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Dissertations / Theses on the topic 'In vitro; Embryology'
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1
Uy, Gary D. "Studies on the control of diploid trophoblast growth in the mouse." Thesis, University of Oxford, 2001. http://ethos.bl.uk/OrderDetails.do?uin=uk.bl.ethos.365366.
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2
Nasr-Esfahani, Mohammad Hossein. "The role of reactive oxygen species in the vitro development of mouse embryos." Thesis, University of Cambridge, 1991. http://ethos.bl.uk/OrderDetails.do?uin=uk.bl.ethos.387105.
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3
Xu, Jiasen. "A study of embryotrophic mechanism of human oviductal cells on mouse embryo development in vitro." Hong Kong : University of Hong Kong, 2000. http://sunzi.lib.hku.hk/hkuto/record.jsp?B22926197.
Full text
4
Chan, Sin-ying Cindy. "In vitro effect of oviductal embryotrophic factors on the gene expressions of preimplantation mouse embryos." Click to view the E-thesis via HKUTO, 2003. http://sunzi.lib.hku.hk/hkuto/record/B31970916.
Full text
5
Black, David H. "Development of ovum pickup and in vitro embryo production to assess fertility responses for mineral intervention studies." Thesis, University of Nottingham, 2018. http://eprints.nottingham.ac.uk/52598/.
Full textAbstract:
As nutrition is of central importance to cattle fertility, this study sought to assess how veterinarians and nutritional advisers manage trace element imbalance in the UK; diagnosis and treatment. The study also sought to develop a robust system for oocyte recovery (ovum pick-up (OPU)) and in vitro embryo production (IVP) for commercial use, and to identify key factors influencing success, including oestrus synchrony and ovarian stimulation prior to OPU. The intention originally was to use OPU/IVP to investigate the impact of mineral imbalances on bovine oocyte quality, early embryo development and pregnancy establishment following embryo transfer (ET). In the first survey of its kind in the UK, the understanding and approach of advisers to mineral nutrition on farms was investigated. Of the 173 respondents, 78% were vets in practice. The overall importance of minerals was recorded by vets as low 33%, medium 37%, and high 30%, while non-vets scored importance as low 17%, medium 48%, and high 35%. There was little consensus amongst the advisers, or within the vet and non-vet subgroups about mechanisms and interactions associated with deficiency, and particularly of copper responsive conditions. The most frequently identified deficiencies were selenium, copper and iodine, while the most commonly identified toxicity was molybdenum. For copper responsive conditions, all of the listed treatments were used at least "occasionally"; the most frequently being glass boluses, in-feed supplementation, matrix boluses, and then copper injections. While there was a diverse choice of treatments, altering the ration was relatively rarely selected. This thesis also provides the first large-scale retrospective analysis of factors influencing the establishment of a commercially robust ovum pick up (OPU) and in vitro embryo production (IVP) platform in the UK. Over a 5-year period, a system was developed and validated for use in the UK with 2,138 cycles of OPU. These cycles were analysed as four sets of data and included two IVP laboratories and 6 OPU teams. Factors in these analyses included OPU team, IVP laboratory, ovarian stimulation protocol and semen type (unsorted vs sex-sorted). The mean number of follicles aspirated by the OPU teams ranged from 6.5 to 14.9 (P < 0.001), while the number of oocytes collected was between 4.0 and 12.4 (P < 0.001). There was an indication (P=0.055) that the blastocyst per oocyte rate varied between teams. The proportion of blastocysts from oocytes that cleaved was higher (P=0.01) for unsorted than sexed semen. Two commercial products containing different ratios of follicle stimulating hormone (FSH) to luteinising hormone (LH) (Folltropin® and Pluset®) were compared in ovarian stimulation programs. The addition of 'coasting' (short-term (typically 48h) hormonal withdrawal after FSH stimulation), prior to OPU was also investigated. Pluset® resulted in a greater (P < 0.001) mean number of follicles aspirated, more (P=0.003) blastocysts per oocyte matured and more (P < 0.001) embryos per cycle (2.45), compared with Folltropin® (1.17) or with no stimulation (1.24). Throughout the study there was a steady improvement in blastocyst production per OPU cycle. In a separate analysis, Grade 1 cumulus oocyte complexes (COCs) as a proportion of COCs recovered, oocytes that cleaved as a proportion of total COCs, and blastocysts as a proportion of total COCs, were all greater (P < 0.05) for stimulated than non-stimulated cycles, irrespective of FSH/LH product. A composite score of oocyte quality and quantity was proposed (sCOC); Log Total Mean sCOC was correlated (P < 0.001) with both the proportion of blastocysts per oocyte collected, and the total number of embryos produced per cycle. Finally, twelve peri-pubertal heifers (approximately 10 months old) participated in a crossover trial which compared PRID® (Delta®) vs CIDR® progesterone releasing intravaginal devices for use in OPU/IVP cycles. Vaginoscopic examination found higher vaginal inflammation grades for PRID® than CIDR® (P < 0.001). There was evidence of vaginal inflammation continuing for at least 2 weeks after device withdrawal. The proportion cleaved of oocytes inseminated was higher for PRID® than CIDR® (P < 0.05). Numerically but not significantly there was a higher proportion of blastocysts per cycle and a higher Log Total Mean sCOC score per cycle with PRID® than CIDR® treatments, but blastocyst yield was low throughout, suggesting a need to repeat the trial. Data collection and analyses are ongoing, to identify other key performance indicators within the OPU/IVP embryo transfer (ET) system, with a view to refining the sCOC composite score model. A robust OPU/IVP/ET system has been developed and this could be used to investigate further how mineral imbalances impact oocyte competence and blastocyst yield.
6
陳倩瑩 and Sin-ying Cindy Chan. "In vitro effect of oviductal embryotrophic factors on the gene expressions of preimplantation mouse embryos." Thesis, The University of Hong Kong (Pokfulam, Hong Kong), 2003. http://hub.hku.hk/bib/B31970916.
Full text
7
Yu, Hing-Sing. "Studies on the toxicity and teratogenicity of cadmium on mouse pre-embryos in vitro and in vivo with special reference to their subsequent development /." [Hong Kong] : University of Hong Kong, 1987. http://sunzi.lib.hku.hk/hkuto/record.jsp?B1221579X.
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8
許嘉森 and Jiasen Xu. "A study of embryotrophic mechanism of human oviductal cells on mouse embryo development in vitro." Thesis, The University of Hong Kong (Pokfulam, Hong Kong), 2000. http://hub.hku.hk/bib/B43894720.
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9
Lawry, John R. "Characterization of the expression of glutamate dehydrogenase in preimplantation mouse embryos using competitive reverse transcription- polymerase chain reactions." Virtual Press, 1994. http://liblink.bsu.edu/uhtbin/catkey/917022.
Full textAbstract:
A mouse embryo culture medium which would allow for in vitro development from 1-cell stage to blastocyst stage could offer many benefits for human research. Previous researchfrom our lab has demonstrated a mouse embryo culture medium named CZB seems to allow for in vivo-like conditions for development. Compared to other commonly used mouse embryo culture media, CZB medium promotes a higher frequency of 1 cell mouse embryos developing to blastocyst stage (Chatot et 1989). A key difference between CZB and other mouse embryo culture media is that CZB contains the amino acid glutamine metabolism is glutamate dehydrogenase (GDH). In order to determine if CZB cultured embryos follow in vivo-like patterns of gene expression for GDH, a quantitative competitive RT-PCR system was designed. A mutant GDH mRNA template was created which lacked a specific restriction enzyme site and was used as a competitive template in quantitative RT-PCR. This system was used to determine the amount of GDH mRNA present in in vivo grown blastocyst stage mouse embryos. It was determined that the amount of GDH mRNA present in in vivo blastocyst stage embryos was 282 fg/embryo. It is believed this system will also allow for quantitation of GDH mRNA in the earlier preimplantation stages of in vivo grown embryos, as well as the preimplantation stages 2-cell to blastocyst of CZB cultured embryos.Department of Biology
10
Sedano, Rodolfo Canseco. "Effect of immunoglobulins on early bovine embryo development in vitro." Thesis, Virginia Tech, 1985. http://hdl.handle.net/10919/41575.
