To see the other types of publications on this topic, follow the link: Inibitoria.
Dissertations / Theses on the topic 'Inibitoria'
Create a spot-on reference in APA, MLA, Chicago, Harvard, and other styles
Consult the top 50 dissertations / theses for your research on the topic 'Inibitoria.'
Next to every source in the list of references, there is an 'Add to bibliography' button. Press on it, and we will generate automatically the bibliographic reference to the chosen work in the citation style you need: APA, MLA, Harvard, Chicago, Vancouver, etc.
You can also download the full text of the academic publication as pdf and read online its abstract whenever available in the metadata.
Browse dissertations / theses on a wide variety of disciplines and organise your bibliography correctly.
1
CAPPELLETTI, MICHELA. "La qualificazione giuridica e l'ammissibilità in via generale della tutela inibitoria." Doctoral thesis, Università degli Studi di Milano-Bicocca, 2018. http://hdl.handle.net/10281/199155.
Full textAbstract:
Il presente lavoro di ricerca riguarda principalmente i presupposti e le funzioni della c.d. tutela inibitoria prevista dal legislatore, conosciuta anche come injunction negli ordinamenti di common law.
Occorre ricordare come nell’ordinamento italiano l’inibitoria individuale sia regolata da differenti norme del codice civile e della legislazione speciale, senza tuttavia trovare riscontro in una disciplina generale per i casi di violazioni continue e ripetute.
Per questo motivo la natura dell’istituto – con specifico riferimento alla qualificazione giuridica e alla sua ammissibilità in via generale – è stata a lungo discussa nella dottrina, che ha considerato il rimedio come un’azione di condanna, di accertamento, costitutiva, ovvero come un quartumgenus.
Tale situazione probabilmente muterà dal momento che nel giugno 2015 la Camera dei Deputati ha trasmesso al Senato il Disegno di Legge 1950 che da un lato sostituisce l’intero art. 140 del Codice del Consumo (relativo alla tutela inibitoria collettiva dei consumatori) e, dall’altro lato, trasferisce tale previsione all’interno del codice di procedura civile.
Tale normativa (che è ancora soggetta all’approvazione finale del Senato), non solo è volta a rafforzare la rilevanza del rimedio inibitorio, ma è destinata a fondare nuove interpretazioni di dottrina e giurisprudenza, sebbene il DDL sia limitato alla dimensione collettiva.
Alla luce di tali premesse ho tentato di analizzare le principali caratteristiche della tutela inibitoria, tenendo in considerazione sia la sua “direzione verso il futuro”, che il suo scopo preventivo, che la differenziano chiaramente dal dagli altri rimedi processuali. In tali casi, infatti, viene richiesto al giudice di ordinare l’interruzione e l’inibizione di qualsivoglia comportamento che sia pregiudizievole per l’attore.
A tal fine, si sono anzitutto analizzate le previsioni legislative che disciplinano i differenti tipi di inibitoria – tra gli altri, l’art. 844 c.c. (immissioni illegittime), art. 156 l.a. (tutela del copyright) –; in secondo luogo si è tentato di rintracciare le caratteristiche comuni delle fattispecie prese in considerazione, in modo da rendere in qualche modo configurabile una tutela inibitoria “generale” e atipica; infine, anche alla luce delle novità de iure condendo, si è tentato di affrontare il problema della qualificazione giuridica dell’istituto, considerando che lo stesso non è facilmente inquadrabile nelle categorie tradizionali.
Inoltre, larga parte del lavoro è dedicata alla comparazione tra l’inibitoria italiana e l’injunction statunitense, non solo per comprendere le principali caratteristiche e differenze, ma, soprattutto, al fine di auspicare lo stesso ampio utilizzo dell’istituto anche in Italia: la nota ammissibilità in via generale e atipica dell’injunction nei sistemi di common law, infatti, può essere considerata un indubbio segnale dell’assoluta importanza di questa forma di tutela per tutti i consociati.The subject matter of this work deals with both the requirements and functions of the s.c. “inhibitory” protection provided by our national legislator, also known as “injunction” within the Common law systems. It is important to recall that while the “inhibitory” protection has been somehow regulated by many different rules of the Civil code (and the special legislation as well), the Italian legal system has always been particularly reluctant in providing a general “inhibitorial” action against continuous and repetitive offenses. That is why the nature of the tool - with special reference to the juridical qualification and its general admissibility – has long been discussed among scholars, who treated the remedy as an action for declaration or an action for a relief, or even as a stand-alone legal instrument. The above mentioned situation is going to change, since in June 2015 the Italian House of Representatives passed a draft-law (d.d.l. n. 1950) which, among other things, on the one hand repeals the entire article nr. 140 of the s.c. Consumer Code (devoted to the collective “inhibitory” protection for consumers) and, on the other hand, set a new disposition, providing the same legal protection, within our Civil procedural code. Such provision (which is still subject to the final Senate confirmation), not only is expected to enhance the relevance of the “inhibitory” remedy, but it will likely soon establish a new set of legal interpretations within the case law as well as among academics, even though the draft is limited to the collective inhibitory protection only. Therefore I tried to face and investigate the main features of the “inhibitory” protection, taking into account both its “direction to the future” and its preventive goal, which clearly make the difference compared to the other jurisdictional means. In such cases, in fact, the judge is requested to order the interruption and the inhibition of any unlawful and detrimental behaviors against the claimant. To this purpose my first duty was to examine the legal provisions governing the different types of “inhibitory” protection – among others, article 844 c.c. (unlawful discharge), article 156 l.a. (copyright protection) –; secondly I tried to figure out the common features of all the mentioned tools, in a way which makes somehow reliable the idea of the “inhibitory” protection as an atypical legal action; finally, provided by such a new figure of jurisdictional protection, the (far from being theoretical) problem of a correct interpretation should be faced, considering that the new tool cannot easily be reported to the three traditional categories of actions for declaration or for relief. Moreover, an extensive part of my work is devoted to a comparison between the Italian “inhibitory” protection and the American injunction, not only to understand the main features and differences but, most of all, to suggest the same extensive use of such a tool into the Italian system: the well-known general admissibility (although atypical) of the injunction within the Common law systems, in fact, in my opinion can be considered as a reliable signal of the general importance of this kind of legal protection for all the citizens.
2
Delgado, Suárez Christian. "Efetividade processual e tutela preventiva dos direitos." reponame:Repositório Institucional da UFPR, 2013. http://hdl.handle.net/1884/29792.
Full textAbstract:
Resumo: A presente dissertação de mestrado versa sobre a tutela jurisdicional inibitória como remédio jurisdicional contra o ilícito civil visando ao cuidado e intangibilidade dos direitos fundamentais e materiais. Adota três perspectivas teóricas que servem de fio condutor para uma nova compreensão da tutela jurisdicional inibitória. O primeiro enquadramento, presente no capítulo II, é o constitucional manifestado no neoprocessualismo, patamar ao qual é chegado após a revisão crítica do antigo binômio Constituição-processo. Logo passa-se a identificar esta nova relação como aquela caracterizada pela aplicabilidade imediata dos direitos fundamentais processuais sobre o legislador e juiz. Esta primeira perspectiva caracteriza-se pela análise considerando o impacto hodierno do neoconstitucionalismo. O capítulo III contém a orientação dogmática ou doutrinária da tutela jurisdicional contra o ilícito e da fundamentação constitucional da tutela jurisdicional inibitória. Trata-se da problemática atual em torno desta espécie de tutela jurisdicional e das soluções dadas para a sua factibilidade dentro do processo. No capítulo IV, relativa à perspectiva metodológica da dissertação, discute-se a possibilidade de instrumentalizar a tutela jurisdicional preventiva no Peru, objetivando a introdução de uma regra executiva aberta (cláusula processual aberta) tal qual o art. 461 do CPC brasileiro de 1973 ou do art. 511 do projeto de novo CPC brasileiro tramitado no Congresso Nacional (PL n° 166/2010). Retratam-se as técnicas legislativas casuísticas e as cláusulas gerais. Finalmente, no Apêndice apresenta-se uma proposta legislativa que pode ser extraída de cada capítulo procurando, assim, a coerência do discurso traçado no início da pesquisa, qual seja, a contribuição não só doutrinária, mas também legislativa para aprimorar o serviço de justiça oferecido pelo Estado no que tange à tutela dos direitos.
3
Frascella, Pietrogiulio <1974>. "Sintesi di molecole a potenziale attività inibitoria per enzimi di tirosina chinasi." Doctoral thesis, Università Ca' Foscari Venezia, 2007. http://hdl.handle.net/10579/490.
Full text
4
Dal, Lago Eugenia <1992>. "La legittimità dell'azione inibitoria: tra diritto di proprietà intellettuale e tutela della concorrenza." Master's Degree Thesis, Università Ca' Foscari Venezia, 2017. http://hdl.handle.net/10579/10677.
Full text
5
Mardegan, Rita de Cassia. "Atividade inibitoria de extratos vegetais sobre Candida spp e sobre proteinases sintetizados por Candida albicans." [s.n.], 2007. http://repositorio.unicamp.br/jspui/handle/REPOSIP/289371.
Full textAbstract:
Orientadores : Jose Francisco Hofling, Mary Anny FoglioTese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba
Made available in DSpace on 2018-08-08T15:40:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Mardegan_RitadeCassia_D.pdf: 1623661 bytes, checksum: 6efd1058d06bb35d4bbde2640edda2e8 (MD5) Previous issue date: 2007
Resumo: O uso de extratos vegetais com fins medicinais é uma das mais antigas formas de prática medicinal da humanidade. Visto que nos últimos anos, a freqüência das infecções fúngicas sistêmicas, principalmente as oportunistas invasivas, têm crescido drasticamente o objetivo deste estudo foi: 1 - testar a atividade dos extratos (diclorometanico e metanólico) de Rosmarinus officinalis, Mentha piperita, Casearia sylvestris, Arctium lappa, Arrabidaea chica e Tabebuia avellanedae para determinar o potencial antifúngico em cepas padrão de Cândida spp (C. albicans, C. dubliniensis, C. parapsilosis, C. tropicalis e C. krusei) e em amostras clinicas de Candida albicans através da determinação da Concentração Inibitória Mínima (CIM) e; 2 - avaliar a capacidade desses extratos em inibirem a atividade das proteinases produzidas por C. albicans, um dos mais importantes fatores de virulência dessa espécie. Foram incluídos nos testes para analisar a inibição da atividade proteolítica os inibidores de protease (Amprenavir e Ritonavir) e a Pepstatina A. Nossos resultados demonstraram CIMs variadas em relação a sensibilidade de cada cepa. O extrato metanólico de Arrabidaea chica foi o mais efetivo na inibição do crescimente de várias espécies de Candida, inclusive em relação aos isolados clinicos de C. albicans, seguido dos extratos diclorometanicos de Arctium lappa e Mentha piperita. Nos testes de inibição das proteinases de Candida albicans os que se destacaram foram os extratos diclorometanico de Arrabidaea chica, Casearia sylvestris e Mentha piperita. Desta forma concluímos que o extrato metanólico de A. chica e os extratos diclorometanicos de A. lappa, M. piperita e C. sylvestris obtiveram relevante atividade antifúngica in vitro contra uma variedade de espécies de Candida sendo promissores como agente antifúngico.
Abstract: The use of plants as medicinal substances is one of the most old medicine practices of the humanity. In the last years, the frequency of systemic yeast infection, mainly the opportunistic, has been increased. The overall aims of the present study were: 1 - to test the extract activity (dichloromethane and methanolic) from Rosmarinus officinalis, Mentha piperita, Casearia sylvestris, Arctium lappa, Arrabidaea chica and Tabebuia avellanedae to determine the antifungal activity using strains of Candida spp (C. albicans, C. dubliniensis, C. parapsilosis, C. tropicalis e C. krusei) and in clinical isolates of C. albicans by determination of minimum inhibitory concentration (MIC) and 2 - evaluate the capacity of the extracts to inhibit the activity of proteinases produced by C. albicans, one of the most important virulence factor of these specie. It has been included as a control to evaluate the inhibition of proteolitic activity Amprenavir e Ritonavir and Pepstatina A. Our results showed a variety of MIC patterns according to the strain sensibility. The methanolic extract of Arrabidaea chica was the most effective in inhibiting the growth of a variety of Candida species, including the clinical isolates of C. albicans, followed by dichloromethane extract of Arctium lappa and Mentha piperita. In relation of the proteinases inhibitory tests from C. albicans the most effective extracts tested were dichloromethane of Arrabidaea chica, Casearia sylvestris and Mentha piperita. In conclusion the methanolic extract from A. chica and dichloromethane extracts from A. lappa, M. piperita e C. sylvestris have relevant antifungal activity against a range of Candida specie in vitro and are promising antifungal agents.
Doutorado
Microbiologia e Imunologia
Mestre em Biologia Buco-Dental
6
MARIANI, ROBERTA. "La legittimazione ad agire negli interessi collettivi." Doctoral thesis, Università degli Studi di Milano-Bicocca, 2011. http://hdl.handle.net/10281/20177.
Full textAbstract:
L’elaborato si propone il compito di esaminare il tema degli interessi collettivi, soffermandosi in particolare su un aspetto che si ritiene di importanza fondamentale e prioritaria rispetto ad altri, anche in un’ottica di effettività della tutela. Il riferimento è alla legittimazione ad agire per questi particolari interessi a dimensione c.d. sovraindividuale, interessi che, seppur abbiano avuto uno sviluppo più noto a partire dagli anni Settanta del secolo scorso, trovano invero le loro radici più profonde già alla fine dell’Ottocento. Lo studio viene pertanto condotto, in una prima parte, ripercorrendo la nascita e lo sviluppo degli interessi collettivi, illustrando le condizioni nelle quali si è avvertita l’esigenza di tutela di posizioni che facessero capo ad una pluralità di individui, il tutto prendendo a riferimento tre periodi storici diversi. Sulla base della medesima suddivisione storica, inoltre, ci si è soffermati sul tema principale della ricerca, e cioè sulla legittimazione ad agire nelle sue diverse forme –diffusa, in capo ai singoli individui della categoria, ovvero concentrata, in capo a dei c.d. enti esponenziali – e sul connesso e imprescindibile tema dell’efficacia soggettiva della sentenza resa all’esito di un “processo collettivo”, anche con riferimento ai rapporti tra questo e il giudizio individuale. Il punto, invero, è particolarmente magmatico e al riguardo si è cercato di dar conto delle soluzioni più disparate che sono state proposte in dottrina, argomentandone i pro e i contro. Da ultimo, analizzate le forme di tutela dei giudizi collettivi nei diversi ambiti di natura sostanziale, ci si è concentrati sul giudizio collettivo proprio (o inibitorio) con specifico riferimento all’ambito consumeristico.
7
Quadros, Cedenir Pereira de. "Estudo do potencial de aplicação industrial de uma mistura composta de lipase alcalina de Fusarium oxysporum e biossurfatante de Bacillus subtilis." [s.n.], 2009. http://repositorio.unicamp.br/jspui/handle/REPOSIP/256670.
