Dissertations / Theses on the topic 'HAP'

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:45:33Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012<br>Introdução: A esquistossomose e potencialmente a causa mais comum de hipertensao arterial pulmonar (HAP) no mundo. Apesar de semelhancas histopatologicas com a HAP idiopatica (HAPI), a HAP associada a esquistossomose (HAP-Esq) apresenta um curso clinico mais benigno, desconhecendo-se, no entanto, os mecanismos que justificam esse disparate. Como a HAP e uma doenca que manifesta-se prioritariamente aos esforcos, a hipotese central deste trabalho foi a de que pacientes com HAP-Esq apresentem respostas fisiologicas ao exercicio incremental, avaliadas atraves de teste de exercicio cardiopulmonar (TECP) em cicloergometro, menos comprometidas que pacientes com HAPI. Objetivos: Primariamente, objetivou-se contrastar as diferencas nos ajustes fisiologicos durante o exercicio dinamico entre pacientes com HAPI e HAP-Esq; secundariamente, objetivou-se correlacionar as variaveis hemodinamicas de repouso com os parametros do TECP e, ainda, avaliar a capacidade do teste de caminhada de seis minutos (TC6M) em identificar limitacoes no desempenho aerobico dos pacientes com HAPI e HAP-Esq. Metodos: Foram analisados TECP incremental em cicloergometro e TC6M de pacientes com HAPI e HAP-Esq, realizados ate 1 mes apos a avaliacao hemodinamica diagnostica, e sem que tratamento especifico para HAP tivesse sido iniciado. Houve duas fases distintas no delineamento do estudo: i) analise retrospectiva de pacientes que realizaram TECP como parte da rotina ambulatorial ou de protocolos de pesquisa; ii) fase prospectiva, na qual individuos com diagnostico recente de HAPI ou HAP-Esq foram submetidos a TECP incremental. Resultados: Foram avaliados 8 pacientes com HAP-Esq e 9 com HAPI. O indice cardiaco (IC), a resistencia vascular pulmonar e a pressao media de arteria pulmonar foram similares entre os grupos. Nao houve diferencas na estimativa da classe funcional da New York Heart Association e na distancia caminhada no TC6M entre os grupos. No entanto, no TECP, o O2pico foi maior em pacientes com HAP-Esq (75,5 ± 21,4 vs 54,1 ± 16,1 %previsto; p=0,016), assim como a inclinacao da relacao O2-W (8,2 ± 1,0 vs 6,8 ± 1,8 mL/min/W; p=0,03). Os individuos com HAP-Esq apresentaram maiores valores de pulso de oxigenio comparativamente a HAPI, alem de menor resposta taquicardica conforme a demanda metabolica (80,1 ± 20,6 vs 123,0 ± 39,2 batimentos/L/min; p=0,02). A inclinacao da relacao E- CO2 foi menor na HAPEsq (40,3 ± 3,9 vs 55,6 ± 19,8; p= 0,04). Houve correlacao entre o IC de repouso e O2pico, O2/W e E/ CO2 apenas nos pacientes com HAPI. Nao houve correlacao do O2pico com a distancia caminhada no TC6M. Conclusoes: Pacientes com HAPEsq apresentaram respostas fisiologicas ao exercicio incremental menos comprometidas que os pacientes com HAPI, mesmo com padrao hemodinamico similar ao repouso. Houve correlacao entre variaveis do TECP e hemodinamicas de repouso apenas nos pacientes com HAPI. O TC6M nao apresentou capacidade de detectar as disparidades funcionais entre os grupos. Os achados ao TECP sugerem que os pacientes com HAP-Esq possuam melhor capacidade em ajustar o debito cardiaco conforme a demanda metabolica durante o esforco, o que pode explicar o melhor curso clinico observado comparativamente a HAPI<br>BV UNIFESP: Teses e dissertações

Afin d'étudier la santé d'un écosystème marin et le potentiel toxique d'une contamination telle que celle liée à la présence d'hydrocarbures aromatiques polycycliques (HAP), il est nécessaire, outre de connaître les niveaux de contamination du milieu, de pouvoir accéder à la fraction à laquelle les organismes aquatiques ont été exposés et de connaître les effets toxiques des contaminants incriminés (effets toxiques qui peuvent être reliés aux phénomènes de biotransformation des contaminants). L'exposition et la contamination des organismes aquatiques aux HAP ont généralement été évaluées par le dosage des HAP bioaccumulés dans les tissus. Or, cette approche est critiquable si l'on tient compte des capacités de biotransformation des organismes, notamment des vertébrés, et des propriétés toxiques des produits de transformation formés. Dans ce contexte, l'objectif de cette thèse est d'évaluer le potentiel des métabolites de HAP dans le but d'étudier l'exposition et la contamination des organismes aux HAP dans l'environnement marin. Une méthode de dosage des métabolites de HAP dans les matrices biologiques a tout d'abord été mise au point. Ensuite, cet outil analytique a été appliqué lors d'expositions de poissons à des HAP individuels et à différents produits pétroliers en milieu contrôlé qui ont permis de mieux appréhender les phénomènes de biotransformation des HAP. Enfin, des études de terrain ont été réalisées, notamment dans le cadre du suivi de la marée noire Erika et de l'étude de la contamination de la baie de Seine, montrant l'applicabilité du dosage des métabolites de HAP afin d'évaluer l'exposition et la contamination des organismes aux HAP en milieu naturel dans des contextes de pollution de nature différente<br>In order to study the health of a marine ecosystem and the toxic potential of a contamination such as the one related to the presence of polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs), it is necessary, in addition to the determination of environmental contamination levels, to have access to the fraction aquatic organisms have been exposed to and to identify the toxic effects of the contaminants (toxic effects which can be related to biotransformation phenomena of contaminants). The exposure and contamination of aquatic organisms to PAHs have generally been evaluated by the quantification of bioaccumulated PAHs in tissues. However, this approach is open to criticism when taking into account the biotransformation capabilities of organisms such as vertebrates and the toxic properties of biotransformation products. In this way, the aim of this study is to evaluate the potential of PAH metabolites in order to study the exposure and contamination of organisms to PAHs in the marine environment. An analytical technique to quantify PAH metabolites in biological matrices has first been set up. Then, this analytical tool has been applied to the study of fish exposures to individual PAHs and to different petroleum products in controlled conditions which has allowed to get a better understanding of PAH biotransformation phenomena. Finally, field studies have been led, notably to study the Erika oil spill and the contamination of the Seine bay, demonstrating the applicability of the quantification of PAH metabolites to evaluate the exposure and the contamination of organisms to PAHs in natural environment and for pollution events of different nature

