Academic literature on the topic 'Herpèsvirus équin de type 1'

Les infections des ruminants sauvages par les herpèsvirus sont passées en revue : les infections par le virus de la thélite herpétique bovine, les formes européenne et africaine du coryza gangréneux et les infections par le virus de la maladie d’Aujeszky, l’herpèsvirus caprin 1 et l’herpèsvirus équin 1. Le spectre de réceptivité de chaque herpèsvirus est détaillé, ainsi que les relations biologiques qu’ils entretiennent avec les espèces de ruminants sensibles.

Cette revue présente les infections des ruminants sauvages par cinq herpèsvirus antigéniquement apparentés : le virus de la rhinotrachéite infectieuse bovine (bovine herpesvirus 1), l’herpèsvirus de la chèvre (caprine herpesvirus 2), l’herpèsvirus de type 1 des cervidés et les herpèsvirus isolés chez le renne (Rangifer tarandus) et le buffle de l’Inde (Bubalus arnee). Le spectre de réceptivité de chaque herpèsvirus est détaillé, ainsi que les relations biologiques qu’ils entretiennent avec les espèces de ruminants sensibles.

Les auteurs ont étudié de 1990 à 1995 des maladies virales du cheval au Pantanal, Brésil, et rapportent pour la première fois la présence de maladies virales respiratoires. La séropositivité pour l’adénovirus équin était de 42 % et concernait principalement les animaux âgés de moins de 3 ans (61,9 %). Vis-à-vis de l’herpèsvirus équin de type 1 (EHV-1), elle était de 36 % (parmi les animaux séropositifs, 50 % étaient des poulains et 22,2 % des juments). La séropositivité observée pour EHV-1/respiratoire était de 58 %. Parmi les rhinovirus équins, seul le rhinovirus équin de type 1 (ERV-1) a été étudié lors de l’enquête. La séropositivité pour ERV-1 était de 18 p. 100. Les poulains âgés de 1 à deux ans (22,2 %) ont présenté un titre de 1/5. Des titres de 1/10 à 1/20 n’ont été observés que chez des animaux âgés de plus de cinq ans. Les réactions positives vis-à-vis du virus influenza A/Equine/2/Miami était de 30 %. Les poulains représentaient 40 % et les juments 28,6 % de tous les animaux séropositifs. La séropositivité pour l’influenza virus A/Equine/2/Fontainebleau était de 42 %. Les poulains et les juments totalisaient 86 % (43 % dans chaque groupe) des animaux séropositifs. Dans l’étude concernant l’anémie infectieuse du cheval, la prévalence observée était de 24,8 %. La séropositivité était de 14,3 % chez les mâles et de 10,6 % chez les femelles. Dans l’enquête sur les arboviroses, des anticorps neutralisants ont été observés pour les virus de l’encéphalite équine de l’est (6,7 %), de l’encéphalite équine de l’ouest (1,2 %), le flavivirus Ilheus (26,6 %), et les bunyavirus de Maguari (28,2 %) et de Tacaiuma (15,7 %). Aucun cas d’arté- rite virale équine n’a été détecté dans la région. Au Pantanal, à l’exception des arboviroses, tous les virus équins sont apparemment contractés quand de jeunes chevaux sont mis en contact avec des chevaux plus âgés, ou suite aux pratiques d’élevage locales.

