Dissertations / Theses: 'Patologie a cellule B'

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Capolla, Sara. "Use of immune-nanoparticles containig chemiotherapeutic agents for the treatment of B-cell malignancies." Doctoral thesis, Università degli studi di Trieste, 2015. http://hdl.handle.net/10077/10980.

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Abstract:

2013/2014
B-cell malignancies are a heterogeneous group of clinical conditions including indolent diseases such as Chronic Lymphocytic Leukemia (CLL) and highly aggressive lymphoproliferative disorders such as Burkitt’s lymphoma. B-cell malignancies treatments take advantage of dose-intensive chemotherapeutic regimens and immunotherapy via monoclonal antibodies. Unfortunately, they may lead to insufficient tumor distribution of therapeutic agents and cause several adverse effects. Thus, we propose a novel therapeutic approach for the treatment of CLL and Burkitt’s lymphoma in which high-doses of the association of hydroxychloroquine and chlorambucil (HCQ/CLB) or fludarabine were loaded inside biodegradable nanoparticles (BNPs) coated with an anti-CD20 antibody. First of all, a Burkitt’s lymphoma cell line (BJAB), two CLL cell lines (MEC1 and EHEB) and cells purified from patients’ blood samples were used to confirm CD20 expression and to assess BNPs binding and internalization. These studies demonstrated BNPs ability to bind malignant B cells and to enter inside cells in a process different from endocytosis. Then, BNPs therapeutic effect was evaluated by MTT test, AnnV/PI assay and western blot to put in evidence apoptosis induction and autophagy inhibition. These experiments demonstrated drugs-loaded BNPs ability to kill malignant B cells with comparable effects than those obtained with free drugs whereas empty BNPs were practically ineffective. In vivo BNPs characterization included the evaluation of their toxicity, biodistribution and therapeutic effect. C57/BL mice were used to evaluate BNPs toxicity which was studied considering survival, loss of body weight and several tissue markers in the blood. Mice receiving 8 injections of free HCQ+CLB died in this experiment whereas animals challenged with the same amount of drugs encapsulated inside BNPs did not show toxic effects suggesting BNPs safety. The importance of antiCD20 antibody in the homing of BNPs was confirmed by in vivo Time-Domain Optical Imaging performed in localized B-cell malignancy-bearing mice. This analysis suggested the ability of antiCD20-conjugated BNPs to specifically target tumor B-cells, with a pick after 24-48 hours. On the contrary, untargeted BNPs localization inside tumor was significantly decreased. In this analysis it was also evident that the liver is the main site of BNPs’ elimination while in the other organs the presence of fluorescent BNPs was very low. Finally, BNPs ability to treat a new xenograft human/SCID leukemia and Burkitt’s lymphoma mouse model was studied. Drugs-loaded BNPs were able to improve HCQ/CLB efficacy in vivo allowing the cure of treated all Burkitt’s lymphoma-bearing mice and 3 out of 7 leukemia-bearing animals. All these data together put the basis for the potential use of BNPs in the treatment of B-cell malignancies.
I tumori a cellule B sono un gruppo eterogeneo di patologie che comprendono sia malattie indolenti, come la leucemia linfatica cronica (LLC), sia aggressive, come il linfoma di Burkitt. Il trattamento delle patologie a cellule B prevede sia l’utilizzo di chemioterapici (agenti alchilanti e analoghi delle purine) che di anticorpi monoclonali. Nonostante la varietà di terapie esistenti, l’efficacia di questi farmaci è limitata dalla mancata specificità per le cellule tumorali e dall’induzione di gravi effetti collaterali. Per ovviare ai limiti delle terapie attuali, è stato quindi proposto l’utilizzo di nanoparticelle coniugate con un anticorpo antiCD20, specifico per le cellule B, e contenenti alte concentrazioni di chemioterapici (idrossiclorochina e clorambucile o fludarabina). Le nanoparticelle sono state caratterizzate in vitro e in vivo durante questo progetto di dottorato. Inizialmente sono stati effettuati studi in vitro al fine di valutare l’espressione del CD20 sulla superficie di una linea cellulare di linforma di Burkitt (BJAB), due linee di LLC (MEC1 e EHEB) e cellule purificate da campioni di sangue di pazienti affetti da LLC. In seguito, il legame e l’internalizzazione delle nanoparticelle a queste cellule sono stati dimostrati suggerendo anche come le nanoparticelle vengano internalizzate attraverso un meccanismo diverso dall’endocitosi. L’effetto terapeutico in vitro delle nanoparticelle è stato valutato con test MTT, AnnessinaV/PI e tramite western blot al fine di evidenziare l’induzione di apoptosi e l’inibizione dell’autofagia, meccanismi attraverso cui i farmaci utilizzati sono noti agire. Questi esperimenti hanno dimostrato che le nanoparticelle cariche di chemioterapici sono in grado di uccidere le cellule B tumorali con effetti paragonabili a quelli ottenuti da pari concentrazioni di farmaci liberi dimostrando come il processo di produzione delle nanoparticelle non influisca sull’efficacia dei chemioterapici. Al contrario, nanoparticelle vuote non sono in grado di uccidere le cellule dimostrando la mancata tossicità dei polimeri da cui sono costituite. Dopo aver confermato il legame e l’internalizzazione delle nanoparticelle che inducono la morte delle cellule B tumorali, sono stati effettuati esperimenti in vivo tra cui studi di tossicità al fine di valutare eventuali effetti collaterali indotti dal trattamento, studi di biodistribuzione e la valutazione degli effetti terapeutici. Gli studi di tossicità sono stati effettuati in topi sani valutando parametri quali la perdita di peso, la sopravvivenza e la tossicità sistemica. Nanoparticelle cariche di farmaci presentano un profilo tossicologico sicuro mentre pari dosi di farmaci liberi inducono la morte di tutti gli animali trattati. Questi esperimenti dimostrano quindi come l’inserimento di farmaci all’interno di nanoparticelle prevenga gli effetti collaterali normalmente indotti dai chemioterapici. Secondariamente, sono stati effettuati studi di biodistribuzione di nanoparticelle coniugate o meno con un anticorpo antiCD20. Questi studi effettuati tramite Optical Imaging dimostrano come nanoparticelle coniugate con l’anticorpo antiCD20 si localizzino preferenzialmente nella massa tumorale in 24-48 ore in quantità maggiore rispetto a nanoparticelle non coniugate con l’anticorpo. Inoltre, da queste analisi risulta evidente come il fegato sia il maggiore sito di eliminazione delle nanoparticelle mentre in altri organi la presenza di nanoparticelle è molto bassa. Infine, un modello disseminato di linfoma di Burkitt e un modello di LLC sono stati sviluppati in topi SCID (Severe Combined ImmunoDeficiency) iniettando rispettivamente cellule BJAB intraperitoneo e cellule MEC1 endovena. I modelli sono stati caratterizzati e utilizzati per valutare la potenziale applicazione delle nanoparticelle nel trattamento di queste patologie. Questi studi hanno dimostrato come le nanoparticelle siano in grado di aumentare l’efficacia dei chemioterapici e di curare tutti i topi affetti da linfoma di Burkitt e 3/7 topi affetti da leucemia. Concludendo, questi risultati suggeriscono la potenziale applicazione delle nanoparticelle cariche di chemioterapici nel trattamento di LLC e linfoma di Burkitt.
XXVII Ciclo
1986

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Fidilio, Annamaria. "Ruolo dell Inotuzumab Ozogamicin (CMC-544) nell induzione dell apoptosi in cellule CD22-positive di patologie linfoproliferative." Thesis, Università degli Studi di Catania, 2011. http://hdl.handle.net/10761/236.

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Abstract:

In questo progetto di ricerca, abbiamo descritto i meccanismi molecolari innescati dall'Inotuzumab Ozogamicina (CMC-544), un anticorpo anti-CD22 coniugato con la calichemicina, in linee immortalizzate ed in colture primarie di cellule linfoidi derivate da patologie linfoproliferative CD22-positive. Abbiamo utilizzato due linee cellulari derivate da linfoma di Burkitt (BL-2, RAJI, NAMALWA), una linea derivata da leucemia a precursori linfoidi B (SUP-B15) e una linea derivata da leucemia mieloide acuta (HL-60) come linea cellulare di controllo. Le cellule sono state trattate con il CMC-544 o il Gemtuzumab Ozogamicina (CMA-676), un anticorpo anti-CD33 coniugato con la calichemicina. Le linee cellulari BL-2 e SUP-B15 mostrano valori di IC50 per il CMC-544 significativamente piu' bassi rispetto a quelli ottenuti dopo trattamento con il CMA-676. Tuttavia, le RAJI e le NAMALWA presentano valori di IC50 simili per entrambi gli immunoconiugati, anche se presentano una bassa percentuale dell'antigene di superficie CD33. Inoltre, mentre le BL-2 e le SUP-B15 sopravvissute al trattamento per 48 ore con il CMC-544 sono arrestate in fase G2/M del ciclo cellulare, le RAJI e le NAMALWA - che presentano una mutazione nella sequenza amminoacidica della proteina p53 non solo non sono in grado di bloccarsi, ma l'esposizione all'immunoconiugato genera una popolazione poliploide. Nonostante cio', gli esperimenti di citofluorimetria, per valutare la distribuzione del ciclo cellulare, dimostrano che il trattamento con il CMC-544 per 12 ore induce un arresto in fase G2/M p53-indipendente in tutte le linee cellulari CD22-positive. Quando abbiamo ripetuto gli stessi esperimenti usando una combinazione sequenziale del CMC-544 e dellÃ Ã Ã Ã Ã Â¢ UCN-01, un inibitore di ChK2, abbiamo osservato un significativo incremento della morte cellulare. Il trattamento per 48 ore con il CMC-544 determina un arresto in fase G2/M del ciclo cellulare solo nelle BL-2 e SUP-B15, un evento fortemente ridotto dopo esposizione all'UCN-01. Tuttavia, le RAJI e le NAMALWA Ã Ã Ã Ã Ã Â¢ mancando del blocco in fase G2/M dopo 48 ore d'esposizione al CMC-544 - non rispondono al trattamento con l'UCN-01. Nonostante cio', l'espressione ectopica di p53 wild-type nelle NAMALWA le ha rese sensibili al trattamento con il CMC-544 ed ha generato un incremento della morte cellulare. Abbiamo, inoltre, confermato il valore predittivo dello status di p53 nel determinare la sensibilita' al trattamento con il CMC-544 anche in colture primarie derivate da pazienti affetti da patologie linfoproliferative CD22-positive. In conclusione, il CMC-544 mostra un alto potenziale terapeutico in cellule immortalizzate ed in linee primarie linfoidi CD22-positive. Lo status mutazionale della proteina p53 potrebbe rappresentare un marcatore molecolare di risposta al CMC-544 sia in vitro che in vivo. Inoltre, la combinazione con un inibitore della protein-chinasi ChK2 potrebbe ripristinare l'attivita' dell'immunoconiugato in pazienti con patologie linfoproliferative CD22-positive che presentano mutazioni nella proteina p53.

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Labriji, Houriya Mestaghanmi. "Vitamine D3 et cellule B du pancréas endocrine." Bordeaux 1, 1986. http://www.theses.fr/1986BOR10572.

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Abstract:

La vitamine d3 qui joue un role preponderant dans l'homeostasie du calcium intervient dans la regulation du fonctionnement de la cellule b du pancreas en controlant les disponibilites cellulaires en calcium.

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Labriji, Mestaghanmi Houriya. "Vitamine D et cellule B du pancréas endocrine." Grenoble 2 : ANRT, 1986. http://catalogue.bnf.fr/ark:/12148/cb37598859v.

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Falcone, M. "LA RIPROGRAMMAZIONE DI ASTROCITI UMANI IN CELLULE NEURO-STAMINALI E NEURONI COME POSSIBILE STRUMENTO TERAPEUTICO PER LE PATOLOGIE NEUROLOGICHE." Doctoral thesis, Università degli Studi di Milano, 2012. http://hdl.handle.net/2434/169918.

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Abstract:

Generating neural stem cells and neurons from reprogrammed human astrocytes is a potential strategy for repair in neurological diseases. It has been recently showed that astrocytes from murine cerebral cortex can be differentiated into neurons by the forced expression of a single transcription factor (Heinrich et al., 2010). While these studies have evaluated astrocyte conversion in the murine context, a similar possibility has yet to be demonstrated in human cells. An essential element for developing such applications with therapeutic value is a thorough comprehension of the mechanisms that regulate reprogramming of adult cells into induced pluripotent stem cells (iPSCs) (Hanna et al., 2010) or directly into another committed lineage, such as fibroblasts converted into neurons and also specific neuronal subpopulations like dopaminergic neurons (Pang et al., 2011, Caiazzo et al., 2011). Here we demonstrate the possibility to obtain progenitors and mature cells of the neural fate directly from human cortical astrocytes with a dedifferentiation into neural stem/progenitor phenotype. Even if for the purpose of autologous cell transplantation in neurological disorders, fibroblasts from patients resemble a much more suitable source of neurons than astrocytes from patients, nevertheless, shading light in the mechanisms that make possible to reprogram astrocytes into NSCs is useful for the final goal of using these cells as endogenous cell source for in situ neural repair in the CNS without any invasive cell graft. Human astrocytes can be reprogrammed into iPSCs, with similar efficiencies to other cells, using the viral expression of four reprogramming factors (Oct4, Sox2, Klf4, and cMyc) (Riuz et al., 2008). Remarkably, overexpression of a single factor like OCT4 in adult cells can induce full reprogramming, as when it is expressed in NSCs (human and mouse) (Kim et al., 2009 a, b) or promote the formation of another phenotype, such as the generation of blood cells with its expression in human fibroblasts (Szabo et al., 2010). These data suggest that the effect of these stem reprogramming factors changes in relationship to the lineage and the differentiation stage of the cells expressing them. In the current work, using the individual expression of OCT4, SOX2, or NANOG, we demonstrated and characterized the direct neural fate conversion of human astrocytes into multipotent neural progenitors, in vitro and in vivo. These cells were generated in a manner that is independent of iPSC production. Individual ectopic expression of the reprogramming factors OCT4 or SOX2 or NANOG into astrocytes, together with specific cytokine/culture conditions, activated the neural stem gene program and induced the generation of cells expressing neural stem/precursors markers. This change of lineage commitment was obtained also in pure CD44+ mature astrocytes and did not require passing through a pluripotent state. These unique astrocytes-derived neural stem cells gave rise to neurons, astrocytes and oligodendrocytes, and showed in vivo engraftment properties. ASCL1 expression further promotes the acquisition of a neuronal phenotype in vitro and in vivo. ASCL1 expression further promotes the acquisition of a neuronal phenotype in vitro and in vivo (Kim et al., 2009). To develop a broader understanding of astrocytes reprogramming we performed a methylation analysis demonstrating that epigenetic modifications underlie this process. These observations indicated that the sites of epigenetic and gene expression changes during reprogramming of astrocytes to NSCs are tightly linked to genes that are functionally important for pluripotency. These data demonstrate restoration of multipotency from human astrocytes, and point out a possible application of cellular reprogramming to endogenous CNS cells for repair of neurological disorders.

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Touarin, Pauline. "Décryptage d'un nouveau mécanisme régulant l'assemblage/désassemblage de réseaux galectine-glycoconjugués au cours d'interactions cellule-cellule." Thesis, Aix-Marseille, 2019. http://theses.univ-amu.fr.lama.univ-amu.fr/191218_TOUARIN_918h49a473o639ntovr_TH.pdf.