No estudo da osteointegração, os resultados adquiridos através dos softwares analisadores de imagens contribuirão para que se tenha uma melhor visualização da interface tecido biológico/material implantado. O objetivo deste trabalho foi avaliar, por meio de estudos histológico, morfométrico e densitométrico, as interfaces tecido ósseo/materiais implantados em comparação com o grupo controle (coágulo), descrevendo qualitativa e quantitativamente os resultados dessas análises. Foram selecionados 16 coelhos, Oryctolagus cuniculus, com idade de 90 dias, sendo estes divididos em quatro grupos de quatro animais (G1, G2, G3 e G4), com períodos pós-operatórios de sete, 15, 21 e 35 dias. Em cada animal, foram feitos dois defeitos ósseos nas tíbias direitas, preenchidos com o biomaterial Composto Ósseo de Ricinus (C.O.R.) granulado e o Grupo Controle (coágulo); na tíbia esquerda, preencheu-se com o biomaterial Hidroxiapatita (HAP-91). Após a eutanásia, as peças cirúrgicas foram removidas, identificadas e submetidas às análises. A análise histológica evidenciou, para os dois biomateriais, um grande aporte de células osteoprogenitoras e, com o avanço dos períodos experimentais, a deposição de um tecido ósseo mais desenvolvido. Estes resultados qualitativos corroboraram com a análise morfométrica, evidenciando a osteointegração pela aproximação das corticais ósseas. Com o estudo densitométrico, pôde-se acompanhar, por imagens tridimensionais e coloridas, o desempenho de cada biomaterial implantado e o grupo controle com o tecido ósseo. Concluiu-se que os dois biomateriais implantados se comportam de uma maneira muito desejável para que se constituam como uma escolha de materiais substitutos da reposição óssea.<br>In the study of osseointegration, the results acquired through the images analysis softwares, contribute in order to have a better view of the biological tissue/ material implanted interface. The aim of this study was to evaluate through studies: histological, morphometric and densitometric, the interactions of bone tissue / implanted materials in comparison with the control group (clot), and describing qualitatively and quantitatively the results of these analyzes. Were selected 16 rabbits, Oryctolagus cuniculus, with 90 days of age and divided into four groups of four animals (G1, G2, G3 and G4), and postoperative periods of seven, 15, 21 and 35 days. In each animal, two bone defects were made on the right tibia, and were filled with the (C.O.R.) Compound Bone of granulated Ricinus biomaterial and control group (clot); and in the left tibia, filled it with (HAP-91) Hydroxyapatite biomaterial. After euthanasia, the tibial bone was removed, identified and submitted for analyzes. The histological analysis showed for both biomaterials, a large amount of osteoprogenitor cells and, with the advancement of the experimental periods, the deposition of more developed bone tissue. These qualitative results corroborated with the morphometric analysis, showing the osseointegration by approximation of the cortical bones. With the densitometric study, could be accompanied, by three-dimensional images and colorful, the performance of each implanted biomaterial and the control group with the bone tissue. It was concluded that both implanted biomaterials behave in a manner very desirable to be constituted as a choice of substitute materials for the bone replacement.

Ce travail a eu pour objectif d'étudier l'oxydation hétérogène de composés aromatiques polycycliques (CAP) adsorbés sur des particules solides, exposés à des oxydants troposphériques. Après adaptation et validation des protocoles analytiques, deux aspects ont été abordés : les cinétiques de dégradation avec O3, NO2 et OH dans un premier temps, puis l'étude des produits d'oxydation formés au cours de ces réactions. Les constantes de vitesse mesurées ont permis de comparer les différences de réactivité entre les composés étudiés (pyrène, 1-nitropyrène, 1-hydroxypyrène, 9,10-anthraquinone). L'influence de différents paramètres sur la réactivité (nature des particules, concentration en HAP...) a aussi été étudiée. Enfin, la détermination des produits d'oxydation et leur quantification, quand cela a été possible, a permis de mieux comprendre le devenir de ces composés particulaires dans l'atmosphère, à travers les mécanismes réactionnels proposés.

L'utilisation de micromycètes dans la dépollution de sols contaminés par des hydrocarbures aromatiques polycycliques (HAP) constitue une alternative aux méthodes classiques, ces dernières présentant des inconvénients de faisabilité technique, de coût et d'efficacité. La bioremédiation paraît donc prometteuse même si la toxicité et le manque de biodisponibilité des polluants vis à vis des microorganismes capables de les dégrader sont deux obstacles à surmonter. Ce travail, utilisant le fluorène comme HAP modèle, s'est orienté vers la recherche de souches fongiques tolérantes et efficaces dans la dégradation du fluorène puis vers l'amélioration de la biodisponibilité du fluorène en utilisant des surfactifs et des cyclodextrines. Ce travail de sélection en milieu liquide a été suivi d'applications en suspension de sol. Au cours des essais de dégradation du fluorène (5 mg/l), treize souches parmi les trente et une testées se sont révélées avoir un potentiel de dégradation supérieur ou égal à 60 % (après 48 h de contact). Dix neuf souches, à potentiel inférieur ou égal à 60 %, ont fait l'objet d'essais d'amélioration impliquant des surfactifs et des cyclodextrines. La démarche consiste à sélectionner des couples micromycète - surfactif ou cyclodextrine selon des critères de bonne tolérance et d'absence de consommation par les micromycètes, avant de procéder à des essais de dégradation du fluorène. L'application aux sols a permis d'identifier des micromycètes efficaces à partir d'un sol pollué et de réaliser des essais de dégradation en suspension de sol amendé en fluorène (100 æg/g). L'importance de la microflore native dans la dégradation du fluorène et l'effet positif de la bioaugmentation ont ainsi pu être mis en évidence. L'utilisation de maltosyl cyclodextrine et de Tween 80 a également un impact positif sur la biodépollution.

Cette étude a porté sur l'application du réactif de Fenton comme procédé de réhabilitation de matrices contaminées par des hydrocarbures aromatiques polycycliques (HAP). En solution aqueuse, le choix des conditions de mise en œuvre du réactif est important, afin de générer suffisamment de radicaux pour oxyder les polluants. Une dégradation des composés est possible, mais une différence de réactivité importante est observée entre les HAP "alternants" et "non alternants" (avec un cycle à cinq atomes de carbone). De plus, si certaines précautions particulières ne sont pas prises, les HAP peuvent s'adsorber sur les parois des récipients, et être de ce fait réfractaires à l'oxydation. Les résultats sur les boues résiduaires montrent que sous certaines conditions (concentrations élevées en réactifs), les polluants peuvent être oxydés alors même qu'ils sont adsorbés. De plus, la matrice semble jouer un rôle important, les oxydes de fer étant probablement à même de décomposer le peroxyde d'hydrogène dans le milieu et d'initier ainsi la réaction de Fenton. L'application de ce traitement d'oxydation à des sols et sédiments contaminés est également possible.

