Dissertations / Theses: 'Protéines de signalisation YAP'

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Nallet-staub, Flore. "Caractérisation de la voie hippo et de ses effecteurs YAP et TAZ dans la pathologie du mélanome cutané." Paris 7, 2012. http://www.theses.fr/2012PA077202.

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Abstract:

Les protéines paralogues YAP et TAZ sont les effecteurs de la voie Hippo chez les Mammifères. Elles sont connues pour favoriser la prolifération cellulaire et décrites eni ^ant qu'oncogènes dans de nombreux cancers. Peu de choses sont connues sur le statut de la voie Hippo dans la pathologie du mélanome cutané. Nous avons donc entrepris une vaste analyse de l'expression des membres de la voie Hippo dans des lignées cellulaires de mélanomes et des tumeurs de patients, puis caractérisé la capacité de YAP et TAZ à contrôler le comportement de cellules de mélanome. Les immunomarquages de YAP et TAZ ont révélé une localisation cytoplasmique et nucléaire des deux protéines aussi bien dans le naevus bénin que dans les lésions mélanocytaires humaines. Les PCR quantitatives et les analyses protéiques ont permis l'identification d'expressions variables des kinases de la voie Hippo et de leurs effecteurs dans un panel de lignées cellulaires de mélanome humain, indiquant une signalisation Hippo fonctionnelle. De plus, la répression stable de TAZ dans quatre lignées cellulaires de mélanome, réduit considérablement leur croissance indépendante de l'ancrage, leur capacité à envahir le Matrigel et le derme de peaux reconstruites in vitro, ainsi que l'expression du gène cible de la voie Hippo : le CTGF. Celle de YAP mène à des effets similaires, mais en moindre mesure. Inversement, la surexpression de YAP augmente le pouvoir invasif des cellules de mélanome, la transcription dépendante des facteurs de transcription TEADs et donc l'expression du CTGF. Ainsi, ces résultats indiquent que les effecteurs YAP et TAZ exercent tous les deux des activités oncogéniques dans les cellules de mélanome
YAP and its paralog protein TAZ are downstream effectors of the Hippo pathway in mammals. Both are amplified in many human cancers and promote cell proliferation and epithelial-mesenchymal transition. To date, little is known about the status of the Hippo pathway in cutaneous melanoma. Then, we undertook a broad analysis of Hippo pathway component expression in human melanoma cell lines and tumors, and! characterized the capacity of YAP and TAZ to control melanoma cell behavior. YAP and TAZ immunostaining revealed mixed cytoplasmic and nuclear staining for both proteins in benign nevi as well as in human melanoma samples. Variable expression of Hippo kinases LATS1/2 and MST1/2 and their effectors YAP1/2 and TAZ was found across a panel of human melanoma cell lines, irrespective of their BRAF mutation status. TAZ was the most predominantly expressed in ail cell lines. Western analysis revealed constitutive phosphorylation of LATS, MST, YAP and TAZ in several cell lines, indicating functional Hippo signaling. Stable knockdown of YAP or TAZ expression in four distinct |cell lines dramatically reduced the expression of CTGF, a classical Hippo target, as well |as anchorage-independent growth, and capacity to invade Matrigel and form lung! métastases in mice. YAP knockdown in 1205Lu cells also reduced invasion in a model of skin reconstruct. Inversely, YAP overexpression increased melanoma cell invasiveness, associated with increased TEAD-dependent transcription and CTGF expression. Together, these results indicate that both YAP and TAZ contribute to the invasive capacity in melanoma cells

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Poirson, Juline. "Interactome des oncoprotéines E6 et E7 des HPV : du système ubiquitine-protéasome à la voie de signalisation Hippo." Thesis, Strasbourg, 2016. http://www.theses.fr/2016STRAJ052.

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Abstract:

Les papillomavirus humains (HPV) constituent l’archétype des virus à ADN oncogènes. Les HPV muqueux à haut risque (principalement HPV16) sont les principaux agents étiologiques du cancer du col utérin. Les protéines virales E6 et E7 sont des acteurs cruciaux de la cancérogenèse induite par HPV. Nous avons construit une ressource composée de 600 ADNc codant les effecteurs humains du système ubiquitine-protéasome (UPS) et identifié de nouvelles cibles potentielles des protéines E6 et E7 en utilisant une méthode basée sur la complémentation protéique de la Gaussia princeps luciférase (GPCA). HPV16 E6 lie les motifs LxxLL présents dans E6AP et IRF3. Nous avons résolu la structure cristallographique des complexes E6/LxxLL de E6AP/p53 et E6/LxxLL de IRF3. Par ailleurs, nous avons montré que les HPV ciblent une nouvelle voie suppresseur de tumeurs, la voie Hippo, avec ses deux médiateurs clef YAP et TAZ. Nous avons généré une banque d’ADNc codant 265 domaines PDZ humains et identifié de nouveaux partenaires potentiels des protéines YAP/TAZ en utilisant la méthode GPCA. Les résultats obtenus permettent de mieux comprendre la biologie des HPV et leur pouvoir oncogène
The human papillomavirus (HPVs) are the archetype of DNA oncogenic viruses. High-risk mucosal HPVs (mainly HPV16) are the main causative agents of cervical cancer and are also involved in other cancers. HPV oncogenic properties are mainly due to the expression of E6 and E7 proteins. We built a resource composed of 600 cDNA encoding the human ubiquitin-proteasome system (UPS) effectors and identified novel E6 and E7 potential targets by using a method based on the complementation of the Gaussia princeps luciferase (GPCA). HPV16 E6 binds to specific LxxLL motifs present in E6AP and IRF3. We have solved the crystallographic structure of the E6/E6AP LxxLL/p53 and E6/IRF3 LxxLL complexes. Furthermore, HPV may target a novel tumour suppressor pathway, the Hippo signalling pathway with its two main mediators YAP and TAZ. We have built a cDNA library dedicated to the 265 human PDZ domains and identified news potential partners of YAP and TAZ proteins by using the GPCA. The results provide novel insights on HPV biology and their oncogenic property

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Ruscica, Biagina. "The critical role of YAP and TAZ in tubular homeostasis." Electronic Thesis or Diss., Université Paris Cité, 2024. https://wo.app.u-paris.fr/cgi-bin/WebObjects/TheseWeb.woa/wa/show?t=6623&f=77103.

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Abstract:

Des études épidémiologiques et expérimentales suggèrent que la progression de la maladie rénale chronique (MRC) après une lésion initiale est génétiquement déterminée, mais les réseaux génétiques qui contribuent à cette prédisposition restent inconnus. Parmi les voies moléculaires potentielles impliquées dans la MRC, cette étude s'est concentrée sur la voie Hippo, une cascade de signalisation conservée au cours de l'évolution et cruciale pour la régulation de la taille des organes et de la prolifération cellulaire. Les protéines paralogues YAP et TAZ, deux coactivateurs transcriptionnels de la voie Hippo, ont récemment été identifiées comme étant également des mécanosenseurs, capables de détecter un large éventail de signaux mécaniques et de les traduire en programmes transcriptionnels spécifiques aux cellules. L'activation de YAP et TAZ a été impliquée dans la progression de plusieurs maladies rénales et dans la transition de la lésion rénale aiguë (LRA) à la MRC . Cependant, les mécanismes sous-jacents restent obscurs et leur rôle dans des conditions physiologiques n'est pas encore bien compris. L'objectif de ce projet est d'élucider le rôle de YAP et TAZ dans les tubules rénaux. Tout d'abord, en utilisant la combinaison de modèles de souris transgéniques et de néphrectomie comme modèle de MRC, nous avons étudié l'effet de l'inactivation sélective du gène Yap ou Taz dans les cellules tubulaires rénales dans ce contexte de maladie. Nos résultats ont révélé une redondance potentielle entre ces deux protéines dans les cellules épithéliales tubulaires. Il est intéressant de noter que nos souris déficientes à la fois en YAP et en TAZ ont développé spontanément un phénotype rénal sévère avec des lésions tubulaires, de la fibrose et de l'inflammation, qui a été décrit en détail dans ce travail. Grâce à l'analyse transcriptomique, nous avons identifié une nouvelle signature moléculaire qui pourrait permettre de mieux comprendre les mécanismes régulés par YAP et TAZ dans les cellules tubulaires. Paradoxalement, dans notre modèle de double knock-out, nous avons observé une aggravation de l'expression et de l'activation de YAP et TAZ, parallèlement à la progression des lésions. Ceci semble être le résultat d'une expansion des cellules « non recombinées », montrant les rôles complexes de YAP et TAZ dans la communication avec les cellules voisines. Ces données démontrent le rôle essentiel de YAP et TAZ dans le maintien de l'homéostasie tubulaire et l'équilibre complexe nécessaire à leur régulation. Cette complexité peut avoir des implications pour les stratégies thérapeutiques ciblant l'inhibition de YAP et TAZ dans les maladies rénales, surtout si l'on considère les effets secondaires potentiels qui pourraient rendre ces approches plus difficiles
Epidemiological and experimental studies suggest that the progression of Chronic Kidney Disease (CKD) after an initial injury is genetically determined, but the genetic networks that contribute to this predisposition remain unknown. Among the potential molecular pathways involved in CKD, this study focused on the Hippo pathway, an evolutionarily conserved signaling cascade crucial for regulating organ size and cell proliferation. The paralogs proteins YAP and TAZ, two transcriptional coactivators of the Hippo pathway, have recently been identified also as mechanosensors, capable of detecting a wide range of mechanical cues and translating them into cell-specific transcriptional programs. Activation of YAP and TAZ has been implicated to the progression of several kidney diseases and in the transition from acute kidney injury (AKI) to CKD. However, the underlying mechanisms remain unclear and their role under physiological conditions is still not well understood. The aim of this project is to elucidate the role of YAP and TAZ in the renal tubules. First, using the combination of inducing transgenic mouse models and nephrectomy as a model of CKD, we investigated the effect of the selective inactivation of Yap or Taz gene in renal tubular cells in this disease context. Our findings revealed a potential redundancy between these two proteins in tubular epithelial cells. Interestingly, our mice deficient in both YAP and TAZ developed a spontaneous severe renal phenotype with tubular injury, fibrosis and inflammation, which was described in detail in this work. Through transcriptomic analysis, we identified a new novel molecular signature that may provide further insight into the mechanisms regulated by YAP and TAZ in tubular cells. Paradoxically, in our double knock-out model, we observed a worsening of YAP and TAZ expression and activation, in parallel with the lesion progression. This appeared to be the result of an expansion of the "non-recombined" cells, showing the complex roles of YAP and TAZ in the cross-talk with the neighbouring cells. These data demonstrated the essential role of YAP and TAZ in maintaining tubular homeostasis and the intricate balance required for their regulation. This complexity may have implications for therapeutic strategies targeting the inhibition of YAP and TAZ in kidney disease, especially considering the potential side effects that could make such approaches more challenging

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Chevalier, Elodie. "Place de la signalisation Hippo dans l'histoire naturelle du Mésothéliome Pleural Malin (MPM) : dissection de ses rôles dans les lignées mésothéliales pleurales humaines et application à la caractérisation moléculaire des 448 patients atteints de MPM inclus dans l'essai clinique de phase 3 "MAPS"." Thesis, Normandie, 2018. http://www.theses.fr/2018NORMC405/document.

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Abstract:

Le mésothéliome pleural malin (MPM) est une tumeur primitive de la plèvre, rare, très agressive, avec un pronostic sombre. Nous avons souhaité au cours de ce travail de thèse, identifier de nouveaux biomarqueurs du MPM en testant l’influence de l’inactivation des membres de la famille RASSF/Hippo sur la survie des 448 patients inclus dans l’essai clinique MAPS (IFCT-GFPC-0701). Nous souhaitions également comprendre quelles fonctions et signalisations essentielles à l’homéostasie cellulaire, auxquelles participe la voie de signalisation RASSF/Hippo, sont perturbées lors du processus de transformation des cellules mésothéliales. L’inactivation des membres de la voie a été étudiée par PCR spécifique de méthylation (MS-PCR) et leur influence sur la survie des 448 patients inclus dans l’essai clinique MAPS testée en analyse uni- et multivariée avant d’être validée par boostrap. D’autre part, nous avons mimé in cell, l’inactivation par ARN interférence de plusieurs membres de la voie Hippo dans des cellules de lignées mésothéliales humaines (MSTO-211H, H2452, H28 et H2052). Nous avons pu identifier plusieurs biomarqueurs du MPM : i) la kinase MST1 dont l’inactivation est un facteur de mauvais pronostic, ii) l’amphiréguline dont l’expression cytoplasmique est au contraire un facteur de bon pronostic et enfin iii) le CD44 dont l’expression élevée constitue un outil diagnostique du MPM. Les approches in cell, nous ont permis de démontrer que les altérations de la voie RASSF/Hippo induisent une activité inappropriée de l’effecteur terminal YAP : le moins bon pronostic des patients présentant une inactivation de MST1 s’explique ainsi par le fait qu’en régulant l’activité de YAP, MST1 contrôle la balance apoptose/prolifération et prévient l’invasion et la croissance sans adhésion. En son absence, ces processus cellulaires sont dérégulés. Ce travail démontre l’importance de l’axe CD44/RASSF1A/MST1 dans le contrôle d’une activité appropriée de YAP et de l’homéostasie des cellules mésothéliales. La compréhension des désordres cellulaires induits par la dérégulation de le voie RASSF/Hippo, désigne YAP comme cible thérapeutique potentielle chez les patients atteints de MPM et présentant des altérations de cette voie de signalisation
Malignant pleural mesothelioma (MPM) is a rare, very aggressive, primary tumor with a poor prognosis. During this thesis, we wanted to identify new biomarkers of MPM by testing the influence of the RASSF/Hippo pathway inactivation on the survival of the 448 patients included in the clinical trial MAPS (IFCT- GFPC-0701). We also wanted to understand which functions and signals essential to cellular homeostasis, linked to RASSF/Hippo signaling pathway, are disturbed during the mesothelial cell transformation process. Inactivation of RASSF/Hippo members was studied by methylation-specific PCR (MS-PCR) and their influence on the survival of the 448 patients included in the MAPS clinical trial tested in uni- and multivariate analysis before being validated by bootstrap. We also mimed in cell, by RNA interference, several members of the Hippo pathway inactivation in human mesothelial cells lines (MSTO-211H, H2452, H28 and H2052). We have identified several biomarkers of MPM: i) MST1 kinase whose inactivation is a factor of poor prognosis, ii) amphiregulin whose cytoplasmic expression is on the contrary a factor of good prognosis and finally iii) CD44 whose high expression is a diagnostic tool for MPM. In cell we demonstrate that RASSF/Hippo pathway alterations induce an inappropriate activity of YAP, one Hippo end effector: the poorer prognosis of patients with inactivation of MST1 is thus explained by the fact that, by regulating YAP activity, MST1 controls the apoptosis/proliferation balance and prevents invasion and growth without adhesion from mesothelial cells. In its absence, these cellular processes are deregulated. This work finally demonstrates the importance of the CD44/RASSF1A/MST1 axis in controlling appropriate YAP activity and mesothelial cell homeostasis. The understanding of the cellular disorders induced by the of the RASSF/Hippo pathway deregulation designates YAP as a potential therapeutic target in patients with MPM and presenting alterations of this signaling pathway

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Bousaleh, Mohamed. "Définir de nouvelles cibles thérapeutiques pour l´hépatite alcoolique : nécessité d´une approche translationnelle." Thesis, Lille 2, 2019. http://www.theses.fr/2019LIL2S041.

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Abstract:

L’hépatite alcoolique (HA) est une maladie complexe de mauvais pronostic. L’arsenal thérapeutique se limite souvent au traitement par corticoïde. Cependant, 40% des patients ne répondent pas au traitement et la transplantation hépatique est la dernière issue pour leur survie. L’HA est caractérisé par une importante infiltration de polynucléaires neutrophiles (PNN), et paradoxalement l’infection de ces patients est fréquente et liée à la mortalité. D’autre part, notre groupe a démontré un important défaut de régénération hépatique caractérisé par une diminution de la prolifération des hépatocytes dans l’HA. Le but de notre étude était de déterminer les mécanismes cellulaires à l’origine du défaut de régénération hépatique dans l’HA, d’explorer les mécanismes physiopathologiques impliqués dans l’interaction du PNN et de l’hépatocyte, et d’évaluer la capacité migratoire des PNN circulants au cours de l’HA.Notre étude a mis en évidence la voie Hippo/YAP comme étant profondément altérée dans l’HA. L’activation de l’effecteur YAP était anormalement induite dans les hépatocytes de patients HA. Cette activation hépatocytaire induisait une dédifférenciation et une perte de fonctionnalité des hépatocytes. L’inhibition de YAP par la dobutamine dans des hépatocytes primaires isolés de patients HA était capable de limiter le processus de dédifférenciation. Ces données suggèrent que cibler YAP représente une stratégie thérapeutique innovante pour la prise en charge de l’HA. Nos travaux ont aussi permis d’identifier la voie NOD1 comme acteur principal dans l’interaction PNN/hépatocytes par le biais de l’expression de molécules d’adhésion. Nos résultats suggèrent cette voie comme cible thérapeutique pour limiter les lésions hépatiques induite par le PNN. De plus, au cours de l’HA, une dérégulation de la voie IL33/sST2 était impliquée dans la migration des PNN. Nous avons démontré une diminution de la capacité migratoire des PNN circulant au cours de l’HA. Le traitement des PNN par l’IL33 était capable de compenser ce défaut migratoire, ce qui représente outil intéressant pour prévenir les risques infectieux dans l’HA
Alcoholic hepatitis (AH) is a complex disease associated to a poor prognosis. The therapeutic arsenal is limited to corticosteroid treatment. However, 40% of patients do not respond to the treatment and liver transplantation represents the last option for their survival. AH is characterized by a large infiltration of polymorphonuclear neutrophils (PMN), and paradoxically the infection of these patients is a frequent event related to mortality. On the other hand, our group has demonstrated in AH an important defect of hepatic regeneration characterized by a decrease in hepatocytes proliferation, and the formation of ductular reaction. The aim of our study was to determine the cellular mechanisms causing the defect of liver regeneration in AH, to explore the pathophysiological mechanisms involved in the interaction of the PMN and hepatocytes, and to evaluate the migratory capacity of the PMN.Our work has highlighted the Hippo/YAP pathway as profoundly altered during AH. The effector YAP was aberrantly activated in AH hepatocytes. This led to the dedifferentiation and the loss of function of hepatocytes. The treatment of AH-isolated hepatocytes by the YAP inhibitor, dobutamine, limited the dedifferentiation process. Targeting YAP appears as an innovative strategy for AH management. Our work also identified the NOD1 pathway as a major actor in the PNN/hepatocyte interaction through expression of adhesion molecules. Our results suggest that NOD1 is an interesting target to limit PMN-induced liver injury. In addition, during AH, deregulation of the IL33 / sST2 pathway was involved in PNN migration. We have demonstrated a decrease in the migratory capacity of circulating PMNs. The treatment of PMN by IL33 was able to compensate for this migratory defect, which represents an interesting tool to prevent infectious risks during AH

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Morice, Sarah. "Rôle de la voie de signalisation Hippo dans le développement des ostéosarcomes." Thesis, Nantes, 2019. http://www.theses.fr/2019NANT1037.

