Dissertations / Theses on the topic 'Inama'

Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2017-10-05T19:38:54Z No. of bitstreams: 1 MeireKarlaMiguelCruz_DISSERT.pdf: 2036779 bytes, checksum: 473b18d2efcf87356709325b06611782 (MD5)
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C?es s?o os reservat?rios prim?rios dos parasitos do g?nero Leishmania. Receptores da imunidade inata fazem a detec??o precoce do parasito e conduzem a imunidade adaptativa espec?fica na tentativa de controlar a infec??o. Entretanto, poucos estudos tem investigado a correla??o entre a express?o de receptores da imunidade inata e a resist?ncia ou susceptibilidade em c?es infectados por Leishmania infantum. O objetivo deste estudo foi correlacionar os achados cl?nicos em c?es naturalmente infectados por L. infantum ? express?o de receptores da imunidade inata (Toll Like Receptors-TLRs e Nod Like Receptors-NLRs). Inicialmente, o soro de 76 c?es foi coletado no Centro de Controle de Zoonoses de Natal, Rio Grande do Norte, Brasil. A positividade dos c?es para L. infantum foi confirmada pela reatividade nos testes de ELISA e DPP?. Os c?es foram clinicamente avaliados e classificados como sintom?ticos (n=19), oligossintom?ticos (n=19), assintom?ticos (n=19) e n?o infectados (n=19). Os c?es naturalmente infectados por L. infantum e controles n?o infectados foram eutanasiados e fragmentos de f?gado foram coletados para quantifica??o da express?o de RNAm de TLRs (TLR1-9), NLRs (NOD1, NOD2, NLRP1 e NLRP3) citocinas (IL1?, IL-6, IL-12, IL-10, TNF?, IFN-?) e iNOS com auxilio da t?cnica de PCR em tempo real. Os resultados demonstram o aumento na express?o da maioria dos receptores do tipo Toll e do tipo Nod nos c?es naturalmente infectados por L. infantum, comparado a animais n?o infectados. Entretanto, c?es sintom?ticos apresentaram maior express?o de TLR1, TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR7, TLR8, NLRP1, NLRP3, NOD1 e IL-1? quando comparado a animais assintom?ticos, mostrando significante aumento na transcri??o destas mol?culas com a progress?o da doen?a. Por outro lado, c?es assintom?ticos apresentaram maior express?o de RNAm de citocinas (IFN-?, IL-12) e iNOS quando comparado a animais oligossintom?ticos e sintom?ticos. Este estudo gerou novos conhecimentos envolvendo receptores da imunidade inata (TLRs, NLRs) na leishmaniose visceral canina (LVC), podendo servir de base para o melhor entendimento dos mecanismos de resist?ncia ou susceptibilidade ? infec??o por L. infantum em c?es, bem como dar subs?dio a estrat?gias profil?ticas para o controle da LVC.
Dogs are the primary reservoirs of parasites of the Leishmania genus. Innate immune receptors perform early detection of the parasite and lead to specific adaptive immune response in attempt to infection control. However, few studies have investigated a correlation between the expression of innate immunity receptors and the resistance or susceptibility pattern in dogs naturally infected with Leishmania infantum. The aim of this study was to correlate the clinical status of dogs naturally infected with L. infantum with the mRNA expression levels of innate imune receptors (Toll like receptors-TLRs and Nod Like Receptors-NLRs). Initially, serum of 76 dogs was collected at the Zoonoses Control Center in Natal, Rio Grande do Norte, Brazil. The L. infantum infection in dogs was confirmed by ELISA and DPP? tests. Subsequently, animals were clinially evaluated and classified as asymptomatic (n=19), oligosymptomatic (n=19), symptomatic (n=19) and uninfected (n=19). Dogs naturally infected by L. infantum and uninfected controls were euthanasied and liver samples were collected to quantify mRNA expression of TLRs (TLR1-9), Nod Like receptors-NLRs (NOD1, NOD2, NLRP1, NLRP3), cytokines (IL1?, IL-6, IL-12, IL-10, TNF?, IFN-?) and iNOS using real-time PCR. The results demonstrate the increased expression of almost all TLRs and NLRs in dogs naturally infected by L. infantum compared with uninfected animals. However, symptomatic dogs showed higher expression of TLR1, TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR7, TLR8 NLRP1, NLRP3, NOD1 and IL-1? than asymptomatic animals, revealing significant up regulation of transcription with disease progression. On the other hand, asymptomatic dogs presented greater cytokine mRNA expression (IFN-?, IL-12) and iNOS when compared to oligosymptomatic and asymptomatic animals. This study unveil new knowledge involving innate immunity receptors (TLRs, NLRs) and cytokines in canine visceral leishmaniasis and may be used as a basis for better understanding of resistance or susceptibility mechanisms in dogs infected with L. infantum, as well as prophylactic strategies to control canine visceral leishmaniasis.

Mestrado em Biologia Molecular e Celular
Os monócitos desempenham um papel importante na imunidade inata e a ativação desta é mediada pelos recetores Toll-like (TLRs). Os TLRs estão envolvidos no reconhecimento de micro-organismos estranhos pelo sistema imunológico inato, podendo também ser ativados por moléculas endogénas. Os TLR2 e TLR4 têm sido associados à ativação da imunidade inata na insuficiência cardíaca (IC). Os monócitos são populações heterogéneas e compreendem subpopulações com fenótipos distintos, que podem ser identificadas pela diferente expressão dos antigénios CD14 e CD16. Este estudo tem como objetivo clarificar os mecanismos de ativação da imunidade inata em doentes com insuficiência cardíaca crónica (ICC), utilizando a imunofenotipagem celular por citometria de fluxo. Foi colhido sangue periférico a 15 doentes com ICC e a 12 controlos saudáveis. Estudou-se por citometria de fluxo o fenótipo celular dos monócitos (FSC, SSC, TLR2, TLR4, CD4, CD11b, CD14, CD16, CD36, CD45, CD64, HLA-Dr e IREM-2), dos neutrófilos (FSC, SSC, CD10, CD11b, CD13, CD15, CD16 e CD45) e dos linfócitos (CD3, CD4, CD8, CD16, CD19 e CD56). As três subpopulações monocíticas identificadas (CD14+CD16-, CD14+CD16+ e CD14dimCD16+) apresentaram diferenças fenotípicas dos antigénios celulares estudados. A subpopulação CD14+CD16+ foi a que expressou com maior intensidade vários antigénios de ativação e os recetores TLR2 e TLR4. Os doentes com ICC apresentaram um aumento ligeiro da percentagem dos monócitos CD14+CD16+ e uma diminuição dos monócitos CD14+CD16-. A subpopulação CD14dimCD16+ apresentou uma diminuição significativa da sua percentagem com o aumento da gravidade da ICC. Na maioria das subpopulações, o TLR2 e o TLR4 tiveram uma tendência de aumento da sua expressão nos doentes com ICC, do que nos controlos. Os monócitos CD14dimCD16+ apresentaram uma diminuição significativa da expressão do TLR2 nos doentes com ICC, relativamente ao grupo controlo. A expressão diferencial do TLR2 e do TLR4 nos subtipos de monócitos poderá contribuir para o desenvolvimento e progressão da IC. A existência de subpopulações monocíticas com fenótipos e funções distintas poderá fornecer informações valiosas da patogénese da IC.
Monocytes play an important role in innate immunity and these are activated by the Toll-like receptores (TLRs). TLRs are able to recognise foreign microorganisms via the innate immune system and these can also be activated by endogenous molecules. TLR2 and TLR4 have been associated with activation the innate immunity in heart failure (HF). Monocytes are heterogenous populations which are subdivided into distinct phenotypes and can be identified by the different expression of CD14 and CD16 antigens. This study´s main objective is to clarify the activation mechanisms of innate immunity in patients with chronic heart failure (CHF), using the cellular immunophenotyping by flow cytometry. Peripheral blood was taken from 15 patients with CHF and was used also 12 health controls. The cellular phenotypes of the monocytes were studied using flow cytometry (TLR2, TLR4, CD4, CD11b, CD14, CD16, CD36, CD45, CD64, HLA-Dr, IREM-2, FSC and SSC), in neutrophils (CD10, CD11b, CD13, CD15, CD16, CD45, FSC e SSC) and in lymphocytes (CD3, CD4, CD8, CD16, CD19 e CD56). The three monocytic subpopulations identified (CD14+CD16-, CD14+CD16+ e CD14dimCD16+) revealed phenotypic differences of the cellular antigens. The CD14+CD16+ subpopulation expressed greater intensity of several activation antigens as well TLR2 and TLR4 receptors. Patients with CHF showed a slight increase in monocyte percentage CD14+CD16+ and a decrease in CD14+CD16- monocytes. The CD14dimCD16+ subpopulation showed a significant decrease of its percentage with increasing severity of CHF. In most subpopulations, TLR2 and TLR4 had a trend of increased expression in patients with CHF than controls. In patients with CHF, CD14dimCD16+ monocytes showed a significant decrease in expression of TLR2, than the control group. Different expression of TLR2 and TLR4 in the subtypes of monocytes may contribute to the development and progression of HF. The existence of monocytic subpopulations with distinct phenotypes and functions can provide valuable information of the pathogenesis of HF.

As influências etárias do sistema imune de bezerros são descritas na primeira fase de vida desses animais e a hipótese de também ocorrerem ariações nos principais mecanismos de resposta inata do pulmão pode identificar períodos de maior suscetibilidade às principais doenças respiratórias que acometem os bezerros nesse período. Com a finalidade de minimizar os prejuízos econômicos associados às doenças respiratórias em bezerros, este estudo objetivou avaliar a dinâmica imunológica inata do sistema respiratório de bezerros sadios nos três primeiros meses de vida, no qual nove bezerros sadios foram acompanhados por três meses e submetidos a oito avaliações imunológicas. O material recuperado do lavado broncoalveolar colhido por broncoscopia foi submetido à avaliação funcional dos macrófagos alveolares utilizando as provas de fagocitose (SaPI e E.coli), burst oxidativo, quantificação de imunoglobulinas e expressão de CD14. Os dados foram avaliados pelo teste ANOVA oneway (unstacked) (paramétricos) e pelo teste Mann-Whitney (não paramétricos). Verificaramse alterações funcionais de fagócitos CD14+, que apesar de se manterem constantes em seus valores relativos durante todo o período, apresentou intensidade de fagocitose elevada pontual na terceira semana de vida e um aumento da fagocitose por mononucleares CD14+ aos 45 dias de idade com diminuição da intensidade da fagocitose por essas mesmas células a partir dessa idade. Conclui-se que a partir de 45 dias de vida os animais começam a montar uma resposta imune própria, porém pontual e que até os 90 dias não atingem a estabilidade necessária para atestar a conclusão do processo de maturação da resposta inata local.
The influences of age in calves\' immune system are described in their first phase of life. The hypothesis that variations occur in the main mechanisms of lung innate response can help to identify periods of greater susceptibility to the respiratory diseases that affect calves in the first stage of their life. With the purpose of minimizing the economic losses associated with respiratory disease in calves, this study aimed to evaluate the innate immune dynamics of the respiratory system of healthy calves in the first three months of life. Nine healthy calves were monitored for three months and eight immunologic evaluations were performed. Bronchoalveolar lavage samples were recovered by bronchoscopy. Then, the alveolar macrophages in samples were identified by protein expression of CD14 and undergone functional evaluation of phagocytosis (SAPI and E.coli) and oxidative burst. Immunoglobulin were also quantified in samples. Data was assessed by one-way ANOVA (unstacked) (parametric) and the Mann-Whitney test nonparametric). Functional alterations in phagocytes CD14 + were observed, and although their relative values were kept throughout the period, higher intensity of phagocytosis in the third week and increased phagocytosis by macrophages CD14 + at 45 days of life was observed. Decreased intensity of phagocytosis was observed after this age. It is concluded that from 45 days of life on, calves began to maintain their immune response, but until 90 days of life they did not achieve the stability to conclude the maturation of local innate response.

CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior
Contaminação bacteriana que normalmente infecta o endométrio bovino no pós-parto prejudica a defesa imunológica quando há estresse metabólico, levando a endometrite e infertilidade. A resposta do endométrio contra bactérias depende da imunidade inata, com o reconhecimento de padrões moleculares associados a patógenos, estimulando a inflamação, caracterizadas por secreção de interleucinas (IL)-1p, IL-6 e IL-8. Entretanto, animais frequentemente falham em eliminar a infecção microbiana quando apresentam reduzidas concentrações de glicose e glutamina, que são fontes de energia para o endométrio no conhecido balanço energético negativo. A contínua inflamação e resposta imune inata contra infecção bacteriana no útero após o parto compromete o bem-estar animal. Neste estudo testou-se a hipótese de que as vias homeostáticas conferidas pela glicose, glutamina e biotina integram o metabolismo energético e a imunidade inata no tecido endometrial bovino. A ausência de glicose reduziu a secreção de IL-1P, IL-6 e IL-8 em culturas de órgãos endometriais desafiadas com a endotoxina lipopolissacarídeo (LPS). Depleção de glutamina também reduziu a atividade inflamatória do endométrio contra LPS. Entretanto, as atividades de glicose e glutamina dependem da presença de glicólise. A vitamina biotina demonstrou ter caráter anti- inflamatório, reduzindo a produção de citocinas pró-inflamatórias no endométrio. Em conclusão, o estresse energético metabólico afetou as respostas inflamatórias à infecções bacterianas no endométrio. Providenciamos dados que demonstram como o balanço energético negativo pode estar ligado a doença uterina no pós-parto.
Bacteria that usually infect the bovine endometrium at postpartum impairs immune defense when exist metabolic stress, leading to endometritis and infertility. The response of the endometrium to bacteria depends on innate immunity, with the recognition of pathogen-associated molecular patterns by stimulating inflammation, characterized by secretion of interleukins (IL) -1p, IL-6 and IL-8. However, animals often fail to eliminate the microbial infection when they have reduced levels of glucose and glutamine, which are sources of energy to the endometrium in the negative energy balance. Continuous inflammation and innate immune response to bacterial infection in the uterus after calving compromise animal welfare. In this study we tested the hypothesis that homeostatic pathways conferred by glucose , glutamine and biotin, link the energy metabolism and innate immunity in the bovine endometrial tissue. The deprivation of glucose reduced the secretion of IL-1P, IL-6 and IL-8 in cultures of endometrial organs challenged with the endotoxin lipopolysaccharide (LPS). Glutamine depletion also reduces the inflammatory activity of the endometrium to LPS. However, glucose and glutamine activities depend on the presence of glycolysis. The vitamin biotin demonstrates anti-inflammatory nature, reducing the production of proinflammatory cytokines in the endometrium. In conclusion, the energy metabolic stress disrupts inflammatory responses to bacterial infections in the endometrium. We provide data on how negative energy balance may be linked to postpartum uterine disease.
Tese (Doutorado)

Resumo: Este trabalho traz uma revisão sistemática e crítica de parte da produção científica de seu autor. O trabalho incluiu três linhas de pesquisa, incluindo a salmonelose, brucelose e leishmaniose. Cada uma destas linhas é discutida em um capítulo individual. A maior parte dos dados discutidos neste trabalho se referem a patologia, patogênese, interação patógeno-hospedeiro, imunidade inata e diagnóstico destas doenças. Ao invés de serem organizados como revisão de literatura tradicional, os capítulos enfatizam a contribuição científica das publicações do autor nestas áreas do conhecimento
Abstract: This work provides a systematic and critical review of part of the scientific production of its author. It includes three research topics, namely salmonellosis, brucellosis, and leishmaniasis. Each one of these topics is discussed in individual chapters. Most of the data discussed here refers to pathology, pathogenesis, hostpathogen interactions, innate immunity, and diagnosis of these diseases. Instead of being organized as a traditional literature reviews, the chapters actually emphasize the scientific contribution of the author's publications in each of these fields