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Abstract:

Les Galectines forment des réseaux d’interactions qui impliquent des β-galactosides et participent à de nombreux processus biologiques. Au niveau extracellulaire, les fonctions biologiques des Galectines proviennent de leur capacité à interagir avec des glycans localisés à la surface des cellules. L’interaction de la Galectine-1 (Gal-1) et son ligand non-glycosylé, le pre-BCR, est le premier exemple d’une interaction des Galectines indépendante des glycans au niveau extracellulaire. Cette interaction est cruciale pour le développement des cellules B et fait intervenir des réseaux d’interactions entre les cellules pre-BII et stromales médiés par Gal-1, formant une synapse pre-B. Nous avons montré que λ5-UR induit des modifications spécifiques de l’affinité de Gal-1 pour certains glycans membranaires. De plus,cette interaction permet à Gal-1 d’acquérir spécifiquement une réactivité vis-à-vis de glycans porteurs d’acides sialiques liés en α2-3 présents spécifiquement à la surface des cellules pre-BII. Nous avons également pu décrypter les modifications des contacts intermoléculaires entre Gal-1 et cet épitope osidique. Des études comparatives avec le peptide synthétique Anginex ont permis de démontrer que bien qu’interagissant sur la même surface que λ5-UR, celui-ci induisait des modifications d’affinité de Gal-1 différentes liées à des modifications de la dynamique interne du site d’interaction des glycans de Gal-1 différentes en fonction du peptide interagissant. Le site d’interaction protéique de Gal-1 peut être impliqué dans d’autres processus cellulaires et servir à affiner les interactions Gal-1/glycoconjugués, agissant tel un rhéostat physiologique
Galectins are bridging glycosylated molecules by their β-galactoside moieties, forming a network involved in many physiological functions. Extracellularly, galectins function has been mainly described through carbohydrate binding activity. The first example of a carbohydrate-independent interaction outside the cell concerns galectin-1 (Gal1) and its ligand, the pre-BCR. This interaction has a crucial role in B-cell development through the formation of a Gal1-dependent lattice between pre-BII and stromal cells. Our previous study revealed that Gal1 interacts with a motif of the pre-BCR (λ5-UR) on a surface adjacent to the Gal1 CBS (Carbohydrate Binding Site) and allows Gal1 to undergo selective affinity changes in its carbohydrate-binding activity in vitro.Using solution state on cell NMR spectroscopy, we investigated the effect of λ5-UR interactions on Gal1 binding activity for its physiological ligands expressed on pre-BII and stromal cell surfaces. We show that λ5-UR can specifically induce a ligand binding shift of Gal1 when bound to its cell surface ligands. We also identified one glycan epitope for which Gal1 increases its affinity upon λ5-UR interaction and deciphered the intermolecular contact changes induced by λ5-UR. In addition, glycan arrays screening combined to NMR relaxation data showed that λ5-UR changes the internal dynamics of specific Gal1 CBS residues resulting in the targeting of specific glycan epitopes. This cellular and structural NMR study ever conducted at atomic resolution for a member of the galectins demonstrates that Gal/unglycosylated protein interactions can act as physiological regulators of Gal1 lattice interactions at the cell surface

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Thibault, Catherine. "Modifications fonctionnelles de la cellule b pancreatique chez le rat hyperglycemique." Paris 7, 1993. http://www.theses.fr/1993PA077212.

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Abstract:

Il est actuellement etabli que l'hyperglycemie des sujets atteints du diabete non-insulinodependant est en grande partie liee a une alteration de la secretion d'insuline qui correspond a une diminution de la reactivite des cellules b productrices d'insuline au glucose. Le but de cette these est d'etudier les relations entre l'hyperglycemie prolongee et la fonction insulinosecretoire. Chez le rat non diabetique, l'hyperglycemie provoque un etat d'hypersensibilite pancreatique au glucose sans que la reponse secretoire maximale soit modifiee. L'etude de l'effet de certains facteurs nerveux sur la secretion d'insuline montre que cette augmentation de la sensibilite pancreatique est liee, d'une part, a une diminution de l'activite sympathique inhibitrice et une augmentation de l'activite stimulante et d'autre part, a une elevation de la reponse insulinique a l'acetylcholine. Chez les rats presentant au prealable des degres varies d'intolerance au glucose, l'hyperglycemie induit des effets differents suivant la severite de l'atteinte pancreatique. Chez les rats legerement intolerants au glucose, l'hyperglycemie entraine une augmentation marquee de la secretion d'insuline. Chez les rats tres intolerants au glucose et diabetiques dont la masse des cellules b est fortement diminuee, cet effet potentialisateur sur la secretion d'insuline est respectivement tres faible ou totalement aboli. Chez les rats legerement intolerants, l'amplification de la reponse insulinique va de pair avec une augmentation importante du metabolisme des phosphoinositides. Au contraire, chez les rats diabetiques, l'hyperglycemie est sans influence sur ce metabolisme. En conclusion, la potentialisation par le glucose de la secretion d'insuline est un element important de la capacite fonctionnelle de la cellule b pancreatique et son alteration pourrait etre un des phenomenes initiaux qui conduirait de la simple intolerance au glucose au diabete non-insulinodependant

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PERUZZI, MARIANGELA. "Terapia cellulare e ingegneria tissutale nelle patologie ischemiche del miocardio: creazione di un miocardio artificiale per la rigenerazione cardiaca." Doctoral thesis, Università degli Studi di Roma "Tor Vergata", 2009. http://hdl.handle.net/2108/1000.

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Abstract:

La terapia rigenerativa cellulare ha attirato in questi ultimi anni un'attenzione sempre maggiore da parte dei ricercatori; numerosi studi, pre-clinici e clinici hanno messo in evidenza come questo tipo di approccio terapeutico abbia le potenzialità per far recuperare la funzionalità cardiaca compromessa. Tuttavia, i risultati dei primi trials clinici hanno dato sinora risultati controversi. E' stato dimostrato che le cellule staminali adulte, sia che esse originino dal tessuto muscolare che dal midollo osseo, non si differenziano in cardiomiociti in grado di migliorare la funzionalità cardiaca. Dati recenti suggeriscono l'esistenza di cellule staminali cardiache residenti nel cuore adulto, con potenzialità di differenziamento verso i vari tipi cellulari presenti nel cuore (cardiomiociti, cellule endoteliali, cellule muscolari lisce). Le cellule staminali cardiache rappresentano l'opzione più promettente per la terapia rigenerativa cardiaca: infatti, esse non comportano problematiche di tipo etico né tantomeno complicanze di natura immunologica come le cellule staminali embrionali. Recentemente un gruppo di ricercatori ha isolato con successo cellule staminali cardiache (CSCs) da frammenti bioptici endomiocardici umani, espandendole in vitro per diverse generazioni e conservandone le potenzialità differenziative in cardiomiociti, cellule endoteliali e cellule muscolari lisce.Purtoppo la terapia cellulare, in generale, soffre ancora di limitazioni correlate alla variabilità dell'engrafment cellulare e all'alta percentuale di morte per apoptosi che fa seguito al trapianto (circa 80%). Inoltre, questo tipo di approccio risulta inadeguato o quantomeno insufficiente in caso di lesioni infartuali di notevoli dimensioni. Parallelamente, la ricerca nel campo dell'ingegneria tissutale applicata alla patologia cardiaca ha compiuto notevoli progressi negli ultimi anni e numerosi studi in vivo e in vitro ne attestano le notevoli potenzialità terapeutiche. Sono state infatti recentemente sviluppate, tecniche di bio-ingegneria che prevedono l'incorporazione delle cellule staminali in matrici biodegradabili con formazione di biocomplessi, al fine di migliorare la sopravvivenza e la differenziazione delle cellule staminali stesse in vivo. Tali costrutti incorporano gli elementi cellulari in una struttura tridimensionale che può essere utilizzata per sostituire l'area di miocardio danneggiata in una maniera più fisiologica ed efficace: infatti, le matrici a base di collagene sono in grado di reintegrare la matrice extracellulare cardiaca danneggiata a seguito dell'insulto ischemico. Tuttavia non sono stati ancora identificati i biocomplessi matrice/cellula staminale più adeguati. La nostra ipotesi è che le cellule staminali cardiache autologhe possano rappresentare la scelta più efficace e realistica da utilizzare per la creazione di biocomplessi. La possibilità di mettere a confronto, l'attività biologica delle CSCs, con quella di altri tipi di cellule staminali adulte (sulle quali sono già stati condotti numerosi studi pre-clinici e clinici), dovrebbe definitivamente individuare e caratterizzare i vantaggi e gli svantaggi del migliore biocomplesso applicabile nella pratica clinica. La creazione di un modello sperimentale animale ottimale e la messa a punto di protocolli diagnostici per il monitoraggio in vivo del comportamento delle cellule staminali servirà come punto di partenza per la realizzazione di studi pre-clinici in animali di grande taglia e di studi clinici di fase I-II.
Cell therapy for regeneration, has received extensive attention and the accumulated evidence from both pre-clinical and clinical studies suggests that it has the potential to restore heart function. However, the results from first clinical trials are mixed, with benefits ranging from absent to transient and, at most, marginal. These studies indicate that adult stem cells, whether muscular or bone marrow-derived, fail to generate new cardiomyocytes, capable to improve cardiac function. Emerging evidence suggests that several subpopulations of resident cardiac stem cells (CSCs) have the ability to differentiate into cardiac myocytes, vascular smooth muscle and endothelial cells. CSCs represent a logical source to exploit in cardiac regeneration therapy bacause, unlike other adult stem cells, they are likely to be intrinsecally programmed to generate cardiac tissue in vitro and to increase cardiac tissue viability in vivo. In addition, autologous CSCs can be employed avoiding ethical and immunological problems associated with the use of embryonic stem cells. Recently, a group of our network has successfully isolated CPCs/CSCs from small biopsies of human myocardium and expanded them ex vivo trough several generations without loosing differentiation potential into cardiomyocytes and vascular cells, bringing autologous transplantation of cardiac stem cells closer to clinical translation. However cell therapy in general suffers limitatations related to variable cell retention, survival and significant cell death or apoptosis, early after implantation in the diseased myocardium. Furthermore, cell transplantation may not always be suitable for catastrophic events like large myocardial damage. For this reason, hybrid therapies that incorporate tissue engineering are being developed as potentially new therapeutic approaches for repair of myocardial tissue. Tissue engineering (TE) involves seeding a biodegradable scaffold with cells that grow into morphologically recognizable tissue both in vitro and in vivo. Recent advances in cell culture and TE have facilitated the development of suitable cell-engineered biodegradable grafts. The optimal biomaterials and cell types, however, have not been identified. Our hypothesis is that autologous cardiac stem cells could represent the most efficient and reliable cell type to be used for an hybrid therapy (tissue engineering/stem cells) to restore myocardial function in ischemic myocardial desease. TE joints the physical replacement of the diseased structure with new cardiac tissue built from a biodegradable scaffold, with the regenerating activity of the optimal cell types. A bioengineered tissue graft (biocomplex) would be the ideal treatment to repair cardiac ischemic diseases. The possibility to compare the biological activity of the CSCs with other adult SCs, should definitely individuate and characterize the advantages and disadvantages of the best clinical applicable biocomplex. Moreover, the creation of the appropriate animal model and the realization of diagnostic protocols aimed to monitor the in vivo cell fate, will be used as pre-clinical background for large animals and phase I-II clinical studies.

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Tchakarska, Guergana. "Les multiples rôles de la cycline D1 dans la cellule B et les hémopathies malignes chroniques B." Caen, 2010. http://www.theses.fr/2010CAEN3127.

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Abstract:

Le myélome multiple et le lymphome à cellules du manteau se caractérisent par l’expression de la cycline D1, absente dans le lignage lymphocytaire B. Le gène CCND1 code pour deux isoformes d’ARNm, « a » et « b » par épissage alternatif. Le rôle respectif de chaque protéine dans la transformation des cellules B est inconnu. Par des stratégies de gain et perte de fonction, dans différents types cellulaires, nous montrons de façon originale que : l’extinction de l’expression de CCND1 ne suffit pas à induire l’arrêt de la prolifération et l’induction de la mort cellulaire ; l’expression ectopique de la cycline D1a inhibe l’activité mitochondriale via le recrutement du canal VDAC ; l’expression ectopique de la cycline D1b permet la greffe in vivo en favorisant la néoangiogenèse ; les cyclines D1a/b et K régulent le métabolisme cellulaire
Multiple myeloma (MM) and mantle cell lymphoma (MCL) are characterized by cyclin D1 expression normally absent in the B-cell lineage. CCND1 encodes two mRNA isoforms, « a » and « b » by alternative splicing. The respective role of each protein in the B-cell transformation process remains unknown. By using various cellular models and gain- and loss-of-function strategies we report that : downregulation of CCND1 expression is not sufficient for cell proliferation arrest and cell death promotion ; ectopic expression of cyclin D1a inhibits mitochondrial activity through the recruitment of VDAC channel ; ectopic expression of cyclin D1b allows in vivo engraftment through the activation of neoangiogenesis ; cyclins D1a/b and K regulate cell metabolism

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Escolar, Jean-Claude. "Hypothermie et sécrétion de l'insuline par la cellule B pancréatique du rat." Bordeaux 1, 1989. http://www.theses.fr/1989BOR10507.

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Abstract:

L'etude de l'effet direct du froid sur la celle b pancreatique montre que les voies oxydatives intramitochondriales du glucose sont tres inhibees alors que la voie des pentoses est favorisee a basse temperature (28 **(o)c), que les mouvements potassiques sont moins inhibes que les flux calciques, que l'hypothermie inhibe les flux calciques non lies a la presence du glucose, que l'augmentation de la temperature potentialise la secretion de l'insuline induite par le glucose

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Escolar, Jean-Claude. "Hypothermie et sécrétion de l'insuline par la cellule B pancréatique du rat." Grenoble 2 : ANRT, 1988. http://catalogue.bnf.fr/ark:/12148/cb376135193.

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LA, SALA GINA. "Effetti degli estrogeni e dei distruttori endocrini sulle cellule germinali embrionali di topo e sulle cellule somatiche della gonade." Doctoral thesis, Università degli Studi di Roma "Tor Vergata", 2009. http://hdl.handle.net/2108/901.