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Abstract:

L'ostéosarcome (OS) est la tumeur osseuse primitive maligne la plus fréquente chez les enfants et les adolescents dont le pronostic reste mauvais, surtout lorsque des métastases sont présentes au diagnostic. Des analyses transcriptomique de biopsies de patients atteint d’OS révèlent la présence d’une signature génique de la voie de signalisation Hippo dans l’OS. Son principal effecteur, YAP, est connu pour son rôle oncogène dans un certain nombre de cancer. Afin d’étudier son rôle dans le développement de l’OS, nous avons développé une approche moléculaire en surexprimant une protéine YAP capable ou non d’interagir avec son facteur de transcription TEAD. Des expériences in vitro et in vivo révèlent le rôle crucial de TEAD dans la prolifération cellulaire et la croissance tumorale médiée par YAP. De plus nous avons montré que la surexpression de YAP augmente la migration cellulaire in vitro et la dissémination métastatique in vivo, indépendamment de son interaction avec TEAD. Des analyses transcriptomique ont montré un enrichissement de gènes liés à la transition épithéliaux-mésenchymateuse, à la migration cellulaire et au TGF-β dans les cellules surexprimant YAP, quel que soit sa capacité à interagir avec TEAD. Des expériences de PLA et d’immunoprécipitation montrent une interaction YAP/Smad3, le principal effecteur de la voie du TGF-β. A l’aide d’un inhibiteur spécifique du TGF-β, le SD-208, nous montrons le rôle essentiel de la signalisation TGF-β/Smads dans la dissémination métastatique médiée par YAP. Ces résultats ont défini le rôle spécifique de TEAD et Smad3 dans la progression tumorale de l’OS, et identifié YAP comme un acteur central du développement de l’OS. Ainsi, YAP pourrait être une cible thérapeutique prometteuse dans l’OS
Osteosarcoma (OS) is the most common primary malignant bone tumour in children and adolescents for whom the prognosis remains poor, especially when metastases are present at diagnosis. Transcriptomic analyses of biopsies from OS patients reveal the presence of an Hippo signalling pathway gene signature in the OS. Its main effector, YAP, is known for its oncogenic role in a number of cancers. In order to study its role in the development of OS, we developed a molecular approach by overexpressing YAP that could or not interact with its transcription factor TEAD. In vitro and in vivo experiments revealed the crucial role of TEAD in cell proliferation and tumor growth mediated by YAP. In addition, we showed that overexpression of YAP increases cell migration in vitro and metastatic dissemination in vivo, regardless of its interaction with TEAD. Transcriptomic analysis showed a genes enrichment related to epithelial-mesenchymal transition, cell migration and TGF-β in cells overexpressing YAP, regardless of its ability to interact with TEAD. PLA and immunoprecipitation experiments showed YAP/Smad3 interaction, the main effector of the TGF-β pathway. Using a specific inhibitor of TGF-β, SD-208, we demonstrated the essential role of TGF- β/Smads signalling in YAP-mediated metastatic dissemination. These results defined the specific role of TEAD and Smad3 in the tumor progression of OS, and identified YAP as a central actor in the development of OS. Thus, YAP could be a promising therapeutic target in OS

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Meléndez, García Rodrigo. "YAP as a Regulator of DNA Replication Timing." Thesis, université Paris-Saclay, 2020. http://www.theses.fr/2020UPASL014.

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Abstract:

Une cellule souche est capable de s’auto-renouveler et de générer des cellules différenciées après division cellulaire. La duplication complète de son génome doit être exempte d'erreurs afin d'éviter la propagation aux cellules filles de mutations délétères. Chez les eucaryotes, il a été montré que des segments d’ADN sur les chromosomes se répliquent de manière coordonnée et à des moments définis pendant la phase de synthèse, un processus appelé programme spatio-temporel de réplication de l'ADN (RT). Des changements majeurs dans le RT sont corrélés avec les changements de détermination des cellules souches et associés à l'organisation et à l’expressivité du génome. Malgré ce rôle central, les mécanismes qui sous-tendent le contrôle du RT restent méconnus. Mon laboratoire a mis en évidence que YAP, l'effecteur en aval de la voie de signalisation Hippo impliquée dans la croissance cellulaire, régule la vitesse et la chorégraphie de la réplication de l’ADN des cellules souches rétiniennes chez l’amphibien xénope. Ces données révèlent YAP comme un nouvel acteur moléculaire dans le contrôle du RT. Pour tester l’implication directe de YAP dans la dynamique de réplication de l’ADN, nous avons tiré profit du système in vitro d’extraits d'œufs de xénope dans lequel toutes les étapes du processus sont reproduites de manière synchrone. Nous montrons que YAP est recruté à la chromatine pendant la réplication et que ce processus se produit seulement après la phase d’initiation des origines de réplication. Des extraits déplétés de la protéine YAP présentent une accélération de la vitesse de réplication et une augmentation du nombre de sites d’activation de la synthèse de l’ADN. Par ailleurs, nous avons identifié RIF1 (Rap1-Interacting Factor 1 ou Replication Timing Regulatory Factor 1), un des rares régulateurs connus du RT, comme un nouveau partenaire de YAP. Comme pour YAP, la perte de fonction de RIF1 dans les embryons de xénope conduit à un phénotype de petit œil et à la dérégulation du RT dans les cellules souches rétiniennes.Dans l'ensemble, nos résultats montrent l’implication de YAP dans le contrôle de la dynamique de réplication de l’ADN et révèlent RIF1 comme un nouveau partenaire dans ce processus. Ce travail ouvre de nouvelles perspectives d’étude quant à l’importance biologique de cette interaction YAP-RIF1 dans le contrôle du RT et sa pertinence comme cible pour influencer le devenir des cellules souches
Stemness could be defined as a state in which a cell is able to self-renew and/or to differentiate after cell division. Before this happens, exhaustive duplication of the genome free of errors must occur in order to avoid deleterious mutations, a hallmark of cancer. Thus, DNA replication is particularly important to stem cells because of their continuous division capacities. Regarding DNA replication in eukaryotes, it was discovered that segments of chromosomes close in space, replicate in a coordinated manner during S phase, a process called replication timing. Moreover, major changes in replication timing correlate with cell differentiation, 3D chromatin architecture and transcription. However, the molecules that govern its regulation are poorly understood. Previously, my laboratory found that YAP, the downstream effector of the Hippo pathway, regulates S phase progression of retinal stem cells in Xenopus laevis. To test YAP function in the direct control of replication timing, we took advantage of the powerful in vitro DNA replication system of X. laevis egg extracts. Briefly, we discovered that YAP is recruited to replicating chromatin dependently of origin licensing. In addition, YAP depleted extracts showed increased DNA synthesis and origin activation; revealing that YAP normal function is to slow-down replication by limiting origin firing. Interestingly, we found Rif1, a major regulator of replication timing, as a novel partner of YAP. In vivo, Rif1 expression overlaps that of Yap within the stem cell compartment of the Xenopus retina. Knockdown of Rif1 leaded to a small-eye phenotype and alterations in replication foci of retinal stem cells, resembling the effect observed in YAP deficient cells. Finally, early-embryonic depletion of both molecules resulted in a strikingly acceleration of cell division.Altogether, our findings unveil YAP implication in the regulation of replication dynamis and show Rif1 as a novel partner. Further investigation to analyze this interaction would help us to understand the biological relevance in the control of replication timing and whether it could be used as a target in regenerative medicine

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Cabochette, Pauline. "CARACTERISATION DU RESEAU DE SIGNALISATION IMPLIQUE DANS LA MAINTENANCE ET LA PROLIFERATION DES CELLULES SOUCHES DE LA RETINE DU XENOPE." Thesis, Paris 11, 2014. http://www.theses.fr/2014PA11T089/document.

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Abstract:

Contrairement aux mammifères adultes, la rétine des amphibiens possède la particularité de croître durant toute la vie de l'animal grâce à l'activité continue d'une population de cellules souches localisée au sein d'une niche bien délimitée, la zone marginale ciliaire (ZMC). Ce modèle offre ainsi la possibilité d'étudier in vivo les mécanismes moléculaires à l'origine du maintien et de la prolifération des cellules souches neurales à des stades post-embryonnaires. Dans ce but, l'identification et la caractérisation des différentes voies de signalisation présentes au sein de la niche biologique des cellules souches rétiniennes est une première étape indispensable. Mon projet de thèse a été divisé en deux objectifs principaux: l'étude des interactions entre les voies Wnt et Hedgehog au sein de la ZMC chez le xénope et la réalisation de l'étude fonctionnelle de Yap, l'effecteur principal de la voie de signalisation Hippo dans ce modèle. Par des approches génétiques et pharmacologiques, la première partie de ce projet a permis de mettre en évidence un antagonisme inattendu entre les signaux Wnt et Hedgehog au sein de la ZMC qui régule l'activité proliférative des cellules souches et des progéniteurs rétiniens. Ce travail nous a conduit à proposer un modèle dans lequel ces deux voies réguleraient la balance prolifération/différenciation dans la rétine post-embryonnaire. Dans un deuxième temps, les expériences de gain et de perte de fonction du gène Yap ont montré que ce dernier joue un rôle essentiel dans la régulation du programme temporel de la phase de réplication de l'ADN des cellules souches rétiniennes. En effet, l'inhibition de Yap entraîne une importante réduction de la durée de la phase S du cycle cellulaire associée à une instabilité génomique. Une surexpression de c-Myc et de la voie p53-p21 semble impliquée dans ce phénotype. Nos travaux nous ont également permis d'identifier un nouveau partenaire de YAP, le facteur de transcription PKNOX1. L'ensemble de ces données nous a ainsi conduit à proposer un modèle selon lequel le complexe YAP/PKNOX1 pourrait être nécessaire au bon déroulement de la phase de réplication des cellules souches, indispensable à la maintenance de l'intégrité du génome de ces cellules et de leur descendance
In contrast to the adult mammals, the retina of amphibians shows continuous growth during adulthood through active neural stem cells localized in the defined niche called ciliary marginal zone (CMZ). This model offers an exceptional tool to study in vivo the molecular mechanisms involved in the maintenance and proliferation of neural stem cells during post-embryonic stages. In this order, the identification and the characterization of the signaling pathways acting in biological retinal stem cell niche is an essential step.My PhD research was divided in two main parts: the study of the interaction between the Wnt and Hedgehog pathways within the CMZ and the functional study of Yap, the downstream effector of the Hippo pathway in this model. By using genetic and pharmacological tools, the first part of this project demonstrated an unexpected antagonism between the Wnt and the Hedgehog signaling in the CMZ that regulates proliferative activity of retinal stem and progenitor cells. In this article, we propose a model in which an antagonistic interplay of Wnt and Hedgehog pathways may regulate the balance proliferation/differentiation in the post-embryonic retina. Second, gain and loss of function experiments of Yap have shown that this factor plays a key role in the regulation of temporal replication of DNA retinal stem cells. Indeed, inhibition of Yap leads to strong reduction of the S-phase length during the cell cycle associated with genomic instability. c-Myc and p53-p21 overactivation seems to be involved in this phenotype. This work also allowed us to identify a novel YAP partner, the transcriptional factor PKNOX1. We indeed propose a model in which the YAP/PKNOX1 complex may be required for the successful convening of the replication phase on stem cells, essential for the maintenance of genome integrity on the cells and their progeny

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Moretti, Julien. "Deubiquitinations dans la voie de signalisation Notch." Paris 6, 2011. http://www.theses.fr/2011PA066365.

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Abstract:

La signalisation Notch est une voie extrêmement conservée, requise dès le développement embryonnaire et contrôlant le choix du destin cellulaire au cours de nombreux processus. Elle est basée sur l’activité du récepteur transmembranaire Notch qui est activé lors de contacts intercellulaires par ses ligands également transmembranaires. Le récepteur subit alors deux clivages protéolytiques, par une métalloprotéase ADAM puis par le complexe multi-protéique γ-secrétase, qui libèrent le domaine intracellulaire de Notch dans le cytoplasme, forme qui est ensuite transportée dans le noyau où elle active la transcription de ses gènes cibles. Le récepteur Notch est régulé par divers processus d’ubiquitination : la monoubiquitination du récepteur Notch activé contrôle son clivage γ-secrétase, la polyubiquitination du récepteur Notch non activé contrôle sa dégradation lysosomiale. L’ubiquitination est réversiblement contrôlée par la déubiquitination. Or, aucune déubiquitination n’a été identifiée dans la voie de signalisation Notch. Mon projet consistait à identifier les déubiquitinases – enzymes catalysant la déubiquitination – impliquées dans les deux processus d’ubiquitinationde Notch, en utilisant deux cribles permettant de tester une banque de shRNA qui cible l’expression des 91 déubiquitinases humaines. Le premier m’a permis d’identifier eIF3f, une sous-unité du facteur d’initiation de la traduction eIF3, comme une nouvelle déubiquitinase qui agit sur Notch activé avant le clivage γ-secrétase. Par ailleurs, le deuxième crible a identifié plusieurs candidates, parmi lesquelles USP12 dont le rôle dans la régulation du trafic de Notch non activé est en cours de validation

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Banerjee, Sara Luiza. "Identification de nouvelles protéines effectrices dans la signalisation des récepteurs Eph." Doctoral thesis, Université Laval, 2021. http://hdl.handle.net/20.500.11794/69034.

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Abstract:

La réponse cellulaire aux stimuli extracellulaires est souvent médiée par des voies de signalisation qui agissent en aval des récepteurs transmembranaires, comme les récepteurs tyrosine kinases (RTK). Avec quatorze membres, la famille des récepteurs Eph représente la plus grande famille de RTK chez l'humain. Contrairement aux autres RTK, les ligands des récepteurs Eph, les éphrines, sont des protéines associées à la membrane cellulaire. La signalisation Eph-éprhines est donc principalement impliquée dans des événements de communication qui impliquent des contacts cellule-cellule comme la migration cellulaire, la répulsion et l'adhésion cellule-cellule. Ces événements sont cruciaux pour certains processus biologiques tels le guidage axonal et l'organisation tissulaire dans l'organisme en développement et chez l'adulte. Les récepteurs Eph sont fréquemment surexprimés ou dérégulés dans divers cancers, en particulier dans les plus agressifs et mortels. Récemment, la signalisation Eph-éphrines est devenue une nouvelle cible émergente pour le traitement du cancer. Bien que les fonctions biologiques des récepteurs Eph aient été largement étudiées, notre compréhension des mécanismes moléculaires grâce auxquels les récepteurs Eph régulent des phénotypes cellulaires précis demeure incomplète. Pour mieux comprendre le système de signalisation impliquant les Eph, mes travaux ont porté sur l'identification de nouvelles protéines effectrices en aval des récepteurs Eph et sur l'étude de leurs implications dans les fonctions régulées par les récepteurs Eph. Pour mieux comprendre les complexes de signalisation associés aux récepteurs Eph dans des conditions natives, j'ai appliqué une approche basée sur la spectrométrie de masse (MS), le marquage de proximité BioID. Cela m'a permis de surmonter les limites de l'utilisation d'approches conventionnelles de purification par affinité pour cartographier les interactions protéine-protéine liées aux récepteurs transmembranaires. J'ai obtenu un réseau de signalisation dépendant des récepteurs EphA4, - B2, -B3 et -B4, qui comprend 395 protéines, dont la plupart n'avaient jamais été liées à la signalisation Eph-dépendante. Pour tester la pertinence biologique des partenaires identifiés, j'ai examiné la contribution de 17 candidats en utilisant une approche de perte de fonction dans une expérience de tri cellulaire dépendante des récepteurs Eph. J'ai pu montrer que la déplétion de quelques candidats, incluant la protéine Par3, bloque le tri des cellules. En utilisant la purification par affinité combinée à la MS, j'ai aussi identifié un complexe de signalisation impliquant la kinase C-terminal SRC (CSK), dont le recrutement aux complexes Par3 dépend des signaux des récepteurs Eph. Pour mieux comprendre les interactions protéiques suivant la liaison Eph-éphrine, j'ai effectué des expériences de TurboID. Ces études m'ont permis d'identifier des complexes protéiques associés au récepteur EphA4 lorsqu'il est lié à l'éphrine-B2. J'ai également étudié les interactions protéine-protéine dépendantes de la liaison du récepteur EphB2 aux éphrines-B1 et -B2. Pour explorer si l'interaction d'EphB2 avec ces deux ligands peut mener à une réponse de signalisation inverse différente, j'ai identifié les partenaires de des ephrin-B1/-B2 lorsque stimulés par EphB2. Enfin, j'ai cartographié les réseaux de signalisation dépendants des récepteurs EphA4 et EphB2 sauvages ou kinase-inactifs, ce qui m'a permis de conclure que la perte de leur activité catalytique a conduit à des changements majeurs dans les interactomes dépendants de ces récepteurs. L'ensemble de mes résultats a permis de mieux définir les complexes protéiques dépendants des récepteurs Eph. Mes études ont mené à une meilleure compréhension des mécanismes moléculaires sous-jacents aux récepteurs Eph et de leur contribution dans le processus de délimitation des tissus, un processus souvent perturbé dans des maladies comme le cancer.
The cellular response to extracellular stimuli is often mediated by signaling pathways that act downstream of transmembrane receptors, such as receptor tyrosine kinases (RTKs). With fourteen members, the Eph family of RTKs is the largest in humans. In contrast to other RTKs, Eph receptor cognate ligands, ephrins, are tethered to the cell surface. This results in Eph receptor-ephrin signaling being mainly involved in short-range cell-cell communication events that regulate cell migration, repulsion and cell-cell adhesion. These events are crucial in biological processes such as axon guidance and tissue boundary formation in the developing and adult organisms. Eph receptors are frequently overexpressed or deregulated in a variety of human tumors, especially in the more aggressive and lethal ones. In recent years, the Eph-ephrin signaling system became an emerging new target for cancer treatment. Although a plethora of Eph receptor biological functions have been extensively studied, we still have a vague idea on the molecular mechanisms of Eph receptor signal transduction, underlying how Eph receptors regulate precise cellular phenotypes. To better understand the Eph receptor signaling system, my studies focused on the identification of novel Eph receptor downstream effector proteins and the determination of their requirement for Eph receptor-regulated functions. To unravel Eph receptor-associated signaling complexes under native conditions, I applied a mass spectrometry (MS)-based approach, namely BioID proximity labeling. This allowed me to overcome the limitations of conventional affinity purification approaches for mapping protein-protein interactions of transmembrane receptors. I obtained a composite signaling network from EphA4, -B2, -B3 and -B4 receptors that comprises 395 proteins, most of which not previously linked to Eph signaling. To test the biological relevance of the identified Eph receptor proximity interactors, I examined the contribution of 17 candidates using a loss-of-function approach in an Eph receptor-dependent cell sorting assay. I showed that depletion of a few candidates, including the signaling scaffold Par3, blocks Eph receptordependent cell sorting. Using affinity purification combined with MS, I further delineated a signaling complex involving C-terminal SRC kinase (CSK), whose recruitment to Par3 complexes is dependent on Eph receptor signals. To further elucidate Eph receptor-centric signaling complexes that are formed upon ephrin binding and are affected by Eph receptor catalytic activity I performed TurboID experiments. I systematically mapped ligand stimulation-dependent signaling networks downstream of EphA4 and EphB2 receptors. I dissected the impact of ephrin-B2 stimulation on the formation of EphA4- nucleated proximal protein complexes. Moreover, I showed the differential recruitment of EphB2 partners upon receptor binding to the same subclass of ligands, ephrin-B1 and ephrin-B2. To explore whether the EphB2 interactions with these two ephrin-B ligands elicit different reverse signaling responses, I delineated ephrin-B1/-B2 proximity partners recruited upon EphB2 stimulation. I also determined that the kinase domain of EphA4/-B2 plays a major role in determining the composition of signaling networks around the receptors, as a loss of catalytic activity led to a drastic decrease in a number of interactors with the receptors. Collectively, my definition of Eph receptor signaling networks sheds light on physiologically relevant Eph receptor-centered protein complexes that occur in living cells. These studies will lead to a better understanding of the mechanisms by which Eph receptors transmit signals at the membrane and give insight into how Eph receptor-mediated signaling pathways contribute to boundary formation, a process often disrupted in diseases like cancer.

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Chaves-Almagro, Carline. "Signalisation apeline : nouvelle cible thérapeutique de l'adénocarcinome pancréatique ?" Thesis, Toulouse 3, 2015. http://www.theses.fr/2015TOU30246/document.