Full textAbstract:
Bovine morulae (day 6: n=257) were obtained to evaluate
the [effect of immunoglobulins (Ig) on early bovine embryo
development in vitro. Fifty-four cows superovulations were
conducted in 36 cows with follicle stimulating hormone.
Embryos were collected by non-surgical procedures and
morphologically evaluated and randomly assigned to culture.
Embryos were cultured in Ham's F-10 containing 10%
(6.4 mg/ml) steer serum (SS), 1% (.64 mg/ml) bovine gamma .
globulins (GG), 1% (.64 mg/ml) bovine IgG, 1% (.64 mg/ml)
bovine 1gM, 10% SS plus 1% GG, 10% SS plus 1% 1gG, or 10% SS
plus 1% 1gM. Embryos were cultured to the hatched blastocyst stage or degeneration and evaluated at 12 h intervals.Master of Science
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余慶聲 and Hing-Sing Yu. "Studies on the toxicity and teratogenicity of cadmium on mouse pre-embryos in vitro and in vivo with special reference to theirsubsequent development." Thesis, The University of Hong Kong (Pokfulam, Hong Kong), 1987. http://hub.hku.hk/bib/B31231457.
Full text
12
Hajdu, Melissa Anne. "Effect of culture conditions, donor source, and injection site on in vitro development of deoxyribonucleic acid microinjected porcine zygotes." Thesis, This resource online, 1993. http://scholar.lib.vt.edu/theses/available/etd-12172008-063219/.
Full text
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Steeves, Tracey Elizabeth 1968. "The in vitro produced cow embryo : factors affecting development and metabolism." Monash University, Centre for Early Human Development, 2000. http://arrow.monash.edu.au/hdl/1959.1/8992.
Full text
14
Hopkins, Katherine Lee. "In vitro characterization of aromatase, estrone sulfotransferase and estrone sulfatase activities in the porcine placenta and endometrium at 30, 60 and 90 days of gestation." Thesis, Virginia Tech, 1987. http://hdl.handle.net/10919/45793.
Full textAbstract:
The purpose of this investigation was to characterize the activities of three enzymes, aromatase, estrone (E1) sulfotransferase and E] sulfatase, in the porcine placenta and endometrium on d 30, 60 and 90 of gestation. These enzymes play key roles in determining in utero concentrations of estrogens. Days 30, 60 and 90 were chosen because previous investigations had determined that these were times of substantial changes in in vitro estrogen production by the porcine placenta and endometrium.
Master of Science
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Pioltine, Elisa Mariano [UNESP]. "Sistema NPPC-NPR2 na espécie bovina: identificação em folículos antrais e modulação na concentração de nucleotídeos cíclicos e na expressão gênica de PDE3 em complexos cumulus-oócito." Universidade Estadual Paulista (UNESP), 2015. http://hdl.handle.net/11449/127782.
Full textAbstract:
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000849664.pdf: 1189084 bytes, checksum: cbc1fe6d442a04c2f695f228e768b010 (MD5)Em camundongo, estudos recentes demonstraram que o precursor do peptídeo natriurético tipo C (NPPC) e o seu receptor do tipo 2 (NPR2) são essenciais para a manutenção do bloqueio da meiose I no oócito. Além disso, fatores parácrinos secretados pelo oócito, como a proteína morfogenética óssea (BMP15), podem modular esse bloqueio pelo estímulo da expressão do gene NPR2 nas células do cumulus de camundongos. Em recente estudo na espécie bovina, o fluido folicular bovino (FFb), quando adicionado ao meio de maturação, interferiu na maturação nuclear do oócito e, como resultado, melhorou a produção in vitro de embriões. Contudo, não são conhecidos quais os fatores, presentes no FFb, que são responsáveis por esse efeito podendo inclusive haver participação das microvesículas presentes neste. Além de ser um componente do FFb, foi demonstrado que o estradiol pode participar diretamente da estimulação do NPR2. Portanto, os objetivos gerais do presente trabalho envolvem a elucidação do sistema NPPC-NPR2 no ovário bovino e a investigação da influência do NPPC exógeno, do estradiol e das vesículas extracelulares sobre a expressão do gene da PDE3 no oócito bovino e sobre a concentração de nucleotídeos cíclicos nos complexos cumulus-oócito. Foram realizado s quatro experimentos: 1) Ensaio imunoenzimático (ELISA) para investigar a presença e a concentração do NPPC no fluido folicular, no lisado de células da granulosa mural e nas vesículas extracelulares, de acordo com a classe de diâmetro folicular (3 a 6 mm; 6 a 8 mm e >8 mm); 2) Imunolocalização do receptor NPR2 no folículo antral bovino; 3) Expressão do gene da PDE3 no oócito bovino, mediante RT - PCR em tempo real, em CCOs im aturos e maturados in vitro por 6 horas com NPPC exógeno, estradiol e vesículas extracelulares; 4) Mensuração da concentração de AMPc e GMPc, em oócitos e células...
In mice, recent studies have demonstrated that the natriuretic peptide precursor C (NPPC) and its type - 2 - receptor (NPR2) are essential for the maintenance of meiosis I arrest in the oocyte. Moreover, paracrine factors secreted by the oocyte such as bone mo rphogenetic protein 15 (BMP15) can modulate this arrest through the expression of the NPR2 gene in cumulus cells of mice. In a recent study in cattle, the bovine follicular fluid (bFF) added to the maturation medium was able to interfere with the oocyte nu clear maturation resulting in higher embryo yield in vitro . However, it is not known what factors present in bFF might be responsible for this effect and one candidate could be the presence of microvesicles in the bFF. Additionally, the estradiol hormone i s component of the bFF and was demonstrated to directly stimulate NPR2 expression. Therefore, the objectives of this work includes the investigation of the NPPC - NPR2 system in the bovine ovary and the assessment of the effects of exogenous NPPC, estradiol and extracellular vesicles on the expression of the PDE3 gene in bovine oocytes and the concentrations of cyclic - nucleotides in cumulus - oocyte complexes. We designed four experiments: 1) enzyme - linked immunosorbent assay (ELISA) for the presence and concen tration of the NPPC in follicular fluid, in the lysate of mural granulosa cells and in the extracellular vesicles, according to follicular diameter (3 to 6 mm, 6 to 8 mm, >8 mm); 2) Immunolocalization of NPR2 receptor in bovine antral follicles; 3) PDE3 ge ne expression in bovine oocyte by RT - PCR in real time, in immature COCs and in COCs in vitro matured for 6 h with exogenous NPPC, estradiol and extracellular vesicles; 4) Measurement of the concentration of cAMP and cGMP in oocytes and cumulus cells, respectively, either immature or matured in vitro for 6 h with exogenous NPPC or extracellular vesicles through specific...
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Pioltine, Elisa Mariano. "Sistema NPPC-NPR2 na espécie bovina : identificação em folículos antrais e modulação na concentração de nucleotídeos cíclicos e na expressão gênica de PDE3 em complexos cumulus-oócito /." Assis, 2015. http://hdl.handle.net/11449/127782.
