Dissertations / Theses on the topic 'In vitro'
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Nogueira, Jênifer Silva. "Germinação ex vitro e in vitro de gabirobeira." Universidade Federal de Goiás, 2012. http://repositorio.bc.ufg.br/tede/handle/tede/7497.
Full textAbstract:
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Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq
The genus Campomanesia spp. has great economic potential unexploed. How its seeds not tolerate desiccation its propagations has been made by seeds extraction, when they are in germinate at appropriate physiological conditions. Several problems such as dormancy, recalcitrance, seasonality, difficulty of propagation has difficult he rational exploration of various species. Environmental conditions appropriate for the germination process may be provided in laboratories by in vitro multiplication. In this work techniques were applied to study some factors that affect ex vitro and in vitro germination of gabirobeira seeds and anther and ovaries culture through micropropagation. The results indicated that ex vitro germination the test substrates (Sand, Bioplant®, Tri-mix®, Bioplant®+Sand (1:1 v/v), Tri-mix®+Sand) for all substrates were superior to Tri-mix® substrate for germination percentage and for emergency speed of index. For the in vitro germination was found that all the culture medium tested in the absence of sucrose had a satisfactory germination rate. Evaluating the effects of accelerated aging and GA3 in the in vitro germination conclude that premature aging interfered the gabirobeira seeds ability of germination and GA3 is unnecessary for the germination stage. In the anthers and ovaries of culture, no callus formation in any of the treatments. However, the PVP was effective as an antioxidant. Keywords: sucrose,
A gabirobeira pertence ao gênero Campomanesia spp. possui grande potencial econômico não explorado. Como suas sementes não toleram a dessecação, sua propagação tem sido realizada logo após a extração, quando estas estão em condições fisiológicas apropriadas para germinar. Vários problemas como dormência, recalcitrância, sazonalidade e dificuldades de propagação têm inviabilizado a exploração econômica racional de várias espécies. Condições ambientais apropriadas para o processo de germinação podem ser fornecidas em laboratórios por meio da multiplicação in vitro. Neste trabalho, foram aplicadas técnicas para estudar alguns fatores que interferem na germinação ex vitro e in vitro de sementes de gabiroba e na micropropagação através da cultura de anteras e ovários. Os resultados indicaram que ao testar os substratos (Areia, Bioplant®, Tri-mix®, Bioplant®+Areia (1:1 v/v), Trimix ®+Areia)todos os substratos foram superiores ao substrato Tri-mix® para a porcentagem de germinação e vigor. Para a germinação in vitro verificou-se que todos os meios de cultura testados (MS, MS meia força, WPM e WPM meia força) na ausência de sacarose tiveram uma taxa de germinação satisfatória. Avaliando os efeitos do envelhecimento acelerado e de GA3 na germinação in vitro, o envelhecimento acelerado interferiu na capacidade germinativa das sementes de gabiroba e verificou-se que a aplicação de GA3 exógeno é desnecessária para a etapa de germinação. Na cultura de anteras e ovários, não houve calogênese em nenhum dos tratamentos testados. No entanto, o PVP foi eficiente como antioxidante.
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Christie, Louisa A. "Homocysteine alters hippocampal signalling in vitro and ex vitro." Thesis, University of Aberdeen, 2006. http://ethos.bl.uk/OrderDetails.do?uin=uk.bl.ethos.440060.
Full textAbstract:
The focus of this thesis was to investigate the non-essential, sulphur-containing amino acid homocysteine (HCY); elevations in plasma HCY have been associated with several pathological states in the elderly; age-associated reductions in vitamins, essential for the metabolism of HCY, are common and this situation is exacerbated during Alzheimer’s disease (AD). Primary culture preparations of hippocampal tissue were utilised to investigate intracellular signalling and Ca2+ homeostasis, which were monitored using the Ca2+ fluorescent dye Fluo-4. In the present study hippocampal slices were prepared from adult rats. In Fluo 4 Ca2+ imaging studies, HCY (10, 100 µM and 1 mM) added acutely, caused rises in intracellular Ca2+ and decreased NMDA-induced Ca2+ responses. Pharmacological investigations confirmed that the primary Ca2+ influx following addition of HCY (1 mM) was not mediated via NMDA, group I mGluRs, glycine or GABA receptors, voltage-gated Ca2+ channels (VGCCs) or intracellular stores (ER). Results with specific antagonists indicate that HCY may have a partial interaction with NMDA receptors and intracellular stores; additionally, experiments revealed that HCY may antagonise the glycine co-agonist binding site on the NMDA receptor and may depend of HCY dose or competition with other glycine site modulators. Acute application of HCY in slices (10 µM - 1 mM) in vitro caused a dose-response effect with lower concentrations impairing and higher doses enhancing LTP. With different systemic routes and longer durations (with two concentrations: 20 and 200 mg/kg) basic transmission and LTP were altered in a bi-directional as well as concentration- and time-dependent manner, suggestive of diverse and complex targets for HCY. Overall, the observed HCY-induced functional alterations amid lack of severe toxicity in vitro and ex vivo in healthy cells suggest a possible contribution in aged or diseased tissues, making this an extremely important consideration for future research as well as for dietary considerations in the elderly.
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Gomes, Daniela Faria. "Compósitos de PCL e vidro bioativo : estudo do comportamento in vitro." Master's thesis, Universidade de Aveiro, 2013. http://hdl.handle.net/10773/12323.
Full textAbstract:
Mestrado em Materiais e Dispositivos BiomédicosNa regeneração do tecido ósseo torna-se cada vez mais frequente o recurso a materiais capazes de interagir com o organismo, através de um conjunto de respostas específicas que conduzem à formação de novo tecido ósseo. Neste contexto, os compósitos de matriz polimérica com enchimento bioativo têm sido objeto de investigação recente pois combinam as vantagens destes dois tipos de materiais, para as aplicações pretendidas. O presente trabalho teve como objetivo desenvolver compósitos de vidro bioativo e policaprolactona (PCL) e estudo do seu comportamento em meio acelular (in vitro). Quando utilizados separadamente em aplicações biomédicas, estes materiais têm revelado características promissoras. No entanto, as propriedades de compósitos de matriz de PCL reforçado com vidro bioativo ainda não estão totalmente esclarecidas. O vidro em estudo pertence ao sistema 3CaO-P2O5-SiO2-MgO, identificado em estudos anteriores, como possuindo características bioativas. O PCL foi escolhido por ser um polímero sintético biocompatível, biodegradável e aprovado pela Food and Drug Administration (FDA). Os compósitos foram preparados por duas técnicas distintas: extrusão e evaporação do solvente. Estudaram-se algumas variáveis de processamento, nomeadamente: a fração de partículas vítreas, o tamanho de partículas do enchimento, fração de partículas vítreas e respetiva distribuição granulométrica. O comportamento destes compósitos em meio fisiológico simulado indica um elevado potencial bioativo, manifestado através da formação de uma camada de fosfato de cálcio na sua superfície, o que torna estes compósitos promissores para aplicações em regeneração do tecido ósseo.
In bone regeneration it becomes more and more attractive the use of materials capable of interacting with the living tissues through adequate responses that lead to the formation of new bone. In this context, composites of polymeric matrix with bioactive filling composites have recently been investigated because they combine the advantages of these two types of materials for the envisaged application. The main goal of this work was to produce composites of polycaprolactone (PCL) and a bioactive glass as filler and to evaluate their in vitro behavior in an acelular medium When used separately in biomedical applications, these materials have revealed quite promising characteristics. However, the properties of composites based on polymeric matrix reinforced with glass are not yet entirely clarified. The bioactive glass used in this project belongs to the 3CaO-P2O5-SiO2-MgO, and system showed, in previous works, to exhibit a bioactive behavior in vitro. PCL was chosen because it is a synthetic biocompatible, biodegradable and Food and Drug Administration (FDA) approved polymer. The composites were prepared by two techniques: extrusion and solvent casting. Some variables of processing were studied, namelly: the filler containt, the particle size and particle size distribution. The behavior of these composites in simulated physiologic environment indicates a high bioactive potential confirmed by the formation of a calcium phosphate layer, making these composites very promising for bone regeneration applications.
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Marangoni, Alessandra. "Propagação ex vitro e in vitro de Heliconia angusta VELL." Florianópolis, SC, 2001. http://repositorio.ufsc.br/xmlui/handle/123456789/80244.
Full textAbstract:
Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias. Curso de Pós-Graduação em Recursos Genéticos VegetaisMade available in DSpace on 2012-10-18T11:58:38Z (GMT). No. of bitstreams: 0Bitstream added on 2014-09-25T21:02:38Z : No. of bitstreams: 1 180090.pdf: 34351582 bytes, checksum: 9e6bf5aa46f9133963271d118a1a7e10 (MD5)
Considerando as limitações das técnicas convencionais de propagação vegetativa para esta espécie, o estabelecimento de metodologia para a propagação vegetativa é de fundamental importância para ampliar as áreas de cultivo e atender a demanda do mercado consumidor. Assim, no presente trabalho, objetivou-se realizar estudos visando otimizar as formas de propagação vegetativa desta espécie. Dois sistemas foram empregados para propagação vegetativa de Heliconia angusta. No primeiro, foi avaliado a propagação vegetativa através da divisão de rizomas onde foi avaliado as respostas destas estruturas frente a utilização de benzilaminopurina (BAP). No segundo sistema de produção, procurou-se estabelecer parâmetros para cultura in vitro desta espécie, em especial o controle da oxidação e da contaminação dos explantes.
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Curti, Aline Ritter. "RIZOGÊNESE IN VITRO E EX VITRO EM Peltophorum dubium (SPRENGEL) TAUBERT." Universidade Federal de Santa Maria, 2014. http://repositorio.ufsm.br/handle/1/3767.
Full textAbstract:
Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível SuperiorPeltophorum dubium is native forest species of Brazil endowed with ecological importance for the recovery of degraded areas and economical for timber purposes. The seeds of this species have low and irregular germination if they are not subjected to treatments to overcome dormancy. However, there are few studies that allow for the vegetative propagation of the species. As a result, the present study aimed to evaluate the formation of roots in shoots of P. dubium applying the techniques of micropropagation and minicutting and acclimatization of plants produced by these techniques. For rooting in vitro micropropagated shoots were subjected to treatments where different culture media were tested, with addition of 30 g L-1 vermiculite, combined with the nutrient media MS, MS/2, WPM, WPM/2 and changes in concentrations of auxin IBA (0, 5, 10 or 20 μM) and sucrose (0, 15 or 30 g L -1) in the presence or absence of agar (0 or 7g L-1) arranged in different tests. The results indicated that the best combination for root formation in vitro shoots of Peltophorum dubium is the use of nutritional WPM/2 without addition of sucrose and auxin, with 7 g L- 1 agar. This condition was still allowing the best performance of the plants during acclimatization in vitro. For rooting of shoots via minicutting, cuttings 3-7 cm apical portion of rooted shoots of seminal origin were used. Root formation after the cuttings are subjected to immersion in solution with 0, 1.000, 2.000 or 4.000 mg L- 1 IBA, from different collections and during 30, 60 or 90 days in a greenhouse with controlled conditions was evaluated for root induction. Rooting in cuttings occurred even without the use of IBA, after successive collections. However, it was increased with the use of up to 2.000 mg L-1 auxin the period of 60 days being sufficient for the formation of roots takes place. The seedlings showed good performance during acclimatization, indicating that the technique is feasible for minicutting plants production Peltophorum dubium.
Peltophorum dubium é uma espécie florestal nativa do Brasil dotada de importância ecológica para fins de recuperação de áreas degradadas e econômica, para fins madeiráveis. As sementes desta espécie apresentam germinação baixa e irregular se não forem submetidas a tratamentos para superação de dormência. Em virtude da carência de estudos que viabilizem a propagação vegetativa da espécie e considerando a natural recalcitrância em relação à rizogênese nesse processo, o presente trabalho teve como objetivo avaliar a rizogênese in vitro e ex vitro em brotações de P. dubium aplicando-se as técnicas de micropropagação e de miniestaquia, bem como a aclimatização das mudas produzidas por meio destas técnicas. Para a rizogênese in vitro, brotações micropropagadas foram submetidas a tratamentos em que foram testados diferentes meios de cultivo, com acréscimo de 30 g L-1 de vermiculita, combinados aos meios nutritivos MS, MS/2, WPM, WPM/2 e alterações nas concentrações da auxina ácido indolbutírico - AIB (0, 5, 10 ou 20 μM) e sacarose (0, 15 ou 30 g L-1), na presença ou ausência de ágar (0 ou 7 g L-1), arranjados em diferentes ensaios. Os resultados indicaram que a melhor combinação para a rizogênese in vitro em brotações de Peltophorum dubium é a utilização do meio nutritivo WPM/2, na ausência de sacarose e da auxina, porém com 7 g L-1 de ágar. Essa condição foi, ainda, a que permitiu o melhor desempenho das mudas durante a aclimatização in vitro. Para a rizogênese em brotações via miniestaquia, foram utilizadas miniestacas, de 3 a 7 cm, isoladas da porção apical de brotações de minicepas de origem seminal. Foi avaliada a formação de raízes após as miniestacas serem submetidas à imersão em solução contendo 0, 1.000, 2.000 ou 4.000 mg L-1 de AIB, oriundas de diferentes coletas e permanecendo por 30, 60 ou 90 dias em casa de vegetação com condições controladas adequadas à indução de raízes. A rizogênese nessas miniestacas ocorreu mesmo sem a utilização de AIB, ao longo das sucessivas coletas. No entanto, foi incrementada com a utilização de até 2.000 mg L-1 da auxina, sendo suficiente o período de 60 dias para que ocorra a formação de raízes. As mudas apresentaram bom desempenho durante a aclimatização, indicando que a técnica de miniestaquia é viável para a produção de mudas de Peltophorum dubium.