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Abstract:

L'apeline, ligand endogène du Récepteur Couplé aux Protéines G, APJ, joue un rôle majeur au niveau cardiovasculaire, notamment dans l'angiogenèse physiologique et la néovascularisation tumorale. Par une étude profiling array, notre équipe à mis en évidence que le gène de l'apeline est surexprimé dans un tiers des adénocarcinomes humains, et de manière intéressante, avec une fréquence très élevée (2/3) dans les cancers du pancréas. Ainsi, mon projet de thèse avait pour but de caractériser l'implication du système apelinergique dans le cancer du pancréas. L'adénocarcinome pancréatique canalaire (ADK) est la forme la plus commune des cancers du pancréas et la découverte de biomarqueurs et nouvelles cibles potentielles est particulièrement importante pour ce cancer dont le diagnostic est tardif et les traitements peu efficaces. Par une approche immunohistochimique sur des coupes d'ADK humains (49 patients), nous avons mis en évidence que l'apeline et APJ sont fortement exprimés par les cellules tumorales pancréatiques. Dans le but de caractériser l'expression spatio-temporelle de l'apeline et de son récepteur au cours de la carcinogenèse pancréatique, nous avons étudié par immunohistochimie leur expression dans des modèles murins d'ADK. Ainsi, dans les souris K-ras (Lox-Stop-Lox-K-rasG12D/+/Pdx1-Cre) récapitulant les stades précoces de la pathologie, et le modèle murin KPC (Lox-Stop-Lox- K-rasG12D/+ ; Lox-Stop-Lox-Trp53 R172H/+/Pdx1-Cre) qui développe un ADK jusqu'au stade invasif, nos résultats mettent en évidence que l'apeline et son récepteur APJ sont exprimés par les cellules tumorales et ce, dès les premiers stades de la carcinogenèse. Afin d'étudier la fonction de la voie de signalisation apeline, nous avons caractérisé les cascades de transduction activées par l'apeline dans la lignée tumorale pancréatique humaine MiaPaCa qui exprime de façon endogène APJ et l'apeline comme retrouvé in vivo.Dans ces cellules, l'apeline induit la stimulation transitoire des ERKs et de la p70S6 Kinase, l'activation prolongée d'Akt et la phosphorylation inhibitrice de GSK3 stabilisant ainsi la Beta-caténine. De manière intéressante, mes travaux mettent en évidence que l'activation de la voie MAPK induite par l'apeline est dépendante de la protéine Gi. A l'inverse, la stimulation soutenue de la voie PI3K/Akt est indépendante de la voie G mais implique l'internalisation du récepteur. De plus, l'apeline régule positivement la quantité protéique de c-myc et cycline D1 tous deux impliqués dans la prolifération cellulaire, ainsi que de l'Hexokinase 2 permettant de maintenir un fort flux glycolytique, essentiel aux besoins énergétiques de la cellule tumorale. Ces résultats sont en accord avec les effets cellulaires que nous observons puisque l'apeline stimule la prolifération, la capture du glucose ainsi que la migration des cellules tumorales, des propriétés essentielles participant à la progression tumorale.Dans ce contexte, la surexpression de l'apeline et de son récepteur dans l'ADK et l'effet de cette de voie de signalisation sur la cellule tumorale fait de ce couple ligand/récepteur une nouvelle cible thérapeutique potentielle dans le traitement du cancer du pancréas
Apelin, the endogenous ligand of the human G-protein coupled receptor, APJ, is a key regulator of cardiovascular system, notably during physiological and tumor angiogenesis. Using a cancer profiling array approach, our team clearly showed that apelin gene is overexpressed in one third of the human carcinomas, with the highest frequency (2/3) in pancreatic cancers. Thus, the aim of my PhD project was to characterize apelin signaling function during pancreatic carcinogenesis. Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) is the most common form of pancreatic cancer and the discovery of biomarkers and new therapeutic targets is of crucial interest for this cancer since this cancer is diagnosed too late and there is no effective therapy. By an immunohistochemistry approach on human PDAC slides (49 patients), we show that apelin and APJ are strongly expressed by pancreatic tumor cells. In order to characterize apelin and APJ spatio-temporal expression during pancreatic carcinogenesis, we have studied their expression by immunohistochemistry in genetically engineered mouse models of PDAC. In the K-ras mouse model (Lox-Stop-Lox-K-rasG12D/+/Pdx1-Cre) which recapitulates early stages of the disease, and in the KPC mouse model (Lox-Stop-Lox- K-rasG12D/+ ; Lox-Stop-Lox-Trp53 R172H/+/Pdx1-Cre) which develops PDAC until invasive stages, our results demonstrate that apelin and its receptor are expressed by tumor cells since the first steps of carcinogenesis. In order to study apelin signaling function, we have characterized signal transduction pathways activated by apelin in MiaPaCa human pancreatic cancer cell line endogenously expressing apelin and APJ as observed in vivo. In these cells, apelin induces transient activation of ERKs and p70S6 Kinase, a sustained Akt activation and an inhibitory phosphorylation of GSK3 thus allowing Beta-catenin stabilization. Interestingly, my results demonstrate that the MAPK pathway activation apelin induced is Gi protein dependent. Conversely, long term stimulation of PI3K/Akt pathway is G protein independent but instead involves receptor internalization. Moreover, apelin positively regulates on one hand c-myc and cyclin D1 protein levels, both of them being implicated in cell proliferation and on the other hand, intracellular protein content of Hexokinase 2 in order to ensure high glycolytic flux which is essential for tumor cells energy supply. These results are in agreement with cellular effects that we observed since apelin stimulates proliferation, glucose uptake and migration of tumor cells which are essentials properties for tumor progression. Accordingly, apelin and APJ overexpression in PDAC and the effects of this signaling pathway on tumor cells make of this ligand/receptor couple a new potential therapeutic target for pancreatic cancer treatment

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Picault, François-Xavier. "Signalisation apeline et adénocarcinomes coliques." Toulouse 3, 2013. http://thesesups.ups-tlse.fr/2407/.

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Abstract:

L'apeline, ligand endogène du récepteur humain couplé aux protéines G, APJ, est un facteur angiogénique qui accélère la croissance tumorale par un effet paracrine sur la néovascularisation tumorale. Notre équipe a également montré une surexpression du gène de l'apeline dans la moitié des adénocarcinomes coliques. Mon travail de thèse a donc consisté à déterminer le rôle de la signalisation apeline au cours de la carcinogenèse colique. Par des études immunohistochimiques, j'ai confirmé la surexpression de l'apeline au niveau peptidique dans les adénocarcinomes coliques humains. J'ai également montré pour la première fois que cette surexpression de l'apeline se produisait dès le stade adénome. Sur des coupes adjacentes, j'ai observé une co-expression du récepteur APJ dont la cinétique d'apparition est identique à celle de l'apeline. Ces résultats suggèrent l'existence d'une boucle autocrine de l'apeline pouvant intervenir dans la croissance des tumeurs coliques. Pour valider cette hypothèse, nous avons étudié l'expression de l'apeline et de son récepteur dans différentes lignées tumorales coliques humaines. En raison de leur forte expression de l'apeline et d'APJ, les cellules LoVo ont été sélectionnées pour les expériences in vitro. Dans cette lignée, l'apeline induit la phosphorylation d'Akt et l'inhibition de l'adénylyl cyclase, confirmant ainsi la présence d'APJ à la membrane plasmique et sa fonctionnalité. Bien qu'aucun effet n'ait été observé sur la prolifération, l'apeline présente clairement des propriétés anti-apoptotiques. En effet, les différents fragments d'apeline protègent les cellules LoVo de la mort cellulaire induite par différents agents pro-apoptotiques comme le TRAIL (TNF-related apoptosis-inducing ligand) et le MG132, un inhibiteur du protéasome. De plus, l'apeline inhibe le clivage de la caspase 3, l'activité enzymatique des caspases 3 et 7, ainsi que le clivage de la PARP induits par un traitement au MG132. L'ensemble de ces données démontre clairement que l'activation de la signalisation apeline engendre une inhibition des voies apoptotiques intracellulaires qui favoriserait ainsi la croissance tumorale. Mais le résultat le plus intéressant est que le traitement des cellules LoVo par un antagoniste du récepteur APJ, l'apeline13(F13A), ralentit de manière significative leur vitesse de prolifération. La co-expression du ligand et de son récepteur est donc à l'origine d'une boucle autocrine qui renforce la croissance tumorale. La co-existence de cet effet autocrine sur la tumeur et de l'effet paracrine sur les vaisseaux rend d'autant plus attractive la signalisation apeline comme nouvelle cible thérapeutique dans les cancers coliques
Apelin, the endogenous ligand of the human G protein-coupled APJ receptor, is an angiogenic factor, which stimulates tumour growth by a paracrine effect on tumor neovascularisation. Our team also showed an upregulation of apelin gene expression in half of the human colon adenocarcinomas. The aim of my thesis was to determine the role of apelin signalling during colon carcinogenesis. I first confirmed by immunohistochemistry the overexpression of apelin peptide in the human colon adenocarcinomas. Then I showed for the first time that this overexpression occurred as soon as the adenoma stage. On adjacent sections, I observed the co-expression of APJ receptor with an identical temporal pattern of expression. These results therefore suggest the existence of an autocrine loop which might participate in the growth of colon tumours. In order to validate this hypothesis, we studied the expression of apelin and its receptor in several colorectal human cancer cell lines. In view of their high expression of apelin and apelin receptor, LoVo cells were selected for in vitro experiments. In this cell line, apelin induced Akt phosphorylation and adenylyl cyclase inhibition, thereby confirming the presence of the receptor at the plasma membrane as well as its functionality. Although apelin did not exert any mitogenic effect, it clearly acted as an anti-apoptotic factor. Indeed, the different apelin fragments protected LoVo cells from cell death induced by TNF-related apoptosis-inducing ligand (TRAIL) or the MG132 proteasome inhibitor. In addition, apelin inhibited caspase 3 cleavage, enzymatic activity of caspases 3 and 7 and PARP degradation induced by MG132. All these data clearly demonstrate that the activation of apelin signalling promotes an inhibition of apoptotic cell pathways which would increase tumour growth. The most prominent result was the inhibitory effect induced by the (F13A)apelin13 receptor antagonist on LoVo cell proliferation. Accordingly, co-expression of apelin and its receptor is the basis of a tumoral autocrine loop which should reinforce tumour growth. The co-existence of this autocrine effect on tumour and the paracrine effect on tumour vessels clearly emphasises the promising role of apelin signalling as a new therapeutic target in the treatment of human colon cancers

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García-García, Diana. "Müller Cells and Retinal Regeneration : The Role of the Hippo/YAP Signaling Pathway Yap Haploinsufficiency Leads to Müller Cell Dysfunction and Late-Onset Cone Dystrophy Linking YAP to Müller Glia Quiescence Exit in the Degenerative Retina." Thesis, université Paris-Saclay, 2020. http://www.theses.fr/2020UPASL068.

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Abstract:

Les maladies dégénératives de la rétine sont une des causes principales de cécité. Parmi les différentes stratégies thérapeutiques actuellement étudiées, notre équipe s’intéresse au potentiel régénératif de la rétine. Une source cellulaire d'intérêt sont les cellules de Müller, principal type de cellules gliales de la rétine capables de se réactiver en cas de dégénérescence, un processus appelé gliose réactive, et dans certaines espèces d’adopter des caractéristiques de cellules souches. Si un tel processus confère la capacité de régénérer la rétine chez les téléostéens, il est cependant largement inefficace chez les mammifères. Avoir une meilleure connaissance des mécanismes moléculaires sous-jacents pourrait aider à transformer leur potentiel de régénération en nouvelles stratégies thérapeutiques en condition pathologique de dégénérescence rétinienne. Dans ce contexte, mon laboratoire s'est focalisé sur l'effecteur terminal de la voie Hippo, le cofacteur de transcription YAP, dont il a été démontré qu'il stimule la régénération de plusieurs organes en cas de lésion. Dans la rétine, YAP est spécifiquement exprimé dans les cellules de Müller et son niveau d’expression augmente en cas de lésion. Cependant, sa fonction dans l'homéostasie rétinienne, et en particulier son rôle dans la régénération rétinienne, sont encore inconnus. La première partie de ma thèse visait donc à décrypter la fonction de YAP dans les cellules de Müller de souris dans des conditions physiologiques et pathologiques. Nous avons révélé que YAP joue un rôle central dans l'homéostasie des cellules de Müller et en tant que tel, est un acteur clé de la survie des cônes au cours du vieillissement. En cas de lésion rétinienne, nous avons montré que YAP est essentiel pour la réactivation des gènes du cycle cellulaire qui accompagne normalement la gliose réactive. Dans ce contexte, nous avons également trouvé une interaction fonctionnelle entre YAP et la voie de signalisation EGFR, suggérant une fonction de YAP en tant qu’intégrateur des réseaux de signalisation mis en jeu dans le contexte régénératif. J'ai également constaté que la suractivation de YAP est suffisante pour induire la reprogrammation des cellules de Müller de souris en cellules hautement prolifératives […]. Dans l'ensemble, ce travail met en évidence le rôle critique de YAP dans la sortie de quiescence des cellules de Müller chez les mammifères et révèle ainsi une cible potentielle pour la médecine régénérative. La deuxième partie de mon projet de doctorat naît des découvertes émergentes mettant en évidence les voies inflammatoires comme régulateurs du processus de régénération. […] De plus, des découvertes récentes sur le rôle de YAP dans la régulation du processus inflammatoire m’ont conduit à faire l'hypothèse qu'il pourrait jouer un rôle dans la relation entre l'inflammation et la régénération rétinienne. J'ai donc cherché à étudier le rôle joué par l'inflammation sur le comportement des cellules de Müller de souris, et à comprendre comment YAP s'inscrit dans cette interaction. J'ai découvert de manière inattendue qu'un contexte pro-inflammatoire établi par les cellules microgliales stimule la prolifération des cellules de Müller de souris dans des explants rétiniens. De plus, mes résultats ont montré que cet effet mitogène se produit de manière dépendante de YAP. Par ailleurs, j'ai découvert que l'effet de la surexpression de YAP sur la prolifération des cellules de Müller peut être potentialisé par un environnement pro-inflammatoire et aboli en cas d’ablation des microglies. Enfin, nous avons constaté que, à son tour, YAP régule des cytokines inflammatoires clés. Dans l'ensemble, cette partie de mon projet permet non seulement d’approfondir nos connaissances concernant l'impact de l'inflammation sur le comportement des cellules de Müller de la souris, mais met également en évidence YAP en tant qu'acteur clé dans la connexion entre l'inflammation et la régénération rétinienne
Degenerative diseases of the retina are one of the main causes of blindness. Among the various therapeutic strategies currently being studied, our team is focusing on the regenerative potential of the retina. One cellular source of interest are Müller cells, the main type of glial cells in the retina capable of reactivating in case of degeneration, a process called reactive gliosis, and in some species adopting certain characteristics of stem cells. If such a process sustains powerful regeneration abilities in teleosts, it is however largely inefficient in mammals. Hence, increasing our knowledge of the molecular mechanisms underlying the behaviour of these cells under pathological conditions may help turning their regenerative properties into new therapeutic strategies. In this context, my laboratory focused on the terminal effector of the Hippo pathway, the co-transcriptional factor YAP, which has been shown to stimulate regeneration of several injured organs. In the retina, YAP is specifically expressed in Müller cells and upregulated in case of damage. However, its function in retinal homeostasis, and its role in retinal regeneration remained unknown.The first part of my PhD aimed at deciphering YAP function in mouse Müller cells in both physiological and pathological conditions. In essence, we revealed a central role of YAP in Müller cell-dependent retinal homeostasis and as such, as a key player for cone survival during aging. In case of retinal damage, we showed that YAP upregulation is critical for cell-cycle gene reactivation that normally accompanies reactive gliosis. In this context, we also found a functional interaction between YAP and the EGFR signaling pathway, supporting a function of YAP as a hub within the complex signaling network of key regenerative signaling pathways. I also found that YAP overactivation is sufficient to induce mouse Müller cell reprogramming into highly proliferative cells, mimicking a fish or amphibian condition, when Müller cells spontaneously proliferate upon injury. As a whole, this work highlights the critical role of YAP in driving mammalian Müller cells to exit quiescence and thus reveals a potential target for regenerative medicine.The second part of my PhD project stemmed from the emerging discoveries highlighting inflammatory pathways as regulators of the regenerative process. Although inflammation is considered to hamper retinal regeneration in mammals, there are no studies regarding the influence of inflammation on mouse Müller cell-dependent regenerative process. In addition, recent discoveries on the role of YAP in the regulation of the inflammatory process lead to the hypothesis that it could play a role in the relationship between inflammation and retinal regeneration. I thus aimed at investigating the role played by the injury-induced inflammation on mouse Müller cell behavior and how YAP fits in this interplay. I unexpectedly discovered that a microglial-dependent pro-inflammatory context stimulates mouse Müller cell proliferation in retinal explants. Importantly, my results showed that this mitogenic effect occurs in a YAP-dependent manner. Moreover, I uncovered that the effect of YAP overexpression on Müller cell proliferation can be potentiated by a pro-inflammatory environment, and abolished upon microglia depletion. Finally, we found that, in turn, YAP regulates key inflammatory cytokines. Altogether, this part of my project not only deepen our knowledge regarding the impact of inflammation on mouse Müller cell behavior, it also highlights YAP as a key player in the crosstalk between inflammation and retinal regeneration

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Girardin, Stephen. "Régulation de la voie de signalisation intracellulaire JNK/SAPK." Université Louis Pasteur (Strasbourg) (1971-2008), 2001. http://www.theses.fr/2001STR13179.

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Jabrani, Amira. "Régulation de la voie Hedgehog : Étude structurale et fonctionnelle de protéines de signalisation." Phd thesis, Université Paris Sud - Paris XI, 2012. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00737495.

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Abstract:

La voie de signalisation HH joue un rôle crucial dans le contrôle de la prolifération et la différenciation cellulaires. Le dérèglement de cette voie est responsable de nombreux cancers. J'ai ainsi mis en place les outils moléculaires nécessaires pour identifier des régions importantes dans les interactions protéines-protéines au sein du complexe intracellulaire de la voie qui vont permettre de mieux comprendre les mécanismes de régulation du facteur de transcription CI en fonction de l'état d'activation de la voie. Mes travaux ouvrent la voie à de nombreuses études structurales et fonctionnelles de ces protéines jusqu'ici peu étudiées.

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Bonnemay, Louise. "Utilisation de nanoparticules magnétiques pour perturber la localisation spatiotemporelle de protéines de signalisation." Thesis, Paris 6, 2014. http://www.theses.fr/2014PA066528/document.

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Abstract:

De plus en plus d’études soulignent l’importance de la localisation intracellulaire des voies de signalisation. Nous avons développé des méthodes permettant de perturber cette localisation à l’aide de nanoparticules magnétiques. Ces dernières sont fonctionnalisées avec les protéines d’intérêts et deviennent ainsi un vecteur permettant de contrôler la localisation de la signalisation. Nous avons tout d’abord appliqué cette méthode dans un système modèle, des gouttes d’extrait cellulaire de Xénope, dans lesquelles nous avons créé artificiellement un gradient de protéines de signalisation à l’aide de nanoparticules magnétiques. Nous avons mis en évidence l’influence d’une asymétrie biochimique sur la localisation d’asters de microtubules. Dans un deuxième temps nous avons examiné la possibilité d’appliquer cette méthode dans des cellules HeLa adhérentes, pour perturber la localisation d’endosomes de signalisation rendus magnétiques. Nous avons cherché à optimiser les conditions expérimentales nécessaires pour contrôler la position d’endosomes de signalisation magnétiques Enfin, un troisième projet dont les résultats préliminaires sont présentés dans cette thèse, a consisté à utiliser un actuateur, non plus magnétique, mais biologique pour confiner une cascade de signalisation. Plus précisément la contraction d’un réseau d’actine confiné dans des gouttes d’extrait cellulaire est utilisée pour localiser des protéines de signalisation. Ces résultats démontrent l’intérêt de nanoparticules magnétiques pour induire et étudier des phénomènes de brisures de symétries dans des environnements biologiques
An increasing number of studies highlight the importance of signaling localization. We developed methods to perturb this localization using magnetic nanoparticles. Proteins of interest are grafted on magnetic nanoparticles, allowing to magnetically localize them. We first propose a new method to engineer directly a spatial gradient of signaling protein concentration within in cell extract droplets using super-paramagnetic nanoparticles. We observed a link between a spatial asymmetry in biochemical cues and microtubules aster positional information. Our assay provides a bottom-up approach to examine the minimum ingredients generating polarization and symmetry breaking within cells. We then examined the possibility to magnetically perturb endosomes position in HeLa cell. We found the experimental conditions to achieve this goal. Finally, we used directly cytoskeleton elements as actin filament to trigger asymmetrically confined signaling proteins and trigger microtubule assembly, in cell extract droplets. More generally, these results show how symmetry breaking within cells can be induced and studied using magnetic nanoparticles and biophysical tools

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Makamté, Kemdib Staëlle Sonia. "Etudes des protéines Patched et SUFU impliquées dans la voie de signalisation Hedgehog." Thesis, Sorbonne Paris Cité, 2017. http://www.theses.fr/2017USPCC102/document.