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Núcleo de Medicina Tropical, 2015.
Submitted by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2015-10-22T19:18:29Z No. of bitstreams: 1 2014_LucianadeMagalhãesLeite.pdf: 1270360 bytes, checksum: f9582b45977ddfcb93b63a0232a75246 (MD5)
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As leishmanioses representam um complexo de doenças com uma importante diversidade clínica e epidemiológica. A Leishmaniose Visceral Canina (LVC) é uma zoonose endêmica no Brasil, anteriormente restrita a áreas rurais, mas, recentemente tem ocorrido expansão no processo de urbanização da Leishmaniose Visceral. A imunidade inata participa dos mecanismos de defesa contra a leishmânia e ainda está pouco compreendida na leishmaniose canina. O objetivo deste estudo foi avaliar a resposta imunitária inata dos fagócitos de cães naturalmente infectados por Leishmania spp. em comparação com cães normais, pela avaliação da fagocitose e capacidade de produzir moléculas microbicidas. Foram utilizados 30 cães, sem raça definida, maiores que um ano de idade, sendo 22 cães machos e 8 fêmeas, que foram distribuídos em dois grupos: 15 cães não infectados utilizados como controle normal e 15 cães naturalmente infectados pela Leishmania spp. Foram feitos o exame clínico, o hemograma e os testes bioquímicos. Foram avaliadas a fagocitose de Saccharomyces cerevisiae pelos neutrófilos e monócitos do sangue periférico, pelos receptores para padrões moleculares de patógenos e pelos receptores para opsoninas. A produção de ânions superóxido foi avaliada pelo teste do NBT, a produção de peróxido de hidrogênio pela oxidação do vermelho neutro na presença de peroxidase e a produção de óxido nítrico foi quantificada pela presença de nitrito no sobrenadante das culturas utilizando reagente de Griess, estimuladas ou não com LPS. Os cães com leishmaniose apresentaram os seguintes sinais clínicos característicos da doença: alopecia (33%), descamação (46%), úlcera na pele (20%), onicogrifose (26%), caquexia (46%), linfoadenomegalia (40%), ceratoconjuntivite (53%). Os cães com leishmaniose apresentaram anemia normocrômica e normocítica, plaquetopenia e leucopenia, com neutrofilia relativa e desvio à esquerda. Os cães com leishmaniose apresentaram diminuição da atividade sérica da alanina aminotransferase (ALT) em relação a cães normais. Não foram observadas diferenças na concentração sérica da creatinina. As proteínas totais (PT) mostraram-se aumentadas em cães com leishmaniose as custas do aumento das globulinas, sendo que não houve diferença na concentração sérica de albumina entre cães com leishmaniose e cães normais. Cães com leishmaniose apresentaram menor capacidade fagocitária pelos neutrófilos do que cães normais quando avaliados pelos r eceptores para padrões moleculares de patógenos. A fagocitose facilitada por opsoninas mostrou que o número de leveduras ingeridas por neutrófilo foi maior em cães com leishmaniose em relação aos controles normais. Não houve diferença entre a capacidade fagocitária pelos monócitos de cães com leishmaniose e cães controle normal quando avaliados pelos receptores para padrões moleculares de patógenos, nas proporções de 5 ou 20 leveduras não sensibilizadas por monócito. Monócitos de cães com leishmaniose apresentaram maior capacidade fagocitária em comparação aos de cães normais, quando avaliados pelos receptores para opsoninas, tanto na proporção de 5 quanto na proporção de 20 leveduras sensibilizadas por monócito. A porcentagem de redução do NBT basal pelos fagócitos de cães com leishmaniose foi menor do que a dos cães controle. Quando utilizamos a concentração de 5 μg/mL de LPS, observamos que cães controles normais apresentaram um aumento da produção de óxido nítrico em relação aos cães controles normais. Entretanto, nos cães com leishmaniose houve diminuição na produção de óxido nítrico quando estimulados com 5 μg/mL de LPS em relação a sua produção basal. Observamos maior produção basal de peróxido de hidrogênio pelos cães com leishmaniose. Nossos resultados mostraram que há uma deficiência dos neutrófilos de cães com leishmaniose tanto na fagocitose quanto na produção de moléculas microbicidas, como os ânions superóxido. Entretanto, os monócitos desses cães embora apresentem uma maior capacidade fagocitária do que os cães normais, mostram uma menor capacidade de produzir óxido nítrico, que é uma das principais moléculas microbicidas para as leishmânias. Estas alterações do sistema imunitário inato podem favorecer o escape do parasito do sistema imunitário do hospedeiro, assim perpetuando sua sobrevivência. Ademais, o aumento da produção de peróxido de hidrogênio pelos monócitos, pode estar contribuindo para restringir em parte a multiplicação do parasito, mas o seu excesso pode também estar contribuindo nos mecanismos de imunopatogenia. Nossos dados contribuem para uma maior compreensão dos mecanismos de defesa da imunidade inata e da imunopatogenia da leishmaniose em cães e podem contribuir para a busca de novos alvos para drogas imunomoduladoras que possam auxiliar no tratamento contra a leishmaniose. ______________________________________________________________________________________________ ABSTRACT
Leishmaniasis represent a complex disease with a significant clinical and epidemiological diversity. The Canine Visceral Leishmaniasis (CVL) is a zoonosis endemic in Brazil, previously restricted to rural areas, but recently there has been expansion in the urbanization process of Visceral Leishmaniasis. Innate immunity participates in the defense mechanisms against Leishmania and is still poorly understood in canine leishmaniasis. The objective of this study was to evaluate the innate immune response of phagocytes of naturally infected dogs to Leishmania spp. compared to healthy dogs, and to evaluate phagocytosis and microbicide molecule production by phagocytes. Thirty dogs, mixed breed, higher than one year old, 22 males and 8 females, were separated into two groups: 15 uninfected dogs used as healthy control, 15 dogs naturally infected by Leishmania spp. The clinical examination, the blood cell count and biochemical tests were assessed. Phagocytosis of Saccharomyces cerevisiae by neutrophils and monocytes were assessed through pathogen-associated molecular pattern and opsonin receptors. The production of superoxide anions was assessed by the NBT test. Hydrogen peroxide production was evaluated by neutral red oxidation and nitric oxide production by the Griess reagent, with or without LPS. Leishmania infected-dogs showed the following clinical characteristics: alopecia (33%), peeling (46%), skin ulcers (20%), onychogryphosis (26%), cachexia (46%), lymphadenopathy (40%), keratoconjunctivitis (53%). Leishmania infected-dogs showed normochromic and normocytic anemia, thrombocytopenia and leukopenia with neutrophil relative increment and a left shift. Leishmania infected- dogs showed decreased serum activities of alanine aminotransferase (ALT) compared to healthy control. No differences were observed in serum creatinine. The total protein (TP) was increased in Leishmania infected-dogs due to an increase in globulins, and there was no difference in serum albumin concentration between dogs with leishmaniasis and healthy controls. Leishmania infected-dogs showed lower phagocytic capacity by neutrophils than healthy dogs when evaluated by pathogen-associated molecular pattern receptors. Phagocytosis facilitated by opsonins showed that the number of ingested yeast per neutrophil was higher in Leishmania infected-dogs when compared to healthy controls. There was no difference between the phagocytic capacity of monocytes by Leishmania infected-dogs and healthy control when evaluated by pathogen-associated molecular pattern receptors. Monocytes from leishmaniasis animals showed higher phagocytic capacity when compared with healthy dogs, as assessed by the opsonin receptors. NBT percent reduction was lower in leishmaniasis than control dogs. When the concentration of 5 mg / mL of LPS was use, it was observed that healthy control dogs showed an increase in nitric oxide production when compared to control dogs. However, in dogs with leishmaniasis decreased nitric oxide production was observed when monocytes were stimulated with 5 / ml LPS. Higher baseline production of hydrogen peroxide by dogs with leishmaniasis was observed. Our results showed that there is a deficiency in neutrophils of Leishmania infected-dogs, both to phagocytosis as production of microbicidal molecules, such as superoxide anions. However, monocytes from leishmaniasis animals showed a higher phagocytic capacity than healthy dogs, showed a decreased capability to produce nitric oxide, which is a major microbicides molecule to Leishmania. These changes in innate immune system may favor the parasite scape from host immune system, thus maintaining their survival. In addition, the increased production of hydrogen peroxide by monocytes may contribute to impair the growth of parasites, but its excessive production may contribute to the immunopathogenesis of the disease. Our data contribute to enhance the understanding of the defense mechanisms of innate immunity and the immunopathogenesis of the disease in dogs. This knowledge may contribute as new targets for immunomodulatory drugs improving treatment against leishmaniasis.

Vibrio cholerae is a non-invasive Gram-negative enteric pathogen that causes cholera, a severe dehydrating diarrheal illness of humans. Cholera is responsible for substantial morbidity and mortality in both endemic and epidemic settings. Current oral killed vaccines do not provide protection that lasts as long as natural cholera infection, and current cholera vaccines have greatly reduced efficacy in children, the population most affected by cholera in endemic areas. Protection against cholera appears to be mediated by immune responses that target the O-specific polysaccharide (OSP) of V. cholerae. Here we report analysis of the immunogenicity and protective efficacy in mice of a cholera conjugate vaccine containing V. cholerae O1 Inaba OSP conjugated to a recombinant immunogenic fragment of tetanus toxoid heavy chain (rTTHc). OSP-rTTHc induced prominent anti-OSP responses in these animals. Serum from vaccinated mice also provide protection in the infant mouse model of cholera infection. Our results suggest that a cholera conjugate might have development potential for evaluation in humans.

Made available in DSpace on 2016-03-15T19:40:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Alethea Valim Kampa.pdf: 419504 bytes, checksum: ac0afb608176469c48b342d5deae18a3 (MD5) Previous issue date: 2009-01-26
Fundo Mackenzie de Pesquisa
This study aimed to observe the existence or not of interactions between the father and his disabled child in playing situations, based upon the Theory of Innate Intersubjectivity. Two disabled children, aged 1 and 1-and-a-half year and their fathers were selected and filmed in their homes, during playtime, for a 30-minute period. Based in the assertion that the child has the ability to respond affective and adequately to the other and synchronically interact, observed behaviors were divided into two main categories: negotiatory and emotional. Playing was analyzed according to the children s ability to maintain them, based in Occupational Therapy s theories on the subject. Results showed that interactions between father and child occurred, although there were frequent breaking in synchrony and the presence of irritation in one of the children, as well as the ability of creating and sustaining a game, despite their limitations, with their fathers help.
Este estudo teve como objetivo observar a existência ou não de interação entre o pai e seu filho com deficiência em situação de brincar, usando como base a Teoria da Intersubjetividade Inata. Para tanto, foram selecionadas duas crianças de um ano e meio a dois anos e meio de idade com deficiência e seus pais para serem filmados em suas casas, num período de recreação, durante 30 minutos. Partindo do pressuposto de que a criança tem a capacidade de responder afetiva e adequadamente ao outro e interagir em sincronia, os comportamentos observados foram divididos em duas categorias principais: negociadoras e emocionais. As brincadeiras foram analisadas segundo a capacidade de manutenção delas pelas crianças, de acordo com as teorias da Terapia Ocupacional sobre o brincar. Os resultados indicaram que houve interação entre os pais e suas crianças, apesar de quebras freqüentes da sincronia e presença de comportamentos de irritação por parte de uma das crianças, além da capacidade delas em criar e sustentar uma brincadeira apesar de suas limitações, com a devida ajuda dos pais.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:00Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-12-20Bitstream added on 2014-06-13T20:41:02Z : No. of bitstreams: 1 takahashi_jdb_dr_jabo.pdf: 1029595 bytes, checksum: 5dcfa84983a9d8cd96a2b6949bdbf51e (MD5)
Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)
Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)
O aparecimento de doenças em peixes de criação intensiva é um problema enfrentado no Brasil e no mundo. Algumas substâncias podem influenciar as respostas do sistema imune de peixes, como o levamisol, através da modulação de parâmetros imunes, aumentando a resistência contra diversos agentes. Foram avaliados os efeitos do levamisol na dieta em dois experimentos. O primeiro experimento avaliou a suplementação com 0, 125, 250 e 500 mg kg-1 do imunoestimulante administrado por sete e 15 dias, no qual foram avaliados os parâmetros da imunidade inata, hematológicos e bioquímicos. A administração do levamisol por sete e 15 dias promoveu alterações em parâmetros imunológicos e hematológicos. A administração do levamisol pode promover imunomodulação, entretanto a determinação do efeito não ficou claro devido às respostas contraditórias em cada parâmetro avaliado. O segundo experimento consistiu em suplementação com 0, 125, 250 e 500 mg kg-1 do imunoestimulante administrada por sete dias conjuntamente com a imunização com bactérias Aeromonas hydrophila. A imunização e a administração de levamisol promoveram aumento do título de anticorpos, atividade bactericida do soro, hematócrito, número de eritrócitos, leucócitos totais e trombócitos nos pacus. A administração de levamisol por sete dias e a imunização de pacus promoveu melhora de alguns parâmetros da imunidade adquirida e inata de defesa. Entretanto outros protocolos devem ser estudados para avaliar o efeito do levamisol sobre o sistema imune de pacu
The emergence of diseases in fish farming is a problem faced in Brazil and worldwide. Some substances can influence the immune system responses of fish, like levamisole, increasing resistance against various etiological agents. Were evaluated the effects of levamisole in diet in two experiments. The first experiment evaluated supplementation with 0, 125, 250 and 500 mg kg-1 imunoestimulante administered by seven and 15 days in which have been assessed the parameters of innate immunity, haematological and biochemists. The administration of levamisole by seven and 15 days promoted changes in haematological and immunological parameters. The administration of levamisole can promote immunodulation, however the determination of the effect not clear due to contradictory answers evaluated in each parameter. The second experiment consisted of supplementation with 0, 125, 250 and 500 mg kg-1 imunoestimulante administered by seven days together with immunization with inactivated Aeromonas hydrophila bacteria with formaldehyde. Immunization and administration of levamisole promoted increase antibody titre, serum bactericidal activity, hematocrit, number of erythrocytes, leucocytes and thrombocytes in pacus totals. Administration of levamisole for seven days and immunization pacus promoted improves some parameters of innate and acquired immunity defense. However other protocols must be studied to assess the effect of levamisole on the immune system of pacu

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:24Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-03-01Bitstream added on 2014-06-13T21:06:01Z : No. of bitstreams: 1 marconi_c_dr_botfm.pdf: 879832 bytes, checksum: 484596013b636e51071f8123a73dfe3c (MD5)
Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)
Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)
A vaginose bacteriana (VB) é a alteração de microbiota vaginal mais frequente em mulheres em idade reprodutiva.Inúmeras complicações ginecológicas e obstétricas são associadas à VB, como doença inflamatória pélvica, aumento do risco de aquisição de Doenças Sexualmente Transmissíveis (DSTs), corioamnionite clínica e histológica e baixo peso ao nascimento. A VB se caracteriza pela substituição dos lactobacilos da microbiota vaginal por outras espécies bacterianas, na sua maioria anaeróbias. Estudos recentes demonstraram que várias espécies até então raramente ou nunca isoladas em laboratório são associadas à VB como Atopobium vaginae, Leptotrichia sp. e Megasphaera sp. Essas espécies têm como característica comum a produção de ácido lático. Dessa forma, tem sido observado que mulheres assintomáticas podem apresentar ausência de lactobacilos na microbiota vaginal e predomínio de tais espécies. Portanto, alguns autores sugerem que elas possam contribuir para o equilíbrio do meio vaginal. Tendo em vista que os casos de VB apresentam grande heterogeneidade quanto à composição microbiológica, considera-se que a resposta imune também possa ser variável. A amplificação da resposta imune local na VB é um dos mecanismos que levam a maior suscetibilidade da mucosa vaginal à aquisição de DSTs, dentre as quais a infecção clamidiana que, é bastante frequente em nossa população. Embora estudos tenham demonstrado associação da infecção por Chlamydia trachomatis (CT) com a VB, poucos trabalhos avaliaram o perfil da resposta imune inata local nesses casos. O objetivo deste estudo foi avaliar parâmetros da imunidade inata e atividade de sialidases nos casos de VB em relação a maior ou menor participação das espécies de A. vaginae, Leptotrichia sp. e Megasphaera sp., além de comparar os níveis de citocinas pro-inflamatórias nos casos de VB de acordo com o status...
Bacterial vaginosis (BV) is the most frequent type of abnormal vaginal flora in women in childbearing age. Several gynecological and obstetrical complications are associated with BV, such as pelvic inflammatory disease, increased risk for acquisition of sexually transmitted infections (STIs), clinical and histological chorioamnionitis and low birth weight. Bacterial vaginosis is characterized by the replacement of the vaginal lactobacilli by other bacterial species, mostly anaerobes. Recent studies show that many species, rarely or never isolated by culture, are highly associated with BV, such as Atopobium vaginae, Leptotrichia sp. and Megasphaera sp. In common, these bacteria have the characteristic of producing lactic acid. Study of the vaginal flora of asymptomatic women showed that these species may replace the lactobacilli, dominating the vaginal environment. Thus, some authors suggest that A. vaginae, Leptotrichia sp. and Megasphaera sp. may contribute to a balanced vaginal flora. Considering that BV cases are microbiologically heterogeneous, the immune response is also likely to differ among the women. An imbalanced local immune response is one of the mechanisms leading to increased acquisition of STIs, such as chlamydial infection, which is very frequent in our population. Although studies demonstrated a significant association of BV with Chlamydia trachomatis (CT), few studies evaluated the associated innate immune response. The objective of this study was to evaluate parameters of the innate immunity and sialidase activity in BV, in relation to the larger or samaller participation of A. vaginae, Leptotrichia sp. and Megasphaera sp., and to compare the levels of pro-inflammatory cytokines in BV cases according to the status of CT infection. We evaluated women that presented BV in the period of the study and the control group was composed by women with normal vaginal flora pattern. Vaginal ...