Full textAbstract:
Orientador: Glaucia Maria PastoreTese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos
Made available in DSpace on 2018-08-13T13:08:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Quadros_CedenirPereirade_D.pdf: 2098145 bytes, checksum: bb56ba34ac3fa84f3dc7493e47485a6d (MD5) Previous issue date: 2009
Resumo: Na perspectiva de se tornar uma alternativa aos produtos já existentes para a indústria, foi proposto neste trabalho uma mistura inédita e original composta por uma lipase alcalina (LA) produzida por Fusarium oxysporum e biossurfatante (BS) produzido por Bacillus subtilis, a qual foi denominada de mistura LA/BS. O objetivo desta mistura foi remover materiais gordurosos de tecidos de algodão e de superfícies de aço inoxidável, assim como remover biofilmes de micro-organismos indesejáveis para a indústria de alimentos. Primeiramente, a mistura LA/BS foi submetida a uma caracterização e verificação da manutenção das propriedades individuais de cada composto quando submetida aos diferentes tratamentos físico-químicos. A lipase alcalina manteve sua atividade enzimática na presença de 0,0001 a 0,01% de biossurfatante. O tensoativo, na mistura LA/BS, manteve sua característica de reduzir a tensão superficial da água para valores em torno de 30 mN.m-1. Quando submetida a variações de temperatura (-4 a 30?C) por 24 h e de pH (6 a 10) por 48 h, a mistura LA/BS se mostrou bastante estável em suas propriedades, demonstrando um comportamento bastante semelhante ao encontrado na literatura. A concentração micelar crítica (CMC) do BS não foi alterada na presença da LA. A mistura não perdeu suas características frente a diversos sais inorgânicos (exceto pelo CuSO4 para LA e Fe3+ para o BS), agentes oxidantes, redutores, quelantes e preservantes de alimentos. Além disso, funcionou como um ótimo agente emulsificante na presença de diversos hidrocarbonetos e ?eos vegetais, apresentando um ?dice de emulsificação após 24 h (IE24) em torno de 60%. Subsequentemente, a lipase alcalina se apresentou mais estável frente a 0,1% de BS (98% de atividade residual) do que aos surfatantes sintéticos testados. Em seguida, avaliou-se a sua capacidade de remover azeite de oliva impregnado em tecidos de algodão em uma solução. Uma alíquota de 0,5 mg.ml-1 de LA foi capaz de remover 48% de gordura dos tecidos e 3 mg.ml-1 de BS cerca de 50%. A presença de 3 mg.ml-1 de BS no sistema contendo 0,5 mg.ml-1 de LA aumentou a remoção do azeite de oliva em 10%, demonstrando um efeito de sinergismo na mistura. Além disso, LA/BS teve um comportamento similar aos surfatantes alquil benzeno linear sulfonado (LAS) e o dodecil sulfato de sódio (SDS). Superfícies rígidas de aço inoxidável foram recobertas com diferentes tipos de gorduras como gordura suína, gordura de frango, manteiga e creme de leite como forma de simular situações vistas em frigoríficos e laticínios. A presença do BS e da mistura LA/BS, de uma forma geral, melhorou a remoção das gorduras presentes nas placas conforme aumenta a concentração dos compostos. A mistura LA/BS melhorou a remoção de gordura suína, de frango e de creme de leite em 30; 35,1 e 29%, respectivamente. A remo?o da manteiga foi a menos influenciada pelos detergentes. Como padrão de detergente foi utilizado o surfatante SDS na concentração de 1,5%. A atividade antimicrobiana da mistura LA/BS foi realizada por meio de ensaio quantitativo pela concentração inibitóia mínima (CIM). Entre todos os micro-organismos testados, somente Bacillus subtilis, Bacillus cereus e a Listeria innocua tiveram seus crescimentos afetados pela mistura. A bactéria B. cereus foi a mais sensível (CIM 0,013 mg.ml-1). Em adição, o efeito de sanitizantes contra L. innocua aderidas ao aço inoxidável foi determinado por contagem em placas. Este método demonstrou que a presença de biossurfatante ou da mistura melhorou a remoção das células aderidas em relação ao tratamento sem sanitizantes, reduzindo a contagem, em média, 0,97 log.cm-2. Entretanto, não houve diferença significativa entre os sanitizantes propostos e o detergente padrão SDS (p<0,05)
Abstract: Within the perspective of becoming an alternative to products already used in the industry, this study proposed an unprecedented and original mixture consisting of na alkaline lipase (AL) from Fusarium oxysporum and a biosurfactant (BS) from Bacillus subtilis, which will be called AL/BS mix. The aim of this mixture was to remove fatty residues from cotton fabrics and stainless steel surfaces, as well as to remove biofilms of undesirable microorganisms on rigid surface to food industry. Firstly, the AL/BS mix was submitted to a characterization to verify the preservation of each compound individual properties when submitted to different physical and chemical treatments. The AL kept its enzymatic activity in the presence of 0.0001 to 0.01% of biosurfactant. The tensoactive agent, in the AL/BS mix, kept its characteristic of reducing the superficial tension of aqueous solutions to values around 30 mN.m-1. When submitted to temperature (-4 to 30ºC for 24 h) and pH (6 to 10 for 48 h) variations, the AL/BS mix proved quite stable in its properties, showing a behavior very similar to the ones found in literature. The BS critical micelle concentration (CMC) did not change in AL presence. The mix did not lose its characteristics in the presence of several inorganic salts (except CuSO4 for AL and Fe3+ for BS), oxidizing, reducing, chelating and food preservative compounds. Apart from that, the AL/BS mix also proved an excellent emulsifying agent in the presence of several hydrocarbons and vegetable oils, showing emulsifying index around 60% after 24 h (EI24). Subsequently, the AL proved more stable in the presence of 0.1% BS (98% residual activity) than the tested synthetic surfactant, in the same concentrations. Next, the ability of the AL/BS mix to remove olive oil from cotton fabric in a solution was evaluated. The 0.5 mg.mL-1 AL managed to remove 48% of the oil from cotton fabrics and 3 mg.mL-1BS managed to remove approximately 50%. The presence of 3 mg.mL-1 BS in the system which contained 0.5 mg.mL-1 AL increased the olive oil removal by 10%, showing a synergy effect in the mixture. Apart from that, AL/BS mix had a similar performance to sodium linear alkyl benzene sulphonate (LAS) and sodium dodecyl sulphate (SDS) surfactants. Rigid stainless steel surfaces were covered with different types of fatty materials, such as pork fat, chicken fat, butter and whipped cream, to simulate situations existing in meat and dairy industries. The presence of BS and AL/BS mix, generally speaking, improved the fat removal from plates in pace with the increase of compounds concentration. The AL/BS mix improved the removal of pork and chicken fat, and whipped cream in 30, 35.1 and 29% respectively. Butter was the fat least influenced by detergents. Surfactant SDS concentration at 1.5% was used as detergent standard. This testing showed efficiency, sensitivity and it can be used to develop new formulations. The anti-microbial activity of AL/BS mix was carried out by minimum inhibitory concentration (MIC) quantitative assays. Among all tested microorganisms, only Bacillus subtilis, Bacillus cereus and Listeria innocua had their growth affected by the mixture. B. cereus bacteria was the most sensitive (MIC 0.013 mg.mL-1). Besides, the sanitizing effect against L. innocua that was attached to stainless steel was determined by plates counting. This assay proved that the presence of biosurfactant or the AL/BS mix improved the removal of adhered cells in relation to the treatment without sanitizers, reducing the count, in average, 0.97 log CFU.cm-2. However, there has not been a significant difference between the proposed sanitizers and the standard detergent SDS (p<0.05)
Doutorado
Doutor em Ciência de Alimentos
8
Brussolo, Stefania <1969>. "Inibitori di tirosina chinasi." Doctoral thesis, Università Ca' Foscari Venezia, 2007. http://hdl.handle.net/10579/253.
Full text
9
Ferrarese, Alessandro. "Progettazione, sintesi e studio di inibitori multichinasici." Doctoral thesis, Università degli studi di Padova, 2014. http://hdl.handle.net/11577/3425285.
Full textAbstract:
In the field of cancer therapy, a primary role is played by ATP-competitive protein kinase inhibitors. Indeed, several drugs belonging to this class have been approved for therapy or are in advanced clinical trials1.
In the last years, the scientific research has been oriented towards the identification of multi-kinase inhibitors with controlled selectivity profile2.
The basis of this approach leans on the identification of exhaustive and effective structure-activity relationships.
In this work the design and the synthesis of 4 classes of 4-anilinopyrimidine derivatives as potential protein kinase inhibitors is discussed. These molecules present features useful for the identification of a complete pattern of structure-activity relationships.
The general structure of the designed compounds is reported in Figure 1.
4-anilino-6-phenylpyrimidine derivatives
4-anilino-6-phenylaminopyrimidine derivatives
4-anilino-5-phenylpyrimidine derivatives
4-anilino-5-phenylaminopyrimidine derivatives
Figure 1. General structure for the 4 classes of designed compounds.
The synthesis has been accomplished for almost all the compounds of the first 3 classes, while an effective synthetic strategy for 4-anilino-5-phenylamino-pyrimidine derivatives has not been identified yet.
Some of the synthesized compounds have been assayed against a panel of 48 kinases, in order to test their binding properties. All the data have been worked out and some preliminary SARs have been drawn. The same compounds have been assayed for their cytotoxicity against two tumoral cell linesNell’ambito della terapia antitumorale un ruolo di primaria importanza è rivestito dagli inibitori di proteinchinasi ATP-competitivi. Numerosi sono infatti i farmaci appartenenti a questa categoria attualmente in terapia o in avanzata sperimentazione clinica1. La ricerca scientifica in questo settore si è negli ultimi anni orientata verso l’individuazione di inibitori multichinasici a selettività controllata2. La base per una progettazione razionale di farmaci di questo tipo sta nell’individuazione di un profilo di relazioni struttura-attività efficace ed esaustivo. In questo lavoro è discussa la progettazione e la sintesi di 4 classi di composti 4-anilinopirimidinici disegnati come potenziali inibitori di proteinchinasi, con caratteristiche tali da poter portare all’individuazione di un pattern di relazioni struttura-attività il più possibile completo. La struttura generale dei composti progettati è riportata in Figura 1. Derivati 4-anilino-6-fenilpirimidinici Derivati 4-anilino-6-fenilamminopirimidinici Derivati 4-anilino-5-fenilpirimidinici Derivati 4-anilino-5-fenilamminopirimidinici Figura 1. Struttura generale delle 4 classi di composti progettate. La sintesi è stata completata per quasi tutti i composti appartenenti alle prime tre classi, mentre non è stato possibile individuare una strategia sintetica efficace per i derivati 4-anilino-5-fenilamminopirimidinici. Alcuni dei composti sintetizzati sono stati sottoposti a saggi enzimatici di binding nei confronti di un pannello di 48 chinasi. I dati ottenuti sono stati elaborati e sono state ricavate preliminari relazioni struttura-attività. Sugli stessi composti sottoposti a screening sono stati poi eseguiti saggi di citotossicità nei confronti di due linee cellulari tumorali
10
Di, Sarra Francesca. "Studi modello di inibitori dell'enzima Tioredossina Reduttasi." Doctoral thesis, Università degli studi di Padova, 2012. http://hdl.handle.net/11577/3422954.
Full textAbstract:
Human Thioredoxin Reductase (TrxR) is associated with cancer cell growth and
anti-apoptosis process. TrxRs employ selenium in the C-terminal redox center
-Gly-Cys-Sec-Gly-COOH for reduction of Trx and other substrates.
Gold-containing drugs, widely used in clinical medicine against tumors and
other diseases, have been validated as potent TrxR inhibitors in vitro in the
nanomolar range: gold is known for its high affinity to thiols and selenols,
rendering the nucleophilic selenolate of reduced TrxR the prime target site of
modification by this metal.
The reactions between Auranofin (2,3,4,6-tetra-O-acetyl-1-thio-β-Dglucopyranosato-
S-(triethylphosphine) gold) and models of thiol and selenol
nucleophiles present in TrxR have been investigated in chloroform and
methanol by means of 1H, 31P and 77Se NMR spectroscopy. In chloroform,
Auranofin undergoes ligand substitution of the tetraacetylthioglucose moiety
with a PhS or PhSe group. The reaction is reversible in both cases but
characterized by widely different equilibrium constants. In polar solvents like
methanol the reaction is more complex, the phosphine also undergoing ligand
exchange. Some features have been clarified through the investigation of
Et3PAuCl, that offers the opportunity to follow up the reactions also by 35Cl-
NMR.
Replacement of phosphine group with N-heterocyclic carbene ligands gives a
more stable Au(I)-Se bond, avoiding the formation of secondary products.
In order to broaden the scope of this reaction, a more realistic model of the TrxR
active site, which matches the C-terminal sequence of TrxR (H-Gly-Cys-Cys-
Gly-OH) was synthesized and characterized. Its interaction with Au(I) based
inhibitors will be further evaluated.L’enzima Tioredosina Reduttasi (TrxR) è associato nell’uomo alla crescita di cellule tumorali e pocessi antiapoptotici. Le TrxRs utilizzano l’atomo di selenio contenuto nel centro redox dell’estremità C-terminale –Gly-Cys-Sec-Gly-COOH per la riduzione della Tioredossina e di altri substrati. Farmaci a base di oro, già ampiamente impiegati nell’uso clinico per varie patologie, sono stati validati come potenti inibitori della TrxR in vitro a concentrazioni nano molari: l’atomo di Au è infatti noto per la sua elevata affinità nei confronti di tioli e selenoli; il selenolato della TrxR ridotta rappresenta quindi il target primario di interazione di questo metallo. Le reazioni tra Auranofin (2,3,4,6-tetra-O-acetil-1-tio-β-D-glucopiranosato-S- (trietilfosfina) oro) e necleofili modello dei tioli e selenoli presenti nella Tioredossina Reduttasi sono state studiate in cloroformio e metanolo attraverso spettroscopia 1H, 31P e 77Se NMR. In cloroformio, l’Auranofin scambia la funzione tetraacetiltioglucosio con un gruppo PhS o PhSe. La reazione è reversibile in entrambi i casi, anche se caratterizzata da una costante di equilibrio largamente differente. Nei solventi polari come il metanolo la reazione è più complessa, e anche la fosfina è implicata in processi di scambio. Alcune chiarimenti sono stati possibli attraverso lo studio della reattività del composto Et3PAuCl, che offre inoltre la possibilità di monitorare le reazioni attraverso 35Cl-NMR. La sostituzione del gruppo fosfinico con leganti come i carbeni N-eterociclici fornisce composti con un legame Au(I)-Se più stabile e risolve il problema della formazione di prodotti secondari. Con l’intento di allargare lo studio di questa reazione, è stato sintetizzato e caratterizzato un modello più realistico dell’enzima TrxR in grado di mimare la sua sequenza C-terminale (H-Gly-Cys-Cys-Gly-OH). La sua interazione con complessi a base di Au(I), in particolare l’Auranofin, sarà ulteriormente valutata.
11
Vitali, Lucia <1959>. "Inibitori del proteasoma nella terapia del mieloma multiplo." Doctoral thesis, Alma Mater Studiorum - Università di Bologna, 2007. http://amsdottorato.unibo.it/184/1/Tesi_Vitali_Lucia.pdf.
Full text
12
Vitali, Lucia <1959>. "Inibitori del proteasoma nella terapia del mieloma multiplo." Doctoral thesis, Alma Mater Studiorum - Università di Bologna, 2007. http://amsdottorato.unibo.it/184/.
Full text
13
Perin, Stefano <1995>. "Sintesi di inibitori peptidici per interazione MEF2-HDAC." Master's Degree Thesis, Università Ca' Foscari Venezia, 2021. http://hdl.handle.net/10579/19004.
Full textAbstract:
I peptidi sono sempre più impiegati come agenti terapeutici per diverse malattie. Possiedono caratteristiche intermedie tra i farmaci chimici e biologici come dimensioni inferiori, sintetizzabili chimicamente, facilmente modificabili, con bassa tossicità, antigenicità ridotta, affinità di legame e specificità. Queste caratteristiche uniche li rendono una modalità attraente per lo sviluppo di inibitori di interazioni proteina-proteina. Lo scopo del progetto è sviluppare nuovi inibitori a base di peptidi in grado di bloccare l’interazione del fattore di trascrizione “myocyte enhancer 2” (MEF2) con alcuni membri della classe IIa delle istone deacetilasi (HDAC), una sottofamiglia di quattro proteine (HDAC4, HDAC5, HDAC7 e HDAC9) che sono state collegate ad una varietà di tumori solidi ed ematologici. A tal fine sono stati prodotti una serie di peptidi HDAC della classe II impiegando un sistema automatizzato di sintesi peptidica su fase solida, purificati con HPLC su fase inversa e caratterizzati via spettroscopia di massa e dicroismo circolare. L’affinità di legame dei peptidi verso MEF2 è stata testata con saggi di Polarizzazione di Fluorescenza. Infine l’affinità di legame di un peptide è stata incrementata inserendo una struttura sintetica intramolecolare (un braccio), che aiuta a bloccare il peptide in una conformazione specifica, in modo tale da ridurre l’entropia conformazionale.
14
Zagni, Chiara. "Progettazione e sintesi di nuovi inibitori delle istone deacetilasi." Thesis, Università degli Studi di Catania, 2011. http://hdl.handle.net/10761/253.
Full textAbstract:
Il controllo epigenetico dell'espressione genica e' operato da modifiche post-translazionali della cromatina, quali acetilazione e deacetilazione. Due enzimi sono respinsabili di questo processo: le HAT (istone acetiltransferasi) e le HDAC (istone deacetilasi). Le HDAC sono un gruppo di enzimi coinvoilti nella regolazione dell'espressione genica, nella riparazione de DNA e nella risposta allo stress. L'acetilazione gioca un ruolo importante nella trascrizione poiche' responsabile del rimodellamento della cromatina aumentando l'accesso dei fattori di trascrizione al DNA. Una diminuzione dei livelli dell'acetilazione istonica sono associate con un aumento dell'attivita' di trascrizione, mentre un decremento dei livelli di acetilazione e associate con le repression della repressione genica. Infatti nelle cellule tumoralisi osserva frequentemente un'anormale espressione genica.
Gli inibitori delle HDAC (HDI) sono potenti induttori dell'arresto della crescita, della differenzione e della morte dellulare per apoptosis in cellule trasformate sia in vitro che in vivo. Ad oggi vi sono sette classi distinte di inibitori delle HDAC e tutti contengono tre elementi strutturali chiave del farmacoforo:
a) un gruppo legante lo zinco (R), che coordina gli ioni zinco al fondo della lunga e stretta cavita' del sito attivo;
b) un cappuccio o à ¢ capà ¢ (la funzione solfonammidica), che interagisce sia con gli aminoacidi sul margine del sito di legame sia con la superficie della proteina.
c) un dominio di legame, il cui ruolo e' assicurare il corretto posizionamento dei gruppi precedenti e di interagire con il canale di legame lipofilo.
Seguendo il nostro recente interesse nella ricerca di HDI piu' potenti, ho progettato e sintetizzato una nuova serie di composti contenenti quattro nuove porzioni chelanti lo zinco, quali formilidrazonometilica,
2-formilidrazinocarbonilica, 2,2,2-trifluoro-N-metilencetammidica e 2,2,2-trifluoro-N-metilacetammidica, legate attraverso uno spaziatore ad una solfonammide (Schema 1), responsabile dell'interazione idrofobica con l'HDAC. Studi di docking hanno mostrato che queste molecule si inseriscono perfettamente nella tasca enzimatica dell'HDAC con un ottimo à ¯ Gbind di à ¢ 7,9 kcal/mol che e' una 1 kcal/mol piu' bassa del SAHA, un ottimo inibitore.The epigenetic control of gene expression is operated through post-translational modifications of chromatin such as acetylation and deacetylation. Two enzymes are responsable for these processes: HAT (histone acetyl transferase) and HDAC (histone deacetylase). HDAC is a group of enzymes involved in regulating gene expression, DNA repair and stress response. Acetylation plays an important role in trascription because it remodels chromatin structure enhancing access to DNA-binding factors. In general, increased levels of histone acetylation are associated with increased transcriptional activity, whereas decreased levels of acetylation are associated with repression of gene expression. In tumor cells abnormal gene expression is frequently observed. HDAC inhibitors have been shown to be potent inducers of growth arrest, differentiation, and apoptotic cell death both in vitro and in vivo transformed cells. To date there are seven distinct classes of HDAC inhibitors and all contain three key structural elements to their pharmacophore: a) a zinc-binding group which coordinates the zinc ion at the bottom of the long narrow active site cavity; b) a capping group which interacts both with the amino acids on the rim of the binding cavity and the protein surface; c) a linker domain whose role is to ensure the correct positioning of the two former groups and to in-teract with the lipophilic binding tunnel. Following our recent interest in the research of more potent HDAC inhibitors, we have projected and synthesized a new series of compounds containing four new zinc chelant moieties, i.e. formylhydrazonomethyl, 2-formylhydrazinocarbonyl, 2,2,2-trifluoro-N-methylideneacetamidic and N-(trifluoroacetyl)amidic, linked by an aromatic spacer to an aromatic sulfonamide, that is responsible of hydrophobic interaction with HDAC. Docking studies have shown that these new molecules fit very good in the HDAC enzymatic pocket with a best ï Gbind of â 7,9 kcal/mol that is 1 kcal/mol lower of the corresponding one for SAHA, a good HDAC.
15
Vaiana, N. "Progettazione e Sintesi di Nuovi Inibitori di Plasmodium Falciparum." Doctoral thesis, Università degli Studi di Milano, 2009. http://hdl.handle.net/2434/154275.