Full textAbstract:
Orientador: Marcelo Fábio Gouveia NogueiraCo-orientadora: Mariana Fernandes Machado
Banca: Marcelo Marcondes Seneda
Banca: Claudia Lima Verde Leal
Resumo: Em camundongo, estudos recentes demonstraram que o precursor do peptídeo natriurético tipo C (NPPC) e o seu receptor do tipo 2 (NPR2) são essenciais para a manutenção do bloqueio da meiose I no oócito. Além disso, fatores parácrinos secretados pelo oócito, como a proteína morfogenética óssea (BMP15), podem modular esse bloqueio pelo estímulo da expressão do gene NPR2 nas células do cumulus de camundongos. Em recente estudo na espécie bovina, o fluido folicular bovino (FFb), quando adicionado ao meio de maturação, interferiu na maturação nuclear do oócito e, como resultado, melhorou a produção in vitro de embriões. Contudo, não são conhecidos quais os fatores, presentes no FFb, que são responsáveis por esse efeito podendo inclusive haver participação das microvesículas presentes neste. Além de ser um componente do FFb, foi demonstrado que o estradiol pode participar diretamente da estimulação do NPR2. Portanto, os objetivos gerais do presente trabalho envolvem a elucidação do sistema NPPC-NPR2 no ovário bovino e a investigação da influência do NPPC exógeno, do estradiol e das vesículas extracelulares sobre a expressão do gene da PDE3 no oócito bovino e sobre a concentração de nucleotídeos cíclicos nos complexos cumulus-oócito. Foram realizado s quatro experimentos: 1) Ensaio imunoenzimático (ELISA) para investigar a presença e a concentração do NPPC no fluido folicular, no lisado de células da granulosa mural e nas vesículas extracelulares, de acordo com a classe de diâmetro folicular (3 a 6 mm; 6 a 8 mm e >8 mm); 2) Imunolocalização do receptor NPR2 no folículo antral bovino; 3) Expressão do gene da PDE3 no oócito bovino, mediante RT - PCR em tempo real, em CCOs im aturos e maturados in vitro por 6 horas com NPPC exógeno, estradiol e vesículas extracelulares; 4) Mensuração da concentração de AMPc e GMPc, em oócitos e células...
Abstract: In mice, recent studies have demonstrated that the natriuretic peptide precursor C (NPPC) and its type - 2 - receptor (NPR2) are essential for the maintenance of meiosis I arrest in the oocyte. Moreover, paracrine factors secreted by the oocyte such as bone mo rphogenetic protein 15 (BMP15) can modulate this arrest through the expression of the NPR2 gene in cumulus cells of mice. In a recent study in cattle, the bovine follicular fluid (bFF) added to the maturation medium was able to interfere with the oocyte nu clear maturation resulting in higher embryo yield in vitro . However, it is not known what factors present in bFF might be responsible for this effect and one candidate could be the presence of microvesicles in the bFF. Additionally, the estradiol hormone i s component of the bFF and was demonstrated to directly stimulate NPR2 expression. Therefore, the objectives of this work includes the investigation of the NPPC - NPR2 system in the bovine ovary and the assessment of the effects of exogenous NPPC, estradiol and extracellular vesicles on the expression of the PDE3 gene in bovine oocytes and the concentrations of cyclic - nucleotides in cumulus - oocyte complexes. We designed four experiments: 1) enzyme - linked immunosorbent assay (ELISA) for the presence and concen tration of the NPPC in follicular fluid, in the lysate of mural granulosa cells and in the extracellular vesicles, according to follicular diameter (3 to 6 mm, 6 to 8 mm, >8 mm); 2) Immunolocalization of NPR2 receptor in bovine antral follicles; 3) PDE3 ge ne expression in bovine oocyte by RT - PCR in real time, in immature COCs and in COCs in vitro matured for 6 h with exogenous NPPC, estradiol and extracellular vesicles; 4) Measurement of the concentration of cAMP and cGMP in oocytes and cumulus cells, respectively, either immature or matured in vitro for 6 h with exogenous NPPC or extracellular vesicles through specific...
Mestre
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Fike, Kate E. "DEVELOPMENT AND COMMERCIALIZATION OF CIRCULATING FETAL CELL BASED TECHNOLOGY AS A NON-INVASIVE PRENATAL DIAGNOSTIC TOOL." Case Western Reserve University School of Graduate Studies / OhioLINK, 2021. http://rave.ohiolink.edu/etdc/view?acc_num=case1621460632878665.
Full text
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Hickman, Cristina Fontes Lindemann. "Environmental factors affecting interferon-τ expression and secretion by in vitro produced bovine blastocysts." Thesis, University of Edinburgh, 2010. http://hdl.handle.net/1842/4399.
Full textAbstract:
Interferon (IFN)τ is the luteotrophic signal in ruminants and is secreted by bovine blastocysts both in vivo and in vitro. IFNτ secretion is highly variable and its control is only partly understood. Most studies on the effects of environmental factors on IFNτ production have evaluated IFNτ production during the time of embryo elongation and attachment. There is less knowledge of how IFNτ production at the blastocyst stage is modulated. Therefore, the hypothesis of this thesis was that the amounts of IFNτ expressed and/or secreted by bovine blastocysts produced in vitro were modulated by environmental factors. In the first set of experiments, bovine embryos were incubated with a cytokine (granulocyte macrophage colony stimulating factor, GM-CSF). GM-CSF had been shown previously to promote embryo viability in a range of species and to modulate IFNτ secretion by ovine blastocysts and thus was classified as a beneficial environmental factor. Three experiments were conducted to test whether GM-CSF stimulated bovine blastocyst development and IFNτ secretion. Embryos were incubated with a range of different concentrations of GM-CSF (2, 5, 10 and 50 ng mL-1) and at different stages of development (1 to 3 and 1 to 9 days post-insemination). Bovine embryos were unresponsive to GM-CSF in terms of IFNτ secretion, pyruvate oxidation, rate of development, blastocyst yield, morphological quality and apoptotic index, irrespective of timing of exposure and/or concentration of GM-CSF. In the second part of the thesis, bovine blastocysts were exposed to a mild heat treatment (42°C for four h) to determine whether heat stress affected IFNτ expression by bovine blastocysts. A novel multiplex reverse-transcription polymerase chain reaction methodology was validated to detect IFNτ and heat shock protein (HSP)70 mRNA in individual bovine embryos relative to an endogenous gene (YWHAZ) and an exogenous mRNA (α-globin) and results were expressed both in absolute terms and in relation to the endogenous control. Heat treatment upregulated IFNτ mRNA expression, suggesting that detrimental environmental factors may influence IFNτ expression. Heat treatment also caused an increase in HSP70 mRNA expression but did not affect blastocyst morphology, suggesting that the level of stress caused by the heat treatment was great enough to activate the cellular stress response, but mild enough not to cause a change in morphology. In addition, the positive correlation between HSP70 and IFNτ transcript levels and the higher IFNτ expression by embryos which showed signs of degeneration and collapse compared to those which progressed in development suggested that IFNτ expression may be indicative of stress. The relationship between IFNτ expression and secretion in vitro with morphology, pyruvate metabolism, apoptotic index and cell number was inconsistent, suggesting that IFNτ production did not correlate with ‘quality’ (defined as an index of viability). Blastocyst yield, day of blastulation and change in morphology index did account for at least part of the variation in IFNτ production, suggesting that some intrinsic factors may regulate IFNτ secretion. These intrinsic factors, however, did not explain all the variation in IFNτ secretion between blastocysts. Therefore, the amount of IFNτ secreted by bovine blastocysts is modulated by both intrinsic and environmental factors. A model was proposed where different levels of stress affect survivability to different extents, and the ability to respond to mild levels of stress may be indicative of improved survivability.
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Bonavia, Sara. "An in vitro model for the mouse Epiblast to investigate the establishment of the antero-posterior polarity." Thesis, Université de Paris (2019-....), 2019. http://www.theses.fr/2019UNIP7120.