Dermatofitoses são infecções fúngicas de natureza crônica cujo principal agente etiológico é Trichophyton rubrum. Apesar de sua alta ocorrência mundial, pouco se sabe sobre os mecanismos imunológicos envolvidos nestas infecções. Neste trabalho investigamos a participação de duas classes de receptores de imunidade inata (NLRs e CLRs) na resposta a T.rubrum e avaliamos o perfil proteômico de macrófagos quando estimulados com o fungo. Observamos que T.rubrum foi capaz de induzir a produção de IL-1β dependente do inflamassomo NLRP3 e destacamos o papel da sinalização de IL-1 na modulação da resposta de IL-17. Determinamos os CLRs dectina-1 e dectina-2 como receptores essenciais na produção de citocinas inflamatórias e para o controle da infecção experimental. Curiosamente, a IL-17 e os linfócitos T e B foram dispensáveis para a eliminação do fungo. Também identificamos a proteína CLEC1A como uma novo receptor para fungos, envolvido no reconhecimento de glicolipídeos de T.rubrum. Por fim, a análise proteômica de macrofagos revelou a vimentina e a plastina-2 como duas proteínas potencialmente envolvidas na relação patógeno-hospedeiro.
Dermatophytosis are chronic fungal infections whose main causative agent is Trichophyton rubrum. Despite its high incidence worldwide, the immunological mechanisms underlying these infections remain largely unknown. Here we investigated the involvement of two classes of innate immune receptors (NLRs and CLRs) in the reponse to T.rubrum and performed a proteomic profiling of macrophages upon T.rubrum stimulation. We observed that T.rubrum was able to drive NLRP3 inflammasome-derived IL-1β production and highlighted IL-1 signaling as an important component in the shaping of the IL-17 response. We defined the CLRs dectin-1 and dectin-2 as key receptors for the induction of inflammatory cytokines and for the infection control in the in vivo settings. Curiously, IL-17 cytokines and T and B lymphocytes were dispensable for fungal clearance. In addition, we uncovered CLEC1A as a new receptor in fungal sensing, involved in the recognition of T.rubrum glycolipids. Finally, the proteomic analysis revealed Vimentin and Plastin-2 as two proteins potentially involved in the host-pathogen interaction.

Orientador: Márcia Guimarães da Silva
Banca: Ana Katherine da Silveira Gonçalves
Banca: Rodrigo Paupério Soares de Camargo
Banca: Andrea da Rocha Tristão
Banca: Geraldo Duarte
Resumo: A vaginose bacteriana (VB) é a alteração de microbiota vaginal mais frequente em mulheres em idade reprodutiva.Inúmeras complicações ginecológicas e obstétricas são associadas à VB, como doença inflamatória pélvica, aumento do risco de aquisição de Doenças Sexualmente Transmissíveis (DSTs), corioamnionite clínica e histológica e baixo peso ao nascimento. A VB se caracteriza pela substituição dos lactobacilos da microbiota vaginal por outras espécies bacterianas, na sua maioria anaeróbias. Estudos recentes demonstraram que várias espécies até então raramente ou nunca isoladas em laboratório são associadas à VB como Atopobium vaginae, Leptotrichia sp. e Megasphaera sp. Essas espécies têm como característica comum a produção de ácido lático. Dessa forma, tem sido observado que mulheres assintomáticas podem apresentar ausência de lactobacilos na microbiota vaginal e predomínio de tais espécies. Portanto, alguns autores sugerem que elas possam contribuir para o equilíbrio do meio vaginal. Tendo em vista que os casos de VB apresentam grande heterogeneidade quanto à composição microbiológica, considera-se que a resposta imune também possa ser variável. A amplificação da resposta imune local na VB é um dos mecanismos que levam a maior suscetibilidade da mucosa vaginal à aquisição de DSTs, dentre as quais a infecção clamidiana que, é bastante frequente em nossa população. Embora estudos tenham demonstrado associação da infecção por Chlamydia trachomatis (CT) com a VB, poucos trabalhos avaliaram o perfil da resposta imune inata local nesses casos. O objetivo deste estudo foi avaliar parâmetros da imunidade inata e atividade de sialidases nos casos de VB em relação a maior ou menor participação das espécies de A. vaginae, Leptotrichia sp. e Megasphaera sp., além de comparar os níveis de citocinas pro-inflamatórias nos casos de VB de acordo com o status ...
Abstract: Bacterial vaginosis (BV) is the most frequent type of abnormal vaginal flora in women in childbearing age. Several gynecological and obstetrical complications are associated with BV, such as pelvic inflammatory disease, increased risk for acquisition of sexually transmitted infections (STIs), clinical and histological chorioamnionitis and low birth weight. Bacterial vaginosis is characterized by the replacement of the vaginal lactobacilli by other bacterial species, mostly anaerobes. Recent studies show that many species, rarely or never isolated by culture, are highly associated with BV, such as Atopobium vaginae, Leptotrichia sp. and Megasphaera sp. In common, these bacteria have the characteristic of producing lactic acid. Study of the vaginal flora of asymptomatic women showed that these species may replace the lactobacilli, dominating the vaginal environment. Thus, some authors suggest that A. vaginae, Leptotrichia sp. and Megasphaera sp. may contribute to a balanced vaginal flora. Considering that BV cases are microbiologically heterogeneous, the immune response is also likely to differ among the women. An imbalanced local immune response is one of the mechanisms leading to increased acquisition of STIs, such as chlamydial infection, which is very frequent in our population. Although studies demonstrated a significant association of BV with Chlamydia trachomatis (CT), few studies evaluated the associated innate immune response. The objective of this study was to evaluate parameters of the innate immunity and sialidase activity in BV, in relation to the larger or samaller participation of A. vaginae, Leptotrichia sp. and Megasphaera sp., and to compare the levels of pro-inflammatory cytokines in BV cases according to the status of CT infection. We evaluated women that presented BV in the period of the study and the control group was composed by women with normal vaginal flora pattern. Vaginal ...
Doutor

Orientadora: Elisabeth Criscuolo Urbinati
Banca: José Eurico Possebon Cyrino
Banca: Helio José Montassier
Banca: Janessa Sampaio de Abreu
Banca: Fabiana Pilarski
Resumo: O aparecimento de doenças em peixes de criação intensiva é um problema enfrentado no Brasil e no mundo. Algumas substâncias podem influenciar as respostas do sistema imune de peixes, como o levamisol, através da modulação de parâmetros imunes, aumentando a resistência contra diversos agentes. Foram avaliados os efeitos do levamisol na dieta em dois experimentos. O primeiro experimento avaliou a suplementação com 0, 125, 250 e 500 mg kg-1 do imunoestimulante administrado por sete e 15 dias, no qual foram avaliados os parâmetros da imunidade inata, hematológicos e bioquímicos. A administração do levamisol por sete e 15 dias promoveu alterações em parâmetros imunológicos e hematológicos. A administração do levamisol pode promover imunomodulação, entretanto a determinação do efeito não ficou claro devido às respostas contraditórias em cada parâmetro avaliado. O segundo experimento consistiu em suplementação com 0, 125, 250 e 500 mg kg-1 do imunoestimulante administrada por sete dias conjuntamente com a imunização com bactérias Aeromonas hydrophila. A imunização e a administração de levamisol promoveram aumento do título de anticorpos, atividade bactericida do soro, hematócrito, número de eritrócitos, leucócitos totais e trombócitos nos pacus. A administração de levamisol por sete dias e a imunização de pacus promoveu melhora de alguns parâmetros da imunidade adquirida e inata de defesa. Entretanto outros protocolos devem ser estudados para avaliar o efeito do levamisol sobre o sistema imune de pacu
Abstract: The emergence of diseases in fish farming is a problem faced in Brazil and worldwide. Some substances can influence the immune system responses of fish, like levamisole, increasing resistance against various etiological agents. Were evaluated the effects of levamisole in diet in two experiments. The first experiment evaluated supplementation with 0, 125, 250 and 500 mg kg-1 imunoestimulante administered by seven and 15 days in which have been assessed the parameters of innate immunity, haematological and biochemists. The administration of levamisole by seven and 15 days promoted changes in haematological and immunological parameters. The administration of levamisole can promote immunodulation, however the determination of the effect not clear due to contradictory answers evaluated in each parameter. The second experiment consisted of supplementation with 0, 125, 250 and 500 mg kg-1 imunoestimulante administered by seven days together with immunization with inactivated Aeromonas hydrophila bacteria with formaldehyde. Immunization and administration of levamisole promoted increase antibody titre, serum bactericidal activity, hematocrit, number of erythrocytes, leucocytes and thrombocytes in pacus totals. Administration of levamisole for seven days and immunization pacus promoted improves some parameters of innate and acquired immunity defense. However other protocols must be studied to assess the effect of levamisole on the immune system of pacu
Doutor

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandarego@gmail.com) on 2015-03-25T13:46:03Z No. of bitstreams: 1 Tese_ICS_ Adenilda Queirós Santos Deiró.pdf: 1416205 bytes, checksum: 530840a5c3123deb34c6aab50fc5cead (MD5)
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CAPES;FAPESB
A obesidade é uma doença multifatorial que tem em sua origem fatores genéticos, psicossociais, nutricionais, metabólicos e endócrinos. A obesidade e a sepse em conjunto, são uma causa de crescente preocupação no mundo ocidental e o aumento da morbidade e mortalidade têm sido relatados em pacientes obesos criticamente enfermos. O mecanismo exato para este fenômeno ainda não está esclarecido. O presente trabalho teve como objetivo avaliar eventuais conseqüências da obesidade sobre aspectos da resposta imune inata de ratos submetidos à sepse polimicrobiana. No primeiro artigo foram avaliadas as conseqüências da sepse em ratos obesos através da análise do leucograma e da histologia do pulmão. Neste trabalho encontramos aumento de leucócitos totais tanto nos ratos submetidos à cirurgia de indução da sepse (CLP) quanto aqueles sham-operados nos tempos de 4 e 24 horas após os procedimentos. Os ratos obesos sépticos apresentam maior lesão pulmonar após 24h da sepse do que os outros grupos. No segundo artigo avaliou-se a função de macrófagos alveolares de ratos obesos frente à sepse polimicrobiana. Foram analisados o índice de aderência, a taxa de fagocitose, a produção de óxido nítrico e a produção de citocinas IFN-γ e IL-12 de ratos normais e obesos sépticos ou sham-operados nos tempos de 4 e 24 horas. Os resultados desse trabalho mostraram que os ratos obesos sépticos produziram maior quantidade de NO após 4h e 24h da cirurgia de indução da sepse (CLP) em relação aos demais grupos. Assim, o resultado deste trabalho demonstrou que a obesidade em situações de estresse orgânico como a sepse pode exacerbar a resposta imune inata deixando o indivíduo susceptível à piora do quadro clínico comprometendo a sobrevivência do indivíduo nesta situação.

Preocupações com o acúmulo de lixo plástico e seu consequente impacto ambiental levaram os cientistas e a indústria química, nas últimas décadas, a uma busca por plásticos biodegradáveis e plásticos produzidos com matérias-primas de fontes renováveis. Entre eles, encontram-se o poli(ácido lático), o poli(?-caprolactona), os poli(hidroxialcanoatos), os polímeros de amido e os polímeros sintéticos que recebem aditivos que facilitam a degradação, conhecidos como oxi-biodegradáveis. Em decorrência dos processos de produção e uso de aditivos e corantes, os plásticos podem conter constituintes que não fazem parte das moléculas do polímero. Por esta razão, o objetivo do trabalho foi determinar os elementos químicos presentes em amostras de polímeros biodegradáveis, sacolas oxi-biodegradáveis e sacolas de amido distribuídas em supermercados, empregando-se análise por ativação neutrônica instrumental (INAA) e espectroscopia de fluorescência de raios X (XRF). A identificação dos polímeros das sacolas de supermercado foi realizada por espectroscopia de absorção no infravermelho com transformada de Fourier (FTIR). Os resultados das análises químicas dos polímeros não processados evidenciaram baixas concentrações dos elementos químicos. Já os plásticos das sacolas apresentaram altas concentrações de cálcio, sódio, zinco e titânio, provenientes do uso de cargas minerais, corantes e outros aditivos. Em algumas amostras, as concentrações de zinco, cobalto, cromo, molibdênio e chumbo excederam os limites estabelecidos pela norma ABNT NBR 15448-2:2008 para polímeros biodegradáveis. As análises também indicaram que os aditivos pró-oxidantes utilizados nas sacolas oxi-biodegradáveis são baseados em compostos químicos que contêm ferro. Os resultados obtidos comprovam que os plásticos biodegradáveis podem ser utilizados de forma segura em embalagens e outras aplicações, desde que se evitem os aditivos contendo elementos químicos tóxicos e outras substâncias perigosas
Concerns about the accumulation of plastic waste and its consequent environmental impact have led scientists and chemical industry, in recent decades, to search for biodegradable plastics and plastics made with renewable raw materials. Among them are included poly (lactic acid), polycaprolactone, polyhydroxyalkanoates, starch polymers and synthetic polymers having additives which facilitate degradation, known as oxo-biodegradable. Due to production processes and use of additives and dyes, plastics may contain small amounts of chemical elements that are not part of the polymer molecules. For this reason, the objective of this study was to determine chemical elements in samples of biodegradable polymers, oxy-biodegradable and starch bags distributed in supermarkets by instrumental neutron activation analysis (INAA) and X-ray fluorescence spectroscopy (XRF). The polymers of plastic bags were identified by Fourier transform infrared spectroscopy (FTIR). Results of chemical analysis of unprocessed polymers have shown low concentrations of chemical elements. On the other hand, plastic bags have high concentrations of calcium, sodium, zinc and titanium, from the use of mineral fillers, dyes and other additives. In some bag samples, the concentration of zinc, cobalt, chromium, molybdenum and lead exceeded the limits established by the ABNT NBR 15448-2:2008 for biodegradable polymers. The analysis also indicated that the pro-oxidant additives used in the oxy-biodegradable bags are based on chemical compounds that contain iron. These results demonstrate that biodegradable plastics can be safely used in packaging and other applications, provided additives containing toxic chemical elements and other hazardous substances are avoided