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Betton, Jean-Michel. "Étude du repliement in-vitro de la phosphoglycérate kinase in-vitro." Paris 11, 1987. http://www.theses.fr/1987PA112277.
Full textAbstract:
Cette thèse présente l’étude de la transition de dénaturation renaturation de la phosphoglycérate kinase (PGK) induite par le chlorure de guanidine. Dans la première partie, la transition conformationnelle a été étudiée à l’équilibre à l’aide de trois signaux: l’activité enzymatique, la fluorescence des tryptophanes et l’ellipcité. A partir de ces données, il a éte clairement constaté que le processus dévie significativement d’un modèle à deux états et qu’il existe des intermédiaires: les courbes de transition obtenues par les différents signaux ne coïncident pas et celle mesurée par dichroïsme circulaire est nettement asymétrique. Dans la seconde partie, les cinétiques de dénaturation et de renaturation ont été suivies par les mêmes signaux. Nous avons pu détecter plusieurs phases cinétiques. Les cinétiques expérimentales ont été comparées aux propriétés cinétiques de plusieurs schémas simulés. Un schéma minimum, tenant compte des diverses observations expérimentale été proposé. Dans la troisième partie, la réversibilité du processus de dénaturation a été étudiée en mesurant la réapparition de l’activité enzymatique. Certaines conditions expérimentales (0,8 M de chlorure de guanidine) permettent de piéger un intermédiaire structuré mal dépourvu de propriétés fonctionnelles. Cet intermédiaire correspond à une partie structurée du domaine C-terminal de la PGK. Ceci a été confirmé dans la dernière partie de la thèse où est présentée l’obtention du domaine C-terminal isolé par protéolyse ménagée. En conclusion, nous proposons un schéma pour la formation de la structure fonctionnelle de la phosphoglycérate kinase.
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Kruger, Francois Jacobus Liebenberg. "In Vitro and In Vitro production of artemisinin by artemisia species." Diss., University of Pretoria, 2004. http://hdl.handle.net/2263/40342.
Full textAbstract:
Artemisinin is produced in the leaves of Artemisia annua and is currently one of the most
valuable antimalarial treatments. A. annua is of Asian origin but many other family members
have been identified worldwide. A. annua however, is the only one that produces artemisinin.
Synthetic production of artemisinin is not yet feasible, not to mention very expensive and the
product yields are relatively low. The aims of this study were threefold: 1) To regenerate
callus, cell cultures and plants from genetically modified root cultures of A. afra into which an
artemisinin biosynthetic gene was inserted from A. annua 2) To investigate the probability
that fungal endophytes are responsible for the production of artemisinin and 3) To establish
two fields of high yielding varieties of A. annua plants and evaluate whether artemisinin
production of these two locations will remain high.
Callus and cell cultures of the genetically modified A. afra root cultures were established, but
no shoots have been produced as of yet and this is an on-going investigation. Fungal
endophytes were sampled and none of the endophytes produced artemisinin. Five different
lines of A. annua were cultivated, successfully grown and harvested. Measurements were
taken at different stages of processing, these were compared and analysed using various
methods such as height and mass comparisons. Comparisons revealed that the production
of artemisinin is correlated to local sets of conditions rather than the variety of individual
lines. The genetic potential to produce high quantities of artemisinin appears to have been
lost, instead of being maintained. We confirmed that secondary compound production and
specifically, artemisinin, is enhanced by certain stress factors on the plants.Dissertation (MSc)--University of Pretoria, 2013.
gm2014
Plant Science
unrestricted
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Odinot, Françoise. "Psychosomatique et fécondation in vitro." Bordeaux 2, 1995. http://www.theses.fr/1995BOR2M026.
Full text
9
McKenna, Erin N. "Embryonic policies the stunted development of in vitro fertilization in the United States, 1975-1992 /." Connect to this title online, 2006. http://rave.ohiolink.edu/etdc/view?acc%5Fnum=bgsu1143490658.
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10
Nitard-Plan, Sylvie. "Bilan de l'activité fécondation in vitro du centre d'aide médicale à la procréation du Vaucluse de 1987 à 1994." Montpellier 1, 1996. http://www.theses.fr/1996MON11032.
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11
Verrey, Nicolas. "Etude longitudinale d'une population ayant fait une première tentative de fécondation in vitro entre janvier 1985 et juin 1986 : succès, abandon, échec." Montpellier 1, 1989. http://www.theses.fr/1989MON11276.
Full text
12
Gagnepain, Anne. "Fécondation in vitro : synthèse clinique, biologique, épidémiologique, législative et éthique ; méta-analyse des essais thérapeutiques." Montpellier 1, 1989. http://www.theses.fr/1989MON11258.
Full text
13
Lucho, Simone Ribeiro. "PROPAGAÇÃO IN VITRO E EX VITRO DE Symplocos uniflora (POHL.) BENTH. (SYMPLOCACEAE)." Universidade Federal de Santa Maria, 2014. http://repositorio.ufsm.br/handle/1/4871.
Full textAbstract:
Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível SuperiorThe Symplocos uniflora species is a native tree that reaches up to 10m tall, belonging to the Symplocaceae family. It is popularly known as pau-de-canga, maria-mole-do-banhado and sete-sangria. Virtually, there is no information in the literature on reproduction, growth and development of this species, whose studies of forms of propagation is essential. Thus, the present study intended to examine the sexual and vegetative propagation of the species S. uniflora through protocols for seed germination and micropropagation. Fruit and vegetative material of adult plants from the Botanical Garden of UFSM were collected. The fruits without pulp, containing the seeds were used to evaluate the effect of temperature, storage time, light, collection time, the application of chemical and mechanical scarification, besides the use of gibberellic acid on seed germination of S. uniflora. Plants grown in a greenhouse were used as donor explants (nodal and apical segment) in order to obtain the direct organogenesis. In the study, MS medium and different combinations of auxin naphthaleneacetic acid (NAA) and cytokinin 6-benzylaminopurine (BAP) were used. The presence of light is essential for the germination of Symplocos uniflora, being classified as positive photoblastic preferred. The use of pre-germination treatment with concentrated sulfuric acid is favorable for overcoming seed dormancy. Of the substrates analyzed, the filter paper showed the best germination percentages and speed of germination. Plantmax® substrate offered the highest length of air shoots. In micropropagation, the average percentage of air shoots was 29% with no occurrence of root formation.
Symplocos uniflora (Symplocaceae) é uma árvore que atinge até 10 m de altura, nativa e conhecida popularmente como pau-de-canga, maria-mole-do-banhado e sete-sangria. O trabalho visou estudar a propagação sexuada e vegetativa da espécie, através de protocolos para a germinação de sementes e micropropagação. Endocarpos concrescidos com as sementes (diásporos) foram utilizados para estudos da germinação das sementes avaliando temperatura de armazenamento (10 e 25ºC), temperaturas de incubação (15, 20, 25 e 30ºC), regimes de luz (fotoperíodo de 16 horas e escuro contínuo), época de coleta dos frutos (janeiro e março de 2013), escarificação química (ácido sulfúrico concentrado por 10 minutos), escarificação mecânica (desponte do endocarpo) e ácido giberélico (GA3), 1,5 m L-1. Plantas cultivadas em casa de vegetação, com 18 meses de idade, foram utilizadas como doadoras de explantes (segmento nodal e apical), visando à obtenção da organogênese direta. No estudo foi utilizado o meio MS e diferentes combinações (tratamentos) de ácido naftalenoacético (ANA) e 6-benzilaminopurina (BAP), em mg L-1: 0,0; 0,1; 0,2 e 0,4 e 0,0; 1,0; 2,0 e 4,0, respectivamente. A temperatura de 25ºC promoveu a maior porcentagem de germinação das sementes (24%). Frutos maduros apresentaram as melhores porcentagens de germinação (30%) e índice de velocidade de germinação (1,19). A presença de luz favoreceu à germinação das sementes, sendo classificadas como fotoblásticas positivas preferenciais. O tratamento pré-germinativo com ácido sulfúrico concentrado por 10 minutos promoveu a superação da dormência das sementes. Na germinação in vitro o uso de GA3 no meio de cultura propiciou os melhores índices de velocidade de germinação (0,18), não influenciando na porcentagem da mesma. No cultivo in vitro, a maior porcentagem de explantes com brotações aéreas (29%) ocorreu na combinação de 0,2 mg L-1 de ANA e 2,0 mg L-1 de BAP, sem ocorrência de formação de raízes. Os explantes utilizados e brotações obtidas in vitro apresentaram taxas de oxidação variando de 10 a 70%.
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Laqua, Anja. "Reaktive Toxizität in vitro." Doctoral thesis, Technische Universitaet Bergakademie Freiberg Universitaetsbibliothek "Georgius Agricola", 2014. http://nbn-resolving.de/urn:nbn:de:bsz:105-qucosa-132574.
Full textAbstract:
Es wird eine Bioassay-Analyse von 168 Testsubstanzen gegenüber Tetrahymena pyriformis beschrieben. Mithilfe dieses In-vitro-Ansatzes konnte eine erste prognostische Aussage über die toxische Wirkung unbekannter Stoffe getroffen werden. Aus den Konzentrations-Wirkungs-Beziehungen erfolgte eine Bestimmung der Toxizitätserhöhung gegenüber der Narkoselevel-Toxizität. Dadurch war eine mechanistische Interpretation der Wirkstärke der Fremdstoffe möglich. Die Wirkung der Fremdstoffe basiert auf direkten toxikologisch relevanten Reaktionsmechanismen mit nukleophilen Biomolekülen oder nach entsprechender enzymatischer Aktivierung und ermöglichte die Aufstellung von Strukturalarmen. Aus jeder Stoffklasse waren Vertreter direkt oder nach enzymatischer Biotransformation erhöht toxisch. Somit ist mithilfe der Ciliaten eine Vorhersage der direkten reaktiven Toxizität möglich. Zudem enthält es für eine metabolische Aktivierung bedeutsame Enzymsysteme. Damit ist es für eine prognostische Vorhersage der Toxizität unbekannter Stoffe anwendbar.
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Errington, Rachel J. "In vitro wound healing." Thesis, University of Oxford, 1993. http://ethos.bl.uk/OrderDetails.do?uin=uk.bl.ethos.357419.
Full text
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Di, Fabio Paola <1978>. "Cabergolina: biotrasformazione in vitro." Doctoral thesis, Alma Mater Studiorum - Università di Bologna, 2010. http://amsdottorato.unibo.it/2922/1/di_fabio_Paola_tesi.pdf.
Full text
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Di, Fabio Paola <1978>. "Cabergolina: biotrasformazione in vitro." Doctoral thesis, Alma Mater Studiorum - Università di Bologna, 2010. http://amsdottorato.unibo.it/2922/.
Full text
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Serikaku, Daniela. "Avaliação in vitro da liberação, penetração e retenção cutâneas de ciclopirox olamina em formulações de uso tópico por um processo validado." Universidade de São Paulo, 2006. http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/9/9139/tde-05122017-142258/.