Full textAbstract:
The discovery of a new class of plasmodium falciparum inhibitors is presented. These compounds represent a novel and unexplored antimalarial chemotype. A systematic study was performed to reduce the molecular weight and improve the metabolic stability while retaining potency and selectivity.
16
Antolini, Nicola. "La ciclofilina D come bersaglio farmacologico: suoi potenziali inibitori peptidici." Doctoral thesis, Università degli studi di Padova, 2012. http://hdl.handle.net/11577/3422509.
Full textAbstract:
The mitochondrial permeability transition pore (MPTP) plays a key role in the process of mitochondria-mediated cell death (apoptosis). Molecules able to inhibit the MPTP can therefore be potential therapeutic agents useful in treating conditions such as trauma, ischemia/reperfusion injury, Parkinson's and Alzheimer's disease and in general all those conditions in which oxidative stress is involved and leading to apoptosis.
The cyclophilin D (CypD), a peptidyl-prolyl isomerase, is a mitochondrial matrix protein that is closely involved in the open-closed transition regulation of MPTP. The mechanism by which exerts its action is not yet known. There are, however, evidence highlighting its key role in the modulation of mitochondrial permeability. Like other cyclophilin family members, is targeted by cyclosporin A (CsA), a cyclic undecapeptide extracted from the fungus Tolypocladium inatum, which has revolutionized the practice of preventing transplant rejection. In fact, CsA is well known for his powerful immunosuppressant that is expressed through the formation of a ternary complex with a cyclophilin and calcineurin (Cn), a Ser/Thr phosphatase, Ca2+/calmodulin-dependent. Cn, through the dephosphorylation of nuclear factor of activated T cells, is heavily involved in signal pathways that activate the immune response. CsA interacts with a cyclophilin and the CsA-Cyp complex associates with Cn, inhibiting its enzymatic activity. Gene ablation studies show that CypD desensitizes MPTP. In addition, treatment with CsA improves, through interaction with CypD and then MPTP inhibition, the conditions of various diseases related to mitochondrial dysregulation in animal models. All these findings validate the hypothesis that inhibition of CypD is a good therapeutic strategy.
The major problem in the use of CsA as an inhibitor of CypD is its immunosuppressive action, which limits its use as may be given only for short periods of time. Indeed, preliminary clinical studies performed on patients with Ullrich dystrophy and Bethlem myopathy have yielded encouraging results, but in a few weeks, the patients became immunosuppressed, and then exposed to the potential risk of contracting dangerous infections. Another problem is that CsA, in spite of its lipophilicity, does not reach adequate concentrations in the central nervous system, particularly in the brain after systemic administration, because it fails to adequately penetrate the blood-brain barrier.
In light of these considerations it is clear that CypD is a drug target of interest and obtaining ligands with no activity against the Cn and can reach high concentrations in the central nervous system, is a condition for the development of promising of therapeutic agents that can control a variety of disorders or diseases.
Antamanide (Anta) is a non-toxic ciclodecapeptide isolated from the fungus Amanita phalloides. Much of the research conducted on this molecule have been devoted to the study of his activities in relation to its ability to form complexes with alkali metals and alkaline earth metals, mainly Na+ and Ca2+, which were then structurally and functionally studied. As CsA and ciclolinopeptide A, a ciclononapeptide extracted from flax seed, the Anta has some immunosuppressive activity, which is however lower than that of CsA.
The purpose of this work is to design, chemical synthesis and characterization, with NMR, atomic interactions with the protein, of peptide inhibitors of CypD and more specifically of the Anta and its derivatives. The objective is to identify new ligands that are not immunosuppressive. The Anta has been chosen as the starting point for the features common to CsA, for the fact of having biological activity and the ability to chelate Ca2+ ions that play an important role in the regulation of MPTP. For this reason we synthesized the Anta and some derivatives in which the Phe residue at position 6 and 9 are replaced by either Gly and Tyr residues. We also synthesized two octapeptidies lacking the Phe in position 5 and 6, and the Phe in position 9 has been replaced by Gly and Tyr. Finally we got for expression in E. coli the CypD marked with 15N, to perform two-dimensional heteronuclear NMR experiments. However, the great difficulties encountered in the refolding of the protein did not allow us to obtain valuable information that this technique could offer. Peptides were performed on the in vitro biological assays, which have shown as the Anta is an inhibitor of the mitochondrial transition pore and that this action is via inhibition of CypD. We have also shown that Anta protects from mitochondrial depolarization and cell death. Finally we can say that the Phe 6 and 9 are essential for the biological action on CypD, as all its derivatives have shown no activity.Il poro di transizione mitocondriale (MPTP) gioca un ruolo chiave nel processo di morte cellulare mediata dal mitocondrio (apoptosi). Molecole in grado di inibire il MPTP possono dunque essere dei potenziali agenti terapeutici, utili nel trattamento di patologie come il trauma, il danno da ischemia/riperfusione, le malattie di Parkinson e Alzheimer e in generale di tutte quelle condizioni in cui è coinvolto lo stress ossidativo e che portano all’apoptosi. La ciclofilina D (CypD), una peptidil-prolil isomerasi della famiglia delle ciclofiline, è una proteina della matrice mitocondriale che è strettamente implicata nella regolazione della transizione aperto-chiuso dell’MPTP. Il meccanismo con cui esplica la sua azione non è ancora conosciuto. Vi sono però delle evidenze che mettono in luce il suo ruolo fondamentale nella modulazione della permeabilità mitocondriale. CypD, così come altri membri della famiglia delle ciclofiline, è il bersaglio principale della ciclosporina A (CsA), un undecapeptide ciclico estratto dal fungo Tolypocladium inatum, che ha rivoluzionato la pratica dei trapianti prevenendo le reazioni di rigetto. CsA infatti è ben nota per la sua potente azione immunosoppressiva che si esplica mediante la formazione di un complesso ternario con una ciclofilina e la calcineurina (Cn), una Ser/Thr fosfatasi Ca2+/calmodulina dipendente. Cn, attraverso la defosforilazione del fattore nucleare di attivazione delle cellule T, è fortemente coinvolta nelle vie del segnale che attivano la risposta immunitaria. CsA complessa con una ciclofilina e il complesso CsA-Cyp si associa con Cn, inibendone l’attività enzimatica. Studi di ablazione genica della CypD mostrano un’inibizione della permeabilità mitocondriale. Inoltre il trattamento con la CsA migliora, attraverso l’interazione con CypD e quindi l’inibizione dell’MPTP, le condizioni di diverse patologie legate alla disregolazione mitocondriale in modelli animali. Tutte queste evidenze convalidano l’ipotesi che inibire CypD sia una buona strategia terapeutica. Il maggior problema inerente all’uso di CsA come inibitore di CypD è la sua azione immunosoppressiva, che ne limita l’impiego in quanto è possibile somministrarla solo per brevi periodi di tempo. Infatti studi clinici preliminari effettuati su pazienti affetti da distrofia di Ullrich e miopatia di Bethlem hanno dato risultati incoraggianti, ma in poche settimane i pazienti sono diventati immunodepressi e quindi esposti al rischio potenziale di contrarre pericolose infezioni. Un altro problema è che la CsA, nonostante la sua lipofilia, non raggiunge adeguate concentrazioni nel sistema nervoso centrale, in particolare nel cervello, dopo somministrazione sistemica, in quanto non riesce a permeare adeguatamente la barriera emato-encefalica. Alla luce di queste considerazioni appare chiaro che la CypD sia un bersaglio farmacologico di grande interesse e che l’ottenimento di ligandi privi di attività nei confronti della Cn e in grado di raggiungere concentrazioni elevate nel sistema nervoso centrale, sia una condizione promettente per lo sviluppo di agenti terapeutici in grado di controllare una gran varietà di disturbi o patologie. Un altro peptide ciclico con struttura riconducibile alla CsA è l’antamanide (Anta). L’Anta è un ciclodecapeptide non tossico isolato dal fungo Amanita phalloides. Molte delle ricerche condotte su questa molecola sono state rivolte allo studio della sua attività in relazione alla sua capacità di formare complessi con metalli alcalini e alcalino-terrosi, principalmente Na+ e Ca2+, che sono poi stati studiati da un punto di vista strutturale e funzionale. Come la CsA e il ciclolinopeptide A, un ciclononapeptide estratto dai semi di lino, l’Anta possiede una certa attività immunosoppressiva, che risulta però inferiore a quella della CsA. Lo scopo di questo lavoro è l’ideazione, la sintesi chimica e la caratterizzazione, mediante NMR, delle interazioni atomiche con la proteina, di inibitori peptidici della CypD e più specificatamente dell’Anta e suoi derivati. L’obiettivo è quello di identificare nuovi ligandi che non risultino immunosoppressivi. L’Anta è stata scelta come base di partenza per le caratteristiche comuni alla CsA, per il fatto di avere un’attività biologica intrinseca e per la capacità di chelare ioni Ca2+ che giocano, anch’essi, un ruolo importante nella regolazione dell’MPTP. Per questo motivo abbiamo sintetizzato l’Anta e alcuni suoi derivati in cui i residui di Phe in posizione 6 e 9 sono sostituiti alternativamente da residui di Gly di Tyr. Inoltre abbiamo sintetizzato due ottapeptidi in cui mancano le Phe in posizione 5 e 6 e in posizione 9 la Phe è stata sostituita da Gly e Tyr. Infine abbiamo ottenuto per espressione in E. coli la CypD marcata al 15N, così da poter effettuare esperimenti NMR bidimensionali eteronucleari. Tuttavia, le notevoli difficoltà riscontrate nel refolding della proteina non ci hanno permesso di ottenere le preziose informazioni che questa tecnica poteva offrire. Sui peptidi sono stati effettuati comunque dei saggi biologici in vitro, che hanno dimostrato come l’Anta sia un inibitore del poro di transizione mitocondriale e che questa azione si esplica attraverso l’inibizione della CypD. Inoltre abbiamo dimostrato che protegge dalla depolarizzazione mitocondriale e dalla morte cellulare. Infine possiamo affermare che le Phe 6 e 9 sono fondamentali per l’azione biologica su CypD, poiché tutti i suoi derivati si sono mostrati privi di attività.
17
SCOTTI, Alessandra. "Progettazione, sintesi ed attività di inibitori del Proteasoma a base peptidica." Doctoral thesis, Università degli studi di Ferrara, 2015. http://hdl.handle.net/11392/2389066.
Full textAbstract:
The ubiquitin-proteasome pathway (UPP) influences essential cellular functions including cell growt, differetiation, apoptosis, signal transduction, antigen processind and inflammatory responses.
Themain proteolytic component of the ubiquitin-proteasome pathway (UPP)is the 26S proteasome, responsible for the turnover of many cellular proteins and represents an attractive target for the treatment of pathologies such as cancer, as well as inflammatory, immune and neurodegenerative diseases.Natural and synthetic proteasome inhibitors having different chemical structures and potency have been discovered.In my PhD I worked on the design, synthesis and biological activity of molecules bearing pseudopeptidiche farmacoforiche different units at the C-terminus, as potential substrates for the interaction with the catalytic enzyme threonine, can inhibit specifically and selectively multicatalytic complex.Based on the data obtained from other series of inhibitors developed in our research group, which provided interesting biological results, I have designed and prepared based molecules peptides bearing new units farmacoforiche C-terminal, represented by groups isoxazolin vinyl-ester and dichloro- naftochinonici. Another series of derivatives instead, presents the methyl ester of trans-trans-muconic which pharmacophore linked to the side chain of a lysine residue common to all pseudo-tripeptides of the series.The new compounds were tested on the enzyme isolated based on their ability to inhibit three different catalytic activities of the proteasome: some of these, such as derivatives dichloro-naftochinonici, have shown a good ability of inhibition of the site post-acidic β1 and site chyme-tryptic β5.
18
FRANCESCHINI, Christian. "Progettazione, sintesi ed attività di inibitori del Proteasoma a base peptidica." Doctoral thesis, Università degli studi di Ferrara, 2012. http://hdl.handle.net/11392/2389430.
Full textAbstract:
The ubiquitin-proteasome pathway represents an attractive target in the
development of new drug therapies.
In particular, the proteasome 26S, a multicatalytic threonine protease
complex, is involved in intracellular ubiquitinated-protein degradation and
many biological processes, such as cell cycle control and differentiation,
apoptosis and generation of antigenic peptides presented by major
histocompatibility complex class I (MHC I) molecules.
The activity of 26S proteasome is located in a central 20S core, the proteoliytic
chamber is composed of four stacked rings capped by two 19S regulatory
complexes. Each ring is composed for seven b subunits with three different
active sites: in particular, the b1 subunit contains a peptidyl-glutamyl peptide
hydrolizing active site (PGPH), the b2 subunit expresses tryptic-like (T-L)
activity, and b5 contains a chimotryptic-like (ChT-L) activity.
Modulation of the proteasome activity by specific inhibitors may represent an
useful tool for the treatment of tumors, metabolic and autoimmune disorders.
The aim of this PhD work is the design, sythesis and evaluation of the
biological activity of several classes peptide-based proteasome inhibitors,
containing different pharmacophoric moieties at the C-terminal position as a
potential substrate for Michael addiction by the catalytic threonine through a
mechanism similar to that of the well-known inhibitors.
Herein we reported studies of the molecules bearing as pharmacophoric Cterminal
function: N-allyl vinil ester, a,b-unsaturated N-acylpyrrole, vinyl
ketone, butadienyl vinyl ester, divinyl ketone and isoxazolin vinyl ester groups.
In accordance with the results obtained in previous series, the
pharmacophoric units are linked to oligopeptidic sequences functionalized at
the N-terminal by appropriated groups.
Biological evaluation of the all new compounds was carried out to assess their
inhibition of the trypsin-like, chymotrypsin-like and post-acidic activities of
proteasome using the isolated enzyme purified from lymphoblastoid cell lines.
Some compounds as a,b-unsaturated N-acylpyrrole and vinyl ketone analogs
showed selective inhibition of the proteasome subunits in a mM range, while
other derivatives bearing different pharmacophoric units don’t provide a
favorable biological response.
19
Montalti, Roberto <1970>. "Studi di sicurezza ed efficacia di regimi immunosoppressivi a base di inibitori di mTOR e sospensione degli inibitori delle calcineurine in pazienti sottoposti a trapianto di fegato." Doctoral thesis, Alma Mater Studiorum - Università di Bologna, 2008. http://amsdottorato.unibo.it/1129/1/Tesi_Montalti_Roberto.pdf.
Full text
20
Montalti, Roberto <1970>. "Studi di sicurezza ed efficacia di regimi immunosoppressivi a base di inibitori di mTOR e sospensione degli inibitori delle calcineurine in pazienti sottoposti a trapianto di fegato." Doctoral thesis, Alma Mater Studiorum - Università di Bologna, 2008. http://amsdottorato.unibo.it/1129/.
Full text
21
Marin, Rodrigo Miguel. "Caracterização do efeito inibitorio de derivados aniquinazolinicos na atividade da adenosina quinase." [s.n.], 2007. http://repositorio.unicamp.br/jspui/handle/REPOSIP/310220.