Les virus influenza équin (EIV) et herpèsvirus équin-1 (EHV-1) sont fréquemment décrits dans de nombreux pays et sont deux pathogènes endémiques au sein de la population équine française. Ces maladies infectieuses ont d’importantes conséquences aussi bien au niveau santé et bien-être animal qu’en terme d’impact économique. La lutte contre ces virus repose essentiellement sur la mise en place de mesures préventives telles que la vaccination. Malgré cela, les épizooties d’EIV et d’EHV-1 sont régulièrement observées en France et dans le monde. Les anticorps neutralisants, synthétisés en réponse à l’infection ou après immunisation, représentent une ligne de défense majeure. L’amélioration des vaccins et l’enrichissement du panel d’outils de mesure des anticorps neutralisants peuvent constituer un apport stratégique dans la lutte contre ces virus. Afin d’améliorer l’efficacité de la réponse vaccinale en amplitude et dans le temps, l’utilisation d’adjuvants constitue une des voies de recherche prometteuse. Ce travail de thèse a consisté, dans un premier temps, à établir la preuve de concept de l’utilisation de l’iPPVO en tant qu’adjuvant innovant in vivo chez le cheval dans le cadre de la vaccination contre l’EIV. Pour cela, les anticorps ont été mesurés par SRH, méthode pour laquelle des corrélats de protection sont associés au taux d’anticorps mesuré. L’ajout d’iPPVO lors de la vaccination a permis d’augmenter significativement le niveau d’anticorps contre l’EIV ainsi que le niveau de protection des chevaux jusqu’à 6 mois après l’immunisation. Dans un second temps, une méthode de mesure des anticorps anti-EIV faisant appel à l’impédancemétrie a été développée afin d’enrichir les méthodes actuelles et faciliter l’analyse à haut débit. Cette méthode de séroneutralisation a présenté une bonne corrélation avec les valeurs de titres SRH. Une seconde étude a testé, le potentiel adjuvant de l’iPPVO in vivo chez le cheval dans un modèle de vaccination contre l’EHV-1,4. La réponse en anticorps mesurée par séroneutralisation a été augmentée jusqu’à 5 mois suivant l’immunisation. Enfin, des résultats préliminaires sur le mécanisme d’action de l’iPPVO sur les cellules mononucléées du sang périphérique a permis de mettre en évidence l’importance de la réponse interféron
Equine influenza virus (EIV) and equine herpesvirus-1 (EHV-1) are frequently described in many countries and are two endemic pathogens in the French equine population. These infectious diseases have important consequences both in terms of animal health and welfare and in terms of economic impact. The fight against these viruses is essentially based on the implementation of preventive measures such as vaccination. Despite this epizootics of EIV and EHV-1 are regularly declared in France and throughout the world. Neutralising antibodies, synthesised in response to infection or after immunisation, represent the main line of defence against these viruses. Improved vaccines and a wider range of tools to measure neutralising antibodies can be a valuable strategy in the fight against these viruses. In order to improve the efficacy of the vaccine response, both in magnitude and duration, the use of adjuvants is one way to improve immunogenicity. This thesis consisted, in the first instance, in establishing the proof of concept of the use of iPPVO as an innovative adjuvant in vivo in horses in the context of vaccination against EIV. For this purpose, antibodies were measured by SRH, a method for which the correlates of protection are well defined. The addition of iPPVO at vaccination significantly increased the antibody level to EIV and protection in horses up to 6 months after immunisation. In a second step, a new method for measuring EIV antibodies in serum based on impedancemetry was developed to improve on current methods and facilitate high throughput analysis. This neutralisation test correlated well with SRH test. Another study was performed, which demonstrated the adjuvant potential of iPPVO in horses during vaccination against EHV-1,4. The antibody response measured by serum neutralisation increased up to 5 months after immunisation. Finally, preliminary results on the mechanism of action of iPPVO on peripheral blood mononuclear cells demonstrated the importance of the interferon