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Abstract:

Negli ultimi anni si è assistito ad un crescente aumento nell’ambiente di sostanze che sono in grado di alterare il sistema endocrino poiché agiscono come l’ormone naturale estrogeno e per questo definite distruttori endocrini (EDs). Si ipotizza che l’esposizione agli EDs durante il periodo fetale e neo-natale sia la causa dell’insorgenza di numerosi disordini dell’apparato riproduttivo maschile come sterilità, cancro del testicolo, criptorchidismo e ipospadia che vengono definite con il termine unico di sindrome del testicolo disgenico (TDS). E’ importante studiare gli effetti degli estrogeni e degli xenoestrogeni, una classe di EDs, durante il periodo fetale ed in particolare durante lo sviluppo dell’apparto riproduttivo e conoscere i meccanismi, con cui tali sostanze esplicano i loro effetti. OBIETTIVI. Verificare l'espressione dei recettori degli estrogeni (ERs) nei precursori dei gameti adulti, ovvero nelle cellule germinali di topo denominate PGCs e analizzare i pathways molecolari attivati in queste cellule dagli estrogeni e dallo xenoestrogeno lindano. Inoltre si vuole verificare la presenza di ERs funzionali nelle cellule somatiche testicolari embrionali utilizzando costrutti ERE-luc e AP1-Luc per valutare l'attività estrogenica di xenoestrogeni. RISULTATI. Lo studio condotto in questa tesi mette in evidenza l'esistenza di pathways molecolari attivabili dall’estrogeno (E2) nelle gonadi embrionali di topo, in particolare, nel testicolo, sia nelle cellule germinali primordiali che nelle cellule somatiche. Abbiamo osservato che l’E2 è in grado di attivare, attraverso il recettore degli estrogeni ERα , importanti chinasi nelle PGCs (AKT, ERK1/2 e SRC) con effetti positivi sulla crescita e proliferazione di tali cellule. Si è osservato che il lindano, al contrario dell’E2, influenza negativamente la sopravvivenza di tali cellule attraverso una azione pro-apoptotica diretta, probabilmente derivante da effetti negativi sull’attività chinasica AKT. Inoltre abbiamo descritto per la prima volta l'esistenza di un recettore dell’estrogeno funzionale nelle cellule del Leydig testicolari durante lo stadio precoce dello sviluppo e messo a punto un test in vitro che può essere utilizzato per valutare l'attività estrogenica di xenoestrogeni direttamente sulle cellule del testicolo embrionale di mammiferi. CONCLUSIONI: Questi risultati rafforzano l’ipotesi dell’origine fetale della TDS. Numerosi studi hanno messo in evidenza gli effetti diretti degli estrogeni sul sistema endocrino, sull'espressione genica e su funzioni specifiche delle cellule somatiche testicolari embrionali, in particolare sulle cellule del Leydig, tuttavia tali studi sono carenti nelle cellule germinali. E’ importante conoscere i meccanismi di azione degli xenoestrogeni sullePGCs visto che attraverso esse viene trasmesso il genoma alle generazioni successive.
In the recent years the increased presence of human made compounds that mimic the action of estrogens termed endocrine disrupters (ED) in environment and in food and the exposure to these compounds during fetal and neonatal period has been hypotized to be the cause of the raise of disorders of male reproductive function, such a decrease of sperm count, increase in the incidence of testicular cancer and cryptorchidism and hypospadias termed Testicular Dysgenesis Syndrome (TDS). For these reason, it is important to know how the estrogens and xenoestrogens, a class of ED, act during the fetal development and to know the mechanism by which these compounds exert their effects. AIMS: To study the expression of estrogen receptors (ERs) in the embryonic precursors of the adult gametes termed PGCs and to analyze the existence in such cells of intracellular molecular pathways modulable by estrogens and xenoestrogen lindane. To verify the presence of functional ER-beta in embryonic testicular somatic cells using an ERE-luc and AP1-Luc assay and to evaluate estrogenic activity of putative EDs on mammalian embryonic testis. RESULTS: The data described in this thesis highlights the existence of functional estrogen-dependent pathways in embryonic mouse gonads in particular in testis, both in germ and somatic cells. We found that E2 is able to activate via ER-beta multiple intracellular signalling in PGCs and that the xenoestrogens, lindane affect the survival in such cells through a direct pro-apoptotic action likely resulting from its adverse effect on AKT activity. Othermore, we described for the first time the existence of a functional ERα pathway in putative Leydig cells from early stage of testis development and describe an in vitro assay that can be used to evaluate estrogenic activity of compounds on mammalian embryonic testis. CONCLUSIONS: These results support the notion of the TDS origin during early stages of testis development. While data are accumulating showing direct effect of estrogens and EDs on gene expression and specific functions of somatic cells of the embryonic testes, in particular Leydig cells, such results on germ cells are lacking and further studies are needed to investigate the effects of these compounds on embryonic germ cell function including epigenetic regulation.

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Plasman, Pierre-Olivier. "Mouvements cationiques transmembranaires dans la cellule B pancréatique: approche radioisotopique, pharmacologique et spectrofluorimétrique." Doctoral thesis, Universite Libre de Bruxelles, 1991. http://hdl.handle.net/2013/ULB-DIPOT:oai:dipot.ulb.ac.be:2013/212996.

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Denis-Lagache, Nicolas. "Commutation ou extinction de l'expression du BCR et impact sur la cellule B." Thesis, Limoges, 2015. http://www.theses.fr/2015LIMO0071/document.

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Abstract:

Lors de la reconnaissance de leur antigène spécifique, les lymphocytes B vont s’activer et interagir avec les autres cellules des organes lymphoïdes secondaires (cellules folliculaires dendritiques, lymphocytes T, …) pour former un centre germinatif où le locus IgH va être remanié afin d’accroitre l’affinité des immunoglobulines pour l’antigène (grâce à l’hypermutation somatique des régions variables (SHM) et de décliner l’activité effectrice des anticorps selon plusieurs types de fonction grâce à la commutation de classe des régions constantes ou « switch u CSR», afin d’éliminer selon diverses stratégies l’antigène . Ces deux mécanismes sont initiés par l’Activation Induced Deaminase (AID) qui cible l’ADN au niveau des cytosines pour les changer en uracile, aboutissant à des cassures simple brin ou double brin lorsque que les mésappariements sont proches les uns des autres.Il a été montré qu’AID est capable de cibler la région régulatrice en 3’ du locus IgH au niveau de régions LS, action qui aboutit à la délétion complète des gènes C du locus, à la perte de l’expression du BCR et à la mort cellulaire lors de la recombinaison suicide du locus (LSR). Dans notre étude, nous avons réalisé un modèle knock-in du gène Cμ humain en aval de la dernière région LS dans le but de sauver les cellules B réalisant la LSR sur les dernières régions LS par l’expression d’un BCR humanisé (modèle LSR-μKI). Notre modèle indique que l’insertion du gène Cμ humain en aval de l’élément hs4 de la 3’RRpermet en effet de remplacer certaines recombinaisons LSR par un switch vers l’expression d’IgM humanisée », et module en outre qualitativement certains aspects de la réponse immunitaire humorale. Notre modèle « rapporteur » de la LSR suggère aussi que l’évènement de LSR est un phénomène régulé qui augmente avec l’activation B. L’étude ex vivo de cellules B issues du modèle suggère que la LSR est possible lors d’une réponse T indépendante comme T dépendante. Elle se montre aussi inductible par les ligands TLR4 mais non TLR9. L’étude du répertoire des IgM humaines indique une utilisation biaisée des familles de VH, avec notamment sur utilisation de la famille VH5murine, suggérant donc que l’incidence de la LSR varie avec la structure des régions variables du BCR et pourrait donc être dépendante de l’affinité contre des antigènes/ligands qui restent à caractériser
After antigen recognition, B cells are activated and interact with other cells within secondarylymphoid organs (dendritic cells, T lymphocytes …) to form a germinal center. In the GC, the IgH locusis reorganized in order to increase the affinity of immunoglobulins for antigen through somatichypermutation (SHM) of V(D)J regions and to configure them into several forms harboring diversifiedmodes of action after “class switc recombination” (CSR). Both mechanisms are initiated by ActivationInduced Deaminase (AID) which targets DNA cytosines to convert them into uracil, then causing singleor double strand breaks in DNA when the mismatchs are located close to each other. It has been shownthat AID can target the IgH locus 3’ regulatory region on specific regions called LS, then leading to thetotal deletion of IgH locus C genes, loss of BCR expression and cell death by locus suicide recombination(LSR). In our study, we created a human Cμ knock-in model distal to the hs4 element of the 3’RR, in anattempt to rescue cells after the LSR event. Our model showed that this insertion indeed succeededinto replacing LSR by “class switching to humanized IgM” and also qualitatively modulated someaspects of the humoral response. This new LSR reporter model additionally supports the hypothesisthat LSR is regulated and increases with B cell activation. Studies of ex vivo B cells from the modelsuggest that LSR can occur in T dependent and independent manners, but is induced by triggering TLR4but not TLR9. Studies of the human IgM repertoire showed a biased use of VH families, and notably themouse VH5 family was used more frequently than in the control group. The BCR repertoire bias stronglysuggests that LSR is at least in part a matter of affinity of the BCR variable regions for antigens andligands that remain to be characterized

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Ave, Elisa. "Le cellule mesenchimali staminali nella patogenesi della leucemia linfatica cronica di tipo B." Doctoral thesis, Università degli studi di Padova, 2010. http://hdl.handle.net/11577/3427362.

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Abstract:

B-cell Chronic Lymphocytic Leukemia (B-CLL) is the most common leukemia in adults and is characterized by the accumulation of mature clonal CD5+ B lymphocytes in peripheral blood, bone marrow and lymphoid tissues. The defect in programmed cell death favours the disease progression through a prolonged survival of malignant cells and the induction of the drug-resistance. The defective apoptosis of B-CLL cells is not only due to intrisic defects of the leukemic clone, but also to extrinsic factors that influence its behavior in the tissue microenvironment. Since the accumulation of monoclonal B cells is also supported by their interaction with surrounding cells, we focused our attention on mesenchymal stem cells (MSCs) in order to evaluate their role in survival and localization of neoplastic clone. MSCs can be isolated, expanded with high efficiency and induced to differentiate into multiple mesenchymal lineages under appropriated colture conditions. In addition, they show crucial immunoregulatory properties suppressing several T-, B- and NK-cell functions and affecting dendritic cell activities. In the present study MSCs isolated from the bone marrow of 47 B-CLL patients were expanded ex vivo and characterized through fluocytometric analysis and differentiation coltures (adipocytes and osteocytes). While MSCs from B-CLL patients exhibited normal phenotype and differentiation capacities, when co-coltured with neoplastic B cells they exherted an anti-apoptotic effect reducing lymphocyte apoptosis. After 7 days of colture in presence of CLL-MSC, we observed a relevant extended survival of leukemic cells, but not of normal B lymphocytes. The same effect was observed on B-CLL cells isolated from 3 patients treated with pro-apoptotic compounds, suggesting an involvement of MSCs in drug-resistance. Finally, chemotaxis tests showed the ability of MSCs to produce molecules promoting migration and localization of neoplastic B cells in bone marrow. Taken together, these findings suggest that MSCs derived from patients with B-CLL, despite an apparent normal phenotype and normal differentiation ability, provide survival signals to neoplastic cells extending their lifespan and producing chemotattic factors favouring their accumulation in the bone marrow.
La leucemia linfatica cronica di tipo B (LLC-B) è la forma più comune di leucemia nell’adulto ed è caratterizzata dall'accumulo clonale di piccoli linfociti B CD5+ nel sangue periferico, nel midollo osseo e negli organi linfatici, dovuto sia ad un aumento della proliferazione che ad un difetto dei meccanismi di morte cellulare programmata. La resistenza all’apoptosi in questi linfociti favorisce la progressione della malattia attraverso un’aumentata sopravvivenza del clone neoplastico e l’induzione della resistenza ai farmaci citostatici. Tali alterazioni sono imputabili sia a fattori intrinseci che a fattori estrinseci derivanti dal microambiente. Poiché l’aumentata sopravvivenza ed il progressivo accumulo del clone linfocitario risultano selettivamente favoriti dall'interazione con cellule accessorie non tumorali presenti nel microambiente in cui esso risiede, in questa tesi abbiamo focalizzato l’attenzione sulle cellule mesenchimali staminali (MSC), allo scopo di valutare il loro ruolo nella sopravvivenza e nella compartimentalizzazione del clone B leucemico. Le MSC costituiscono una frazione esigua (inferiore allo 0,01%) della popolazione di cellule midollari, sono cellule staminali multipotenti in grado di differenziare in diversi tessuti di origine mesenchimale; sono inoltre dotate di proprietà immunomodulatorie verso linfociti B, T, Natural Killer e cellule dendritiche. In questa tesi le MSC sono state isolate dal sangue midollare di 47 pazienti affetti da LLC-B e sono state caratterizzate fenotipicamente e funzionalmente mediante analisi citofluorimetrica (positività per CD73, CD90 e CD105, negatività per CD31, CD34 e CD45) e colture differenziative (adipociti ed osteociti) confrontandole con MSC di donatori sani. Successivamente si sono allestite co-colture di linfociti B di pazienti affetti da LLC e MSC allo scopo di valutare l’effetto delle MSC sul clone neoplastico di LLC. Le MSC ottenute dai pazienti non hanno presentato alterazioni dal punto di vista fenotipico né funzionale rispetto alle MSC di donatori sani, tuttavia esse hanno sviluppato interazioni capaci di favorire la sopravvivenza del clone leucemico. Gli esperimenti di co-coltura hanno dimostrato infatti che le MSC esercitano un effetto anti-apoptotico sui linfociti B neoplastici, documentato da un aumento significativo della sopravvivenza delle cellule B di LLC dopo 7 giorni di coltura, effetto verificatosi anche con MSC di donatori sani e invece molto meno marcato nei linfociti B normali. Tale attività anti-apoptotica si è osservata, seppur di minore intensità, anche nei linfociti B di pazienti sottoposti a trattamento chemioterapico in vivo con Fludabarina e Ciclofosfamide, suggerendo che le MSC possano essere implicate anche nei meccanismi di chemio resistenza del clone di LLC. Infine l’analisi della migrazione cellulare dei linfociti B patologici in presenza di terreno condizionato derivante dalle colture di MSC ha dimostrato la capacità delle MSC di produrre stimoli chemiotattici in grado di richiamare in sede midollare il clone maligno, ma non i linfociti B normali. I dati riportati suggeriscono che le MSC nei pazienti affetti da LLC-B, sebbene non mostrino alterazioni dal punto di vista fenotipico e funzionale, svolgono un ruolo attivo nel favorire la sopravvivenza e la compartimentalizzazione delle cellule B neoplastiche a livello midollare.

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RAVASI, MADDALENA. "Cellule staminali mesenchimali (msc) nelle patologie demielinizzanti: studio in vitro della promozione della sopravvivenza di neuroni e della formazione della mielina da parte di msc." Doctoral thesis, Università degli Studi di Milano-Bicocca, 2009. http://hdl.handle.net/10281/7472.

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Abstract:

The aim of this work was the study of trophic properties of MSCs on sensitive neurons in culture. In particular we tested the MSCs’s capacity of myelination in order to use these cells for demyelinating disease therapies. MSCs are adult, multipotent and undifferentiated stem cells derived from bone marrow and isolated by plastic adherence. DRG from 15-day old Sprague-Dawley rat embryos were removed and cultured on a substrate of rat-tail collagen in AN2 medium supplemented with 5 ng/ml NGF. In a previous study our lab demonstrated that MSCs are able to rescue DRG dissociated neurons and to support their long-lasting survival in presence of NGF when co-cultured at direct contact. In this work we characterized cultured DRG neurons cellular death by means of cytofluorimetric, immunofluorescences and electron microscopy tecniques, demonstrating that neuronal cultures died for apoptosis and that MSCs protected neurons from this kind of death. We then investigate if the trophic role of MSCs was mediated by the release of soluble factors. We demonstrated that cocultures MSCs conditioned medium didn’t improve neuronal survival. We also investigated if MSC express constitutively on their surface some molecules able to improve neuronal survival by plating neurons on paraformaldehyde fixed MSCs (0,5%, 4%) and even in this case neurons died as the untreated control neurons. Therefore we concluded that the effect of MSCs on neuronal survival was mainly mediated by direct contact. We also observe in electron microscopy some point of contact between MSCs and neurons, and using a vital fluorescent cytoplasmatic stain we demonstrated the possibility of a passage of material between the two populations. By immunofluorescences we observed the presence only in cocultures of connexin 32, 36 and 42, which are proteins involved in neuronal gap junction formation. Connexin 32 was found in correspondence of neuronal and MSC membrane, suggesting that there were connection between neurons and MSC. We also demonstrated by electron microscopy the presence of axonal myelination only in neurons in cocultures. The myelin production was not due to the presence of satellite cells in our cultures, because we eliminated them with fluorodesoxyuridin that kills proliferating cells, as confirmed by immunofluorescences experiment with two markers of glial cells, GFAP and S100. Moreover the myelin production is neither due to transdifferentiation of MSCs, as demonstrated by immunofluorescences. The myelin presented in cocultures is few but it is compact and functional, presenting Node of Ranvier and morphological characteristic similar to myelin of neuronal and Schwann cells cocultures. In conclusion in this work we demonstrated that MSC can myelinate neuronal processes in culture, without transdifferentiating in Schwann cells. These results can be the base of more elaborate studies on human MSCs and on other types of neurons, like SNC neurons, to confirm the validity of MSC even on SNC, in order to identify a possible therapy for demyelinating disease with stem cells.