Full textAbstract:
Le développement d'un embryon est une interaction de phénomènes, impliquant des réarrangements morphogénétiques, mouvement collective et différenciation cellulaire. Comment une forme complexe, composée de nombreux tissus différents, résulte d'un pool symétrique de cellules identiques n'est pas encore totalement dévoilé. Dans cette thèse, nous nous intéressons à comprendre l'un des premiers événements qui brise la symétrie de l'embryon et établit une direction dans laquelle les différents tissus du futur corps seront répartis : l'établissement de la polarité antéro-postérieure (A-P), qui marquera le locus où la gastrulation va commencer. La manière dont cet axe est établi a été partiellement élucidée. Nous savons que le processus est contrôlé par des signaux chimiques, morphogènes, sécrétés par certains sous-groupes de cellules du tissu extra-embryonnaire. Les conditions minimales d'observation de la polarité ne sont cependant pas encore claires. Avec ce travail, nous avons l'intention de construire un système synthétique in vitro pour découvrir les ingrédients minimaux pour observer la brisure de symétrie dans une structure symétrique, qui imite l'épiblaste en morphologie et en expression génétique. Nous observons comment ce système réagit sous stimulation homogène avec des morphogènes. Nous comparons les résultats obtenus, à une situation où la symétrie du stimulus est brisée. Pour stimuler les cellules avec un stimulus directionnel, nous faisons recours à la microfluidique : nous avons développé un dispositif qui nous permet de stimuler notre épiblaste synthétique avec un gradient de morphogènes. Notre dispositif d'origine reposait sur un débit continu pour établir un puits et une source parfaits pour maintenir le gradient. Nous avons observé une perte d’expression du gene Nodal que nous n'avons pas observée en stimulant les organoïdes uniformément. Nous émettons l'hypothèse que le débit continu est responsable de l'élimination d'une partie de la signalisation sécrétée par les cellules. En modifiant le dispositif pour induire une stimulation uniforme, mais en produisant un gradient de molécules sécrétées, nous avons pu observer la polarité des organoïdes d'une manière plus cohérente qu'en les stimulant uniformément. Nous concluons que ces expériences suggèrent l'existence d'un mécanisme d'autorégulation dans l'embryon pour établir la polarité, et que ce mécanisme coopère avec d'autres pour assurer la robustesse de la polarisation, et qu'une source localisée de molécules de signalisation pourrait être pertinente pour augmenter la fréquence de l'observation de la polarité des organoides des cellules souches embryonnaires. Nous prévoyons que d'autres études utilisant des gradients statiques permettront de pousser ce résultat plus loin. Enfin, nous proposons un système qui permettrait d'étudier un aspect sous-investi du développement : le rôle du confinement physique. Comme on le voit, l'embryon précoce est confiné par le tissu extra-embryonnaire, lui appliquant une contrainte. Nous suggérons qu'il serait intéressant d'étudier l'aspect confinement, en le dissociant de l'aspect signalisation. Pour ce faire, nous proposons d'adapter une méthode d'encapsulation développée à l'origine pour cultiver des organoïdes de cellules cancéreuses, pour encapsuler des cellules souches embryonnairesThe development of an embryo is an interplay of phenomena, involving morphogenetic rearrangements, collective migration and cell differentiation. How a complex shape, made of many different tissues, arises from a symmetric pool of identical cells is still not fully unveiled. In this thesis, we are interested in understanding one of the first events that breaks the symmetry of the embryo and establishes a direction along which, the different tissues of the future body will be allocated: the establishment of the Antero-Posterior polarity (A-P), that will mark the locus at will gastrulation will start. How this axis is established has been partly elucidated. We know that the process is controlled by some chemical signalling, morphogens, released by some subgroups of cells in the extra-embryonic tissue. The minimal conditions for observing polarity however are still not clear. With this work we intend to build a synthetic in vitro system to find out the minimal ingredients to observe symmetry breaking in a symmetrical structure, that mimics the Epiblast in morphology and gene expression. We observe how this system reacts under homogeneous stimulation with morphogens. We compare the results obtained, to a situation where the symmetry of the stimulus is broken. To feed the cells with a directional stimulus, we make use of microfluidics: we developed a device that allows us to stimulate our synthetic Epiblast with a gradient of morphogens. Our original device was relying on continuous flow to establish a perfect sink and source to maintain the gradient. We observed a loss of Nodal expression that we did not observe when stimulating the organoids in bulk. We hypothesise the continuous flow to be accountable for washing out some secreted signalling downstream of the signal we induce differentiation with. By modifying the device to induce a uniform stimulation, but producing a gradient of secreted molecules, we were able to observe polarity arising in the organoids in a more consistent way than in bulk. We conclude that these experiments hint to the existence of a self-regulated mechanism in the embryo to establish polarity, and that this mechanism co-operate with others to ensure the robustness of the polarisation, and that a localised source of signalling molecules could be relevant to increase the frequency of observation of polarity in Embryonic Stem Cells only organoids. We anticipate that further studies making use of static gradients devices would allow to push this result further. Last, we propose a system that would allow the study of an underinvestigated aspect of development: the role pf physical confinement. As seen, the early embryo is confined by the Extra-embryonic tissue, applying a constraint to it. We suggest that it would be interesting to study the confinement aspect, uncoupling it from the signalling aspect. To do so, we propose to adapt an encapsulation method originally developed to grow cancer cells organoids, to encapsulate Embryonic Stem Cells
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Junior, Antonio Euclides Pereira de Souza. ""Acetato de medroxiprogesterona administrado em período pré-natal induz hipospádia em machos e virilização em fêmeas de camundongos"." Universidade de São Paulo, 2005. http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/5/5153/tde-17022006-105731/.
Full textAbstract:
A fertilização in vitro tem sido associada com um aumento na incidência das hipospádias, e alguns hormônios esteróides usados em seus protocolos têm sido implicados neste processo. Para testar essas hipóteses em um modelo animal, descrevemos neste trabalho as alterações morfológicas ocorridas no tubérculo genital de camundongos, expostos à progesterona durante a vida intrauterina. Foi administrado acetato de medroxiprogesterona por via subcutânea no período pré-natal em animais normais e animais desprovidos de receptores androgênicos (Tfm). A progesterona induziu a formação de hipospádia nos animais do sexo masculino, virilização nos do sexo feminino e não causou alterações nos animais TfmIn vitro fertilization (IVF) has been associated with an increase incidence of hypospadias. IVF protocols require the maternal use of progesterone which may be a factor in causing hypospadias. To test these hypotheses in an animal model, we describe the effects of maternal progesterone exposure on genital development in mice. Medroxyprogesterone acetate (MPA) was administered by subcutaneous injection during the pre-natal period to wild type mice and animals knockout to androgen receptors (Tfm mice). Progesterone caused hypospadias in male mice fetuses, a virilizing effect in the female mice genitalia and didn't have any effect in Tfm animals
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Leroux, Benoît. "Approches cytologique et pharmacologique de la levée des effets inhibiteurs exercés par l'éthylène sur l'embryogenèse de microspores isolées de colza et de chou-fleur." Rennes 1, 2007. http://www.theses.fr/2007REN1S074.
Full textAbstract:
L’obtention d’embryons à partir de microspores isolées de chou-fleur nécessite l’application d’un choc hyperthermique. Ce traitement s’avérant souvent insuffisant, nous avons postulé que l’embryogenèse était inhibée par une hormone de stress : l’éthylène. Des études cytologiques et pharmacologiques ont été réalisées pour appréhender l’effet de l’éthylène sur l’évolution des microspores de la variété Topas de colza. Il se confirme que les faibles réactivités sont liées à une surproduction d’éthylène. Dans ce cas, l’ajout au milieu de culture d’inhibiteurs de la biosynthèse de l’éthylène restaure l’embryogenèse. La transposition de cette approche aux microspores de génotypes récalcitrants de chou-fleur confirme le fait que ce caractère résulte au moins pour une part d’une surproduction d’éthylène qui peut être maîtrisée. Les inhibiteurs de l’éthylène semblent donc pouvoir trouver des applications dans l’optimisation de la production d’haploïdes doublés chez le chou-fleurTo obtain embryos from isolated microspores of cauliflower it is necessary to apply them a heat shock. However, in some instances this treatment is not found to be effective. We have hypothesized that embryogenesis could be inhibited by production in excess of the stress-hormone ethylene. Cytological and pharmacological studies have been developed to assess the involvement of ethylene in the control of development in microspores from the rape variety Topas. We demonstrated that weak reactivity of microspores was related with high ability to produce ethylene. This could be reversed through addition in culture media of ethylene biosynthesis inhibitors. The transposition of this approach to non-responsive microspores of cauliflower supported the inference that restricted embryogenesis is partly due to over-production of ethylene which can be counteracted. This indicated that the use of ethylene inhibitors could lead to relevant applications in production of doubled haploids of cauliflower
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Beldjabri, Nacéra. "Culture in vitro chez diverses plantes florales (Lisianthus, pétunia, tabac et pervenche de Madagascar) dans le but d'embryogenèse somatique : obtention de cals et de régénérations." Vandoeuvre-les-Nancy, INPL, 1997. http://www.theses.fr/1997INPL116N.