Les hydrocarbures aromatiques polycycliques (HAP) sont des polluants organiques largement répandus dans l’environnement. Ils sont très fréquemment détectés dans les sols et sont principalement le produit d’une combustion incomplète de la matière organique. Etant toxiques et cancérigènes, de nombreuses études portant sur leur élimination des sols ont été massivement effectuées au cours des dernières années. Parmi tous les traitements disponibles pour traiter des sols contaminés par les HAP, les approches biologiques sont prometteuses car elles ont un impact limité, voire nul sur l’environnement. Cependant, leur efficacité est étroitement dépendante de nombreux facteurs difficiles à contrôler. L’objectif de cette thèse a été d’obtenir une connaissance plus précise concernant la dépollution biologique de sols contaminés par des HAP, en définissant à travers une série d‘expériences, les conditions les plus appropriées pour leur élimination principalement en termes de caractéristiques physiques et chimiques du sol, de la structure des HAP et leurs concentrations, la densité et la composition microbienne, le pH et l’humidité du sol et la disponibilité des nutriments. Les expériences réalisées dans cette thèse, sont basées sur le compostage de déchets organiques avec des sols contaminés par des HAP. L’ajout de matière organique vise à promouvoir la dégradation biologique simultanée des HAP et des déchets organiques frais en conditions contrôlées. Les résultats attendus de cette approche sont la dégradation des polluants en composés moins nocifs, en raison de la stimulation de l’activité des micro-organismes présents dans le sol ainsi que dans les déchets organiques apportés. Dans le but de comprendre l’influence des facteurs précédemment mentionnés, les expériences ont été menées sur un sol synthétique, artificiellement contaminé, ainsi que sur un sol contaminé provenant d’un site industriel identifié comme pollué par des HAP. Quatre types de déchets organiques frais ont été sélectionnés pour être ajoutés au sol artificiellement contaminé par des HAP. Les résultats ont montré que les boues activées étaient l’amendement organique le plus efficace par rapport au fumier de bufflonnes, aux déchets de cuisine et aux déchets organiques à base de légumes. Un taux d’élimination des HAP totaux supérieur à 60% a été atteint avec les boues activées. En outre, cette série d’expériences a prouvé que les conditions mésophiles étaient plus favorables que les conditions thermophiles, mais également que la teneur en azote, l’importance de la fraction soluble et les teneurs en protéines sont très importantes pour l’élimination des HAP. Sur la base de ces résultats, une série d’expériences a été menée sur un sol historiquement contaminé en apportant des quantités différentes de boues activées (ratio massique sol contaminé : boues activées variant de 1:2, 1:1 , 1:0,5 à 1:0). Contrairement aux résultats obtenus avec le sol artificiel, pour un sol naturellement contaminé, les amendements à base de boues activées n’ont pas stimulé l’élimination de HAP. Les meilleurs résultats ont été obtenu pour le sol non amendé par les boues activées (un rendement d’élimination des HAP totaux de 32% a été atteint en l’absence de boues activées, tandis qu'en présence d’un amendement à base de boues activées les meilleurs résultats ne dépassent pas 14% d’élimination des HAP totaux), cela prouve que la stimulation de micro-organismes pouvant dégrader les HAP est un facteur clé pour le succès du processus de dépollution biologique dans des conditions environnementales favorables<br>Polycyclic Aromatic Hydrocarbons (PAHs) are organic pollutants widely distributed in the environment and very frequently detected in soils as they are mainly produced from an incomplete combustion of organic matter at high temperature. They are toxic and even carcinogenic, therefore their removal from soils has been massively studied in the past years. Among all treatments suitable for treating soils contaminated by PAHs, biological ones are promising and challenging as they have a low or even no impact on the environment as well as their efficiency is tightly dependent on many factors not easy to control. The objective of this thesis has been to get more accurate knowledge on bioremediation of PAHs contaminated soils, by defining, through a series of experiments, the most suitable conditions for their biological remediation mainly in terms of physical and chemical soil characteristics, PAHs type and concentration, microbial density and composition, pH value, moisture content and availability of nutrients. The bioremediation experiments carried out in this thesis are based on landfarming as well as composting soil treatments and aimed at promoting the simultaneous biodegradation of PAHs and fresh organic wastes under controlled conditions. The expected result of this approach has been the conversion of organic pollutants into less harmful compounds, due to the activity of the microorganisms present in soil as well as in the organic waste added to soil. With the aim of deeply understanding the influence of the aforementioned factors on the bioremediation of PAHs contaminated soil, experiments were conducted on a synthetic soil, artificially contaminated, as well as on a real contaminated soil. In details, four different types of fresh organic waste were selected to be added to PAHs artificially contaminated synthetic soil and the results showed that centrifuged activated sewage sludge (SS) was the most effective organic amendment compared to buffalo manure (BM), food and kitchen waste (FKW) and fruit and vegetable waste (FVW). The removal efficiency of total PAHs reached with SS was actually a little higher than 60%. Furthermore, this set of experiments proved that mesophilic conditions were more performing than thermophilic conditions, as well as the content of nitrogen, soluble fraction and proteins played an important role in the PAHs removal. Based on the previous results, the next set of experiments was conducted on a real contaminated soil amended with different amounts of centrifuged activated SS (e.g. contaminated soil to SS mass ratios were 1:2, 1:1, 1:0.5 and 1:0 as wet weight basis). In contrast to results obtained with synthetic soil, in a real contaminated soil, SS amendment resulted in being not beneficial to PAHs removal. The best results were actually achieved where no SS was added (total PAHs removal efficiency of 32%, whereas with SS the best results showed a value of 14%), proving that the adaptation of microorganisms to PAHs is the key factor for the success of the bioremediation process coupled with setting favorable environmental conditions

La leptospirose est une zoonose de représentation mondiale concernant la plupart des Mammifères dont l'homme. Hap1 a été purifiée dans une fraction protéique de 32 kDa extraite de leptospires, bactéries responsables de la leptospirose. La protéine Hap1 s'est révélée être associée à une protection hétérologue contre la leptospirose chez des gerbilles. Le gène hap1 a été exprimé par E. Coli afin de produire la protéine recombinante rHap1. Ce travail confirme et prolonge les travaux antérieurs : Hap1 est secrétée par les seuls leptospires pathogènes lors de leur multiplication. Très immunogène et protectrice dans les conditions naturelles, cette protéine sous sa forme recombinante ne permet pas de reproduire les activités protectrices dans les conditions naturelles. L'objectif de ce travail était donc de purifier la ou les formes naturelles de la protéine Hap1 afin d'en définir les présentations structurales expliquant cette contradiction<br>Leptospirosis is a zoonosis with a worldwide distribution concerning most Mammalians among which humans. Hap1 was purified from an antigenic zone with an apparent molecular mass of 32 kDa extracted from leptospires, bacteria responsible for leptospirosis. Immunization with Hap1 expressed by adenovirus or plasmid induced in gerbils a protection against leptospirosis. Then hap1 gene was expressed by E. Coli to product the recombinant protein rHap. This present work confirms these previous data: Hap1 is secreted during the multiplication of only pathogenic leptospires. Very immunogenic and protective in the natural conditions, this protein in the recombinant form doesn't permit to reproduce protective activity in the natural conditions. So, the purpose of this work was to purify one or many Hap1 naturally forms in order to determine the structural difference to understand this contradiction

Les Hydrocarbures Aromatiques Polycycliques (HAP) sont une famille de polluants atmosphériques issus de la combustion incomplète de la matière organique. Le chauffage domestique, la fumée de tabac ainsi que certaines activités industrielles sont les principales sources d'émission environnementale. Certains HAP sont connus ou suspectés d'être cancérigènes pour l'homme, comme le benzo[a]pyrene (BaP), à travers la formation de dommages à l'ADN. La majorité des études se sont focalisées sur l'étude d'un HAP pur alors que l'exposition est toujours en lien avec des mélanges. Ce travail vise à évaluer in vitro sur un modèle d'hépatocytes humains (lignée HepG2) la modulation de la génotoxicité des HAP en mélanges à travers l'utilisation de deux biomarqueurs: le test des comètes mesurant les cassures de l'ADN et le dosage par HPLC/MS/MS des adduits à l'ADN du BPDE, métabolite principal du BaP. Dans un premier temps, les dommages induits par le BaP pur ou en mélange binaire avec d'autres HAP particulaires sont évalués. L'étude est ensuite étendue d'une part à des mélanges atmosphériques réels prélevés dans l'environnement ou en milieu industriel, et d'autre part à la fraction d'HAP particulaires reconstituée correspondante. Dans une dernière partie, l'intérêt de ces tests in vitro pour le suivi de l'exposition des populations à des agents génotoxiques associés à divers types d'environnements a été évaluée. Ce travail met en avant la nécessité d'approfondir les connaissances sur les mécanismes à l'origine des interactions entre les composés ainsi que l'intérêt du recours à la modélisation comme outil d'évaluation des dangers liés à l'exposition des populations aux HAP en mélanges<br>Polycyclic Aromatic Hydrocarbons (PAH) are atmospheric pollutants arising from incomplete combustion of organic matter. Residential heating, vehicle exhaust, cigarette smoke and industrial activities are the main sources of P AH in the environ ment. Sorne of these PAH are suspected or known carcinogens to humans like benzo[a]pyrene (BaP) which causes DNA damage. Most studies focused on the effect of individual P AH whereas human exposure al ways occurs through complex mixtures. This work aims at evaluating the modulation in vitro of the genotoxicity of P AH in mixtures, using in a cellular model of human hepatocytes (HepG2). To achieve this goal, biomarkers of genotoxicity such as the cornet assay measuring DNA strand breaks, and the HPLC/MS/MS measurement of DNA adducts of BPDE, the most reactive BaP metabolite, were chosen. Ln a first step, DNA damage induced by BaP as a pure compound or in binary mixture with other particulate P AH were investigated in order to higltlight the mode of interaction between these compounds. This study was then extended, in one hand to real atmospheric mixtures collected in the environment or inside industrial plants, and in another hand to the reconstructed corresponding particulate P AH fraction. Ln a last more applied part, suitability of those in vitro tests for the monitoring of the genotoxic risk associated with ambient air. This work emphasizes the need for a deeper understanding of the mechanisms underlying interactions between compounds, as well as the necessity to use mathematical modelling as a tool in the assessment of human health hazards posed by exposure to ambient air