L'adeno-associated virus de type 2 (AAV-2) est un parvovirus humain qui nécessite la présence d'un virus auxiliaire tel que l'herpès simplex de type I (HSV-1) pour effectuer un cycle réplicatif complet. En absence de virus auxiliaire, son génome viral associé à la chromatine est alors sensible à un mécanisme de répression cellulaire qui éteint la transcription de ses gènes rep et cap. Actuellement, quatre gènes précoces de l'HSV-1, codant pour le complexe hélicase primase (UL5/8/52) et la protéine DBP (UL29) ont été définis comme étant essentiels pour permettre la synthèse des formes réplicatives de l'AAV-2. Toutefois, aucun d'entre eux ne possèderait de fonctions transactivatrices capables d'activer l'expression du gène rep. De ce fait, l'objectif de ce travail de thèse a été d'investiguer les protéines de l'HSV-1 qui permettent d'activer l'expression du gène rep, à partir d'une forme latente intégrée de l'AAV-2. Dans ce contexte, les promoteurs de l'AAV-2 sont silencieux, en particulier, le promoteur p5, point de départ de la transcription des gènes rep et cap. Ainsi, nous avons montré que la protéine ICP0 permettait de lever la répression exercée au niveau du promoteur p5, en agissant au niveau transcriptionnel. Cet effet serait dépendant de son activité E3 ubiquitine ligase, conférée par son domaine RING Finger et de l'activité protéolytique du protéasome, suggérant qu'ICP0 pourrait induire la dégradation de facteurs cellulaires participant à la répression du p5. De plus, nous avons montré que la localisation d'ICP0 dans les structures ND10 et par conséquent, leur désorganisation ne serait pas nécessaire pour activer l'expression du gène rep. Enfin, USP7, une protéase clivant les motifs ubiquitine conjugués sur ICP0 participerait indirectement à l'effet transactivateur d'ICP0 sur le promoteur p5, en contribuant, notamment, à la stabilité d'ICP0. Dans l'ensemble, cette étude a permis de démontrer que ICP0 serait un facteur clé pour l'activation des gènes de l'AAV-2 et devrait ainsi contribuer à la définition des fonctions auxiliaires de l'HSV-1
Adeno-associated virus type 2 (AAV-2) is a human parvovirus that requires the presence of a helper virus, such as the herpes simplex virus type 1 (HSV-1) to accomplish a complete productive cycle. In the absence of helper virus, AAV-2 can establish a latent infection that is characterized by the absence of expression of viral genes. So far, four HSV-1 early genes, UL5/8/52 (helicase primase complex), and UL29 (ssDBP), were defined as sufficient for AAV replication when cells were transfected with a plasmid encoding for the wild type AAV-2 genome. However, none of these viral products was shown to behave as a transcriptional factor able to activate AAV gene expression. Our study provides the first evidence that the immediate-early HSV-1 protein ICP0, can promote rep gene expression in cells latently infected with wild type AAV-2. This ICP0-mediated effect occurs at the transcriptional level and involves the ubiquitin-proteasome pathway. Furthermore, using deletion mutants we demonstrate that the localization of ICP0 to ND10 and their disruption is not required for the activation of the rep promoter. Finally, ubiquitin-specific protease USP7 plays an indirect role in the reactivation of rep gene expression. Altogether, this study indicates that ICP0 is a key helper factor for AAV gene activation and thus contributes to the definition of the HSV-1 helper activities