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Abstract:

Parmi les voies de signalisation, la voie hedgehog (HH) intervient dans la formation de la polarité segmentaire. Si elle est défectueuse, elle entraine plusieurs malformations. De nombreux cancers présentent une suractivation de cette voie. La voie HH activée par la fixation du ligand HH sur le récepteur Patched (hPtc) et fait intervenir plusieurs partenaires cytoplasmiques dont Supressor of Fused (SUFU).Peu de données moléculaires et structurales sont disponibles pour cette voie et pourtant, ces données sont nécessaires pour comprendre sans ambiguïté son fonctionnement. De plus, la voie HH a été proposée comme pouvant être la cible de traitements chimio thérapeutiques mais, la protéine hPtc est impliquée dans l’efflux des drogues anticancéreuses. Une inhibition de hPtc par la fixation de son ligand entraine l’inhibition de l’efflux de drogues. Néanmoins, le site de fixation de HH sur son récepteur n’a pas encore été déterminé.Durant cette thèse, les travaux effectués ont permis l’étude structurale de la protéine hPtc notamment la détermination du site de fixation de HH. Dans un deuxième volet de cette thèse, j’ai effectué des études structurales de certaines protéines SUFU.Dans un premier temps, je me suis concentrée sur les domaines extracellulaires de hPtc qui ont été décrits comme nécessaires pour la fixation du ligand HH. J’ai cloné une protéine chimère constituée de ces deux domaines liés par le lysozyme du phage T4 (hPtcD1D2). Cette construction a été exprimée dans la bactérie E.coli. Les conditions d’expression testées permettent d’obtenir la protéine sous forme de corps d’inclusion dans le cytoplasme de la bactérie. Dans un deuxième temps, j’ai cloné la protéine dans un vecteur d’expression en levure. De manière concomitante, j’ai exprimé la protéine hPtc tronquée de ses régions N et C terminales (hPtcΛNΛC). Ce sont des régions intrinsèquement désordonnées qui ne permettraient pas une bonne cristallisation de la protéine. L’expression a été effectuée dans la levure. La solubilisation de cette protéine membranaire est en cours d’expérimentation.Ce travail a permis de poser les bases de l’expression de hPtcD1D2 et de hPtcΛNΛC. Ceci va notamment permettre la surexpression de la protéine et sa cristallisation afin de déterminer sa structure 3D et de caractériser le site de fixation de son ligand.Enfin, j’ai entrepris des études structurales des protéines SUFU. Un nouveau site de fixation du Zn a été caractérisé. En effet, après purification de la protéine, j’ai effectué des mesures d’affinité à l’aide d’un composé colorimétrique, le PAR et des expériences de spectroscopie d’émission atomique dans lesquelles j’ai fait varier le pH et la concentration en Zn. Ainsi, j’ai pu déterminer que SUFU a une affinité nanomolaire pour le Zn meilleure à pH 8 qu’à pH 6,5. La fixation du Zn se ferait donc sur un site basique. La structure de SUFU a été publiée en 2013 par deux équipes, je me suis inspirée des conditions de cristallisation de ces deux articles, pour cristalliser SUFU en présence de Zn. Les expériences de dichroïsme circulaire ont permis d’affirmer que ces protéines sont organisées en hélices α et en feuillets β. De plus, grâce à la diffusion des rayons X aux petits angles, j’ai pu déterminer que dSUFU, hSUFU et zSUFU n’ont pas la même conformation en solution. Alors que SUFU de drosophile est un monomère globulaire, les protéines humaine et de poisson zèbre seraient plutôt allongées et dimériques. La région N-terminale potentiellement impliquée dans la dimérisation de hSUFU a été tronquée et hSUFUΛ30 présente des différences d’état d’oligomérisation
The hedgehog (HH) signalling pathway is involved in the segmentary polarity formation. A dysfunction of this pathway is involved in several malformations. Many cancers are caused by an overactivation of this pathway. The HH signalling pathway is activated by the binding of HH on the receptor Patched (hPtc) and included many cytoplasmic partners such as Suppressor of Fused (SUFU). Few molecular and structural data are available on this pathway even if these data are important to fully understand the pathway functioning. Furthermore, the HH signalling pathway maybe be the target of chemotherapy treatments. However, hPtc is involved in drugs efflux. Inhibition of hPtc by the binding of its ligand HH may lead to this efflux inhibition. Yet, the binding site of HH on its receptor hPtc is not yet determined.During this thesis, the structural study of hPtc have been engaged especially the study of the binding site of HH. On the second hand, I have structurally studied some SUFU proteins.First of all, I have expressed the extracellular domains of hPtc. These domains have been described as necessary for HH binding. I have cloned a chimeric protein made by the extracellular domains of hPtc associated with the lysozyme T4 (hPtcD1D2). This protein have been expressed in the E.Coli bacteria. The protein expressed in inclusion bodies in the cytoplasm of the bacteria. In the other hand, I have cloned the protein in a yeast expression vector. Part of this, I have also expressed the protein hPtc without its N and C terminus regions (hPtcNC). These regions are intrinsically disrupted. They may lead to crystallization problems. The protein has been expressed in yeast.This work permits to expressed hPtcD1D2 and hPtcΛNΛC. This will lead to the expression of the protein and its crystallisation in order to determine its 3D structure and to characterize its ligand binding site.Finally, I structurally studied the protein SUFU. A novel Zn binding site has been characterized. In fact, after the protein purification, I have made affinity measures using a colorimetric compound, PAR. I also performed spectroscopic experiments in which I varied the pH and the Zn concentration. I determined the SUFU has a nanomolar affinity for the Zn best at pH 8 than pH 6.5. Indeed, the Zn binding site may be basic.The SUFU 3D structure has been published in 2013 by two teams. Inspired by their crystallization conditions, I crystallized SUFU with Zn. Circular dichroism experiments permitted to know that the proteins are organized in  helices and  sheets. Moreover, small angles X ray spectroscopy experiments show that dSUFU, hSUFU and zSUFU did not have the same conformation in solution. Drosophila SUFU is globular and human and zebrafish SUFU are long and dimeric. The N-terminal region involved in hSUFU has been removed and hSUFUΛ30 is present in different oligomerization forms

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Ferry, Xavier. "Signalisation de l'activation des mastocytes par les sécrétagogues basiques." Université Louis Pasteur (Strasbourg) (1971-2008), 2002. http://www.theses.fr/2002STR13111.

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Martinez, Turtos Adriana. "Les effets anti-tumoraux d'un régime pauvre en protéines et de la signalisation IRE1α." Electronic Thesis or Diss., Université Côte d'Azur, 2022. http://www.theses.fr/2022COAZ6012.

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Abstract:

Les interventions nutritionnelles sont étudiées dans le contexte des maladies non transmissibles telles que le cancer. Les régimes alimentaires tels que la restriction calorique, le jeûne, les régimes cétogènes et restreints en protéines ont montré leur capacité à limiter la progression tumorale. Ainsi, récemment nous avons décrit l'effet protecteur d'un régime isocalorique partiellement réduit en protéines dans plusieurs modèles de souris cancéreuses. Nous avons ainsi établi que ces régimes appauvris en protéine limitaient la croissance tumorale via l’induction d’une immunosurveillance anticancéreuse dépendante de l’activation de la protéine IRE1α.Inositol-requiring enzyme 1α (IRE1α) est le senseur du stress du ER (réticulum endoplasmique) le plus conservé au cours de l'évolution. Il est induit en réponse à un stress dit UPR (Unfolded Protein Response). L'UPR est activé par l'accumulation de protéines mal repliées dans le RE, les perturbations lipidiques de la membrane du RE, l'hypoxie et la privation de nutriments. IRE1α active des cibles en aval via son activité endoribonucléase notamment. Ainsi, IRE1α, via son activité endoribonucléase, conduit principalement à l'épissage de XBP1 et la dégradation concomitante de certains ARNs par un processus connu sous le nom de Regulated IRE1-Dependent Decay (RIDD). Alors que l'épissage XBP1 permet de préserver l'homéostasie cellulaire, l'induction massive de RIDD conduit à l'apoptose en réponse à un stress chronique du RE.La signalisation IRE1α a été décrite comme jouant un rôle dual dans les cancers. Alors que l'axe IRE1α-XBP1 promeut la progression tumorale dans plusieurs tumeurs solides et liquides, la branche IRE1α-RIDD a été suggérée comme suppresseur de tumeur dans le glioblastome. Étant donné que nos découvertes précédentes ont montré que IRE1α est impliqué dans les effets protecteurs d'un régime pauvre en protéines contre les tumeurs, nous avons étudié l'effet de l'expression exogène de IRE1α dans des cellules tumorales implantées chez des souris immunocompétentes.Nous avons constaté qu’une activation complète de l’activité ARNase d’IRE1α limitait la croissance tumorale de modèles de cancers colorectaux et pulmonaires. Les tumeurs présentaient une activité plus élevée IRE1α ce qui se traduisait par une activation des voies IRE1α-XBP1 et IRE1α-RIDD, une immunosurveillance anticancéreuse plus élevée et des cellules tumorales en apoptose. En conclusion, nos résultats indiquent qu’une activation complète de l’activité RNAse d’IRE1α peut jouer un rôle suppresseur de tumeur
Nutritional interventions are investigated in the context of non-communicable diseases such as cancer. Dietary regimens such as caloric restriction, fasting, ketogenic and protein-restricted diets have shown benefits to control tumor progression. Indeed, we have previously reported the protective effect of an isocaloric diet partially reduced in protein in several cancer mouse models. Beyond a stronger anticancer immunosurveillance dependent on cytotoxic T cells, the low protein diet limited tumor growth in an IRE1α-dependent manner.Inositol-requiring enzyme 1α (IRE1α) is the most evolutionally conserved ER (endoplasmic reticulum) stress sensor induced as part of the Unfolded Protein Response (UPR). The UPR is activated by accumulation of misfolded proteins in the ER, lipidic disturbances in the ER membrane, hypoxia and nutrient deprivation. IRE1α activates downstream targets via its endoribonuclease activity resulting in XBP1 splicing as well as degradation of RNAs by a process known as the Regulated IRE1-Dependent Decay (RIDD). While XBP1 splicing recovers cellular homeostasis, massive RIDD induction leads to apoptosis under chronic ER stress.The IRE1α signaling has been described to play dual roles in most hallmarks of cancer. While the IRE1α-XBP1 axis in tumor cells supports tumor progression in several solid and liquid oncogenic malignancies, the IRE1α-RIDD branch has been suggested as tumor-suppressive in glioblastoma. Since our previous findings showed that IRE1 is implicated in the tumor-protective effects of a low protein diet, we investigated the effect of the exogenous expression of IRE1 in tumor cells implanted in immunocompetent mice.We found that overexpression of IRE1 and self-induction of its full RNAse activity was detrimental for subcutaneous tumor growth of colorectal and Lewis lung carcinomas. Tumors with higher IRE1 activity were characterized by active IRE1α-XBP1 and IRE1α-RIDD branches, a higher anticancer immunosurveillance and tumor cells undergoing apoptosis. The enhanced anti-cancer immune response elicits upon IRE1α overexpression was mainly dependent on T cell-mediated-cytotoxicity. In conclusion, our findings support the notion that IRE1α with a full RNAse activity can have tumor-suppressive roles

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Yao, Lei. "Etude de la voie de signalisation de TOR (Target Of Rapamycin) chez Arabidopsis thaliana." Aix-Marseille 2, 2007. http://theses.univ-amu.fr.lama.univ-amu.fr/2007AIX22004.pdf.

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Abstract:

TOR (target of rapamycin) est une protéine de signalisation conservée chez les eucaryotes. Ses fonctions ont été explorées chez les cellules animales et la levure montrant que la voie de signalisation à laquelle elle appartient est essentielle pour la régulation de la croissance cellulaire. Chez les plantes, le gène TOR existe mais la résistance naturelle à la rapamycine et la léthalité embryonnaire associée à son inactivation insertionnelle limitent l’étude de sa voie de signalisation. Dans ce travail, j’ai donc utilisé la technologie du RNAi constitutif ou conditionnel pour réduire l’expression du gène TOR chez Arabidopsis thaliana. J’ai aussi généré un anticorps permettant la détection de la protéine TOR. Ces approches ont montré que la modification de l’expression de AtTOR causait d’importantes modifications morphologiques, la croissance végétative et reproductive étant positivement corrélées avec l’expression de TOR. J’ai pu aussi montrer que la voie de TOR était impliquée dans la taille du méristéme, la taille et le nombre des cellules et l’accumulation de biomasse. Ces travaux ont aussi montré un lien entre TOR la disponibilité des éléments nutritifs tels que le phosphate et le sucre, les phytohormones, la quantité de lumiére et la tolérance aux stress. Ceci suggére donc que TOR est un composant important de l’intégration entre la croissance et l’environnement chez les plantes. Enfin l’anticorps produit a permis d’étudier les interactions hétérologues entre la protéine AtTOR et la protéine FKBP de Saccharomyces cerevisisae
TOR (target of rapamycin) is a conserved eukaryotic signaling protein. Its pathway has been investigated mostly in animal and yeast cells where it is recognized as a central regulator of cell growth. In plants, although the TOR gene was identified, the natural resistance of plants to rapamycin and the lethal phenotype caused by its insertional knockout currently hamper the study of the TOR pathway. Previous results have shown that the Arabidopsis thaliana TOR is essential for embryo development, but the precise architecture of the plant TOR pathway remains to be determined. In this work I used constitutive or inducible RNAi to reduce the AtTOR expression and I generate an antibody recognizing the AtTOR protein in plants cells. These approaches show that modifying AtTOR expression causes significant alterations in morphology and that vegetative and reproductive growth are positively correlated with AtTOR expression. The AtTOR signalling pathway regulates meristem size, cell size and cell numbers, and in turn affects the accumulation of biomass. I further demonstrated that AtTOR is also linked to the response to nutrient availability such as phosphate and sugar, phytohormones, light-dosage and the tolerance of stresses. This suggests that plant TOR is an essential component of the growth response to environmental cues. Using the AtTOR antibody we further characterize the heterologous interaction between AtTOR and the Saccharomyces cerevisiae FKBP protein

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Vacher, Sébastien. "La signalisation glucose chez le champignon phytopathogène Sclerotinia sclerotiorum : caractérisation du gène snfS codant pour une protéine kinase." Lyon 1, 2002. http://www.theses.fr/2002LYO10149.

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Abstract:

Le champignon phytopathogène Sclerotinia sclerotiorum peut attaquer et macérer un grand nombre d'espèces de plantes grâce à la sécrétion d'une collection d'enzymes lytiques. L'expression de la majorité des enzymes dégradatives de la paroi des plantes est régulée au niveau transcriptionnel et soumis à la répression glucose contrôlée par CRE, un homologue de Mig1p. Chez la levure, la fonction de Mig1p est modulée par phosphorylation due à la protéine kinase Snf1p en réponse aux modifications de conditions environnementales. Cette kinase intervient aussi dans de nombreux phénomènes généraux comme la méiose ou le vieillissement cellulaire. Nous avons cloné le gène snfS de S. Sclerotiorum dans le but de remonter la cascade de signalisation qui indique au champignon la présence de glucose dans le milieu. Le gène snfS code pour une protéine de 765 acides aminés au Pi théorique de 7,4 qui possède toutes les structures caractéristiques d'une sérine thréonine protéine kinase. L'étude en RT-PCR a montré que snfS est exprimé durant la pathogenèse et durant la phase saprophyte à un niveau constant caractéristique d'une expression constitutive. Le cDNA de snfS peut complémenter partiellement le mutant snf1 de la levure car les cellules complémentées ne peuvent utiliser toutes les sources de carbone assimilées par les cellules sauvages. La régulation de l'activité de Snf1p chez la levure est liée à des interactions entre deux différents domaines de la protéine et des sous-unités du complexe enzymatique. En double hybride, des interactions entre deux protéines SNFS ont été détectées et elles interviennent au niveau du domaine régulateur mais pas entre les deux domaines de la protéine. Enfin, la protéine fusion SNFS::GFP apparaît localisée dans tout le cytoplasme et la localisation est partiellement sous le contrôle de la source de carbone présente dans le milieu. Tous ces résultats indiquent que la régulation des homologues SNFS chez la levure et le champignon filamenteux est différente.

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Hamon, Annaïg. "Etude de la signalisation Hippo/YAP dans les cellules gliales de Müller en conditions physiologiques et pathologiques de dégénérescence rétinienne chez la souris." Thesis, Université Paris-Saclay (ComUE), 2017. http://www.theses.fr/2017SACLS558/document.