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Lavenu-Bombled, Cécile. "Approche originale de thérapie génique pour l'hémophilie B." Paris 7, 2004. http://www.theses.fr/2004PA077110.

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Zonta, Francesca. "Ruolo anti-apoptotico della tirosin-chinasi Lyn nella leucemia linfatica cronica a cellule B." Doctoral thesis, Università degli studi di Padova, 2015. http://hdl.handle.net/11577/3424269.

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Abstract:

B-chronic lymphocytic leukemia (B-CLL) is the commonest leukemia in the Western world and is characterized by the clonal expansion of small CD5+ B lymphocytes in the pheripheral blood, bone marrow and lymphoid organs, due to defective apoptosis. One of the crucial factors for the survival of B-CLL cells is the anomalous activity of a few enzymes such as the lipide kinase PI3K, the Ser/Thr kinase PKC and the tyrosine-kinases Syk and Lyn. My research focus was Src family kinase Lyn, which is overexpressed, constitutively active and delocalized in the cytosol within an aberrant multiprotein complex, in association with the molecular chaperone Hsp90, which in turn accounts for the high level of tyrosine-phosphorylation, ultimately contributing to the cancer phenotype of B-CLL cells. The aim of my PhD work was to identify Lyn’s cytosolic substrates potentially involved in the apoptosis resistance mechanisms observed in leukemia cells. Using biochemical and biomolecular methods as well as a bioinformatics approach, two potential substrates of Lyn were identified, namely the cysteine protease caspase-8 and the protein phosphatase-2A (PP2A). Firstly, we established that in B-CLL, the inactive zymogen of caspase-8, procaspase-8, is phosphorylated at Tyr380 by the cytosolic pool of Lyn, which brings about its inhibition and its structural rearrangements in a dymeric cytosolic form. The phosphorylation of Tyr380 of caspase-8 is abolished by the use of both the Lyn inhibitor dasatinib and the Hsp90 inhibitor geldanamycin, the latter of which also leads to the disassembly of the aberrant cytosolic complex and the drop in the Lyn’s cytosolic activity, resulting in the caspase-dependent apoptosis. Secondly, we verified that Lyn negatively affects the activity of one of the key factors in the modulation of cell survival signals, PP2A. Phosphorylation of the catalytic subunit of PP2A at Tyr307 causes inhibition of the phosphatase activity not only per se but also strengthening the interaction of PP2A with its cellular inhibitor SET, which is also overexpressed in B-CLL cells. As a result, PP2A is stably preserved in an inhibited form, which contributes to the persistence of prosurvival signals, in particular those mediated by the serine/threonine kinase Akt. Moreover, to identify new compounds able to activate PP2A in order to contrast survival signals in B-CLL, we tested fingolimod (FTY720), which is already known as a PP2A activator, currently in use in the treatment of multiple sclerosis and recently emerging as a pro-apoptotic factor in different types of cancer cells. Notably, the mechanism of action consists in the ability of fingolimod to bind to SET and hence remove this cellular inhibitor of PP2A from its catalytic subunit. Since this drug is used as an immunosuppressive agent, by virtue of its provoking the degradation of the sphingosine-1-phosphate receptor, and shows cardiovascular side effects, it might prove unsuitable in a more complex therapeutic strategy. Therefore, fingolimod structural analogues which could not interfere with the sphingosine receptors, but could still destabilize the PP2A/SET complex were designed and synthesized. One of these compounds, MP07-66, showed an effectiveness similar to fingolimod, as to both the ability to disrupting the PP2A/SET complex and inhibit the protein kinase Akt, this latter being vital in preserving the survival signals. This compound also was able to induce apoptosis in leukemia cells, which effect was further enhanced by the combination with dasatinib by a synergistic mechanism, further confirming the role of phosphorylation in the stability of PP2A/SET. In conclusion, this work identifies PP2A and Caspase 8 as substrates of the cytosolic aberrant activity of Lyn, confirming the key role of this tyrosine kinase in supporting multiple anti-apoptotic signals in the B-CLL. The molecular mechanisms of apoptosis resistance here identified may be potential targets in the development of new therapies for clinical use.
La leucemia linfatica cronica a cellule B (LLC-B) è la forma più comune di leucemia nell’adulto ed è caratterizzata dall’accumulo di piccoli linfociti B CD5+ nel sangue periferico, nel midollo osseo e negli organi linfatici, dovuto sia a un aumento della proliferazione, che a un difetto dei meccanismi di morte cellulare programmata. Tra i fattori che contribuiscono alla sopravvivenza del linfocita neoplastico un ruolo fondamentale svolge l’attività anomala di diversi enzimi con attività fosfotransferasica che modulano le principali vie di segnalazione intracellulare, tra cui la lipide chinasi PI3K, la serina/treonina chinasi PKC, e le tirosin-chinasi Syk e Lyn. L’attività di ricerca svolta durante il mio dottorato si è concentrata sulla Src chinasi Lyn, la quale in questa patologia risulta sovra-espressa, iperattiva e delocalizzata nel citosol come componente di un complesso multiproteico aberrante. All’interno di questo complesso, Lyn è associata al chaperone molecolare Hsp90, il quale la preserva in conformazione attiva, così contribuendo all’elevata tirosin-fosforilazione basale tipica della LLC-B. Lo scopo della mia indagine è stato identificare le molecole substrato dell’anomala attività di Lyn, potenzialmente coinvolte nei fenomeni di resistenza all’apoptosi dei cloni leucemici. Grazie all’applicazione di metodi biochimici e biomolecolari, nonché a un approccio bioinformatico, abbiamo identificato due substrati proteici di Lyn, la proteasi caspasi 8 e la proteina fosfatasi 2A (PP2A). In primo luogo, abbiamo dimostrato che nelle cellule B di LLC, la procaspasi 8, zimogeno della caspasi 8, è fosforilata in Tyr380 ad opera di Lyn citosolico; tale fosforilazione comporta non solo l’inibizione dell’attività caspasica ma anche il riarrangiamento strutturale della proteasi stessa, che nei cloni leucemici localizza nel citosol in forma dimerica. Tale inibizione viene rimossa usando sia inibitori di Lyn, come il dasatinib, sia inibitori di Hsp90, come geldanamicina, quest’ultimo provocando la rottura del complesso citosolico e quindi il calo dell’attività di Lyn e in ultima analisi attivando le vie apoptotiche estrinseca ed intrinseca. In secondo luogo, abbiamo verificato che Lyn esercita un controllo negativo su uno dei fattori chiave della modulazione dei segnali che regolano la sopravvivenza cellulare, la serina/treonina fosfatasi PP2A. I nostri dati indicano l’esistenza di un meccanismo d’inibizione dell’attività fosfatasica di PP2A, che dipende sia dalla fosforilazione come tale in Tyr307 della subunità catalitica, ma anche dalla stabilizzazione dell’interazione della fosfatasi con il suo inibitore proteico cellulare SET, il quale è anch’esso sovra-espresso nelle cellule di LLC-B. La formazione di questo complesso stabile mantiene la fosfatasi in uno stato inattivo contribuendo quindi alla persistenza dei segnali di sopravvivenza mediati in particolar modo dalla serina/treonina chinasi Akt. Inoltre, allo scopo di individuare nuove molecole in grado di riattivare PP2A e quindi utili a contrastare i segnali di sopravvivenza delle cellule leucemiche, abbiamo verificato l’utilità di un noto attivatore di PP2A, il fingolimod (FTY720), già impiegato nella sclerosi multipla e ultimamente rivelatosi efficace nel causare la morte cellulare in vari tipi di modelli di neoplasia. Il meccanismo di azione risiede nella capacità di rimuovere l’inibitore SET dalla subunità catalitica di PP2A. Questo composto, tuttavia, possedendo attività immunosoppressiva a causa dell’induzione della degradazione del recettore della sfingosina ma anche effetti collaterali a carico del sistema cardio-vascolare, può rivelarsi inadeguato nell’ottica di una più complessa strategia terapeutica in campo oncologico. Quindi sono stati sviluppati degli analoghi strutturali che non interferissero con il recettore della sfingosina ma destabilizzassero il complesso della PP2A fosforilata e SET. In questo modo è stato identificato un composto (MP07-66), con un’efficacia sovrapponibile al fingolimod sia nel disgregare il complesso che nell’inibire la protein chinasi Akt, fondamentale nel preservare i segnali di sopravvivenza. Inoltre tale composto era in grado di indurre apoptosi su cellule leucemiche, il quale effetto veniva incentivato dalla presenza di dasatinib con meccanismo sinergico, ulteriormente confermando il ruolo della fosforilazione nella stabilità del complesso PP2A/SET. In conclusione, questo lavoro identifica PP2A e caspasi 8 quali substrati dell’attività citosolica aberrante di Lyn, confermando il ruolo chiave di questa chinasi nel supportare i molteplici segnali anti-apoptotici presenti nella LLC-B. I meccanismi molecolari di resistenza all’apoptosi qui identificati possono costituire dei potenziali bersagli per lo sviluppo di nuove terapie ad uso clinico.

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N'GUYEN, JEAN-MICHEL. "Systeme nerveux autonome et memoire de la cellule b-pancreatique au glucose chez le rat." Paris 7, 1994. http://www.theses.fr/1994PA077342.

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Abstract:

Le fait que l'effet potentialisateur de l'hyperglycemie prolongee sur la secretion d'insuline s'observe in vivo mais pas in vitro suggere l'implication de facteurs extrapancreatiques dans la memoire de la cellule b au glucose in vivo. Nous avons etudie le role possible du systeme nerveux autonome. Chez les rats rendus prealablement hyperglycemiques par une perfusion (48h) du glucose, nous avons montre: 1) l'implication d'une augmentation du tonus parasympathique et d'une diminution du tonus sympathique d'une part par enregistrement de l'activite electrique spontanee et d'autre part par des tests de secretion d'insuline apres vagotomie ou en presence d'un agoniste adrenergique, l'oxymetazoline. 2) ces alterations d'activite du systeme nerveux autonome sont dues a des changements au niveau du systeme nerveux central et a des modifications de la sensibilite de la cellule b aux neuromediateurs du systeme nerveux autonome. 3) une augmentation du debit sanguin insulaire qui est liee en grande partie a l'hyperactivite du systeme parasympathique alors que la diminution du tonus sympathique ne semble pas jouer de role important. L'ensemble de ce travail fournit de nombreux arguments en faveur d'une participation du systeme nerveux autonome au phenomene de memoire au glucose de la cellule b in vivo et suggere l'existence d'une boucle de regulation peut etre en circuit ferme liant la glycemie, l'activite du systeme nerveux autonome et la secretion d'insuline

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Bulj, Zrinka <1983&gt. "Studio del ruolo della Protein chinasi B/Akt nella migrazione di Cellule Staminali Mesenchimali umane." Doctoral thesis, Alma Mater Studiorum - Università di Bologna, 2013. http://amsdottorato.unibo.it/5154/1/Bulj_Zrinka_tesi.pdf.

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Abstract:

Le cellule staminali/stromali mesenchimali umane (hMSC) sono attualmente applicate in diversi studi clinici e la loro efficacia è spesso legata alla loro capacità di raggiungere il sito d’interesse. Poco si sa sul loro comportamento migratorio e i meccanismi che ne sono alla base. Perciò, questo studio è stato progettato per comprendere il comportamento migratorio delle hMSC e il coinvolgimento di Akt, nota anche come proteina chinasi B. L’espressione e la fosforilazione della proteinchinasi Akt è stata studiata mediante Western blotting. Oltre al time-lapse in vivo imaging, il movimento cellulare è stato monitorato sia mediante saggi tridimensionali, con l’uso di transwell, che mediante saggi bidimensionali, attraverso la tecnica del wound healing. Le prove effettuate hanno rivelato che le hMSC hanno una buona capacità migratoria. E’ stato osservato che la proteinchinasi B/Akt ha elevati livelli basali di fosforilazione in queste cellule. Inoltre, la caratterizzazione delle principali proteine di regolazione ed effettrici, a monte e a valle di Akt, ha permesso di concludere che la cascata di reazioni della via di segnale anche nelle hMSC segue un andamento canonico. Specifici inibitori farmacologici sono stati utilizzati per determinare il potenziale meccanismo coinvolto nella migrazione cellulare e nell'invasione. L’inibizione della via PI3K/Akt determina una significativa riduzione della migrazione. L’utilizzo di inibitori farmacologici specifici per le singole isoforme di Akt ha permesso di discriminare il ruolo diverso di Akt1 e Akt2 nella migrazione delle hMSC. E’ stato infatti dimostrato che l'inattivazione di Akt2, ma non quella di Akt1, diminuisce significativamente la migrazione cellulare. Nel complesso i risultati ottenuti indicano che l'attivazione di Akt2 svolge un ruolo critico nella migrazione della hMSC; ulteriori studi sono necessari per approfondire la comprensione del fenomeno. La dimostrazione che l’isoforma Akt2 è necessaria per la chemiotassi diretta delle hMSC, rende questa chinasi un potenziale bersaglio farmacologico per modulare la loro migrazione.
Human Mesenchymal Stromal Cells (hMSC) are currently tested in several clinical trials. In spite of hMSC efficacy is frequently linked to their ability to reach the affected site, little is known on their migratory behavior and the underlying mechanism. This study was designed to investigate the migratory behavior of hMSC and to test the involvement of Akt, also known as protein kinase B. Akt protein expression and phosphorylation was investigated in hMSC western blotting analysis. Cell migration was assessed by transwell, wound healing and time lapse in vivo motility assays. MSC results fairly migratory and Akt was strongly activated at basal level. Furthermore, the characterization of the major regulatory proteins and effectors, upstream and downstream of Akt, has led to the conclusion that the cascade of reactions of this signaling pathway in hMSC follows a canonical pathway. Pharmacological inhibitors were used to determine the potential mechanism responsible for cell migration and invasion. Blocking PI3K/Akt pathway resulted in decreased hMSC migration. The use of pharmacological inhibitors specific for individual Akt isoforms allowed us to discriminate the different role of Akt1 and Akt2 in the migration of the hMSC. Through our analysis, we demonstrated that pharmacological inactivation of Akt2, but not that of Akt1, significantly decreased cell migration and invasion. Although these results are not fully comprehensive for the understanding of the phenomenon, in the complex indicate that the activation of Akt2 plays a critical role in allowing the migration of the hMSC. The demonstration that the Akt2 isoform is required for the chemotaxis of direct hMSC, makes this kinase a potential pharmacological target to modulate the migration of such cells.