A hipertensão arterial (HA) é uma desordem comum com etiologia incerta. Entretanto, sabe-se que a inflamação vascular caracterizada pela infiltração de células do sistema imune é um mecanismo importante no desenvolvimento desta condição. Outro distúrbio hipertensivo conhecido é a pré-eclampsia (PE), uma síndrome específica da gravidez, caracterizada pela ativação excessiva do sistema imunológico materno, levando à inflamação e disfunção endotelial, causando hipertensão. Existem fortes evidências que receptores da imunidade inata (pattern-recognition receptors – PRRs) também tem um importante papel no desenvolvimento da HA e da PE. Os PRRs reconhecem padrões moleculares associados a patógenos (pathogen-associated molecular patterns – PAMPs) ou a ligantes endógenos (danger-associated molecular patterns – DAMPs), ativando diferentes cascatas de sinalização que regulam respostas inflamatórias locais e sistêmicas. Estes receptores incluem retinoic acid-inducible gene I (RIG-I)-like helicases (RLHs), nucleotide-binding oligomerization domain (NOD)-like receptors (NLRs) e toll-like receptors (TLRs). Apesar de alguns estudos já terem ligado a ativação excessiva de PRRs à PE, ainda não é claro como essa ativação leva ao desenvolvimento desta complicação. Dessa forma, visando esclarecer se diferentes PRRs estão realmente associados com PE e como isto ocorre, realizamos uma revisão sistemática da literatura sobre o assunto. Vinte e seis estudos estavam de acordo com os critérios de inclusão e foram revisados: 20 que analisaram expressões de PRRs de acordo com a presença de PE e 6 que investigaram a associação de polimorfismos nos genes para PRRs e esta complicação. Poucos estudos analisaram expressões nos genes RIG-I, IFIH1, TLR-1, 5, 6, 7, 8 e 9 em células do sistema imune ou placentas de mulheres com PE (casos) ou mulheres grávidas saudáveis (controles). Sendo assim, ainda é inconclusivo se estes PRRs estão envolvidos no desenvolvimento da PE. Os resultados dos 10 estudos que analisaram expressões do TLR-2 em casos e controles também são contraditórios. A maioria dos estudos que investigaram expressões do TLR-3 e TLR-4 em casos e controles para PE indicam que estes receptores estão aumentados na placenta ou células imunes de mulheres com PE. Até o momento, polimorfismos nos genes TLR-2, 3, e 4 e NOD-2 não parecem estar associados com o desenvolvimento da PE. O receptor interferon-induced with helicase C domain 1 (IFIH1) é uma NLR que tem um papel importante na imunidade inata contra infecções virais. Interessantemente, um estudo prévio realizado pelo nosso grupo demonstrou uma expressão aumentada do gene IFIH1 em células mononucleares de pacientes com diabetes mellitus tipo 1 (DM1) e HA comparado a pacientes normotensos. Além disso, um estudo prévio sugeriu a associação deste receptor com PE. Sendo assim, visando esclarecer o papel do IFIH1 na HA e PE, comparamos a expressão de IFIH1 e as frequências do polimorfismo rs1990760 neste gene entre mulheres com PE (casos) e mulheres grávidas saudáveis (controles). Em um estudo experimental, também avaliamos o efeito do knockdown do IFIH1 com siRNA em uma linhagem de células endoteliais humanas tratadas com ácido nucléico viral sintético (PIC) na expressão de genes relacionados à inflamação, angiogênese e hipertensão. No estudo de caso-controle, a expressão gênica de IFIH1 foi diminuída em placentas de mulheres com PE (n = 44) comparado ao grupo controle (n = 65) (p= 0,049). Após a exclusão das mulheres negras da amostra, esta diferença entre grupos foi mais pronunciada (p= 0,004). As frequências do polimorfismo rs1990760 não diferiram significativamente entre mulheres com PE (n = 59) e mulheres controles (n = 134). Para o estudo experimental, células HUVECs (human umbilical vein endothelial cells) foram transfectadas com um siRNA controle ou com dois diferentes siRNAs contra o IFIH1, por 48 h. Em seguida, as HUVECs foram transfectadas com PIC, por 24h, para mimetizar uma infecção viral. Após este período, o RNA total foi extraído para as análises de expressão gênica. O tratamento com PIC induziu um aumento significativo nas expressões de TNF, IFN-, iNOS, VEGF, ANGPT-2 e ET-1 e o bloqueio do IFIH1 foi capaz de prevenir parcialmente o aumento nestes genes. O tratamento com PIC não induziu a expressão gênica de PGE-2 (p >0,05). Todos os resultados de expressão gênicas foram confirmados nos experimentos usando um segundo siRNA contra IFIH1. O aumento nos níveis proteicos de Ang-II-induzidos por PIC pareceram diminuir após bloqueio do IFIH1, mas esta diferença não atingiu significância formal (p= 0,069). Para avaliar se os genes relacionados à hipertensão e angiogênese poderiam ser induzidos em um ambiente inflamatório não viral, as HUVECs foram tratadas com a citocina pró-inflamatória IFN- por 48 h. O tratamento com esta citocina aumentou significativamente as expressões de STAT-1, PGE-2, ANGPT-2 e VEGF. Estes resultados indicam que um ambiente inflamatório não viral é suficiente para ativar a via do IFIH1 em células endoteliais. Dessa forma, estudos adicionais são necessários para definir quais PAMPs ou DAMPs podem ativar IFIH1 nessas células levando a expressão de genes relacionados à inflamação, angiogênese e hipertensão. Em conclusão, nossos resultados sugerem que a expressão de IFIH1 está diminuída em mulheres com PE, provavelmente contribuindo a patogênese desta complicação. Além disso, experimentos in vitro nas HUVECs demonstraram que o tratamento com PIC é capaz de induzir as expressões de genes relacionadas à inflamação, angiogênese e hipertensão e que o bloqueio do IFIH1 diminui o aumento na expressão destes genes. Este estudo contribuir com um possível novo papel do IFIH1 na patogênese da PE e HA.
Arterial hypertension (AH) is a common disorder with unknown etiology. However, it is known that vascular inflammation characterized by infiltration of immune cells is a key mechanism in the development of this condition. Other recognized hypertensive disorder is preeclampsia (PE), a specific pregnancy syndrome characterized by excessive activation of the maternal immune system, leading to inflammation and endothelial dysfunction, and then causing hypertension. There are strong evidences that innate immunity receptors (pattern-recognition receptors – PRRs) play an important role in the development of AH and PE. PRRs recognize highly conserved pathogen-associated molecular patterns (PAMPs) as well as endogenous ligands (danger-associated molecular patterns – DAMPs), activating different signaling cascades that regulate local and systemic inflammatory responses. These receptors include retinoic acid-inducible gene I (RIG-I)-like helicases (RLHs), nucleotide-binding oligomerization domain (NOD)-like receptors (NLRs) e toll-like receptors (TLRs). Even though some studies have linked an excessive PRR activation to PE, it is still unclear how this activation might lead to the development of this complication. Therefore, aiming to elucidate if different PRRs are indeed associated with PE and how this occurs, we conducted a systematic review of the literature on the subject. Twenty-six studies met the inclusion criteria and were revised: 20 of them analyzed PRR expressions according to PE presence, and 6 studies investigated the association between PRR polymorphisms and this complication. Only few studies analyzed RIG-I, IFIH1, TLR-1, 5, 6, 7, 8 and 9 expressions in immune cells or placentas from PE women (cases) and healthy pregnant women (controls); therefore, it is still inconclusive if these PRRs are involved in PE. Results from the 10 studies that analyzed TLR-2 expressions in cases and controls are contradictory. The majority of the studies that investigated TLR-3 and TLR-4 expressions in cases and controls indicate that these PRRs are increased in placenta or immune cells from PE women. To date, polymorphisms in TLR-2, 3, and 4 and NOD-2 genes do not seem to be associated with PE development. The interferon-induced with helicase C domain 1 (IFIH1) receptor is a NLR that plays an important role in the innate immunity against viral infections. Interestingly, a previous study published by our group demonstrated an increased IFIH1 expression in mononuclear cells from type 1 diabetic patients with AH compared to normotensive patients. Moreover, this receptor also seems to be associated with PE. Hence, to further investigate the role of IFIH1 in AH and PE, we compared IFIH1 expressions and frequencies of the rs1990760 in this gene between PE women (cases) and healthy pregnant women (controls). In an experimental study, we also evaluated the effect of IFIH1 knockdown with siRNA in a human endothelial cell line treated with synthetic viral nucleic acid (PIC) in the expression of genes related to inflammation, angiogenesis and hypertension. In the case-control study, IFIH1 expression was decreased in placenta from PE women (n = 44) compared to the control group (n = 65) (P= 0.049). After exclusion of black women, the difference between groups was more pronounced (P= 0.004). Frequencies of the rs1990760 polymorphism did not differ significantly between PE women (n = 59) e control women (n = 134). In the experimental study, HUVECs (human umbilical vein endothelial cells) were transfected with either a control siRNA or with two different siRNAs targeting IFIH1 for 48h. Then, HUVECs were transfected with PIC, for 24 h, to mimic a viral infection. After this period, total RNA was extracted for gene expression analyses. PIC treatment induced a significant increase in TNF, IFN-, iNOS, VEGF, ANGPT-2, and ET-1 expressions, and the IFIH1 knockdown was able to partially prevent the up-regulation of these genes. PIC treatment did not influence PGE-2 gene expression (P >0.05). All gene expression results were confirmed in experiments using a second siRNA targeting IFIH1. IFIH1 knockdown seemed to prevent PIC-induced increase of Ang-II protein levels, although this difference did not reach formal statistical significance (P= 0.069). To evaluate if hypertension- and angiogenesis-related genes could be also induced in a non-viral inflammatory environment, HUVECs were treated with the pro-inflammatory cytokine IFN- for 48 h. Treatment with this cytokine significantly increased STAT-1, PGE-2, ANGPT-2 e VEGF gene expressions. These results indicate that a non-viral inflammatory environment is sufficient to activate IFIH1 pathway. Therefore, further studies are necessary to clarify which PAMPs or DAMPs could activate IFIH1 in these cells, leading to the expression of genes related to inflammation, angiogenesis and hypertension. In conclusion, our results suggest that IFIH1 gene expression is decreased in placentas from PE women, probably contributing to PE pathogenesis. Furthermore, the in vitro experiments in HUVECs demonstrated that PIC treatment induces expressions of genes related to inflammation, angiogenesis and hypertension, which is decreased after IFIH1 knockdown. This study adds a new possible role for IFIH1 in the pathogenesis of PE and AH.

O leite é classificado quimicamente como uma dispersão mista de aspecto branco com sabor levemente adocicado. Além da elevada concentração de cálcio, contém micronutrientes, aminoácidos e ácidos graxos em proporções adequadas à nutrição humana. Segundo a FAO, até o final de 2016, a produção mundial de leite bovino atingirá 817 milhões de toneladas. No Brasil, o setor lácteo apresenta-se como uma atividade de impacto socioeconômico significativo. Para atender o anseio de uma sociedade cada vez mais preocupada com a qualidade dos produtos que consome, assim como exigências internacionais, a Rede Brasileira de Laboratórios Centralizados da Qualidade de Leite (RBQL) através do Programa Nacional de Melhoria da Qualidade do Leite (PNMQL), criado pelo Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento, aprovou a Instrução Normativa nº 51 - IN51, contendo os regulamentos técnicos de produção, identidade e qualidade do leite. Milhares de medições químicas são realizadas com o propósito de tomada de decisões e regulamentações da qualidade dos alimentos oferecidos à população mundial, sendo essencial existir confiabilidade nos resultados das análises químicas. Recomenda-se que os laboratórios analíticos utilizem materiais de referência certificados (MRC), provenientes de um fornecedor reconhecido e competente, que propiciem caracterização química inequívoca do material. Neste contexto, este trabalho objetivou a caracterização química de leite em pó bovino de diferentes tipos comercialmente disponíveis, com o propósito de fornecer subsídios para a produção de MRC dessa matriz alimentar. Foram adquiridas 72 amostras de leite em pó no comércio varejista, englobando os tipos integral, semidesnatado, desnatado, instantâneo e enriquecido. O método de análise por ativação neutrônica instrumental empregado permitiu a determinação dos elementos químicos essenciais Ca, Fe, K, Na e Zn, além de Br, Co, Cs e Rb. O emprego de materiais de referência certificados como controle da qualidade analítica corroborou a exatidão e a precisão dos resultados. Dentre as amostras estudadas, algumas são enriquecidas com os elementos químicos Ca e Fe. A hipótese de igualdade dos leites enriquecidos com Ca e Fe foi rejeitada para ambos, visto que observou-se a existência de diferenças estatísticas (p < 0,001) para esses elementos. A média aritmética dos leites enriquecidos com Fe foi de 167,7 mg/kg (n = 15), enquanto a média aritmética dos leites não-enriquecidos foi de 13,6 mg/kg (n = 57). A média aritmética dos leites enriquecidos com Ca foi de 22.822 mg/kg (n = 3), enquanto a média aritmética dos leites não-enriquecidos foi de 10.049 mg/kg (n = 69). De maneira geral, os leites em pó com menores quantidades de gordura (desnatado e semidesnatado) apresentaram maiores quantidades dos elementos químicos. Pela análise de agrupamento, verificou-se que a distância multivariada entre os leites em pó integrais foi menor, o que indica similaridade. Assim, entende-se como estratégica e viável a seleção deste tipo de leite em pó como candidato para a produção de material de referência certificado
Milk is chemically classified as a mixed white appearance dispersion with a slightly sweet taste. Besides the high calcium concentration, the milk contains micronutrients, amino acids and fatty acids in proportions suitable for human nutrition. According to FAO, by the end of 2016, the world production of bovine milk will reach 817 million tons. In Brazil, the dairy sector is an activity with a significant socioeconomic impact. To meet the longing of a society increasingly concerned with the quality of the products it consumes, as well as the international requirements, the Brazilian Network of Centralized Milk Quality Laboratories (RBQL) through the National Program for the Improvement of Milk Quality (PNMQL), created by the Ministry of Agriculture, Livestock and Supply, approved the Normative Instruction No. 51 - IN51, containing the technical regulations for milk production, identity and quality. Thousands of chemical measurements are performed for the purpose of making decisions and regulations of the quality of food offered to the world population, and it is essential to have reliability in the results of chemical analyses. It is recommended that analytical laboratories use certified reference materials (CRM) from a recognized and competent supplier that provides unequivocal chemical characterization of the material. In this context, this work aimed at the chemical characterization of bovine milk powder of different types commercially available, with the purpose of providing subsidies for the production of CRM of this food matrix. Seventy-two samples of milk powder were purchased in the retail market, including the integral, semi-skimmed, skimmed, instant and enriched types. Instrumental neutron activation allowed the determination of the essential chemical elements Ca, Fe, K, Na and Zn, as well Br, Co, Cs and Rb. The analytical quality control with certified reference materials corroborated the accuracy and precision of the results. Among the samples studied, some are enriched with the chemical elements Ca and Fe. The hypothesis of equality of Ca- and Fe-enriched milks was rejected for both, since there were statistical differences (p < 0.001) for these elements. The arithmetic mean of Fe-enriched milks was 167.7 mg/kg (n = 15), while the arithmetic mean of non-enriched milks was 13.6 mg/kg (n = 57). The arithmetic mean of Ca-enriched milks was 22,822 mg/kg (n = 3), while the arithmetic mean of non-enriched milks was 10,049 mg/kg (n = 69). In general, milk powder with lower amounts of fat (skimmed and semi-skimmed) had higher amounts of the chemical elements. The cluster analysis evidenced that the multivariate distance for the whole milk powder was smaller, which indicates the similarity. Thus, it is understood as strategic and viable the selection of this type of milk powder as candidate for production of certified reference material

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior
The immunostimulatory properties of inactivated parapoxvirus ovis (iPPVO) have been investigated in different animal species and experimental settings. This study investigated the effects of administration of iPPVO on selected events of the innate response in mice. Neutrophil activation, phagocytic activity of macrophages, serum bactericidal activity, induction and antiviral activity of interferon type I (IFN - I) and expression of several classes of cytokines were assayed following intraperitoneal inoculation of Mus musculus with iPPVO (107 TCID50). Serum from iPPVO-treated animals showed IFN-I activity against murine encephalomyocarditis virus (EMCV) between 6 and 12 hours post infection (hpi), as shown by plaque reduction. A significant activation of neutrophils at 6hpi was observed by NBT reduction test in animals treated with the iPPVO. Peritoneal macrophages from mice treated with iPPVO demonstrated a significant increase (p<0.01) in phagocytic activity against Candida albicans both in vivo (between 12 and 96 hpi) and in vitro (24 and 72 hpi). iPPVO treated mice showed increased serum bactericidal activity against Escherichia coli (p<0.05) at two periods (24 and 72 hpi). A second study evaluated the expression of cytokines in response to inoculation of iPPVO. For this, spleens and serum samples were collected from mice treated with iPPVO at different intervals after inoculation and subjected to quantification of messenger RNA (mRNA) by real time PCR (qRT-PCR) and detection/quantification of serum cytokines by ELISA. Quantification of mRNA identified a significant and transient increase in the expression of various cytokines, with variable magnitude and kinetics. mRNA expression of proinflammatory cytokines (IL-1β, TNF-α and IL-8) peaked at 24 hpi (5.4 times increase) and 48 hpi (3 and 10 times, respectively). A 15-fold increase in expression of INF-γ and 6-fold for IL-12 was observed at 48 and 24 hpi, respectively. An increase in the expression of self-regulatory cytokines (Th2) cells, especially IL-10 and IL-4 was detected at later periods (72 and 96 hpi) with peaks of 4.7 and 4.9 fold, respectively. The determination of the concentration of serum cytokines by ELISA showed an increase in IL-1β, TNF-α, IL- 12, IFN-γ and IL-10 with kinetics similar to that observed by qPCR, especially for IL-1 and INF-γ. In summary, these results demonstrate that inoculation with iPPVO stimulates transiently a number events associated with cellular and humoral innate immune responses. If taken together, these effects would likely contribute for the enhanced resistance to certain pathogens observed in animals treated with iPPVO.
As propriedades imunoestimulatórias do Parapoxvirus ovis inativado (iPPVO) têm sido verificadas em diferentes espécies animais e condições experimentais. No presente trabalho foram investigados os efeitos da administração do iPPVO sobre eventos da resposta inata de camundongos. Ativação de neutrófilos, atividade fagocítica de macrófagos, atividade bactericida do soro, indução e atividade antiviral do interferon tipo I (INF-I) e expressão de várias classes de citocinas foram investigados em diferentes intervalos após inoculação de Mus musculus pela via intraperitonial com iPPVO (dose 107 TCID50). O soro de animais tratados com iPPVO apresentou atividade de INF-I frente ao vírus da encefalomiocardite murina (EMCV) entre 6 e 12 horas pós inoculação (hpi), como demonstrado pela redução significativa de formação de placas virais. Uma significativa ativação dos neutrófilos circulantes foi observada pela técnica de redução do NBT em animais tratados com o iPPVO às 6 hpi. Macrófagos peritoneais de camundongos tratados com iPPVO demonstraram um aumento significativo (p<0,01) na atividade fagocítica frente a Candida albicans tanto in vivo (entre 12 e 96 hpi) quanto in vitro (24 e 72hpi). Camundongos tratados com iPPVO apresentaram aumento na atividade bactericida do soro frente à Escherichia coli (p<0,05) em dois períodos avaliados (24 e 72 hpi). Um segundo estudo avaliou a expressão de citocinas em resposta à inoculação do iPPVO. Para isso, amostras de baço e soro foram coletados de camundongos tratados com iPPVO em diferentes intervalos após a inoculação e submetidas a quantificação de RNA mensageiro (RNAm) por PCR em tempo real (qRT-PCR) e detecção/quantificação de citocinas no soro por ELISA. A quantificação de RNAm permitiu detectar um aumento significativo e transitório da expressão de várias citocinas, com magnitude e cinética variáveis. A expressão de RNAm das citocinas pró-inflamatórias (IL-1β, TNF-α e IL-8) atingiu o pico às 24 hpi (aumento de 5,4 vezes), 48 hpi (3 e 10 vezes, respectivamente). Um aumento de 15 vezes na expressão gênica do INF-γ, e de 6 vezes para a IL-12 foi observado às 48 e 24 hpi, respectivamente. Um incremento na expressão das citocinas auto-regulatórias (Th2), principalmente IL-10 e IL-4, foi detectado em períodos mais tardios (72 e 96 hpi) com picos de 4,7 e 4,9 vezes, respectivamente. A determinação da concentração das citocinas séricas por ELISA revelou um aumento nos níveis de IL-1β, TNF- α, IL-12, INF-γ e IL-10, com uma cinética similar à observada pela técnica de qPCR, especialmente para IL-1β e INF-γ. Em resumo, esses resultados demonstram que o tratamento com iPPVO estimula de forma significativa e transitória uma série de eventos celulares e humorais ligados à resposta imune inata. Esses efeitos, se considerados em conjunto, provavelmente contribuem para o aumento da magnitude da resposta imunológica a certos patógenos observada em animais tratados com o iPPVO.