Full textAbstract:
Dans ce travail, l'embryogenèse somatique a été tentée chez différentes espèces florales : le Lisianthus (Eustoma grandiflorum) le pétunia (Petunia hybrida), le tabac (Nicotiana glutinosa et Nicotiana langsdorfii) et la pervenche de Madagascar (Catharanthus roseus). Les expérimentations ont consisté en la culture in vitro de différents organes : anthères, ovaires, fragments de feuilles, fragments d'entre-nœuds et de pédoncules floraux de chacune des espèces étudiées. Les essais réalisés ont porté sur l'influence du prétraitement au froid, de la composition du milieu de culture, de la taille des boutons à mettre en culture et de la lumière et de l'obscurité. Outre l'obtention d'un embryon somatique issu d'une anthère de Lisianthus, des résultats intéressants et reproductibles de callogenèse et de régénération de plantes sont apparus à partir de tous les organes mis en culture chez le Lisianthus, le pétunia et le tabac. Les réponses des différentes espèces vis-à-vis des facteurs d'études en termes de callogenèse et de régénération, sont fonction de l'organe mis en culture et du stade de développement de chacun des éléments utilisés.
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Kandil, Mostafa. "Hérédité épigénique de vitro-variants obtenus par haplodiploïdisation chez l'Orge (Hordeum Vulgare) : analyse des croisements diallèles et de leurs descendances par autofécondation." Vandoeuvre-les-Nancy, INPL, 1990. http://www.theses.fr/1990INPL058N.
Full textAbstract:
Ce travail porte sur les impacts de l'haploïdisation par culture in vitro androgenèse et gynogenèse chez Hordeum Vulgare. Après quatre générations d'autofécondation des haplodiploïdes variants et du témoin, Les études biométriques du végétal et les analyses biochimiques du grain, montrent que la variabilité observée, après culture in vitro, est transmise d'une génération à l'autre de façon stable génétiquement. Après croisement diallèle, entre haplodiploïdes et avec le témoin, les données biométriques sont traitées par le modèle de GRIFFING. Outre les forts effets d'AGC, exprimant la transmissibilité héréditaire des caractères marquants, il apparait des effets d'intéraction très nets dans certains cas (ASC significative). Par ailleurs il faut signaler des dissymétries de transmission, ARG et ARS significatives. Les comparaisons des moyennes amènent à des effets maternels, paternels et de transgression. Cette étude est suivie de l'autofécondation des produits de croisements. L'homogénéité génétique de ces descendances permet d'éliminer toute hypothèse d'hétérozygotie due à une double mutation chez les parents variants. Cet ensemble amène à proposer l'intervention d'un système héréditaire, dit épigènique qui ne ségrégue pas. La dernière partie fait l'objet de l'application de notions relatives à la variabilité liée à la culture in vitro, dans le cadre d'une contribution à la création in vitro d'Orge (marocaines) résistantes au sel en exerçant des pressions de sélection par le chlorure de sodium sur des cals issues de culture du gamétophyte mâle
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Mezzarobba, Antoine. "L'androgénèse "in vitro" chez le tournesol cultivé (Helianthus annuus L. )." Montpellier 2, 1988. http://www.theses.fr/1988MON20057.
Full textAbstract:
L'isolement in vitro d'antheres de tournesol cultive (helianthus annuus l. ) a un stade jeune du developpement de la microspore, a permis d'obtenir des embryons a des frequences elevees. Un traitement thermique a 35#oc et a l'obscurite pendant les 12 premiers jours de culture des antheres, augmente significativement le rendement en embryons. Le developpement de ces embryons a fourni des plantes diploides, haploides et mixoploides. . .
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Wongtiem, Prapit. "Propagation of Cassava (Manihot esculenta Crantz) by somatic embryogenesis." Angers, 2011. http://www.theses.fr/2011ANGE0072.
Full textAbstract:
La culture du manioc est l'une des plus importantes en Thaïlande. L'évolution de la demande en amidon, en aliments pour animaux et en biocarburant nécessitera une augmentation annuelle de 4 à 6 millions de tonnes de racines. Une augmentation de la production peut être obtenue par la diffusion de clones sélectionnés. Celle-ci est limitée par la méthode de propagation traditionnelle. La propagation en masse par embryogenèse somatique (ES) est une méthode prometteuse pour accélérer la diffusion des clones chez les fermiers. Ce travail avait pour but de mettre en place trois procédés d' ES (embryogenèse primaire, secondaire et indirecte) pour cinq clones thaïlandais : R5, R7, R9, R72, R90. Le clone R9 a été sélectionné récemment pour la production d'éthanol. Des embryons primaires ont été obtenus pour deux clones (R9 et R90). Des cultures d'ES secondaires (cycliques) ont été établies en milieux solide et liquide pour le clone R9. . . . .Cassava is one of the most important economic crops in Thailand. The increase demand for starch, animal feed and carburant ethanol will require an addition 4-6 million tons of fresh roots every year. A short term increase in production can be obtained from the dissemination of new clones with higher productivities. However, the diffusion rate of selected clones is limited by the traditional vegetative propagation method of this crop. Mass propagation by somatic embryogenesis (SE) can be a very promising technique to faster their diffusion to the farmers. This work aimed to establish different SE processes (primary, secondary and indirect SE) for five cassava clones selected by the Rayong Field Crops Research Center : R5, R7, R9, R72, R90. R9 has recently been selected for its suitability to produce ethanol. Primary somatic embryos were obtained from foliar explants for two clones (R9 and R90). Secondary SE cultures, also called cyclic, were established on solid and liquid media for the clone R9. . .
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Alissa, Abdelrahman Asad. "Application de la culture "in vitro" à l'amélioration du tournesol Helianthus annuus." Montpellier 2, 1986. http://www.theses.fr/1986MON20038.
Full textAbstract:
L'androgenese in vitro a permis pour la premiere fois l'obtention des plantes viables soit directement par embryogenese, soit indirectement par passage par le stade intermediaire de cals organogeneses chez certaines especes sauvasges d'helianthus: h resinosus, h. Tuberosus h. Rigidus rigidus et h. Accidentalus plantatineus et leurs hybrides interspecifiques avec le tournesol cultive (h. Annuus l. ). Le comptage chromosomique chez les plantes obtenues in vitro permet de distinguer des plantes haploides et aneuploides. La culture in vitro d'embryons immatures chez le tournesol cultive (h. Annuus l. ) et les 2 especes sauvages h. Anomalus, h. Resinosus, permet de lever la dormance et d'assurer ainsi 5 generations par an, ce qui conduit a la fixation rapide des lignees
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Garret-Reolon, Sophie. "Etude des signaux induits lors de la locomotion des cellules de crêtes neurales aviaires in vitro." Paris 5, 1997. http://www.theses.fr/1997PA05S015.
Full textAbstract:
La locomotion cellulaire est un évènement intervenant dans de nombreux processus biologiques, notamment dans le développement embryonnaire. Jusqu'à présent, les différentes études menées in vitro pour comprendre les mécanismes du déplacement ont mis en évidence les intervenants de la migration dont les intégrines. Ces récepteurs membranaires aux molécules de la matrice extracellulaire forment un lien physique entre la cellule et son support mais elles sont également capables de traduire des signaux vers le cytoplasme. Nous avons étudié les signaux induits lors de la locomotion des cellules de crêtes neurales in vitro. Ces cellules constituent une population cellulaire de l'embryon à l'origine de nombreux types cellulaires chez l'adulte. Nous avons caractérisé ces signaux et déterminé leur importance relative en perturbant les voies de transduction de ces signaux par l'addition d'agents métaboliques spécifiques. L'utilisation de la technique de videomicroscopie appliquée à des tests fonctionnels nous a permis d'observer les effets sur la dynamique de locomotion. Nous mettons en évidence une multiplicité des signaux impliques dans la migration des cellules de crêtes neurales de caille. Les protéines kinases des tyrosines, la voie calcique, les kinases c et les phosphatases semblent essentielles pour la migration des cellules de crêtes neurales. Le signal calcique pourrait être implique dans l'adressage des intégrines dans les plaques d'adhérence. Dans une deuxième partie, après avoir recensé ces signaux, nous avons débuté la caractérisation de leurs cibles. Nous avons montré qu'il existe des changements importants dans la répartition des protéines présentes dans les plaques d'adhérence ainsi que dans la quantité totale de certaines d'entre elles. La taline semble notamment une composante essentielle pour l'établissement des plaques d'adhérence.