Les Hydrocarbures Aromatiques Polycycliques (HAP) sont une famille de polluants atmosphériques issus de la combustion incomplète de la matière organique. Le chauffage domestique, la fumée de tabac ainsi que certaines activités industrielles sont les principales sources d'émission environnementale. Certains HAP sont connus ou suspectés d'être cancérigènes pour l'homme, comme le benzo[a]pyrene (BaP), à travers la formation de dommages à l'ADN. La majorité des études se sont focalisées sur l'étude d'un HAP pur alors que l'exposition est toujours en lien avec des mélanges. Ce travail vise à évaluer in vitro sur un modèle d'hépatocytes humains (lignée HepG2) la modulation de la génotoxicité des HAP en mélanges à travers l'utilisation de deux biomarqueurs : le test des comètes mesurant les cassures de l'ADN et le dosage par HPLC/MS/MS des adduits à l'ADN du BPDE, métabolite principal du BaP. Dans un premier temps, les dommages induits par le BaP pur ou en mélange binaire avec d'autres HAP particulaires sont évalués. L'étude est ensuite étendue d'une part à des mélanges atmosphériques réels prélevés dans l'environnement ou en milieu industriel, et d'autre part à la fraction d'HAP particulaires reconstituée correspondante. Dans une dernière partie, l'intérêt de ces tests in vitro pour le suivi de l'exposition des populations à des agents génotoxiques associés à divers types d'environnements a été évaluée. Ce travail met en avant la nécessité d'approfondir les connaissances sur les mécanismes à l'origine des interactions entre les composés ainsi que l'intérêt du recours à la modélisation comme outil d'évaluation des dangers liés à l'exposition des populations aux HAP en mélanges.

Onze hydrocarbures aromatiques polycycliques (hap) ont ete recherches dans differents environnements marins cotiers de mediterranee definissant un gradient de contamination. L'origine principalement pyrolytique des hap contenus dans les sediments est mise en evidence pour l'ensemble des sites, et des pollutions petrogeniques ponctuelles ont ete identifiees dans les sites peu contamines. L'hypothese de l'introduction des hap dans le milieu marin sous forme essentiellement particulaire permet de modeliser les mecanismes de contamination des sediments a l'aide des processus hydrosedimentaires. Les distributions des hap dans les tissus de moules et les niveaux de l'activite enzymatique benzo(a)pyrene monooxygenase indiquent que le mode de contamination des moules par les hap sous forme dissoute est preponderant. Enfin le potentiel eleve de toxicite des sediments fins des mytylicultures est mis en evidence

Mestrado em Engenharia Alimentar - Processamento de Alimentos / Instituto Superior de Agronomia<br>Em Portugal, os contaminantes são controlados pelo Regulamento (CE) nº 1881/2006 da Comissão de 19 de dezembro de 2006 que fixa os teores máximos de certos contaminantes presentes nos géneros alimentícios. Os Hidrocarbonetos Aromáticos Policíclicos (HAP) são contaminantes abrangidos pelo Regulamento (CE) nº 1881 e são o foco do presente trabalho, no que respeita à sua presença em produtos cárneos fumados de modo tradicional em Portugal. No ano de 2014 surgiu uma alteração a este regulamento, sendo que os teores de HAP foram diminuídos de 5 μg kg-1 para o benzo(a)pireno e 30 μg kg-1 para a soma de quatro HAP para 2 e 12 μg kg-1, respetivamente. Posto isto, Portugal, entre outros países da União Europeia, alegaram dificuldade em produzir os seus produtos tradicionais segundo estes valores de HAP. Sendo assim, estes países foram abrangidos por uma derrogação que lhes permitiu continuar a produzir os seus produtos abrangidos pelos limites máximos (LM) antigos, durante um prazo de 3 anos desde a data de implementação da derrogação (2014). Ao longo dos 3 anos coube aos países monitorizar a produção de produtos cárneos fumados e verificar se seria possível produzir os mesmos produtos com teores de HAP mais baixos. Como consequência desta alteração, surgiu o presente trabalho pela necessidade de contactar diretamente os produtores, no sentido de conhecer os seus processos de produção, de avaliar o conhecimento de boas práticas relativamente ao processo de fumagem e, sobretudo, solicitar análises relativas aos teores de HAP nos produtos fumados, no sentido de avaliar o panorama nacional. A análise das respostas por parte dos produtores permitiu concluir que o panorama português é positivo, sendo que a grande maioria das análises obtidas por parte dos produtos se encontram dentro dos limites permitidos pela nova alteração ao regulamento<br>N/A

Diploma thesis occupy with preparation of porous material from magnesium powder with a HAp admixture by cold pressing followed by spark plasma sintering (SPS). This thesis contain both preparation of bulk material, diffusion plot and charakterization of materials based on the compaction process conditions. On the basis of physical mechanical characteristics, the impact of the pressing process on the subsequent sintering and the resulting material properties are evaluated. Bulk material is characterized considering to structure and physical–mechanical properties. Properties of final metarial will serve to optimize conditions for process of bulk material preparation.

L’objectif du travail de recherche était de mettre en relation dans des sols de cokeries anciennement contaminés, la biodisponibilité de polluants (HAP et/ou métaux lourds), leur génotoxicité et leurs effets populationnels chez le ver de terre Eisenia fetida. Cette étude a montré que les sols étudiés, malgré une contamination similaire, présentaient une toxicité vis-à-vis des vers de terre et d’autres organismes terrestres (plantes, collemboles) totalement différente. Ces différences d’écotoxicité seraient imputables à la biodisponibilité des polluants, différente entre les sols. Cette étude a également montré que le traitement de thermodésorption, appliqué à l’un des sols contaminés, augmentait la biodisponibilité des métaux lourds. Le traitement de thermodésorption modifierait à la fois 1) la nature et la composition de la matière organique du sol, 2) la spéciation des métaux lourds, 3) les liens entre la matière organique et les métaux, les rendant plus biodisponibles et génotoxiques vis-à-vis des vers de terre. L’approche biologique-écotoxicologique, qui prend en considération la biodisponibilité des polluants, se révèle donc essentielle en complément de l’approche physico-chimique dans l’évaluation 1) des risques et 2) de l’efficacité de remédiation des sols contaminés. Cette étude a également montré que la mesure des dommages à l’ADN des coelomocytes de vers de terre est un biomarqueur pertinent dans l’évaluation de la génotoxicité des polluants des sols. Ce biomarqueur de génotoxicité peut être utilisé en tant qu’indicateur de biodisponibilité des polluants. Il s’est révélé plus sensible que la survie et au moins aussi sensible que la reproduction, qui sont deux paramètres étudiés classiquement chez les vers de terre. Ce biomarqueur de génotoxicité pourrait être utilisé en tant qu’indicateur précoce de perturbations physiologiques, même si le lien mécanistique entre les dommages à l’ADN et les répercussions sur la reproduction des vers de terre nécessite des recherches ultérieures<br>The aim of this work research was to show in formerly-contaminated coking plant soils a relationship between the bioavailability of soil pollutants (PAH and/or heavy metals), their genotoxicity and their populational effects in the Eisenia fetida earthworm. This study showed that despite a similar contamination studied soils exhibited a great difference in ecotoxicity to earthworms and other terrestrial organisms (plants, springtails). Differences in ecotoxicity of soils would be attributable to bioavailability of soil pollutants which is different between soils. This study also showed that thermal desorption applied on one of the contaminated soils increased bioavailability of heavy metals. Thermal desorption would modify 1) the nature and composition of soil organic matter, 2) the speciation of heavy metals, 3) links between soil organic matter and heavy metals, rendering them more bioavailable and genotoxic to earthworms. The biological-ecotoxicological approach, which takes into consideration the bioavailability of soil pollutants, reveals to be necessary in addition of the physico-chemical approach in the evaluation of 1) risks and 2) remediation efficiency of contaminated soils. This study also showed that the measure of DNA damage in coelomocytes of earthworms is a relevant biomarker in the evaluation of genotoxicity of soil pollutants. This biomarker of genotoxicity can be used as indicator of bioavailability of soil pollutants. It revealed more sensitive than survival and as sensitive as reproduction, which are classical endpoints measured in earthworms. This biomarker of genotoxicity could be used as early indicator of physiological disturbances, even if the mechanistic link between DNA damage and effects on reproduction require further studies