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Bulj, Zrinka <1983&gt. "Studio del ruolo della Protein chinasi B/Akt nella migrazione di Cellule Staminali Mesenchimali umane." Doctoral thesis, Alma Mater Studiorum - Università di Bologna, 2013. http://amsdottorato.unibo.it/5154/.

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Abstract:

Le cellule staminali/stromali mesenchimali umane (hMSC) sono attualmente applicate in diversi studi clinici e la loro efficacia è spesso legata alla loro capacità di raggiungere il sito d’interesse. Poco si sa sul loro comportamento migratorio e i meccanismi che ne sono alla base. Perciò, questo studio è stato progettato per comprendere il comportamento migratorio delle hMSC e il coinvolgimento di Akt, nota anche come proteina chinasi B. L’espressione e la fosforilazione della proteinchinasi Akt è stata studiata mediante Western blotting. Oltre al time-lapse in vivo imaging, il movimento cellulare è stato monitorato sia mediante saggi tridimensionali, con l’uso di transwell, che mediante saggi bidimensionali, attraverso la tecnica del wound healing. Le prove effettuate hanno rivelato che le hMSC hanno una buona capacità migratoria. E’ stato osservato che la proteinchinasi B/Akt ha elevati livelli basali di fosforilazione in queste cellule. Inoltre, la caratterizzazione delle principali proteine di regolazione ed effettrici, a monte e a valle di Akt, ha permesso di concludere che la cascata di reazioni della via di segnale anche nelle hMSC segue un andamento canonico. Specifici inibitori farmacologici sono stati utilizzati per determinare il potenziale meccanismo coinvolto nella migrazione cellulare e nell'invasione. L’inibizione della via PI3K/Akt determina una significativa riduzione della migrazione. L’utilizzo di inibitori farmacologici specifici per le singole isoforme di Akt ha permesso di discriminare il ruolo diverso di Akt1 e Akt2 nella migrazione delle hMSC. E’ stato infatti dimostrato che l'inattivazione di Akt2, ma non quella di Akt1, diminuisce significativamente la migrazione cellulare. Nel complesso i risultati ottenuti indicano che l'attivazione di Akt2 svolge un ruolo critico nella migrazione della hMSC; ulteriori studi sono necessari per approfondire la comprensione del fenomeno. La dimostrazione che l’isoforma Akt2 è necessaria per la chemiotassi diretta delle hMSC, rende questa chinasi un potenziale bersaglio farmacologico per modulare la loro migrazione.
Human Mesenchymal Stromal Cells (hMSC) are currently tested in several clinical trials. In spite of hMSC efficacy is frequently linked to their ability to reach the affected site, little is known on their migratory behavior and the underlying mechanism. This study was designed to investigate the migratory behavior of hMSC and to test the involvement of Akt, also known as protein kinase B. Akt protein expression and phosphorylation was investigated in hMSC western blotting analysis. Cell migration was assessed by transwell, wound healing and time lapse in vivo motility assays. MSC results fairly migratory and Akt was strongly activated at basal level. Furthermore, the characterization of the major regulatory proteins and effectors, upstream and downstream of Akt, has led to the conclusion that the cascade of reactions of this signaling pathway in hMSC follows a canonical pathway. Pharmacological inhibitors were used to determine the potential mechanism responsible for cell migration and invasion. Blocking PI3K/Akt pathway resulted in decreased hMSC migration. The use of pharmacological inhibitors specific for individual Akt isoforms allowed us to discriminate the different role of Akt1 and Akt2 in the migration of the hMSC. Through our analysis, we demonstrated that pharmacological inactivation of Akt2, but not that of Akt1, significantly decreased cell migration and invasion. Although these results are not fully comprehensive for the understanding of the phenomenon, in the complex indicate that the activation of Akt2 plays a critical role in allowing the migration of the hMSC. The demonstration that the Akt2 isoform is required for the chemotaxis of direct hMSC, makes this kinase a potential pharmacological target to modulate the migration of such cells.

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Amin, Ali Rada. "BCR de classe IgA : signalisation de la cellule B normale et dans un contexte de lymphoprolifération." Limoges, 2009. http://www.theses.fr/2009LIMO4069.

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Abstract:

Afin de positionner des QTL de fertilité mâle, nous avons utilisé un ensemble de lignées interspécifiques, recombinantes et congéniques (IRCS). Nous avons positionné 8 QTL influençant les paramètres : poids testiculaire, et prostatique, morphologie et vitalité des spermatozoïdes. Nous avons ciblé notre étude sur une lignée IRCS portant un QTL impliqué dans une réduction du poids testiculaire, et une tératozoospermie sur le chromosome 11. L'analyse en cartographie fine nous a permis de proposer une région candidate de 4 gènes significativement exprimés dans le testicule. Par ailleurs, nous avons conduit une analyse du transcriptome testiculaire de trois lignées IRCS et des lignées parentales qui a montré comment des gènes spretus étaient régulés lorsqu'ils étaient introgressés dans un génome musculus. Cette étude nous a permis d'amorcer une réflexion sur la tolérance d'un génome vis-à-vis des flux de gènes entre espèces voisines dans la constitution d'un génome mosaïque
In order to map new QTL regulating male fertility parameter, we analysed a set of Interspecific Recombinant Congenic strain. We mapped 8 QTL implicated in testis, development, prostate growth, sperm vitality and morphology. We performed fine mapping analysis of a QTL of reduced testis weight associated with teratozoospermia, localised on MMU11. We proposed a candidate locus encompassing four testis expressed gene. Moreover, in order to understand gene expression regulation in interspecific mosaic genome, we analysed testis transcriptome of three IRC strains compared with parental strains testis transcriptome. In this study, we describe how spretus genes are regulated when introgressed in musculus background. This study gives some insight concerning gene flow tolerance across the specie barrier during emergence of mosaic genome

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Gerossier, Laetitia. "L’influence de HBx sur la réplication du virus de l’Hépatite B et les conséquences sur la cellule." Thesis, Lyon, 2017. http://www.theses.fr/2017LYSE1196/document.

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Abstract:

L’infection par le virus de l’hépatite B (HBV) est problème majeur de santé publique mondial car, en dépit d’un vaccin efficace, les traitements curatifs actuels ne permettent pas l’élimination complète du virus. Comprendre les mécanismes de réplication du virus et son rôle dans la survenue du cancer hépatocellulaire (CHC) reste un enjeu majeur.Le rôle de la protéine HBx dans l’infection par HBV et l’oncogenèse viro-induite, reste mal connu, malgré un grand nombre de publications, car les fonctions décrites jusqu'alors sont limitées à des contextes d’études particuliers, souvent loin des conditions physiologiques.Mes travaux de thèse reposent sur l’utilisation de modèles d’études proches de la physiologie naturelle d’une infection par HBV, notamment des cellules primaires infectables in vitro. J’ai pu démontrer lors de mon étude que HBx est indispensable à la réplication de HBV, et qu’il agit essentiellement via son interaction avec DDB1 pour contrer la restriction du virus due au complexe SMC5/6, en induisant sa dégradation. Ce facteur de restriction permet de bloquer la transcription de l’ADN viral au niveau épigénétique. Ce nouveau rôle inattendu de SMC5/6 ouvre de nombreux axes de recherche, notamment sur les mécanismes de restriction des virus à ADN épisomal. SMC5/6 est connu pour son implication dans les voies de réparation de l’ADN : la dernière partie de ce manuscrit montre que sa dégradation dans les cellules infectées, altère ces mécanismes et sensibilise les cellules aux dommages à l’ADN, induits notamment par la radiothérapie. La présence de HBx dans les CHC pourrait ainsi s’avérer un atout pour le traitement du CHC
Hepatitis B virus (HBV) infection is a major health problem worldwide as (1) despite an effective preventive vaccine over 240 million individuals are chronically infected and (2) the actual viral suppressive treatments available do not eliminate viral DNA from cells. Thus, infected individuals are at a high risk of developing hepatocellular carcinoma (HCC) and understanding viral replication mechanisms and how it impacts on hepatocarcinogenesis is a major challenge.The role of the HBx protein, notably in viral replication and oncogenic processes, is the subject of many publications. However, many studies have often used non-physiological infection conditions. My thesis project has addressed these limitations by using cellular models, including primary human hepatocytes which can be infected by HBV, to investigate HBx’s role in these processes. I have shown that HBx is indispensable for HBV replication and that HBx associates with the infected cell’s DDB1/ E3 ubiquitin complex to target its Smc5/6 complex for degradation via the proteasome. These studies have identified that the Smc5/6 complex is a novel viral restriction factor that acts at an epigenetic level to block viral replication. This unexpected role of SMC5/6 has led to new research into the evolutionary conservation of restriction factors for episomal DNA viruses. As SMC5/6 is implicated in DNA Damage Repair (DDR), the last section of my thesis reports how SMC5/6 degradation in infected cells can sensitise cells to the cell killing effects of DNA damaging agents such as ionizing radiation and hydroxyurea. These results open-up possibilities for HCC treatment where HBx expression may be of therapeutic benefit

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Venturi, Beatrice <1982&gt. "Trapianto di cellule staminali autologhe geneticamente modificate per il trattamento di patologie metaboliche del fegato: approccio di terapia genica ex vivo per la sindrome di Crigler Najjar tipo I." Doctoral thesis, Alma Mater Studiorum - Università di Bologna, 2010. http://amsdottorato.unibo.it/2524/1/VENTURI_BEATRICE_TESI.pdf.

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Venturi, Beatrice <1982&gt. "Trapianto di cellule staminali autologhe geneticamente modificate per il trattamento di patologie metaboliche del fegato: approccio di terapia genica ex vivo per la sindrome di Crigler Najjar tipo I." Doctoral thesis, Alma Mater Studiorum - Università di Bologna, 2010. http://amsdottorato.unibo.it/2524/.

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BADRICHANI, ANNE ZEINA. "Role des proteines anti-apoptotiques dans la cellule endotheliale (doctorat : immunologie)." Paris 5, 1998. http://www.theses.fr/1998PA05N150.

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Gascan, Hugues. "Caracterisation du facteur de croissance hilda : leukemia inhibitory factor produit par des cellules tumorales humaines." Nantes, 1988. http://www.theses.fr/1988NANT04VS.

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TORTORICI, Vincenza. "CARATTERIZZAZIONE FENOTIPICA E FUNZIONALE DELLE CELLULE B (CD19+), PLASMACELLULE (CD38+++) DOPPIO NEGATIVE (IgD-CD27-) SU SANGUE MIDOLLARE NEI PAZIENTI CON MGUS E MM." Doctoral thesis, Università degli Studi di Palermo, 2014. http://hdl.handle.net/10447/90912.

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Nasillo, Vincenzo. "Caratterizzazione degli specifici effetti off-target degli inibitori della Bruton tirosin-chinasi sull'immunità innata antifungina in pazienti con patologie linfoproliferative B: implicazioni diagnostiche e terapeutiche." Doctoral thesis, Università degli studi di Modena e Reggio Emilia, 2021. http://hdl.handle.net/11380/1256057.

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Abstract:

Le infezioni fungine invasive rappresentano un'importante causa di morbilità e mortalità nei pazienti affetti da malattie linfoproliferative. Negli ultimi anni, l'introduzione di nuovi farmaci, in particolare gli inibitori della Bruton tirosin-chinasi (BTK), ha permesso di migliorare drasticamente la prognosi dei pazienti affetti da leucemia linfatica cronica (LLC) e da altri disordini clonali delle cellule B. Sebbene queste molecole fossero inizialmente considerate meno immunosoppressive rispetto alla classica chemio-immunoterapia, un numero crescente di segnalazioni hanno descritto l'insorgenza di infezioni fungine opportunistiche inattese, in particolare l'Aspergillosi invasiva, nei primi 6 mesi di trattamento. La BTK rappresenta una molecola cruciale nella trasmissione della cascata del segnale da diversi recettori, come i pathogen-associated molecular patterns (PAMP), cioè β-glucani, chitina e mannani, CD11b/CD18, triggering receptor expressed on myeloid cells 1 (TREM-1) e Toll-like receptors (TLR), che permettono il riconoscimento dei funghi da parte del braccio innato dell'immunità. Tuttavia, i meccanismi immunopatogenetici alla base dello sviluppo di infezioni fungine invasive in pazienti trattati con inibitori della BTK non sono stati ancora completamente delucidati. Il nostro studio, basato su diversi saggi funzionali immunologici in vitro, mira a caratterizzare gli effetti specifici degli inibitori della BTK sulla risposta immunitaria innata contro i funghi mediata da neutrofili, monociti, macrofagi e piastrine, ottenuti da pazienti con linfomi a cellule B. L'inibizione farmacologica della BTK si è associata a una ridotta trasmissione delle vie di segnale attivate da Aspergillus fumigatus, determinante un difetto significativo nella secrezione di citochine infiammatorie nei neutrofili, nei macrofagi e nei monociti, isolati da pazienti e donatori sani. Nei neutrofili, l'inibizione della BTK ha ridotto in modo significativo l'attività fagocitaria (decremento medio del 51,6% e del 37,6% con due diversi farmaci inibitori della BTK). Allo stesso modo, si è riscontrata una notevole riduzione della funzione fagocitaria dei macrofagi associati alla LLC (dette nurse-like cells, NLC), così come dei monociti circolanti CD14+ (sia nei pazienti affetti da LLC che nei volontari sani). Concordemente, la secrezione di TNF-α da parte delle NLC, valutata con il saggio di secrezione citochinica (cytokine secretion assay, CSA), è stata fortemente indotta dalla stimolazione con i conidi di Aspergillus fumigatus, mentre è risultata notevolmente soppressa da due diversi inibitori della BTK. Inoltre, per la prima volta, abbiamo dimostrato che l'esposizione agli inibitori della BTK compromette diverse funzioni immunitarie delle piastrine, quali l'attivazione (come indicato dai bassi livelli di espressione della P-selectina), l'attività di uccisione diretta e la capacità di aderire ai conidi. Il test di danno ifale (hyphal damage test), eseguito su neutrofili, monociti, macrofagi e piastrine in presenza di inibizione farmacologica della BTK, ha documentato una notevole riduzione dell'attività litica antimicotica in tutti i suddetti tipi di cellule, sia nei pazienti che nei volontari sani. Nel complesso, questi effetti concorrono all’inefficacia nel contrastare completamente la germinazione dei conidi. I nostri risultati hanno rivelato specifiche modifiche nella risposta innata indotte dall'inibizione della BTK in pazienti con neoplasie delle cellule B, dimostrando il ruolo di questa chinasi come "guardiano" dell'immunità innata.
Invasive fungal diseases (IFDs) represent an important cause of morbidity and mortality in patients affected by lymphoproliferative diseases. In the recent years, the introduction of new drugs, in particular those targeting Bruton tyrosine kinase (BTK), has allowed dramatic improvement in the prognosis of patients with chronic lymphocytic leukemia (CLL) and other B-cell clonal disorders. Although these small molecules were initially considered less immunosuppressive than chemo-immunotherapy, an increasing number of reports have described the occurrence of unexpected opportunistic fungal infections, in particular invasive aspergillosis, in the first 6 months of treatment. BTK represents a crucial molecule in the transmission of signaling cascade from several immune receptors, such as pathogen-associated molecular patterns (PAMPs, i.e. β-glucans, chitin and mannans), CD11b/CD18, triggering receptor expressed on myeloid cells 1 (TREM-1) and Toll-like receptors (TLRs), that allow the recognition of fungi by the innate arm of the immunity. However, the immunopathogenetic mechanisms underlying the development of IFDs in patients treated with BTK inhibitors are not fully elucidated, and multiple pathways might be involved. Our in vitro study, based on different immunological functional assays, aimed at characterize the specific off-target effects of BTK inhibitors on anti-mold innate immune response mediated by neutrophils, monocytes, macrophages, as well as platelets, obtained from patients with B-cell neoplasms. Pharmacological inhibition of BTK reduced signaling pathways activated by Aspergillus fumigatus, determining an exacerbation of an immunosuppressive signature and a significant defect in the secretion of inflammatory cytokines, either in neutrophils, macrophages and monocytes isolated from patients and healthy donors. In neutrophils, the inhibition of BTK significantly hampered the phagocytic activity (mean reduction of 51,6% and 37,6%, with two different BTK-inhibitors). Similarly, we found a remarkable reduction in the phagocytic function of CLL-associated macrophages (nurse-like cells, NLC), as well as of CD14+ circulating monocytes (either in CLL patients and healthy volunteers). Concordantly, secretion of TNF-α by NLC, assessed by cytokine secretion assay (CSA), was strongly induced by pulsing the cells with Aspergillus fumigatus conidia and was markedly reduced by two different drugs targeting BTK. Furthermore, we demonstrated, for the first time, that the exposure to BTK-inhibitors impairs several immune functions of platelets, i.e. activation (as indicated by the low levels of P-selectin expression), direct killing activity and ability to adhere to conidia. Hyphal damage test, performed on neutrophils, monocytes, macrophages and platelets in the presence of pharmacological BTK-inhibition, documented a striking reduction of the anti-hyphal lytic activity in all aforementioned cell types, either in patients and healthy volunteers. Overall, these effects concur to a failure in completely counteracting conidia germination. Our results revealed specific modifications in the innate response in patients with B-cell neoplasms induced by the inhibition of the BTK pathway, underlying the importance of this targetable kinase as a “guardian” of the innate immunity.