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Abstract:

Les maladies dégénératives de la rétine sont une des causes principales de cécité. Parmi différentes stratégies thérapeutiques actuellement étudiées, notre équipe s’intéresse au potentiel régénératif de la rétine. Une source cellulaire d'intérêt sont les cellules de Müller, principal type de cellules gliales de la rétine, capables de se réactiver en cas de dégénérescence et d’adopter certaines caractéristiques de cellules souches. Elles entrent alors dans un état appelé gliose réactive. Tandis que chez certaines espèces comme le poisson, elles permettent la régénération de la rétine, elles ont des capacités régénératives très limitées et inefficaces chez les mammifères. Une meilleure connaissance des mécanismes moléculaires régissant la gliose réactive des cellules de Müller est donc essentielle si l’on veut identifier des cibles thérapeutiques capables de stimuler le potentiel de régénération de ces cellules. Dans ce contexte, le but de mon projet de thèse a été d’étudier le rôle du co-facteur de transcription YAP dans la réactivation des cellules de Müller. Cette protéine est l’effecteur de la voie de signalisation Hippo, connue pour son implication dans la régulation des cellules souches et la régénération de certains organes.Dans un premier temps, nous avons réalisé une analyse transcriptomique qui a montré que la voie Hippo/YAP est une des principales voies dérégulées dans un modèle de dégénérescence rétinienne chez la souris. Nous avons ensuite montré que la protéine YAP est spécifiquement exprimée dans les cellules de Müller et que son expression et son activité transcriptionnelle sont augmentées au cours de la dégénérescence lorsque les cellules de Müller deviennent réactives. Ces données suggèrent pour la première fois un lien entre YAP et la gliose réactive dans la rétine. Par conséquent, dans un second temps, mon projet de thèse a consisté en l’étude fonctionnelle de YAP dans les cellules de Müller. Dans ce but, nous avons généré par croisements chez la souris un modèle inductible de délétion du gène Yap spécifiquement dans ces cellules. Ce modèle a permis de montrer qu’en absence de Yap en conditions physiologiques, plusieurs gènes spécifiques des cellules de Müller sont dérégulés, suggérant un dysfonctionnement de ces cellules. L’étude phénotypique a permis de révéler que ces dérégulations moléculaires conduisent à un vieillissement prématuré des cellules de Müller et à une baisse de la vision chez les souris âgées. Ces données suggèrent que YAP est requis pour le fonctionnement normal des cellules gliales de Müller. Nous avons ensuite examiné l’impact de la perte de Yap dans les cellules de Müller en conditions de dégénérescence des photorécepteurs. Une analyse transcriptomique a permis de montrer que différents aspects de la réponse moléculaire des cellules de Müller réactives sont affectés. Parmi les processus biologiques dérégulés, nous nous sommes intéressés à la régulation de la prolifération cellulaire. Nous avons montré que YAP est nécessaire à l’augmentation de l’expression de gènes associés à la réentrée dans le cycle cellulaire de la glie de Müller. Par ailleurs, nos résultats suggèrent que des composants de la voie de signalisation EGFR, connue pour son rôle central dans la réactivation des cellules de Müller, sont régulés par YAP.Dans l’ensemble, ces résultats révèlent l’importance de YAP (i) dans le fonctionnement des cellules de Müller en conditions physiologiques pour maintenir l’homéostasie rétinienne, et (ii) dans la régulation des processus de réactivation de ces cellules en conditions dégénératives. De plus, ces données permettent de proposer un modèle selon lequel YAP serait impliqué dans le contrôle de la réentrée des cellules de Müller dans le cycle cellulaire via une interaction avec la voie de signalisation EGFR. Ce travail a donc contribué à approfondir nos connaissances du réseau de signalisation impliqué dans la réactivation des cellules de Müller de la rétine des mammifères
Retinal dystrophies are one of the main causes of blindness. Among the different therapeutic strategies currently studied, our team is interested in the regenerative potential of endogenous retinal cells. A cellular source of interest are Müller cells, which are the main type of glial cells in the retina. These cells are able to reactivate in case of retinal degeneration and adopt various characteristics of stem cells. They enter a state called reactive gliosis. While in some species such as the fish, they allow the complete regeneration of the retina, they have very limited and ineffective regenerative capacities in mammals. Increasing our knowledge of the complex molecular response of Müller cells to retinal degeneration is thus essential for the development of promising new therapeutic strategies. In this context, the aim of my thesis project was to study the role of the co-transcription factor YAP in Müller cells reactivation. This protein is the main effector of the Hippo signaling pathway which is a crucial player in the field of stem cell biology and regeneration.As a first step, we performed a transcriptomic analysis, which revealed that the Hippo/YAP pathway is one of the main signaling deregulated in a mouse model of photoreceptor degeneration. In particular, we found that YAP is specifically expressed in Müller cells and strongly upregulated upon retinal degeneration, when these cells are reactivated. We thus uncovered for the first time a link between the Hippo/YAP pathway and reactive gliosis in the retina. Consequently, the second part of my thesis project was to undertake a functional study of YAP in Müller cells. For this purpose, we generated, by crossing, a mouse model allowing for Yap conditional knockout specifically in these cells. This model allowed us to show that Yap deletion leads to deregulation of several Müller cell specific genes. A phenotypic analysis revealed that these molecular deregulations lead to premature aging of Müller cells and visual defects in old mice. These results suggest that YAP is required for normal function of Müller glial cells. We then studied the impact of Yap deletion in Müller cells under degenerative conditions. A transcriptomic analysis revealed that various aspects of the molecular response of reactive Müller cells are affected in the absence of Yap. Among the deregulated biological processes, we focussed in particular in the regulation of cell proliferation. We found that YAP is required to trigger cell cycle gene upregulation that occurs in Müller glial cells following photoreceptor cell death. Furthermore, our results suggest that some components of the EGFR signaling pathway, which is known for its central role in the reactivation of Müller cells in pathological conditions, are regulated by YAP in Müller cells.Taken together, these results highlight the importance of YAP (i) in Müller cell function under physiological conditions to maintain retinal homeostasis, and (ii) in the regulation of Müller cell reactivation process under degenerative conditions. Moreover, these data allow us to propose a model in which YAP would be involved in the control of Müller glia cell cycle re-entry through its interaction with the EGFR signaling pathway. Therefore, this work has contributed to increase our knowledge of the signaling network involved in the reactivation of Müller cells in the mammalian retina

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Brigui, Amira. "Rôle et contrôle du trafic de Patched dans la voie de signalisation Hedgehog chez Drosophila melanogaster." Paris 7, 2009. http://www.theses.fr/2009PA077030.

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Abstract:

Les protéines sécrétées Hedgehog (HH) agissent comme des morphogènes au cours du développement animal. Chez les Vertébrés, la voie de signalisation HH, contrôle aussi le devenir des cellules souches et sa dérégulation est associée à de multiples cancers. Le récepteur de HH, Patched (PTC), inhibe la voie HH en absence de signal et est lui même inhibée par HH. PTC contrôle aussi le gradient de HH en séquestrant et internalisant HH. Le trafic intracellulaire de PTC semble étroitement lié à son activité. Ici nous analysons le rôle de deux E3 Ubiquitine ligases de type HECT, NEDD4 et SU(DX) dans le trafic et l'accumulation de PTC chez la drosophile. Nous montrons que NEDD4 régule négativement PTC et est nécessaire pour l'endocytose de PTC seule ou liée à HH. Ces effets sont dus à l'interaction de NEDD4 avec un motif L/PPxY conservé dans les protéines PTC. L'internalisation de PTC peut être spécifiquement bloquée en mutant ce motif. L'endocytose de PTC est essentielle à son accumulation mais pas à son activité inhibitrice sur la voie de signalisation ni à sa capacité à retenir HH Nous montrons aussi que SU(DX) est impliquée dans l'endocytose de PTC et est nécessaire à son ciblage au lysosome en réponse à HH. Nos résultats suggèrent que NEDD4 et SU(DX) coopérèrent pour réguler finement le niveau de PTC : NEDD4 permet l'endocytose constitutive de PTC et sa dégradation, alors que SU(DX) semble être spécifique à son ciblage au lysosome et sa dégradation par les cellules qui répondent à HH. Finalement, compte tenu de leurs rôles dans le trafic Notch, NEDD4 et SU(DX) représentent un lien potentiel entre ces deux voies de signalisation, qui sont centrales à la fois dans le développement et l'oncogenèse
The secreted Hedgehog (HH) proteins act as morphogens in animal development. In vertebrates, HH signalling also controls the fate of stem cells and its deregulation is involved in oncogenesis. The HH receptor Patched (PTC) inhibits the HH pathway in the absence of signal and is itself inhibited by HH binding. PTC also controls the HH gradient by the sequestration and internalisation of HH 4. The transport of PTC is tightly linked to its activity. Here, we analysed the role of two HECT E3 ubiquitin ligases, NEDD4 and SU(DX), in the trafficking and accumulation of PTC in Drosophila. We show that NEDD4 down regulates PTC and is necessary for the endocytosis of free or HH-bound PTC. These effects rely on the interaction of NEDD4 with an L/PPXY (PY) recognition motif conserved in PTC proteins. Internalisation of PTC can be specifically blocked by altering this motif. Thus, PTC endocytosis is essential for its accumulation but not for its intrinsic inhibitory signalling or its ability to bind and retain HH. We also show that SU(DX) is involved in PTC endocytosis and is necessary for lysosomal sorting of PTC in response to HH. Our findings suggest that NEDD4 and SU(DX) cooperate to finely tune the regulation of PTC levels: whereas NEDD4 promutes the constitutive endocytosis and degradation of PTC, SU(DX) appears to be specifically required for the lysosomal sorting and degradation of PTC in cells responding to HH. Finally, given their roles in Notch trafficking, NEDD4 and SU(DX) represent points of potential between these two signalling pathways, which are central to both development and oncogenesis

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Schramm, Antoine. "Caractérisation de domaines d’oligomérisation et régions désordonnées de phosphoprotéine de paramyxovirus." Thesis, Aix-Marseille, 2019. http://www.theses.fr/2019AIXM0381.

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Abstract:

Chez les paramyxovirus, la réplication viral est gouvernée par le complexe réplicatif. Composée des protéines N, P et L, il constitue une cible de choix pour des inhibiteurs anti-viraux. La P est caractérisée comme la plateforme de recrutement principale unissant les différents éléments du système. Cependant, l’interaction entre la P et la L reste peu caractérisée. L’objectif de ma thèse est d’améliorer d’une part la cartographie de P en rapport avec son interaction avec L et d’autre part d’améliorer les modèles structuraux de P. En utilisant différentes approches nous sommes parvenus à identifier différents éléments de la Pinter agissant avec la L et à associer une fonction à ces interactions. Notamment, le module P XD combiner à un domaine d’oligomérisation est indispensable pour former un complexe stable et soluble entre P et L. Nous avons identifié un domaine en C-ter du domaine d’oligomérisation dont la présence est indispensable pour le repliement de L sous forme active. Finalement, nous avons mis en évidence qu’une propriété physico-chimique du domaine d’oligomérisation est crucial pour le fonctionnement de la machinerie de transcription et réplication virale. Des mesures de biophysiques sur des fragments de P permirent de proposer un modèle préliminaire de la structure du domaine C-terminale de P à très basse résolution.La cartographie de l’interaction entre P et L suggère que ces deux protéines interagissent via différents sites, suggérant un complexe dynamique au sein duquel le domaine d’oligomérisation, jusqu’ alors considéré comme un domaine relativement inerte, jouerait un rôle crucial dans la machinerie de transcription et réplication
The replication of paramyxoviruses is headed by the viral replicative machinery composed of three proteins : P, N and L.This complexe is a promising target for antiviral inhibitors. While P is known to be the centralrecruitment platform of the system, the interaction details of the P-L complex remain obscure. The ambition ofmy thesis project is to improve our knowledge on P interaction and dynamics. Thus, on one hand my goal is toimprove the P-L interaction mapping and on the other hand to contribute to a better structural description of P.Combining bio-physical and functional virology approaches, we identified P modules involved in the P-Lcomplex assembly. P XD is an essential P module for interaction as well as the P oligomeric state. theoligomerisation domain C-terminal part is essential for P chaperon function and crucial to drive L to an activeconformation. Finally, physico-chemical properties that correlate the oligomerisation domain stability is essentialfor transcription and replication processes. Moreover, based on biophysical measurements on P truncatedvariants, we propose a preliminary model of P C-terminal domain at very low resolution. Those results are a stepforward in narrowing down the replicative complex mechanistic. P mapping suggest that P and L interacttogether via different sites, suggesting this complex is rather dynamic. Especially, the oligomerisation domain sofar considered as an inert part of P, plays a crucial role in the replicative machinery

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Miot, Marie-Caroline. "Etude du système CpxA/R : une voie de signalisation du repliement incorrect des protéines de l'enveloppe d'Escherichia coli." Paris 6, 2007. http://www.theses.fr/2007PA066691.

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Abstract:

Le système à deux composants CpxA/R, voie de réponse au stress extracytoplasmique chez Escherichia coli, comprend le senseur membranaire histidine kinase CpxA et le régulateur transcriptionnel cytoplasmique CpxR. Cette voie est activée notamment par la présence de protéines mal repliées ou agrégées dans le périplasme. En absence de stress, la voie Cpx est réprimée par le facteur périplasmique CpxP. Le mécanisme de détection des signaux et le mode d’action de CpxP restent encore mal déterminés. Afin de comprendre les mécanismes d’agrégation dans le périplasme, nous avons étudié la compétition entre l’agrégation et le repliement de fusions protéiques. Nos travaux ont montré que leur solubilité dépend de la solubilité de la protéine en position N-terminale et que des agrégats périplasmiques peuvent contenir des protéines actives. Les fusions protéiques étudiées, qui présentent un défaut de repliement, activent la voie Cpx. Dans l’étude du système Cpx, nous avons entrepris la caractérisation biochimique et fonctionnelle de CpxP et CpxA. Afin de surproduire CpxP, nous avons optimisé la région d’initiation de traduction de cpxP pour laquelle une structure secondaire dans l’ARNm limite la production de CpxP. La caractérisation de CpxP a montré que CpxP est un complexe homodimèrique. La protéine membranaire CpxA a été produite à partir d’un système acellulaire en présence de micelles de détergent, dans une conformation active. Nous avons déterminé que CpxA s’organise probablement en dimère et analysé l’importance des différents domaines de CpxA dans son oligomérisation. Nos résultats ont montré que CpxP inhibe l’activité de CpxA par une interaction directe entre les deux dimères.

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Cabane, Candice. "Les voies de signalisation des protéines P38 et AKT : rôle et interaction au cours de la différenciation des cellules musculaires." Nice, 2003. http://www.theses.fr/2003NICE4000.

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Bayle, Julie Emmanuelle. "Régulation de la signalisation du récepteur KIT par les protéines SOCS : Etude de l'adaptateur SOCS6." Aix-Marseille 2, 2004. http://www.theses.fr/2004AIX22080.

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Quettier, Anne-Laure. "Implication des protéines tyrosine phosphatases dans la signalisation de l' acide abscissique chez Arabidopsis thaliana." Paris 6, 2006. http://www.theses.fr/2006PA066312.

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Blaize, Gaëtan. "Analyses moléculaire, cellulaire et fonctionnelle des protéines de signalisation CD5 et Themis1 dans les lymphocytes T." Thesis, Toulouse 3, 2018. http://www.theses.fr/2018TOU30124.

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Abstract:

Les lymphocytes T (LT) sont des cellules essentielles du système immunitaire. Elles expriment à leur surface un récepteur, le TCR, qui a la capacité de reconnaître des peptides issus de la dégradation de protéines provenant d'agent infectieux associés aux molécules du complexe majeur d'histocompatibilité. Cette reconnaissance conduit à l'activation de signaux intracellulaires dans les LT propagés grâce à la coordination fine de molécules de signalisations cytosoliques ou membranaires qui agissent de concert pour entraîner des réponses cellulaires adaptées au type d'agent infectieux et permettre le développement d'une réponse immunitaire efficace. Au cours de ce travail de thèse, j'ai étudié deux protéines impliquées dans ces processus, CD5 et Themis1. Les protéines CD5 sont des co-récepteurs des LT capables d'inhiber la signalisation transmise par les TCR. Ils contribuent à réguler le répertoire des TCR en modulant finement les processus de sélection dans le thymus. Le rôle de ces co-récepteurs dans les LT périphériques et les mécanismes moléculaires par lesquels ils opèrent restent mal compris. Pour essayer d'élucider ces mécanismes, j'ai analysé l'interactome de CD5 dans les LT par spectrométrie de masse. J'ai montré que l'engagement des TCR entraîne le recrutement par CD5 d'un complexe moléculaire formé des protéines c-Cbl, Sts-2, SHIP, CIN85, CrkL et Pi3K. L'analyse de l'interactome de CD5 dans les LT c-cbl-/- suggère que c-CBL agit comme une protéine adaptatrice au sein de ce complexe qui relie CD5 aux autres protéines de signalisation. J'ai montré qu'une tyrosine, localisée en position 429 sur la région intracytoplasmique de CD5, était nécessaire à la formation de ce signalosome. L'analyse de la signalisation des TCR dans les LT provenant de souris contenant une mutation invalidante de la tyrosine 429 montre que ce complexe moléculaire régule négativement la phosphorylation de protéines telles que ZAP-70, SLP-76 et ERK et diminue la capacité des lymphocytes T à proliférer en réponse à l'engagement des TCR. CD5 réprime parallèlement l'activité des protéines Foxo1 en facilitant l'activation d'Akt et diminue ainsi la différentiation des LT naïfs en LT régulateurs (Treg) dans les organes lymphoïdes périphériques. Nos résultats suggèrent que CD5 pourrait faciliter le développement de réponses immunitaires efficaces en bloquant la différentiation de Treg dirigés contre des antigènes étrangers. La protéine Themis1 a été découverte récemment et joue un rôle essentiel dans le développement des LT en inhibant l'activité catalytique des tyrosines phosphatases SHP-1 et SHP-2. Les fonctions moléculaires et cellulaires régulées par Themis1 dans les LT périphériques sont inconnues. Au cours de ma thèse, j'ai étudié un nouveau modèle murin sélectivement déficient pour Themis1 dans les LT périphériques après leur développement dans le thymus. Des analyses in vitro montrent que Themis1 augmente les seuils de signalisation des TCR nécessaire pour activer les LT et réprime sélectivement la production d'IFNƴ dans des cellules polarisées Th1. In vivo, l'expression de Themis1 augmente la susceptibilité au développement d'Encephalomyélite Autoimmune Expérimental (EAE), un modèle murin de sclérose en plaques. Des résultats préliminaires obtenus dans ce modèle suggèrent de façon inattendue que Themis1 favorise la différentiation des LT encephalitogènes producteurs d'IFNƴet de GM-CSF. Themis1 pourrait agir in vivo en réprimant l'activité des co-récepteurs inhibiteurs tels que PD-1 et CTLA-4 qui recrutent des phosphatases à domaines SH2
T-cells play a key role in immune responses. Each T-cell expresses a unique TCR (T-cell receptor) which specifically recognises a microbial-derived antigen presented by MHC molecules (major histocompatibility complex) on the surfaces of host cells. This interaction leads to the activation of T-cells via highly regulated intracellular signalling pathways using numerous membrane-bound and cytoplasmic proteins. These complex signals are responsible for the development of a customised immune response specifically directed against the invading pathogen. This thesis examines the role of two proteins involved in TCR signalling, CD5 and Themis1. CD5 proteins are TCR-associated co-receptors which exhibit inhibitory activity on TCR signalling. They modulate the variability of the TCR repertoire by finely regulating positive and negative selection in the thymus. However, their role in peripheral T-cells and the underlying molecular mechanisms by which they act is poorly understood. To answer this question, the CD5 interactome in peripheral T-cells was determined by mass spectrometry. Analysis of the interactome shows that, upon TCR engagement, CD5 recruits several proteins in a molecular complex referred to hereafter as "CD5 signalosome", namely: c-Cbl, Sts-2, SHIP, CIN85, CrkL and Pi3K. The same interactome analysis in c-Cbl deficient T-cells proves that c-Cbl acts as an adaptor necessary for the interaction between CD5 and the other proteins of the CD5 signalosome. These data have also demonstrated the necessity of a specific tyrosine for signalosome recruitment, located in position 429 within the intracytoplasmic domain of CD5. Analysis of TCR signalling in T-cells harbouring an invalidating Tyr429 mutation reveals that the CD5 signalosome downregulates phosphorylation of key proteins such as ZAP-70, ERK1/2 and SLP-76 and decreases T-cell auto-amplification upon stimulation. In parallel, CD5 also inhibits activity of Foxo1 protein by facilitating Akt recruitment, thereby reducing regulatory T-cell (Treg) generation in secondary lymphoid organs. Altogether, our data suggest that the CD5 co-receptor could promote a specifically adapted immune response against exogenous antigens by limitation of Treg differentiation. In 2009, our team identified a previously unknown signalling protein called Themis1 (THymocyte-Express Molecule Important for Selection) that is essential for T-cell development. The role of Themis1 has been extensively studied in thymocytes and recent data show that Themis enhances TCR signalling by selective inhibition of SHP-1 and SPH-2 phosphatases in these cells. However, its role in peripheral T-cells remains elusive. To study the post-thymic role of Themis1, we generated a new mouse model selectively deficient for Themis1 in peripheral T-cells but not in thymocytes. My in vitro analyses show that Themis1 enhances the TCR signalling threshold necessary to activate T-cells and selectively represses IFNƴ production in Th1 polarised T-cells. In vivo, Themis1 expression increases susceptibility to experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE, multiple Sclerosis mouse model). Surprisingly, preliminary results obtained in the same mouse model also suggest that Themis1 enhances differentiation of encephalitogenic T-cells producing IFNƴ and GM-CSF. We therefore hypothesise that Themis1 could act in vivo by repressing the activity of co-inhibitory receptors such as PD-1 or CTLA-4 by recruiting SH2 domain-containing phosphatases

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Ahr, Barbara. "Rôles des motifs cytoplasmiques de CXCR4 dans la signalisation induite par SDF-1." Montpellier 1, 2005. http://www.theses.fr/2005MON1T009.