Les hydrocarbures aromatiques polycycliques (HAP) dans l'atmosphère sont largement étudiés depuis de nombreuses années, en raison de l'impact sanitaire de ces composés sur l'homme. Du fait de leurs propriétés physico-chimiques, les HAP se répartissent dans les phases gazeuses et particulaires. Cette partition gaz-particule influe sur leur devenir (transport et réactivité) et sur leur impact sanitaire. Ceci rend nécessaire le prélèvement simultané dans les deux phases. Par ailleurs le parlement européen (directive fille n°2004/107/CE) a récemment décidé qu'ils devaient faire l'objet d'une surveillance et le benzo(a)pyrène (BaP) a été choisi comme étant représentatif de cette classe de composés. Dans les cas d'une étude gaz-particule des HAP ou d'un suivi réglementaire (du B(a)P en phase particulaire) la mesure est généralement effectuée par préleveur conventionnel haut volume. Or, de nombreux auteurs ont montré que ce type de préleveur engendrait de multiples artefacts. <br />Ce travail a pour objectif d'améliorer la mesure biphasique des HAP (et plus généralement des composés organiques semivolatils) en validant un tube dénudeur préalablement calibré en laboratoire. Pour cela nous avons réalisé plusieurs campagnes de terrain afin de comparer le préleveur dénudeur au préleveur conventionnel. Les résultats nous ont permis d'observer des différences parfois très importantes entre les préleveurs notamment pour les HAP les plus réactifs (dont le BaP). Ceci semble indiquer une dégradation des HAP particulaires sur le filtre du préleveur conventionnel tandis que le filtre du préleveur dénudeur est protégé des oxydants gazeux par le tube dénudeur. Néanmoins, l'ampleur de cette dégradation n'est pas une fonction linéaire de la quantité d'oxydants. Elle semble être influencé par d'autres paramètres, tels que l'état de "vieillissement" de la particule. Enfin nous avons conçu et réalisé un dispositif expérimental permettant d'étudier la dégradation potentielle des HAP à l'intérieur du tube durant le prélèvement. Cette étude a été réalisée pour le naphtalène avec l'ozone comme oxydant.

L'écotoxicité d'un sol contaminé par les HAP et provenant d'une ancienne cokerie a été étudiée. La contamination du sol par les 16 HAP s'élevait à 2634  241 mg/kg de sol exprimé en poids sec. Des métaux ont été trouvés également mais à concentration faible, de l'ordre des niveaux géologiques en Lorraine, à l'exception du mercure. Les résultats de toxicité des lixiviats soulignent la sensibilité des deux essais de toxicité chronique - sur la reproduction des cladocères et la division algale. Un caractère mutagène du lixiviat a été enregistré avec le test d'Ames et le test Mutatox ; mais aucune réponse n'a été notée avec le test Umu moins sensible. La germination des plantes testées n'est pas affectée par le sol de cokerie, contrairement à la croissance. Les résultats des essais d'écotoxicité terrestre témoignent d'une toxicité élevée du sol étudié sur la survie et la reproduction des collemboles, sur la reproduction des vers de terre et la survie des juvéniles. L'influence du sol de dilution utilisé pour tester différentes concentrations du sol contaminé a été étudiée en comparant un sol contrôle artificiel (ISO) et un sol naturel de prairie. La comparaison des réponses des invertébrés au sol de cokerie fait apparaître une sensibilité plus élevée en sol artificiel ISO qu'en sol naturel. Il ne semble pas que le transfert des HAP du sol à la biomasse végétale ou à celle des invertébrés pose des problèmes d'accumulation, compte tenu des facteurs enregistrés nettement inférieurs à 1. Les essais de bioaccumulation sur vers de terre ont montré que les HAP lourds (5 cycles et plus) étaient plus fortement accumulés que les légers (3 et 4 cycles)<br>A cokery soil polluted by PAHs was assessed for its toxicity and genotoxicity to soil and aquatic organisms. Total mean 16 PAH concentration was determined to 2634  241 mg/kg d. W. The heavy metals were in the range of the respective regional reference values. The effective concentration (EC) values based on concentration-response relationships were calculated. Toxicity of water extracts in chronic bioassays (algal growth and reproduction of C. Dubia) was high compared to acute toxicity (bacterial luminescence and daphnid viability). The Ames and Mutatox tests indicated mutagenicity of water extracts, while no response was found with the Umu test showing lower sensitivity. Germination of the tested plant species was not affected, contrary to plant growth. Fresh biomass was a more sensitive parameter than dry biomass. The results of terrestrial toxicity showed that toxic effect of contaminated soil was high, when survival and reproduction of collembola, reproduction of earthworm and survival of juvenile earthworm were measured. Different concentrations of the contaminated soil mixed with the artificial ISO or loamy natural soil were tested to determine influence of the control soil on toxicity. There was a significant trend that toxicity of contaminated soil was lower in the natural soil tested than in ISO, when reproduction of collembola and earthworm was studied. The transfer of PAHs from contaminated soil to biota (earthworm and plant) was inferior to 1, indicating no major problem in trophic chains. The earthworm bioaccumulation of high- molecular-weight PAHs with 5-6 aromatic rings was higher than the one of low-molecular-weight PAHs with 3-4 aromatic rings

Le but de ce travail a été de caractériser le devenir des HAP dans des sols crayeux. Les échantillons de craie ont été prélevés à différentes profondeurs sur le site d'une ancienne cokerie de la région Nord- Pas de Calais. Les phénomènes de sorption ont été caractérisés le naphtalène, le phénanthrène et le benzo[a]pyrène et deux matrices solides, la craie et le carbonate de calcium. La cinétique d'adsorption peut être décomposée en deux étapes (phases rapide et lente), et simulée correctement par un modèle double site, laissant supposer l'existence de deux types de site d'adsorption différant par leur accessibilité. Le facteur cinétique et le coefficient de distribution entre les phases solide et liquide sont variables en fonction de la nature du composé (notamment caractère hydrophobe et taille de la molécule) et de la matrice (composition et texture). Le potentiel de biodégradation des HAP a été testé en utilisant le 14C phénanthrène et le 14C benzo[a]pyrène sur cinq échantillons de craie. Les résultats obtenus reflètent la présence d'une microflore indigène apte à dégrader les HAP de faible poids moléculaire. Le dénombrement et l'identification de la population dégradant le naphtalène et le phénanthrène ont mis en évidence une population spécifique abondante et diversifiée. Le couplage des phénomènes de sorption et de biodégradation a permis d'étudier l'effet de l'adsorption sur la minéralisation du composé. Les essais ont montré que l'adsorption affecte nettement la biodégradation en limitant l'accessibilité des composés. En conclusion, cette étude montre que les processus de sorption et de biodégradation peuvent exister dans les sols crayeux du site étudié, et limiter la mobilité de composés organiques hydrophobes tels que les HAP. Ces observations de laboratoire peuvent être interprétées comme un indice de l'existence d'une possible atténuation naturelle d'une pollution par les HAP de la formation crayeuse du sous-sol des anciennes cokeries ou usines à gaz<br>Polycyclic aromatic hydrocarbons (PAH) are common pollutants in the soils of former coke facilities and MGP sites. In order to understand the behavior and the fate of those compounds in chalky soils, mobility and biodegradation processes were studied using soil material sampled at different depths on a coke plant site. Sorption processes were characterized under saturated conditions for three contaminants, naphthalene, phenanthrene and benzo[a]pyrène, with two inorganic matrices, chalk and calcium carbonate. Study of kinetic reflects a very fast process with an irreversible retention of the compound in the solid matrices. P AH's biodegradation was tested in microcosms using C 14 phenanthrene and five soils with P AH's contents ranging from 1 to 300 mg/kg of dried soil. For this compound, the mineralisation is a rapid process, without latency state, reflecting the existence of an indigenous specific micro flora in chalky soils, fitted to degrade some PAH. The accounted total soil micro flora is abundant in any sampled soil reflecting an important microbial activity (109 to 10 10 UFC/g). In relation to an aggression of naphthalene and phenanthrene, the behavior of the indigenous microbial population was characterized. Bacteria are degrading in any soil sample. For those compounds, the accounted degrading micro flora is abundant ( 105 to 109 UFC/g of dried soil) showing that de graders are ubiquitous, and reflects the presence of a biodegradation potential at all different depths. The effect of sorption processes on biodegradation was studied in microcosm using C14 naphthalene and C14 phenanthrene. For those compounds, sorption affects the biodegradation with a decrease of kinetic, reflecting a decrease of pollutant accessibility for de graders. As a conclusion, this study suggests that the sorption and biodegradation processes occurring on site can reduce the pollutant mobility in a chalky environment