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Maillard, Patrick. "Sensibilite et permissivite des cellules lymphoides humaines vis-a-vis du virus de l'hepatite b : approches experimentales." Paris 11, 1997. http://www.theses.fr/1997PA114807.

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Tang, Jianqing. "Réarrangements alternatifs des gènes d'immunoglobulines codant pour les chaines légère kappa et lambda dans les cellules b humaines." Nancy 1, 1991. http://www.theses.fr/1991NAN10140.

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Abstract:

Trois types de gènes codent pour les chaines lourdes(IGH) et les chaines légères kappa(IGK) et lambda(IGL) des immunoglobulines. Le réarrangement de ces gènes est obligatoire pour qu'ils puissent s'exprimer. La chronologie de ce réarrangement au cours de la différenciation des lymphocytes b implique d'abord les gènes IGH, et ensuite, selon la littérature, une séquence d'essais successifs dans l'ordre IGK-IGK-IGL-IGL. A la suite de l'observation d'une inversion de la ration des chaines kappa: lambda dans les lymphocytes associes aux tissus muqueux et dans les liquides sécrétoires chez l'homme, nous avons entrepris d'analyser le réarrangement des gènes des chaines légères humaines dans les leucémies, les lymphocytes b amygdaliens et les lymphocytes b du sang périphérique. Les résultats obtenus, présentés dans ce mémoire, nous conduisent à proposer un modèle alternatif pour la chronologie de réarrangement des gènes codant pour les chaines légères, selon lequel le réarrangement de ces gènes peut commencer soit par IGK soit par IGL. Le deuxième gène qui réarrangerait serait également au choix IGK ou IGL. Cette hypothèse diffère des modèles traditionnels en ce qu'une cellule b peut réarranger ce gène IGL sans avoir nécessairement réarrangé les deux allèles IGK. Nos résultats indiquent enfin que la prédominance de cellules produisant des chaines légères lambda dans le malt peut résulter de l'utilisation préférentielle de ce réarrangement alternatif

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PIEVANI, ALICE SILVIA. "Cytokine-induced killer (cik) cell cultures for the adoptive immunotherapy of hematological malignancies: characterization and new therapeutic strategies for clinical application." Doctoral thesis, Università degli Studi di Milano-Bicocca, 2011. http://hdl.handle.net/10281/20178.

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Abstract:

Cytokine-induced killer (CIK) cells are a heterogeneous population of lymphocytes obtained in vitro within 21 days from mononuclear cells under the influence of cytokines. CIK cells show potent MHC-unrestricted cytotoxicity against a variety of tumor cells, in particular hematological malignancies, and minimal tendency to induce graft-versus-host disease. The expanded bulk CIK culture consists of over 90% CD3+ cells, of which the majority coexpress CD56 and the remaining cells are CD56-. CD3+CD56+ “true” CIK cells are terminally differentiated non dividing lymphocytes which could deliver potent MHC-unrestricted cytotoxicity for the immediate destruction of tumor cells. The other less cytotoxic CD3+CD56- cell subset represents a progenitor reservoir that could proliferate and differentiate into CD3+CD56+ CIK cells. CD3+CD56+ CIK cells express activating NK receptors including NKG2D, DNAM-1 and low levels of NKp30. Cell signalling not only through TCR/CD3, but also through NKG2D, DNAM-1 and NKp30, leads to CIK cell activation resulting in granule exocytosis and cytotoxicity. Antibody blocking experiments revealed that NKG2D, DNAM-1 and NKp30 are actually involved in tumor cell recognition and killing. Anti-CMV specific CIK cells could be expanded in standard CIK conditions and mediate both specific, MHC-restricted recognition of a CMV-pulsed autologous target and NK-like non specific cytolytic activity against leukemic cell targets. Antibody blocking of NKG2D and NKp30 only inhibited NK-like cytotoxicity. Their dual effector function suggests that CIK cells, when used in a clinical setting, may control both neoplastic relapses and viral infections, two frequently associated complications in transplanted patients. B-cell non-Hodgkin lymphoma is only partially susceptible to CIK-mediated lysis. The addition of anti-CD20 monoclonal antibodies GA101 or rituximab increased cytotoxicity mediated by CIK cell cultures by 35% and 15%, respectively. This enhancement was mainly due to antibody-dependent cytotoxicity mediated by the 1%-10% NK cells contaminating CIK cultures. The addition of human serum inhibited NK-cell activation induced by rituximab, but not activation induced by GA101. Overall lysis in presence of serum, even of a resistant B-NHL cell line, was significantly increased by 100 mcg/mL of rituximab, but even more so by GA101, with respect to CIK cultures alone. The combined use of CIK cells with anti-CD20 mAbs could represent a novel immunotherapy protocol for the treatment of B lymphoma patients with resistant disease.

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Mouriec, Karen. "Régulation de l’aromatase B dans les cellules gliales radiaires dans le cerveau du poisson zèbre (Danio rerio) et rôles potentiels dans la neurogénèse adulte." Thesis, Tours, 2008. http://www.theses.fr/2008TOUR4023/document.

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Abstract:

Chez les mammifères, la neurogénèse adulte est limitée, au contraire, chez les poissons téléostéens, elle est intense et a lieu dans tout le cerveau. Chez les poissons, l’aromatase cérébrale (aroB), l’enzyme de synthèse de l’œstradiol (E2) est régulée par l’E2 dans les cellules gliales radiaires (CGR). Ces CGR dont le rôle est inconnu chez les poissons sont des cellules progénitrices chez les mammifères lors de l’embryogénèse. L’objectif de ce travail était d’étudier l’hypothèse d’un lien entre l’E2 et la forte activité neurogénique chez les poissons. Nous montrons que les CGR sont des cellules progénitrices chez le poisson zèbre adulte. Nous avons caractérisé une lignée de poisson zèbre transgénique aroB/GFP. Nous mettons en évidence que des androgènes peuvent réguler l’aroB, via les récepteurs aux œstrogènes (ERs). Enfin, nous montrons que les ARNm des ERs et de l’aroB apparaissent très tôt pendant le développement et que la signalisation œstrogénique se met en place entre 24h et 48h
Whilst adult neurogenesis is a limited process in mammals, it is, in contrast, intense in teleost fish and occurs in the whole brain. Fish exhibit specific features concerning the aromatase, the enzyme that synthesises estradiol (E2). Indeed, brain aromatase (aroB) is up-regulated by E2 in radial glial cells (RGC). These RGC are known progenitor cells in mammals, during embryonic neurogenesis. In contrast, their role is unknown in fish. The aim of this work was to study the potential link between E2 and the strong neurogenic activity of fish. We show that RGC are progenitor cells in the adult brain of zebrafish (Danio rerio). Moreover, we characterized and validated a transgenic zebrafish line aroB/GFP. We also found that aromatizable and non aromatizable androgens can induce aroB through estrogen receptors. We also show that the onset of the estrogen regulation of aroB appears between 24 and 48h

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Reversat, Anne. "Role of the Cdc42/PAR polarity complex in antigen processing and presentation by B lymphocytes." Paris 7, 2012. http://www.theses.fr/2012PA077149.

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Abstract:

L'activation des Lymphocytes B repose sur la reconnaissance spécifique de PAg par le BCR, présenté in vivo par d'autres APCs, et conduit à la formation d'une synapse immunologique qui permet Pinternalisation l'Ag et son apprêtement en peptides associés aux molécules du CMHII. Ces complexes CMHII-peptides sont ensuite présentés aux lymphocytes T auxiliaires CD4+. Cette étape permet l'activation et la différentiation des LB en cellules productrices d'anticorps de haute affinité. Cette thèse identifie Cdc42 et le complexe de polarité PAR comme étant des régulateurs essentiels de la polarisation du LB. C'est le premier travail qui démontre la réorientation du centre organisateur des microtubules (MTOC) et des lysosomes contenant le CMHII vers le site d'internalisation de l'Ag, et cette polarisation est essentielle pour la présenation de l'Ag aux lymphocytes T. La polarisation du MTOC vers le site d'interaction avec l'Ag dépend de la GTPase Cdc42, qui est activée sous l'engagement du BCR, et est essentielle à l'apprêtement et la présentation de l'antigène par les LB. Par ailleurs, nous montrons que de Cdc42 est essentielle à l'activation de la kinase aPKCÇ du complexe de polarité PAR en réponse à l'interaction BcR-Ag. L'inhibition de l'expression de Cdc42 ou de aPKCÇ induit un défaut de polarisation du MTOC et des lysosomes vers l'Ag qui conduit à une réduction de l'apprêtement de l'Ag. Enfin, cette thèse montre aussi que la sous-unité Par3 du complexe PAR se concentre à la synapse immunologique, où il agit de concert avec la dynéine pour permettre la polarisation du MTOC à a synapse qui est essentielle pour Pinternalisation de PAg et sa présentation aux lymphocytes T auxiliaires. Ces résultats indiquent que, dans les lymphocytes B, l'activation du BCR induit la réorganisation du cytosquelette de microtubules sous le contrôle de Cdc42 et PAR, et cette polarisation du MTOC est essentielle pour la convergence des vésicules du CMHII et de PAg qui permet l'apprêtement de la présentation de l'Ag
Activation of B lymphocytes is triggered by the specific binding of antigens (Ag), tethered in vivo at the surface of Ag-presenting cells, to the B Cell Receptor (BcR). Engagement of the BCR with Ag leads to the formation of an immunological synapse, which triggers B cell activation and promotes the acquisition of membrane-bound Ag for processing it into endo-lysosomes, loading onto MHCII molecules and presentation to CD4+ T cells. Interaction with T cells is required for B cell activation and differentiation into high-affinity antibody producing cells. In this thesis we have identified and highlighted the roles of Cdc42 and the PAR polarity complex as key regulators of B lymphocyte polarization. This work is the first demonstration that B lymphocytes polarize their machinery toward particulate antigens. Furthermore, polarization of the MT cytoskeleton and MHCII+ containing lysosomes at the immune synapse is fundamental for efficient Ag extraction, processing, and loading onto MHCII molecules and for presenting Ag to CD4+ T cells. This thesis shows that the Rho GTPase Cdc42 is activated upon BCR engagement and controls MTOC polarization toward the IS. Disruption of Cdc42 leads to impairments in both cytoskeleton and vesicle polarity and in Ag presentation. We further show that the PAR polarity complex is a key effector of Cdc42 in this process. First, the kinase aPKCÇ is activated under BCR engagement; it localizes on lysosomes and relies on Cdc42 activation. Second, aPKCÇ silencing results in the loss of MTOC and lysosome polarization. Finally, aPKCÇ silencing in B lymphocytes impairs Ag processing and Ag presentation to CD4+ T cells. The last results of my work show that Par3 concentrates at the immune synapse, which indicates a local polarity cue where the centrosome is efficiently docked. Par3 acts together with dynein to induce MTOC polarization at the immune synapse and is essential for efficient Ag internalization and presentation to CD4+ helper T cells. We conclude that upon B cell activation Cdc42 controls together with PAR the dynamic re-organization of the microtubule cytoskeleton, which is essential to direct the trafficking events required for Ag processing and presentation

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Petit, Pierre. "Récepteurs purinergiques de la cellule B insulino-sécrétrice : recherche des mécanismes de couplage entre l'activation des récepteurs et la réponse fonctionnelle." Montpellier 1, 1989. http://www.theses.fr/1989MON11077.

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Santamaria, Kathleen. "Etude de l’hétérogénéité des centrocytes humains à travers l’expression du CD23 : différenciation en plasmablastes et expression d’une signature minimale transcriptionnelle au niveau cellule-unique comportant DEC2." Thesis, Rennes 1, 2020. http://www.theses.fr/2020REN1B038.

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Abstract:

La différenciation terminale des lymphocytes B à travers le centre germinatif conduit à la production de cellules sécrétrices d’anticorps : les plasmocytes (PC) à longue durée de vie et de haute affinité pour l’antigène. Cette réaction implique la formation d’une microstructure anatomique qui comprend une zone sombre : lieu d’intenses proliférations des centroblastes et de maturation d’affinité de leur BCR, et une zone claire dans laquelle ont lieu les commutations de classes isotypiques du BCR et la sélection des centrocytes (CC). Ce processus est finement contrôlé par les lymphocytes T folliculaires auxiliaires (Tfh) notamment à travers la production de molécules comme l’IL-4, le CD40L et l’IL-21. Ce travail de thèse s'intéresse à l'expression du CD23 à la surface des CC lors de leur métamorphose en PC. J'ai d’abord montré que l'expression de ce récepteur de faible affinité aux IgE est régulée par les signaux Tfh : CD40L et IL-4. De plus j'ai mis en évidence que les CC humains exposés aux signaux Tfh mais négatifs pour le CD23 sont capables de se différencier en PC. Dans ce cadre, la signature transcriptionnelle de ces progéniteurs de PC a été étudiée à l'échelle de la cellule unique et a permis d’identifier un gène jusqu’alors jamais décrit dans les PC qui code pour le facteur de transcription DEC2 et dont la fonction reste à déterminer. J'ai par ailleurs étudié l'expression du CD23 dans le lymphome folliculaire et mis en évidence qu’il existe des différences entre les populations tumorales positives et négatives pour le CD23, suggérant que les cellules CD23neg ont un avantage de survie et une capacité de différenciation supérieure en culture que les cellules CD23pos
Terminal B cell differentiation through the germinal center leads to the production of antibody-secreting cells: plasma cells (PC) with a long lifespan and high affinity for the antigen. This reaction involves the formation of an anatomical microstructure that includes a dark zone: site of intense proliferation and affinity maturation of the BCR of the centroblasts, and a light zone in which the class switch recombination of the BCR and centrocyte (CC) selection take place. This differentiation is finely controlled by follicular helper T cells (Tfh) that produce molecules such as IL-4, CD40L and IL-21. This phD work focus on the CD23 expression on the surface of CC during their metamorphosis into PC. Firstly, I showed that the expression of the low affinity IgE receptor is regulated by Tfh derived IL-4 and CD40L. Moreover, I showed that CC exposed to Tfh signals and which do not express the CD23 were the ones that have the ability to differentiate into PC. In this context, I identified at the single cell level a transcriptional signature expressed specifically by these cells which contains a gene never described in PC, encoding the transcription factor DEC2 whose function remains to be determined. In addition, I studied CD23 expression in follicular lymphoma and showed the existence of differences between these two populations, suggesting a preferential survival and differentiation of CD23neg cells compared to CD23pos cells

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Antoine, Marie-Hélène. "Mécanisme d'action des activateurs des canaux potassiques: études sur la fibre musculaire lisse vasculaire et sur la cellule B des îlots pancréatiques." Doctoral thesis, Universite Libre de Bruxelles, 1993. http://hdl.handle.net/2013/ULB-DIPOT:oai:dipot.ulb.ac.be:2013/212750.