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Pedeboscq, Stéphane. "Etude in vitro des effets cytotoxiques et apoptotiques induits par divers agents anticancéreux sur cultures cellulaires de glioblastomes humains." Bordeaux 2, 2007. http://www.theses.fr/2007BOR21493.
Full textAbstract:
Le glioblastome est la tumeur maligne la plus agressive du SNC, avec une médiane de survie d'environ 1 an. Malgré les progrès des techniques chirurgicales et le développement de nouveaux protocoles de radio- et chimiothérapie, le pronostic reste très sombre : de nouvelles stratégies thérapeutiques sont donc nécessaires. En conséquence, nous avons développé un modèle in vitro capable d'évaluer l'effet d'agents anticancéreux sur des primocultures de cellules obtenues à partir de patients atteints de glioblastome. Les anticancéreux restés proviennent de différentes classes pharmacologiques : alkylants (témozolomide, carboplatine, BCNU), anti-EGFR (geftinib) et inhibiteur du protéasome (bortezomib). L'effet cytotoxique des anticancéreux a été évalué par un test de viabilité cellulaire au MTT. L'induction d'apoptose a été mesurée par cytométrie de flux à l'aide de la sonde fluorescente TMRM. L'expression de EGFR et bcl-2 a été déterminée par western blot. Sur la lignée DBTRG05-MG surexprimant ZGFR, les résultats montrent une augmentation de la cytotoxicité du ténozolomide et du carboplatine par l'addition de geftinib. Ceci n'est pas observé sur la lignée U87-MG, n'exprimant pas RGFR. Le bortezomib montre une importante toxicité à très faible concentration sur les 2 lignées. Le modèle de culture primaire a permis de montrer les différences interindividuelles vis à vis des anticancéreux testés, et d'évaluer l'effet de nouvelles molécules. Des corrélations ont été établies entre résultats in vitro et efficacité clinique. Enfin, la détermination d'EGFR et bcl-2 sur chaque primoculture a permis de déterminer un profil de bon ou mauvais répondeurGlioblastoma multiforme is a malignant astrocytic tumor with median survival of about 12 months. Despite advances in surgical techniques and in the development of new protocols in radio- and chemotherapy, the prognosis remains poor and new therapeutic strategies are required. Therefore, we developed an in vitro model able to evaluate anticancer drug toxicity on cells obtained from individual glioblastoma patients. Anticancer agents tested were from different pharmacological classes alkylating agents (temozolomide, carboplatin and BCNU), tyrosine kinase inhibitor of EGFR (geftinib) and proteasome inhibitor (bortezomib). A cytotoxicity test using MTT was used to evaluate in vitro drug efficacy. Apoptosis was measured by flow cytometry using a fluorescent probe TMRM. EGFR and bcl-2 expressions were determined by a western blotting technique. On glioblastoma DBTRG05-MG cell line expressing high levels of EGFR, our results show a potentiation of temozolomide and carboplatin cytotoxity by the anti-EGFR grftinib. This is not observed on U87-MG cell line which do not express EGFR. Bortezomib shows a great toxicity on the two cell lines, at very low concentrations. The primary culture model permits to determine individual response for each patient, shows interindividual differences between patients and allow us to evaluate the in vitro efficacy of new molecules. Then, we could establish a correlation between the in vitro data determined with our study model and the clinical efficacy evaluated in the patient file. EGFR and bcl-2 status were assessed on each primoculture leading us to determinz a good and bad responder profile
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Flores, Berrios Ericka Patricia. "Contrôle génétique de la régénération in vitro chez le tournesol (Helianthus annuus L. ) et identification des régions chromosomiqus impliquées." Toulouse, INPT, 1999. http://www.theses.fr/1999INPT014A.
Full textAbstract:
L'objectif de cette etude est d'identifier les facteurs genetiques controlant la regeneration in vitro chez le tournesol. L'aptitude a la regeneration d'un ensemble de lignees recombinantes et leurs parents ( pac-2 et rha-266 ) a ete teste par : l'organogenese, l'embryogenese somatique et la culture de protoplastes. Le dispositif experimental un essai en blocs randomises avec trois repetitions. Une importante variabilite genetique a ete observee chez les lignees recombinantes pour tous les caracteres etudies. Une comparaison entre des meilleures lignees recombinantes (10%) et le meilleur parent present un gain genetique significatif. Le taux d'heritabilite, au sens strict, pour chaque parametre varie entre 40 et 70%. Le marquage moleculaire par aflp, effectue sur un ensemble de quatre-vingt-onze lignees recombinantes et leurs parents a permis de construire une carte genetique comprenant 18 groupes de liaison et 254 marqueurs. Des regions chromosomiques ayant un effet majeur sur l'organogenese, l'embryogenese somatique et la culture de protoplastes ont ete identifiees dans les groupes de liaison vii et ix. Chaque qtl represente une large part de la variance genetique, qui est superieur a 40%. Ce phenomene s'explique par la presence d'un seul locus affectant la totalite des caracteres ou par la presence de differents loci etroitement lies. Il est possible que ces regions comportent des genes impliques dans l'aptitude a la regeneration. La region limitee par les marqueurs catc15-gctt5 a un effet important sur la reponse a l'organogenese et a l'embryogenese somatique. Un gene majeur, implique dans la formation de bourgeons et dans l'initiation du developpement de cellules embryogenes, pourrait etre positionne dans cette region. Les qtls communs dans les groupes de liaison vii et ix sembleraient etre impliques dans le processus de la division cellulaire. Des analyses complementaires sont necessaires pour identifier les genes controlant l'aptitude a la regeneration chez le tournesol. L'integration de marqueurs supplementaires a la carte que nous proposons permettra de mieux preciser les regions identifiees et d'envisager le transfert de l'aptitude a la regeneration a des genotypes consideres comme recalcitrants.
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Zhong, Danni. "Culture "in vitro" d'anthères et de microspores isolées de tournesol cultivé (Helianthus annuus L. )." Montpellier 2, 1992. http://www.theses.fr/1992MON20265.
Full textAbstract:
Deux methodes d'androgenese ont ete etudiees chez le tournesol cultive: culture in vitro d'antheres et de microspores isolees. Dans la culture in vitro d'antheres, l'incorporation du pvp insoluble ou de la cysteine a permis d'ameliorer le potentiel embryogene des antheres. Une relation inverse entre le brunissement enzymatique et les activites ppo et po d'un cote et le potentiel embryogene de l'autre a ete etablie. Les transferts successifs des embryons obtenus sur le milieu de regeneration contenant du saccharose en concentrations decroissantes a permis d'augmenter de facon significative le pourcentage de plantes regenerees. Les etudes histologiques ont demontre que les embryons obtenus ont essentiellement une origine somatique. Dans la culture de microspores isolees, les processus d'isolement et de purification ont ete mis au point. Des poils pluricellulaires, obtenus lors du broyage des antheres peuvent se diviser et donner des cals et representent donc une reactivite parasite lors de la culture des microspores. Dans les meilleures conditions actuelles, apres 3 semaines de culture, 0,3 a 0,5% des microspores peuvent se diviser et se developper jusqu'a un stade de proembryon
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Auboiron, Erik. "Influence des caractéristiques de l'atmosphère (gaz carbonique, éthylène, eau) et de la disponibilité en eau du milieu sur les cultures "in vitro" d'"Hevea brasiliensis"." Montpellier 2, 1991. http://www.theses.fr/1991MON20106.