Ce travail a eu pour objectif l’étude de la dégradation hétérogène d’hydrocarbures aromatiques polycycliques (HAP) et de polybromo diphényles éthers (PBDE) en présence d’oxydants atmosphériques. La réactivité du benzo[a]pyrène et du dibenzo[a,l]pyrène pour les HAP et du BDE 153 (hexabromé) et du BDE 209 (décabromé) pour les PBDE, a été étudiée lorsqu’ils sont adsorbés sur des particules minérales modèles (des particules de silice) et exposés à l’ozone, au dioxyde d’azote ou aux radicaux hydroxyles. L’extraction et l’analyse de ces composés ont été optimisées. Le suivi de l’évolution de la concentration en composé adsorbé en fonction de son temps d’exposition à l’oxydant a permis de déterminer les paramètres cinétiques de chaque composé, pour chaque oxydant. L’influence de la concentration particulaire et de la structure moléculaire sur la réactivité a ainsi été évaluée et débattue. L’identification des produits de réactions majoritaires a été effectuée pour les réactions des HAP avec le dioxyde d’azote et les radicaux hydroxyles et les réactions des PBDE avec les radicaux hydroxyles. Enfin, l’étude de la génotoxicité des extraits de particules pour différents temps d’exposition aux oxydants a été réalisée. Cette étude regroupe une approche cinétique, une approche mécanistique et une approche toxicologique<br>This work deals with the heterogeneous degradation of polycyclic aromatic hydrocarbons (PAH) and polybromo diphenyls ethers (PBDE) with various atmospheric oxidants. The reactivity of Benzo[a]pyrene (BaP) and dibenzo[a,l]pyrene (DalP) for PAH and BDE 153 and BDE 209 for PBDE, had been studied when they are adsorbed on a model of mineral particles (silica particles) and exposed to ozone, nitrogen dioxide and hydroxyl radical. Extraction and analyse of compounds were optimised. For all studied reactions, kinetic parameters were obtained following the remaining concentration of compound for different exposure times. Influence of the particle loading and molecular structure on the reactivity had been evaluated and discussed. Identification of the main degradation products was made for the reaction of PAH with nitrogen dioxide and hydroxyl radical and for the reaction of PBDE with hydroxyl radical. Then, the genotoxicity of the particle extracts was made for different exposure times. This study talks about kinetics, mechanistic and genotoxicity

Thèse (M. Sc.) - Université du Québec à Rimouski, 2006.<br>Titre de lʹécran-titre (visionné le 23 avril 2007). Mémoire présenté à l'Université du Québec à Rimouski comme exigence partielle du programme de maîtrise en océanographie. CaQRU CaQRU Bibliogr.: f. 58-67. Paraît aussi en éd. imprimée. CaQRU

Thesis (M.A.) PLEASE NOTE: Boston University Libraries did not receive an Authorization To Manage form for this thesis or dissertation. It is therefore not openly accessible, though it may be available by request. If you are the author or principal advisor of this work and would like to request open access for it, please contact us at open-help@bu.edu. Thank you.<br>Hospital acquired pneumonia (HAP) causes significant mortality and morbidity and is now no longer reimbursed by Centers for Medicare and Medicaid (CMS). For all of these reasons, hospitals want to minimize their HAP rates. Aggressive oral care (tooth brushing 3 times a day) has been shown to reduce the incidence of HAP in the intensive care unit setting, but this has not been tested in the acute care setting, in which patients are more stable, less sick, and more ambulatory. In an attempt to address HAP rates in acute care settings, this clinical trial entailed providing all patients in four wards with a 3 times per day tooth-brushing oral care protocol, which was implemented or supervised by the nurses on each ward. Six matched wards on a separate campus that received normal standard of care served as controls. The goal of this clinical trial was to cut the pneumonia rate in half, from 2% to 1%. This clinical trial was conducted to determine whether an oral care regimen would reduce the incidence of aspiration pneumonia over the three months of intervention in the experimental group (HAC) versus the control group (ENC) from Nov 5, 2012 to Feb 15, 2013.<br>2031-01-01

Les hydrocarbures aromatiques polycycliques (HAP) sont produits au cours de processus de pyrolyse et de combustion. Ils se retrouvent dans les sols, souvent à des concentrations importantes. La réhabilitation d'anciens sites pollués par des HAP nécessite un diagnostic initial de la pollution. Dans cette optique, une procédure analytique basée sur la spectrophotométrie UV a été développée et validée sur environ 80 échantillons de sol. Les différentes méthodes d'exploitation des spectres UV des extraits organiques de sol ont conduit au développement d'outils simples et rapides de caractérisation. La méthodologie de laboratoire a été adaptée au terrain et a conduit à la réalisation d'un kit de caractérisation rapide des HAP. L'ensemble des résultats est donné en 20 minutes.

Dans le cadre de la valorisation agricole des déchets organiques, l'augmentation de la disponibilité des hydrocarbures aromatiques polycycliques (HAP) induite par l'introduction de matière organique dans un sol fait l'objet de nos travaux. Tout d'abord, le partage des HAP avec la matière organique d'un sol et d'une boue de station d'épuration modèles en mélanges a été étudié à l'aide d'extractions et de cinétiques d'adsorption (Kd méthanol). Dans un second temps, à partir d'un dispositif en incubateurs, l'évolution de la disponibilité des HAP dans un mélange boue:terre a été étudiée sur une période de 185 jours. Enfin, la disponibilité des HAP pour les végétaux en présence de boue résiduaire a été étudiée à partir d'un dispositif en vases de végétation et sur site. Les résultats montrent que le Kd méthanol et l'extractibilité des HAP dans un mélange de terre et de boue sont proportionnels au taux de carbone organique total et au temps d'incubation. La présence de boues conduit à l'immobilisation d'une plus faible quantité de HAP. La disponibilité des HAP à partir d'un mélange boue:terre est limitée par la présence de boues et de cations tels que le mercure mercurique. Il semble que la matière organique des boues soit plus lessivable que celle du sol entraînant un risque accru de dispersion des micropolluants dans l'environnement. La valorisation des déchets organiques en agriculture, telle qu'elle est actuellement pratiquée en France, ne présente pas d'effet direct sur la mobilité et la disponibilité des HAP dans le sol. Cependant un effet à long terme sur la qualité de l'eau et du sol est à craindre. La limitation des flux de HAP vers les surfaces agricole constituerait une réponse sociétale<br>The aim of this work is to understand how the valorisation of urban sewage sludges on soils can play on polycyclic aromatic hydrocarbons (PARs) mobility in soils. First, extractions and adsorption kinetics have been envolved in order to study P AHs affinities with organic matters of a sewage sludge and a soil. Second, PARs mobility has been studied during a 185 days long incubation experiment. Then, PARs disponibility for plants has been studied with greenhouse cultivated plants and wild plants grown on a sewage sludge storage plateform. These experiments shown that adsorption and extractibility of PARs is linked to the soil total organic carbon content. Addition of sewage sludge to the soil leeds to less immobilisation of PARs in soil, whereas this addition or mercury addition leeds to less PARs disponibility. The use of sewage sludges for culture fertilisation as it is ruled in France leeds to any direct effect on P AHs mobility and disponibility in soil