Full textAbstract:
Orientador: Kleber Gomes FranchiniTese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas
Made available in DSpace on 2018-08-10T16:52:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Marin_RodrigoMiguel_D.pdf: 1749179 bytes, checksum: 025af214a1c78761be008c2a30ea5596 (MD5) Previous issue date: 2007
Resumo: A adenosina quinase tem um papel crítico no controle da disponibilidade tecidual de adenosina. Sua inibição provoca aumento da concentração local de adenosina, que, por sua vez, exerce efeitos em múltiplos aspectos da função celular. O desenvolvimento de bloqueadores farmacológicos da atividade da adenosina quinase tem, portanto, amplo potencial de aplicação terapêutica. O presente estudo foi planejado para caracterizar os efeitos inibitórios de derivados de 4-anilinoquinazolinas, DMA - cloridrato de 6,7-dimetóxi-4-N-(N,N¿-3¿-dimetilfenil)aminoquinazolina e PD153035 - Cloridrato de 6,7-dimetóxi-4-N-(3¿-bromofenil) aminoquinazolina na atividade da adenosina quinase, bem como sua ação sistêmica sobre a concentração de adenosina em órgãos e tecidos. Para avaliar a hipótese de inibição da adenosina quinase pelos compostos 4-anilinoquinazolínicos foram feitos ensaios in vitro com adenosina quinase recombinante (~42 kDa) clonada de fígado de camundongos. O ensaio para avaliar a atividade e a cinética da adenosina quinase recombinante constou de determinação do consumo de adenosina, obtido através de medidas da concentração de adenosina no meio com técnica de HPLC. Os estudos iniciais de cinética enzimática foram realizados sob condições saturantes, em realação ao substrato ATP, adicionado-se concentrações variadas de adenosina ao meio de reação Nestas condições a reação foi ajustada ao modelo de Michaelis-Menten e os parâmetros Km (Constante de dissociação que caracteriza a especificidade do substrato pela enzima) e Vmax (Velocidade máxima da reação enzimática sob concentrações saturantes de substrato) utilizados para análise da cinética. Considerando-se o consumo de adenosina, os valores de Km e Vmax da adenosina quinase foram de 2,5 ± 0,28 µM e 38 ± 1,26 nmols /min/µg de proteína, respectivamente. Experimentos realizados com o inibidor clássico de adenosina quinase, 5-Iodotubercidina, produziram inibição com IC50 de 100nM. Em seguida foram feitos experimentos in vitro para verificar os efeitos inibitórios dos compostos 4-anilinoquinazolínicos DMA e PD153035 na atividade da adenosina quinase. A avaliação da cinética enzimática na presença de várias concentrações de DMA e PD153035 permitiu confirmar a atividade inibitória desses compostos na adenosina quinase recombinante. Os valores de IC50 (a concentração do inibidor que exibe a metade do efeito inibitório máximo) foram de 0,8 nM e 1,2 pM para o PD153035 e DMA, respectivamente. Os valores de Ki (Constante de inibição) calculados com base nos valores de IC50 através da equação de Cheng-Prusoff foram estimados em 0,24 pM e 160 pM, para o DMA e o PD153035, respectivamente. Confirmada a hipótese de que os compostos 4-anilinoquinazolínicos inibem a atividade da adenosina quinase in vitro, realizamos experimentos in vivo para avaliar se o DMA aumenta a disponibilidade de adenosina em coração, fígado e cérebro de ratos, bem como em corações isolados de ratos, em preparações de Langendorff. As dosagens de adenosina tecidual foram obtidas através de método baseado em HPLC. A análise revelou um aumento médio de 47% e 30% nos níveis de adenosina no coração e fígado, respectivamente, de ratos tratados por gavagem com DMA em relação aos controles. Nos experimentos de corações isolados, a análise das amostras mostrou um aumento médio de 64% da concentração de adenosina nos corações perfundidos com o composto em relação aos controles. Conclusões: Com base nos achados do presente estudo podemos concluir que 1) a adenosina quinase recombinante apresenta atividade enzimática in vitro; 2) os compostos derivados de 4-anilinoquinazolinas DMA e PD153035 inibem a atividade da adenosina quinase recombinante em baixas concentrações, sugerindo um efeito específico e 3) a administração sistêmica de DMA provocou aumento da disponibilidade de adenosina em tecidos e em órgão isolado de ratos, possivelmente em decorrência de inibição da atividade de adenosina quinase tecidual. Tendo em vista a importância dos efeitos da adenosina sobre o sistema biológico e a confirmação da potência e seletividade de compostos 4-anilinoquinazolínicos como inibidores de adenosina quinase, pode-se sugerir o potencial uso terapêutico desses compostos em doenças, cuja origem esteja relacionada com alterações da concentração de adenosina celular
Abstract: Adenosine kinase has a critical role in the control of bioavailability of tissue adenosine. Its inhibition increases the local concentration of adenosine that affects several aspects of cellular functions. The development of pharmacological agents with adenosine kinase inhibitory properties has attracted interest as a promising strategy for therapeutic application. The aim of the present work was to characterize the inhibition effects of 4-anilinoquinazolines derivatives, DMA ¿ -N-(N,N-3'-dimethylphenylamino) -6,7-dimethoxyquinazoline hydrochloride and PD153035 - -N-(3'-bromophenylamino) -6,7- dimethoxyquinazoline hydrochloride on adenosine kinase activity as well as its systemic actions on adenosine levels in tissues. To evaluate the hypothesis of adenosine kinase inhibition by 4-anilinoquinazoline compounds, we performed in vitro assays with recombinant adenosine kinase cloned from mouse liver (~42 KDa). The activity and enzymatic kinetic assay of recombinant adenosine kinase involved monitoring adenosine levels in the reaction mixture by HPLC. Adenosine kinase activity was assayed using saturated concentration of ATP and different concentrations of adenosine. Under these conditions, the reaction was adjusted for the Michaellis-Menten model and kinetics parameters (Km and Vmax) were determined. Considering the adenosine contents, the Km and Vmax values were 2.5 ± 0.28 µM and 38.0 ± 1.26 nmols /min/µg of protein, respectively. Different concentrations of the standard inhibitor 5-iodotubercidin were used and the IC50 value obtained was 100 nM. In vitro enzymatic reactions were carried out to confirm DMA and PD153035 inhibitory effects on adenosine kinase activity. The kinetic reaction evaluation in presence of different DMA and PD153035 concentrations confirmed the inhibitory activity of these compounds on adenosine kinase. The IC50 values determined by the non-linear curve fitting program PRISM were 0.8 nM and 1.2 pM for PD153035 and DMA, respectively. The Cheng-Prusoff equation was used to calculate the Ki values from IC50 values, and they were estimated at 160.0 pM and 0.24 pM for PD153035 and DMA, respectively. We confirmed the hypothesis that the 4-anilinoquinazoline compounds have in vitro inhibitory effects on adenosine kinase activity. Then, we performed in vivo experiments to evaluate if DMA increases the adenosine levels in rat tissues such as heart, brain and liver as well as in the Langendorff preparations of isolated rat heart. An HPLC-based method was used to detect and quantify purine nucleoside adenosine and nucleosides derivatives in rat tissue samples. Adenosine levels in the heart and liver of rats treated with DMA increased average of 47% and 30%, respectively, relative to controls. In experiments using isolated hearts, the sample analysis showed an average 64% increase of adenosine concentrations in the rat hearts perfused with DMA relative to control. Conclusions: We conclude that 1) recombinant adenosine quinase presents enzymatic activity in vitro, 2) 4-anilinoquinazoline derivatives PD153035 and DMA inhibit the activity of recombinant adenosine quinase at low concentrations, suggesting a specific effect and 3) the systemic administration of DMA increases adenosine levels in tissues and isolated rat hearts, possibly due to inhibition of adenosine quinase activity. Considering the importance of adenosine effects on biological systems and adenosine kinase inhibition by 4-anilinoquinazoline compounds, a potential therapeutic use of these compounds in diseases related to cellular alterations of the adenosine levels is suggested.
Doutorado
Ciencias Basicas
Doutor em Clínica Médica
22
Finelli, Francesco. "Rinforzo sismico di murature a sacco: modellazione strutturale di inibitori di collasso." Master's thesis, Alma Mater Studiorum - Università di Bologna, 2017. http://amslaurea.unibo.it/14832/.
Full textAbstract:
La muratura a sacco, e più in generale le murature multi-foglia, rappresentano una tipologia costruttiva ampiamente diffusa nell'ambito del patrimonio architettonico italiano ed europeo. L'elevata vulnerabilità delle murature a foglia multipla nei confronti dell'azione sismica è stata evidenziata in maniera drammatica dai terremoti che hanno colpito l'Italia in tempi recenti. Il tipico meccanismo di collasso si manifesta generalmente attraverso il distacco e ribaltamento dei paramenti esterni fuori dal piano.
Nel presente studio viene affrontato il tema del rinforzo della muratura a sacco attraverso l'impiego di barre di connessione trasversale tra le foglie, con l'obiettivo ripristinare una risposta strutturale monolitica.
Con l'ausilio di modelli numerici realizzati con il software a elementi finiti Abaqus, sono state effettuate analisi non lineari per condurre valutazioni sul contributo fornito dagli elementi di rinforzo al comportamento strutturale di pannelli in un muratura a sacco.
La strategia di modellazione adottata, la quale prevede la rappresentazione della muratura nella sua effettiva costituzione a sacco, è stata poi estesa allo studio di un caso reale, la Torre Civica di Ravenna, per la quale è stata effettuata un'analisi di vulnerabilità sismica e una valutazione del beneficio potenzialmente fornito dall'inserimento di connettori trasversali, nell'ottica di un futuro intervento di miglioramento strutturale.
23
Stragliotto, Stefano. "Sviluppo in silico di inibitori dello chaperone Hsp90 a potenziale interesse terapeutico." Doctoral thesis, Università degli studi di Padova, 2011. http://hdl.handle.net/11577/3425331.
Full textAbstract:
The molecular chaperone heat shock protein (HSP) 90, in the last years had a leading role as an anticancer drug target because of its importance in maintaining the conformation, stability and function of key oncogenic client proteins involved in signal transduction pathways leading to proliferation, cell cycle progression and apoptosis, as well as other features of the malignant phenotype such as invasion, angiogenesis and metastasis. This project focuses on developing new drug - like compound that show Hsp90 inhibitor activity, mainly by utilizing computational methodologies based on crystallographic structure. During the project were developed and tested new methodologies like a topological similarity analysis and a specific scoring function, that was parameterized on Hsp90 directlyLo chaperone Hsp90 si è affermato in questi ultimi anni come un interessante bersaglio terapeutico per svariate patologie umane. Tra tutte, molte tipologie di neoplasie maligne, in cui l’eccessiva attività di questa macchina molecolare consente il mantenimento della vitalità delle cellule trasformate, pur in presenza di gravi alterazioni del genoma e del tradotto proteico. Da ricordare inoltre, l’implicazione di questa proteina in patologie neurodegenerative quali la malattia di Alzheimer e di Parkinson e, da recenti scoperte, anche nella sclerosi multipla e nell’atrofia muscolare spinale e bulbare. Questo progetto mira ad indagare lo chaperone mediante metodologie computazionali, con fine ultimo quello di potersi inserire all’interno di un processo di drug discovery, che possa portare allo sviluppo di nuove molecole, o al recupero di molecole già esistenti, con attività inibitoria nei confronti di questa proteina. Per fare questo, ho cercato di ottimizzare un protocollo di virtual screening che fosse in grado di trovare, nel caso fossero presenti all’interno dei database analizzati, delle molecole attive sul bersaglio. Inoltre ho adottato alcune strategie innovative per andare a selezionare i database di ligandi in modo da massimizzare le possibilità di successo. Sono stati applicati metodi di analisi delle similarità topologiche delle proteine ed è stata parametrizzata una scoring function specificamente su Hsp90. Tutto questo è stato permesso dalla grande abbondanza di dati sulle strutture cristallografiche risolte ai raggi X, che da un lato hanno favorito il lavoro, mettendo a disposizione le strutture di molti inibitori noti; ma dall’altro hanno reso complessa la scelta di un modello di partenza, su cui basare in seguito il protocollo di docking molecolare.
24
Cafaro, Emiddio. "Design e sintesi di analoghi delle azumammidi, potenti inibitori degli enzimi HDACs." Doctoral thesis, Universita degli studi di Salerno, 2011. http://hdl.handle.net/10556/247.
Full textAbstract:
2008 - 2009Le azumammidi sono cinque ciclopeptidi di origine marina, isolate nel 2003 da Fusetani et al dalla spugna Mycale izuensis e brevettate dalla Yamanouchi Pharmaceutical. L'interesse destato da questi metaboliti secondari è da attribuire alla loro attività biologica di inibitori degli enzimi HDACs (istone deacetilasi), attività che conferirebbe loro un importante potere farmacologico per il trattamento dei disturbi connessi al mal funzionamento di tali enzimi, compresi alcuni tipi di cancro. Le azumammidi A ed E sono già state ottenute sinteticamente, ma le strategie elaborate sono risultate lunghe e laboriose e hanno fornito rese piuttosto basse (3-8%). Obiettivi di questa tesi di dottorato sono stati l'elaborazione e la sintesi di analoghi delle azumammidi che ne conservino l'attività, ma che siano più facilmente accessibili dal punto di vista sintetico. In particolare. nella prima parte di questo lavoro. sono state sintetizzate due varianti stereochimiche della naturale (+)-azumammide E: L'ottenimento di queste strutture ha permesso di svolgere, degli studi di interazione del complesso inibitore-HDAC ed ha messo in luce degli interessanti aspetti strutturali degli inìbitori ciclotetrapeptidici: l’attività di queste molecole è correlata non alla configurazione assoluta dei propri centri stereogenici, ma, piuttosto. alla topologia delle catene laterali dei singoli amminoacidi... [a cura dell'autore]
VIII n.s.
25
Montemurro, Luca Antonio <1977>. "Virtual screening di inibitori del complesso N-Myc/Max e valutazioni in vitro." Doctoral thesis, Alma Mater Studiorum - Università di Bologna, 2008. http://amsdottorato.unibo.it/1070/1/Tesi_Montemurro_Luca.pdf.
Full text
26
Montemurro, Luca Antonio <1977>. "Virtual screening di inibitori del complesso N-Myc/Max e valutazioni in vitro." Doctoral thesis, Alma Mater Studiorum - Università di Bologna, 2008. http://amsdottorato.unibo.it/1070/.
Full text
27
Alabiso, Orazio Daniele. "Effetti degli inibitori delle fosfodiesterasi 5 nei modelli animali di malattia di alzheimer." Doctoral thesis, Università di Catania, 2012. http://hdl.handle.net/10761/1244.
Full textAbstract:
Questo lavoro nasce dall osservazione che il peptide beta-amiloide (Abeta), fondamentale nella patogenesi della Malattia di Alzheimer (Alzheimer s disease - AD), agisce sul sistema ossido nitrico/GMPc inducendo una diminuzione della plasticità sinaptica, dei livelli di GMPc e della fosforilazione del fattore di trascrizione e molecola della memoria CREB. Considerato che gli inibitori delle fosfodiesterasi 5 (PDE5) aumentano i livelli di GMPc e la fosforilazione di CREB, abbiamo studiato se tali molecole possano avere un effetto benefico nel fenogtipo dell AD su modelli murini di deposizione di amiloide, detti APP/PS1. Abbiamo dimonstrato che l inibitore delle PDE5 sildenafil, scelto poichè già ampiamente studiato nelle sue proprietà farmacologiche, effetti collaterali e follow-up sugli esseri umani, determina un miglioramento della funzione sinaptica, della fosforilazione di CREB e della memoria nei topi APP/PS1. Quindi, l inibizione delle PDE5 potrebbe rappresentare un nuovo target nella terapia dell AD. Inoltre, l effetto a lungo termine potrebbe essere molto utile per migliorare la compliance nei pazienti affetti da AD.
28
Tine', Maria Greca <1985>. "Studio dell'ossigeno singoletto generato da pigmenti. Sintesi di inibitori di specie ossigeno reattive." Master's Degree Thesis, Università Ca' Foscari Venezia, 2012. http://hdl.handle.net/10579/1671.
Full textAbstract:
La prima parte della tesi prevede la produzione di ossigeno singoletto da parte dei pigmenti dopo irraggiamento. Rilevazione mediante tecniche gascromatografiche. La seconda parte invece ha lo scopo di produrre una specie fluorescente ossidata e di studiare il processo ossido riduttivo.
29
Gambalunga, Alberto. "Identificazione e caratterizzazione di nuovi inibitori del poro della transizione della permeabilità mitocondriale." Doctoral thesis, Università degli studi di Padova, 2008. http://hdl.handle.net/11577/3425052.
Full textAbstract:
We have characterized the mitochondrial and cellular effects of two molecules identified by Genextra's S.p.A from a chemical library by high throughput screening (HTS) designed to identify novel inhibitors of the mitochondrial permeability transition pore (PTP). The screening, based on in vitro calcium-induced mitochondrial swelling, yielded several PTP inhibitory compounds and two of them, CngPtP003 and CngPtP006, have been selected for the present study. We studied the inhibitory properties of CngPtP003 and CngPtP006 on PTP in isolated mouse liver mitochondria with the Calcium Retention Capacity (CRC) assay, and the inhibitory profiles compared with those displayed by the well known PTP inhibitor cyclosporin A (CsA). From this first set of experiments we confirmed that both compounds are PTP inhibitors with different biological potency and efficacy, and that their molecular targets are not the same as that of CsA, with which both compounds displayed additive effects. In a second set of experiments we studied the mitochondrial effects of CngPtP003 and CngPtP006 in intact HeLa cells with the tetramethylrhodamine methyl ester (TMRM) assay, which measures the mitochondrial membrane potential. We found that only CngPtP003 is able to protect the cells from the depolarization and from cell death caused by the PTP inducer arachidonic acid. Lack of inhibition by CngPtP006 data has been confirmed both in HeLa isolated mitochondria and in several human permeabilized cell lines, indicating that the inhibitory properties of CngPtP006 are limited to mouse mitochondria, which were used in the primary screening. These results validate the HTS approach for the identification of novel PTP inhibitors, whose suitability for drug development is currently under investigation.
30
Santini, Sujen Eleonora <1979>. "Il 2-metossiestradiolo: un potenziale inibitore fisiologico dell'angiogenesi follicolare." Doctoral thesis, Alma Mater Studiorum - Università di Bologna, 2008. http://amsdottorato.unibo.it/809/1/Tesi_Santini_Sujen_Eleonora.pdf.
Full text
31
Santini, Sujen Eleonora <1979>. "Il 2-metossiestradiolo: un potenziale inibitore fisiologico dell'angiogenesi follicolare." Doctoral thesis, Alma Mater Studiorum - Università di Bologna, 2008. http://amsdottorato.unibo.it/809/.
Full text
32
Lucenti, Giulia. "Sviluppo di nuovi inibitori dell'enzima ureasi e loro valutazione ai fini dell'utilizzo in agricoltura." Master's thesis, Alma Mater Studiorum - Università di Bologna, 2021. http://amslaurea.unibo.it/24818/.
Full textAbstract:
L’enzima ureasi è un enzima appartenente alla classe delle idrolasi in grado di idrolizzare l'urea in ammoniaca e anidride carbonica, esso è presente in molti batteri che colonizzano il suolo. È importante perché rende disponibile per le piante l'azoto dell’urea utilizzata come fertilizzante in agricoltura. Se l’idrolisi dell’urea avviene troppo velocemente, gran parte dell’azoto ammoniacale viene però perso dal suolo attraverso volatilizzazione, denitrificazione e lisciviazione, tutti fenomeni che causano gravi problematiche in campo ambientale ed agricolo. Si è quindi diffuso in agricoltura, l’utilizzo di inibitori dell’ureasi, che rallentano l’idrolisi dell’urea in ammoniaca.
Il presente lavoro di tesi ha come obbiettivo quello di valutare possibili nuovi inibitori dell’ureasi derivanti dalla pirolisi di biomasse di origine vegetale, che possano potenzialmente sostituire gli inibitori di sintesi attualmente presenti in commercio. Il lavoro si è articolato in tre aspetti principali: i) la produzione di diverse frazioni tramite pirolisi di legno di larice, legno di pioppo e paglia di panico e la loro successiva caratterizzazione chimica; ii) la valutazione della capacità di ciascuna frazione di inibire l’attività ureasica dei batteri del suolo; iii) la valutazione dell’ecotossicità delle varie frazioni nei riguardi di alcuni organismi del suolo (lombrichi, piante, batteri).
I risultati ottenuti indicano che i prodotti considerati hanno una capacità di inibizione dell’ureasi paragonabile a quella dell’NBPT, l’inibitore di sintesi attualmente più utilizzato in campo agricolo ma risultano avere una tossicità non trascurabile, soprattutto per il lombrico Eisenia andrei. La tossicità sembrerebbe però essere mitigata dall’uso in combinazione con il biochar. In conclusione, possiamo dichiarare che i risultati ottenuti rappresentano un buon punto di partenza, ma sono necessari ulteriori studi per poter approfondire l’argomento.
33
BOTTI, ELISABETTA. "p53 promuove la progressione tumorale nelle cellule di melamona resistenti agli inibitori di BRAF." Doctoral thesis, Università degli Studi di Roma "Tor Vergata", 2017. http://hdl.handle.net/2108/198145.