Full textAbstract:
Para que um produto de aplicação tópica apresente o efeito terapêutico é necessário que o fármaco seja liberado de seu veículo e atravesse a barreira do estrato córneo, atingindo seus sítios de ação nas camadas da pele nas quais o efeito é esperado. Os estudos de penetração cutânea in vitro, utilizando células de difusão de Franz modificadas, podem fornecer resultados úteis quanto à eficácia do produto. As dermatofitoses são micoses superficiais. São manifestações crônicas e resistentes ao tratamento, fato que se explica não só em decorrência da própria natureza destas afecções como também devido à baixa penetração de fármacos antimicóticos na pele. Dentre os antifúngicos disponíveis na terapêutica, ciclopirox olamina é uma substância que tem demonstrado elevada eficácia no tratamento de dermatofitoses. O presente trabalho teve como objetivo desenvolver formulações de uso tópico contendo 0,5% de ciclopirox olamina e avaliar a performance dessas formulações. Foi possível obter formulações estáveis fisicamente, contendo promotores de penetração cutânea. O sistema de amostragem automática utilizado para realização dos experimentos foi qualificado e apresentou-se em condições adequadas.In order to present the pharmacological effect, a topical product must release the pharmaceutical active ingredient from its vehicle and this active must pass through the stratum corneum barrier, reaching the target layer of the skin, where its effect is desired. In vitro skin penetration studies, using modified diffusion Franz cells, can provide useful results regarding the product efficacy. Dermatophytosis is superficial mycosis resistant to treatment due to the disease nature and also to the low penetration profile of the antifungals into the skin. Among the antifungals available in the therapeutic arsenal, ciclopirox olamine has demonstrated a high efficacy in the treatment of dermatophytosis. The objectives of the present work were to develop topical formulations containing 0,5% of ciclopirox olamine and evaluate their performance. It was possible to obtain physically stable formulae, containing skin penetration enhancers. The automatic sampling system used in the experiments was qualified, showing adequate performance.
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Cohen, Floriane. "Architectures dynamiques des réseaux neuronaux in vitro." Thesis, Paris Sciences et Lettres (ComUE), 2018. https://tel.archives-ouvertes.fr/tel-02512337.
Full textAbstract:
Le fonctionnement du système nerveux est basé sur l’établissement de circuits neuronaux complexes. Pendant le développement, le branchement axonal permet à chaque neurone de créer des contacts synaptiques avec de multiples cibles. Ce phénomène joue un rôle majeur dans la mise en place des réseaux neuronaux. La compréhension des mécanismes du branchement neuronal est donc essentielle à l’étude du développement des circuits nerveux.Dans cette thèse, nous avons étudié le branchement neuronal en imposant des contraintes morphologiques aux neurones à l’aide de micropatterns adhésifs. En utilisant des patterns statiques, nous avons pu explorer le comportement des branchements neuronaux dans une large gamme de géométrie. Nous avons en particulier étudié l’influence de l’angle de branchement.En parallèle, nous avons travaillé sur le développement d’une technique de micropatterning dynamique basée sur l’adsorption spontanée de dérivées PEGylés de poly-L-lyisne permettant de créer des patterns reconfigurables, dans le but de pouvoir contrôler spatio-temporellement la génération de branches neuritiquesThe function of the nervous system relies on the establishment of complex neuronal circuitry. During development, axon branching allows each neuron to establish synaptic contacts with multiple targets and is essential to the assembly of highly interconnected networks. Therefore, understanding the mechanisms underlying the control of neuronal branching is crucial in the study of neuronal circuit development.In this thesis, we investigated this phenomenon by imposing morphological constraints to neurons through the use of different chemical micropatterning techniques. Using static micropatterns, we explored branching behavior in a wide range of geometries with a focus on the influence of branching angle. In parallel, we have also worked on the development of a dynamic patterning technique based on spontaneous adsorption of comb-like derivatives of poly-L-lysine to form switchable patterns on highly cell-repellent surfaces, with the aim of creating a platform allowing for spatio-temporally controlled generation of neurite branches
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Tain, Laurence. "D'une infécondite a une fécondation in vitro, parcours. ." Lyon 2, 1998. http://www.theses.fr/1998LYO20065.
Full textAbstract:
Comment se fait le recours aux techniques de fecondation in vitro ? Comment se construisent, socialement et dans le temps, ces decisions successives, ces parcours de vie qui amenent, un jour, un couple a consulter a l'hopital pour sterilite puis a effectuer une fecondation in vitro ? Il s'agit d'approcher la realite des processus sans presupposer trop fortement de leur automaticite, de leur evidence. Les dimensions temporelle et institutionnelle de l'assistance medicale a la procreation sont abordees en meme temps que l'elaboration conjointe, par le medecin et le couple de + patients ;, des moments de cette + trajectoire ;. Sont impliques aussi bien des structures comme la securite sociale, les firmes pharmaceutiques ou le cecos que l'organisation hospitaliere et les rapports entre l'hopital et la medecine de ville. Il semble que le consensus fondant + l'accord ; entre les differents acteurs repose sur plusieurs piliers :. Une representation commune de l'infecondite, probleme biomedical dont la solution est technique ; c'est une conception hyperactive, ou techniciste, de la medecine qui est a l'oeuvre et a laquelle adherent tout particulierement les femmes occupant une position subalterne dans la hierarchie hospitaliere ;. Une importance forte accordee au temps de l'hopital, temps de l'urgence technique, du programme qui fait loi, souvent assimile, dans le discours, au + rythme naturel ; ;. Le desir de ne pas s'eloigner du + modele biologique ; de la procreation, qui conduit a reserver l'acces de ces techniques a un couple forme d'un homme et d'une femme. Des contradictions n'en demeurent pas moins : il est difficile de justifier exclusivement par des arguments scientifiques l'ensemble des pratiques de l'assistance medicale a la procreation ; l'artifice technique a tendance a faire eclater les limites + naturelles ; du temps de la procreation aussi bien que l'unite + biologique ; de procreation. La profession medicale est confrontee a ces contradictions pour legitimer son intervention dans ce nouveau domaine. Au-dela des difficultes rencontrees par les medecins, se trouve posee la question de la transformation des normes qui concerne le corps social tout entierWhat leads people to resort to in vitro fertilization ? What social and temporal construction underlies the successive decisions, the life histories whereby a couple ends up seeking medical advice and eventually undergoing in vitro fertilization ? When trying to understand the actual process, one should not unquestioningly assume that it is self-evident. This study deals with the time dimension of medically assisted procreation (which is also rooted in the medical institution) ; it also looks into the joint elaboration, by doctors and the two + patients ; in the consulting couple, of the successive steps taken on this course. The process involves such institutions as cecos, the social security system, or pharmaceutical firms as well as hospital and private practice. The consensus which is at the root of the + agreements ; between all those actors is itself based on several elements :. There is first a shared perception of infertility as a biomedical problem admitting of technical solutions. We have here a hyperactive, technologically oriented conception of medicine, which particularly appeals to women working at the lower levels of the hospital hierarchy ;. A lot of importance is devoted to + hospital ; time, a time of urgent medical decisions, ruled by strict schedules. Simultaneously, this + hospital ; time is often considered as being one with + natural ; time ;. A wish to keep as close as possible to the + biological ; pattern ; this leads to keeping in vitro fertilization for couples made up of a man and a woman. Still, there remain contradictions : all the practices involved in medically assisted procreation can hardly be justified by science alone. Technical procedures tend to undermine the conception of a + natural ; time for procreation and a + biological ; procreation unit. Those are the contradictions the medical profession has to overcome before its role in this new field can be seen as legitimate. Beyond the difficulties faced by individual mds, what is at stake, in fact, is the evolution of social norms, a broader issue which touches on society as a whole
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Chaya, Alberto Yukio. "Produção in vitro de embriões caprinos pré-púberes: efeito da melatonina nos meios de maturação in vitro e cultivo in vitro embrionário." Universidade Federal de Viçosa, 2016. http://www.locus.ufv.br/handle/123456789/9164.
Full textAbstract:
Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2016-11-29T17:51:01Z
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Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior
A produção in vitro de embriões caprinos ainda não é considerada uma biotecnologia rotineiramente efetiva. Um dos fatores mais importante e que dificulta a evolução no processo de todo o processo da PIV é o estresse oxidativo. A proposta adotada neste estudo foi avaliar os efeitos da adição de melatonina em meios de maturação e cultivo in vitro no desenvolvimento de embriões caprinos e na qualidade dos blastocistos oriundos de oocitos de cabras pré-púberes. O objetivo do primeiro estudo foi avaliar o efeito da melatonina no meio de cultura in vitro de embriões partenogenéticos através da taxa de desenvolvimento de blastocistos e vitrificação. Foi utilizado um meio de maturação e de cultivo in vitro e convencional com e sem melatonina (10-9 mol L-1). Os oocitos com células do Cumulus oophorus foram maturados in vitro naqueles meios de maturação por 27 h e então ativados. Estas células ativadas foram cultivadas nos respectivos meios de cultivo por oito dias e então aferidos as taxas de blastocistos. O método de vitrificação foi utilizado de acordo com Mermillod et al., 1998. A adição da melatonina a 10-9 mol L- aos meios de maturação e de cultivo in vitro não apresentou melhora na taxa de blastocistos produzidos. Na segunda parte deste estudo objetivou-se avaliar o efeito da melatonina no meio de cultura in vitro, porém em embriões fertilizados artificialmente, por meio da taxa de desenvolvimento de blastocistos. Utilizou-se um meio convencional para MIV com ou sem adição de melatonina a 10-9 mol L-1. Após a MIV, os oocitos maturados foram inseminados com semen a fresco, e os espermatozoides foram capacitados em meio de capacitação contendo heparina. Os possíveis zigotos foram separados e uma parte foi cultivado em meio de cultura padrão com adição da melatonina a 10-9 mol L-1. Ambos foram cultivados durante oito dias e a taxa de blastocisto foi aferida. Os resultados desta segunda etapa mostraram que ao utilizar melatonina a 10-9 mol L-1 adicionada ao meio de maturação in vitro convencional melhoraram quanto ao número de células fertilizadas (34,57% vs. 17,39%, p<0,05), embora, não houve melhora na taxa de clivagem e no número de blastocistos produzidos. A conclusão mostra que a melatonina a 10-9 mol L-1 adicionada tanto em MIV, quanto em CIV, não melhora o desenvolvimento e a produção dos embriões in vitro, embora possa aumentar a taxa fertilização in vitro.
The in vitro production of goat embryos is not considered a routinely effective biotechnology. There are a number of factors that hinder the progress in the process of maturation, fertilization, cultivation and freezing. One of the most important factors that cause deleterious effects throughout the IVP process is the oxidative stress. The proposal of this study in order to prevent and to control that stress condition was to supplement the in vitro maturation (IVM) and in vitro culture media (IVC) with melatonin evaluating it effects on the development of goat embryos and quality of embryos derived from prepubertal goats oocytes. The aim of the first experiment was to evaluate the effect of melatonin supplementation in the in vitro culture on development of parthenogenetic embryos. It was used two in vitro maturation media [conventional maturation media (CM) and CM + 10-9 M melatonin] and two in vitro culture media [conventional cultivation media (CC) and CC + 10-9 M melatonin. The oocytes with cumulus cells were randomly distributed in the IVM and then activated by ionomycin method followed by 6-DMAP. Afterwards, presumptive zygotes were randomly distributed in the IVC media and cultured for eight days. Supplementation of 10-9 M melatonin to the IVM and IVC media showed no improvement in the parthenogenetic blastocyst rate. The blastocyst rate diminished when melatonin was added in vitro culture medium. The second study was also evaluate the effect of melatonin in vitro culture medium, but using in vitro fertilization over the blastocyst development rate. We used a conventional medium (CM) to in vitro maturation media and other CM was supplemented with melatonin at 10-9 M. After IVM, the matured oocytes were inseminated with fresh semen, and then, that spermatozoa were capacitated and cultured for eight days. There was an in vitro culture media used and other one added with melatonin (10-9 M). The results of this second study demonstrated that the use of melatonin at 10-9 M added to the in vitro conventional maturation medium presented a beneficial effect on the number of fertilized cells (34.57 % vs. 17.39%, p<0.05). However, this addition there was no improvement in the cleavage rate nor the blastocyst rate. We concluded that melatonin at 10-9 M added in both IVM medium and IVC medium do not improve the development of embryos. However, it can be a gain in the in vitro fertilization rate when melatonin is added in the IVM medium.
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Antonetti, Philippe. "Contribution à l'étude de la culture in vitro et de la vitro-variation du genre populus." Nancy 1, 1990. http://www.theses.fr/1990NAN10409.
Full textAbstract:
La première partie de ce travail consiste en une mise au point et une optimisation des techniques de culture in vitro du peuplier pour différents clones des sections Aigeiros, Tacamahaca et Leuce : obtention et culture de cals (pour 35 clones) ; néoformation de bourgeons sur les cals et régénération de la plante entière (pour 35 clones) ; micropropagation des clones originels et des néoformations dérivées de cals (pour 34 clones) ; obtention et culture de suspensions cellulaires (pour 6 clones) ; obtention et culture de protoplastes (pour 6 clones), la culture jusqu'au stade micro-cal reste à maitriser. La seconde partie concerne la mise en évidence de la vitro-variation. 1092 plants ont été régénérés à partir de cals de différents clones. 39 variants présentent des morphologies foliaires ou des ports différents. On ne note aucune variation à l'égard de la résistance à deux rouilles foliaires (Melampsora larici-populina et M. Allii-populina). Par contre, 5 plants issus d'une lignée de cals d'un clone de grisard devenue plus résistante au filtrat de culture d'hypoxylon mammatum (après culture des cals en présence de ce filtrat), présentent également une résistance accrue à ce filtrat. L'analyse en cytométrie en flux de nombreux variants montre que la plupart sont devenus tetraploides, quelques plants présentant des morphologies très modifiées sont restés diploides. L'analyse de quelques cals nous permet de signaler qu'ils sont généralement tétraploides
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Brun, Sophie. "Le facteur masculin en fécondation in vitro." Montpellier 1, 1991. http://www.theses.fr/1991MON11057.