Les leptospires sont des bacteries du genre leptospira divise en plusieurs genomospecies dont certaines sont responsables d'une zoonose : la leptospirose. Des recherches anterieures ont permis l'obtention, apres purification, d'une fraction proteique de 32 kda associee a la protection contre cette maladie. Deux mini-sequences ont ete definies. L'analyse d'homologie de ces deux mini-sequences avec une banque de donnees a revele la presence de deux proteines dans la fraction 32 kda. L'existence de ces deux genes a ete confirmee par southern blot dont le profil de restriction concorde avec l'existence des genes hap 1 et ompl1 issus de la banque de donnees. L'analyse de la sequence des produits d'amplification a egalement permis de determiner la presence de ces deux genes hap 1 et ompl1 codant pour deux proteines conservees hap1 et ompl1. Les genes hap1 et ompl1 ont ete clones dans un vecteur procaryote et deux proteines recombinantes ont ete produites. La purification de ces proteines recombinantes a ete abordee par la strategie de chromatographie d'affinite (his-tag) permettant d'obtenir la proteine recombinante hap1 pure et en quantite suffisante pour des essais d'immunisation. Ces essais n'ont pas permis de montrer une protection significative induite par la proteine hap1, cependant l'anticorps monoclonal 6e5-a2f5 contre la proteine recombinante hap1 a apporte une protection passive significative contre une epreuve virulente. Les genes hap1 et ompl1 ont ete clones dans un vecteur eucaryote afin de realiser des essais d'immunisation a l'aide d'un adenovirus recombinant. Deux essais ont ete menes et ont donne des resultats concordants permettant de dire que hap1 apporte une protection contre une epreuve virulente heterologue de leptospires pathogenes. En revanche, ompl1 n'apporte aucune protection. La proteine hap1 est donc capable d'induire une protection contre la leptospirose. Elle devient un candidat interessant pour de potentiels nouveaux vaccins contre la leptospirose.

La dissipation des Hydrocarbures Aromatiques Polycycliques (HAP), polluants persistants majoritaires des sols de friches industrielles, implique l'action de microorganismes bactériens et fongiques. Cependant, leur contribution relative à la dissipation in situ, en fonction des interactions entre ces microorganismes ou avec les plantes et les polluants, est mal connue et les communautés fongiques ont été très peu étudiées dans de tels environnements. L'objectif de cette thèse était de préciser l'écodynamique des HAP dans la rhizosphère sous l'effet des microorganismes et de leurs interactions et d'évaluer la diversité fongique dans des sols contaminés. La dynamique des communautés fongiques a été étudiée in situ pendant 5 années, par PCR en temps réel et Temporal Temperature Gradient Electrophoresis (TTGE), dans un sol historiquement contaminé en présence ou non de plantes et dans le même sol ayant subi un traitement de remédiation par désorption thermique. Les plantes avaient un effet positif sur l'abondance et la diversité des champignons et étaient le facteur déterminant la structure des communautés fongiques, dominées par les Ascomycètes. D'autre part, des souches bactériennes et fongiques ont été isolées de ce sol et testées pour leur capacité à dégrader les HAP in vitro. Parmi celles-ci, la bactérie Arthrobacter oxydans Pyr2MsHM11 et le champignon Fusarium solani MM1 ont été choisies comme souches modèles pour étudier leur action individuelle ou conjointe sur la dissipation de trois HAP, dans différentes conditions, des plus simples (cultures liquides) aux plus complexes (microcosmes de sol planté en présence d'une microflore). Les résultats ont montré l'importance fondamentale des interactions entre microorganismes, notamment des phénomènes de compétition, pour la croissance des souches modèles et pour l'expression de leurs potentiels de dissipation des HAP<br>The dissipation of Polycyclic Aromatic Hydrocarbons (PAHs), very common and persistant pollutants in soils from industrial wastelands, involve the action of bacterial and fungal microorganisms. However their respective contribution, and the influence of the microbial and plant-microbe interactions on in situ PAH dissipation, are poorly known and fungal communities were scarcely studied in such environments. This work aimed to study the fate of PAHs in rhizosphere under the influence of microorganisms and their interactions and to estimate the fungal diversity in contaminated soils. The dynamic of fungal communities was monitored in situ for 5 years, by real-time PCR and Temporal Temperature Gradient Electrophoresis (TTGE) in an aged PAH-polluted soil and in the same soil treated by thermal desorption. The results showed that plants had a positive effect on fungal abundance and diversity and were the main driver of fungal community structure, dominated by Ascomycetes. Besides, bacterial and fungal strains were isolated from this soil and screened for their ability to dissipate PAHs in vitro. Among them, the bacteria Arthrobacter oxydans Pyr2MsHM11 and the fungus Fusarium solani MM1 were chosen as model strains to study their individual and simultaneous effect on PAH dissipation in different experimental conditions, from liquid cultures to planted soil microcosms with a complex microflora. It was found that interactions between microorganisms, notably competition, had a crucial influence on their growth and on the expression of their PAH dissipation potential

L'échantillonnage passif est une alternative prometteuse à l'échantillonnage ponctuel. Cette technique permet d'accumuler les contaminants présents dans l'eau directement in-situ, intégrant ainsi les variations de concentrations temporelles qui ne sont pas détectables avec l'échantillonnage ponctuel. Cependant la plupart des échantillonneurs commercialisés actuellement utilisent des phases complexes et coûteuses. Ces travaux de thèse ont pour objectif de mettre au point un nouvel échantillonneur intégratif plus robuste et moins coûteux, capable d'échantillonner autant les contaminants métalliques que les composés organiques. Pour cela, l'idée était d'utiliser comme phase adsorbante un minéral naturel poreux doté de fortes capacités d'adsorption ; des zéolithes et une sépiolite naturelle ont été envisagées. Le développement d'un tel dispositif est un processus complexe qui passe tout d'abord par l'étude des capacités d'adsorption des différents solides pour les contaminants métalliques ainsi que pour les composés organiques. La comparaison des capacités d'adsorption des différents solides démontre que la sépiolite est la plus efficace pour la rétention de la majorité des contaminants étudiés. Sur la base de ces résultats la sépiolite est sélectionnée comme phase réceptrice du nouvel échantillonneur. Le déploiement de ces nouveaux dispositifs dans un milieu semi-contrôlé soumis à différents scénarios de contamination met en lumière une importante capacité d'échantillonnage tant pour les métaux que pour les contaminants organiques hydrophiles. Enfin, dans une dernière étape.