O periparto é um período crítico no qual as adaptações fisiológicas e imunológicas ocorridas podem ser responsáveis pela susceptibilidade às infecções intramamárias, durante o processo de colostrogênese. Desta forma, o estudo da imunidade inata e sua resposta frente aos patógenos bacterianos são fundamentais para entendimento, diagnóstico e adoção de medidas profiláticas para a mastite bovina. Portanto, o objetivo deste trabalho foi avaliar a imunidade inata no sangue e secreção mamária de vacas da raça Holandesa no período periparto e sua resposta frente à exposição natural aos patógenos bacterianos durante a colostrogênese. Para tanto, foram avaliadas amostras de sangue (n= 91) e secreção mamária (n=208) de treze fêmeas bovinas de 2° a 4° parição. As vacas foram avaliadas semanalmente nas três semanas que antecedem e sucedem a parição prevista. A avaliação da resposta imune inata e detecção do processo inflamatório da glândula mamária (GM) foram realizadas por meio do exame específico da GM, exame bacteriológico, contagem de células somáticas da secreção mamária e provas imunológicas, tais como: viabilidade das células do colostro/leite; dosagem da citocina pró-inflamatória interferon-gama (IFN-γ), imunofenotipagem e avaliação funcional de leucócitos polimorfonucleares CH138+. Com base nos resultados obtidos, pode concluir-se que: a) A parição representou o momento com maior taxa de infecção mamária, no entanto, as alterações mamárias decorrentes do processo de colostrogênese limitaram o uso de exame específico do aparelho mamário para detecção da mastite clínica; b) A função dos neutrófilos sanguíneos nos momentos M-2 e M-1 apresentou-se diminuída, este fenômeno pode ter contribuído para maiores taxas de infecção mamária e exacerbação da função dos neutrófilos sanguíneos no momento da parição; c) A resposta nos neutrófilos sanguíneos não foi exclusiva da GM e apresentaram-se intensificadas nos momentos com alta frequência de inflamações uterinas no pós-parto; d) A GM apresenta-se altamente susceptível às infecções bacterianas no pós-parto imediato, decorrente da baixa viabilidade celular, reduzida proporção e atividade funcional dos neutrófilos CH138+ residentes. A adaptação ao pós-parto e aumento da atividade funcional dos neutrófilos da secreção mamária foi observada nas semanas subsequentes ao parto, resultando em diminuição da taxa de infecção bacteriana.
Peripartum is a critical period in which physiological and immunological adaptations occurred may be responsible for susceptibility to mammary infections during colostrogenesis. Thus, the study of innate immunity and its response against bacterial pathogens are crucial for understanding, diagnosis and adoption of prophylactic measures for bovine mastitis. Therefore, the aim of this study was to evaluate the innate immunity in blood and mammary secretion of lactating Holstein cows in the peripartum period and its response due to natural exposure to bacterial pathogens during colostrogenesis. For this, blood (n = 91) and mammary secretion ( n = 208 ) samples of thirteen dry cows from 2° to 4° calving were evaluated. Cows were evaluated weekly in the three weeks preceding and following the predicted birth. The evaluation of the innate immune response and detection of inflammation of the mammary gland (MG) were performed using specific examination of MG , bacteriological, somatic cell count (SCC) of mammary secretions and immunological tests, such as: cell viability of colostrum / milk; dosage of pro-inflammatory cytokine interferon -gamma (IFN - γ ), immunophenotyping and functional assessment of polymorphonuclear leukocytes CH138+. Based on the results obtained, it can be concluded that : a) The calving represented the moment with the highest rate of mammary infection, however, the mammary changes resulting from the colostrogenesis limited the use of specific examination of the mammary system for clinic mastitis detection; b) The function of blood neutrophils in the moments M- 2 and M- 1 showed reduced, this phenomenon may have contributed to higher rates of mammary infection and exacerbation the blood neutrophils function of at parturition moment ; c) The response in blood neutrophils was not exclusive to MG and presented intensification in moments with high frequency of uterine inflammation in postpartum; d) The MG has to be highly susceptible to bacterial infections in the immediate postpartum period, due to low cellular viability ratio and reduced functional activity of residents CH138+ neutrophils . The adaptation to postpartum and increased functional activity of neutrophils in mammary secretion was observed in the following partum weeks, resulting in decreased rate of bacterial infection.

This thesis is based upon twenty-one months of fieldwork (including four months at a local funeral home) carried out in Makabe, a small town located in Ibaraki prefecture within the central region of the main island of Honshu in Japan. Engaging with anthropological approaches to death and mortuary ritual, it aims to produce a new ethnographic investigation of death and its related beliefs and practices. More precisely, it attempts to explore the way in which people in Makabe deal with the dead and 'perceive' death in and through various mortuary rites. Since the rapid economic growth of the 1960s, Japan has been considered one of the most developed, modernised and urbanised countries in the world. The rapid urbanisation and modernisation have brought fundamental social changes not only to urban but also to rural districts. In these circumstances, mortuary rituals have also changed from communitybased 'traditional' funerals to 'commercialised' ones managed by professional undertakers. Nonetheless, many important aspects of the 'traditional' perception of death and its ritual articulation remain more or less unchanged in Makabe. The most important of these aspects is the 'traditional' idea that the pollution of death (kegare) is extremely dangerous, powerful and contagious, an idea which continues to have an important influence on the treatment of the dead. Thus, the ritual imperatives still place considerable emphasis on the purification or elimination of death pollution and the replenishment of vitality. Along these lines, the thesis attempts to illuminate death and the articulation of mortuary rituals in and through their relation to pollution and vitality. In order to do so, it focuses on the exploration of several major themes including the connection between different kinds of death and persons, the spirit of the dead, the sources of pollution and its purification, the expression of grief, and the exchange of gifts. All of these themes are meant to illustrate the way in which pollution and vitality are implicated in the process of death. Thus, the analysis as a whole seeks to elucidate why local perceptions of death and the articulation of the actual mortuary rituals must be understood, first and foremost, in terms of pollution and vitality; indeed, grasping the relationship between pollution and vitality is crucial in order to understand not only the conjunction between mortuary rituals and people's perception of death but also a number of important features of the 'traditional' Japanese Cosmos that I encountered in Makabe.

Foram estudados os efeitos de um estresse social, produzido pela introdução de um rato, na condição de \"intruso\", por uma hora, em uma comunidade formada por três elementos (macho dominante, macho submisso e fêmea), com relações sociais pré-estabelecidas, sobre o comportamento, a bioquímica e a atividade imune inata de neutrófilos. Os animais intrusos apresentaram, em relação ao grupo controle, tendência a serem mais ativos e menos ansiosos no Campo Aberto e no Labirinto em Cruz Elevado, níveis significantemente mais elevados de corticosterona sérica, burst oxidativo induzido por SAPI significantemente aumentado e, tanto no córtex frontal como no hipotálamo, sistemas serotonérgicos significantemente mais ativados. Os dados, foram interpretados como decorrentes de uma reação de estresse preparando o organismo dos animais intrusos para novo desafio: um eixo HPA mais ativado, com conseqüências favoráveis para uma ação rápida; uma resposta imune inata mais efetiva, para defesa contra possíveis injúrias e uma neuroquímica denotando um refreamento de comportamentos impulsivos, permitindo escolhas mais adequadas em contexto de confrontação social. Essa reação tornou os organismos mais ativos e eficazes, um exemplo do aspecto positivo do estresse. Demonstrou-se, também, a existência e importância das grandes diferenças individuais e necessidade de se tratar estatisticamente e interpretar com muito cuidado os efeitos de estímulos estressores mais sutis, onde essas diferenças despontam com menor clareza e podendo induzir a erro interpretativo.
The present works shows the effects of social stress, produced by introducing a rat, in the condition of \"intruder\", for one hour, in a community formed for three elements namely a dominant male , submissive male and a female, with preset social relations, concerning their behaviour, the biochemistry and the innate immune activity of neutrophils. The intruder animals displayed, in relationship to the control group, a tendency towards being more active and less anxious in the Open Field and the Plus Maze, as well as of serum corticosterone levels with higher values, as well as its oxidative burst being significantly increased. And, as in the frontal cortex as in hypothalamus is concerned, the author found significant activation of serotonergic systems. The data, had been indicative of the function of the reaction of stress in order to prepare the organism for a challenge: a activated HPA axis was increased, with favorable consequences for a fast action; an innate immune reply more effective and neurochemistry denoting cohibition of impulsive behaviours, allowing more adjusted choices in the context of social confrontation This reaction turned the organisms more active and efficient, in an example of the positive aspect of stress reaction. The data also demonstrated the existence and importance of the great individual differences and the need of keeping in mind the statistic approach and very careful interpretation of subtle stressors, whenever these differences appear clearly and may eventually induce to an interpretative error.

INTRODUÇÃO: A doença pneumocócica invasiva (DPI) tem alta mortalidade sendo o pulmão órgão de intenso acometimento. Na DPI caracterizou-se localmente importante processo inflamatório agudo com expressivo aumento de macrófagos, polimorfonucleares e fenômenos exsudativos como edema e hemorragia intra-alveolar. Concretizou-se uma resposta inflamatória proeminente com redução dos fenômenos de apoptose que se traduziu por aumento significativo de citocinas pró-inflamatórias, exceto IL-6 e IL-8, aumento de Toll-2, ativação do complemento, aumento de expressão de ICAM- 1 e CD 14 que em conjunto favorecem o estabelecimento dos fenômenos inflamatórios. A diminuição significativa das células NK e das células de Langherhans, IL-6 e IL-8 reflete comprometimento da imunidade inata. Tal comprometimento poderia ser responsável pela diminuição dos linfócitos TCD4+ e TCD8+ com consequente baixa produção de IFN. Em resumo, as lesões teciduais graves na DPI seriam decorrentes do comprometimento parcial da imunidade inata, em especial das células NK e das células de Langherhans, do prejuízo da imunidade adaptativa e da redução da apoptose como possível estratégia defensiva do pneumococo
INTRODUCTION: Invasive pneumococcal disease (IPD) is a condition with high mortality rates, the lungs being intensely attacked. The in situ immune response was determined, in blocks recovered from 22 necropsies of adults who died from IPD in the lungs, by quantitative immune cell phenotype (CD57-NK, CD1a, CD68, antigen S-100, TCD4, TCD8, CD20), Complement-C3, ICAM-1, CD14, Caspase-3 and cytokine (interferon , TNF, TGF, interleukin - IL-1, IL-2, IL-4, IL-6, IL-8, IL- 10), Toll-2 and SP-A (surfactant). A locally important acute inflammation process was characterized in IPD, with significant rise in macrophages, neutrophils and exsudative phenomena such as edema and intra-alveolar hemorrhage. Compared with the lungs from age-matched controls, results from patients with IPD showed significant depletion of NK, CD1a,CD4+, CD8+, CD20+ cells, interferon , IL-4, IL- 6 , IL-8, TGF and Caspase-3 (apoptosis). On the other hand, S-100, Toll-2, IL-1, IL-2R, IL-10, ICAM-1, CD14 and SP-A were more frequently seen in the alveoli of patients with IPD than in controls. A pronounced inflammatory response was detected, with decrease in apoptosis phenomena that translated into significant increase of pro-inflammatory cytokines, except for IL-6 and IL-8, increase in Toll-2, complement activation, increased ICAM-1 and CD-14 expression, which altogether favored installation of the inflammatory processes. A significant decrease in NK and Langherhans cells, IL-6 and IL-8 reflect the harm to the innate immune system. This could respond for the decrease in TCD4+ and TCD8+ lymphocytes, with a consequent low IFNy output. Briefly, the severe tissue lesions in IPD could be a consequence of the partial damage to the innate immunity, particularly of NK and Langherhans cells, of adaptive immune dysfunction, and of apoptosis reduction possibly as a defense strategy of the pneumococcus