Full text
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Dumont, Christine. "Analyse chromosomique d'ovocytes humains après fécondation in vitro." Montpellier 1, 1991. http://www.theses.fr/1991MON11172.
Full text
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Estephan, Marie-Thérèse. "Micro-adénome à prolactine et fécondation in vitro." Montpellier 1, 1995. http://www.theses.fr/1995MON11096.
Full text
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Gottardi, Fernanda Patrícia [UNESP]. "Inibição da maturação nuclear pela butirolactona I durante o transporte de oócitos bovinos destinados à produção in vitro de embrões (PIV)." Universidade Estadual Paulista (UNESP), 2009. http://hdl.handle.net/11449/98202.
Full textAbstract:
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Previous issue date: 2009-02-19Bitstream added on 2014-06-13T18:58:54Z : No. of bitstreams: 1
gottardi_fp_me_jabo.pdf: 551122 bytes, checksum: 296df34d2ff79346b4bafb7a4da03dc9 (MD5)Facta
Butirolactona I (Bl-I) pode ser utilizada em sistemas PIV de embriões para bloquear a meiose durante o transporte de oócitos obtidos de OPU. O objetivo deste estudo foi verificar a concentração de BL-I eficaz durante o transporte de oócito bovinos. Oócitos (n=4581) foram pré-maturados em criotubos contendo meio com 10 ou 100μM de Bl-I, acrescido ou não de HEPES (20mM), no período de 5 horas em estufa portátil Minitub e transferidos para incubadora com atmosfera e temperatura controlada, permanecendo por mais 19 horas. Em seguida foram maturados a 38,5ºC em atmosfera de 5% de CO2 durante 20 horas, fecundados e os zigotos cultivados. Foram avaliadas a maturação nuclear e a maturação citoplasmática após pré-MIV e MIV (24h.-controles e 20h.-tratados). A fertilização foi avaliada após 18 h. da inseminação. Os embriões foram analisados quanto ao seu desenvolvimento e qualidade. Os dados foram avaliados por ANOVA (p
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Renzi, Adriana. "Análise da influência do hormônio anti-Mülleriano na produção in vitro de embriões bovinos." Universidade de São Paulo, 2012. http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17135/tde-19042013-154338/.
Full textAbstract:
A maturação in vitro de oócitos (MIV) é uma importante tecnologia reprodutiva a qual gera oócitos maduros capazes de suportar o desenvolvimento embrionário pré-implantacional e sua completa evolução à termo. Muitos fatores levam ao processo de maturação do oócito, e o AMH (hormônio anti-Mülleriano) tem demonstrado possuir um importante efeito nesta etapa. Neste trabalho nós demonstramos a influência da suplementação de AMH na maturação de complexos cumulus-oócito (COCs). Nossos resultados demonstram que não houve efeito na produção de embriões para COCS grau I. Entretanto, pudemos encontrar diferenças significativas entre os COCs graus II e III maturados na presença de 150ng/ml de AMH. Aqui também demonstramos que não houve diferença significativa na expressão relativa de mRNA para os genes AMHRII e FSHR no oócito, e na expressão relativa de mRNA para os genes AMH, AMHRII e FSHR nas células da granulosa. Nossos resultados corroboram com as importantes funções do AMH na produção de embriões, sugerem que a suplementação do meio de maturação de oócitos com AMH pode ajudar a melhorar a produção de blastocistos.The in vitro oocyte maturation (MIV) is an important reproductive technology that generates mature oocytes able to support the preimplantation embryonic development and their fully evolution to term. Many factors lead to oocyte maturation process, and the AMH (AntiMüllerian hormone) have demonstrated important effects in the oocyte development. Here, we report the influence of AMH supplementation in the cumulus-oocyte complex (COCs) maturation. We found that AMH had no effect on embryo production of COCs grade I. On the other hand, significant differences between the COCs grade II and COCs grade III matured in AMH 150ng/ml were verified. We have also demonstrated that there were no significant difference in mRNA expression of the genes AMHRII and FSHR in the oocyte, and in mRNA of the genes AMH, AMHRII and FSHR in the granulosa cells. Taken together, the results corroborate the important roles for AMH on embryo production, and suggest that AMH supplementation could achieve successful outcome in the production of blastocysts.
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Quadros, Kenia Michele de. "MULTIPLICAÇÃO IN VITRO E EX VITRO DE Ilex paraguariensis A. Saint Hilaire (ERVA-MATE)." Universidade Federal de Santa Maria, 2013. http://repositorio.ufsm.br/handle/1/3765.
Full textAbstract:
Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e TecnológicoHolly (Ilex paraguariensis A. Saint Hilaire) plays an important economic, social and ecological throughout southern of Brazil; however, still requires efficient protocols for vegetative propagation of seedlings aiming planting of selected genotypes. This work aimed to study vegetative propagation technologies turned at mass production of holly seedlings through in vitro micropropagation, microcutting and minicutting. The propagation of explants derived from the apical and nodal holly segments from eight clones established in vitro was evaluated in four cultivations. It was also evaluated acclimatization and ex vitro rooting of microcuttings, testing different substrates, separated in two experiments. In experiment one, the substrates were used pure (carbonized rice husk, coarse sand, vermiculite, coconut fiber and commercial substrate of pine bark) and in the second experiment, the substrates were used in combination with equal proportions (carbonized rice husk and coarse sand; carbonized rice husk, coarse sand and commercial substrate of pine bark; carbonized rice husk and commercial substrate of pine bark). Holly minicuttings of two collections and four clones (CE1, CE2, EF6 and EF7) were treated with or without 3-indolibutírico acid (IBA) at a dose of 1.000 mg L-1 and then placed in a substrate composed by carbonized rice husk, coarse sand and commercial substrate of pine bark. Clones CE1 and CE2 coming from microcuttings ex vitro rooted and acclimatizated in the greenhouse, and the clones and EF6 EF7 come from cuttings rooted of epicormic shoots of two adult plants. From the second collection, it was followed the rooting evolution of four clones under evaluation at 15, 30, 45, 60 and 75 days. It is feasible the maintenance of holly germplasm bank, whereas complete plants derived from nodal segments and apical segments rooted in vitro, can be acclimated in a greenhouse for holly seedlings production, with the explants competence maintained over four cultivations. Holly microcuttings can be acclimated and ex vitro rooted, using as substrate the composition of the same proportions of carbonized rice husk and commercial substrate of pine bark or with carbonized rice husk, coarse sand and commercial substrate of pine bark. In holly minicutting, clones differ in rooting competence and induction period for root initiation, whereas the application of 3-indolibutiric acid does not affect the rooting of holly minicuttings. The closed system of cultivation in sand is feasible for conduct and management of holly ministumps aiming to collect the minicuttings. application of 3-indolibutiric acid does not affect the rooting of holly minicuttings. The closed system of cultivation in sand is feasible for conduct and management of holly ministumps aiming to collect the minicuttings.
A erva-mate (Ilex paraguariensis A. Saint Hilaire) exerce uma grande importância econômica, social e ecológica em toda a região sul do Brasil, no entanto, ainda necessita de protocolos eficientes para a propagação vegetativa de mudas visando o plantio de povoamentos com clones selecionados. Esse trabalho teve como objetivo estudar tecnologias de propagação vegetativa voltado à produção massal de mudas de erva-mate por meio da micropropagação in vitro, microestaquia e miniestaquia. Foi avaliada a propagação de explantes oriundos de segmentos apicais e segmentos nodais de erva-mate de oito clones estabelecidos in vitro e em quatro cultivos. Também foi avaliada a aclimatização e o enraizamento ex vitro de microestacas, testando diferentes substratos, separados em dois experimentos. No experimento um, os substratos foram utilizados puros (casca de arroz carbonizada, areia grossa, vermiculita média, fibra de coco e substrato comercial à base de casca de pinus) e no segundo experimento, os substratos foram utilizados em combinações e em iguais proporções (casca de arroz carbonizada e areia grossa; casca de arroz carbonizada, areia grossa e substrato comercial à base de casca de pinus; casca de arroz carbonizada e substrato comercial a base de casca de pinus). Miniestacas de erva-mate de duas coletas e de quatro clones (CE1, CE2, EF6 e EF7) foram tratadas com e sem ácido 3-indolibutírico (AIB) na dose de 1.000 mg L-1 e então colocadas em substrato composto por casca de arroz carbonizada, areia de granulometria grossa e substrato comercial a base de casca de pinus. Os clones CE1 e CE2 foram provenientes de microestacas enraizadas ex vitro e aclimatizadas em casa de vegetação, e os clones EF6 e EF7 foram oriundos de estacas enraizadas de brotações epicórmicas de duas matrizes adultas. A partir da segunda coleta, foi acompanhada a evolução do enraizamento dos quatro clones em avaliação aos 15, 30, 45, 60 e 75 dias. É possível a manutenção de banco de germoplasma de erva-mate, sendo que plantas completas oriundas de segmentos nodais e segmentos apicais enraizados in vitro, podem ser aclimatizados em casa de vegetação para a produção de mudas de erva-mate, com a competência dos explantes mantida ao longo de quatro cultivos. Microestacas de erva-mate podem ser aclimatizadas e enraizadas ex vitro, utilizando como substrato a composição de mesmas proporções de casca de arroz carbonizada e substrato comercial à base de casca de pinus ou com o substrato de casca de arroz carbonizada, areia grossa e substrato comercial a base de casca de pinus. Na miniestaquia de erva-mate, os clones diferem na competência ao enraizamento e no período de indução à iniciação radicial, sendo que a aplicação de ácido 3-indolibutírico na dose de 1.000 mg L-1 não afeta o enraizamento de miniestacas de erva-mate. O sistema fechado de cultivo em areia é viável para a condução e o manejo de minicepas de erva-mate visando a coleta de miniestacas.
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Horbach, Micheli Angelica. "PROPAGAÇÃO IN VITRO E EX VITRO de erva-mate (Ilex paraguariensis Saint Hilaire Aquifoliaceae)." Universidade Federal de Santa Maria, 2008. http://repositorio.ufsm.br/handle/1/8628.
Full textAbstract:
Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível SuperiorMate (Ilex paraguariensis) is an important species in Southern Brazil for its economical and cultural values. The present work had the objectives of analyzing the propagation of mate by cuttings, disinfection and in vitro establishment of nodal segments from adult plants and micropropagation of plants originated from immature embryos. Mate cutting were submitted to three (0, 4000 and 8000 mg L-1) IBA doses and two lengths (3 and 10 cm) of cutting. The cuttings were evaluated at 135 days for survival, rooting and formation of roots, leaves and shoots. In the disinfection experiments, nodal segments of one-year-old shoots were immersed in alcohol solution of 70% for two and four min., in 2% of NaOCl for 15, 25 and 35 min. and inoculated in ¼ of MS medium. The percentage of contaminated, oxidized and healthy explants were evaluated at 15 days. In micropropagation, mate seedlings from immature embryos were submitted to different culture mediums (MS, ¼ MS and WPM) for 30 days and evaluated for number of leaves and length of seedlings. For the multiplication, different doses (0; 0,01; 0,1; 1,0 and 2,0 mg L-1) of BAP were tested in ¼ MS culture medium. At 50 days, they were evaluated for the number of shoots, leaves and internodes, shoots length and height. Different doses (0; 0,5; 1,0 and 1,5 mg L-1) of IBA were evaluated for rooting and kept explants either for 15 or 30 days in the medium. In vitro plants of mate were acclimatized in different (vermiculite, sand or coconut shells) substrates, with controlled temperature and light environmental conditions. The highest percentage of rooted cuttings, in both evaluated length, were with 4000 mg L-1 of IBA. Cuttings with 3 cm length produced the highest percentage of rooted cuttings. Nodal segments of one-year-old shoots have the highest survival, with the disinfection with alcohol 70% for four minutes and NaOCl 2% for 25 min. The ¼ of MS salts medium can be used as basal medium for in vitro culture of mate plants. The basal medium with 2 mg L-1 of BAP increases the number of adventitious shoots and promotes shoot proliferation after some sub cultivations, enabling in vitro plant maintenance as microstump, as shoot supply. In vitro rooting can be achieved in one cycle of 30 days of cultivation, with the addition of 3 mg L-1 of IBA to the medium with ¼ of MS salts. In vitro plants of mate can be acclimatized in coconut shells or sand in controlled temperature and light conditions.