Full text
34
Calderan, Laura. "Caratterizzazione preclinica in vitro di nuovi inibitori non peptidomimetici della glutatione trasferasi P1-1." Doctoral thesis, Università degli studi di Padova, 2015. http://hdl.handle.net/11577/3424699.
Full textAbstract:
Glutathione transferases (formerly glutathione S-transferases, GSTs) are a superfamily of enzymes involved in the glutathione (GSH)-dependend detoxification of a wide range of chemicals, including drugs. Moreover, certain members of this superfamily interact with and modulate the activity of protein kinases involved in key cellular processes, including proliferation and apoptosis [Ruzza et al., 2009]. Among them, GSTP1-1 is frequently overexpressed in a variety of human tumors, where it contributes to conferring resistance to different anticancer agents. In light of these observations, several GST inhibitors or GST-activated prodrugs have been investigated throughout the years; however, none of them has been approved for use as antitumor drug [Ruzza et al., 2009; Sau et al., 2010].
6-(7-nitro-2,1,3-benzoxadiazol-4-ylthio)hexanol (NBDHEX) and its structural analogue MC3181 are promising anticancer agents with potent inhibitory activity towards GSTP1-1 [Ricci et al., 2005; Pasello et al., 2011; De Luca et al., 2014]. A first aim of this work was to evaluate the metabolic fate of these compounds in humans and in laboratory animal species. The metabolic stability of NBDHEX and MC3181 was assessed by high performance liquid chromatography (HPLC) or LC coupled to diode array detection and tandem mass spectrometry (LC-DAD-MS/MS), upon incubation of each drug with human, mouse or rat liver microsomes or cytosol as enzyme source. The reactions investigated were UDP-glucuronic acid (UDPGA)-dependent glucuronidation, reduced nicotinamide adenine dinucleotide phosphate (NADPH)-dependent microsomal oxidation, and oxidized nicotinamide adenine dinucleotide (NAD+)-dependent cytosolic oxidation.
Both NBDHEX and MC3181 underwent glucuronidation and microsomal NADPH-dependent oxidation in all of the investigated species. Moreover, NBDHEX, but not MC3181, underwent alcohol dehydrogenase-dependent oxidation in both human, rat and mouse cytosol.
The identity of NBDHEX glucuronide was confirmed by nuclear magnetic resonance analyses.
Finally, interspecies differences were identified in the glucuronidation of both compounds and in the cytosolic oxidation of NBDHEX, while sex-related differences were observed in the rate of glucuronidation of MC3181 as well as in the rate of cytosolic oxidation of NBDHEX.
Sulfasalazine (sulfasalazopyridine; SASP), a drug currently used to treat rheumatic and inflammatory bowel diseases, is a non-substrate inhibitor of various human GSTs, including GSTP1-1 [Ahmad et al., 1992]. Despite this, its poor oral bioavailability and metabolic instability (which is mainly linked to the presence of an azo group in its structure) hinder its use as an anticancer agent. In this work, 30 SASP analogues containing an imidazole ring in substitution of the azo group of SASP (i.e. salycylbenzoimidazole derivatives, EML), have been investigated as potential inhibitors of human GSTP1-1. Further structural modifications involved the sulfonamide as well as the aminosalicylic moiety of the drug.
Seven out of 30 of the salycylbenzoimidazole derivatives studied (i.e. EML340, EML277, EML259, EML337, EML357, EML279, and EML338) inhibited human placental GST (mostly GSTP1-1) conjugation activity more efficiently than the parent compound, SASP. Thus, the azo group seems to be not essential for inhibition of the enzyme activity.
Further enzyme inhibition assays carried out using human recombinant GST A1-1, M1-1 and P1-1, showed that EML337 displays a certain grade of selectivity for GSTP1-1, while EML340 and EML277 were highly selective towards GSTM1-1.
Finally, preliminary in vitro cytotoxicity assays indicate that the methyl esters EML259, EML337 and EML339 can interfere with the growth of A375 and SK-MEL 23 human melanoma cell lines.Le glutatione trasferasi (glutatione S-trasferasi, GST) promuovono la detossificazione di numerose sostanze esogene ed endogene elettrofile tramite catalisi della loro coniugazione con glutatione ridotto. Alcune GST, tra cui la GSTP1-1, partecipano inoltre alla regolazione di processi quali l’apoptosi e la proliferazione cellulare mediante interazione con mitogen activated protein chinasi [Ruzza et al., 2009]. Alcune GST, in particolare la GSTP1-1, sono notoriamente sovraespresse in numerosi tumori umani, e tale sovraespressione concorre a conferire un fenotipo di poliresistenza a farmaci antineoplastici. Nel corso degli anni sono stati dunque identificati e studiati svariati inibitori di GST o profarmaci attivati da tali proteine; nessuno di essi, tuttavia, è attualmente in uso clinico per la terapia dei tumori [Ruzza et al., 2009; Sau et al., 2010]. Fra gli inibitori di GST ad oggi identificati si annoverano il 6-(7-nitro-2,1,3-benzossadiazol-4-iltio)esanolo (NBDHEX) e il suo analogo strutturale MC3181, entrambi inibitori potenti della GSTP1-1 umana e in fase di valutazione preclinica quali agenti antitumorali [Ricci et al., 2005; Pasello et al., 2011; De Luca et al., 2014]. Un primo obiettivo dell’attività svolta nell’ambito del Dottorato di Ricerca era l’ottenimento di informazioni circa la stabilità metabolica dei due candidati farmaci, considerata l’attuale assenza di informazioni a riguardo. Tale analisi è stata effettuata mediante l’utilizzo, quali fonti degli enzimi di biotrasformazione, di frazioni subcellulari epatiche microsomiali e citosoliche umane, murine, e di ratto. Sono state considerate in particolare le reazioni di ossidazione microsomiale mediata da enzimi richiedenti nicotinammide adenina dinucleotide fosfato ridotto (NADPH), di coniugazione con acido glucuronico, e di ossidazione citosolica mediata da enzimi adenina dinucleotide ossidato (NAD+)-dipendenti. I risultati ottenuti mediante cromatografia in fase liquida ad elevate prestazioni (HPLC) e cromatografia liquida accoppiata a rivelatore spettrofotometrico a serie di diodi e spettrometria di massa tandem (LC-DAD-MS/MS) dimostrano come entrambi i composti in esame vadano incontro, in tutte le specie considerate, a glucuronidazione, con formazione di un solo prodotto di reazione, e ad ossidazione microsomiale richiedente NADPH, con formazione di almeno due metaboliti. L’NBDHEX, ma non l’MC3181, è soggetto inoltre ad ossidazione citosolica NAD+-dipendente mediata da alcol deidrogenasi, con formazione di un unico prodotto di reazione. Il glucuronide dell’NBDHEX è stato ulteriormente caratterizzato mediante analisi di risonanza magnetica nucleare. Lo studio ha messo in evidenza l’esistenza di differenze interspecie nella velocità di glucuronidazione di entrambi i composti, e, nel ratto, di differenze tra i due sessi nella velocità di glucuronidazione dell’MC3181 e di ossidazione citosolica dell’NBDHEX. Tra gli inibitori di GSTP1-1 ad oggi noti vi è anche l’antinfiammatorio-immunomodulatore sulfasalazina (salicilazosulfapiridina, SASP) [Ahmad et al., 1992], il quale, tuttavia, si mostra poco adatto all’utilizzo in vivo nella terapia dei tumori, principalmente a causa della scarsa biodisponibilità orale e della marcata instabilità metabolica, riconducibile per lo più alla presenza di un gruppo azoico [Klotz, 1985]. Una seconda parte del lavoro svolto durante il Dottorato di Ricerca ha avuto come obiettivo la valutazione in vitro di 30 nuovi analoghi strutturali della SASP quali potenziali inibitori della GSTP1-1 umana per il trattamento dei tumori. Tutti gli analoghi considerati (EML) si caratterizzano per la sostituzione del gruppo azoico tipico della SASP con un anello imidazolico. Ulteriori modifiche sono state apportate a carico della porzione sulfonamidica e/o aminosalicilica della SASP. Sette dei 31 analoghi studiati (EML340, EML277, EML259, EML337, EML357, EML279, ed EML338) esercitano un effetto inibitorio nei confronti dell’attività coniugativa della GST isolata da placenta umana (principalmente GSTP1-1) superiore a quello della SASP; il legame azoico non appare dunque essenziale ai fini dell’attività inibitoria nei confronti dell’enzima. In saggi di inibizione enzimatica basati sull’impiego delle proteine umane ricombinanti GST A1-1, M1-1 e P1-1, il composto EML337 mostra un’inibizione preferenziale nei confronti della GSTP1-1. EML277 ed EML340 esibiscono invece marcata selettività d’azione nei confronti della forma GSTM1-1. Infine, gli esteri EML259, EML337 ed EML339 dimostrano, in esperimenti preliminari in vitro, attività inibitoria sulla crescita delle linee di melanoma umano A375 e SK-MEL 23, esprimenti GSTP1-1 [Depeille et al., 2005; Hoey et al., 2009].
35
Leal, Vilmar Moura. "Estudo do reflexo inibitorio retoanal em multiparas, na zona de alta pressão com cateter radial." [s.n.], 2003. http://repositorio.unicamp.br/jspui/handle/REPOSIP/308754.
Full textAbstract:
Orientador: Claudio Saddy Rodrigues CoyDissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas
Made available in DSpace on 2018-08-03T16:26:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Leal_VilmarMoura_M.pdf: 1606636 bytes, checksum: 7b12d0641f97608e38b55b8cc93da306 (MD5) Previous issue date: 2003
Resumo: A fisiologia da evacuação e a fisiopatologia dos distúrbios evacuatórios ainda hoje não são bem compreendidas. A ocorrência destes distúrbios vem aumentando progressivamente, implica em limitações, compromete a qualidade de vida e tem custos significativos. A incontinência fecal acomete cerca de 2% da população, com predomínio em mulheres e que tenham tido partos normais. Com relação à constipação, em 30 a 50% dos casos, a causa é funcional. Os testes para o estudo da fisiologia anorretal têm sido bastante utilizados, especialmente a manometria. No entanto, algumas variáveis deste exame ainda apresentam dúvidas quanto sua interpretação. Dentre estas, destaca-se o Reflexo Inibitório Retoanal (RIRA), freqüentemente descrito como presente, ausente ou inconclusivo. Apenas recentemente vem sendo realizada uma abordagem mais pormenorizada deste. Sendo a pesquisa deste reflexo comumente realizada com cateter axial e considerando a assimetria anatômica do canal anal, seu estudo na zona de mais alta pressão (ZAP) com cateter radial poderia adicionar informações não disponíveis. Objetivo: estudar os parâmetros do reflexo inibitório retoanal em multíparas, com cateter radial. No período entre 2001 e 2002, foram estudadas 36 pacientes, com quatro a seis partos vaginais, com média de idade de 40,7 (30 a 50) anos, Grupo 1 e 10 pacientes, com um a três partos vaginais, com média de idade de 38,5 (31 a 50) anos, Grupo 2. Com relação à função evacuatória do Grupo 1, 63,9% das pacientes encontravam-se assintomáticas, 33,3% apresentavam como queixa constipação e 2,8% incontinência fecal. Dentre as pacientes do Grupo 2, 50% eram assintomáticas e as demais referiam constipação. Todas as pacientes são oriundas do Hospital Getúlio Vargas ¿ Teresina - PI - Universidade Federal do Piauí (UFPI). Foram analisados na ZAP a pressão anal média de repouso (PAM) e os seguintes valores por quadrante: pressão média de repouso pré-relaxamento (PREP), porcentagem de relaxamento (%RELAX), pressão no ponto de máximo relaxamento (PRELAX), tempo de relaxamento (TRELAX) e o tempo de recuperação (TREC). Não houve diferença significante entre as médias de idades dos pacientes dos Grupos 1 e 2 (p = 0,43), assim como entre as médias da pressão anal média de repouso (p = 0,053). Os valores das médias da PREP nos quadrantes apresentaram diferença com significância estatística, no Grupo 2. A comparação dos valores desta variável entre os Grupos 1 e 2 foi estatisticamente diferente nos quadrantes com exceção do anterior. Os valores das médias de PRELAX foram mais baixos e com significância estatística no Grupo 1, a comparação entre os grupos evidenciou diferença estatisticamente significante nos quadrantes 1 e 4. Não foram evidenciadas diferenças significativas entre os valores das médias de %RELAX no Grupo 1 ou Grupo 2, assim como entre os grupos. Também não ocorreu diferença significativa com relação aos valores dos tempos de relaxamento e de recuperação nos dois grupos, assim como a comparação destas variáveis entre os grupos nos diferentes quadrantes. Os dados obtidos nesta casuística permitem concluir que: 1- a PREP nos quadrantes, tende a uma simetria nas pacientes multíparas, provavelmente decorrente de comprometimento global da função esfincteriana; 2- o Reflexo Inibitório Retoanal(RIRA), contrariamente a PREP, pode ter os parâmetros que o compõe manifestados de maneira irregular nos diferentes quadrantes na ZAP, da mesma forma, em decorrência das alterações estruturais mais prováveis nas pacientes do Grupo 1; 3- a utilização do cateter radial no estudo do Reflexo Inibitório Retoanal (RIRA) pode fornecer dados não obtidos com o cateter axial
Abstract: Physiology of evacuation and physiopathology of evacuatories disturbs still today aren¿t well understood. The occurrence of this disturbs has been rising progressively, it implies in limitation, affects the quality of life and has significant costs. Fecal incontinence occurs at about 2% of population, more in women, especially in those who had vaginal delivery history. In relation to constipation, 30 ¿ 50% of the cases, the cause is functional. Physiologies tests have been used more and more frequently, among these tests the pioneer manometry has gain more attention. Therefore same variables of this test have still doubt about its interpretation. Among this doubts there is the inhibitory recto anal reflex (RIRA), frequently described as present, absent or inconclusive. Only recently a more detailed approach of this complex phenomena has been realized. Once the research of this reflex is commonly made with axial catheter, and considering that anatomy of the anal canal is not symmetric, the study of the RIRA in the high pressure zone (HPZ), with radial catheter could add more information that were not available. Aim: to study parameters of inhibitory recto anal reflex in multiparous, with radial catheter. In the period of 2001 to 2002, 36 patients with 4 to 6 vaginal delivery were studied, with average age 40,7 (30 ¿ 50) years old, belong to Group 1 and 10 patients with 0 to 3 vaginal delivery, with average age 38,5 (31 ¿ 50) years old, belong to Group 2. In relation to evacuation function in Group 1, 63,9% of the patients were asymptomatic, 33,3% had constipation and 2,8% had fecal incontinence. Among the patients of Group 2, 50% were asymptomatic and 50% were constipated. All patients were from Hospital Getúlio Vargas ¿ Teresina ¿ PI ¿ Federal University of Piauí ¿ UFPI. This study was approved by Ethical Committee of this university. In HPZ, anal resting pressure (ARP) and the follow values for quadrant: average of resting anal pressure before relaxation (PREP), percentage of relaxation (%RELAX), pressure at the point of maximum relaxation (PRELAX), relaxation time (TRELAX) and recovery time (TREC) were analyzed. There weren't significant difference between average age of the patients in the two groups (p = 0,43) as far as average of resting anal pressure (p = 0,053). The average values of PREP among quadrants had statistics significant differences in Group 2. The comparison of the values of this variable in two groups was statistically different in the quadrants except in the anterior. The values of PRELAX average were smaller and with statistics difference in Group 1, the comparison between groups shows statistics significant differences in quadrants 1 and 4. No significant differences were observed in the values of %RELAX in Group 1 or Group 2, as far as between the groups there were. Also no differences with relaxation and recovery time among quadrants in the groups as far as between groups. The data obtained in this study permit the following conclusion: 1- PREP among quadrants tend to a lack of symmetry in multiparous patient, probably because of global involvement of sphincter function; 2- RIRA in opposition of PREP, can have its parameters manifested of irregular way among quadrants of HPZ, the same way because of structural alterations more probably in patients of Group 1; 3- Use of radial catheter in study of RIRA can produce data that can not be obtained with axial catheter
Mestrado
Medicina Interna
Mestre em Ciências Médicas
36
Cardoso, Marcia Helena Miranda. "Efeito inibitorio do oxido nitrico na adesão plaquetaria : mecanismos dependentes e indepentes de GMP ciclico." [s.n.], 2006. http://repositorio.unicamp.br/jspui/handle/REPOSIP/308918.