De nombreux virus sont responsables de maladies chez le cheval et peuvent entraîner des épizooties et des entraves aux échanges commerciaux. Parmi ceux-ci l’herpèsvirus 1 et le virus de l’artérite virale équine sont particulièrement surveillés. Des méthodes de détection et de caractérisation moléculaires ont été développées. Nous avons étudié la relation entre les différentes formes d’expression clinique des infections à HVE-1 et le génotype des souches circulant en France. Nous avons ainsi pu confirmer que l’HVE 1 était un des pathogènes abortifs majeurs et qu’il pouvait également être responsable de formes neurologiques sporadique ou épidémique. L’étude par SNP-PCR de la présence de la mutation A/G2254 de l’ORF30 codant l’ADN polymérase a montré que des souches dites «non neuropathogènes» pouvaient être détectées lors de formes paralytiques et qu’à l’inverse des souches dites « neuropathogènes» étaient détectées lors de formes abortives. Ceci suggère l’intervention d’autres facteurs liés au cheval et à son environnement dans l’expression des formes de la maladie. La caractérisation, par analyse phylogénétique des ORF2a à 7, des souches françaises du virus de l’artérite virale, a permis de montrer l’apparition en France d’une souche de type nord américain en 2003. L’épizootie d’artérite virale équine de l’été 2007 décrite dans ce travail a montré qu’une souche Européenne du sous-groupe 2, particulièrement virulente, était responsable de la mort de sept chevaux et d’un avortement. Les perspectives consistent en une approche du séquençage complet du génome d’HVE-1 et une étude phylogénétique d’autres souches d’intérêt pour l’AVE afin de déterminer l’origine de l’épizootie
Many viruses are responsible of equine pathologies and may involve both outbreaks and trade limitations. Among them, equid herpesvirus -1 (EHV-1) and equine arteritis virus (EAV) are monitored closely. Methods of detection and molecular characterisation were developed. We investigated the relationships between the different clinical expressions of EHV-1 infection and genotype of the strains being present in France. We could confirm EHV-1 being both a major abortive agent and also responsible of either sporadic or epidemic neurological diseases. Determining by SNP-PCR the presence/absence of mutation A/G2254 in ORF 30, coding for DNA polymerase, allowed to precise that non-neuropathogenic strains could be detected during paralytic forms, and conversely, neuropathogenic strains could be detected during abortive forms of the disease. This suggests that other factors related to horse and environment also are interfering with the clinical expression of the syndrome. Characterisation of the French strains of EAV, by phylogenetic analyses of ORF 2a-7, allowed demonstrating the emergence in 2003 of a North American strain. The outbreak of equine viral arteritis being described in this paper, revealed an European strain from subgroup 2 (highly virulent) to be responsible of one abortion and death of seven horses. Perspectives are based on the complete sequencing of EHV-1 genome as well as phylogenetic study of other EAV strains in order to determine the origin of the outbreak

Les vecteurs de type amplicon, dérivés du virus de l'herpès simplex de type I, constituent un outil de choix pour le transfert de gène. Ils permettent de véhiculer un ADN de très grande taille dans de nombreux types cellulaires sans que cet ADN s'intègre dans le génome cellulaire. Ces vecteurs sont des particules herpétiques défectives ayant pour génome un concatémère d'unités plasmidiques, dont les seules séquences virales sont les signaux en cis nécessaires à sa réplication et à son encapsidation. Les fonctions nécessaires en trans à leur production sont fournies par un virus ou génome auxiliaire. Il en résulte une population virale constituée de vecteurs amplicons et de virus auxiliaires. La présence d'un grand nombre de virus auxiliaires, même défectifs, rendait ces vecteurs difficilement utilisables en thérapie génique. Pour remédier à ce problème, nous avons construit un virus auxiliaire, HSV-1 LaL J, qui est défectif et dont les séquences en cis essentielles à son clivage-encapsidation, encadrées par deux sites loxP en orientation parallèle, sont spécifiquement délétées par la recombinase Cre. En parallèle, nous avons établi une lignée transcomplémentante permettant la production de ce virus, ainsi qu'une lignée cellulaire transcomplémentante exprimant la recombinase Cre, qui permet l'expression du virus HSV-1 LaL J, mais inhibe son encapsidation. Aussi, les protéines nécessaires à la production de vecteurs amplicons sont toujours synthétisées, mais le virus auxiliaire n'est plus produit. Nous avons alors utilisé le virus HSV-1 LaL J et ces nouvelles lignées cellulaires, pour produire des vecteurs amplicons. Nous avons, ainsi, montré que des titres élevés de vecteurs amplicons, dont le taux de contamination par un virus auxiliaire non pathogène est très faible, pouvaient être aisément obtenus. Les vecteurs ainsi produits sont non cytotoxiques pour les cellules infectées. Enfin, nous avons étudié, in vitro, l'expression de ces vecteurs.