A erva-mate (Ilex paraguariensis) é uma espécie de grande importância no sul do Brasil, pelo valor econômico e cultural que apresenta. O presente trabalho teve por objetivos analisar a propagação de erva-mate por estaquia, o estabelecimento e desinfestação in vitro de segmentos nodais de plantas adultas e a micropropagação de plantas oriundas de embriões imaturos. Para a estaquia, testaram-se três doses de AIB (0, 4000 e 8000 mg L-1) e dois comprimentos de estacas (3 e 10 cm). As estacas foram avaliadas quanto à sobrevivência, o enraizamento, o número de raízes, de folhas e de brotos e o comprimento de raízes e de brotos, aos 135 dias. No experimento de desinfestação, segmentos nodais de brotações de ano de erva-mate foram imersos em etanol 70%, por 2 e 4 min. e, depois, em NaOCl 2%, por 15, 25 e 35 min e, então inoculados em meio com ¼ do MS. Aos 15 dias avaliaram-se a percentagem de explantes contaminados, oxidados e sadios. Na micropropagação, plântulas de erva-mate, obtidas de embriões imaturos, foram submetidas a diferentes meios de cultura (MS, ¼ MS e WPM) por 50 dias, com avaliação do incremento obtido para as variáveis número de folhas e comprimento de plântulas. Para a multiplicação dessas plantas, foram testadas a adição de diferentes doses (0; 0,01; 0,1; 1,0 e 2,0 mg L-1) de BAP ao meio de cultura com ¼ do MS. Foram avaliados o número de brotos, folhas e entrenós, o comprimento dos brotos e a altura das plantas, aos 50 dias de cultivo. No enraizamento de brotos de erva-mate foram utilizadas doses (0; 0,5; 1,0; 1,5; 3,0 e 6,0 mg L-1) de AIB, por 15 e 30 dias. As avaliações constaram da percentagem de enraizamento e de calo obtidas, do número e comprimento de raízes, do número de folhas e altura das plantas, aos 30 dias de cultivo. Plantas de erva-mate, produzidas in vitro, foram aclimatizadas em diferentes substratos (vermiculita média, areia e casca de coco) com temperatura e luminosidade controladas. A maior percentagem de estacas enraizadas, em ambos os comprimentos, foi com a dose de 4000 mg L-1 de AIB, sendo que as estacas de 3 cm obtiveram uma maior percentagem de enraizamento. Segmentos nodais de brotações de ano de erva-mate apresentam a maior sobrevivência com a desinfestação com álcool 70% por 4 min. e em NaOCl 2% por 25 min. O meio com ¼ dos sais do MS pode ser utilizado como o meio de cultura base para o cultivo in vitro de plantas de erva-mate. A adição de 2 mg L-1 de BAP ao meio de cultura base aumenta o número de brotos adventícios em erva-mate, além de formar tufos após alguns subcultivos, possibilitando a manutenção de plantas como microcepas, para o fornecimento de brotos. O enraizamento in vitro de erva-mate pode ser realizado em apenas uma fase de 30 dias, com a adição de até 3 mg L-1 de AIB ao meio com ¼ dos sais do MS. Plantas de erva-mate, produzidas in vitro, podem ser aclimatizadas nos substratos casca de coco ou areia em ambiente com temperatura e luminosidade controladas.
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Yu, Xiaomin. "Embryonic development of In Vitro matured mouse oocytes following vitrification and In Vitro fertilization." Thesis, McGill University, 2011. http://digitool.Library.McGill.CA:80/R/?func=dbin-jump-full&object_id=96931.
Full textAbstract:
With increasing incidences of early onset of cancer and the delay of reproductive age, the demand for fertility preservation in women have increased. Even though most results of oocyte cryopreservation have been obtained from ovarian stimulation protocols for in vitro fertilization (IVF), ovarian stimulation with gonadotropins may not be suitable for many women, especially those who are with hormone-dependent cancers, or those require immediate chemotherapy. However, it is agreed that the outcome of in vitro matured (IVM) oocytes are not as good as in vivo matured ones. In this thesis, we tested the interfering of oocytes during IVM, by the addition of antioxidant and the blocking of mitochondrial function, and observed their survival and the outcome of embryonic development after vitrification and IVF. For the first part, our study showed that the presence of the antioxidant, cysteamine during IVM significantly (P<0.05) reduced the fragmentation rate in cumulus-intact group from 61.9% to 40.8% following vitrification-thawing and IVF. However, the same trend wasn't shown in denuded groups. Nevertheless, there were no significant differences in terms of maturation and cleavage rate with the supplementation of cysteamine in either COC or denuded groups. We hypothesized that cysteamine facilitated effect during IVM might have occurred by affecting mtDNA accumulation during IVM. Fluorescent real-time quantitative analysis of mtDNA showed that the mtDNA copy number were similar in cysteamine treated and untreated group with a ratio close to 1, which implied that the effect of cysteamine during IVM may not be directly related to the mtDNA replication. In the second part, a mitochondria blocker, rotenone, was added to the IVM medium in order to test the vitrification outcome and the subsequent embryonic development. The testing of rotenone concentrations from 100nM to 50µM, showed a lethal dose of around 50µM where all the oocytes were lysed during IVM. With the increase of rotenone concentration from 2µM to 50µM, the oocyte maturation rate dropped significantly in a dose dependent manner and eventually reaching 0 when the concentration was at 50µM. Within the concentration window of 250nM to 2µM, where no difference has been found in terms of the oocyte death and maturation rates compared to the control, there is a significant drop of cryo-survival rate at a concentration of 2µM, from 93.3% (in the control) to 55.6%. The percentage of embryos that developed to 4-8 cell stage were significant lower in the 2µM group (17.5%), compared to the group with a lower concentration of 250nM (50%). This study confirmed the strong positive dependency of mitochondrial functionality during oocyte maturation on its later development as well as the cryopreservation outcomes. Our work suggested that as two individual ART applications, the understanding and improvement of IVM could improve the outcome of vitrification since the impact of IVM on the oocytes could significantly determine the oocytes ability to survival and to develop following vitrification and IVF.Suite a làugmentation de l'incidence des pathologies cancéreuses chez les jeunes et au recul de l'âge parental, les demandes de préservation de la fertilité sont de plus en plus fréquentes. Bien que la majorité des résultats sur la cryopréservation des ovocytes aient été obtenu suite a un protocole de stimulation ovarienne dans le cadre d'un traitement par fécondation in vitro (FIV), làdministration de gonadotrophines est inappropriées pour un certain nombre de patientes, en particulier celle atteintes de cancer hormono-dépendant, ou celle nécessitant une chimiothérapie sans délai possible. D'autre part, il est bien établi que le taux de fécondation des ovocytes maturés in vitro (IVM) n'est pas aussi élevé que lorsque les ovocytes sont maturés in vivo. Dans cette thèse, nous avons testé l'effet de la présence d'antioxydants et d'inhibiteurs de la fonction mitochondriale dans le milieu de maturation in vitro sur le taux de maturation ovocytaire (IVM) ainsi que sur le taux de survie et de développement embryonnaire après vitrification. Dans un premier temps, nous avons démontré que la présence d'antioxydants, la cysteamine, pendant l'IVM réduit significativement le taux de fragmentation après vitrification des ovocytes maturés avec leur cellules du cumulus (complexes ovocyte-cumulus, COC), de 61.9% dans le groupe non traité à 40.8% dans le groupe traité (p<0.05). Cette différence n'est pas observée dans le groupe des ovocytes maturés en l'absence de leur cellules du cumulus (ovocytes dénudés). La présence de cysteamine n'a pas d'effet significatif sur le taux de maturation et de clivage embryonnaire que les ovocytes soient dénudés ou non. Nous avons ensuite vérifié si l'effet bénéfique de la cysteamine durant l'IVM était lié à l'accumulation de DNA mitochondrial durant la maturation ovocytaire. Le nombre de copies d'aDN mitochondrial dans les ovocytes maturés en présence ou non de cysteamine a donc été évalué par PCR quantitative et le résultat ne montre pas de différence significative entre les deux groupes (ratio ~1). Ces données ne sont donc pas en faveur d'un effet de la cysteamine sur la réplication de l'aDN mitochondrial lors de la maturation ovocytaire in vitro. Dans un deuxième temps, un inhibiteur de la fonction mitochondriale, la rotenone, a été ajoutée au milieu de maturation in vitro afin de tester son effet sur la vitrification et le développement embryonnaire ultérieur. Les tests d'échelonnement de concentrations, de 100nM a 50µM, ont permis de définir une dose l'etale de 50µM, pour laquelle la totalité les ovocytes sont lysés. Entre 2µM et 50µM, le taux de maturation diminue de manière dose dépendante, atteignant 0 à la dose maximale. Dans une échelle de concentration allant de 250nM à 2µM, aucune différence significative n'est observée en terme de taux de survie et de maturation entre le groupe traité et le groupe contrôle. Par contre le taux de survie après vitrification diminue en présence de 2µM de roterone dans le milieu IVM, passant de 93.3% dans le groupe contrôle à 55.6% dans le groupe traité. Le taux d'embryons atteignant 4-8cellules après fécondation est également significativement plus bas dans le groupe traité à une concentration de 2µM comparé à un groupe traité à une dose plus faible de 250nM (respectivement 17.5% et 50%). Cette étude confirme le rôle essentiel des mitochondries durant la maturation ovocytaire, le développement ultérieur et la survie après cryopréservation. Notre travail montre l`interaction entre deux techniques utilisées en Procréation Médicalement Assistée : la maturation in vitro d'une part et la vitrification d'autre part. La compréhension et le développement des milieux de maturation ovocytaire in vitro ont en effet un impact majeur sur la survie des ovocytes après vitrification et sur leur développement embryonnaire ultérieur.
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MARTINS, J. P. R. "Propagação in vitro e ex vitro, aspectos anatômicos e fisiológicos de Neoregelia concentrica (Bromeliaceae)." Universidade Federal do Espírito Santo, 2012. http://repositorio.ufes.br/handle/10/5177.
Full textAbstract:
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Previous issue date: 2012-02-16As bromélias possuem valorização comercial, oferecendo contribuições significativas no setor econômico agrário. Porém os métodos propagativos convencionais não são capazes de suprir a demanda do mercado crescente. A cultura de tecidos pode contribuir na multiplicação de plantas ornamentais, produzindo mudas em larga escala e com qualidade comprovada. Contudo, órgãos vegetativos de plantas desenvolvidas in vitro podem apresentar estruturas e tecidos pouco desenvolvidos que podem prejudicar o posterior estabelecimento ex vitro. Assim, objetivou-se avaliar o efeito de fitorreguladores na propagação in vitro e na morfofisiologia de Neoregelia concentrica, uma bromélia nativa da Mata Atlântica com potencial ornamental. O primeiro experimento, referente à multiplicação, foi conduzido a partir de plantas de N. concentrica previamente estabelecidas in vitro e com 180 dias de idade. Essas foram inoculadas em tubos de ensaio contendo meio de cultivo autoclavado suplementado com 6-benzilaminopurina ou cinetina, em 4 concentrações que variaram de 0 a 15,0 µM L-1. Aos 60 dias foram realizadas análises fitotécnicas e a coleta aleatória de 3 plantas de cada tratamento para análise morfofisiológica. No segundo experimento, referente ao enraizamento in vitro e ex vitro, brotos de N. concentrica foram induzidos em meio de cultivo com 15,0 µM L-1 de 6-benzilaminopurina por 80 dias, seguido de subcultivo em meio isento de fitorreguladores por 45 dias. Na rizogênese in vitro, os brotos foram individualizados e cultivados por 60 dias em meio suplementado com ácido-indol-3-butírico ou ácido-naftaleno-acético em 5 concentrações que variaram de 0 a 4,0 µM L-1. Para rizogênese ex vitro, brotos de N. concentrica foram individualizados e as bases imersas em solução de ácido-indol-3-butírico ou ácido-naftaleno-acético em 4 concentrações (entre 0 e 15,0 µM L-1). Após 60 minutos de imersão, os brotos foram plantados em bandejas plásticas contendo vermiculita e cultivados por 45 dias. Ao final de cada método de rizogênese, foi realizada a análise dos parâmetros fitotécnicos. No experimento de multiplicação, verificaram-se diferenças significativas em função dos tratamentos para todos os parâmetros fitotécnicos e morfofisiológicos analisados. O aumento da concentração induziu maior porcentagem de explantes com emissão de brotos e número médio de brotos, sendo o emprego de 6-benzilaminopurina com as maiores médias em relação à cinetina. O aumento da concentração de citocininas empregadas no meio de cultivo também induziu maior espessamento dos tecidos foliares internos, tendo 6-benzilaminopurina com valores superiores à cinetina. No segundo experimento, observou-se na rizogênese in vitro maior enraizamento inicial (30 dias) e maior número de raízes nos brotos cultivados em meio com 3,0 µM L-1 de ácido-naftaleno-acético, já na rizogênese ex vitro, observou-se os melhores resultados, dentre eles, número e comprimento médio das raízes, quando aplicado 5,0 μM L-1 de ácido-indol-3-butírico na base dos brotos. O emprego de 15,0 μM L-1 de 6-benzilaminopurina é promissor na multiplicação in vitro e no desenvolvimento dos tecidos foliares de N. concentrica. O empregado de 3,0 µM L-1 de ácido-naftaleno-acético no meio de cultivo foi eficiente na rizogênese in vitro. Para rizogênese ex vitro, recomenda-se a aplicação de 5,0 µM L-1 de ácido-indol-3-butírico na base das brotações de N. concentrica.