Full textAbstract:
Orientador: Edson AntunesTese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas
Made available in DSpace on 2018-08-06T13:42:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cardoso_MarciaHelenaMiranda_D.pdf: 20008968 bytes, checksum: 1a1bf9dc06053f021c3ee9e0591edd1e (MD5) Previous issue date: 2006
Resumo: A inibição da adesão de plaquetas ao subendotélio é fundamental na prevenção de agregação excessiva e de formação de trombos, sendo o óxido nítrico (NO) o principal mediador envolvido neste fenômeno. O objetivo deste estudo foi investigar o mecanismo de ação do NO na inibição da adesão de plaquetas humanas, procurando identificar os mecanismos dependentes e independentes de GMP cíclico (GMPc). Os ensaios de adesão foram realizados em placas de 96 poços recobertos com fibrinogênio, usando-se plaquetas lavadas (1,2 x 108 plaquetas/mL) obtidas de indivíduos sadios. Dependendo do protocolo experimental, as plaquetas não ativadas e ativadas com trombina (50 mU/mL) foram incubadas com SNP (0,1-1,0 mM) ou SIN-1 (0,1-1,0 mM), na ausência ou na presença de ODQ (inibidor da guanilato ciclase solúvel), SOD (seqüestrador do ânion superóxido) ou gaiato (antioxidante seqüestrador de peroxinitrito). A adesão foi avaliada aos 15 e 60 min de incubação, medindo-se a atividade da fostase ácida. Nossos resultados mostraram que as plaquetas se aderem significativamente ao fibrinogênio in vitro, sendo a resposta em 60 min maior do que em 15 min. O tratamento das plaquetas com SNP (0,1 e 1,0 mM) elevou significativamente os níveis de GMPc e reduziu a adesão plaquetána aos 15 e 60 min. A pré-incubação das plaquetas com ODQ impediu a elevação dos níveis de GMPc induzida pelo SNP (ambas as concentrações e tempos), e reverteu a inibição da adesão plaquetária observada com 0,1 mM de SNP Entretanto, o ODQ não modificou a inibição da adesão quando se usou 1,0 mM de SNP. Por outro lado, a pré-incubação das plaquetas com SOD ou gaiato reverteu significamente o efeito inibitório de 1 mM de SNP. Resultados semelhantes foram obtidos com o SIN-1 em todas as condições experimentais. No sentido de descartar que a inibição da adesão plaquetária proporcionada pelos doadores de NO não é decorrente de efeito citotóxico, realizamos ensaios de citotoxicidade (MTT). Nossos dados revelaram que o SNP não é tóxico à plaqueta em nenhuma das concentrações e condições usadas. Por outro lado, o SIN-1 mostrou-se tóxico na concentração de 1 mM, sendo este efeito citotóxico revertido pela pré-incubação das palquetas com SOD. Numa segunda etapa deste trabalho, passamos à investigação do componente independente de GMPc responsável pela inibição da adesão plaquetária em resposta ao SNP e SIN-1, dando ênfase à nitrotirosina. A incubação de plaquetas com SNP (0,1 mM) por 15 min não revelou nenhuma proteína nitrada, mas quando as plaquetas foram tratadas com concentração maior de SNP (1 mM) ou SIN-1, houve o aparecimento de uma nitração de proteína nos resíduos de tirosina com uma massa molecular aparente de 110 kDa, identificada como alfa-actinina-1. A nitração foi aumentada em plaquetas ativadas com trombina. Por outro lado, amostras de plaquetas tratadas com SNP ou SIN-1 (0,1 e 1 mM) por 60 min não mostraram nitração de proteína nos resíduos de tirosina. No conjunto, estes dados sugerem que o NO inibe a adesão de plaquetas não ativadas e ativadas, por mecanismos dependentes e independentes de GMPc sendo que a nitração da a-actinina 1 plaquetária, parece ser o principal mecanismo responsável pelo componente independente de GMPc. Paralelamente, observamos que em concentrações elevadas, o SIN-1 diminui a viabilidade e a atividade da fosfatase ácida das plaquetas devido à formação de ânion superóxido.
Abstract: The inhibition of platelet adhesion to the subendothelium by nitric oxide (NO) is essential in preventing excessive aggregation and thrombus formation The objective of this work was to investigate the mechanisms of the NO on inhibition of human platelet adhesion looking for identify of the cGMP-dependent and independent mechanisms Adhesion assay was carried out in the 96-well microtiter plates coated by fibrinogen, using washed platelet (1,2 x 108 plaquetas/mL) from healthy volunteers. Depending on the experimental protocols, non activated or thrombin (50 mU7ml_)-activated platelets were incubated with NO donors (SNP or SIN-1), guanylyl cyclase inhibitor (ODQ), O2" scavenger (SOD) and -(-) epigallocatechin gallate, and allowed to adhere to the wells for either 15 or 60 min at 37°C. Cell toxicity was estimated using the MTT assay by platelets after exposure to NO donors. Nitrated proteins were detected by immunobloting. Purification and identification of them were done by Western blotting analysis and mass spectrometry respectively. Significant platelet adhesion was achieved when non-activated and activated platelets were kept on plates for 15 min or 60. The adhesion was significantly increased when platelets were activated with of thrombin. SNP (0,001 - 1000 nM) inhibited significantly both non-activated and thrombm-stimulated platelet adhesion. The MTT reduction assay showed that the exposure of platelets to SNP (0 1 and 1 mM) caused any toxic effect. Pretreatment of platelets with ODQ nearly abolished SNP (0.1 mM)-mediated cGMP elevation and the inhibition of platelet adhesion, but failed to affect the inhibitory effect of SNP (1 mM) on cell adhesion. Pre-incubation of platelets with SOD, reversed the effect of SNP 1mM. Epigalocatechin gallate did not affect the effect of SNP at 0.1 mM: on the other hand, reduced this effect at 1mM SNP. SIN-1 (0,001 - 100 jiM) concentration-dependently inhibited both non-activated and thrombin-stimulated platelet adhesion. In the higher concentration (1 mM), the SIN-1 inhibited almost all platelet adhesion. Pretreatment of platelets with ODQ markedly reverted the increased the levels of cGMP as well as decreased the inhibition of platelet adhesion by SIN-1 at 0,1 mM. SOD did not change the SIN-1 (0,1 mM)- mediated platelet inhibition, but reverted the platelet inhibition in all another conditions. MTT assay showed that the SIN-1 at 1 mM caused toxic effect in the platelets, and this effect was restored by SOD ECG did not affect the effect of SIN-1, excepted in the small concentration, when the inhibitory effect of thrombin-activated platelets was decreased. Immunobloting indicated the presence of nitrated protein that was recognized as alpha-actinin 1. In conclusion, cGMP-dependent and -independent mechanisms contribute to inhibition of platelet adhesion by NO, and that the a-actinic nitration can be the most important c GMP-independent mechanism. Parallel of this, we observed that the high concentration of SIN-1 decreased the viability and acid phosphatase activity by formation of superoxide anion.
Doutorado
Doutor em Farmacologia
37
Ganzetti, Giulia. "Tossicità cutanea da inibitori dell’Epidermal Growth Factor Receptor (EGFR): valutazione clinico-istologica ed approccio terapeutico." Doctoral thesis, Università Politecnica delle Marche, 2014. http://hdl.handle.net/11566/242853.
Full textAbstract:
L'inibizione del recettore del fattore di crescita epidermico (EGFR) rappresenta un importante
traguardo raggiunto nella ricerca e nello sviluppo della terapia dei tumori solidi epiteliali. Si tratta di
una classe di farmaci biologici che trovano attualmente ampio utilizzo nel trattamento di tumori del
colon-retto, del pancreas, del polmone (NSCLC), della testa-collo e della mammella, metastatici e
non responsivi alle chemioterapie convenzionali.
L'EGFR, oltre ad essere sovraespresso in numerose neoplasie epiteliali, è costituzionalmente
presente nei cheratinociti dello strato basale dell'epidermide, nella guaina esterna del follicolo
pilifero, nelle ghiandole sebacee e sudoripare eccrine, nelle cellule dendritiche e in diverse cellule
del tessuto connettivo.
L'inibizione farmaco-indotta del recettore determina l'attivazione di un meccanismo trasduzionale
responsabile di un'anormale maturazione e differenziazione cutanea, dell'aumento dell'apoptosi e
dell'esacerbazione della risposta infiammatoria, con conseguente danno tissutale a carico delle
strutture sopra menzionate.
All'interazione EGF/EGFR fa seguito la fosforilazione del residui tirosino-chinasici del dominio
intracellulare del recettore con conseguente attivazione di due distinte vie molecolari: la via RASMAPK
e la via PI3K-Akt, attraverso le quali l'EGFR regola importanti processi cellulari,
modulando, a livello nucleare, l'espressione di specifici fattori trascrizionali.
La via MAPK (Mitogen-Activated Protein Kinase) è direttamente coinvolta nella regolazione del
ciclo cellulare, promuovendo la proliferazione cellulare.
La via PI3K (Phosphatidylinositol 3-Kinase)-Akt è invece responsabile dei segnali di sopravvivenza
inviati alla cellula attraverso l'inibizione del meccanismo di morte cellulare programmata
(apoptosi).
Gli eventi avversi che più comunemente si riscontrano in corso di terapia con inibitori dell'EGFR
sono a carico della cute e dei suoi annessi e consistono in:
1. rash cutaneo acneiforme prevalentemente del tronco e del volto,
2. xerosi cutanea,
3. prurito,
4. fissurazioni, paronichie,
5. iperpigmentazione,
6. alterazioni della crescita dei peli,
7. mucositi.
La tossicità cutanea, oltre a causare una significativa alterazione dello stato di benessere fisico,
psichico e sociale del paziente, è dose dipendente e può essere tale da indurre una riduzione della
dose del farmaco somministrato o addirittura determinarne la sospensione,
Numerosi dati di letteratura evidenziano una correlazione diretta tra lo sviluppo e la gravità della
tossicità cutanea e la risposta alla terapia antitumorale.
Pertanto è plausibile che l'effetto antineoplastico e la tossicità cutanea secondaria all'uso di questi
farmaci condividano meccanismi fisiopatogenetici. Tutto questo è suggerito da recenti acquisizioni
scientifiche. In particolare, l'incidenza e la gravità clinica della tossicità cutanea, correlano
significativamente con la risposta clinica alla terapia antineoplastica. Inoltre dati preliminari su
piccoli gruppi indicano che l'espressione cutanea di Akt è inversamente correlata con lo sviluppo
della tossicità cutanea, e che pertanto potrebbe avere un significato predittivo. Al contrario l'attività
tissutale cutanea della MAPK potrebbe correlare direttamente con la tossicità cutanea.
La ricerca svolta nel triennio di Dottorato si è posta due obiettivi principali: valutare l'incidenza ed
il polimorfismo clinico delle manifestazioni cutanee in corso di terapia con inibitori dell'EGFR ed
eseguire indagini istologico-immunoistochimiche volte ad indagare l'aspetto morfologico delle
lesioni cutanee e l'esistenza di biomarcatori tissutali cutanei predittivi di sviluppo della tossicità
farmaco-indotta.The inhibition of epidermal growth factor receptor (EGFR) represents one of the major achievements in research and development of solid tumors' epithelial therapy. This is a class of biologics that are currently widely used in the treatment of metastatic and unresponsive neoplasms of the colon, pancreas, lung, (NSCLC), breast, head and neck . EGFR is over-expressed in many epithelial tumors, but it is also evident in keratinocytes of the basal layer of the epidermis, in the outer sheath of the hair follicle, in the sebaceous and eccrine sweat glands, in the dendritic cells and in connective tissue. EGFR drug inhibition brings to abnormal skin maturation and differentiation, to increased apoptosis and to enhanced inflammatory pathways, followed by tissue injury . The EGF/EGFR interaction leads to the phosphorylation of tyrosine residues of the EGFR intracytoplasmic domain, with the activation of two molecular pathways: RAS-MAPK and PI3KAkt. The RAS-MAPK (Mitogen-Activated Protein Kinase) is directly involved in the cell cycle regulation and in the promotion of cell proliferation . The PI3K (phosphatidylinositol 3-kinase)-Akt is responsible for apoptosis inhibition. The most common cutaneous adverse events during EGFR inhibitors therapy are: 1. acneiform rash, 2. xerosis, 3. itching, 4. fissures, paronychia, 5. hyperpigmentation, 6. hair changes, 7. mucositis. The skin toxicity is dose-related and it may lead to a dose reduction or drug interruption with a great impact on patients' quality of life . Literature data show a significant linear correlation between development and severity of skin toxicity and response to anti-tumor therapy . Therefore, both therapeutic effects and skin toxicity linked to these drugs could share physiopathogenetic mechanisms. Moreover, preliminary data on a small group of patients show that the cutaneous Akt expression is inversely correlated to skin toxicity, with a predictive value. Conversely, the cutaneous expression of MAPK may correlate directly with skin toxicity. Aims of the research are to assess the incidence and clinical polymorphism of cutaneous adverse events during EGFR, inhibitors therapy and to assess morphological study of skin lesions through histological examinations. Moreover immunohistochemical analyses will be performed in order to assess predictive cutaneous biomarkers of skin toxicity.
38
Romano, Chiara. "Meccanismi strutturali che regolano l'efficacia degli Inibitori delle Tirosin-Chinasi sull'attività catalitica di BCR-ABL." Doctoral thesis, Università di Catania, 2013. http://hdl.handle.net/10761/1389.
Full textAbstract:
L evidenza che l attività tirosin-chinasica costitutiva dell oncoproteina BCR-ABL fosse responsabile della patogenesi della Leucemia Mieloide Cronica (LMC) ha portato allo sviluppo di Inibitori delle Tirosin-Chinasi (TKIs) in grado di inibire il funzionamento del dominio catalitico di BCR-ABL. Tuttavia, circa il 30% dei pazienti di LMC sviluppa resistenze al trattamento farmacologico, in alcuni casi dovute alla generazione di mutazioni puntiformi nel dominio tirosin-chinasico di BCR-ABL. Ad eccezione della mutazione T315I, che genera un oncoproteina resistente al trattamento con TKIs di prima e seconda generazione, quali Imatinib (IM) e Dasatinib (DAS), ma è sensibile all inibitore di terza generazione Ponatinib (PON), non sono mai state riportate sostituzioni amminoacidiche a livello dei quattro residui E286, M318, I360 e D381 che, insieme alla T315, sono responsabili delle interazioni con i TKIs mediante la formazione di legami a idrogeno. In questo progetto sono stati, quindi, valutati gli effetti di mutazioni conservative e non conservative a livello di questi quattro residui sull attività oncogenica di BCR-ABL. È stato osservato che, ad eccezione della mutazione conservativa I360T, qualunque sostituzione che coinvolga questi residui abolisce completamente l attività catalitica e la capacità trasformante dell oncoproteina. Inoltre, la ridotta attività chinasica di BCR-ABLI360T è soppressa da tutti gli inibitori attualmente disponibili.
Mediante simulazioni di dinamica molecolare, sono state inoltre caratterizzate le interazioni fra IM, DAS e PON con i cinque residui di BCR-ABLI360T e BCR-ABLT315I con cui formano legami a idrogeno. È stato dimostrato che, la perdita del legame col residuo mutagenizzato T360 non influenza la sensibilità di BCR-ABLI360T al trattamento con i tre inibitori. Inoltre, sono state fornite ulteriori spiegazioni strutturali della diversa efficacia dei tre farmaci nel trattamento di BCR-ABLT315I.
Infine, avendo osservato che i residui E286, M318, I360 e D381 sono conservati in diverse tirosin-chinasi umane, coinvolte nella patogenesi di alcuni tipi di tumori, questi risultati possono contribuire alla progettazione di nuovi inibitori contro queste chinasi, che possano prevenire lo sviluppo di resistenze dovute a mutazioni puntiformi.
39
Zanatta, Samuele. "Sintesi di nuovi inibitori della Topoisomerasi II e della Protocheinchinasi CK2 con potenziale attività antitumorale." Doctoral thesis, Università degli studi di Padova, 2008. http://hdl.handle.net/11577/3425048.
Full textAbstract:
The Topoisomerase inhibitors play an essential role in the research of new molecules useful in the antitumor therapy. Topoisomerases are enzymes that regulate the topology of the DNA macromolecule. There are two type of Topoisomeases: Type I are enzymes that cleave single strand of DNA, type II cleaves both strands of DNA and they play an essential role on the cell life. The Topoisomerases are the targets of many antitumor agents currently used in the clinical practice.
Proteinkinase CK2 is another interesting target for the potential anti-neoplastic drugs. CK2 is a messenger-indipendent kinase that plays an essential role in cell growth and proliferation.
Some studies underline the interaction between Topoisomerase II and proteinkinase CK2 as CK2 is involved in the control of Topo II activity and programmed cell death (apoptosis). The synergism between Topoisomerase II inhibitors and CK2 inhibitors was studied considering that usually the treatment of cancer is a multicomponent therapy.
The research was developed with two goals:
1. The synthesis of new Topoisomerase II inhibitors represented by molecular hybrid obtained by functionalization of planar benzoquinazolinic system substituted by methanesulfonamidoanilinic chain of Amsacrine, known drug Topo II inhibitors.
2. The synthesis of new quinolinone proteinkinase CK2 inhibitors and coumarin proteinkinase CK2 inhibitors.
40
CASTI, MARTA. "Cristallizzazione del solfato di sodio in calcari biomicritici: l'uso di inibitori per la mitigazione del degrado." Doctoral thesis, Università degli Studi di Cagliari, 2016. http://hdl.handle.net/11584/266702.
Full textAbstract:
Salt crystallisation is one of the most harmful decay problems in porous materials. Especially ancient building and archaeological sites can show very intense damage (e.g. detachment and pulverization of the materials) that produce a strong loss of matter and so cultural identity. Mainly hypogea show salt crystallisation due to capillary rising. However also anthropic sources like pollution or cement can be found in these sites producing decay. Sodium sulphate is very common where there is the combination between cement and pollution. This salt is very harmful for porous materials due to his high crystallization pressure and the possibility to change to anhydrous phase to hydrated one. When microclimatic variations occur due to semi-confined environment, phase transitions of sodium sulphate take place with consequence on porous material decay.
This research studied sodium sulphate crystallisation on a Mediterranean biomicritic limestone and the action of crystallisation inhibitors to mitigate it.
The early Christian burial of Munazio Ireneo was studied to understand sodium sulphate crystallisation in biomicritic limestone. Diagnostic investigation and microclimatic monitoring were carried out to understand decay phenomena. The hypogeum is a semi-confined environment and high damage can be found due to phase transition of sodium sulphate.
Crystallisation of a Mediterranean biomicric limestone was also studied in laboratory by XRD, OM, SEM, MIP and NMR analysis. Crystallisation inhibitors were tested on the limestone in sodium sulphate solution capillary rising. Two different inhibitors were applied with two distinct system (immersion and poultice). XRD, MIP and SEM analysis were carried out to understand the modification of the inhibitor on the stone microstructure. The loss of material was evaluated to understand the effect of the inhibitors comparing the loss of material in the blank sample. A greater loss of material than the blank sample was found when the first inhibitor was applied through both of the system; the second inhibitor had a minor loss of material but chromatic variations could be found on the stone.
41
GUIDA, ANNALISA. "Decifrare la risposta immunitaria ai checkpoint inibitori e ricerca di nuovi biomarcatori nel carcinoma renale metastatico." Doctoral thesis, Università degli studi di Modena e Reggio Emilia, 2020. http://hdl.handle.net/11380/1201007.
Full textAbstract:
Nivolumab rappresenta attualmente uno standard per il trattamento di seconda linea del carcinoma renale metastatico (mRCC). E’ un anticorpo monoclonale IgG4 diretto contro programmed death-1 (PD-1) ed agisce inibendo il legame tra PD-1 e il suo ligando. Nella maggior parte dei pazienti, il farmaco ripristina la risposta immunitaria antitumorale T-mediata, migliorando la sopravvivenza e il tasso di rispsote obiettive. Tuttavia, in un certo numero di pazienti non si osserva una risposta al trattamento, motivando la crescente necessità di predire e incrementare il numero di pazienti responsive al trattamento con inibitori dei checkpoint immunitari. Il sistema immunitario rappresenta quindi un mediatore dell’attività del farmaco, suggerendo che l’equilibrio tra agenti regolatori positivi e negativi del sistema immunitario possono avere un ruolo chiave nell’efficacia terapeutica. Oggetto di attenzione sono fattori solubili coinvolti nel reclutamento e nella regolazione delle cellule T effettrici, i sottotipi di cellule T regolatorie e il rapporto tra cellule T effetrici e regolatorie.