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A infecção pelo vírus Chikungunya causa alta morbidade devido principalmente a artralgia e artrite geradas. A inflamação induzida nas articulações pela infecção viral envolve a imunidade inata e adaptativa. Entretanto, os mecanismos imunológicos envolvidos na proteção ou patogênese não estão ainda, totalmente, elucidados. Dessa forma o objetivo do presente estudo foi avaliar as expressões de receptores da imunidade inata e citocinas induzidas por sua ativação em pacientes infectados pelo vírus Chikungunya. Neste estudo, foi avaliado a expressão de RNAm por PCR em tempo real dos receptores tipo Toll (TLR3, TLR7, TLR8, TLR9), RLR (MDA5 e RIG-1), Moléculas adaptadoras (TRIF e MyD88) e citocinas (IFNα, IFNβ, IFNγ, IL-6, IL-12 e TNFα) em sangue total de pacientes na fase aguda da infecção por Chikungunya (N=28) e em indivíduos saudáveis, não infectados (N=9) utilizados como grupo controle. Os pacientes infectados pelo CHIKV apresentaram aumento da expressão de RNAm de TLR3, em relação aos indivíduos saudáveis. Não foi observada diferença significativa da expressão de TLR7, TLR9, MDA5 e RIG-1 nos pacientes infectados pelo CHIKV, sendo observada, no entanto, uma redução da expressão de RNAm de TLR8, quando comparado aos indivíduos saudáveis. Nossos resultados indicam que a infecção pelo CHIKV em pacientes na fase aguda induz elevada produção de IFN-α, IFN-γ e IL-6, moléculas da imunidade inata, com ação antiviral provavelmente, devido ao reconhecimento do vírus por TLR3 e em menor proporção por MDA5 e RIG-1, além de mecanismos que, possivelmente, envolvam a colaboração de TLR9. Ainda, foram constatadas correlações positivas entre as expressões de RNAm de TLR3, TLR7, TLR9, MDA5 e RIG-1 com expressão IFN-α. De maneira interessante, também foram observadas correlações positivas entre as expressões de RNAm de TLR3 com IFN-α, IFN-γ e IL-12, e entre a expressão de RNAm de MDA5 com IFN-α, IFN-β, IFN-γ e IL-6, IL-12 e TNF-α.
Chikungunya virus infection cause high morbidity mainly due to arthalgia and arthritis generated. An inflammation induced in the joints by viral infection involve innate and adaptive immunity. However, the immunological mechanisms involved in protection or pathogenesis have not yet been completely elucidated. Thus the aim of the present study was to evaluate the expression of innate immunity receptors and cytokines induced by their activation in patients infected with the Chikungunya virus. In this study the expression of mRNA by real-time PCR of Toll receptors (TLR3, TLR7, TLR8, TLR9), RLR (MDA5 and RIG-1), adaptive molecules (TRIF and MyD88) and cytokines (IFN-α, IFN-β, IFN-γ, IL-6, IL-12 and TNF-α) in whole blood of patients in the acute phase of the Chikungunya infection (N=28). Uninfected cases (N=9) were used as negative controls. Pacients infected with CHIKV are older than TLR3 mRNA expression in relation to healthy languages. Influences of the expression of TLR7, TLR9, MDA5 and RIG-1 in CHIKV infected patients in the past have not been confirmed but have been shown to decrease TLR8 mRNA expression when they were found in the healthy populations. Factors related to CHIKV infection in pacients in the suck phase, infection with IFN-α, IFN-γ and IL-6, infections of innate immunity with antiviral action, recognition of the virus by TLR3 and to a lesser extent by MDA5 and RIG-1, in addition to mechanisms that possibly involve TLR9 collaboration. Furthermore, positive correlations were found between the mRNA expression of TLR3, TLR7, TLR9, MDA5 and RIG-1 with IFN-α expression. Interestingly, positive correlations between TLR3 mRNA expression with IFN-α, IFN-γ and IL-12 were also observed, and between MDA5 mRNA expression with IFN-α, IFN-γ and IL-12 were also observed, and between MDA5 mRNA expression with IFN-α, IFN-β, IFN-γ and IL-6, IL-12 and TNF-α.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Biologia, Departamento de Biologia Celular, 2015.
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Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2016-03-02T21:53:39Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_CalliandraMariadeSouzaSilva.pdf: 5665217 bytes, checksum: 9f6e99bb7df736ed20ba2e9203882c3c (MD5)
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A paracoccidioidomicose (PCM) é uma doença endêmica, considerada a micose sistêmica mais prevalente no Brasil. A resposta ao agente etiológico, o fungo Paracoccidioides spp. é multifatorial e complexa, sendo que a natureza da resposta imune inicial, ou inata, resultará em um padrão de suscetibilidade ou resistência à PCM. Este estudo teve como principal foco a análise dos padrões moleculares de suscetibilidade ao P. brasiliensis, comparando as diferenças na resposta de células importantes na primeira linha de defesa ao fungo, por meio da análise da expressão gênica, em duas linhagens de camundongo: uma suscetível (B10.A) e outra resistente (A/J). Para isto, células dendríticas (BMDC) e macrófagos polarizados (M1-like, GM-BMM, e M2-like, M-BMM), derivados da medula óssea dessas duas linhagens murinas, foram co-cultivados, na ausência ou na presença de leveduras de P. brasiliensis. Após 6 horas, de co-cultivo, o RNA das BMDCs foi extraído e empregado em análises transcritômicas em larga escala (RNA-seq). As análises preliminares validam a qualidade das sequências obtidas e asseguram seu uso nas etapas subsequentes das análises dos dados gerados pelo experimento de RNA-seq. Dentre os genes descritos como diferencialmente expressos entre o grupo controle (não infectado) e o grupo experimental, oito tiveram sua expressão validada por qRT-PCR. Os genes diferencialmente expressos em ambas as linhagens foram agrupados por ontologia gênica e vias de KEGG para fornecer um panorama geral da reprogramação do transcritoma em resposta à infecção por P. brasiliensis. Em resumo, as BMDCs da linhagem A/J montam uma resposta controlada com poucos genes diferencialmente expressos em relação à condição controle. Já, as BMDCs da linhagem B10.A apresentam uma resposta intensa, com uma maior variação de expressão diferencial de genes. Neste trabalho, também avaliamos o impacto da polarização de macrófagos no modelo murino de PCM. Em geral, independente da linhagem de camundongos, os macrófagos com polarização similar a M2 (M-BMM), mostraram-se mais bem equipados para combater o fungo, apresentando o aumento nos níveis de transcritos de quimiocinas e citocinas. Ainda sobre o padrão desta resposta de macrófagos do tipo M2, também foi observado que comparado a B10.A, os M2-like de A/J desenvolveram uma resposta mais efetiva quanto ao controle da infecção, tendo sido também observado o aumento nos níveis de transcritos associados às vias de transdução de sinal dos TLRs, Dectina-1 e complemento, entre ouros. Por outro lado, os macrófagos com a diferenciação similar a M1 (GM-BMM) de ambas as linhagens de camundongo aumentaram os níveis dos transcritos de IL-2, IL-6, IL-10, IL-12 e TNF-α quando comparados aos M-BMMs (tipo M2) infectados. GM-BMMs de B10.A mostrou uma diminuição nos níveis de alguns transcritos associados às vias de sinalização a partir de TLRs, Dectina-1 e complemento, entre outros PRRs anti-fúngicos, quando comparados aos GM-BMMs da linhagem A/J.
Paracoccidioidomycosis (PCM), a rural and suburban endemic disease, is considered the most prevalent systemic mycosis in Brazil. The response to its etiological agent (Paracoccidioides spp.) is multifactorial and complex. However, the manner in which the initial response is developed will determine if the patient presents a resistance or susceptibility to this infection. The focus of this study was to analyze the molecular patterns of susceptibility to P. brasiliensis infection, by comparing the differences in gene expression of cells of a susceptible (B10.A) and a resistant (A/J) mice strain, important in the first line of defense, in response to this fungus. To this end, dendritic cells (BMDC) and polarized macrophages (M1-like, GM-BMM, and M2-like, M-BMM) derived from the bone marrow of both murine strains were co-cultured with P. brasiliensis. After 6 hours co-culture, the RNA extracted from dendritic cells were sequenced by RNA-seq. Preliminary analysis of the RNA-seq data validated the quality of the sequences obtained and therefore ensured their use in subsequent steps of analysis. Of these, the expression of eight genes, up-regulated and/or not modulated, were validated by qRT-PCR. The genes differentially expressed in both strains were grouped then by gene ontology and KEGG pathways to provide an overview of the transcriptome reprogramming to P. brasiliensis infection. In summary, the BMDCs of the A/J strain mounts a controlled response with few differentially expressed genes relative to the control condition. While, the BMDCs of B10.A strain presents a more intense response with a wider range of differential gene expression. In this work, we also evaluated the impact of macrophage polarization in the murine model of PCM. In general, regardless of mouse strain, macrophages with M2-type polarization (M-BMM), proved to be better equipped to fight the fungus, with increase transcripts accumulation of chemokines and cytokines. Even within this polarazition, in comparison with B10.A M-BMMs, A/J M-BMMs developed a more effective control of infection, being also observated an increase in the transcripts levels associated with the signal transduction of TLRs, Dectin-1, complement, and others. Moreover, the macrophages with type M1 differentiation (GM-BMM) infected with P. brasiliensis of both mouse strains increased transcript levels of IL-2, IL-6, IL-10, IL-12 and TNF-α when compared to infected M-BMMs (M2 type). B10.A GM-BMM showed a decrease in the levels of some transcripts associated with TLR, Dectin-1 and complement signaling pathways, and other associated antifungal PRRs when compared to A/J GM-BMM.

The gokan is a medium of pre-modern Japanese literature where the story is told through a mixture of text and image on every page, with the narrative and dialogue of the story surrounding the image illustrations on all sides. The Nise Murasaki inaka Genji (A Rustic Genji by a Fake Murasaki, 1829-42), written by Ryutei Tanehiko (1783-1842) and illustrated by Utagawa Kunisada (1786-1865), was one of the most popular gokan of the Edo Period (1605-1868) and has been republished approximately twenty-four times from the end of the nineteenth century until today. By examining how these works handle text and image, this thesis seeks to gain a deeper understanding about how image functions in the gokan genre. When text must be translated and the image altered from the original layout to make it comprehensible to modern readers, the resulting text and image combinations, or lack of image, offer insight into the importance of the role of image in gokan.

Made available in DSpace on 2015-05-19T13:30:31Z (GMT). No. of bitstreams: 2 2013mayara-mmc.pdf: 1411074 bytes, checksum: 2521ca963e0a676d61e1a93252efa84f (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2013
Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães. Recife, PE, Brasil
A febre da dengue (FD) e a febre hemorrágica da dengue (FHD) têm emergido como as mais importantes doenças causadas por arbovírus em áreas tropicais. A forma mais grave da doença, a FHD, apresenta taxa de mortalidade geralmente entre 1 por cento e 10 por cento e requer hospitalização e um cuidadoso controle hemodinâmico dos pacientes. O interferon do tipo I (IFN-I), IFN-alfa/beta, juntamente com o IFN tipo do II (IFN-II), IFN-gama, são fundamentais na mediação da resposta antiviral, através da modulação da resposta imune para inibir a propagação viral. No presente trabalho, propomos o estudo da resposta imune inata ao vírus da dengue (DENV), com ênfase no IFN-I. Para isso, investigamos os níveis de expressão dos genes que codificam os IFN-I e IFN-II, utilizando cDNA, obtido de células mononucleares do sangue periférico (PBMCs) de pacientes infectados com o DENV, através do sistema de PCR em tempo real (qPCR), e analisamos os níveis de IFN-I no soro dos mesmos pacientes pelo ELISA. Avaliamos, também, a via de sinalização do IFN-I em células infectadas por diferentes cepas do DENV, utilizando a linhagem celular BHK21pISRELucHygro, que possui em seu genoma um plasmídeo que contém como promotor o ISRE (região responsiva ao IFN-I) fusionado ao gene repórter luciferase. A quantificação do IFN-I das PBMCs, por qPCR, mostrou que os pacientes acometidos com a FHD, com até 5 dias de febre, expressaram níveis mais elevados do IFN-I quando comparados aos pacientes acometidos pela FD. Enquanto, os níveis séricos de IFN-alfa dos pacientes FD e FHD, quantificados através do ELISA, mostraram níveis similares, representando um padrão diferente do observado nos transcritos de IFN-I em PBMCs. No entanto, os níveis séricos de IFN-gama foram significativamente maiores em pacientes FHD, confirmando o padrão observado na quantificação por qPCR
Por fim, na análise da via de sinalização do IFN-I via expressão da luciferase em células BHK21pISRELucHygro após infecção por diferentes cepas do DENV foi observado que esses isolados clínicos possuíram a capacidade de inibir a via em diferentes proporções

La tesi ha come obiettivo l’analisi della vulnerabilità sismica dell’edificio “Ex INAM” sito a Rimini e la redazione di un progetto di rifunzionalizzazione e miglioramento sismico dello stesso. I disegni del progetto di massima dell’edificio sono del 1960 ad opera dell’architetto Francesco Santini. La costruzione ha luogo in una porzione di terreno facente parte delle allora mura storiche delle città dove si trovava l’antico Gioco del Pallone. L’ossatura portante è in calcestruzzo armato a formare una “L” nel cui snodo sono presenti i collegamenti verticali a servizio dei quattro piani fuori terra e dell’interrato. Poiché l’analisi storico-critica nei vari archivi ha portato a un livello di conoscenza LC1, si è svolto un progetto per la definizione della campagna di indagini e prove da effettuare per raggiungere un livello di conoscenza. Si è quindi eseguita una valutazione della vulnerabilità sismica grazie al programma CDSWin che ha evidenziato come l’edificio non soddisfa i criteri di resistenza imposti dalle attuali normative. Parallelamente si è redatto il progetto architettonico, corredato dal progetto di prevenzione incendi, per la nuova destinazione d’uso dell’immobile: dovrà ospitare aule, laboratori, studi docenti e uffici tecnici-amministrativi a servizio del Dipartimento di Scienze della Qualità della Vita dell’Università di Bologna. Si è poi passati alla fase di progettazione degli interventi di miglioramento sismico al fine di ridurre e, ove possibile, eliminare le vulnerabilità riscontrate in fase di analisi: si sono inseriti due elementi resistenti in c.a. al piano interrato in corrispondenza del vano scala: la risposta globale dell’edificio è notevolmente migliorata, arrivando a presentare solo altre due criticità: la resistenza al taglio non viene verificata per la trave-cordolo di uno dei due setto e per il pilastro del vano scale al piano terra. Per entrambi gli elementi si è pensato ad un intervento con materiali fibrorinforzati

Submitted by Chaylane Marques (chaylane.marques@ufpe.br) on 2015-03-12T19:42:05Z No. of bitstreams: 2 Dissertacao Jean Sauve.pdf: 1000878 bytes, checksum: 23d1efdd1dd02ca5753a16ef0cc08d82 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5)
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O papilomavírus humano (HPV) é o principal agente etiológico de lesões malignas, a exemplo do câncer cervical e de suas lesões precursoras, as Neoplasias Intraepiteliais Cervicais (NICs). Investigamos se os polimorfismos de base única (SNPs) no gene da Beta-Defensina Humana 1 (DEFB1) poderiam estar associados à susceptibilidade à infecção e à progressão da lesão cervical provocadas por HPV de alto risco. Polimorfismos neste gene têm sido alvo de diversos estudos e revelaram ser de suma importância na susceptibilidade a diversas infecções. Neste estudo, os SNPs -52G/A, -44C/G e -20 G/A na região 5' UTR do gene DEFB1 foram analisados através de sequenciamento, em um grupo de 160 pacientes do sexo feminino HPV positivas e 71 indivíduos sadios. As análises estatísticas foram feitas utilizando o Teste exato de Fisher e o Teste do Qui-quadrado. Os resultados indicam que o alelo -44G e o haplótipo ACA podem estar relacionados com a susceptibilidade à infecção pelo HPV de alto risco. Os resultados não apontam diferenças significativas nas frequências alélicas e genotípicas dos outros polimorfismos entre pacientes infectados com HPV de alto risco e indivíduos sadios. Também não foram encontradas diferenças estatisticamente significativas nas frequências alélicas e genotípicas nos pacientes HPV positivos quanto ao grau de lesão cervical.

Orientador: Maria Terezinha Serrão Peraçoli
Resumo: Introdução: A pré-eclampsia (PE) destaca-se como uma das principais causas de morbidade e mortalidade tanto materna como fetal, se caracteriza por ativação anormal do sistema imune inato e adaptativo. No plasma de gestantes portadoras de PE encontram-se níveis elevados de estruturas moleculares associadas ao estresse e morte celular, denominados padrões moleculares associados ao dano (DAMPs) como, proteína de choque térmico (Hsp70), HMGB1 (high mobility group box 1), Hialurona (HA) e Ácido Úrico, que parecem contribuir diretamente com a patogênese dessa doença. Essas DAMPs ligam-se a receptores presentes em células da imunidade inata, podendo ativar um complexo intracelular denominado inflamassoma, responsável pelo processamento e liberação de IL-1β e IL-18. Essas citocinas são potentes mediadores inflamatórios e importantes na ativação da resposta imune adaptativa, auxiliando a diferenciação de células T em Th17 e Th1, respectivamente. Na PE, a ocorrência de resposta inflamatória sistêmica parece decorrer da deficiência no controle de células T efetoras por células T reguladoras (Treg). Portanto, o balanço entre células Treg e Th17 pode ser crítico para a tolerância ao feto e para a prevenção da doença. Objetivos: O presente trabalho teve como objetivos: Avaliar o estado de ativação, endógena e induzida pelas DAMPs (urato monossódico (MSU), HA e Hsp70), em monócitos, pela identificação da presença do inflamassoma e associação com a produção de citocinas; Avaliar o envolvime... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo)
Doutor

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2017-06-21T17:31:58Z No. of bitstreams: 1 marcilenegomesevangelista.pdf: 1574607 bytes, checksum: acb74a623ce9dd5bb6068182a1172534 (MD5)
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CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior
A esclerose múltipla (EM) é uma doença inflamatória, crônica e desmielinizante do sistema nervoso central (SNC). É na maioria dos casos grave e incapacitante, afetando cerca de 2,5 milhões de pessoas em todo mundo. Encefalomielite autoimune experimental (EAE) é um modelo murino de doença autoimune, mediada por linfócitos Th1 e Th17, desenvolvido para o estudo da EM. O protocolo de indução do modelo utiliza o adjuvante completo de Freund (CFA) que contem padrões moleculares associados ao patógeno (PAMPs) que se ligam aos receptores Toll-like (TLRs), expressos em células apresentadoras de antígeno (APC), cruciais para ativação dos linfócitos T. Estes receptores são necessários à indução da EAE, ativando vias de sinalização nas células da imunidade inata e adaptativa, que podem induzir a produção de mediadores pró-inflamatórios, responsáveis pela lesão no SNC, ou mediadores anti-inflamatórios, que podem participar da regulação da doença. O presente estudo avaliou a resposta imune inata na fase inicial de desenvolvimento da EAE em camundongos C57BL/6 imunizados com o peptídeo MOG35-55 (glicoproteína mielínica de oligodendrócitos) e CFA (grupo EAE) ou somente CFA (grupo MOG negativo). Os animais foram sacrificados nos dias 2, 4 e 7 após a indução do modelo. Os linfonodos inguinais e a medula espinhal foram removidos e submetidos à análise histológica, dosagens de citocinas e quimiocinas, assim como avaliação da expressão dos TLRs. Os resultados obtidos indicaram que somente os animais do grupo EAE desenvolveram sinais clínicos da doença. Este grupo também apresentou intenso infiltrado celular na medula espinal no 7º dia após a indução, níveis elevados de quimiocinas CCL5 e CCL20 e citocinas IL-6, IL-12, IL-1β, TNF-α, IFN-γ, IL-17, IL-10 e TGF- β no SNC, além de maior número de APCs expressando TLR3, TLR4 e TLR9. Desta forma, estes dados sugerem que a expressão dos TLRs e a produção das citocinas pró-inflamatórias mostram-se como sendo fatores críticos para a indução da EAE e, o aumento de padrões anti-inflamatórios, ainda nos pontos iniciais do desenvolvimento da doença, sugere o uso destes padrões, como mecanismos de regulação do modelo experimental e, possivelmente da EM.
Multiple sclerosis (MS) is an inflammatory, chronic demyelinating disease of the central nervous system (CNS). It is in most cases severe and disabling, affecting about 2.5 million people worldwide. Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) is a murine model of autoimmune disease mediated by Th1 and Th17 lymphocytes developed for studying MS. The induction protocol model uses the complete Freund's adjuvant (CFA) containing the pathogen associated molecular patterns (PAMPs) that bind to Toll-like receptors (TLRs) expressed on antigen presenting cells (APC), crucial for activation T lymphocytes. These receptors are necessary for the induction of EAE by activating signal pathways in cells of the innate and adaptive immunity, which can induce the production of pro-inflammatory mediators responsible for the CNS lesions or anti-inflammatory mediators that can participate in the regulation of disease. The present study evaluated the innate immune response in the initial phase of development of EAE in C57BL/6 mice immunized with MOG35-55 peptide (myelin oligodendrocyte glycoprotein) and CFA (group EAE) or CFA alone (group MOG negative). The animals were sacrificed on days 2, 4 and 7 after induction model. The inguinal lymph nodes and spinal cord were removed and subjected to histological, serum cytokines and chemokines, as well as evaluating the expression of TLRs. The results showed that only animals of group EAE developed clinical signs of disease. This group also showed an intense cellular infiltrate in the spinal cord on day 7 after induction, high levels of chemokines CCL5 and CCL20 and cytokines IL-6, IL-12, IL-1β, TNF-α, IFN-γ, IL-17, IL-10 and TGF-β in the CNS, and increased number of APCs expressing TLR3, TLR4 and TLR9. Thus, these data suggest that expression of TLRs and production of pro-inflammatory cytokines are shown as being critical for the induction of EAE, and increased anti-inflammatory patterns, still in the initial points of development of the disease, suggests the use of these patterns as regulation mechanisms of the experimental model and possibly the MS.