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Barros, Fabíola Lacerda de Souza. "Respostas morfogênicas ex vitro do mamoeiro Golden e in vitro do mamoeiro Tainung 01." Universidade Federal do Espírito Santo, 2008. http://repositorio.ufes.br/handle/10/6604.
Full textAbstract:
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Previous issue date: 2008-07-10Foram realizados experimentos in vivo e in vitro objetivando a propagação assexuada do mamoeiro (Carica papaya L.). O experimento in vivo foi realizado com a cultivar Golden , do grupo Solo , em lavoura comercial com dois anos e meio de idade em final de produção, onde se estudou o efeito da poda em diferentes alturas do tronco (inteira sem o ápice, 0,5, 1,0, 1,5, 2,0 m) a partir do solo, para se identificar qual destas proporcionaria maior rendimento de brotações laterais aptas à estaquia. Uma contagem de brotações aos 25 dias após a poda a diferentes alturas foi realizada no experimento in vivo. As brotações contabilizadas foram podadas e, posteriormente, feita outra contagem de novas brotações aos 50 dias. Com a poda a 2,0 metros de altura, obteve-se maior número de brotações aos 25 e aos 50 dias, no período do verão, mostrando viabilidade no reaproveitamento de lavouras em final de produção na propagação assexuada. Meios de enraizamento foram testados nos experimentos in vitro. No primeiro experimento foram estudadas as concentrações do meio MS a 100%, 50% da força e MS modificado associados aos níveis do regulador de crescimento AIB (0; 0,1; 0,2; 0,4 e 0,8 mg L-1). No primeiro experimento o enraizamento foi insatisfatório devido à contaminação bacteriana, aliada a uma possível fitotoxidez do antibiótico utilizado (cefotaxima 100 mg L-1), ou ainda, ao acúmulo de citocinina remanescente da fase de multiplicação, prejudicando as reações morfogênicas e o enraizamento. No segundo experimento, utilizou-se meio de enraizamento contendo ou não carvão ativo, na concentração 1gL-1, associado aos níveis do regulador de crescimento ANA (0; 0,25; 0,5; 1,0; 2,0 mgL-1). Também não se obteve sucesso no enraizamento, provavelmente pela quantidade ou associação dos antibióticos utilizados (rifampicina 300 mg L-1 +cloranfenicol 100 mg L-1) ao meio de cultura, mesmo tendo controlado acontaminação bacteriana. O carvão ativo a 1 g L-1 acrescentado ao meio, apesar de não auxiliar o enraizamento, mostra significância de forma isolada, sendo benéfico ao desenvolvimento da parte aérea e impedindo o calejamento na base dos ramos, mostrando eficiência na adsorção de substâncias tóxicas do meio de cultivo, em relação ao tratamento que não recebeu o carvão ativo
The experiments were carried out in vivo and in vitro having of the objective the assexual reproduction of the papaya tree (Carica papaya L.). The experiment in vivo was accomplished with to cultivate Golden, of the group Sole, in commercial farming with two and a half years of age in production end, where it was studied the effect of the pruning in different heights of the trunk (it completes without the apex, 0,5, 1,0, 1,5, 2,0 m) starting from the ground, and to identify which of these it would provide larger income of capable production of lateral shoots to the cutting. With the pruning to 2,0 meters of height was obtained larger shoots number, in two consecutive pruning, in other words, to the 25 and 50 days, in the period of the summer, showing viability in the recycling of farmings in production end in the assexual reproduction. In the experiments in vitro were tested rooting medium. In the first experiment were studied the concentrations of the MS medium of 100%, 50% of the force and MS modified associates at the levels of the growth regulator AIB (0; 0,1; 0,2; 0,4 and 0,8 mg L-1). The rooting was unsatisfactory due to the bacterial contamination, allied to a possible phytotoxity of the used antibiotic (cephotaxin 100 mg L-1), or still, to the kitocinin accumulation remaining of the multiplication phase harming the morphogenics reactions and the rooting. In the second experiment was used rooting medium containing (1 g L-1) or not active coal, associate at the levels of the growth regulator ANA (0; 0,25; 0,5; 1,0 and 2,0 mg L-1). It was not also obtained success in the rooting probably for the amount or association of the antibiotics used (Rifampicin 300 mg L-1 + cloranphenicol 100 mg L-1) in the culture medium, even having controlled the bacterial contamination. The active coal to 1 g L-1 increased to the medium, in spite of not aiding the rooting show significance in an isolated way, being beneficial to the development of the aerial part and impeding the calluse in the base of the shoots, showing efficiency in the adsorption of poisonous substances of the culture medium, in relation to the treatment that didnt receive the active coal
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Benitez, Letícia Carvalho. "Tolerância à salinidade avaliada em genótipos de arroz, cultivados ex vitro e in vitro." Universidade Federal de Pelotas, 2008. http://repositorio.ufpel.edu.br/handle/ri/2020.
Full textAbstract:
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Previous issue date: 2008-07-17Plants under natural conditions are exposed to several environmental stresses which affect their metabolism. Among them, soil salinity is one of the most serious problems in irrigated agriculture. Trying to identify genetic variability for this character, the main goal of this work was to evaluate the germination and the initial development of plantlets of 10 rice genotypes under salt stress. The plantlets were cultivated ex vitro and in vitro, and many morphological characters were used to phenotype their responses. The investigations were performed ex vitro in the greenhouse and in vitro in culture media with NaCl concentrations of 0, 68, 136 and 204 mM added to a nutrient solution and to culture media, respectively. After 21 days from the beginning of each experiment, plantlet emergence and seed germination in vitro were evaluated. Other characters measured were shoot length, number of leaves, leaf area, root length, number of roots and fresh and dry mass of aerial part and radicular system. Analysis of variance, regression fitting, percentage of reduction and dissimilarity analysis were performed. The salinity damages were seen only at the initial phase of germination and plantlet emergence except on 204 mM concentration which was inhibitory to in vitro seed germination. All measured characters had their development reduced in saline substrate. The characters average shoot area, shoot biomass and root biomass were the most sensitive to NaCl and the characters leaf and root number were the less affected by the salinity excess. The genotypes showed different responses in both experimental conditions. The genotypes formed three groups when an UPGMA hierarchal method was applied to both system of cultivation. Five and two groups were found when Tocher optimization method was applied to in ex vitro and in vitro data, respectively. The variables average shoot area and average root dry mass contributed more to similarity between genotypes ex vitro, while the average shoot and root weight were the most contributing for the in vitro dissimilarity. The variable shoot length was the one that less contributed to genotype discrimination in both cultivation systems. It is concluded that the genotype BRS Bojuru presented the highest tolerance to salinity while BRS Ligeirinho showed the lowest tolerance in both investigations.
As plantas, sob condições naturais, estão expostas a vários estresses ambientais que afetam seu metabolismo. Dentre estes, a salinidade dos solos e da água de irrigação é um dos mais sérios problemas para a agricultura irrigada. Sabendo que o germoplasma do arroz possui uma variabilidade genética para tolerância à salinidade, o objetivo deste trabalho, foi avaliar a germinação e o desenvolvimento inicial de plântulas de 10 genótipos de arroz, cultivados ex vitro e in vitro, por meio de caracteres morfológicos e agrupá-los para o caráter tolerância à salinidade. Foram realizados trabalhos em casa de vegetação e no sistema de cultura in vitro com as concentrações de 0, 68, 136 e 204 mM de NaCl acrescidos à solução nutritiva e ao meio de cultura, respectivamente. Após 21 dias do início de cada experimento, foram avaliadas a emergência de plântulas ex vitro e a germinação de sementes in vitro, além das médias dos caracteres altura da parte aérea, número de folhas, área foliar, comprimento de raiz, número de raiz e massa fresca e seca da parte aérea e do sistema radicular. Foram procedidas análises de variância, ajuste de regressões, cálculos de percentagem de redução e análise de dissimilaridade. A salinidade a atrasou a fase inicial de germinação e emergência de plântulas, exceto na concentração de 204 mM que foi inibitória para germinação das sementes in vitro. Todos os caracteres mensurados tiveram seu desenvolvimento reduzido em substrato salino, sendo os caracteres correspondentes à área foliar média e à fitomassa média da parte aérea e do sistema radicular os mais suscetíveis ao NaCl e número médio de folhas e de raiz os menos afetados pelo excesso de salinidade. Observou-se dissimilaridade entre os genótipos estudados para tolerância à salinidade nas duas condições experimentais, verificada pela formação de três grupos pelo método hierárquico UPGMA, em ambos sistemas de cultivo, e de cinco e dois grupos pelo método de otimização de Tocher no cultivo ex vitro e in vitro, respectivamente. As variáveis, área foliar média e massa seca média de raiz, contribuíram mais para a dissimilaridade entre os genótipos ex vitro, enquanto que massa fresca média da parte aérea e de raiz foram as que mais contribuíram para a dissimilaridade in vitro. A variável altura média da parte aérea foi a que menos contribuiu para a separação dos genótipos nos dois sistemas de cultivo. Pode-se concluir que o genótipo BRS Bojuru apresentou maior tolerância à salinidade, enquanto que BRS Ligeirinho mostrou maior sensibilidade nos dois trabalhos.
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PAULUCIO, M. C. "GERMINAÇÃO EX VITRO E POTENCIAL ORGANOGÊNICO E EMBRIOGÊNICO IN VITRO DE Lecythis pisonis CAMBESS." Universidade Federal do Espírito Santo, 2016. http://repositorio.ufes.br/handle/10/7692.
Full textAbstract:
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Previous issue date: 2016-02-26PAULUCIO, Márcia Cristina. Germinação ex vitro e potencial organogênico e embriogênico in vitro de Lecythis pisonis cambess. 2016. Dissertação (Mestrado em Ciências Florestais) Universidade Federal do Espírito Santo, Jerônimo Monteiro, ES. Orientadora: Profa. Dra. Elzimar de Oliveira Gonçalves. Coorientador: Prof. Dr. Rodrigo Sobreira Alexandre. A espécie Lecythis pisonis cambess pertencente à família Lecythidaceae, possui potencial ornamental, frutífera, madeireira, podendo ser utilizada no reflorestamento, além de produzir saborosas castanhas ricas em proteínas e minerais. Os estudos das técnicas de propagação sexuada e assexuada de espécies florestais assumem um papel relevante nas pesquisas científicas, objetivando a preservação e a utilização dessas espécies com interesses diversificados. Objetivou-se com este trabalho, avaliar a germinação ex vitro das sementes submetidas a diferentes métodos de superação de dormência e avaliar o estabelecimento in vitro e o potencial organogênico e embriogênico da espécie L. pisonis. Inicialmente para o estudo da germinação ex vitro, foram avaliados o comprimento, largura e espessura das sementes. Em seguida as sementes foram submetidas aos seguintes tratamentos pré-germinativos: sementes intactas (testemunha); escarificação mecânica; escarificação química com ácido sulfúrico (98%) por 30, 60 e 90 minutos e total remoção do tegumento. Foram avaliados, a porcentagem de emergência (E%); índice de velocidade de emergência (IVE) e frequência relativa da emergência (Fr). As sementes intactas e imersas ao H2SO4 por 30, 60 e 90 minutos foram radiografadas pelo equipamento de raios X (X QDP-01X) e foi analisado o desgaste químico provocado pelo H2SO4 no tegumento da semente e se este tratamento causou algum dano a semente. Ao final do experimento foi realizada a caracterização morfológica das plântulas e calculado a porcentagem de poliembrionia das sementes escarificadas mecanicamente. Observou-se que as sementes de L. pisonis apresentam dormência tegumentar e o tratamento mais eficiente para superar esta dormência foi a escarificação mecânica, com maior porcentagem de emergência e maior vigor das plântulas formadas. O teste de raios x mostrou que a escarificação química não causou danos ao endosperma e ao embrião da semente, além disso, o desgate químico do tegumento foi proporcional ao tempo de imersão das sementes no ácido sulfúrico. As sementes de L. pisonis apresentaram 25% de poliembrionia. Ainda avaliou-se o estabelecimento in vitro e o potêncial organogênico e embriogênico da espécie em estudo. Os explantes utilizados para o estabelecimento in vitro foram sementes sem tegumento de L. pisonis, no qual foram inoculados no meio WPM sem regulador de crescimento e mantidos em sala de crescimento por 150 dias. Neste experimento foram observadas diferentes respostas morfogênicas: esverdeamento (63%), calogênese (84%), germinação (8%), rizogênese direta (4%) e organogênese indireta (2%). Para a indução da embriogênese somática foram utilizados os segmentos de sapucaia, inoculados em meio MS, com a adição dos reguladores de crescimento em diferentes concentrações (0; 1,5 e 3,0 mg L-1 de 2,4-D) e citocinina (0, 0,5 e 1,0 m L-1 de KI). Observou-se que as concentrações utilizadas não foram eficientes para a indução de embriões somáticos. Na indução do enraizamento in vitro de segmentos caulinares de plântulas germinadas in vitro foram testadas diferentes concentrações de AIB (0,0; 1,0; 2,0 e 3,0 mg L-1). Observou-se a formação de raízes em todas as concentrações utilizadas, exceto na ausência da auxina.