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Cavane', A. "CARATTERIZZAZIONE DELL'ATTIVITA' ANTITUMORALE DELL'INIBITORE DEGLI HDAC ITF2357 (GIVINOSTAT®) IN MODELLI PRECLINICI DI LINFOMA NON-HODGKIN A CELLULE B C-MYC POSITIVI." Doctoral thesis, Università degli Studi di Milano, 2014. http://hdl.handle.net/2434/232417.

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Abstract:

Il fattore trascrizionale c-Myc gioca un ruolo fondamentale nella patogenesi e nella progressione dei linfomi non-Hodgkin a cellule B (B-NHL) e la sua deregolazione è generalmente associata ad una cattiva prognosi. L’attivazione aberrante della proteina c-Myc può essere causata da anomalie cromosomiche, come traslocazioni o mutazioni, oppure da modifiche post-traduzionali che ne determinano l’iperespressione. Osservazioni recenti indicano che c-Myc è in grado non solo di attivare e reprimere rispettivamente molti oncogeni e oncosoppressori, ma anche di modificare il profilo di espressione di alcuni microRNA, stabilendo così un secondo livello di controllo sull’espressione genica ai fini del mantenimento del fenotipo neoplastico. Date le molteplici evidenze a sostegno della capacità di c-Myc di promuovere il suo programma trascrizionale interagendo con regolatori epigenetici, come gli enzimi istone-deacetilasi (HDAC), i farmaci che inibiscono gli HDAC potrebbero essere utilizzati in clinica revertendo il fenotipo neoplastico indotto dall’iperespressione di c-Myc. Pertanto, in questo progetto sono stati analizzati gli effetti antitumorali indotti da un farmaco pan-inibitore degli HDAC, ITF2357 (Givinostat ®), in modelli preclinici di NHL di tipo B che esprimono ad alti livelli la proteina c-Myc. I risultati ottenuti dimostrano che ITF2357 è in grado di ridurre significativamente la crescita in vitro di cellule di NHL a cellule B, provocando un arresto del ciclo cellulare in fase G1, accompagnato da un progressivo aumento di apoptosi cellulare. Questi effetti sono correlati alla down-modulazione dei livelli proteici di c-Myc e associati all’induzione di due microRNA che bloccano la sintesi proteica di c-Myc, Let-7a e miR-26a. Dal momento che l’aumento della trascrizione dei microRNA non risulta essere persistente nel tempo e non giustifica pienamente la repressione di c-Myc, sono stati analizzati i livelli di attivazione della traduzione cap-dipendente che regola la sintesi di molte oncoproteine, tra cui anche c-Myc. Il trattamento con ITF2357 inibisce le principali molecole coinvolte nella traduzione cap-dipendente (4E-BP-1, eIF-4E, eIF-4G) e i due maggiori regolatori (PIM e Akt) in funzione della sensibilità cellulare all’attività antitumorale dell’HDAC inibitore. Inoltre, il trattamento farmacologico con ITF2357 riduce in modo significativo la crescita in vivo di due modelli cellulari di linfoma di Burkitt, ed in combinazione con ciclofosfamide a dosi sub-ottimali genera in modo sinergico delle remissioni complete dalla malattia nella maggior parte degli animali, al pari o in alcuni casi maggiori rispetto al trattamento con ciclofosfamide a dosi ottimali. Complessivamente, i risultati ottenuti indicano che ITF2357 esercita una spiccata attività antitumorale in linfomi non-Hodgkin a cellule B c-Myc positivi, i quali sono generalmente associati ad una cattiva prognosi. La somministrazione di ITF2357, come singolo agente o in associazione alla chemioterapia convenzionale, potrebbe sia aumentare il tasso di risposte cliniche che ridurre le dosi di chemioterapici limitandone gli effetti collaterali.
Recruitment of histone deacetylases (HDACs) by transcription factor c-Myc to promoter regions of regulatory protein- and microRNA-coding genes is essential for its proto-oncogenic functions. Considering the widespread involvement of c-Myc in lymphomagenesis, we studied the antitumor effects of the new-generation pan-HDAC inhibitor ITF2357 (Givinostat®) in c- Myc-overexpressing human B-cell non-Hodgkin lymphoma (B-NHL) models. ITF2357 significantly delayed the in vitro growth of B-NHL cell lines by inducing G1 cell-cycle arrest, eventually followed by cell death. These events correlated with the extent of c-Myc protein down-regulation and were associated with the induction of the c-Myc targeting microRNAs let-7a and miR-26a. Since microRNA modulation was not as persistent as c-Myc repression, we investigated whether cap-dependent translation was also affected and found, in effect, that 4E-BP1, eIF4E, and eIF4G, as well as its major positive regulators, Akt and PIM kinases, were inhibited in function of the cell sensitivity to ITF2357 antitumor activity. In vivo, ITF2357 significantly hampered the growth of 2 human Burkitt’s lymphoma models and, in combination with low-dose cyclophosphamide, achieved complete remissions in most animals, equaling or even exceeding the activity of standard cyclophosphamide. Collectively, these findings provide the rationale for testing the clinical advantages of adding ITF2357 to conventional treatments for c-Myc overexpressing lymphomas.

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Fayette, Jérôme. "Effet des cellules dendritiques humaines générées in vitro sur la réponse immunitaire humorale." Lyon 1, 1998. http://www.theses.fr/1998LYO1T259.

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Mantelli, Barbara. "Valutazione delle risposte immunitarie umorali e cellulari di tipo B in soggetti vaccinati con Gardasil o Cervarix." Doctoral thesis, Università degli studi di Padova, 2014. http://hdl.handle.net/11577/3423584.

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Abstract:

The family of human papillomaviruses comprises over 120 different types that infect cutaneous and mucosal tissues, and among them high-risk genotypes (HPV16, 18, 31, 33, 45, 51, 58 and others) are strongly associated with different cancer in the genital tract in men and women. Low-risk genotypes (HPV6, 11, 40, 43 and others) are found in genital epithelial lesions but rarely detected in malignancies. Cervical cancer is the third most common cancer in women world-wide associated with persistent infection of sexually transmitted high-risk HPV genotypes. In particular, HPV16 and 18 cause more than 70% of invasive cervix cancer in women. Immunocompetent women are able to clear high-risk HPV genotypes infections in 12-18 months. This is accompanied or closely followed by seroconversion against the major coat protein L1. The antibody titres developed during natural infection are low and don’t protect against HPV reinfection, moreover, not all women seroconvert. Approximately 10% of women fail to clear HPV infection resulting in long-term persistent infection that leads to progressive disease. In 2006-2007 two prophylactic vaccines were licenced based on virus-like particles technology: a bivalent HPV16/18 L1 VLP vaccine (Cervarix, GSK) and a tetravalent HPV 6/11/16/18 L1 VLP vaccine (Gardasil, MSD). Both vaccines showed almost 100% efficacy against CIN 2/3 against vaccine-related HPV types in naïve women. The efficacy is considerably lower against HPV types not included in vaccine formulation, and also in women with evidence of previous or current infections of vaccine-related genotypes. Furthermore, both vaccines are safe, and induce high titres of type-specific neutralizing antibodies against both linear and conformational epitopes on capsid protein L1 (4 years follow up of phase III clinical trials) preventing both high risk HPV16 and 18 infection and lesion development in the cervix. In addition, the quadrivalent vaccine is protective against occurrence of external genital warts. Despite this success, several key issues are still open. In fact, reports from phase III studies suggest that the two HPV vaccines may induce different antigen-specific immune responses in terms of intensity and persistence. The generation of memory B-cells and their responses to recall antigens are crucial factors for the long-term efficacy of vaccine induced humoral protection and up to now standardized assays are not commercially available to measure HPV immunity. Moreover, the efficacy in pre- and early adolescents, the primary targets for vaccination, has not been demonstrated. Furthermore, at present, the majority of data available on the two HPV vaccines comes from studies performed by the manufacturers. In this contest, an independent study was designed by enrolling HPV vaccinated women in Veneto and Emilia Romagna Regions to a) set up standardized B-cell elispot assays to measure the frequency of memory B-cells specific to HPV6, 11, 16 and 18 VLPs; b) screen a cohort of HPV vaccinees stratified by age (12 years old vs 20-45 years old) and by time after the 3rd dose of vaccine (1-6 months vs 4 years); c) compare the immune responses of Cervarix and Gardasil HPV vaccines. This study demonstrates that Gardasil induces high and sustained number of memory B-cells against the HPV types included in the vaccine formulation. With regard to the frequency of memory B-cells the vaccine was not influenced by the age of vaccine administration and was similar among the age groups at 1-6 months and 4 years after vaccination. Furthermore, Gardasil induces high antigen-specific IgG titres in both age groups that decrease significantly 4 years after vaccination but remains still detectable. However, the IgG titres were significantly lower in the 20-45 years old group compared to the 12 years old group both both 1-6 months and 4 years after vaccination, and the percentage of vaccinees whom IgG levels were still detectable were significantly lower in the 20-45 years old group compared to the 12 years old group 4 years after the vaccination. Cervarix induces higher B-cell responses (both frequency of memory B-cells and antigen-specific IgG titres) compared to Gardasil in 12 years old vaccinees, tested 1-6 months after vaccination. Evalutation of immune responses in 12-years old Cervarix recipients 4 years after vaccination as well as in 20-45 years old (both 1-6 months and 4 years after vaccination) is in progress.
Il carcinoma della cervice uterina rappresenta la seconda causa di morte per tumore tra le giovani donne fra i 15 e i 44 anni, dopo il tumore al seno. Si stimano infatti a livello mondiale 530.000 nuovi casi di tumore cervicale all’anno e circa 275.000 decessi. Lo sviluppo del tumore alla cervice uterina è imputabile all’infezione persistente, sessualmente trasmessa, di alcuni genotipi ad alto rischio di Papillomavirus (HPV); in particolare più del 70% di tutti i tumori cervicali è correlato con la presenza di HPV16 e 18 mentre il rimanente 25% è legato all’infezione causata da altri genotipi di HPV come 31, 33, 45 e 58. Le donne immunocompetenti sono in grado di eliminare spontaneamente le infezioni dei genotipi ad alto rischio in 12-18 mesi. La seroconversione che deriva dall’infezione non avviene in tutte le donne e, laddove succede, i titoli degli anticorpi neutralizzanti sono molto bassi e non proteggono da successive reinfezioni. Inoltre, il 10% delle donne non è in grado di eliminare il virus e l’infezione persistente a livello della mucosa cervicale, è il punto di partenza di una serie di eventi molecolari che portano allo sviluppo di lesioni neoplastiche. Nel 2006-2007 sono stati approvati e commercializzati due vaccini profilattici anti-HPV costituiti dalle proteine L1 del capside virale, assemblate a formare degli pseudovirioni (VLP) tridimensionalmente identici alle particelle virali native ma non infettivi: Cervarix (GSK) contenente le VLP di HPV16 e 18 e Gardasil (Merck) contenente le VLP di HPV6, 11, 16 e 18, quindi protettivo anche nei confronti di infezioni genitali di tipo benigno come i condilomi. Gli studi clinici hanno dimostrato che entrambi i vaccini sono sicuri, capaci di indurre elevati livelli di anticorpi neutralizzanti contro la proteina L1 ed efficaci nel proteggere dall’infezione da parte dei genotipi di HPV presenti nel vaccino. Tuttavia, i vaccini sono in commercio solo da pochi anni e sono necessari ulteriori studi per correlare l’efficacia di protezione con l’entità delle risposte immunitarie indotte. Per studiare l’immunità a lungo termine, la determinazione dei titoli anticorpali (neutralizzanti e non) è uno strumento utile ma non sufficiente, ed è necessario quindi quantificare i linfociti B memoria antigene-specifici. Inoltre, sono ancora pochi i dati disponibili in letteratura sull’induzione delle risposte immunitarie in funzione dell’età di somministrazione del vaccino e soprattutto la maggior parte dei dati di efficacia e di risposte immunitarie indotte da Gardasil e Cervarix provengono dalle aziende che commercializzano i vaccini. In questo contesto, lo studio indipendente da noi eseguito aveva tre obiettivi: 1) sviluppare e standardizzare una metodica di B-cell Elispot per la quantificazione dei linfociti B memoria HPV genotipo-specifici; 2) quantificare i linfociti B memoria e i titoli anticorpali, specifici per ciascun antigene vaccinale, in una popolazione di adolescenti (12 anni) e di donne (20-45 anni) vaccinate con Gardasil o Cervarix, arruolate 1-6 mesi o 4 anni dopo la vaccinazione; 3) comparare l’immunogenicità dei due vaccini anti-HPV. In particolare, ad oggi sono state arruolate 283 volontarie di cui per il vaccino Gardasil n=121 per il gruppo 12 anni, n=112 per il gruppo 20-45 anni e per il vaccino Cervarix n=60 per il gruppo 12 anni. L’arruolamento dei soggetti vaccinati con Cervarix è ancora in corso e lo studio verrà completato nei prossimi 6 mesi. I risultati dello studio hanno dimostrato che le frequenze dei linfociti B memoria HPV genotipo-specifiche indotte dal Gardasil sono elevate 1-6 mesi dopo la vaccinazione in entrambe le coorti di età e, nonostante diminuiscano nel corso del tempo, dopo 4 anni continuano ad essere significativamente elevate indipendentemente dall’età di somministrazione del vaccino. Al contrario, i titoli anticorpali sono influenzati dall’età di somministrazione del vaccino. Infatti, i titoli anticorpali misurati nella coorte di adolescenti sono sempre significativamente superiori rispetto a quelli misurati nella corte delle donne, sia 1-6 mesi sia 4 anni dopo la vaccinazione. In aggiunta, la percentuale di individui i cui titoli anticorpali non sono più misurabili, dopo 4 anni dalla vaccinazione, è significativamente superiore nelle donne rispetto alle adolescenti. Relativamente alla comparazione delle risposte immunitarie indotte dai due vaccini anti-HPV, i risultati preliminari ottenuti in un gruppo di adolescenti vaccinate con Cervarix dimostrano che 1-6 mesi dopo la vaccinazione il Cervarix induce titoli anticorpali e frequenze di linfociti B memoria anti-HPV16 e 18 significativamente superiori rispetto ad adolescenti vaccinate con Gardasil. I risultati ottenuti potranno essere un utile ausilio per il Ministero della Salute per tracciare le linee guida di prevenzione primaria del tumore alla cervice uterina.