Cette étude se focalise sur l'activité de la protéine ICP0 du virus Herpès Simplex de type 1. Dans le contexte de ses activités nucléaires, nous avons découvert une nouvelle réponse cellulaire suite à des dommages centromériques induits par ICP0. [. . . ]

Le virus Herpès simplex de type 1 (HSV-1) est un pathogène humain capable d'envahir le système nerveux central et de provoquer des encéphalites. La glycoprotéine B (gB), un composant d'HSV-1 nécessaire à l'entrée du virus dans les cellules, a été impliquée dans la neuroinvasion. Son domaine cytoplasmique présente des motifs conservés similaires à des motifs de transport intracellulaire. Afin de déterminer leur rôle dans le transport intracellulaire et la maturation de la gB, nous avons tronqué ou muté ces motifs et caractérisé les modifications occasionnées. Nos résultats montrent qu'une région incluant le motif di-acide ERTE est nécessaire à la maturation glycosidique complète de la protéine, à son expression à la surface cellulaire et à la production de particules infectieuses dans un test de complémentation d'un virus gB-défectif. Deux motifs, YTQV et LL, participent à son transport rétrograde de la surface cellulaire au TGN. Le motif YTQV est nécessaire à l'endocytose de la gB depuis la surface, tandis que le motif LL participerait à une étape plus tardive du transport, puisque sa modification n'empêche pas l'internalisation de la gB, mais retarde son accumulation dans le TGN et favorise son recyclage à la membrane plasmique. La modification de ces motifs entraîne aussi une diminution de l'infectiosité virale et des effets sur le phénotype d'infection (notamment, la modification du motif LL favorise la formation de syncytia). Ces résultats confortent un modèle selon lequel HSV-1 acquiert ses glycoprotéines dans le TGN et suggèrent que le transport rétrograde de la gB joue un rôle important dans la diffusion du virus de cellule à cellule et dans l'infectiosité virale
Herpes simplex virus type 1 (HSV-1) is a human pathogen which infects neurons and can reach the central nervous System (CNS), causing encephalitis. Glycoprotein B (gB), a main component of HSV-1 necessary for entry into host cells, has been involved in neuroinvasion. Its cytoplasmic domain contains highly conserved motifs, similar to motifs involved in intracellular sorting of transmembrane proteins. To determine their role in the intracellular transport and maturation of gB, we deleted or mutated these motifs, and characterized the subsequent modifications in transfected and infected cells. We identified a region that includes the di-acidic motif ERTE, which is essential for the maturation and cell surface expression of gB, and for complementation of a gB-null virus. Two other motifs, YTQV and LL, participate in the retrograde transport of gB from the cell surface to the TGN. Whereas YTQV is essential for internalization of gB from the cell surface, LL most likely participates in a further step of this transport, since mutation of the LL motif does not prevent internalization of gB, but delays its accumulation in the TGN, while enhancing its recycling to the cell surface. Modification of these motifs leads to a decrease in virus infectivity and to changes in the phenotype of infection in cell culture (disruption of the LL motif enhances syncytium formation and the opposite is observed when the YTQV motif is modified). Altogether, these results favor a model in which HSV-1 gets its glycoproteins and final envelope at the TGN, and suggest that retrograde transport of gB, albeit non essential, might play an important role in cell-to-cell spread and infectivity of the virus

Les vecteurs dérivés du virus HSV-1 sont des outils intéressants pour l'oncolyse virale ou la thérapie génique par gène suicide des tumeurs cérébrales. Les vecteurs herpétiques recombinants atténués sont utilisés en oncolyse virale. Nous avons construit et développé un vecteur herpétique recombinant qui porte une cassette d'expression transgénique, biscistronique et auto-inductible. Les vecteurs défectifs de type amplicon sont des outils à fort potentiel de transfert d'ADN de grande taille dans de nombreux types cellulaire. Nous avons construit et développé un vecteur amplicon portant le gène codant pour la protéine herpétique ICP0. L'infection de cellules issues de glioblastome humain par ce vecteur induit l'arrêt de leur prolifération et aboutit à leur mort. A contrario, il ne montre aucun effet cytotoxique sur des cellules qui ne prolifèrent pas. Nous avons aussi étudié l'expression d'un autre transgène et établi qu'elle est dépendante du type cellulaire et qu'ICP0 peut l'augmenter
HSV-1 derived vectors are promising tools for viral oncolysis or gene therapy by suicide gene of brain tumors. Attenuated recombinant vector are used for viral oncolysis. We have constructed and characterized a recombinant vector which carries a transgenic, biscistronic and auto-inductible expression unit. Defectif amplicon type vectors are tools with good potential for transfer of large size DNA in variety of cell types. We have constructed and developed an amplicon vector which carries the gene encoding the herpetic ICP0 protein. Human glioblastoma cells infected with this vector stop proliferating, resulting in cell death. No toxic effects were observed in non proliferaing infected cells. We have studied the expression of a second transgene carried by amplicon vectors and showed that though its expression is cell type dependent, simultaneous ICP0 expression could significantly increased it