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Wiecheteck, Marcelo Sergio Souza. "Micropropagação de Eucalyptus viminalis Labill. a partir de material juvenil." [s.n.], 2013. http://hdl.handle.net/1884/25251.
Full textAbstract:
A regeneração de plantas de Eucalyptus viminalis Labill. Foi obtida através da micropropagação de segmentos nodais de mudas. O desenvolvimento da técnica consistiu da adequação das fases de desinfestação dos explantes e multiplicação, alongamento e enraizamento de brotações sob condições assépticas e controladas de incubação. O meio de cultura básico foi o de MURASHIGE & SKOOG (MS), suplementado com 2% (P/V) de sacarose e solidificado com 0,8 % (P/V) de ágar , além das vitaminas descritas por GAMBORG & WETTER. Segmentos modais com aproximadamente 1 cm de comprimento, obtidos de mudas de 1 ano, foram desinfestados em solução de 1 ou 2% de hipoclorito de sódio durante 5, 10 ou 15 minutos. Tais explantes foram cultivados em meio MS com metade da concentração sais, com adição de BAP e ANA, ambos na concentração de 0,1 mg.l-1 . Na multiplicação empregou-se a combinação de BAP e ANA. Na fase de alongamento, efetuou-se a combinação de concentrações de sais no meio de cultura com adição suplementar de nitrogênio e regimes de luz, além da combinação de carvão ativado com GA3 e AIB. No enraizamento, empregaram-se diferentes concentrações de AIB combinadas com cinetina, em meio MS ou MS/2. Explantes tratados com solução de 1% de hipoclorito de sódio por 10 min. Apresentaram menores taxas de contaminação e oxidação e maior sobrevivência em relação aos demais tratamentos. Múltiplas brotações foram induzidas pela adição de 0,2 mg.l-1 de BAP e 0,1 mg.l-1 de ANA ao meio MS. No alongamento, o uso do carvão ativado, isoladamente, no meio MS, resultou no maior crescimento em altura das brotações. O uso do GA3 mostrou-se detrimental para o alongamento. O melhor enraizamento foi obtido no meio MS/2 suplementado com 0,5 mg.l-1 de AIB. Nesta fase, o meio MS/2 foi mais eficaz que o MS na formação das raízes. Na micropropagação de Eucalyptus viminalis a máxima taxa de multiplicação obtida foi de 5 a 6 brotações por explante, a cada 8 semanas, com percentagem de enraizamento de 66,6 %. Considerando-se o aspecto das brotações, a taxa ótima de multiplicação foi de 4,6 brotações por explante.
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Silva, Neto João Paulo da 1985. "Avaliação da microinfiltração na interface pilar-implante." [s.n.], 2012. http://repositorio.unicamp.br/jspui/handle/REPOSIP/288293.
Full textAbstract:
Orientadores: Mauro Antônio de Arruda Nóbilo, Flávio Domingues das NevesTese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba
Made available in DSpace on 2018-08-20T14:19:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 SilvaNeto_JoaoPauloda_D.pdf: 20811970 bytes, checksum: 8ae74338d9cd1c1d9de8b33947c0f2c0 (MD5) Previous issue date: 2012
Resumo: A conexão entre implante e pilar está diretamente relacionada com o infiltrado bacteriano e a presença de células inflamatórias que levam à perda óssea ao redor da microfenda formada por esta interface. Entretanto, ainda não há consenso quanto aos resultados dos testes in vitro e as metodologias aplicadas para a avaliação da microinfiltração nesta interface. O objetivo neste estudo foi: 1) avaliar, por meio de uma revisão sistemática, a influência das metodologias nos resultados dos estudos in vitro de microinfiltração na interface implante-pilar (I-P); 2) Avaliar, experimentalmente a microinfiltração bacteriana na interface I-P em implantes cone Morse inoculados com diferentes volumes de suspensão bacteriana. Para a revisão sistemática, foi realizada uma procura nas bases de dados MEDLINE, EMBASE e Cochrane, por estudos in vitro avaliando a microinfiltração na interface I-P publicados no período entre 1990 e agosto de 2011. Após a aplicação dos critérios de inclusão e exclusão, os artigos selecionados foram arranjados em tabelas e submetidos a análise descritiva. Para o ensaio de microinfiltração bacteriana foram selecionados implantes e pilares cone Morse, que por sua vez foram divididos em 2 grupos em função do tipo de pilar: parafuso passante (PP) e corpo sólido (CS). Posteriormente, os grupos foram subdivididos em 4 subgrupos, em função do volume de suspensão bacteriana inoculado nos implante (n=6): PP1: 0,1'mi'L; PP3: 0,3'mi'L; PP5: 0,5'mi'L; PP7: 0,7'mi'L; CS1: 0,1'mi'L; CS3: 0,3'mi'L; CS5: 0,5'mi'L e CS7: 0,7'mi'L. Uma suspensão bacteriana de Escherichia coli ATCC 35218 foi inoculada no interior dos implantes com volume de acordo com o respectivo grupo, sendo os componentes apertados segundo recomendações do fabricante. Após a inoculação os espécimes foram imersos em solução nutritiva bacteriana estéril para avaliação de um possível extravasamento do inoculo (grupo controle). Posteriormente, os conjuntos foram incubados em uma nova solução até o recobrimento da junção para avaliação microbiológica. A microinfiltração foi avaliada pela alteração na claridade da solução a cada 24 horas durante 7 dias. Ao final deste período os conjuntos foram reabertos para avaliação da viabilidade bacteriana. A revisão mostrou alta variabilidade de resultados e de tipos de ensaio de microinfiltração entre os estudos, apresentando alguns pontos críticos como volume bacteriano inoculado; concentração bacteriana; método de inoculação; períodos de acompanhamento e verificação de viabilidade bacteriana. No ensaio todos os espécimes inoculados com 0,7'mi'L e uma amostra de CS5 apresentaram turbidez no grupo controle após as primeiras 24 horas sendo excluídas do estudo. Durante os sete dias de acompanhamento nenhum espécime apresentou indicativo de microinfiltração bacteriana. E após este período, a viabilidade bacteriana foi confirmada em todos os espécimes avaliados. Dentro das limitações deste estudo pode se concluir que a falta de padronização entre os estudos in vitro dificulta comparações e pode explicar algumas divergências entre seus resultados. Não foi observada microinfiltração na interface I-P em implantes com conexão do tipo Morse e o volume de 0,7'mi'L excedeu a capacidade máxima do sistema avaliado
Abstract: The connection between implant and abutment is directly related to bacterial infiltration and it has been correlated with the presence of bacterial infiltration and inflammatory cells that can lead to bone loss around the marginal bone crest. However, there is no consensus to the in vitro tests results and methodologies for the assessment of microleakage at this interface. The aims of this study were to evaluate: 1) the influence of methodological aspects in variations on the results of in vitro microleakage studies of the implant-abutment (I-A) interface; 2) the bacterial microleakage in the I-A interface of Morse tapered implants inoculated with different volumes. For the review, MEDLINE, EMBASE and Cochrane Library database were consulted for in vitro studies published between 1990 and August 2011. For those studies that met the inclusion and exclusion criteria, data were arranged in tables and subjected to descriptive analysis. In the bacterial microleakage test, Morse tapered implants and abutments were selected and assigned into two groups depending on the abutment type: passing screw abutment (PS) and solid abutment (S), and then further subdivided into four subgroups depending on the volume of inoculation in the inner part of the implant (n=6): PS1: 0.1'mi'L; PS3: 0.3'mi'L; PS5:0.5'mi'L; PS7: 0.7'mi'L; S1: 0.1'mi'L; S3: 0.3'mi'L; S5: 0.5'mi'L e S7: 0.7'mi'L. For the control group, the presence of external contamination was assessed. A bacterial suspension was inoculated in the implants and incubated for microbiological analysis. The microleakage was evaluated every 24 hours during 7 days. After this period, the implants were disassembled for confirmation of the bacterial viability. All the specimens inoculated with 0.7 'mi'L and one sample of S5 presented turbidity in the control group after the first 24 hours and were excluded of the study. During the seven days, none of the specimens presented positive results for microleakage and the bacterial viability was confirmed in all evaluated specimens. Within the limitations of this study, it can be concluded that a lack of standardization hinders comparisons among studies and can give an explanation of some divergences among them; during the seven days, none of the specimens presented positive results for microleakage and the bacterial viability was confirmed in all evaluated specimens; the volumes 0.1, 0.3, and 0.5?L did not present bacterial microleakage in the IA interface. The volume of 0.7'mi'L is excessive and lead to false results of microleakage
Doutorado
Protese Dental
Doutor em Clínica Odontológica
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Yahyaoui, Tarek. "Etude de la morphogénèse in vitro des ébauches d'inflorescences de vigne." Dijon, 1998. http://www.theses.fr/1998DIJOS051.
Full textAbstract:
Devant l'insuffisance des connaissances sur la physiologie du développement des inflorescences dans les bourgeons latents de la vigne, il a paru intéressant d'étudier les mécanismes de régulation hormonale de la morphogenèse de ces inflorescences. Pour cela, nous avons procédé par la culture in vitro des ébauches d'inflorescences de trois variétés de vigne durant la période de repos végétatif (novembre - avril). Cette étude comporte deux grandes parties correspondant a deux séries d'expériences réalisées sur des ébauches d'inflorescences de vigne cultivées in vitro. La première partie est destinée à présenter leur développement in vitro, illustré par le cas du pinot noir et du chardonnay, ainsi que les facteurs susceptibles de l'influencer. Les données recueillies au cours de cette première partie nous ont conduit à la notion de voies morphogénétiques (au nombre de six). Leur analyse a permis de comprendre que le phénomène en question se déroule en définitive selon trois voies morphogénétiques principales, induites chacune par un type de régulateurs de croissance particulier. La deuxième partie de ce mémoire rassemble les résultats de la deuxième série d'expériences. Les connaissances précédemment acquises vont être approfondies dans l'espoir de parvenir à la maitrise de la régulation hormonale de chaque étape de la morphogenèse in vitro des ébauches d'inflorescences. Dans cet objectif, un cépage apyrène appelé Madina a été utilisé pour mettre en évidence un éventuel effet favorable de son génotype. Par ailleurs, un retardateur de croissance (le chlorure de chlorocholine) a été choisi pour jouer sur l'état initial des ébauches d'inflorescences. Enfin, d'autres événements observés in vitro sont décrits tels que l'abscission florale, la réversion vers le développement végétatif et la senescence des ébauches d'inflorescences.
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Vangramberen, Anne Jackie. "Fécondation in vitro après 38 ans : analyse rétrospective 1993-1997." Bordeaux 2, 1998. http://www.theses.fr/1998BOR2M075.
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Tesson-Werner, Mathilde Zaccabri Annie. "Transferts embryonnaires en FIV et ICSI facteurs pronostiques /." [S.l.] : [s.n.], 2009. http://www.scd.uhp-nancy.fr/docnum/SCDMED_T_2009_TESSON_WERNER_MATHILDE.pdf.
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Soto, Heras Sandra. "Oocyte competence: Study of melatonin and meiotic inhibitors to improve in vitro embryo production in juvenile goats." Doctoral thesis, Universitat Autònoma de Barcelona, 2019. http://hdl.handle.net/10803/667266.