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Lacombe, Francis. "Sensibilité des cellules leucémiques à la 1-B-D-Arabinofuranosylcytosine (ARA-C) : étude par cytométrie en flux." Bordeaux 2, 1994. http://www.theses.fr/1994BOR28310.

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Zoulim, Fabien. "Signification de l'expression des proteines pre-s1 dans le serum et les cellules mononucleees du sang au cours des infections chroniques dues au virus de l'hepatite b." Lyon 1, 1990. http://www.theses.fr/1990LYO1M151.

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Lizundia, Regina. "Activation constitutive de JNK et AP-1 dans les lymphocytes parasités par Theileria : leur rôle dans la survie et la transformation cellulaire." Paris 6, 2006. http://www.theses.fr/2006PA066293.

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Sun, Cheng-Ming. "Etude du système immunitaire du nouveau-né murin : analyse de l'ontogenèse, des fonctions et de la régulation des cellules dendritiques au cours de la période néonatale." Paris 7, 2004. http://www.theses.fr/2004PA077229.

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Richard, Yolande. "Hétérogénéité des lymphocytes B humains : multiplicité des signaux de compétence et de progression." Paris 6, 1987. http://www.theses.fr/1987PA066601.

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Portier-Granboulan, Marie. "Analyse du rôle de la phosphoinositide 3-kinase dans la présentation antigénique et le transport endosomal du récepteur des lymphocytes B et de l'antigène." Paris 7, 2003. http://www.theses.fr/2003PA077099.

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Kamagate, Adama. "Caractérisation moléculaire de la Ca2+-ATPase de la membrane plasmique dans la cellule B pancréatique et étude de sa contribution à la sécrétion d'insuline." Doctoral thesis, Universite Libre de Bruxelles, 2003. http://hdl.handle.net/2013/ULB-DIPOT:oai:dipot.ulb.ac.be:2013/211331.

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Gall, David. "Aspects de la dynamique non linéaire d'un oscillateur cellulaire: étude expérimentale et théorique du rôle de l'échange sodium/calcium de la cellule B pancréatique." Doctoral thesis, Universite Libre de Bruxelles, 1999. http://hdl.handle.net/2013/ULB-DIPOT:oai:dipot.ulb.ac.be:2013/211921.

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Abstract:

Dans les conditions physiologiques normales, la glycémie est maintenue dans d'étroites limites. La sécrétion d'insuline par les cellules B pancréatiques joue un rôle majeur dans ce contrôle. En effet, l'insuline est la seule hormone capable d'empêcher une élévation excessive de la glycémie. La cellule B pancréatique constitue un exemple d'oscillateur cellulaire dont la dynamique non linéaire permet l'apparition d'une activité électrique "en salves" ("bursting"). Lors de la sécrétion, les cellules B présentent des oscillations du potentiel membranaire, alternances de phase actives, où la membrane est dépolarisée et durant laquelle des potentiels d'action sont produits, et de phases silencieuses, où le potentiel membranaire est stable et hyperpolarisé. La durée relative de la phase active est directement carrelée au taux de sécrétion d'insuline. Cette activité électrique est produite par une modification des flux ioniques transmembranaires. Il est maintenant établi que l'élévation de la concentration intracellulaire de Ca2+ ([Ca2+]i) qui se produit lors de la phase active est impliquée dans le déclenchement de l'exocytose. Néanmoins, les mécanismes impliqués dans la régulation de l'activité électrique restent mal compris.

Dans ce travail, nous examinons le rôle d'une protéine présente dans la membrane de la cellule B, l'échangeur Na+/Ca2+ ,dans la modulation des oscillations du potentiel membranaire et de la [Ca2+]i .Depuis sa découverte au niveau des cellules cardiaques et de l'axone de calmar, l'échange Na+/Ca2+ a été identifié dans de nombreux autres types cellulaires dont la cellule B pancréatique. Ce transporteur utilise le gradient électrochimique du Na+ comme source d'énergie pour l'expulsion des ions Ca2+ du cytosol. Dans les cellules cardiaques, il représente un mécanisme important d'expulsion du Ca 2+ intracellulaire. De plus, étant donné la stoechiométrie de la réaction de transport, son activité induit un courant (I Na/Ca) qui est impliqué dans la prolongation des potentiels d'action cardiaques. Au niveau de la cellule B pancréatique, le rôle de l'échange Na+/Ca2+ reste mal compris. L'absence d'inhibiteur spécifique de la protéine handicape sérieusement l'approche expérimentale.

Dès lors, nous avons utilisé une approche basée sur la modélisation mathématique afin de clarifier l'impact de l'activité de l'échange Na+/Ca2+ sur l'activité électrique et la régulation de [Ca2+]i de la cellule B pancréatique. La modélisation de l'activité électrique de la cellule B pancréatique repose sur le formalisme développé par Hodgkin et Huxley pour la cellule nerveuse. Dans ce contexte, l'application de la conservation de la charge au circuit équivalent de la membrane cellulaire fournit un système d'équations différentielles ordinaires, non linéaires.

Lors de la première partie de notre travail, nous avons mis au point un dispositif expérimental permettant de mesurer le courant électrique lié aux phénomènes de transport ioniques dans les membranes cellulaires. Nous avons pu détecter I Na/Ca et étudier son activation par la [Ca2+]i et le potentiel membranaire. Ces données expérimentales nous ont permis de proposer un modèle minimal pour I Na/Ca. D'autre part, afin d'évaluer expérimentalement l'effet de l'échange Na+/Ca2+ sur l'activité électrique de la cellule B pancréatique, nous avons étudié l'effet d'une réduction de la concentration extracellulaire de Na+ sur les oscillations du potentiel membranaire.

D'un point de vue théorique, à partir de notre modèle minimal pour I Na/Ca ,nous avons élaboré différents modèles mathématiques de l'activité électrique des cellules B. Ces modèles fournissent une prédiction correcte, qualitativement et quantitativement, de l'effet d'une réduction de la concentration extracellulaire de Na+ sur l'activité électrique périodique de la cellule B pancréatique. D'autre part, nos simulations numériques nous ont permis de démontrer la capacité de l'échange Na+/Ca2+ à moduler la durée relative de la phase active des oscillations du potentiel membranaire. De plus, nous avons pu mettre en évidence un mécanisme physiologique original liant la concentration extracellulaire de glucose et l'activité du transporteur. Enfin, nous nous sommes intéressés aux effets induits par la présence de l'échange Na+/Ca2+ sur l'activité électrique périodique et la régulation de [Ca 2+]i de cellules B couplées électriquement et hétérogènes en leurs paramètres. En effet, dans les conditions physiologiques, les cellules B constituent une population de cellules hétérogènes, électriquement couplées au sein des îlots pancréatiques. Il est établi que ce couplage joue un rôle essentiel dans l'apparition et la régulation de l'activité électrique périodique. Nous avons étudié différents modèles mathématiques correspondant à un réseau de cellules électriquement couplées. Nos simulations numériques nous ont permis de démontrer que l'échange Na+/Ca 2+ joue un rôle clef dans la régulation de la [Ca2+]i au sein d'un réseau de cellules B couplées électriquement. Il prévient, localement, l'apparition de niveaux de [ca2+]i trop élevés, potentiellement dangereux pour le métabolisme cellulaire, causés par l'hétérogénéité des paramètres cellulaires.

Doctorat en sciences, Spécialisation physique
info:eu-repo/semantics/nonPublished

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Bonoli, Laura. "Profiling the molecular mechanisms driving the fate of human B cells in response to vaccination." Doctoral thesis, Università degli studi di Padova, 2015. http://hdl.handle.net/11577/3424514.

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Abstract:

Antigen (Ag) encounter activates B cells to proliferate and mature through the formation of germinal centers. Here somatic hypermutation of the variable regions and Immunolgobulin (Ig) isotype switching lead the high affinity Ag-specific clones to two possible differentiation outcomes: antibody (Ab) secreting plasmablasts (PB) or quiescent memory B cells (MBC). The molecular mechanism that drives the fate of a human B cell to differentiate into PB or MBC is poorly understood. Recent studies have provided new insights into the transcriptional program responsible for B cell maturation in mice or human bulk populations. The limited availability of samples and the difficulties in isolating Ag-specific MBCs from peripheral blood make this analysis particularly challenging in humans. We collected samples from human donors that received the seasonal influenza vaccine; those were processed and sorted immediately after the bleed at two different time points: day 8 and day 22 post vaccination, namely the peaks of PBs and MBCs response respectively. The blood samples were used to collect PBs, Ag-specific MBCs and naive B cells (NAIVE) by flow cytometry sorting, exploiting classical surface markers strategies. A new protocol was set up to allow qPCR analysis of multiple genes from sorted single human B cells. This protocol was first used in a pilot study on cells sorted from a first vaccinee, to perform gene expression profiling of 21 relevant genes that allowed us to discriminate the three different B cell populations. Then we up-scaled and optimized the protocol taking advantage of the 96.96 Fluidigm Dynamic Array technology, which enables to perform RT-qPCR for 96 single cells against 96 target genes in one single reaction. This new high-throughput approach was then applied to 240 single cells belonging to Ag-specific MBCs, PBs and NAIVE B cells (80 each) of a second vaccinee, to perform gene expression profiling of 96 genes involved in several pathways of B cell differentiation. By performing unsupervised hierarchical clustering on all the cells, we observed that NAIVE, PBs and MBCs clustered separately and it was possible to identify signatures of gene expression characterizing the three populations. Linear Discriminant Analysis, a dimensionality-reduction analysis, shows that PBs are particularly different from MBCs and NAIVE, that instead share more similarities. By performing statistical analysis we identified the significant differentially expressed genes, which include genes involved in known B cell expression networks and, interestingly, also novel observations (FOXP1, POU2AF1, IRF2). We then compared the gene expression profile of Ag-specific MBCs with MBCs isolated from a healthy donor, to investigate possible differences in the expression patterns of recently activated MBCs and steady-state MBCs. With this analysis we identified 16 genes with a significant differential expression level, denoting a more active profile for the recently activated MBCs isolated from the vaccinee. To further investigate the heterogeneity of Ag-specific MBCs we also recovered immunoglobulin VH sequences from the same cells by sequencing the specific PCR products. Correlation studies showed only weak association between B cell receptor (BCR) maturation (in terms of VH mutation rate) and gene expression data. Conversely, significant association was found between the expression of two genes and the Ig isotype. In particular RORα is associated with IgA, while TBX21 with IgG, in accordance to previous studies performed on mouse bulk B cell populations. The genes identified with this study could be further investigated as they represent potential markers of B cell response to human vaccination.
Nell’ambito del processo di attivazione dovuto all’interazione con l’antigene (Ag), le cellule B proliferano e iniziano un processo di maturazione terminale attraverso la formazione dei centri germinativi (GC). All’interno dei GC, a seguito dell’ipermutazione somatica delle regioni variabili del recettore delle cellule B (BCR) ed il cambiamento di isotipo delle immunoglobuline, i cloni che hanno raggiunto alta affinità per l’Ag possono andare incontro a due possibili destini: differenziamento in plasmablasti (PB) che secernono anticorpi (Ab) o in cellule B della memoria quiescenti (MBC). Il meccanismo molecolare che determina il destino delle cellule B umane durante il differenziamento tardivo in PB o MBC è poco conosciuto. Studi recenti hanno rivelato nuovi aspetti del programma trascrizionale responsabile della maturazione di cellule B in topo o in popolazioni di cellule umane, ma la disponibilità limitata di campioni e la difficoltà nell'isolamento di MBC Ag-specifiche da sangue periferico hanno reso l’analisi di questi tipi cellulari particolarmente complicata. Per questo sono stati raccolti campioni di sangue da donatori sottoposti a vaccinazione stagionale contro l’influenza. Questi campioni sono stati processati immediatamente dopo il prelievo, effettuato in corrispondenza di due particolari momenti: 8 e 22 giorni dopo la vaccinazione, rispettivamente picchi della risposta mediata da PB e da MBC . I campioni di sangue periferico sono stati usati per l’isolamento di PB, NAIVE e MBC Ag-specifiche sfruttando marcatori di superficie. Per l’analisi del profilo di espressione genica è stato ottimizzato un metodo che permette di effettuare qPCR di numerosi geni in cellule B umane isolate come singola cellula. Tale approccio è stato usato inizialmente per uno studio pilota dell’espressione di 21 geni di interesse su cellule isolate da un primo soggetto, permettendoci di discriminare cellule appartenenti alle tre diverse popolazioni. Successivamente questo protocollo è stato ottimizzato sfruttando la tecnologia del 96.96 Dynamic Array prodotto da Fluidigm, sistema che permette di effettuare RT-qPCR su 96 singole cellule per 96 geni in una singola reazione. Con questo metodo ad alta resa abbiamo analizzato 240 singole cellule appartenenti alle popolazioni di MBC Ag-specifiche, PB e NAIVE (80 cellule ciascuna) di un secondo soggetto, permettendoci di analizzare il profilo di espressione di 96 geni coinvolti nelle vie di differenziamento delle cellule B. Attraverso un’analisi statistica di raggruppamento gerarchico dei dati di espressione appartenenti a tutti i campioni processati, abbiamo riunito sotto tre gruppi diversi per espressione genica le cellule appartenenti alle tre diverse popolazioni e abbiamo identificato i geni che le caratterizzano. La Linear Discriminant Analysis, una tecnica di riduzione dimensionale supervisionata, sottolinea come i PB siano particolarmente differenti da MBC Ag-specifiche e NAIVE, che invece condividono un profilo più simile. Sfruttando diversi metodi di analisi statistica, sono stati identificati i geni significativamente espressi in maniera diversa tra le tre popolazioni. Così facendo sono stati individuati sia geni il cui ruolo nella maturazione delle cellule B è noto, sia geni conosciuti principalmente per la loro funzione in altri processi o altre fasi dello sviluppo di queste cellule (FOXP1, POU2AF1, IRF2). Inoltre abbiamo confrontato i profili di espressione delle MBC Ag-specifiche con MBC isolate da un donatore sano non vaccinato, per identificare possibili differenze nei profili di espressione di MBC recentemente attivate e MBC circolanti, lontane dall'attivazione Ag-specifica. Tale analisi ha identificato 16 geni espressi differentemente in maniera significativa, evidenziando un profilo di espressione che denota uno stato di attivazione per le MBC recentemente contattate dall'Ag. Per studiare ulteriormente l’eterogeneità delle MBC Ag-specifiche, tramite PCR abbiamo amplificato e sequenziato le regioni variabili delle catene pesanti (VH) delle immunoglobuline espresse dalle stesse cellule, ma gli studi di correlazione mostrano solo deboli associazioni tra maturazione del BCR (in termini di tasso di mutazione delle VH) e dati di espressione genica. Al contrario, è stata individuata associazione significativa tra la selezione dell'isotipo del BCR e l’espressione di due geni, in particolare l’espressione di RORα è associata alla classe IgA, mentre TBX21 all’IgG, in accordo con studi precedenti effettuati in popolazioni di cellule B murine. In conclusione, i geni identificati da questo studio come discriminanti delle MBC recentemente attivate dall'Ag potrebbero essere ulteriormente studiati in qualità di potenziali marker della risposta B alla vaccinazione in uomo.

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Karray, Saoussen. "Heterogeneite fonctionnelle des lymphocytes b de leucemie lymphoide chronique de type b : interactions entre signaux non specifiques." Paris 7, 1988. http://www.theses.fr/1988PA077083.

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Dissertations / Theses on the topic 'Patologie a cellule B'

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