L’obiettivo principale del progetto è identificare biomarcatori sierici e immunitari in pazienti affetti da mRCC e trattati con Nivolumab per predire quali pazienti possono beneficiare del trattamento.
E’ uno studio prospettico, longitdinale, su pazienti affetti da mRCC trattati con Nivolumab nella normale pratica clinica. Lo studio indaga le variazioni nei principali parametri immunitari nella popolazione in esame, attraverso l’analisi di prelievi ematici al basale e a distanza di 1, 2, 3, 6 ed eventualmente 12 mesi. Vengono prelevati 30 mL di sangue periferico da cui sono estratte le cellule perferiche mononucleate. Le cellule vengono conservate in azoto liquido. Vengono testati i seguenti anticorpi: CD3, CD4, CD8, CD25, CD127, FoxP3, ICOS, CXCXR6, CXCR3, CD95, CD45RA, CCR7, CD95, HLA-DR, CD38, CD28, CD27, CD71, CD87, CD39, TIM3, TIGIT, CCR4, Glycoforin, PD-1/IgG4, CD57, KI-67. Questa citometria a flusso multicolor viene analizzata in collaborazione con il Dr. Lugli (Humanitas Milano). I campioni vengono ottenuti attraverso un citometro a flusso BD Symphony. Per l’analisi dei dati viene utilizzato FlowJo 9.6 per MacOSX.
Da gennaio 2016 a ottobre 2018 sono stati arruolati 21 pazienti. L’età media è di 60 anni (33-79). La maggiro parte dei pazienti ha un’istologia a cellule chiare (90%). Il Nivolumab è stato somministrato come terapia di seconda linea nel 59% dei casi e di terza linea nel 27% dei casi. Secondo International Metastatic Renal Cell Carcinoma Database Consortium Score (IMDC score) il 72% ha un rischio prognostico intermedio e il 14% ha un rischio prognostico sfavorevole. Con un follow up mediano di 14 mesi (min 2 max 31), il tasso di sopravvivenza a 6 e 12 mesi è rispettivamente del 74% (95%CI 48-88) e del 47% (95%CI 22-68). La mediana di sopravvivenza libera da progressione è di 4.2 mesi (95%CI 3-10). Un controllo di malattia è stato registrato in 8 pazienti (40%) definiti responder (R). Al momento dell’analisi il trattamento era in corso di 4 pazienti. Dati preliminari mostrano che KI67, marker di proliferazione, aumenta dopo 15 giorni di trattamento. Coerentemente anche HLA-DR e CD38 sono aumentati.
La riattivazione del sistema immunitario è l’obiettivo del trattamento con Nivolumab. Auspichiamo di individuare marker facilmente misurabili predittivi di risposta al trattamento. Un follow up più lungo sarà necesario per confermare i dati preliminari.Nivolumab represents the new second-line treatment for metastatic renal cell carcinoma (mRCC). This drug is a fully human IgG4 against PD-1 and his role is to inhibits programmed death-1 (PD-1)/PD-1 ligand 1 (PD-L1) immune checkpoint. In the majority of patients, this drug is able to restore the patient’s tumour-specific T-cell-mediated response thus improving both overall survival and objective response rate. However, a lack of clinical response occurs in a number of patients, raising questions about how to predict and increase the number of patients who receive long-term clinical benefit from immune checkpoint therapy. The requirement for the immune system as a mediator of the drug's activity suggests that the balance of positive and negative regulators of the immune response at the time of therapy may be critical for therapy efficacy. Of particular interest are soluble factors involved in the recruitment and regulation of effector T cells, the frequency of different subsets of regulatory T cells and the ratio between effector T cells and regulatory T cells. The main aim of this project is to identify immune and serum biomarkers that are modulated in patients with metastatic renal cell carcinoma during and treated with immune checkpoint inhibitors and that can discriminate patients who most likely benefit from such therapy. This is a prospective, longitudinal, study on patients with mRCC who will receive Nivolumab in standard clinical practice. The project investigates changes in main immune parameters in patients with mRCC treated with nivolumab by analysing blood samples at baseline and after 1, 2, 3, 6 and eventually 12 months. Thirty mL of blood were collected and peripheral blood mononuclear cells (PBMC) were isolated according to standard procedures. PBMC were stored in liquid nitrogen. Then, PBMC were thawed according to standard procedures and stained with a viability probe and the following antibodies recognizing: CD3, CD4, CD8, CD25, CD127, FoxP3, ICOS, CXCXR6, CXCR3, CD95, CD45RA, CCR7, CD95, HLA-DR, CD38, CD28, CD27, CD71, CD87, CD39, TIM3, TIGIT, CCR4, Glycoforin, PD-1/IgG4, CD57, KI-67. This 28-color multicolour flow cytometry panel was set up in collaboration with Dr. Lugli (Humanitas, Milan). Samples were acquired by using a BD Symphony flow cytometer. Compensation was set using single stained controls and gating strategy was checked by using FMO. Data analysis was performed using FlowJo 9.6 under Mac OSX. From January 2016 until October 2018 we enrolled 21 patients. The median age was 60 years (33-79). The majority of patients had clear cell histology (90%). Nivolumab was given as second-line therapy in 57% of patients, as third line therapy in 29% of cases. According with International Metastatic Renal Cell Carcinoma Database Consortium Score (IMDC score) 72% of patients were in the intermediate prognostic risk group and 14% in poor risk. With a median follow-up of 14 months (min: 2 max: 31), 6-months and 12-months survival rate were 74% (95%CI 48-88) and 47% (95%CI 22-68), respectively. Median progression-free survival (PFS) was 4.2 months (95% 3-10). Disease control was achieved in 8 patients (40%), defined responder (R). At time of analysis treatment was ongoing in 4 patients. Preliminary data on PBMC show that Ki-67, a marker of cell proliferation, is increased after 15 days of therapy in some patients. Accordingly, the expression of HLA-DR and CD38 are increased. Reactivation of the immune system is one of the main goals of nivolumab. We expect to identify easily measurable immune biomarkers that predict the responsiveness to nivolumab. Finding novel biomarkers that predict the response to therapy with nivolumab and monitor its efficacy can be of great benefit for the success of treatment. Longer follow up is required to assess preliminary immunological data.
42
CASTIGLIONE, GIULIA. "Effetti metabolici in vitro degli inibitori delle deacetilasi istoniche su colture primarie di epatociti di ratto." Doctoral thesis, Università degli studi di Padova, 2009. http://hdl.handle.net/11577/3426424.
Full textAbstract:
Histone acetylation/deacetylation are pivotal epigenetic mechanisms responsible for regulating chromatin structure and DNA transcription, respectively leading to a higher o a lesser degree of accessibility to transcription factors and RNA polymerase, i.e. turning on/off genetic expression. It has been described that histone deacetylase inhibitors (HDAIs) can influence hepatic DNA expression and tumor cell lines differentiation but few data about their effects on hepatocytes are available.
Freshly isolated Sprague-Dawley rat hepatocytes seeded on matrigel were cultured in control medium or in medium containing one of the following HDAIs: sodium butyrate (NaBu, 500 nM), valproic acid (VPA, 2 mM) or tricostatin A (TSA, 10 mM). After 4 days, cell viability and function were tested by albumin secretion (sandwich ELISA, normalizing the data with the protein content assayed by the Bradford’s method with Comassie Blue), albumin expression (RT-PCR analysis), urea synthesis after ammonia challenge (colorimetric method), cytotoxicity (LDH release measurement) and cell proliferation (BrDU incorporation).
Albumin secretion doubled after hepatocyte exposure to NaBu in comparison to controls (92.35 ±18.97 ?g/mg protein vs 44.36 ±7.81 ?g/mg protein; p=0.02) while it was inhibited by VPA (25.09 ± 3.02 vs 44.36 ±7.81 ?g/mg protein; p=0.03) and unaffected by TSA (46.9 ± 9.12 ?g/mg protein vs 44.36 ±7.81 ?g/mg protein; p=0.83). A similar behaviour was observed at RT-PCR analysis of albumin expression (data are relative values compared to controls which are by default 1; VPA: 2.2; NaBu: 12.6; TSA: 1.8). Urea metabolism was preserved in all conditions (controls: 25.47 ± 4.06 ?g/mg protein/h; VPA: 23.45± 4.87 ?g/mg protein/h, p=0.75; NaBu: 30.53 ± 6.98 ?g/mg protein/h, p=0.54; TSA: 25.89 ± 5.97 ?g/mg protein/h, p=0.95). Cells were significantly less viable when exposed to NaBu (54.26 %, p<0.001) or VPA (40.12 %, p=0.0097) than controls (70.74%) while TSA was less cytotoxic (67.85 %, p=0.56). Hepatocyte proliferation was increased with VPA (19.82 ± 3.19 BrDU-positive cells/mm2) and decreased with NaBu (2.05 ± 0.84 BrDU-positive cells/mm2) when compared to controls (5.88 ± 0.70 BrDU-positive cells/mm2).
NABU appears to be a differentiating agent on cultured hepatocyte, being able to stimulate albumin expression and production. Urea synthesis was however unaffected. NaBu appears to be less hepatotoxic than VPA, which provides a good proliferative stimulus. TSA played a quasi neutral role. These results suggest a possible use of HDAIs to improve hepatic specific functions in bioartificial liver devices.L’acetilazione e la deacetilazione del DNA sono meccanismi epigenetici cruciali responsabili della regolazione della struttura della cromatina e della trascrizione del DNA, che consentono una maggiore o minore accessibilità ai fattori di trascrizione e alla RNA polimerasi, inducendo o inibendo rispettivamente l’espressione genica. In letteratura è descritto che gli inibitori della deacetilazione degli istoni (HDACIs = histone deacetylase inhibitors) possono influenzare il DNA inducendo la traduzione di geni tipicamente espressi nelle cellule del fegato ed il differenziamento di linee cellulari tumorali verso il pattern epatico, tuttavia sono ancora pochi i dati disponibili sui loro specifici effetti sugli epatociti. Epatociti di ratto Sprague-Dawley appena isolati sono stati seminati su piastre con substrato di matrigel e coltivati con medium di controllo o con medium contenente uno dei seguenti HDACIs: il sodio butirrato (NaBu, 500 nM), l’acido valproico (VPA, 2 mM) e la tricostatina A (TSA, 10 mM). Dopo 4 giorni sono stati determinati i seguenti parametri: la funzionalità del metabolismo epatico tramite l’analisi della secrezione di albumina (sandwich ELISA, normalizzando i dati per il contenuto proteico misurato con il metodo di Bradford tramite il Blu di Comassie), l’analisi dell’espressione genica di albumina (analisi di Real Time PCR, RT-PCR), la quantificazione della sintesi di urea (realizzata mediante metodo colorimetrico con il carico di ammoniaca), la stima della citotossicità (quantificazione del rilascio di latticodeidrogenasi [LDH] mediante spettrofotometria) e della proliferazione cellulare (incorporazione di bromodesossiuridina [BrDU] mediante microscopia a fluorescenza). La secrezione di albumina è risultata raddoppiata dopo l’esposizione degli epatociti al NaBu rispetto ai controlli (92.35 ± 18.97 ?g/mg proteine contro 44.36 ± 7.81 ?g/mg proteine; p = 0.02), mentre è stata inibita dal VPA (25.09 ± 3.02 ?g/mg proteine contro 44.36 ± 7.81 ?g/mg proteine; p = 0.03) e non è influenzata dal TSA (46.9 ± 9.12 ?g/mg proteine contro 44.36 ± 7.81 ?g/mg proteine; p = 0.83). L’analisi dell’espressione di albumina tramite RT-PCR conferma tali risultati (i dati sono espressi come valori relativi rispetto ai controlli i quali per convenzione hanno valore 1; VPA = 2.2; NaBu = 2.6; TSA = 1.8). Il metabolismo dell’urea è risultato inalterato (controlli = 25.47 ± 4.06 ?g/mg proteine/ora; VPA = 23.45 ± 4.87 ?g/mg proteine/ora, p = 0.75; NaBu = 30.53 ± 6.98 ?g/mg proteine/ora, p = 0.54; TSA = 25.89 ± 5.97 ?g/mg proteine/ora, p = 0.95). Le cellule sono risultate significativamente meno vitali se esposte al NaBu (54.26 %, p <0.001) ed al VPA (40.12 %, p = 0.0097) rispetto ai controlli (70.74%), mentre il TSA si è dimostrato meno citotossico (67.85 %, p = 0.56). La proliferazione degli epatociti è risultata incrementata nell’esposizione al VPA (19.82 ± 3.19 cellule BrDU-positive/mm2, p <0.01) mentre è diminuita con il NaBu (2.05 ± 0.84 cellule BrDU-positive/mm2) rispetto ai controlli (5.88 ± 0.70 cellule BrDU-positive/mm2, p <0.01). Il NaBu sembra quindi essere un agente di differenziazione per gli epatociti in grado di stimolare l’espressione genica dell’albumina e la sua secrezione. Tuttavia la sintesi di urea sembra non esserne influenzata. Il NaBu è risultato meno epatotossico del VPA, il quale costituisce peraltro un buono stimolo proliferativo. Il TSA gioca un ruolo quasi neutro ai dosaggi testati. Questi risultati suggeriscono di approfondire un possibile utilizzo degli HDACIs per incrementare le funzioni tipiche degli epatociti non solo in vitro ma anche nei dispositivi per il fegato bioartificiale.
43
PAROLIN, DEBORA. "MESSA A PUNTO DI TEST ALTERNATIVI PER LO SCREENING DI POTENZIALI INIBITORI DELLA PROTEASI DI HIV-1." Doctoral thesis, Università degli Studi di Milano, 2014. http://hdl.handle.net/2434/231147.
Full textAbstract:
Current AIDS therapies are mainly based on the use of inhibitors targeting the active site of enzymes which are crucial for the HIV-1 replication cycle. However, due to the HIV-1 high mutation frequency and the small target size, escape mutants emerge in the long term which show resistance to such inhibitors. In the attempt to overcome this problem, it is therefore desirable to switch the attention to target enzymes which are crucial for HIV-1 survival. My attention was drawn in particular to the HIV-1 protease precursor maturation process as a possible pharmacological target.
The currently available tests for the screening of putative inhibitors of enzyme activity are based on the use of HIV-1-infected cell cultures which make use of live virus and therefore are cumbersome and expensive. I therefore decided to try to set up alternative methods based on the inhibition of specific target functions by developing in vitro as well as in vivo assays based on both prokaryotic and eukaryotic cells, thus avoiding the use of live virus. These assays might be proposed as a first-line screening test which might subsequently be confirmed by performing the live-virus assay only on pre-selected promising candidates.
In order to meet the objectives it was necessary to clone and to express the HIV-1 protease precursor, a molecule endowed with intrinsic folding and self-processing features, with the aim of studying its properties in vitro on isolated molecules, as well an in vivo, inside bacterial as well as eukaryotic cells.
The first aim was the production and purification of the HIV-1 protease precursor in a prokaryotic cell. The purified protein would be used in immuno-enzyme assays for a detailed study of its folding process, thus gaining access to the possibility of checking the activity of putative folding inhibitors. The precursor was in fact purified making use of the His tag. However, the extraction procedures required to stabilize such a hydrophobic and maturation-prone molecule turned out to be too harsh and led to the loss of maturation capacity. Therefore, I decided to postpone this part of the project and to concentrate on the in vivo assay, which looked more promising in the short term. The second target was more quickly met: the aim was to develop a quick and reliable microbiological assay suitable to screen for folding inhibitors and for inhibitors of HIV-1 protease activity. The bacterial strain carrying the precursor gene can be induced to express the precursor which quickly maturates into protease, thus being toxic for the bacterial host. This growth arrest can be released by treatment with inhibitors of the folding process, which limit the amount of mature enzyme produced, and by inhibitors of the enzyme activity, thus resulting in bacterial cell survival. This test can be modified for large-scale application and has been used as the starting point for the development of a similar test making use of a human lymphoblastoid cell line expressing the protease precursor.
44
Cassani, Lorenzo. "Sintesi e studio della reattività di derivati degli acidi tioidrossamici, potenziali inibitori della S-glucosiltransferase (S-UGT)." Master's thesis, Alma Mater Studiorum - Università di Bologna, 2017. http://amslaurea.unibo.it/14461/.
Full textAbstract:
Lo scopo di questo lavoro è stata la sintesi dei tioidrossimati, composti contenenti la funzione Z-tioidrossimata. Questi sono stati ottenuti partendo da cinque diverse aldeidi che, una volta trasformate in ossime, sono state fatte reagire ciascuna con il metil N-acetil cisteinato, estere della (L)-N-acetilcisteina, a dare la funzione Z-tioidrossimata. Durante la sintesi, sulla base di lavori svolti precedentemente dal gruppo di ricerca presso cui ho svolto il tirocinio, si sono seguite due procedure differenti: la prima che utilizza la N-clorosuccinimide, la seconda che utilizza, invece, una soluzione di ipoclorito. Entrambe hanno portato a delle buone rese anche se la seconda procedura è risultata essere la migliore, soprattutto per quanto riguarda il tempo di reazione. Successivamente i tioidrossimati sono stati sottoposti a processi di solfatazione-eliminazione, eliminazione-acidificazione al fine di ottenere i corrispondenti isotiocianati e acidi tioidrossamici. Poichè questi due processi si sono rivelati poco efficienti, si è cercato di migliorarli apportando diverse modifiche e ripetendoli di seguito più e più volte. Alcuni risultati incoraggianti sono stati ottenuti anche se la metodica messa a punto non è risultata essere applicabile a tutti i substrati impiegati.
45
MATTEO, M. DE. "Tecnologie combinatoriali per l'identificazione di inibitori di enzimi ART : design, sintesi e screening di librerie pseudo-peptidiche." Doctoral thesis, Università degli Studi di Milano, 2007. http://hdl.handle.net/2434/33621.