HSV-1 est un virus affectant l'humain et qui communément provoque des lésions oraux-faciales récurrentes. Même s'il y a des thérapies efficaces qui bloquent la réplication du virus, il n'est jamais éradiquer de son hôte. Ainsi, Cellectis a pour objectif de développer les méganucleases qui clivent spécifiquement au niveau du génome viral. La question initiale posée durant cette thèse a été de déterminer comment prouver l'efficacité et la sûreté d'une telle thérapie. Pour cela, nous avons proposé d'utiliser la technologie de Peignage Moléculaire pour la visualisation directe et l'analyse de molécules uniques par l'hybridation de sondes spécifiques sur de l'ADN irréversiblement fixé et étiré. Nous avons été confrontés à la complexité du génome HSV-1. En effet, ce génome de 152 kb est organisé en deux fragments, composés de séquences uniques entourés de séquences inversées répétés. Par recombinaison homologue entre les séquences répétées, quatre isomers sont générés. Nous avons testé l'hypothèse que quelque soit les cellules infectées ou la souche utilisée, les quatre isomers étaient répartis de façon équivalente. L'analyse par peignage moléculaire a révélé des distributions statistiquement non équivalentes en fonction de la souche et des cellules analysées. Nous avons également détectés des concatemères de réplication aussi long que 10 génomes équivalents ; De façon intéressante, les isomers étaient systématiquement répartis de façon équivalente dans ces concatemères suggérant que la différence de distribution survient au niveau du processus d'encapsidcation. Enfin, une proportion considérable d'éléments non canoniques a étés observés in vitro et in vivo
HSV-1 is a prevalent human pathogen that commonly leads to recurrent facialoral lesions. Although there are efficient drugs to block its replication, HSV-1 is never clear of the host Within this context, the company Cellectis aims to develop a new class of therapeutic agent (the meganucleases) that specifically cleaves into the HSV-1 genome of infected cells, thus allowing its eradication. The first question addressed during this thesis was how to assess the efficacy and safety of such a therapy. We proposed molecular combing for the direct visualization and analysis of single DNA molecules through hybridization of specific probes on uniformly and irreversibly stretched HSV-1 DNA. Following technical improvements, we successfully detected the genomes in viral particles and infected cell DNA extracts, as well as in DNA extracts from mouse, rabbit and human cornea. We were confronted to the complexity of the organization of HSV-1 genomes. Indeed, its 152 kb genome is organized in two covalently linked-segments. Each segment is composed of a unique sequence flanked by inverted repeated sequences. During replication, four HSV-1 genome isomers are produced by homologous recombination between the inverted repeats. We tested the hypothesis that the process of isomerization systematically results in a random distribution no matter which cell or strain is considered. Using HSV-1 probes, we were able to distinguish between the four isomers through molecular combing analysis. Interestingly, both in vitro and in vivo, we found imbalanced distribution functions of the strain, cell or tissue considered. In the DNA extract of infected cells, concatemeric molecules as long as 10 equivalent genomes were detected. Strikingly, among these, the isomers distribution was always equivalent. This suggests that any such imbalance may occur during encapsidation. A considerable proportion of non-canonical assortments were detected in vitro and in vivo