Um modelo de indução de estresse/ansiedade é a separação materna. Sabe-se, a este respeito, que o desenvolvimento do comportamento emocional normal em mamíferos jovens depende da interação entre a mãe e o filhote. Além disso, eventos estressantes na infância e interrupções no cuidado materno podem levar a efeitos deletérios na resposta imune e na resistência a doenças ao longo da vida. Buscamos neste trabalho estudar os efeitos da separação materna sobre o comportamento, imunidade inata e crescimento tumoral de uma prole de camundongos machos adultos. Nossos resultados mostraram que a separação materna, em camundongos A/J, (1) não produziu alterações robustas no comportamento e em parâmetros hematológicos (antes e após o crescimento tumoral), (2) aumentou a atividade de neutrófilos sanguíneos e macrófagos alveolares (antes e após o crescimento tumoral), (3) aumentou os níveis estriatais de serotonina, seu metabólito 5-HIAA e o turnover de dopamina, (4) diminuiu os níveis séricos de corticosterona e (5) não influenciou a incidência tumoral. Em camundongos C57BL/6, a separação materna produziu um comportamento ansioso e um aumento na atividade de neutrófilos sanguíneos. Tomados em seu conjunto, parece-nos possível afirmar que a separação materna tenha produzido alterações na atividade neuroimune dos animais, modificando, nos mesmos a atividade do eixo HPA e essas alterações foram influenciadas pelas características individuais das linhagens.
Maternal separation is one model of stress/anxiety induction. We know about it that the mammals normal emotional behavior development depends on the interaction between mother and younglet. Beside this, early life stressed events can induce deletery effects in immune response and to illness resistance for all life long. In this work we searched for the maternal separation effects on the behavior, innate immunity and tumor growth in an adult male mice offspring. Our results showed that the maternal separation, in A/J mice (1) had no big effects in the behavior and in the hematological parameters (before and after the tumor growth), (2) increased the neutrophil and alveolar macrophages activity (before and after the tumor growth), (3) increased the serotonin striatum levels, the 5-HIAA metabolite and the dopamine turnover (4) decreased the corticosterone serum levels and (5) had no effects on tumor incidence. In the C57BL/6 mice, the maternal separation induced an anxiety behavior and increased the neutrophil activity. These results suggest that the maternal separation could have produced alterations in neuroimmune activity, modifying the HPA axis activity and these alterations could be influenced by individual strains characteristics.

Submitted by Hellen Luz (hellencrisluz@gmail.com) on 2017-09-20T15:56:14Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_NeuropatologiaExperimentalInduzida.pdf: 11978675 bytes, checksum: 42960f5934592c55ca43814444848b98 (MD5)
Rejected by Irvana Coutinho (irvana@ufpa.br), reason: Aguardar as orientações on 2017-10-10T16:50:18Z (GMT)
Submitted by Hellen Luz (hellencrisluz@gmail.com) on 2017-10-17T18:01:26Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_NeuropatologiaExperimentalInduzida.pdf: 11978675 bytes, checksum: 42960f5934592c55ca43814444848b98 (MD5)
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CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior
Muitos esforços têm sido dedicados para o entendimento da neuropatogênese das encefalites virais a partir de trabalhos experimentais. Porém, poucos estudos investigaram a neuropatologia experimental de rabdovírus amazônicos, como a induzida pelos vírus Itacaiunas e Curionopolis, recentemente agrupados em um novo gênero denominado Bracorhabdovirus, proposto para a família Rhabdoviridae. Esses vírus apresentam tropismo por neurônios do SNC de camundongos neonatos infectados experimentalmente, entretanto, pouco se conhece a respeito da resposta imune do SNC contra esses agentes. O presente trabalho analisou aspectos da resposta imune de células residentes do SNC de camundongos neonatos, após infecção experimental pelos vírus Itacaiunas e Curionopolis, in vivo e in vitro. Para alcançar esses objetivos, foram utilizadas técnicas histoquímica e imunohistoquímica para detecção de microglias ativadas e astrócitos, respectivamente, em secções de cérebros de camundongos infectados. A quantificação das células ativadas foi realizada em regiões do hipocampo, utilizando técnicas estereológicas. Além disso, foi investigada a expressão de citocinas pró e antiinflamatórias produzidas por células do SNC em cultivos primários infectados com os vírus Itacaiunas e Curionopolis por ensaios imunoenzimáticos (ELISA), a partir de sobrenadantes de co-culturas enriquecidas de microglias/neurônios e de astrócitos/neurônios. Foi também analisada a expressão de óxido nítrico por citoquímica utilizando o reagente DAF-FM diacetato (4-amino-5-methylamino-2,7′-difluorofluorescein diacetate). Os resultados mostraram que cérebros de camundongos infectados com os vírus Curionopolis 2d.p.i. e Itacaiunas 4 e 7d.p.i. apresentaram discreta ativação microglial, porém, em camundongos infectados com o vírus Curionopolis 5d.p.i houve intensa ativação. A imunohistoquímica revelou marcação de poucos astrócitos em animais infectados com os vírus Curionopolis 2d.p.i e Itacaiunas 4 e 7d.p.i. no hipocampo. Por outro lado, nos camundongos infectados com Curionopolis 5d.p.i., houve aumento de astrócitos, principalmente na região da fissura hipocampal. Os resultados obtidos a partir dos ensaios imunoenzimáticos mostraram que houve grande produção de IL-12p40 nas culturas de células do SNC infectadas com os vírus, 48 e 96h.p.i. Baixos níveis de TGF-β foram detectados após 48 horas de infecção com os vírus em estudo, no entanto, observou-se aumento da expressão dessa citocina após 96h.p.i. Também foi demonstrado, com 48 horas de infecção, baixos níveis da citocina IL-10, aumentando após 96 horas para ambos os vírus, principalmente nas co-culturas enriquecidas de microglias/neurônios infectados pelo vírus Itacaiunas. Culturas de células do SNC infectadas com os vírus Itacaiunas 48 e 96h.p.i. e Curionopolis 48h.p.i. mostraram discreta produção de óxido nítrico, porém houve aumento nessa produção em culturas infectadas com o vírus Curionopolis 96h.p.i. Esses resultados sugerem que há predominância de uma resposta pró-inflamatória nos tempos iniciais da infecção para ambos os vírus e uma tentativa de modulação dessa resposta com a produção de citocinas antiinflamatórias nos tempos tardios.
Experimental studies are making many efforts to understand the neuropathogenesis of viral encephalitis. However, a few is known about the Central Nervous System (CNS) response against amazonic rhabdovirus. The virus Itacaiunas e Curionopolis were classified preliminary as members of the Rhabdoviridae family. It was suggested for these virus to be included in a new genus, Bracorhabdovirus. They are neurotropic virus and little is known about the inflammatory response of the CNS against these virus. This study examined aspects of the immune response of newborn mice CNS resident cell after experimental infection by Itacaiunas and Curionopolis virus, in vivo and in vitro. To achieve these goals, histochemical and immunohistochemical techniques were used to detect activated microglia and astrocytes, respectively, in sections of the brains of infected mice. The quantification of these cells were performed in hippocampal regions using stereological techniques. Furthermore, was investigated the expression of proinflammatory and anti-inflammatory cytokines produced by CNS cells in primary cultures infected with virus Itacaiunas and Curionopolis by using enzyme immunoassay (ELISA) from supernatants co-cultures enriched of microglia/neurons and astrocytes/neurons. The expression of nitric oxide was also analyzed by using cytochemical reagent DAF-FM diacetate (4-amino-5-methylamine-2,7-difluorofluorescein-diacetate). As a result, age matched control animals of each group did not present activated microglia or astrocytosis, as well as, both Curionopolis and Itacaiunas infected subjects early after the inoculation (2d.a.i. and 4d.a.i respectively). However at 5th d.a.i., Curionopolis infections significant increase in the number of activated microglias and reactive astrocytes were detected whereas at the 7th d.a.i. after Itacaiunas infection only minimal activation of microglia and reactive astrocytosis was detected. The results from immunoassays showed great production of IL-12p40 in cultures of CNS cells infected with both virus, 48 and 96 hours after infection (h.a.i.). Low levels of TGF-β and IL-10 were detected after 48 hours of infection with both virus, however, was observed increased expression of this cytokines after 96 hours. CNS cell cultures infected with Curionopolis virus 48h.p.i. and Itacaiunas virus 48 and 96h.a.i. showed a slight production of nitric oxide, but it was increased in cultures infected with Curionopolis virus 96h.a.i. These results suggest that the proinflammatory response is dominant in both virus, however, it seems that the anti-inflammatory cytokines try to modulate the inflammatory response of the late days pos-inoculation.

O Estado de São Paulo é caracterizado por um mosaico de paisagens formado por fisionomias vegetais como a floresta de restinga, a floresta ombrófila densa, a floresta estacional semidecidual e o cerradão, representadas, respectivamente, pelas unidades de conservação Parque Estadual Ilha do Cardoso, Parque Estadual Carlos Botelho, Estação Ecológica dos Caetetus e Estação Ecológica de Assis. Mesmo protegidas legalmente, essas áreas ocorrem, na maior parte, em regiões bastante alteradas pela ação antrópica. As epífitas, especialmente as bromélias, respondem diretamente a essas intervenções, sendo interessantes para diversos estudos ambientais. As bromélias apresentam estratégias diferenciadas para a absorção de elementos químicos a partir da serrapilheira depositada no tanque (bromélia-tanque) ou diretamente da atmosfera (bromélia atmosférica). Entretanto, o emprego dessas plantas para estudos de qualidade ambiental é comprometido por etapas da análise química, principalmente relativas à amostragem e à contaminação da superfície das folhas com material particulado. De acordo com o procedimento usual, a amostragem envolve a retirada de diversas plantas, acarretando possíveis danos aos ecossistemas. Por essa razão, a proposta desse trabalho consiste em uma metodologia inovadora de amostragem denominada sustentável, em que são retirados discos de folhas das bromélias sem a necessidade de remoção das rosetas das áreas estudadas. Considerando as diferentes formações vegetacionais, a diversidade de bromeliáceas, as características nutricionais das plantas epifíticas e a problemática de amostragem de bromélias nativas em unidades de conservação, este presente trabalho teve como objetivos específicos (I) a avaliação da composição química de bromélias nos diversos tipos vegetacionais, (II) a avaliação da composição química das diferentes espécies de bromélias, (III) a avaliação da contribuição dos modos nutricionais do tipo tanque e atmosférico e dos modos de crescimento epifítico e terrícola para a composição química de folhas de bromélias (IV) a avaliação do efeito da lavagem sobre a composição química das folhas, (V) a comparação dos resultados da amostragem sustentável com aqueles da amostragem usual e (VI) a avaliação da variabilidade da composição química dos diferentes terços das folhas e terços da planta. A análise por ativação neutrônica instrumental (INAA) foi empregada por permitir a determinação simultânea de diversos elementos químicos em elevado nível metrológico. Para cada estudo realizado, as amostras tiveram preparo específico, permitindo a análise por INAA. As bromélias apresentaram diferenças quanto à composição química entre as unidades de conservação, embora não tenha sido verificada um padrão único de distribuição dos elementos químicos, corroborando composição química inerente de cada espécie. Bromélias-tanque mostraram maiores concentrações dos elementos químicos essenciais. As folhas das plantas estudadas apresentaram concentrações levemente maiores no modo epifítico quando comparadas com aquelas crescendo sobre o solo. Os resultados obtidos demostraram a necessidade de um procedimento de lavagem para minimizar a influência de material particulado sobre as concentrações de elementos químicos nas folhas. A nova amostragem sustentável promoveu resultados comparáveis, principalmente para o terço inferior, com a amostragem usual. Ainda, aumentou-se a confiabilidade dos resultados dada a redução do número de etapas do preparo de amostras proporcionado por esta metodologia de amostragem
The State of São Paulo, Brazil, is characterized by a mosaic of landscapes formed by diverse vegetational types as restinga forest, dense ombrophilous forest, seasonal semideciduous forest and savanna woody, respectively represented by the conservation units Parque Estadual Ilha do Cardoso, Parque Estadual Carlos Botelho, Estação Ecológica dos Caetetus and Estação Ecológica de Assis. These units are legally protected, although occurring mostly in areas highly modified by anthropogenic impacts. Epiphytes, especially bromeliads, directly respond to these impacts, being interesting for environmental studies. Bromeliads have different strategies for the uptake of chemical elements from the litterfall deposited in the tank (tank bromeliad) or from the atmosphere (atmospheric bromeliad). Many steps of the chemical analysis affect the application of these plants for environmental quality studies, including sampling and leaf surface contamination with particulate matter. According to the usual procedure, sampling depends on the removal of several rosettes, which may cause impacts on the ecosystem. Therefore, the proposal of this work consists in a novel sampling methodology, named \"sustainable\", in which small disks of bromeliad leaves are collected without removing rosettes from the studied areas. Considering the different vegetation, the bromeliad diversity, the nutritional characteristics of epiphytic plants and the problem of sampling native bromeliads in conservation units, this work aimed at (I) the evaluation of chemical composition of bromeliads from diverse vegetational types, (II) the evaluation of chemical composition of different bromeliad species, (III) the evaluation of the contribution of tank and atmospheric nutritional modes, as well as epiphytic and terrestrial growth modes, for the chemical composition of bromeliads, (IV) the assessment of washing effects on leaf chemical composition, (V) the comparison of sustainable sampling results with those obtained from usual sampling and (VI) the assessment of chemical composition variability at different leaf and plant positions. Instrumental neutron activation analysis (INAA) was employed, allowing the simultaneous determination of diverse chemical elements at a high metrological level. For each study, samples were prepared accordingly before being analyzed by INAA. The bromeliads showed differences in chemical composition among the conservation units. There was no uniform distribution pattern of chemical elements among the bromeliad species, corroborating an inherent species chemical composition. Tank bromeliads showed apparently high efficiency in the uptake of essential chemical elements. The studied plants showed concentrations slightly higher in bromeliads growing in epiphytic mode when compared to those growing on soil. The results demonstrated the need for the washing procedure to minimize the particulate matter influence on the concentrations of chemical elements. The new sustainable sampling provided results comparable to the usual sampling procedure, especially for the bottom plant position. Further, the reliability of the results was increased due to the reduction of steps for sample preparation provided by this sampling methodology

This thesis presents a material-centered characterization of 120 geologic samples from four fine-grained basalt quarries on the Samoan Island of Tutuila. Previous unsuccessful attempts at definitive Tutuilan quarry differentiation have utilized x-ray fluorescence (XRF). In this study, clear differentiation of each analyzed quarry was achieved using instrumental neutron activation analysis (INAA). Biplots of canonical discriminant function scores for the INAA data illustrate clear separation based on the variation in chemical composition between each quarry. The samples analyzed not only define quarry separation, but also provide the "core group" for a preliminary baseline necessary for future artifact-centered provenance studies. Inclusion of these "core group" samples in the baseline was confirmed by stepwise discriminant analysis. These findings suggest the ability to determine quarry of origin on the island of Tutuila, which can elucidate the importance of individual Tutuilan quarries in the export and exchange of fine-grained basalts.