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Abstract:

LE RECEPTEUR AUX CHIMIOKINES CXCR4 APPARTIENT A LA FAMILLE DES RECEPTEURS COUPLES AUX PROTEINES G HETEROTRIMERIQUES (RCPGs). LE SEUL LIGAND NATUREL QUI LUI SOIT ACTUELLEMENT CONNU EST LA CHIMIOKINE SDF-1. CXCR4 EST PAR AILLEURS UN CORECEPTEUR MAJEUR DU VIH-1 AYANT UN TROPISME POUR LES LIGNEES CELLULAIRES T. LES VIRUS X4, A TROPISME POUR LES LIGNEES T, APPARAISSENT AU COURS DE L'EVOLUTION DE LA PATHOLOGIE, ET CETTE EMERGENCE EST ASSOCIEE A UNE FORTE DEPLETION DES LYMPHOCYTES T CD4+, QUI SERAIT DUE, EN PARTIE AU MOINS, A DES PHENOMENES D'APOPOSE DES LYMPHOCYTES T NON INFECTES. AVANT MON ARRIVEE AU LABORATOIRE, UNE PARTIE DE LA CASCADE APOPTOTIQUE ACTIVEE LORS DE L'INTERACTION DES GLYCOPROTEINES D'ENVELOPPE PRESENTEES A LA SURFACE DES CELLULES, AVEC CXCR4, AVAIT ETE MISE EN EVIDENCE. IL AVAIT NOTAMMENT ETE MONTRE QUE CETTE APOPTOSE INDUIT LA DEPOLARISATION DE LA MEMBRANE MITOCHONDRIALE, LE RELARGAGE DE CYTOCHROME C DE LA MITOCHONDRIE VERS LE CYTOSOL, ET L'ACTIVATION DES CASPASES 9 ET 3. IL NOUS PARAISSAIT ALORS INTERESSANT DE CARACTERISER CETTE CASCADE DE SIGNALISATION PLUS EN AMONT, ET DE DETERMINER LE ROLE JOUE PAR LES DOMAINES CYTOPLASMIQUES DE CXCR4 DANS LES VOIES DE SIGNALISATION INDUITES PAR CE RECEPTEUR EN SITUATION PHYSIOLOGIQUE. AFIN DE REPONDRE A CETTE PROBLEMATIQUE, NOUS AVONS CONSTRUIT DES MUTANTS DE CHACUN DES DOMAINES CYTOPLASMIQUES DE CXCR4. NOUS AVONS AINSI MIS EN EVIDENCE QUE, APRES LIAISON DE SDF-1, SEULE LA TROISIEME BOUCLE INTRACELLULAIRE DE CXCR4 EST REQUISE POUR L'OBSERVATION DES SIGNAUX DEPENDANTS DES PROTEINES Gi, MAIS QUE CETTE BOUCLE N'A AUCUN ROLE DANS L'INTERNALISATION DU RECEPTEUR, SIGNAL STRICTMENT DEPENDANT DE LA PARTIE C-TERMINALE DE CXCR4. NOUS AVONS EGALEMENT DETERMINE QUE LE CHIMIOTACTISME EST UN EVENEMENT PLUS COMPLEXE QUI IMPLIQUE LES DEUXIEME ET TROISIEME BOUCLES CYTOPLASMIQUES DE CXCR4 AINSI QUE SON DOMAINE C-TERMINAL. GRACE AUX MUTANTS DES DOMAINES CYTOPLASMIQUES DE CXCR4, ET AVEC DES MUTANTS PONCTUELS DES TYROSINES CYTOPLASMIQUES, NOUS AVONS ENSUITE DETERMINE QUE, APRES ACTIVATION PAR SDF-1, LA PARTIE N-TERMINALE DE LA TROISIEME BOUCLE CYTOPLASMIQUE DE CXCR4 EST IMPLIQUEE DANS LA PHOSPHORYLATION DE JAK2, ET QUE LA TYROSINE 157 EST RESPONSABLE DE L'ACTIVATION DE STAT3. A PLUS LONG TERME, CE TRAVAIL POURRAIT PERMETTRE DE DISSOCIER AU NIVEAU FONDAMENTAL LES SIGNAUX INDUITS PAR CXCR4 APRES LIAISON DE SDF-1 DE CEUX INDUITS APRES INTERACTION DES GLYCOPROTEINES D'ENVELOPPE DU VIH-1, ET AINSI POUVOIR APPORTER DE NOUVELLES PERSPECTIVES DE TRAITEMENT EN INHIBANT L'APOPTOSE DEPENDANTE DU VIRUS SANS INTERFERER AVEC LE ROLE PHYSIOLOGIQUE DE CXCR4.

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Girard, Johanne. "Altération du sentier de signalisation Sonic Hedgehog dans le cancer superficiler de la vessie : description du phénomène et hypothèse." Doctoral thesis, Université Laval, 2009. http://hdl.handle.net/20.500.11794/20951.

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Abstract:

Les tumeurs papillaires superficielles représentent plus de 75% de tous les cancers primaires de la vessie et on observe une récidive chez une majorité de patients dans les 12 mois suivant la résection de la tumeur, ce qui en fait un cancer provoquant une grande morbidité. L'objectif général des travaux présentés dans cette thèse est de confirmer la possible implication du gène PTC dans le processus de cancérogénèse vésicale. Dans un premier temps, une carcinogénèse chimique chez des souris Pte⁺/⁻ a montré une accélération de l'apparition des évènements prénéoplasiques et des carcinomes chez les souris mutantes comparativement à leurs congénères de type sauvage. De plus, l'apparition de foyers de prolifération stromale a été observée uniquement chez les souris mutantes, et ce avant même l'apparition de carcinomes. Dans un deuxième temps, la caractérisation de ce phénomène stromal a démontré qu'il s'agissait d'une prolifération de myofibroblastes activés et que cela était indépendant de l'altération de la voie Ptc/Shh canonique qui, elle, était observable dans toutes les tumeurs induites chez les souris, peu importe leur génotype. Cette prolifération stromale restreinte aux souris Ptc⁺/⁻ suggère que l'inactivation d'une copie du gène Ptc modifie les interactions épithélium/stroma, menant à une carcinogénèse accélérée. Dans un troisième temps, l'analyse de l'expression des membres de la voie PTC/SHH dans les tumeurs humaines a démontré une altération de la voie PTC/SHH indépendante du statut du locus de Ptc, donnée en parfait accord avec ce qui a été démontré chez la souris. Une baisse de PTC et une perte de GLI-l étaient observables dans la majorité des tumeurs, ce qui ne correspond pas à la logique de la voie, démontrant que le cancer de la vessie est une maladie multigénique impliquant des membres de la voie PTC/SHH, sans qu'il y ait activation de la voie canonique. Et finalement, une analyse d'e?, pression des membres de la voie PTC/SHH dans des lignées vésicales humaines a permis de démontrer une expression aléatoire des ces gènes, suggérant qu'ils ne sont pas essentiels au maintien des cellules in vitro. Des travaux préliminaires pour la mise au point d'un modèle cellulaire du cancer de la vessie ont démontré qu'il était impossible d'obtenir une expression stable des protéines GLI-l et GLI-2 dans des cellules de lignées vésicales par transfection, amenant l'hypothèse que ces protéines soient essentielles au bon maintien de l' intégrité de l'urothélium et que leur perte favorise la cancérogénèse.

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Semac, Isabelle. "Signalisation dans les lymphocytes B et T : Influence des protéines de surface CD20 et CD4 dans les microdomaines." Aix-Marseille 2, 2003. http://www.theses.fr/2003AIX22015.

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Bachet, Jean-Baptiste. "Récepteurs tyrosine-kinase, voies de signalisation et tumeurs digestives." Versailles-St Quentin en Yvelines, 2013. http://www.theses.fr/2013VERS0019.

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Abstract:

Les récepteurs tyrosine kinase (RTK) sont des pro-oncogènes impliqués dans la pathogénèse de nombreuses tumeurs digestives. Nous avons mené plusieurs travaux de recherche translationnelle et fondamentale sur le RTK KIT et les tumeurs stromales gastro-intestinales (GISTs). Les GISTs avec la delWK557-558 et celles avec une délétion emportant les deux résidus tyrosine de l'exon 11 de KIT semblaient avoir le même pronostique. Les GISTs homozygotes étaient par contre plus souvent malignes que les GISTs hétérozygotes. Les GISTs homozygotes seraient secondaires à une perte d’heterozygotie sans perte de matériel génétique. A partir de lignées cellulaires, nous avons démontré que la biologie de KIT dans les cellules hétérozygotes était plus proche de celle des cellules hémizygotes KIT non muté que des hémizygotes KIT muté. Le statut hémizygote/hétérozygote d'une part et la perte ou non des résidus tyrosine de l'exon 11 de KIT d'autre part étaient associés à des profils d'expression d'ARNm et de miARN spécifiques. Enfin, nous avons pu décrire trois familles avec une mutation germinale de l'exon 13 de KIT et proposer des recommandations pour leur prise en charge
Receptor tyrosine kinases (RTKs) are pro-oncogenes involved in the pathogenesis of many gastrointestinal tumors. We conducted several studies of translational and basic research on the RTK KIT and the gastrointestinal stromal tumors (GISTs). GISTs with delWK557-558 and those with a deletion carrying the two tyrosine residues in KIT exon 11 had the same prognosis. Homozygous GISTs appear more often malignant than heterozygous GISTs. We then reported that homozygous GISTs may be secondary to loss of heterozygosity without loss of genetic material. From cell lines, we demonstrated that the biology of KIT in heterozygous cells was closer to that hemizygous unmutated KIT cells that hemizygous mutated KIT. The hemizygous/heterozygous status on the one hand and the loss or non-tyrosine residues of the KIT exon 11 on the other hand were associated with specific expression profiles of mRNA and miRNAs. Finally, we have described three families with a germline mutation in exon 13 of KIT, and we proposed recommendations for their management

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Ibarz, Géraldine. "Etude pharmacologique de la signalisation intracellulaire d'un récepteur couplé aux protéines G : le récepteur de la cholécystokinine de type I." Montpellier 1, 2003. http://www.theses.fr/2003MON13503.

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Abstract:

Le récepteur de la cholécystokinine de type 1 (R-CCK1) est un récepteur à sept domaines trans-membranaires couplé aux protéines G dont la structure primaire varie légèrement entre les espèces. Nous avons pu montrer que les R-CCK1 murin et humain, contrairement au R-CCK1 de rat, induisent une inhibition de l'activation transcriptionnelle de c-Jun, en présence d'une sur-expression de MEKK1. A l'aide d'expériences complémentaires, il a pu être déterminé que cet effet serait indépendant de l'état de phosphorylation de la SAPK/JNK et de c-Jun, et de l'activité kinase de la SAPK/JNK, principale kinase connue jusqu'à présent comme activant c-Jun. Par ailleurs, les expériences menées sur des mutants du R-CCK1 murin tendent à prouver que la troisième boucle intracellulaire ne serait pas impliquée dans cette différence de signalisation intracellulaire, et que, par contre, le premier domaine trans-membranaires et l'extrémité C-terminale des R-CCK1 pourraient jouer un rôle dans ce phénomène.

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Bernet, Agathe, and Agathe Bernet. "Caractérisation et rôle des cils primaires de l'épididyme dans la voie de signalisation Hedgehog." Master's thesis, Université Laval, 2018. http://hdl.handle.net/20.500.11794/31455.

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Abstract:

Les cils primaires (CP) sont des antennes de signalisation présentes en un seul exemplaire à la surface de la plupart des cellules. Ils jouent un rôle de mécano/chimio-senseur pour le développement et le maintien de l’homéostasie des tissus, en réponse aux stimuli et à la voie de signalisation Hedgehog (Hh). En 2013, l’ultrastructure des CP a été mise en évidence au niveau de l’épithélium épididymaire d’équidés. L’épididyme, organe du système reproducteur masculin, est composé d’un épithélium pseudo-stratifié qui se différencie au cours du développement postnatal jusqu’à la maturité sexuelle. Les principaux types cellulaires qui composent cet organe au stade adulte, assurent des rôles distincts et bien orchestrés afin de contrôler la composition du micro environnement spermatique. Bien que la mutation de gènes codants pour les constituants majeurs des CP entraine une infertilité masculine, peu de choses sont connues concernant leur rôle au niveau du système reproducteur. Nous émettons donc l’hypothèse que les CP de l’épididyme joueraient un rôle dans le contrôle des fonctions épididymaires. Nos objectifs se définissent en deux points 1) la caractérisation spatiotemporelle de cette organelle le long de l’épididyme, 2) l’étude fonctionnelle des CP de l’épididyme dans la voie de signalisation Hh. Grâce à une souris double transgénique Ar13b/mCherry- EGFP/CETN2, nous avons révélé une évolution spatio-temporelle des CP au cours du développement postnatal. En effet, à la naissance, les CP sont localisés au pôle apical des cellules épithéliales alors que chez l’adulte, les CP sont exclusivement associés aux cellules basales cytokératine-V positives. De plus, par une approche pharmacologique nous avons évalué l’implication des CP de l’épididyme murin dans la voie de signalisation Hh. Bien que les fonctions des CP, au niveau de l’épididyme, restent à déterminer, notre étude préliminaire ouvre la porte à une meilleure compréhension du contrôle et maintien des fonctions épididymaires et de la fertilité masculine.
Les cils primaires (CP) sont des antennes de signalisation présentes en un seul exemplaire à la surface de la plupart des cellules. Ils jouent un rôle de mécano/chimio-senseur pour le développement et le maintien de l’homéostasie des tissus, en réponse aux stimuli et à la voie de signalisation Hedgehog (Hh). En 2013, l’ultrastructure des CP a été mise en évidence au niveau de l’épithélium épididymaire d’équidés. L’épididyme, organe du système reproducteur masculin, est composé d’un épithélium pseudo-stratifié qui se différencie au cours du développement postnatal jusqu’à la maturité sexuelle. Les principaux types cellulaires qui composent cet organe au stade adulte, assurent des rôles distincts et bien orchestrés afin de contrôler la composition du micro environnement spermatique. Bien que la mutation de gènes codants pour les constituants majeurs des CP entraine une infertilité masculine, peu de choses sont connues concernant leur rôle au niveau du système reproducteur. Nous émettons donc l’hypothèse que les CP de l’épididyme joueraient un rôle dans le contrôle des fonctions épididymaires. Nos objectifs se définissent en deux points 1) la caractérisation spatiotemporelle de cette organelle le long de l’épididyme, 2) l’étude fonctionnelle des CP de l’épididyme dans la voie de signalisation Hh. Grâce à une souris double transgénique Ar13b/mCherry- EGFP/CETN2, nous avons révélé une évolution spatio-temporelle des CP au cours du développement postnatal. En effet, à la naissance, les CP sont localisés au pôle apical des cellules épithéliales alors que chez l’adulte, les CP sont exclusivement associés aux cellules basales cytokératine-V positives. De plus, par une approche pharmacologique nous avons évalué l’implication des CP de l’épididyme murin dans la voie de signalisation Hh. Bien que les fonctions des CP, au niveau de l’épididyme, restent à déterminer, notre étude préliminaire ouvre la porte à une meilleure compréhension du contrôle et maintien des fonctions épididymaires et de la fertilité masculine.
Primary cilia (PC) are signaling antennas present in a single copy on the surface of most cells. They play a mechano / chemo-sensory role for the development and maintenance of tissue homeostasis, in response to extracellular stimuli. In 2013, the ultrastructure of PC was demonstrated in equine epididymal epithelium. The epididymis, an organ of the male reproductive system, is composed of a pseudo-stratified epithelium that differentiates during postnatal development until puberty. The different cell types populating this epithelium control discrete and well-orchestrated role in order to monitor the composition of the spermatic microenvironment. Although the mutation of genes coding for the major constituents of PC leads to male infertility, little is known regarding their role in the male reproductive system. Our hypothesis is that PC play a role in the control of the functions important to epididymis development and homeostasis. Our objectives are defined in two points: 1) to define the spatio-temporal localization of this organelle along the epididymis, and 2) to determine the function of PC in the transduction of the Hh signaling pathway, which is known to be important for proper sperm maturation. Using an Arl13b / mCherry- Cetn2 / GFP transgenic mouse model, we revealed for the first time a spatio-temporal change of PC cell-specificity during epididymis postnatal development, from birth to adulthood. After birth, PC are localized at the apical pole of undifferentiated cells whereas in the adult, elongated PC are exclusively associated with cytokeratin-V positive basal cells. In addition, we evaluated the involvement of epididymal PC in the transduction of the Hh signaling pathway through a pharmacological approach. Although the functions of PC in the epididymis remains to be determined, our preliminary in vitro studies open the door to a better understanding of the control and maintenance of epididymal functions and male fertility.
Primary cilia (PC) are signaling antennas present in a single copy on the surface of most cells. They play a mechano / chemo-sensory role for the development and maintenance of tissue homeostasis, in response to extracellular stimuli. In 2013, the ultrastructure of PC was demonstrated in equine epididymal epithelium. The epididymis, an organ of the male reproductive system, is composed of a pseudo-stratified epithelium that differentiates during postnatal development until puberty. The different cell types populating this epithelium control discrete and well-orchestrated role in order to monitor the composition of the spermatic microenvironment. Although the mutation of genes coding for the major constituents of PC leads to male infertility, little is known regarding their role in the male reproductive system. Our hypothesis is that PC play a role in the control of the functions important to epididymis development and homeostasis. Our objectives are defined in two points: 1) to define the spatio-temporal localization of this organelle along the epididymis, and 2) to determine the function of PC in the transduction of the Hh signaling pathway, which is known to be important for proper sperm maturation. Using an Arl13b / mCherry- Cetn2 / GFP transgenic mouse model, we revealed for the first time a spatio-temporal change of PC cell-specificity during epididymis postnatal development, from birth to adulthood. After birth, PC are localized at the apical pole of undifferentiated cells whereas in the adult, elongated PC are exclusively associated with cytokeratin-V positive basal cells. In addition, we evaluated the involvement of epididymal PC in the transduction of the Hh signaling pathway through a pharmacological approach. Although the functions of PC in the epididymis remains to be determined, our preliminary in vitro studies open the door to a better understanding of the control and maintenance of epididymal functions and male fertility.

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Gouedard, Lucile. "Identification des voies de signalisation de l'hormone anti-Müllerienne." Paris 11, 2000. http://www.theses.fr/2000PA11T035.