Le travail rapporte dans ce memoire concerne la mise au point d'un nouveau systeme de production de vecteurs retroviraux a partir de vecteurs herpetiques de type amplicon. Pour ceci, une unite de transcription retrovirale, contenant les genes gag, pol et env de momlv sous le controle de sequences activatrice, promotrice et de polyadenylation herpetiques, a ete construite. Cette unite, deletee des deux ltrs, des sites pbs et ppt ainsi que du signal d'encapsidation, mais conservant les sites accepteur et donneur d'epissage, a ete clonee dans un plasmide vecteur herpetique de type amplicon. Des amplicons vecteurs (ou vecteurs gpe) ont ete produits en utilisant un virus auxiliaire hsv-1 defectif, sur des cellules transcomplementantes. La population virale heterogene, constituee de vecteurs gpe et de virus hsv-1 auxiliaires, a ete utilisee pour infecter des cellules te, contenant un provirus integre porteur du gene lacz, (les cellules te-lac2), et le surnageant de ces cellules infectees a ete preleve et filtre a differents temps post-infection. Ces surnageants contiennent des particules retrovirales lacz ecotropes, capables de transduire une activite -galactosidase dans des cellules murines nih3t3, mais non dans des cellules humaines te671. L'arn viral de ces vecteurs a ete detecte et caracterise par rt-pcr. Le titre de vecteurs retroviraux produits apres infection des cellules te-lac2 par les amplicons gpe augmente avec la quantite d'amplicons utilises. La production de vecteurs retroviraux est fortement inhibee par une surinfection des cellules te-lac2 avec le virus hsv-1 auxiliaire, indiquant que la co-infection par le virus auxiliaire perturbe la production de vecteurs retroviraux induite par les amplicons gpe. Les particules retrovirales semblent donc etre produites seulement dans les cellules te-lac2 qui recoivent uniquement l'amplicon gpe. L'induction de la production de vecteurs retroviraux par les amplicons gpe est neutralisee par des anticorps anti-hsv-1 mais pas par des anticorps anti-momlv. La transduction de l'activite -galactosidase par le surnageant des cellules te-lac2 infectees par les vecteurs gpe est, quant a elle, neutralisee par les anticorps anti-momlv. Ces resultats montrent qu'un vecteur de type amplicon, porteur de l'unite retrovirale gpe, peut permettre la production de maniere transitoire de vecteurs retroviraux. Une des applications possible de ce nouveau systeme de production serait d'utiliser ces amplicons gpe afin de remobiliser un genome vecteur retroviral integre dans une cellule, aussi bien in vivo qu'in vitro

Le theme de cette these est l'etude des intermediaires de la replication du virus herpes simplex de type 1 (hsv-1), dans le but de mieux caracteriser le mecanisme par lequel ce virus synthetise son adn. Lors de l'initiation de ce travail, il etait admis que hsv-1 repliquait son adn selon le modele du cercle roulant, generant de longs concatemeres lineaires. Cependant, ce modele n'avait pas ete demontre directement en raison de la grande taille du genome hsv-1. La technique d'electrophorese en champs pulses m'a permis de separer l'adn des unites genomiques de celui constituant les intermediaires de replication, afin d'analyser ces derniers. Les resultats obtenus confirment que les structures replicatives sont sous forme de concatemeres. Cependant des inversions de composantes l adjacentes sont retrouvees en proportion equimolaire au sein des concatemeres. L'etude de souches hsv-1 mutantes montre que ces inversions se produisent tot dans le cycle viral et sont responsables du phenomene d'isomerisation genomique. De plus, les analyses en pfge revelent que la majeure partie des intermediaires de replication se trouve sous la forme d'une structure complexe, non lineaire, probablement constituee d'adn branche. L'ensemble de ces observations concernant la structure des intermediaires de replication ne peut etre explique par le mecanisme du cercle roulant classique, qui doit donc etre revu, et implique probablement que des phenomenes de recombinaison soient constitutivement lies a la synthese de l'adn viral. Le role dans le cycle viral des topoisomerases de type i et ii cellulaires a aussi ete evalue. Ces enzymes apparaissent necessaires a la production de particules infectieuses, probablement en intervenant sur differentes etapes de la maturation de l'adn. Cependant, aucune d'entre elles ne semble strictement requise ni pour la formation des inversions genomiques, ni pour la resolution des structures complexes.