Full textAbstract:
L'atmosphere influe sur l'embryogenese somatique et le microbouturage de l'hevea. Le confinement est stimulateur du debourrement alors que l'aeration est plus favorable pour le developpement des pousses ainsi que pour l'induction de l'embryogenese. Le gaz carbonique n'a pas d'influence majeure. L'ethylene inhibe l'induction de l'embryogenese, le developpement des pousses, l'expression de l'enracinement mais stimule une etape d'induction de la rhizogenese. Il n'agit pas sur le debourrement caulinaire. Le nitrate d'argent, inhibiteur des effets de l'ethylene, est aussi stimulateur de sa synthese. L'embryogenese est stimulee pour les taux d'humidite relative situes entre 92 et 97 pour cent. Le milieu liquide sur motte cellulosique sorbarod, utilise sur une sequence de culture, est tres favorable. L'agar double la concentration en na du milieu initial alors que la motte double celle de ca. En milieu liquide, na, p, mg, fe, mn et zn sont moins consommes. En immersion temporaire, le debourrement est fortement stimule mais l'allongement n'est possible que si les regulateurs de croissance sont dilues ou le saccharose concentre. La teneur en saccharose des milieux est positivement correlee avec l'allongement et inversement avec le debourrement. Quelques pousses presentent des zones de lyses contenant du materiel cellulaire en degenerescence et du caoutchouc
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Bardoul, Michèle. "Récepteurs AMPA et kai͏̈nate précoces dans le tronc cérébral embryonnaire : effets de leur blocage ou de leur stimulation "in vitro"." Montpellier 2, 1997. http://www.theses.fr/1997MON20177.
Full textAbstract:
L'expression de recepteurs fonctionnels -amino-3-hydroxy-5-methyl-isoxazole-propionate (ampa)/kainate a des stades precoces du developpement du systeme nerveux central (snc) souleve la question de leur role au cours de l'embryogenese. Nous avons d'abord analyse, chez le rat, les effets du blocage ou de la stimulation des recepteurs ampa/kainate sur des cellules dissociees de rhombencephale en culture, modele qui facilite le controle des parametres experimentaux. L'exposition a des antagonistes (competitifs aussi bien que non competitifs) provoque une mort cellulaire importante si le traitement a lieu pendant les premiers jours in vitro (jiv). En revanche, l'application de kainate ou de trifluoromethyl-ampa n'entraine des pertes cellulaires neuronales que si elle est plus tardive. L'exposition precoce aux agonistes modifie le niveau d'activite des recepteurs permeables aux cations divalents sans affecter la survie cellulaire. Le deficit en neurones (mais pas en cellules gliales) observe dans les cultures traitees est du essentiellement a une forte augmentation de la mort cellulaire (en partie de type apoptotique) et non a une baisse de la proliferation. Un deuxieme modele (cultures de tranches de rhombencephale et de moelle epiniere d'embryons de rat de 13 et 14 jours) a confirme la sensibilite des cellules embryonnaires au blocage ou a la stimulation des recepteurs. Ensemble, ces donnees suggerent que les cellules neurales dotees de recepteurs ampa/kainate, et peut-etre secondairement d'autres cellules, necessitent un niveau approprie d'activation de ces recepteurs pour leur survie et leur maturation. Nous avons pu constater que des recepteurs ampa/kainate fonctionnels existent chez l'homme a des stades embryonnaires. La consommation maternelle de substances susceptibles d'alterer l'activite de ces recepteurs pourrait perturber la formation du snc, si ces substances traversent la barriere placentaire.
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Mentewab, Ayalew. "Androgénèse in vitro chez le blé : utilisation pour la transformation génétique et l'amélioration de la résistance au stress hydrique." Toulouse, INPT, 1998. http://www.theses.fr/1998INPT001A.
Full textAbstract:
L'androgenese permet de produire des plantes haploides doublees (hd) apres obtention des plantes haploides et doublement de leur stock chromosomique. L'origine haploide et unicellulaire des microspores en font une cible de choix pour la transformation genetique. Le travail realise a pour objectif l'utilisation de l'androgenese pour l'amelioration des bles par deux voies : la transformation genetique et l'obtention de plantes hd resistantes a la secheresse. Dans une premiere partie, nous avons examine l'effet des facteurs externes conditionnant l'embryogenese et l'obtention de plantes hd aussi bien par culture d'antheres que par culture de microspores isolees chez le ble dur et le ble tendre. Nos travaux ont permis de demontrer les resultats suivants : -le pretraitement au froid a un effet negatif sur la production d'embryons chez les genotypes utilises dans notre experimentation. -le traitement a la colchicine sur embryons in vitro (500 mg/l) pendant 1 ou 3 jours permet d'atteindre des taux de doublement chromosomique eleves, mais diminue fortement la regeneration des embryons formes. -une concentration elevee de maltose (135 g/l) dans le milieu d'induction diminue la production d'embryons a partir de microspores isolees de ble. -en l'absence de pretraitement (thermique ou nutritionnel), une centrifugation sur gradient de ficoll n'a pas d'effet sur l'embryogenese a partir des microspores isolees. -il existe une interaction genotype-ovaires lors de la culture de microspores isolees. En tenant compte des resultats obtenus, nous avons, dans une deuxieme partie, procede a la transformation genetique, par biolistique. Des embryons haploides et des microspores isolees de ble ont ete bombardes, en utilisant comme marqueurs, les genes c1 et b-peru stimulant la biosynthese des anthocyanines. Une expression transitoire a ete mise en evidence au niveau des microspores bombardees apres un ou huit jours de culture. Le bombardement n'a eu aucun effet sur la regeneration des embryons androgenetiques et des plantes chimeriques ont ete obtenues. L'etude de 60 lignees hd obtenues a partir des plantes f1 provenant du croisement entre les deux genotypes pavon et siete cerros, resistantes et sensibles a la secheresse montre l'existence de lignees transgressives, presentant des caracteres agronomiques et physiologiques de resistance au stress hydrique, meilleurs que ceux de leur deux parents.
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Ahmad, Nazem. "La cinetique cellulaire de la premiere molaire inferieure de l'embryon de souris in vivo et in vitro." Université Louis Pasteur (Strasbourg) (1971-2008), 1988. http://www.theses.fr/1988STR13045.
Full text
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Verna, Jean-Marc. "Analyse "in vitro" de l'innervation sélective du derme et de l'épiderme chez l'embryon de poulet : rôle de divers facteurs d'origine matricielle et cellulaire." Grenoble 1, 1987. http://www.theses.fr/1987GRE10023.
Full text
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Peyrot, Elisabeth. "La concrête de fleurs du jasmin des Açores (Jasminum azoricum L. ). Recherches pour l'obtention "in vitro" de jasmins résistants au pourridié." Montpellier 2, 1993. http://www.theses.fr/1993MON20072.
Full textAbstract:
Lors de l'etude botanique de quatre especes de jasmins (jasminum officinale, jasminum azoricum, jasminum grandiflorum et jasminum sambac), l'observation micrographique de poudres de feuilles montre la presence de poils tecteurs et secreteurs. Les caracteristiques des poils tecteurs peuvent constituer un critere de distinction entre les 4 especes. De plus, l'examen microscopique de prelevements de petales a permis d'observer des gouttelettes refringentes supposees contenir des huiles essentielles. L'analyse cg et cg/sm de la concrete de fleurs du jasmin des acores (j. Azoricum) a permis l'identification d'une quarantaine de composes. Deux alcools terpeniques sont particulierement abondants: le farnesol et le geranyllinalol. La composition qualitative de la concrete de j. Azoricum est differente de celles de j. Grandiflorum et j. Sambac d'une part, et de l'huile essentielle de ses propres feuilles d'autre part. L'evolution de la qualite de la concrete est etudiee lors de l'epanouissement de la fleur et durant toute la vie de la fleur. Une autre partie de ce travail est consacree a l'obtention de plants de jasmins resistants a une maladie des racines, le pourridie, provoquee par un champignon (rosellinia necatrix). Ce champignon produit une toxine, la cytochalasine e. Apres la mise au point du dosage par h. P. L. C. De la cytochalasine dans des extraits de mycelium, plusieurs modes de culture sont testes en vue de la recuperation d'extraits fongiques toxiques necessaires a la selection de cals resistants. Parallelement, la regeneration de plants de jasminum officinale et jasminum azoricum a partir de cals est recherchee par organogenese et embryogenese somatique. Les potentialites embryogenes des cals sont mises en evidence par une etude cytologique
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Charpentier, Gilles. "Etude d'un facteur testiculaire qui perturbe le developpement de l'ovaire du foetus de rat, in vitro." Paris 7, 1988. http://www.theses.fr/1988PA077032.