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L'action principale de l'hormone anti-Müllérienne (AMH) est la régression des canaux de Müller, ébauches de l'utérus, chez le fœtus mâle. L'AMH est un facteur appartenant à la famille du TGF-p. Les membres de cette famille, comprenant les bone morphogenetic proteins (BMPs) et l'activine, transduisent leur signal via un complexe de deux récepteurs distincts : un récepteur de type II, liant l'hormone, et un récepteur de type I recruté par le type II, qui transduit le signal en activant une protéine Smad. Smad 1 et ses homologues Smad5 et 8 sont activées par les BMP, alors que Smad2 et 3 sont stimulées par le TGF-P ou l'activine. Dans le cas de l'AMH, seul son récepteur de type II (AMHR-II) était identifié au début de ma thèse. Après une caractérisation biochimique de celui-ci, nous avons étudié plusieurs récepteurs AMHR-II mutants, identifiés chez des malades atteints du syndrome de persistance des canaux de Müller. Certaines protéines mutantes ne sont pas exprimées à la surface cellulaire, ce qui explique qu'elles ne puissent lier l'AMH. D'autres formes mutantes d'AMHR-II présentent un défaut plus fonctionnel de blocage de la transduction du signal, dû à une action dominante négative de ces récepteurs. Afin de visualiser le récepteur de l'AMH endogène, nous avons produit un anticorps anti AMHR-II. Cet outil a permis à une équipe du laboratoire de démontrer l'apparition progressive d'AMHR-II le long du canal de Müller. Cette vague d'expression correspond strictement à la vague de régression du canal. Mon projet principal était l'identification du récepteur de type I de l'AMH, parmi six. Récepteurs de type I déjà clonés. Nous avons démontré que le récepteur BMPR-IB 1 ALK-6 co précipite avec AMHR-II, de manière ligand-dépendante. De plus, Smad 1 est activée spécifiquement par l'AMH, dans des lignées cellulaires testiculaires et ovariennes. En conclusion, il semble donc que l'une des voies de transduction de l'AMH utilise le même récepteur de type I et la même Smad que les BMPs
Anti-Müllerian hormone induces the regression of Müllerian ducts in male fetuses. It belongs to the transforming growth factor-P family, which includes bone morphogenetic proteins (BMPs) and activin. Members ofthe family signal through two distinct receptors denoted type I and II. The ligand binding induces the assembly of a receptor complex in which the specifie type II receptor activates the type I receptor, which phosphorylates Smad proteins. Smad 1, 5 and 8 participate in BMP pathways and Smad2 and 3 transduce TGF-P and activin signals. A novel member of the type II receptor family was identified as the AMH type II receptor (AMHR-II). After biochemical characterization of this receptor, we have studied mutations of AMHR-II, observed in patients with persistent Müllerian duct syndrome. Sorne of them induce protein retention in the reticulum endoplasmic, leading to a binding defect. Other mutants can block signal propagation because they are dominant-negative. Another goal of my work was to visualize endogenous AMHR-II in AMH target cells. We produced a specifie antibody against AMHR-II. With this antibody, another mean of the laboratory demonstrated a cranial to caudal expression of AMHR-II protein in the Müllerian ducts, strictly correlated with the regression phenomenon. My main project was to identify the AMH type I receptor, among six type I receptors already cloned. We demonstrate that BMPR-IB 1 ALK-6 co-precipitates with AMHR-II in a ligand dependent manner. Moreover, Smad 1 is specifically activated by AMH, in testicular and ovarian celllines. In conclusion, it means that AMH and BMP share same type I receptor and Smad

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Bouvet, Marion. "Etude des voies de signalisation impliquées dans la phosphorylation des protéines du myofilament dans l’insuffisance cardiaque." Thesis, Lille 2, 2015. http://www.theses.fr/2015LIL2S061/document.

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Abstract:

Avec plus de 3,5 millions de nouveaux cas diagnostiqués chaque année, l’insuffisance cardiaque (IC) touche actuellement plus de 15 millions d’européens et représente ainsi la première cause de mortalité cardiovasculaire en Europe. Malgré les avancées de la recherche cardiovasculaire, l’IC reste une maladie grave et de mauvais pronostic. En effet, plus de 50% des patients meurent dans les 5 années suivant le diagnostic. La compréhension des mécanismes physiopathologiques sous-jacents, encore largement inconnus, permettrait de développer des thérapeutiques visant à soigner les causes de l’IC plutôt que les conséquences et ainsi d’améliorer la prise en charge des patients. La contribution majeure des modifications post-traductionnelles (MPTs) dans la régulation de l’expression génique, de l’activité enzymatique ainsi que dans la régulation fonctionnelle des protéines font des MPTs les intégrateurs de l'adaptation dynamique du phénotype. C’est pourquoi l’équipe a réalisé des analyses phosphoprotéomiques dans un modèle expérimental d’IC chez le rat à 2 mois post-infarctus du myocarde (IDM). Ces analyses ont permis de mettre en évidence d’une augmentation du niveau de phosphorylation en sérine de la Desmine dans les ventricules gauches (VG) de rats IC par rapport aux témoins.Notre étude vise à identifier d’une part les kinases impliquées dans la phosphorylation de la Desmine et d’autre part à déterminer l’impact de l’augmentation de la forme phosphorylée de la Desmine sur son devenir dans le modèle in vivo.Par analyse bioinformatique, nous avons sélectionné les kinases potentiellement impliquées dans la phosphorylation de la Desmine. L’étude de la régulation de ces kinases dans le modèle d’IC chez le rat a permis de mettre en évidence la présence d’une plus grande quantité d’unités actives de PKC zeta et de GSK3 beta dans les VG de rats IC à 2 mois post-IDM. In vitro, l’inhibition de PKC zeta entraîne à la fois une diminution de l’activité GSK3 beta ainsi qu’une modulation du profil de phosphorylation de la Desmine. L’ensemble de ces données suggère l’implication de PKC zeta et de GSK3 beta dans l’augmentation du niveau de phosphorylation de la Desmine dans le modèle d’IC chez le rat. Néanmoins, leur action directe sur la Desmine, en cascade ou encore indirecte via d’autres partenaires reste encore à définir.Par immunofluorescence, nous avons mis en évidence la présence d'agrégats de Desmine dans les VG de rats IC à 2 mois post-IDM possiblement formés suite à son hyperphosphorylation. Nous avons émis l’hypothèse que ces agrégats de Desmine, comme toute protéine agrégée, seraient toxiques pour le cardiomyocyte et nécessiteraient l'intervention des systèmes protéolytiques pour être éliminés afin d'assurer la survie cellulaire. L’étude du système ubiquitine protéasome, de la macroautophagie et de l’autophagie médiée par le chaperonnes (CMA) dans le modèle d’IC chez le rat à 7 jours, 1 et 2 mois post-IDM suggère que l’inefficacité de la macroautophagie à 7 jours post-IDM et la diminution de son activité au cours du temps entraînerait une accumulation cytosolique de Desmine phosphorylée mais également l’induction de la CMA afin d’assurer la clairance de cette dernière. In vitro, nous avons montré que l’induction pharmacologique de la CMA entraîne une diminution du niveau de Desmine ainsi qu’une modulation de son profil de phosphorylation.L’augmentation de phosphorylation en sérine de la Desmine dans les VG de rats IC à 2 mois, dépendante de la PKC zeta et/ou GSK3 beta, semble entraîner l’accumulation cytosolique de Desmine ainsi que la formation d’agrégats dans les VG de rat IC qui pourraient participer à la dysfonction contractile observée au cours de l’IC. En réponse à l'inefficacité de la macroautophagie, la CMA serait activée afin d’assurer l’élimination de la Desmine phosphorylée et ainsi la survie du cardiomyocyte au cours de l’IC
With over 3,5 million new cases each year, heart failure (HF) currently affects more than 15 million of European individuals and thus represents the leading cause of cardiovascular mortality in Europe. Despite advances in cardiovascular research, HF remains a serious disease with poor prognosis. Indeed, more than 50 per cent of patients die within 5 years after diagnosis. Understanding the underlying physiopathological mechanisms would allow the development of therapeutics to treat the causes of HF rather than the consequences of the disease, thereby improving the medical care of patients. The major contribution of post-translational modifications (PTMs) in the regulation of gene expression, enzyme activity as well as in the functional regulation of proteins, turns PTMs into integrators of the dynamic adaptation of the phenotype. For this reason, the team performed phosphoproteomic analyses in an experimental rat model of HF at 2 monhs following myocardial infarction (MI). These analyses revealed an increase of the phosphorylation levels of Desmin at serine residues in left ventricles (LV) of HF rats compared to sham rats.The aim of our study is to identify the kinases which are implicated in Desmin phosphorylation on one hand, and the impact and behavior of increased phosphorylated Desmin in cardiomyocyte on the other hand.By bioinformatic analysis, we first selected the kinases which are potentially implicated in Desmin phosphorylation. Then, we studied the enzymatic regulation of selected kinases in an experimental rat model of HF, which allowed the identification of active PKC zeta and GSK3 beta in the LV of HF rats at 2 months. In vitro, pharmacological inhibition of PKC zeta leads to a decreased of GSK3 beta activity as well as a modulation of the phosphorylated Desmin profiles. Taken together, these data suggest an implication of PKC zeta and GSK3 beta in the increase of Desmin phosphorylation levels in the LV of HF rats. However, their direct, consecutive or indirect implication on Desmin phosphorylation remains to be evaluated.By immunofluorescence, we observed the presence of aggregated Desmin in LV of HF rats at 2 months post-MI that suggest that these could be the result of Desmin hyperphosphorylation. We hypothesized that these Desmin aggregates, like other aggregated proteins, could be toxic for cardiomyocytes and need to be cleared by proteolytic systems to ensure cell survival.The study of proteolytic systems in the in vivo model showed that while the UPS is not modulated all along LV remodeling, macroautophagy decreases with time and could thus drive cytosolic accumulation of phosphorylated Desmin in LV of HF rats. At the same time, CMA seems to be activated thereby ensure phosphorylated Desmin clearance. In vitro, we have shown that pharmacological induction of CMA results in lower phosphorylated Desmin levels.In conclusion, increased Desmin phosphorylation levels seems to be dependent of PKC zeta and/or GSK3 beta activation in LV of HF rats at 2 months after MI. This elevation could drive the cytosolic accumulation and aggregation of Desmin, which could be involved in the contractile dysfunction observed during HF. Finally, as a result of decreased macroautophagy, CMA could be activated in LV of HF rats to ensure phosphorylated Desmin clearance and thus cardiomyocyte survival

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Tzen, MonZen. "Invasion de la cellule hôte par Toxoplasma gondii : étude des voies de signalisation cellulaire impliquant les protéines kinases." Paris 5, 2005. http://www.theses.fr/2005PA05P612.

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Abstract:

Toxoplasma gondii est un parasite intracellulaire obligatoire ; son implication en pathologie humaine est bien connue notamment chez la femme enceinte (par passage transplacentaire de la mère au fœtus) et chez les immunodéprimés (par réactivation de kystes cérébraux). Les mécanismes entrant en jeu dans l'infectivité du parasite, et plus particulièrement l'invasion de la cellule hôte par le parasite, sont peu connus, néanmoins plusieurs études ont montré l ‘importance du calcium lors de ces phénomènes. En effet, le calcium joue un rôle important dans la mobilité du parasite, ainsi que dans l'attachement du toxoplasme à la cellule hôte. Le calcium activerait plusieurs cascades de réaction impliquant des protéines kinases telles que les MAPKs (Mitogen Activated Protein Kinases), les CDPKs Calcium Dependent Protein Kinases). . . En effet, l'utilisation d'inhibiteurs de kinases tel que le PD98059 empêchent la pénétration du toxoplasme dans les cellules en culture et inversement le traitement des cellules 3T3 en culture par la bombésine, un peptide activant les MAPK via les protéines kinases C (PKC), favorise l'invasion et la multiplication du toxoplasme. De plus, la présence de calcium jusqu'à un certain seuil favorise aussi fortement cette pénétration du toxoplasme dans les cellules en culture. Dans un " in gel assay ", Nous avons montré chez le tachyzoïte la présence de plusieurs protéines kinases qui phosphorylent fortement en présence de calcium et dont les activités sont inhibées en présence d'EGTA (chélateur du calcium). Nous avons cloné et séquencé les gènes de plusieurs protéines kinases dont une CDPK sur laquelle nous avons approfondi notre recherche et que nous avons nommée TgCDPK3. Cette dernière est une protéine kinase dépendante du calcium qui appartient à une famille de protéine kinase découverte uniquement chez les plantes et les protistes. TgCDPK3 est une protéine de 62 kDa. La localisation intracellulaire grâce à deux anticorps spécifiques anti-SE41 et anti-SE42 a montré que cette protéine était cytoplasmique. L'ensemble de ces résultats semblent indiquer que TgCDPK3 joue un rôle dans l'infectivité de T. Gondii et qu'elle peut être une nouvelle cible thérapeutique
Toxoplasma gondii is an obligate intracellular parasite ; its implication in human pathology is well known regarding two particular aspects : congenital toxoplasmosis and reactivated toxoplasmosis in immunodeficient patients. Regulation of the infectivity of the parasite is not clear at this time. Meanwhile, many studies point to the importance of the calcium during the processus of the invasion of the parasite. Ca2+ has an important role for the motility of the parasite, for attachment to the host cells and for survival. Intracellular Ca2+ plays a essential role in signal transduction in eukaryotic cells, by activating protein kinase cascades (such as MAPKs involving protein kinase C ; and CDPKs). In addition, tachyzoite stimulation with bombesin stimulated host cell invasion 2-fold, and conversely, tachyzoite treatment with PD98059, a MAP kinase inhibitor, significantly reduced both parasite infectivity and growth. To demonstrate the presence of protein kinase activity in Toxoplasma gondii, an " in gel renatured protein assay " was performed after different Ca2+ stimuli, showing the existence of proteins that can strongly phosphorylate MBP in the presence of Ca2+. This increase was reversed with the incubation of tachyzoite with EGTA (calcium inhibitor). In this study, we have cloned and sequenced kinase genes, in particular a 62 kDa CDPKs that we named TgCDPK3. TgCDPK3 is an enzyme from the calcium dependent protein kinase superfamily, that is absent from the complete genome sequence of yeast and of nematode and human. It is then tempting to speculate that CDPKs might be present in plants and protozoans only. The immunolocalization using two specifics antibodies of TgCDPK3, anti-SE41 and anti-SE42 antibody reveal that this protein is cytoplasmic. This result suggest that TgCDPK3 plays a role in the infection of the parasite and may be a novel therapeutic target

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Duchene, Johan. "Le récepteur B2 de la bradykinine : exemple d'un RCPG utilisant de nouvelles voies de signalisation dites alternatives." Toulouse 3, 2003. http://www.theses.fr/2003TOU30143.

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Dupont, Joëlle. "Signalisation de l'insuline chez le poulet : mise en évidence d'IRS-1 et de Shc dans le foie et le muscle." Aix-Marseille 3, 1999. http://www.theses.fr/1999AIX30051.

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Abstract:

Chez les mammiferes, pour agir, l'insuline se fixe sur son recepteur ; en reponse celui-ci s'autophosphoryle puis phosphoryle sur tyrosines plusieurs substrats cellulaires (irs-1, shc). Dans cette etude, nous avons caracterise irs-1 et shc dans le foie et le muscle de poulet, une espece insulino-resistante. Differents modeles experimentaux ou la sensibilite a l'insuline est alteree ont ete etudies : jeune prolonge et realimentation, traitement a la corticosterone, poulets genetiquement maigres ou gras. Irs-1 (185 kda) et les trois isoformes de shc (66, 52 et 46 kda) sont presents (arnm et proteines). A la fois, irs-1 et shc (principalement 52 kda) sont phosphoryles sur tyrosines, s'associent avec le recepteur et a la pi 3-kinase dans les deux tissus. Dans le foie, le recepteur, irs-1, shc et la pi 3-kinase forment un complexe quaternaire (de telles etudes n'ont pas ete realisees dans le muscle). Un autre complexe comprenant irs-1 et shc (46 kda) depourvu d'activite pi 3-kinase est egalement present. Dans le foie, la cascade de signalisation est inactivee par le jeune et stimulee par la realimentation ou l'injection d'insuline et alteree dans les modeles experimentaux. A l'inverse, dans le muscle, la phosphorylation du recepteur ou d'irs-1 est totalement insensible aux conditions experimentales ; seule la phosphorylation de shc est alteree. De plus, la pi 3-kinase musculaire est insensible mais hyperactive (30 fois celle du rat). En conclusion, irs-1 et shc sont presents dans le foie et le muscle de poulet. Les evenements post-recepteurs sont sensibles a l'insuline dans le foie mais pas dans le muscle. Ce dernier aspect contribuerait a expliquer l'insulino-resistance du poulet.

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Marquette, Amélie. "Signalisation et oncogenèse dans le mélanome." Thesis, Paris Est, 2009. http://www.theses.fr/2009PEST0079.

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Abstract:

Le mélanome, la tumeur cutanée la plus agressive, est devenu un problème majeur de santé publique dans de nombreux pays. Diagnostiqué précocement, il peut être traité par excision chirurgicale, mais le pronostic pour les mélanomes plus avancés est très mauvais car cette tumeur est résistante à toutes les thérapies utilisées à ce jour. Dans le but de développer de nouvelles thérapies pour traiter cette tumeur, nous étudions les voies de signalisation qui jouent un rôle prépondérant dans la prolifération, la survie et la différenciation des mélanocytes et des mélanomes. Il s’agit de la voie des MAPK, la voie PI3K et la voie de l’AMP cyclique (AMPc). Nous avons tout d’abord démontré que certaines phosphodiestérases (PDE ; les inhibiteurs physiologiques de la voie de l’AMPc) sont surexprimées dans les lignées de mélanomes et inhibent ainsi la différenciation de ces cellules. La surexpression des PDEs est nécessaire à la transformation des mélanocytes par l’oncogène Ras alors que la réactivation de la voie de l’AMPc dans les lignées de mélanome inhibe leur prolifération. Ces données suggèrent qu’une stratégie thérapeutique qui aurait pour objectif de stimuler la différenciation des mélanomes en réactivant la voie de l’AMPc pourrait permettre d’inhiber leur prolifération. Nous avons par ailleurs montré que la protéine kinase B-Raf, qui est fréquemment mutée dans les mélanomes, était cependant inactivée dans les mélanomes contenant une mutation de Ras. Nous avons démontré que cette inhibition était due à une régulation négative de B-Raf par son substrat Erk. En effet, Erk phosphoryle B-Raf sur sa partie amino-terminale pour empêcher son interaction avec Ras. Ce mécanisme de régulation négative de B-Raf force ces lignées de mélanomes à utiliser l’isoforme C-Raf. Ce travail a des conséquences sur le traitement du mélanome. En effet, si B-Raf n’est pas utilisé pour l’activation de la voie des MAPK dans les mélanomes mutés N-Ras, les inhibiteurs de B-Raf en développement clinique seront inefficaces dans ces cancers. Nous avons par ailleurs démontré qu‘un inhibiteur des kinases B-Raf et C-Raf, en développement clinique (Sorafenib), induisait l’activation de ces kinases par hétérodimérisation en régulant leur phosphorylation. Ces résultats mettent en évidence de nouveaux mécanismes de régulation des proto-oncogènes B-Raf et C-Raf qui pourraient jouer un rôle important dans la résistance des mélanomes aux inhibiteurs de Raf qui sont actuellement en développement clinique
Melanoma, the most aggressive skin tumor, has become a major public health problem in many countries. Diagnosed early, it can be treated by surgical excision, but the prognosis for advanced melanoma is very poor because the tumor is resistant to all therapies used today. In order to develop new therapies to treat this tumor, we study the signaling pathways that play a major role in the proliferation, survival and differentiation of melanocytes and melanoma. These are the MAPK, PI3K pathway and the cyclic AMP (cAMP). We first demonstrated that some phosphodiesterases (PDEs; physiological inhibitors of cAMP pathway) are overexpressed in melanoma lines and thus inhibit the differentiation of these cells. Overexpression of PDEs is necessary for melanocyte transformation by oncogenic Ras when the reactivation of the cAMP pathway in melanoma lines inhibits their proliferation. These data suggest a therapeutic strategy that would aim to stimulate the differentiation of melanoma by reactivating the cAMP pathway could help to inhibit their proliferation. We have also shown that the protein kinase B-Raf, which is frequently mutated in melanoma, however, was inactivated in melanomas containing a mutation of Ras. We demonstrated that this inhibition was due to a downregulation of B-Raf by Erk substrate. Indeed, Erk phosphorylates B-Raf on its amino-terminal to prevent its interaction with Ras. This negative regulatory mechanism of B-Raf melanoma is forcing these lines to use isoform C-Raf. This work has implications for the treatment of melanoma. Indeed, if B-Raf is not used for the activation of MAPK in N-Ras mutated melanoma, the B-Raf inhibitors in clinical development will be ineffective in these cancers. We also demonstrated that a kinase inhibitor of B-Raf and C-Raf, which is in clinical development (Sorafenib), induces the activation of these kinases by heterodimerization in regulating their phosphorylation. These results reveal new mechanisms of regulation of proto-oncogene B-Raf and C-Raf, which could play an important role in the resistance of melanoma to Raf inhibitors, which are currently in clinical development

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Boutet-Robinet, Elisa. "Pharmacologie moléculaire des médicaments neuroleptiques et implication des protéines RGS dans la signalisation du récepteur dopaminergique D2." Toulouse 3, 2002. http://www.theses.fr/2002TOU30177.