Full textAbstract:
Combinatorial technologies for identifying enzymes ART inhibitors: design, synthesis and screening of pseudo-hexapeptidic libraries The subject of this thesis, peptides and peptidomimetics, recently has been an area of great interest for the drug discovery process. The work described in this thesis has been planned for and accomplished with combinatorial technologies. The aim has been to create new peptidomimetic libraries for the purpose of identifying synthetic molecules capable of mono-ADP-ribosyl-transferases. The work can be divided as follows: 1) The development of synthetic methodology for the production of a large number of compounds: synthesis of 480 pseudo- hexapeptides that contain an azabicyclo[X.Y.0] alkane amino acid residue. 2) Development of immunoassay for the screening of the peptidomimetic library and development of an affinity chromatography system to purify the intracellular ART enzyme. 3) Purification and quality control of the peptidomimetic library. The main result obtained from the work was the discovery of novel, selective pseudo-hexapeptides inhibitors of mono-ADP-ribosyl-transferases.
46
Castelli, R. "ELEVATA INCIDENZA DI LINFOMI INDOLENTI NON FOLLICOLARI NEI PAZIENTI CON CARENZA ACQUISITA DI INIBITORI DELLA C1 ESTERASI." Doctoral thesis, Università degli Studi di Milano, 2016. http://hdl.handle.net/2434/358729.
Full textAbstract:
I linfomi della zona marginale sono malattie linfoproliferative rare, e rappresentano, nella popolazione generale, circa il 10% di tutti i linfomi non Hodgkin. I pazienti con carenza acquisita di inibitore della C1 esterasi, rappresentano una popolazione ad elevato rischio di sviluppare malattie linfoproliferative, si calcola infatti che il 33% di tali pazienti presenta o presenterà una malattia linfoproliferativa conclamata.
In questo studio abbiamo valutato una casistica di 72 pazienti affetti da carenza acquisita di inibitore della C1 esterasi seguiti nel nostro centro per 15 anni (range 1-24 anni) allo scopo di valutare la prevalenza della malattie linfoproliferative in tale popolazione e se particolari istotipi di malattia linfoproliferativa prevalgono in questa popolazione rispetto alla popolazione generale. I pazienti presentano una età mediana di 71 anni (range 64-79 anni), l’età mediana all’ insorgenza dei sintomi è di 57,5 anni (range 50-66 anni).
Ventiquattro pazienti presentavano malattie linfoproliferative. Venti pazienti presentavano malattie linfoproliferative indolenti di tipo non follicolare (il 75% costituito da linfomi marginali splenici), un paziente ha presentato un linfoma follicolare, mentre tre pazienti hanno presentato malattie linfoproliferative ad elevato grado di malignità (2 linfomi diffusi a grandi cellule B ed un linfoma mantellare). La malattia linfoproliferativa è stata diagnosticata all’ insorgenza dei sintomi di angioedema in 15 pazienti nei rimanenti durante il decorso dell’angioedema.
2 dei 24 pazienti sono in “watchful wait” pertanto allo stato attuale non ricevano alcun trattamento per la malattia linfoproliferativa. 13 pazienti hanno ricevuto un trattamento chemioterapico e due pazienti sono stati trattati con Rituximab. La sola splenectomia è stata effettuata in 3 pazienti.
Tutti i pazienti trattati per la malattia linfoproliferativa con trattamento chemio/immunoterapico o splenectomia hanno sperimentato un miglioramento dei sintomi clinici di angioedema o un miglioramento dei parametri complementari.
Il nostro studio suggerisce che, i pazienti con carenza acquisita di C1-inibitore hanno una elevata prevalenza di linfomi della zona marginale rispetto alla popolazione generale. L’ origine post-germinale di tali malattie linfoproliferative, suggerisce che la stimolazione antigenica continua svolge un ruolo fondamentale nella patogenesi di tale condizioni.
La proliferazione clonale B cellulare rappresenta un denominatore comune nei pazienti con carenza acquisita di C1-inibitore sia nei pazienti che presentano anticorpi inattivanti C1 inibitore che in quelli che sviluppano malattia linfoproliferativa.Marginal zone lymphoma represents about 10% of all non-Hodgkin lymphomas (NHLs). 33% of patients with acquired angioedema (AAE) due to acquired C1-inhibitor (C1-INH) deficiency (C1-INH-AAE) have or will develop NHLs. C1-INH-AAE is a rare condition. We report the follow-up of 72 C1-INH-AAE patients, followed for a median of 15 years (range 1– 24). Median age was 71 (range 64–79) years; median age at onset of angioedema symptoms was 575 (range 50–66) years and it was 63 [range 45–80) years at diagnosis]. Twenty patients were diagnosed with low-grade non-follicular B-cell lymphomas (75% were splenic MZL), one with follicular and three with high-grade lymphomas (two diffuse large B-cell lymphomas and one mantle cell lymphoma). Fifteen NHLs were diagnosed at onset of AAE or thereafter (3 months to 7 years), eight had already been diagnosed at onset of angioedema. Two of 24 patients remain on watchful wait. Thirthen of 24 received chemotherapy, two received rituximab. Three underwent splenectomy. All 18 patients receiving therapy for NHL experienced post-treatment reduction in AAE symptoms. Our study suggests that clonal B-cell proliferation is the pathology underlying AAE leading to production of C1-INH-neutralizing autoantibodies and to NHLs. The postgerminal centre origin of NHL suggests that immune stimulation may contribute to lymphomagenesis.
47
Saracino, Laura. "Coordinamento di Trial Clinici multicentrici finalizzati allo studio e all'ottimizzazione dell'outcome del trapianto epatico." Doctoral thesis, Università degli studi di Padova, 2014. http://hdl.handle.net/11577/3423830.
Full textAbstract:
Introduction. Despite being recognized a clinical application for almost thirty years, data are very scarce regarding liver transplant patients’ long term health issues. Patient survival surpasses the 10 year threshold in increasing numbers, exposing this population to risks from chronic use of immunosuppressive drugs.
Methods. The Liver Transplantation Centre of Padua coordinated two spontaneous multricentric studies: a longitudinal observational retrospective multicentre (12 Italian Liver Transplant Centres,) assessing long term survival and main characteristics of the recipient population; and EPOCAL, a spontaneous Phase II Interventional Multicentric (7 Italian Liver Transplantation Centres) Open-label Randomized Control Trial, assessing acute rejection and graft loss within 3 months of liver transplantation, renal function, incidence of adverse events.
Results. Data on 3008 liver transplantations performed in Italy between 1983–1999 were documented by an eCRF. Data of 2846 patients with sufficient follow-up were used for further analysis. 20 years patient survival was estimated at 51 %.
A total of 139 patients were enrolled in the EPOCAL study, 92 in the study group and 47 in control group. We did not find any significant difference between the two groups prior intervention. The primary end-point in the study group was achieved: biopsy-proven acute rejection was under 25 % (under 14 %) (p < 0.05). Renal function was significantly better in the study group at 3 months (p < 0.05).
Conclusion. These studies show an Italian long term liver transplantation cohort with excellent survival profiles. We show efficacy and safety of an immunosuppressive protocol with minimization of calcineurin inhibitor (tacrolimus) and early introduction of everolimus. Together, we have a path towards long term survival of patients with sustainable immunosuppressive protocols.Introduzione. Nonostante sia un'applicazione clinica da quasi trent'anni, i dati relativi allo stato di salute a lungo termine dei pazienti trapiantati di fegato sono scarsi. Il numero dei pazienti che raggiungono la soglia di sopravvivenza a 10 anni è in aumento, esponendo questa popolazione al rischi associati all'uso cronico degli immunosoppressori. Metodi. Il Centro Trapianti di Fegato di Padova ha coordinato due studi multicentrici spontanei: uno studio retrospettivo, osservazionale, longitudinale, multicentrico (12 Centri Trapianto di Fegato italiani) che valuta la sopravvivenza a lungo termine e le principali caratteristiche della popolazione ricevente; e EPOCAL uno studio spontaneo di Fase II, interventistico, multicentrico (7 Centri Trapianto di Fegato italiani), in aperto, randomizzato, controllato che valuta il rigetto e la perdita del graft a 3 mesi dal trapianto, la funzione renale e l'incidenza degli eventi avversi. Risultati. I dati su 3008 trapianti di fegato effettuati in Italia dal 1993 al 1999 sono stati registrati in un eCRF. I dati di 2846 pazienti con un sufficiente follow-up sono stati usati per le analisi successive. La sopravvivenza a 20 anni dal trapianto è stata stimata al 51%. Un totale di 139 pazienti è stato arruolato nello studio EPOCAL, 92 nel gruppo di studio e 47 nel gruppo di controllo. Non abbiamo trovato differenze significative tra i due gruppi prima all'arruolamento. L'end-point primario dello studio è stato raggiunto: i rigetti acuti confermati da biopsia erano meno del 25 % (sotto 14 %) (p < 0,05). La funzione renale a tre mesi era significativamente migliore nel gruppo di studio (p < 0,05). Conclusioni. Questi studi presentano un profilo di sopravvivenza eccellente della coorte di pazienti italiani trapiantati di fegato da lungo tempo. Mostriamo sicurezza ed efficacia di un protocollo immunosoppressivo con minimizzazione degli inibitori della calcineurina (tacrolimus), e l'introduzione precoce di everolimus. L'insieme dei risultati mostra una strada verso la sopravvivenza a lungo termine dei pazienti con protocolli immunosoppressivi sostenibili.
48
GALIMBERTI, CHIARA. "Preliminary characterization of CR13626, a novel tyrosine kinase inhibitor for the treatment of glioblastoma." Doctoral thesis, Università degli Studi di Milano-Bicocca, 2022. http://hdl.handle.net/10281/365481.
Full textAbstract:
Presso l’azienda Rottapharm Biotech è emersa una nuova piccola molecola chiamata CR13626 che è stata identificata come un inibitore tirosin chinasico innovativo caratterizzato da un buon tropismo cerebrale e in grado di inibire alcune chinasi rilevanti nello sviluppo del glioblastoma (GBM), la più comune e maligna forma di tumore primario cerebrale nell’uomo, quali le chinasi EGFR, VEGR2, Fyn, Yes, Lck, HGK e RET. Inoltre, CR13626 non è risultato essere un substrato dei trasportatori di membrana implicati nel processo di resistenza multifarmaco e che in un contesto tumorale contribuiscono alla resistenza del tumore ad uno specifico trattamento farmacologico. Così, lo scopo del mio progetto di tesi è stato quello di caratterizzare l’attività di CR13626, sia in vitro che in vivo, in modo da sondare il suo potenziale per la terapia del glioblastoma.
Con questo scopo per prima cosa ho valutato l’abilità di CR13626 di inibire l’attivazione indotta da ligando dei recettori EGFR e VEGFR2 in cellule di glioblastoma U87MG e in cellule endoteliali HUVEC-C, rispettivamente, attraverso esperimenti di immunoblotting. Inoltre, per definire meglio la potenza di CR13626 nell’inibire la chinasi Fyn in un modello cellulare, ho valutato la capacità del composto nel ridurre i livelli di fosforilazione di Tau mediati da Fyn utilizzando cellule HEK-239 co-transfettate per esprimere sia Fyn e Tau e un saggio ELISA messo a punto ad hoc.
Inoltre, dal momento che VEGFR2 è ampiamente coinvolto nel promuovere il processo di angiogenesi, il quale a sua volta contribuisce a fornire un appropriato sostentamento al tumore, ho valutato la capacità di CR13626 di ridurre la formazione di strutture rappresentative di nuovi vasi come indicazione di eventuali proprietà antiangiogenetiche del composto in un saggio volto a investigare la formazione di queste strutture mediante l’utilizzo di cellule HUVEC-C.
Successivamente ho verificato l’effetto di CR13626 sulla proliferazione cellulare in diverse linee cellulari di glioblastoma coltivate in 2D, ed in particolare nelle seguenti linee: U87MG, U373, U87MG vIII e T98G. Ciascuna di esse possiede infatti alterazioni e mutazioni genetiche presenti anche nelle cellule tumorali di GBM. Con lo scopo di verificare un’eventuale tossicità di CR13626 nei confronti di cellule non tumorali, ho verificato l’effetto di CR13626 sulla linea non tumorale di cellule HEK-293.
Inoltre, dal momento che gli sferoidi 3D sono considerati più rappresentativi della complessità del microambiente tumorale rispetto alle colture 2D, costituendo quindi un modello più attendibile per verificare la risposta cellulare ad un trattamento farmacologico, ho valutato l’efficacia di CR13626 nel ridurre la proliferazione di cellule U87MG coltivate in 3D.
Infine, l’attività antitumorale in vivo di CR13626 è stata valutata in un modello murino ortotopico eterologo di glioblastoma basato sull’impianto di cellule U87MG-Luciferate nel cervello di topi nudi (esperimento condotto presso i laboratori della società Accelera Srl, Nerviano, Italia). Gli animali sono stati trattati oralmente con CR13626 alla dose di 50 mg/kg/giorno o con il rispettivo veicolo per 10 giorni, partendo al giorno 9 dall’impianto delle cellule tumorali. La progressione del tumore è stata valutata tramite la misura di bioluminescenza (BLI) alla fine del trattamento (giorno 19) e durante i successivi giorni di osservazione (giorni 26 e 33) e la sopravvivenza degli animali è stata successivamente monitorata. In parallelo, in un gruppo satellite di animali con analogo impianto tumorale e trattati oralmente con CR13626 per 5 giorni alla dose di 50 mg/kg/giorno, sono state determinate le concentrazioni cerebrali e plasmatiche del composto.At Rottapharm Biotech, a novel small molecule compound called CR13626 has emerged as a novel tyrosine kinase inhibitor with a good tropism for the brain and the ability to inhibit EGFR, VEGR2, Fyn, Yes, Lck, HGK and RET kinases relevant for the development of glioblastoma (GBM), the most common and malignant type of primary brain tumor. In addition, CR13626 resulted to be not a substrate of multidrug transporters involved in tumour resistance. Thus, the aim of my project is to characterize the activity of the compound, both in vitro and in vivo, to investigate the potential of CR13626 for glioblastoma therapy. To this purpose, I firstly investigated the ability of CR13626 to inhibit the ligand-induced activation of EGFR and VEGFR2 receptors in U87MG GBM and HUVEC-C cells, respectively, through western blot experiments. To better define the potency of CR13626 on Fyn kinase in a cellular model, I exploited the Fyn-mediated phosphorylation levels of Tau in Fyn/Tau co-transfected HEK-293 cells through a customized indirect-ELISA. Because of VEGFR2 is largely involved in promoting angiogenesis process, which contributes to tumor sustenance, I evaluated the ability of CR13626 to reduce the formation of new vessel-like structures in a HUVEC-C tube formation assay, as an indication of its antiangiogenic properties. Then I verified the effect of CR13626 on cellular proliferation in different 2D human GBM cell lines such as U87MG, U373, U87MG vIII and T98G, each harboring some of the genetic alterations/mutations present in GBM tumor cells. I also evaluated the activity of CR13626 on HEK-293 cells to assess the effect of the compound on a non-tumoral human cell line and to exclude a potential toxicity on healthy cells. Since 3D cell spheroids are more representative of the complexity of tumor environment with respect to 2D cultures and represents a more reliable model to assess cellular response to a drug treatment, I also investigated the efficacy of CR13626 in reducing cellular proliferation in U87MG cells cultured as 3D spheroids. Finally, the antitumor activity of CR13626 was investigated in vivo in an orthotopic xenograft mouse model of GBM based on the injection of U87MG-Luciferase cells in nude mice (experiment performed at Accelera Srl, Nerviano, Italy). Animals were orally treated with CR13626 (50 mg/kg/daily) or vehicle for 10 days, starting on day 9 post-implantation. Tumour progression was evaluated through the measurement of bioluminescence (BLI) at the end of dosing (day 19) and during follow-up (days 26 and 33). The survival of animals was also evaluated. In addition, the plasma and brain concentrations of CR13626 in tumour-bearing mice were determined in a satellite group of animals orally treated for 5 days with CR13626 (50 mg/kg/daily).
49
Simmons, Kate Joanne. "Design, Synthesis and Biological Evaluation of new inibitors of the Bacterial Mur Systhetases." Thesis, University of Leeds, 2008. http://ethos.bl.uk/OrderDetails.do?uin=uk.bl.ethos.494257.
Full text
50
Suffritti, C. "Marcatori di severità di malattia nei soggetti con angioedema da carenza C1 inibitore." Doctoral thesis, Università degli Studi di Milano, 2011. http://hdl.handle.net/2434/166930.
Full textAbstract:
Markers of disease severity in angioedema due to C1 inhibitor deficiency
Background Hereditary angioedema (HAE) is characterized by recurrent attacks of edema affecting skin, gastrointestinal tract, and larynx. HAE results from an inherited deficiency (type I) or dysfunction (type II) of C1 inhibitor (C1-INH). C1-INH has a broad spectrum of activities inhibiting complement, contact system, coagulation and fibrinolysis. During acute attacks, unregulated active kallikrein cleaves high-molecular weight kininogen (HK) releasing bradykinin, the mediator of the increased vascular permeability. Despite the deficiency of C1-INH is constant in HAE, angioedema symptoms are intermittent and their frequency is highly variable among patients and in the same individual during life.
Objective To identify predictive markers of disease severity in HAE for therapeutic approach.
Methods We measured cleaved HK and complement parameters (functional C1-INH, antigenic C1-INH, C4, C1q) in 123 HAE patients during remission. Between patients without therapy, 23 had high frequency of angioedema attacks (>12 attacks/year), 18 had intermediate frequency (3-12 attacks/year) and 22 had low frequency (<3 attacks/year). Ten HAE patients were studied during 16 different acute attacks. As control group we studied 61 healthy subjects.
Results Cleaved HK in HAE patients during remission (mean 44%±9) was significantly higher (P=0.0001) than in healthy controls (mean 35%±5) and further increased during acute attacks (58%±7) (P=0.0001). Cleaved HK was significantly increased during remission in patients with >12 attacks/year compared to those with <3 attacks/year and also to those with 3-12 attacks/year (p=0.04). C4 antigen levels were significantly higher in patients with sporadic symptoms than in patients with high frequency of attacks (>12 attacks/year).
Conclusions Our findings demonstrate that the measurement of cleaved HK can help identifying patients at risk for angioedema symptoms. Evaluation of the cleavage of HK may represent a sensitive tool for monitoring HAE patients.