Full text
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Robert, Joe͏̈lle. "Influence de divers constituants de la matrice extracellulaire sur le comportement de cellules dermiques d'embryon de poulet cultivées in vitro." Grenoble 1, 1988. http://www.theses.fr/1988GRE10110.
Full text
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Fremont, Patrick. "Differenciation en culture in vitro de myoblastes d'ebauches musculaires lentes et rapides de l'embryon d'oiseau : influence de l'innervation et de l'activite mecanique." Nantes, 1987. http://www.theses.fr/1987NANT2028.
Full text
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PAPASEIT, CYRIL. "Formation de motifs microtubulaires in vitro et dans l'embryon de drosophile par des processus dissipatifs de type réaction-diffusion." Université Joseph Fourier (Grenoble), 1998. http://www.theses.fr/1998GRE10190.
Full textAbstract:
Les processus physico-chimiques de reaction-diffusion ont ete proposes par turing comme une explication possible de l'auto-organisation et de la morphogenese biologique. La theorie prevoit que des systemes chimiques ou biochimiques loin de l'equilibre thermodynamique peuvent former des structures complexes a partir d'un etat initialement homogene. Les processus impliques sont non-lineaires, irreversibles, et consomment continuellement de l'energie. Dans certaines conditions, des solutions de microtubules in vitro se comportent ainsi. La prediction principale de cette theorie consiste en ce que les motifs doivent etre constitues de differences de concentration en reactifs. Dans cette these nous montrons que les motifs macroscopiques stries formes spontanement par les microtubules in vitro, contiennent des variations periodiques dans la concentration en microtubules. Les techniques employees sont la diffusion des neutrons aux petits angles et la fluorescence. C'est la premiere demonstration experimentale de la formation de structures de turing dans un systeme biologique in vitro. Reprenant l'idee initiale de turing, nous nous sommes demandes si ces processus peuvent se produire in vivo pendant l'embryogenese. Un motif microtubulaire strie, mis en evidence par immunofluorescence, apparait dans l'uf de la mouche drosophile au moment de la gastrulation. Une caracteristique des motifs formes par des processus de reaction-diffusion est leur sensibilite aux dimensions de l'echantillon. Nous avons trouve que le motif microtubulaire forme dans des ufs ligatures varie avec la longueur du fragment de la meme maniere que celui apparaissant in vitro dans des recipients de longueurs differentes. Ces resultats sont egalement en accord avec la theorie et apportent un element de preuve que les processus de reaction-diffusion peuvent se produire pendant l'embryogenese de la drosophile. Enfin, la comparaison du motif microtubulaire avec le motif d'expression d'un gene reconnu jouer un role dans la segmentation, suggere qu'il pourrait exister un lien entre les deux systemes.
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SUIGNARD, KHASKIYE GISELE. "Contribution a l'etude des modifications des proprietes fonctionnelles affectant les cardiomyoblastes isoles en culture in vitro et des mecanismes d'action de l'acetylcholine sur le myocarde embryonnaire de poulet." Nantes, 1987. http://www.theses.fr/1987NANT2026.
Full text
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HANTAZ-AMBROISE, DJENNET. "Differenciation des cellules de la moelle epiniere de rat in vitro : regulation de la croissance neuritique et de la maturation des cellules gliales." Paris 6, 1988. http://www.theses.fr/1988PA066653.
Full textAbstract:
L'etude in vitro de cellules neuronales obtenues a partir de cellules primaires de moelle epiniere d'embryons de rat de 14 jours a permis de montrer l'influence, sur la croissance des neurites, de plusieurs facteurs extracellulaires. Les resultats montrent que les neurones spinaux sont capables de repondre a ces differents facteurs par induction de plusieurs formes de croissance neuritique. Les cellules non neuronales jouent un role dans la regulation de ces differentes formes de croissance des neurites
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Chiwocha, Sheila. "Douglas fir megagametophyte development in situ and in vitro." Thesis, 2004. https://dspace.library.uvic.ca//handle/1828/9049.
Full textAbstract:
Megagametophyte development in situ and in vitro was investigated in Douglas fir to address the following questions: (1) Do endogenous levels of plant hormones change during megagametophyte development and are they associated with morphological changes? (2) Can megagametophytes be cultured prior to fertilization? (3) Can embryos be rescued from megagametophytes cultured soon after fertilization?
A histochemical study of storage reserve deposition during megagametophyte development was performed with material isolated weekly for 11 weeks. Prior to fertilization, starch was detected in the neck cells of megagametophytes analyzed 9 weeks after pollination (WAP). During embryogenesis, starch was deposited in the central region of megagametophytes. Proteins and lipids were first detected in the prothallial cells in the periphery of megagametophytes isolated 14 and 15 WAP, respectively. With further development, starch was deposited in prothallial cells around the corrosion cavity, while proteins and lipids were spatially localized to prothallial cells in the periphery. In the embryo, starch accumulation was preferentially localized in the root cap and the embryonal suspensor cells at 17 WAP.
A parallel study quantifying the endogenous levels of plant hormones: IAA, IAAsp, Z, ZR, iP, IPA, ABA and ABA-GE, in megagametophytes was performed. Hormones were extracted, purified and fractionated using HPLC. To correct for losses due to procedures, radiolabelled standards were added prior to extraction. The hormones were quantified using an ELISA method. On a dry weight basis, Z levels were highest in megagametophytes at the late central cell stage (8 WAP). During embryogenesis, Z levels peaked during week 13. ZR peaked twice at 13 and 17 WAP. The iP content of megagametophytes increased at 10, 13 and 17 WAP while iP.A concentration increased at 13 and 17 WAP. Prior to fertilization, the free LAA was highest in megagametophytes at 9 WAP. During embryogenesis, the major lA A accumulations occurred at I I ,13 and 15 WAP. lAAsp concentrations reached their highest levels at 10, 14 and 18 WAP. ABA content increased at 11, 13 and 17 WAP. In contrast, ABA-GE levels were relatively constant over the 11 weeks analyzed.
Megagametophytes were isolated weekly from 7–10 WAP and cultured on a modified half-strength Litvay's medium supplemented with one of three auxins (NAA, IBA or 2,4-D) and a cytokinin (2 mg/L BAP). Each auxin was tested at three levels: 0.1, 1.0 or 10 mg/L. The objective was to determine whether the megagametophytes would continue to grow in culture. Megagametophytes increased in length after 9 and 18 days of culture. Auxin and cytokinin supplements had a significant effect on growth for material isolated 7 or 10 WAP. However, the viability of the archegonia rapidly declined on all the media tested. The most optimal treatment for each auxin type (BAP in combination with 0.1 mg/L NAA. 1.0 mg/L IBA or 1.0 mg/L 2.4-D) was used to initially culture pollinated megagametophytes in the embryo rescue experiment. After 21 days, megagametophytes were transferred to media containing ABA concentrations of 0.5, 20 or 40 μM. A majority of the rescued embryos were developmentally arrested at the globular stage. Only three embryos, containing over 30 cotyledons each, matured on ABA concentrations of 5, 20 or 40 μM.
In conclusion, the prothallial cells of the pre-fertilization megagametophytes could be cultured for long periods and their growth was not dependent on the presence of viable archegonia. The endogenous levels of plant hormones varied with megagametophyte development and were associated with morphological changes. This information has implications for growing megagametophytes for in vitro fertilization and embryo rescue experiments. The endogenous levels of plant hormones could be used to design culture media for rescuing embryos resulting from in vitro fertilization in Douglas fir.Graduate