Full textAbstract:
La producción in vitro de embriones (PIVE) tiene su mayor limitación en la eficacia de la maduración in vitro (MIV) de los oocitos. La MIV altera la competencia de los oocitos debido al efecto perjudicial de los radicales de oxígeno (ROS) y a la reanudación rápida y espontanea de la meiosis. En oocitos de cabras de 1 a 2 meses de edad, estos dos factores son más intensos y perjudiciales. En esta tesis, se plantearon dos estrategias para mejorar los protocolos de MIV en estos oocitos: A) Suplementar el medio de MIV con melatonina como potente antioxidante para disminuir los ROS; B) Diseñar un sistema bifásico de MIV con una fase de pre-maduración (pre-MIV) con inhibidores de la meiosis, seguida por una segunda fase de MIV convencional.
El efecto de la melatonina fue evaluado en dos estudios. En el primero, se testaron diferentes concentraciones de melatonina (10-11, 10-9, 10-7, 10-3 M) en el medio de MIV. La suplementación con 10-7 M de melatonina aumentó el porcentaje de blastocistos (28.9% vs. 11.7% en el control) y redujo el nivel intra-oocitario de ROS. En el segundo estudio, evaluamos los mecanismos de acción de la melatonina (10-7 M) en los oocitos y detectamos la presencia del receptor de melatonina 1 (MT1) en oocitos y células del cúmulo mediante inmunocitoquímica. La melatonina incrementó la actividad mitocondrial y el ATP de los oocitos, redujo los ROS y mejoró la calidad de los blastocistos producidos in vitro (55.8 vs. 30.4 células de la masa celular interna), comparado con el grupo control sin antioxidantes. No pudimos determinar si estos efectos son mediados por el MT1 porqué el grupo melatonina más lucindol (antagónico del MT1) no mostró diferencias significativas respeto los grupos melatonina y control.
La estrategia para mejorar la competencia de los oocitos mediante una pre-MIV con inhibidores meióticos se desarrolló en dos estudios. El primer estudio se llevó a cabo en la Universidad de Adelaida (Australia) en oocitos de bovino adulto. Evaluamos el efecto de distintas concentraciones del péptido natriurético tipo C (CNP; 50, 100, 200 nM) y el 3-isobutyl-1-methylxanthine (IBMX; 500 µM) sobre el arresto meiótico durante 6 y 24 h. El cultivo de pre-MIV con CNP (100 nM) más IBMX durante 6 horas obtuvo el mayor efecto de parada meiótica (92% de oocitos en vesícula germinal; VG). A continuación, diseñamos un sistema bifásico utilizando este protocolo de pre-MIV, seguido de 20 h de MIV convencional, y comparamos con una MIV control (24 h). La MIV bifásica prolongó la comunicación entre células del cúmulo y oocito, evaluada mediante la densidad de proyecciones de transzona (TZP), mejoró la actividad mitocondrial y aumentó la producción de blastocistos (45.1% vs. 34.5%). En el segundo estudio, analizamos un sistema similar en oocitos de cabras de 1 a 2 meses de edad. Primero, evaluamos el efecto de distintas dosis de CNP (50, 100, 200 nM) con o sin la adición de 10 nM de estradiol. La pre-MIV con CNP (200 nM) más estradiol mantuvo un 74.7% de oocitos en VG y una alta densidad de TZP durante 6 h. En segundo lugar, cultivamos los oocitos con MIV bifásica (6 h pre-MIV más 24 h MIV) comparado con MIV control (24 h). La MIV bifásica incrementó el glutatión intra-oocitario y disminuyó los ROS, aumentó la expresión de DNA metiltranferasa 1 y proteína 6 estimuladora de TNF en complejos cúmulo-oocito (COCs), y mejoró la producción de blastocistos (30.2% vs. 17.2%).
En conclusión, la MIV con melatonina y la pre-MIV con inhibidores meióticos son métodos que pueden mejorar sustancialmente la competencia de los oocitos de hembras muy jóvenes para producir embriones in vitro.Oocyte in vitro maturation (IVM) is a limiting step for the in vitro embryo production (IVEP). Conventional IVM can impair oocyte competence due to the damaging effect of reactive oxygen species (ROS) and the rapid and spontaneous meiotic resumption. These two factors are more intense and damaging for oocytes of juvenile goats (1-2 months old). In the present thesis, we hypothesized that two different strategies could improve IVM protocols in these oocytes: A) Supplementing the IVM medium with melatonin as a powerful antioxidant in order to reduce ROS; B) Designing a biphasic IVM system including a pre-maturation (pre-IVM) culture phase with meiotic inhibitors, followed by a conventional IVM phase. The effect of melatonin was evaluated in two studies. In the first study, various melatonin concentrations (10-11, 10-9, 10-7, 10-3 M) were tested in the IVM medium. The supplementation with 10-7 M of melatonin increased the blastocyst rate (28.9% vs. 11.7% in control) and decreased intra-oocyte ROS levels after IVM. In the second study, the mechanisms of action of melatonin (10-7 M) in the oocyte were assessed and the presence of melatonin receptor 1 (MT1) was detected in oocytes and cumulus cells by immunocytochemistry. Melatonin increased oocyte mitochondrial activity and ATP content, decreased intra-oocyte ROS levels, and improved blastocyst quality (55.8 vs. 30.4 cells in the inner cell mass), compared to control group without antioxidants. However, we could not determine if these effects were mediated by MT1 because IVM with melatonin plus luzindole (an inhibitor of MT1) showed no significant differences compared to melatonin and control groups. The strategy for improving oocyte competence during a pre-IVM culture with meiotic inhibitors was also developed in two studies. The first study was performed at the University of Adelaide (Australia) with oocytes from adult cow. We evaluated the effect of various concentrations of C-type natriuretic peptide (CNP; 50, 100, 200 nM) and 3-isobutyl-1-methylxanthine (IBMX; 500 µM) on oocyte meiotic arrest during 6 and 24 h. Pre-IVM culture with CNP (100 nM) plus IBMX for 6 h showed the greater effect on the meiotic arrest (92% of oocytes in germinal vesicle; GV). We developed a biphasic IVM system using this pre-IVM protocol followed by 20 h of conventional IVM, and compared to control IVM (24 h). Biphasic IVM prolonged cumulus-oocyte communication assessed by the density of transzonal projections (TZP), improved oocyte mitochondrial activity and increased blastocyst rate (45.1% vs. 34.5%). In the second study, a similar biphasic IVM system was tested in juvenile-goat IVEP. First, the effect of various CNP doses (50, 100, 200 nM) were tested with and without the addition of 10 nM estradiol. Pre-IVM with CNP (200 nM) plus estradiol sustained 74.7% of oocytes in GV and a high density of TZPs during 6 h. Second, oocytes were cultured with biphasic IVM (6 h pre-IVM plus 24 h IVM) compared to control IVM (24 h). Biphasic IVM increased intra-oocyte glutathione levels and decreased ROS, up-regulated the expression of DNA methyltransferase 1 and TNF-stimulated gene 6 protein in cumulus-oocyte complexes (COCs), and improved blastocyst rate (30.2% vs. 17.2%). In conclusion, IVM with melatonin and pre-IVM with meiotic inhibitors are promising methods that can considerably improve the oocyte developmental competence of very young females for producing embryos in vitro.
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Lamla, Thorsten. "In-vitro-Selektion streptavidinbindender Peptide." [S.l. : s.n.], 2002. http://www.diss.fu-berlin.de/2002/281/index.html.
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Fritz, Kathrin. "Gerinnungsveränderungen unter In-vitro-Fertilisationstherapie." [S.l.] : [s.n.], 2003. http://deposit.ddb.de/cgi-bin/dokserv?idn=969786670.
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Hoffmann, Sebastian. "Evidence-based in vitro toxicology." [S.l.] : [s.n.], 2005. http://deposit.ddb.de/cgi-bin/dokserv?idn=975776207.
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Sarafoff, Nikolaus. "Amplifikation von Prionen in vitro." Diss., lmu, 2006. http://nbn-resolving.de/urn:nbn:de:bvb:19-57072.
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Tittel, Inga Katharina. "Zytotoxizität bioresorbierbarer Hartgewebekleber in vitro." Diss., lmu, 2006. http://nbn-resolving.de/urn:nbn:de:bvb:19-61206.
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Borse, Vishal Harish. "In-vitro biomechanics of vertebroplasty." Thesis, University of Leeds, 2014. http://ethos.bl.uk/OrderDetails.do?uin=uk.bl.ethos.713483.
Full textAbstract:
Osteoporotic vertebral compression fractures are a major burden worldwide. Percutaneous vertebroplasty is a recognised treatment option for these fractures but there is conflicting evidence regarding the optimum amount of cement to use and there is little evidence regarding the best surgical approach to treating these fractures. Newer techniques are available which expand on the basic premise of percutaneous vertebroplasty. This project aimed to provide the basic science to answer the questions of cement fill, approach and the use of modern adjuncts to traditional percutaneous vertebroplasty. The first phase looked at approaches and cement fill and found that a 30% fill via a unipedicular approach , gave the best biomechanical outcome combined with the lowest theoretical risk and that the interaction between the cement and the vertebral endplate was important for syength restoration. Phase 2 expanded on the work carried out earlier in this study and looked at the response to dynamic loading of augmented and unaugmented vertebra. It reinforced the findings of phase 1 that 30% was the key figure and the endplate-bolus interaction was key. Finally phase 3 took the work carried out in the study so far and compared cavity creation vertebroplasty using a contour osteotome with traditional balloon kyphoplasty in, a static loading environment. It demonstrated equivocal strength restoration between the two but with lower incidence of implant induced fracture in the contour group. The culmination of this project provides guidelines for the effective use of cement augmentation by percutaneous vertebroplasty as a method for restoring strength post vertebral fracture in osteoporotic patients.
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Crossley, Martin Richard. "Modelling neuromuscular circuits in vitro." Thesis, King's College London (University of London), 2016. https://kclpure.kcl.ac.uk/portal/en/theses/modelling-neuromuscular-circuits-in-vitro(bad38aeb-f480-492d-9332-a804d0632ecf).html.
Full textAbstract:
The survival of complex organisms depends on their ability to interact with their environment through precise control of motor behaviours. This is achieved via specialised synapses called neuromuscular junctions (NMJs) found between motor neurons (MNs), projecting from the hindbrain and spinal cord, and skeletal muscle in the periphery. Current evidence suggests that pathological changes at the NMJ precede many neuromuscular disorders. Studying neuromuscular circuits is therefore critical to improving our understanding of this system and advancing therapies for many currently incurable diseases. One key strategy for discovering new treatments are pharmacological screens, however performing these on NMJs in vivo is challenging, with limited opportunities for experimental manipulation or long-term observation. Recent advances in stem cell biology present an exciting opportunity to produce in vitro models of neuromuscular circuits, with improved accessibility, reproducibility and scalability. This thesis describes and validates a model for neuromuscular circuit development and NMJ formation and maturation. Mouse ESC lines were generated to enable the production of spinal MNs and skeletal muscle. Patch-clamp experiments revealed that murine embryonic stem cell-derived motor neurons (ESC-MNs) mature electrically over a period of 3 weeks, progressing from an immature, non-spiking character to a mature phenotype capable of firing high frequency trains of action potentials. This behaviour was recapitulated via photostimulation using a stably integrated Channelrhodopsin-2 (ChR2) transgene. To investigate the functional properties of ESC-MNs, an ESC line was established expressing a doxycycline-inducible Myod1 transgene. Following Myod1 induction these cells form multinucleated skeletal myotubes in vitro. Co-cultures of ESC-MNs and myotubes show immature but functional synapses, with contractile activity directed by light stimulation via ChR2. Long-term in vitro culture was assessed using an alternative muscle target from the chick model system. Co-culture of ESC-MNs with chick primary skeletal muscle leads to maturation of NMJs, and spontaneous as well as light-evoked muscle contractions. These co-cultures represent an accessible model for studying NMJ development and function, as well as providing a potential assay to screen genetic or pharmacological therapies for muscular and MN diseases.
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Parker, Elaine. "Human bone growth in vitro." Thesis, National Library of Canada = Bibliothèque nationale du Canada, 1999. http://www.collectionscanada.ca/obj/s4/f2/dsk2/ftp01/MQ45522.pdf.
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Talke, Anja. "In-vitro-Selektion kohlenhydratbindender Proteine." [S.l.] : [s.n.], 2005. http://www.diss.fu-berlin.de/2006/654/index.html.
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Nicholas, Richard St John. "In vitro microglial oligodendrocyte interactions." Thesis, University of Cambridge, 2001. http://ethos.bl.uk/OrderDetails.do?uin=uk.bl.ethos.621384.
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