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Abstract:

Bien que le récepteur dopaminergique D2 soit le principal récepteur impliqué dans l'action des médicaments neuroleptiques, les bases moléculaires de l'action de cette classe thérapeutique hétérogène ne sont que partiellement élucidées. Ce travail montre que les neuroleptiques se comportent différemment au niveau du récepteur dopaminergique D2, à condition que celui-ci possède une activité constitutive. Ceci a été démontré en utilisant une protéine chimérique des récepteurs dopaminergique D2 et adrénergique alpha1B. Ce système expérimental a permis de mesurer l'activité d'agoniste inverse de 11 neuroleptiques, parmi lesquels 8 sont des agonistes inverses à haute efficacité tandis que 3 sont des agonistes inverses de plus faible efficacité. Un seul neuroleptique, la ziprasidone, se comporte comme un antagoniste neutre dans ce système. La caractérisation de certains de ces neuroleptiques a été poursuivie, en évaluant leur aptitude à moduler l'expression des ARNm qui dirigent la synthèse des protéines RGS (régulatrices de la signalisation des protéines G) dans le cerveau de rat après des traitements aigus et chroniques. Parmi les 7 protéines RGS étudiées par hybridation in situ, seul RGS2 présente une augmentation du taux d'expression de son ARNm. Cet effet est observé dans le striatum après des traitements par l'halopéridol ou la rispéridone mais pas après un traitement avec la clozapine, à des doses induisant des taux d'occupation similaires des récepteurs dopaminergiques D2 striataux. .
Though the dopamine D2 receptor is the main receptor involved in the action of neuroleptic drugs, it is less clear how this heterogeneous class of molecules is acting at the molecular level. This thesis reports on the distinct behaviour for a series of neuroleptic drugs at a constitutively active dopamine D2 receptor construct. This was achieved specially with a chimeric receptor between the a1B-adrenergic and dopaminergic D2 receptor. .

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Giordano, Cécile. "Étude du mécanisme d’activation de la voie de signalisation canonique de Hedgehog chez la drosophile." Electronic Thesis or Diss., Université Côte d'Azur (ComUE), 2017. http://www.theses.fr/2017AZUR4131.

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Abstract:

Hedgehog (Hh) est un morphogène secrété qui contrôle la croissance et la différentiation cellulaire chez les métazoaires. La dérégulation de son activité entraine des maladies développementales et de nombreux cancers chez l’adulte. Chez la drosophile, la transduction du signal Hh est initiée par la fixation de Hh sur son récepteur Patched (Ptc), conduisant à la stabilisation de la protéine membranaire Smoothened (Smo) et à l’activation du complexe de transduction composé de 5 protéines : les kinases Fused (Fu), PKA, GprK2, la kinésine Costal 2 (Cos2), et le facteur de transcription Cubitus Interruptus (Ci). Ma thèse a porté sur l’étude de la régulation et des interactions moléculaires entre les composants du complexe de transduction. Par des approches complémentaires, j’ai montré qu’en absence d’Hh, les protéines PKA et Fu interagissent du côté C-terminal de Ci, alors que la présence d’Hh induit leur relocalisation vers le domaine N-terminal de Ci. J’ai pu prouver que l’élément déclencheur de ce remaniement protéique est Smo. En présence d’Hh, Smo s’incorpore dans le complexe de transduction, conduisant à l’activation et au déplacement de Fu vers la région N-terminale de Ci. Ce remaniement entraine la phosphorylation et l’activation de Ci. Ma thèse révèle l’importance des changements de conformation au sein du complexe de transduction de la voie Hh. Le mécanisme de transduction étant conservé entre invertébrés et invertébrés, mon doctorat apporte des éléments de recherche pour mieux comprendre le fonctionnement normal et pathologique des cellules
Hedgehog (Hh) is a secreted morphogen that controls growth and differentiation in both vertebrates and invertebrates. The dysregulation of its activity leads to severe developmental defects, and the onset of cancer in adults. In Drosophila, the Hh signal transduction is initiated by the binding of Hh to its receptor Patched (Ptc). This induces the stabilization of the transmembrane protein Smoothened (Smo) and the subsenquent activation of a transduction complex consisting of 5 proteins: the kinases Fused (Fu), PKA and Gprk2, the kinesin Costal2 (Cos2), and the transcription factor of the pathway Cubitus Interruptus (Ci). The aim of my thesis was to study the regulation and molecular interactions between the different components of the transduction complex. Thanks to complementary techniques, I have shown that in absence of Hh the proteins Fu and PKA interact in C-terminal part of Ci, whereas on the presence of Hh induces their relocalization toward the N-terminal domain of Ci. I have proved that the trigger element of this moving is Smo. In presence of Hh, Smo goes into transduction complex, allowing the activation and the moving of Fu toward N-terminal domain of Ci. This relocalization is responsible of Ci phosphorylation and activation. My thesis reveals the importance of conformational changes inside the transduction complex of Hh pathway. As the mechanism of transduction is conserved between species, my PhD provides research elements in order to better understand the normal and abnormal functioning of cells

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Chaligné, Ronan. "Signalisation par le récepteur de la thrombopoïétine et syndromes myéloprolifératifs non-LMC." Paris 11, 2009. http://www.theses.fr/2009PA11T053.

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Perroy, Julie. "Le récepteur métabotropique du glutamate mGlu7 : voie de signalisation et fonction dans les neurones." Montpellier 2, 2001. http://www.theses.fr/2001MON20095.

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Zanin, Natacha. "Role de STAM dans la régulation endosomale de la signalisation JAK/STAT induite par les IFNs." Thesis, Université Paris-Saclay (ComUE), 2015. http://www.theses.fr/2015SACLS047.

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Abstract:

La première implication des récepteurs aux interférons de type 1 (IFNAR1) dans le contrôle de la voie Jak/STAT induite par les IFNs a été établie par mon laboratoire il y a une dizaine d'années (Marchetti et al., 2006). Une des questions fondamentales était alors de déterminer comment et pourquoi l'endocytose des IFNARs pouvait contrôler la voie Jak/STAT. Deux acteurs clés du tri endosomal ont attiré notre attention : Hrs (Hepatocyte growth factor-Regulated tyrosine kinase Substrate) et STAM (Signal Transducing Adaptor Molecule). Ces deux protéines constituent le complexe ESCRT-0 (Endosomal Sorting Complexes Required for Transport-0) les localisant, de manière idéale, à l'interface entre signalisation cellulaire et trafic membranaire.La combinaison de la biologie moléculaire et cellulaire, de la biochimie et de la microscopie à fluorescence, nous a permis d'établir que STAM s'associe au complexe IFNAR1 à la membrane plasmique afin d'y exercer son effet inhibiteur sur la signalisation Jak/STAT. Cette inhibition est levée lorsqu'IFNAR est libéré dans l'endosome et qu'il peut ainsi être recruté par Hrs sous la dépendance de l'IFN-α. En nous basant sur des expériences de déplétion par shRNA ou d'inhibition pharmacologique, nous avons identifié PTP1B (Protein Tyrosine Phosphatase 1B) en tant qu'activateur de la voie Jak/STAT induite par les IFNs. Le blocage sélectif de l'endocytose d'IFNAR par déplétion de clathrin, nous a permis de montrer que l'activation de PTP1B est inhibée à la membrane plasmique. Cela a été confirmé par des expériences d'interaction protéine-protéine (Proximity Ligation Assay) indiquant que STAM est constitutivement associé à IFNAR1, tandis que l'interaction entre IFNAR1 et Hrs a seulement lieu à l'endosome.Ainsi, nos résultats permettent d'établir un modèle dans lequel, à la membrane plasmique, STAM est un frein permanent à la signalisation Jak/STAT, qui est levé après l'endocytose d'IFNAR et sa libération dans l'endosome de tri. De plus, nous avons montré que l'interaction Hrs/STAM dans l'endosome précoce permet de différencier, de manière sélective, l'activation de la signalisation Jak/STAT médiée par l'IFN-α ou l'IFN-β
A decade ago, my laboratory established the first role of type I IFNs receptor (IFNAR) endocytosis in the control of Jak/STAT signaling induced by type 1 IFNs (Marchetti et al., 2006). A salient question is now to elucidate why and how IFNAR endocytosis could control the Jak/STAT pathway. Two key players of endosomal sorting retained our interest: Hrs (Hepatocyte growth factor-Regulated tyrosine kinase Substrate) and STAM (Signal Transducing Adaptor Molecule). These two classical components of the ESCRT-0 (Endosomal Sorting Complexes Required for Transport-0) complex were ideally placed at the interface between signaling and membrane trafficking. By using a combination of molecular and cellular biology, biochemistry, and fluorescent microscopy, we could establish that STAM binds to the IFNAR complex at the plasma membrane to exert an inhibitory effect on Jak/STAT signaling. This inhibition is removed when IFNAR is delivered to the sorting endosome by interacting with Hrs upon IFN-α stimulation. Based on shRNA down-expression and pharmacological inhibition, we further involve the PTP1B (Protein Tyrosine Phosphatase 1B) as it activates Jak/STAT signaling upon IFN stimulation. We could also show that PTP1B activation is inhibited by STAM at the plasma membrane from experiments where IFNAR endocytosis was blocked by siRNA-mediated clathrin down-expression. This was further confirmed by protein-protein interaction experiments (Proximity Ligation Assay) showing that STAM was constitutively associated with IFNAR1, whereas the interaction between IFNAR1 and Hrs occured only at the sorting endosome. Our results therefore allow to draw a model where STAM is a constitutive handbrake on Jak/STAT signaling at the plasma membrane that is released after IFNAR endocytosis and delivery to the sorting endosome. We further show that Hrs/STAM interaction at the early endosome allows to selectively distinguish the activation of Jak/STAT signaling mediated by IFN-α or IFN-β

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Denys, Anne. "Rôle des acides gras polyinsaturés n-3 dans la régulation de la voie de signalisation de ERK1/ERK2." Dijon, 2003. http://www.theses.fr/2003DIJOS028.

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Abstract:

Au cours de ce travail, nous avons étudié le rôle de l'acide eicosapentaenoi͏̈que (EPA) et de l'acide docosahexaenoi͏̈que (DHA) dans la régulation de l'activation des MAP kinases / ERK1 et ERK2 des lymphocytes T. Ces acides gras polyinsaturés (AGPI) seuls n'induisent ni la phosphorylation ni l'activité enzymatique des MAP kinases (MAPK). Nous avons stimulé les cellules avec l'anticorps anti-CD3, le phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA), ou l'acide okadai͏̈que (AO). L'acide okadai͏̈que semble agir en aval de MEK ou via une voie d'activation indépendante de MEK car U0126 ne diminue pas l'état de phosphorylation des MAPK induit par l'AO. L'application de GF109203X, un inhibiteur de protéines kinases C (PKC) entraîne une inhibition de l'activité des MAPK stimulées par le PMA, ainsi, suggérant que la voie d'activation est couplée à la PKC. En ce qui concerne l'EPA et le DHA, ils diminuent l'activation des MAPK induite par le PMA et l'anti-CD3. D'autre part l'EPA et le DHA inhibent l'activation de deux isoformes de PKC, les PKC alpha et epsilon. Ainsi, ces AGPI régulent la voie de signalisation de ERK1/ERK2 via ces kinases. De plus, les AGPI exercent des effets inhibiteurs sur la translocation nucléaire de NF-kB, de la transcription du gène de l'IL-2 et de la prolifération des cellules T. L'ensemble de ces observations permet de soutenir l'hypothèse selon laquelle l'EPA et le DHA exercent des effets immunosuppresseurs en partie via l'inhibition de la voie de signalisation PKC/MAPK dans les cellules T
In this study, we investigated in T-cells the role of eicosapentaenoic acid and docosahexaenoic acid in MAPK/ERK1/ERK2 regulation pathway. These PUFA alone failed to induce phosphorylation and enzymatic activity of MAPK. In order to ascertain their mechanism of action on MAPK activation we used anti-CD3 antibodies, phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA) or okadaic acid (OA) to activate MAPK. PMA and anti-CD3 activate MAPK upstream of MEK as U0126, a MEK inhibitor, abolishes their action. On the other hand, OA seems to act upstream of MEK or via a MEK independent MAPK pathway. Furthermore, GF109203X, a PKC inhibitor, inhibited PMA-stimulated MAPK activity. Also, this pathway is coupled with PKC. EPA and DHA abolished PMA and anti-CD3-induced MAPK activation and the translocation of two PKC isoforms, PKC alpha and PKC epsilon. Also these PUFA regulate the ERK1/ERK2 pathway via these kinases. Their inhibitory effect are responsible for inhibition of NFkB translocation, IL-2 gene transcription and T cell proliferation. Together these observations suggest that EPA and DHA exert immunosuppressives effects in part via the PKC/MAPK pathway in T-cells

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Mekpoh, Flavien. "Signalisation Nodal à courte et longue distance chez l'oursin Paracentrotus lividus : rôles potentiels de Cripto, d'Univin et d'une modification post-traductionnelle." Paris 6, 2012. http://www.theses.fr/2012PA066664.

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Abstract:

Le TGF-beta Nodal joue un rôle essentiel au cours du développement de nombreux organismes. Dans l'embryon d'oursin, Nodal agit en amont d'une cascade de régulations génétiques contrôlant la régionalisation de l'ectoderme le long de l'axe dorso-ventral. Nodal est exprimé très tôt dans l'ectoderme présomptif ventral où son activité est requise pour la spécification de l'ectoderme ventral et dorsal. Dans ce contexte, tout indique que Nodal agit à courte distance, limitée par son antagoniste Lefty. Cependant, de récentes études ont montré que Nodal joue également un rôle sur la régionalisation des précurseurs du mésoderme au pole végétatif de l'embryon, domaine éloigné du territoire d'expression de Nodal. Au cours de ma thèse, j'ai tenté de clarifier les mécanismes par lesquels Nodal signale à distance chez l'oursin en analysant les rôles de deux facteurs susceptibles de moduler l'activation de la voie de signalisation Nodal. Le premier facteur est Cripto, une protéine membranaire de la famille des EGF-CFC qui, chez les vertébrés, agit comme un corécepteur de Nodal et qui est en même temps la cible de l'antagoniste de Nodal: Lefty. En outre, nous avons analysé le rôle du ligand TGF-beta, Univin, un orthologue de Vg1/GDF1, et l'effet d'une modification post-traductionnelle de Nodal sur sa capacité à signaler à distance. Pris dans leur ensemble, les résultats de ces études suggèrent que des partenaires tels que Cripto ou Univin, mais aussi les modifications post-traductionnelles telles que des glycosylation, peuvent potentialiser l'activité du signal Nodal et donc jouer un rôle majeur dans la régulation de la signalisation Nodal à distance
TGF-beta family member Nodal plays essential roles in the development of many organisms. In the sea urchin embryo, Nodal acts upstream of gene regulatory network controlling the regionalization of the ectoderm along the dorsal-ventral axis. Nodal is expressed very early in the presumptive ventral ectoderm where its activity is required for specification of the ventral and dorsal ectoderm. In this context, there is evidence that Nodal activity is limited to the ectoderm by its antagonist Lefty. However, recent studies have shown that Nodal also plays a role in the regionalization of the mesoderm precursors in vegetative pole of the embryo, territory distant from Nodal expression domain. In my thesis, I have attempted to clarify the mechanisms by which Nodal signals over long range, using the sea urchin, by analyzing the roles of different factors that modulate the activity of the Nodal signaling pathway. The first factor is Cripto, a membrane protein of the EGF-CFC family. In vertebrates, Cripto acts as a coreceptor for Nodal, which is also the target of the Nodal antagonist: Lefty. In addition, we analyzed the role of TGF-beta ligand, Univin, an ortholog of Vg1/GDF1, and the effect of post-translational modification of Nodal on its ability to signal over long-range. Taken together, results of these studies suggest that partners such as Cripto or Univin, but also post-translational modifications such as glycosylation, may potentiate the activity of Nodal signaling and therefore play a major role in regulating Nodal long-range signaling

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Mazars, Anne. "Implication des voies de signalisation des protéines JNK et SMAD dans l'apoptose régulée par le TGF-β1." Paris 5, 2001. http://www.theses.fr/2001PA05P606.

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Abstract:

Le TGF-beta appartient à une famille de médiateurs locaux impliqués dans le contrôle de la prolifération et de la différenciation des cellules ainsi que dans l'apoptose. Ce facteur agit en s'associant à des récepteurs transmembranaires et conduit à l'activation de différentes voies de signalisation cellulaire; L'une de ces voies implique les protéines Smad2 et Smad3. Suite à la stimulation de la voie des protéines Smad par le TGF-beta1, des boucles de régulation négative sont stimulées afin d'inactiver cette voie de signalisation cellulaire. Une de ces boucles est la translocation de la protéine Smad7 du noyau vers le cytoplasme et sa fixation au récepteur du TGF-beta1, empêchant la phosphorylation des protéines Smad2 et Smad3 par le récepteur. Le TGF-beta1 initie une deuxième voie de signalisation, la voie des GTPases de la famille Rho et déclenche la cascade d'activation des protéines kinases JNK. .
The TGF-beta plays an important role in constraining cellular proliferation and in regulating the cell cycle, but is also a potent inducer of apoptosis. TGF-beta1 initiates signaling throgh transmembrane receptors and activates various cellular pathways. Smad and JNK proteins have been identified as essential downstream elements of the signal transduction pathways that are required for TGF-bata1 signaling. Smad2 and Smad3, are directly activated by ligand-activated receptor. One negative feedback loop may control TGF-beta response, the involvement of Smad7, which localizes in the nucleus but translocates to the cytoplasm after TGF-beta1 stimulation. Smad7 can exert its inhibitory function by binding to TGF-beta1 receptor, thereby blocking the receptor-regulated Smad from interacting with the receptor. .

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Barthet, Gaël. "Régulation des voies de signalisation dépendante et indépendante des protéines G activées par le récepteur 5-HT4." Montpellier 1, 2007. http://www.theses.fr/2007MON1T014.

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Abstract:

Les récepteurs à 7 domaines transmembranaires (R-7TM) ont longtemps été caractérisés par leur aptitude à activer les protéines G et à générer la production de seconds messagers. Ce type de signalisation est régulé au cours du processus de désensibilisation qui implique les GRK (G protein-coupled receptors kinases) et les β-arrestines. Récemment, ces dernières ont été mises en évidence dans l'activation indépendante des protéines G des ERK1/2 (extracellular-related kinases 1/2) par certains R-7TM. En utilisant le récepteur 5-HT4 (R-5-HT4) comme modèle de R-7TM, nous avons pu observer une régulation de sa signalisation Gs/AMPc par la GRK2 qui ne fait pas intervenir son activité kinase. Cette désensibilisation est également distincte de l'endocytose consécutive au recrutement des β-arrestines par le récepteur. Nous avons également mis en évidence une activation des ERK1/2 par le R-5-HT4 via la tyrosine kinase Src, à la fois indépendante des protéines G et des β-arrestines. Cette signalisation est régulée de façon autonome par une autre GRK, la GRK5, et la β-arrestine1 sous sa forme phosphorylée. Cette régulation est également indépendante de l'endocytose du R-5-HT4 puisqu'au contraire, l'internalisation du R-5-HT4 est bloquée au cours de ce processus. Des protéines communément impliquées dans la régulation de la signalisation dépendante des protéines G sont donc également capables de réguler des signalisations indépendantes des protéines G, bien que les événements moléculaires soient distincts.

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Dissertations / Theses on the topic 'Protéines de signalisation YAP'

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