Orientador: Ernesta Zamboni
Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Educação
Made available in DSpace on 2018-07-17T09:32:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Camargo_DulceMariaPompeode_D.pdf: 16179113 bytes, checksum: 0056397a70d7d2fb13ca4de8cb47a291 (MD5) Previous issue date: 1992
Resumo: Este trabalho visa narrar uma experiência com professores leigos do médio Araguaia, nordeste de Mato Grosso, que após cursarem o PROJETO INAJÁ (1987-1990), possuem hoje habilitação a nível de segundo grau. A atuação com esses professores, vindos da roça, da cidade, do patrimônio e da Aldeia Tapirapé foi um grande desafio, tanto para nós, docentes, como para eles, cursistas. Iniciamos a tese, colocando as nossas impressões acerca da região e da historicidade do PROJETO, desde o momento em que foi gestado. Posteriormente, reconstituímos a construção da metodologia de trabalho, bem como, o conteúdo desenvolvido e elaborado no decorrer do processo. Ao final, estabelecemos os cruzamentos entre saber local e o conhecimento estruturado. Apontamos para a necessidade de uma retomada constante das nossas reflexões e de uma avaliação contínua desta experiência, para nós, tão singular
Doutorado
Metodologia de Ensino
Doutor em Educação

Durante uma infecção, uma complexa seqüência de eventos é inkiada após a invasão do hospedeiro por microrganismos patogênicos. Escherichia coli enteroinvasora (EIEC), assim como Shigella, causa disenteria através da invasão da mucosa do cólon, levando à destruição tecidual e inflamação. Para que ocorra um processo infeccioso, porém, são necessários inóculos de 102 Shigella e 106 EIEC. Foram avaliados aspectos da resposta inflamatória desencadeada pela infecção por EIEC em modelo murino, comparativamente a Shigella. A infecção de macrófagos J774 por EIEC resultou em fagocitose bacteriana, comprometimento da viabilidade do macrófago e produção de citocinas. Macrófagos de camundongos C57BU6 infectados com EIEC produziram NO, que parece ser importante no controle da infecção. Foi observado que camundongos INOS nocaute apresentaram maior produção de citocinas pró-inflamatórias e maior letalidade após infecção do que os selvagens. EIEC induziu a migração de granulócitos e monócitos para o peritônio, e a secreção de citocinas por estas células. Houve proliferação de linfócitos em resposta aos antígenos solúveis de EIEC, mas não foi detectada produção de citocinas por estes linfócitos.Comparativamente a Shigella, EIEC escapou mais lentamente do macrófago, induziu menor produção de citocinas pró-inflamatórias e NO, e menor ativação dos linfócitos T. Estes dados sugerem o desafio com EIEC desencadeia uma resposta menos severa no hospedeiro do que Shigella, o que explicaria a forma mais branda de disenteria e resolução mais rápida do processo infeccioso causado por EIEC.
During an infection, a complex sequence of events in iniciated after invasion of the host by pathogenic microorganisms. Enteroinvasive Escherichia coli (EIEC) and Shigella cause dysentery by means of invading the colonic mucosa, leading to tissue destruction and inflammation. In arder for an infectious process to occur, inocula of 102 Shigella are necessary incontrast to e 106 EIEC. The infection of J774 macrophages by EIEC resulted in phagocytosis of the bacterium, a hindering of the viability of the macrophage and in the production of cytokines. Macrophages obtained from C57BU6 mice infected with EIEC produced NO, which seems to be important for the control if infection. We observed that in iNOS knockout mice, both the production of proinflammatory cytokines and lethality were higher than that observed in wild-type mice. EIEC induced the migration of granulocytes and monocytes to the peritoneum as well as the secretion of cytokines by these cells. We observed a proliferation of Iymphocytes in response to inoculation with soluble EIEC antigens, however, in this case, the production of cytokines was not detected. Compared to Shigella, EIEC was slower in escaping from the macrophage, and induced a shyer production of pro-inflammatory cytokines and NO, as well as promoted a smaller activation of T Iymphocytes. These data suggest that when challenged with EIEC, the host produces a less severe response than that elicited by Shigella, which might explain why the infectious process with EIEC produces a milder form of dysentery with a quicker resolution.

A idade entre o terceiro e o sexto mês de vida é um período peculiar para o estabelecimento da imunidade própria dos bezerros. Nesse intervalo, há susceptibilidade e índice de letalidade à broncopneumonias maiores, provavelmente devido à imaturidade do sistema imunológico pulmonar, quer seja por uma insuficiente resposta, nos primeiros momentos, quer seja por uma resposta citotóxica exagerada, no momento subsequente. A par disso, este trabalho teve o intuito de verificar o momento em que ocorre a maturidade do sistema imunológico, como se comportam os perfis Th1 e Th2 e a existência de uma resposta citotóxica exagerada, durante esta fase de estabelecimento da imunidade ativa dos bezerros. Para tal, estudaram-se as funções de fagocitose e metabolismo oxidativo de leucócitos sanguíneos e broncoalveolares, as classes de imunoglobulinas e citocinas incriminadas nos padrões de resposta linfocitária Th1 e Th2, em 10 bezerros da raça holandesa, sadios, avaliados em sete momentos experimentais, com intervalo quinzenal, entre o terceiro e o sexto mês de vida. Os dados foram submetidos à análise estatística, pela comparação entre as médias ou medianas, confrontadas pelo teste de Anova e Tukey, quando paramétricas, e pelo teste de Kruskal Wallis e Dunn, quando não paramétricas, considerando nível de significância P≤ 0,05 e tendência P≤ 0,10. Os dados que apresentaram dinâmicas semelhantes entre si foram submetidos ao teste de correlação de Pearson. Na região broncoalveolar, observaram-se um aumento progressivo das funções dos macrófagos alveolares, equilíbrio de secreção dos isotipos IgG1 e IgG2 e predominância de citocinas compatíveis com padrão de resposta Th1, até os 150 dias de vida dos bezerros. Aos 165 dias de vida, ocorreram diminuição da função celular, aumento dos títulos de IgG2 e aumento da citocina regulatória IL-10. Aos 180 dias, retornou-se o equilíbrio entre secreção de IgG1 e IgG2, diminuiram os teores de IL-10 e ocorreu tendência a aumento de IL-12, TNF-α e metabolismo oxidativo de macrófagos alveolares, o que permitiu concluir que a resposta imune tem característica própria, nesta faixa etária, e não se torna matura até os seis meses de vida. Apesar de os fagócitos pulmonares já estarem eficientes, a partir dos 135 dias de vida, tornam-se hiperresponsivos aos 150 dias de vida, momento em que gera consequentemente uma resposta regulatória e/ou humoral aos 165 dias de vida, para que aos 180 dias de vida, o equilíbrio entre os perfis Th1 e Th2 seja atingido
The age between the third and sixth month of life is a peculiar period for the establishment of active immunity of calves. There is a greater susceptibility and lethality by bronchopneumonia, probably due to the immaturity of the pulmonary immune system, whether by an insufficient response , in the first moments , whether by an exaggerated cytotoxic response in the subsequent time. So, this work aimed to verify when the maturity of the immune system occurs, how the Th1 and Th2 profiles behave and if there is an exaggerated cytotoxic response during this active phase for immunity of the calves without maternal interference. For this purpose we studied the functions of phagocytosis and oxidative metabolism of blood and bronchoalveolar leukocytes, classes of immunoglobulins and cytokines incriminated in lymphocyte response patterns Th1 and Th2, in 10 holstein healthy calves. They were sampled every fifteen days, during the third until sixth month of life. Data were statistically analyzed by comparing the means or medians, confronted by ANOVA test and Tukey, when the data were parametric, and by Kruskal Wallis and Dunn's test, when the data were nonparametric, level of significance p ≤ 0.05 and trend p ≤ 0.10. The data that showed similar dynamics between them were subjected to Pearson correlation test. In bronchoalveolar region, until 150 days of age, the alveolar macrophages functions increased progressively, the IgG1 and IgG2 isotypes secretion showed a balance, and the cytokines profile were compatible with Th1 response. At 165 days of age, there was a decrease of cellular function, an increased of IgG2 titers and the IL-10 secretion, a regulatory cytokine, increased. At 180 days of life, we observed a balance of IgG1 and IgG2 secretion, a decreased of IL-10 levels and a tendency to increase IL-12, TNF-α and alveolar macrophage oxidative metabolism. These results indicated that the calves have an active immune response with particularities for this age group and it does not become mature until six months of life. Despite of the macrophages alveolar are already efficiency from the 135 days of age, they become more reactive at 150 days. After this moment, a regulatory and/or humoral response begins at 165 days of life, as the balance of Th1 and Th2 profiles are reached at 180 days of calves life

A sobrecarga de proteínas nas células tubulares proximais pode levar a lesão intersticial por mecanismos não claros que podem envolver a ativação da imunidade inata. Nós investigamos a hipótese de que a exposição prolongada de células tubulares a altas concentrações de proteínas estimula a imunidade inata, desencadeando inflamação intersticial progressiva e lesão renal. Além disso, investigamos se a inibição específica da imunidade inata ou adaptativa proporcionaria renoproteção em um modelo estabelecido de proteinúria maciça, nefropatia por adriamicina (ADR). Os ratos adultos Munich-Wistar receberam uma dose única de ADR (5 mg / kg iv), sendo acompanhados por 2, 4 e 20 semanas. A albuminúria maciça foi associada à ativação precoce das vias da imunidade inata NF-?B e NLRP3, cuja intensidade correlacionou-se fortemente com a densidade da infiltração de linfócitos. Além disso, os ratos ADR exibiram sinais claros de estresse oxidativo renal. Vinte semanas após a administração de ADR, observaram-se fibrose intersticial intensa, glomerulosclerose e perda da função renal. A administração de micofenolato de mofetil (MMF), 10 mg / Kg / dia, impediu a ativação da imunidade inata e adaptativa, bem como do estresse oxidativo renal e fibrose renal. Além disso, o tratamento MMF foi associado com a mudança de MØ do tipo M1 para o fenótipo M2. Nas células cultivadas de NRK52-E, o excesso de albumina aumentou o teor de proteína de TLR4, NLRP3, Caspase-1, IL6, IL1-beta, MCP-1, alfa-SMA e COLL-1. O silenciamento do TLR4 e / ou NLRP3 mRNA atenuou esse comportamento proinflamatório / profibrótico. A ativação simultânea de imunidade inata e adaptativa podem ser fundamentais para o desenvolvimento de lesão renal em doenças altamente proteinúricas. A inibição da imunidade inata e/ou adaptativa podem constituir uma estratégia para prevenir a DRC nesse contexto
Protein overload of proximal tubular cells can promote interstitial injury by unclear mechanisms that may involve activation of innate immunity. We investigated the hypothesis that prolonged exposure of tubular cells to high protein concentrations stimulates innate immunity, triggering progressive interstitial inflammation and renal injury. In addition, we investigated whether specific inhibition of innate or adaptive immunity would provide renoprotection in an established model of massive proteinuria, adriamycin (ADR) nephropathy. Adult male Munich-Wistar rats received a single dose of ADR (5 mg/kg iv), being followed for 2, 4 or 20 weeks. Massive albuminuria was associated with early activation of both the NF-kB and NLRP3 innate immunity pathways, whose intensity correlated strongly with the density of lymphocyte infiltration. In addition, ADR rats exhibited clear signs of renal oxidative stress. Twenty weeks after ADR administration, marked interstitial fibrosis, glomerulosclerosis and renal functional loss were observed. Administration of mycophenolate mofetil (MMF), 10 mg/Kg/day, prevented activation of both innate and adaptive immunity, as well as renal oxidative stress and renal fibrosis. Moreover, MMF treatment was associated with shifting of M0 from the M1 to the M2 phenotype. In cultivated NRK52-E cells, excess albumin increased the protein content of TLR4, NLRP3, Caspase-1, IL6, IL- 1beta, MCP-1, alpha-actin and collagen-1. Silencing of TLR4 and/or NLRP3 mRNA abrogated this proinflammatory/profibrotic behavior. Simultaneous activation of innate and adaptive immunity may be key to the development of renal injury in heavily proteinuric disease. Inhibition of innate and/or adaptive immunity may constitute a strategy to prevent CKD in this setting

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2017.
Submitted by Raquel Almeida (raquel.df13@gmail.com) on 2017-05-19T17:03:17Z No. of bitstreams: 1 2017_AngelinaMariaMoreschiBasso.pdf: 8664082 bytes, checksum: df2395cb8590c7b00e379fcfd9160aba (MD5)
Approved for entry into archive by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2017-05-19T21:46:48Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_AngelinaMariaMoreschiBasso.pdf: 8664082 bytes, checksum: df2395cb8590c7b00e379fcfd9160aba (MD5)
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Os fungos patogênicos oportunistas são responsáveis pela maior parte das infecções fúngicas nos seres humanos. Nos últimos anos, foi observado um aumento considerável na incidência de infecções causadas por esses organismos, principalmente em pacientes imunossuprimidos (portadores de HIV), transplantados ou em tratamento quimioterápico. Atualmente, a medicina está proporcionando um aumento na sobrevida desses pacientes, contudo a taxa de mortalidade continua elevada. A resposta imunitária é essencial para a proteção do hospedeiro durante o curso destas infecções e a ativação imunológica adequada é fundamental para controlar o patógeno. Neste contexto, a utilização de estimuladores de ativação é uma estratégia terapêutica interessante, uma vez que possibilita o controle eficiente destes fungos. Os polissacarídeos são importantes indutores da resposta imune e podem se ligar aos receptores de reconhecimento padrão. Além disso estas moléculas podem ativar a mecanismos da resposta imunológica, como estimular a produção de citocinas pró- inflamatórias e da explosão respiratória, aumentando assim a eficiência da atividade microbicida. Os polissacarídeos são constituintes da parede celular de fungos, leveduras, bactérias e plantas. Os cogumelos são fontes importantes de polissacarídeos que apresentam diversas propriedades biologicamente ativas, principalmente aquele relacionado a atividade imunomodulatória, sendo capazes de modular a ativação da imunidade inata e adaptativa. Assim, estes carboidratos podem ser diferenciados de acordo com as diversas características estruturais. Neste contexto, o objetivo deste trabalho foi selecionar e caracterizar os polissacarídeos provenientes dos cogumelos Ganoderma lucidum e Auricularia auricula, e avaliar sua capacidade imunomodulatória e a resposta imunitária do hospedeiro infectado pelo fungo patogênico Cryptococcus neoformans. Os resultados indicaram que ambas as frações (solúvel e insolúvel) de polissacarídicas extraídas dos cogumelos avaliados demonstraram uma composição monossacarídica similar (majoritariamente glicose na fração insolúvel e galactose na fração solúvel) e da identificação de beta glucanas nas frações solúveis e insolúveis de Auricularia auricula. Adicionalmente, a avaliação das frações dos cogumelos analisados não apresentou citotoxicidade, frações LPS free, uma atividade imunomodulatória em células dendríticas e macrófagos M1 e M2 por análise pela ligação aos receptores Dectina-1, TLR2 e TLR4). Ainda foi observado a secreção de citocinas (TNF-α, IL-1β, IL-10), de óxido nítrico e de espécies reativas de oxigênio. Assim como a modulação da imunidade adaptativa (pelo aumento da expressão de CD80, CD86 e MHCII) utilizando técnicas como ELISA e citometria de fluxo. Todavia, os ensaios in vitro referente à atividade microbicida das frações na infecção fúngica e também assim as análises de genes relacionados à defesa contra o patógeno assim como a avaliação da sobrevida in vivo indicaram que somente polissacarídeos da fração insolúvel de Auricularia auricula demonstraram serem promissores como adjuvantes para potencializar a defesa da imunidade inata referente à infecção por Cryptococcus neoformans.
Opportunistic pathogenic fungi are responsible for the majorist of human infection. In the last years, it was observed an increase in the incidence of infections by these organism, mainly in patients exhibiting immunosuppressed patients (HIV), transplanted or in chemotherapy treatment. Currently, medicine advances are providing to provide an increase in the survival of these patients although the mortality rate is still high. The immune response is essential to protect the host during these infections and the immune adequate activation is critical to pathogen control. In this context, immune cell activation stimulators is a therapeutic strategy promising, since it allows fungi efficient control. The polysaccharides are important immune response inductors and may receptors bind of pattern recognition receptors. Moreover, these molecules can activate various functions pro-inflammatory cytokine production stimulate and respiratory burst, thereby improving microbicide efficient activity. The polysaccharide are constituents of fungi bacteria and plants cell wall. The mushrooms are important sources of polysaccharides showing several active biological properties, mainly innate and adaptive immunomodulatory activity. These carbohydrates can be differentiated according to structural diversity. Then, the objective of this study was to select and to characterize polysaccharides from Ganoderma lucidum and Auricularia auricula mushrooms as well as to evaluate the host immune response infected by fungus pathogen Cryptococcus neoformans. The results showed that both fractions (soluble and insoluble) of polysaccharides obtained from Ganoderma lucidum and Auricularia auricula have similar monosaccharide composition (mainly glucose in insoluble fraction and galactose in soluble fraction) and beta-glucan in Auricularia auricula fractions. In addition, the assessment of insoluble fractions of the species analyzed showed acceptable cytotoxicity; free LPS molecules; immunomodulatory activity in dectin-1, TLR2 and TLR4 and macrophages by receptors ligation. Moreover, it was observed a production of TNF-α, IL-1β, IL- 10 cytokine as well as nitric oxide and species oxygen reactive production. In addition; an adaptive immune modulation with increase of CD80, CD86 and MHCII. Nevertheless, in vitro and in vivo fungal infection assays presented that only fraction insoluble obtained from Auricularia auricula were promising adjuvants in innate immunity defense Cryptococcus neoformans infection.