L’objectif de cette thèse a été d’évaluer les possibilités de réhabilitation de sols dégradés, contaminés par des HAP ou à faible qualité agronomique (parc à cendres volantes), en couplant la bioremédiation de ces sols à la culture de Miscanthus x giganteus (MxG). Dans un premier temps, la mise au point d’une série de bioessais in vitro au format microplaque a permis de témoigner de la contribution spécifique des exsudats racinaires de MxG et plus particulièrement de la quercétine (identifié parmi les métabolites secondaires racinaires) dans la biostimulation de bactéries HAP-dégradantes. Afin d’appréhender l’effet rhizosphérique de MxG sur la qualité des sols, des cultures en microcosmes de sols reconstitués puis de sols de friches ont été menées en laboratoire. D’une part, la dissipation significative des HAP à 4 cycles a pu être mesurée dans le compartiment racinaire des sols contaminés. D’autre part, l’augmentation des teneurs en carbone organique observée dans les cendres volantes, associée à une dynamisation du cycle de l’azote suggèrent une accélération des processus pédogénétiques liés au « vieillissement » du substrat. En outre, le développement d’un protocole d’extraction et de purification d’acides nucléiques a permis de suivre l’évolution de la diversité des communautés bactériennes des sols par méthode PCR-TTGE des ADNr 16S microbiens. La sélection de phylotypes bactériens a été mise en évidence au niveau rhizosphérique, en particulier à l’interface sol-racine (rhizoplan), soulignant l’influence de processus racinaires sur la structuration des communautés bactériennes in vivo. Enfin, un dernier volet, rendant compte d’expériences exploratoires sur deux saisons de croissance en champs (sols pollués et parc à cendres), a permis de confirmer l’adaptation de MxG à la variété de substrats étudiés, suggérant que sa culture pourrait constituer une alternative d’agriculture durable sur sites contaminés<br>The aim of this work was to investigate the potential of Miscanthus x giganteus (MxG) for PAH polluted soils remediation and fly ash revegetation. In vitro studies through microplate assays demonstrated the contribution of MxG root exudates and particularly of quercetin (following the identification of root secondary metabolites) to the selective biostimulation of PAH-degrading bacteria. To get insights into bioremediation processes and rhizosphere effects on soil quality, microcosm experiments were conducted at a laboratory scale, using artificially reconstituted soils and collected industrial soils. On the one hand, significant dissipations of four-ring PAH were noticed in the rhizosphere of contaminated soils. On the other hand, significant organic carbon and nitrite inputs could be measured in fly ash, indicating a “restart” of nitrogen cycle and suggesting an enhancement of fly ash weathering processes in the long term. Besides, the development of a soil nucleic acid extraction and purification method permitted to study the evolution of bacterial community diversity in all types of soils, based on PCR-TTGE of eubacterial 16S rDNA. Specific enrichments of bacterial phylotypes could be reported in rhizoplanes, confirming root-associated processes on the selection of soil bacterial communities. Finally, plant adaptation to the broad range of studied substrates in situ lead us to suggest that MxG cultivation could be an effective strategy for a new system of sustainable agricultural activities in wasteland soils

Heme-activated proteins (HAPs) are transcription factors that have multiple roles in plant growth and development, such as embryogenesis, flowering time control, and drought tolerance. In the present study I found that HAP3b was also involved in controlling response to cold stress. Transcript profiling and gene expression analyses indicated that HAP3b repressed the CBF3 regulon under normal growth conditions. As a result, plants with HAP3b-overexpressed showed decreased survival rates while plants homozygous for the null allele hap3b showed an improved freezing tolerance compared to wild-type plants. To understand the mechanism of HAP3b in Arabidopsis, i.e. whether it also acts through forming a heterotrimer, the yeast two-hybrid system and the protein coimmunoprecipitation method were used to identify the proteins that could interact with HAP3b. From yeast two-hybrid analyses, it was found that HAP3b could interact with one (At3g14020) of ten HAP2s and all ten HAP5s tested. Further analyses showed that the newly identified HAP2 protein could only interact with two HAP5 proteins, those encoded by At5g63470 and At1g56170. To address whether HAPs also play important roles in major crop plants, HAP3 genes in barley (Hordeum vulgare L.) were identified and characterized. From database sequence analyses, cloning, and sequencing, it was found that barley plants have at least six full-length members in the HAP3 family. Phylogenetic analyses showed that each barley HAP3 was different, forming its own cluster with the HAP3s from other plant species. Each barley HAP3 also showed its own expression pattern in different tissues, at different developmental stages and under various environmental stresses. In particular, TC176294 showed the highest sequence similarity to HAP3b in Arabidopsis and its high expression was associated with flowering. In addition, TC176294 was upregulated by various abiotic stresses and by abscisic acid (ABA). Thus, TC176294 might be a barley ortholog of HAP3b. TC191694 showed the highest sequence similarity to HAP3c and might be a barley ortholog of HAP3c. TC191694 overexpression plants were early flowering compared to HAP3b-overexpression and wild-type plants while overexpression of TC176294 plants were not.

This degree project is a verification of a hand made calculation made by Semcon CAE inGothenburg, Sweden. The main purpose has been to investigate how loads in a pre-tensionedbolt appear and how material displacement and contact pressures in the nuts affect bolt joints.A FEM-model has been created to imitate the reality as much as possible this to verifySemcon’s calculations. The result of the FEM-model has been compared with the result fromSemcon report 87-082-008, see appendix 2. Thus the Semcon original report has beenverified.The results between the Semcon report 87-082-008and the FEM calculations can be seen inchapter 2 and appendix 1.The basic data of the degree exam is the Semcon report and is the starting point of the wholeproject. All data regarding dimensions, geometry, materials and so on is based on the datafrom the Semcon report.A fatigue analysis based on the FEM-results was not conducted. This was due to thesimilarities in result between the previous Semcon report and this study

Orientadores: Marcelo Cristianini, Albert Ibarz<br>Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos<br>Made available in DSpace on 2018-08-19T16:47:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Augusto_PedroEstevesDuarte_D.pdf: 1976096 bytes, checksum: a2886b4fb55c12282722d43633096c70 (MD5) Previous issue date: 2012<br>Resumo: A homogeneização a alta pressão (HAP) tem sido estudada por diversos autores como metodologia não térmica para a conservação de alimentos, especialmente produtos de frutas. Trabalhos realizados com esses produtos e testes industriais indicam aumento de consistência devido a HAP. No entanto, poucos trabalhos da literatura estudam alterações físico-químicas em produtos de frutas devido à HAP, especialmente em relação às características reológicas. A avaliação de tais alterações é essencial não só para o entendimento e dimensionamento do processo, mas também permite a utilização do método para provocar alterações intencionais e desejáveis em alimentos, como aumento de consistência. O presente trabalho estudou o efeito da homogeneização a alta pressão (HAP) nas características reológicas de suco de tomate. Na primeira parte do trabalho, avaliaram-se as propriedades reológicas dependentes do tempo, em estado estacionário e de viscoelasticidade linear de sucos não processados, determinando assim as técnicas e os modelos matemáticos mais adequados para utilização nas demais etapas do projeto. Em seguida avaliou-se o efeito da HAP nas características reológicas de um modelo de soro de suco de tomate. A HAP reduziu a viscosidade do modelo, sendo tal redução modelada como função da pressão de homogeneização (PH). Avaliou-se então o efeito da HAP no suco. A HAP reduziu o tamanho das partículas em suspensão, assim como sua distribuição, promovendo maior interação entre partículas e entre partículas e o soro. Como consequência, resultou em aumento da consistência, tixotropía, comportamento viscoso e elástico dos produtos. O efeito da PH se mostrou assintótico, sendo discutidas as razões para tal, modelando-se os parâmetros obtidos como função da PH. Por fim, avaliou-se o efeito da HAP nas propriedades de deformação e relaxação do suco de tomate. Utilizando o modelo de Burger, identificaram-se os componentes estruturais do suco de tomate associados aos comportamentos reológicos. Dessa forma, o presente trabalho descreveu as mudanças estruturais associadas ao processo que afetam a reologia do produto. Conclui-se que a HAP é uma poderosa ferramenta para promoção de alterações físicas em produtos de frutas<br>Abstract: High pressure homogenization (HPH) has been widely studied as a non-thermal method for food preservation. Industrial assessments and scientific works have demonstrated the consistency increasing in those products due to HPH. However, just a few works in literature have studied the physico-chemical changes in fruit products due HPH processes. The evaluation of rheological changes due to HPH is important not only for process design, but also for using this technology in order to promote desirable changes in food products, such as improvement of its consistency. The present work studied the effect of high pressure homogenization (HPH) on the rheological properties of tomato juice. Firstly, it was evaluated the tomato juice time-dependent, steady-state shear and viscoelastic properties. This first part was carried out in order to evaluate the rheological methods and mathematical models to be used in the work. Then, it was evaluated the effect of HPH on the rheological properties of a tomato juice serum model. The HPH decreased the serum model viscosity, which was modelled as function of the homogenization pressure (PH). The HPH effect on tomato juice was then evaluated. The HPH decreased the suspended particle dimensions and distribution, resulting in higher particle-particle and serum-particle interaction. As a result, it was observed an increasing in product consistency, thixotropy, viscous and elastic behaviour. The effect of PH showed an asymptotic behaviour, which was described and modelled. Finally, it was evaluated the effect of HPH on tomato juice creep and recovery properties. The mechanical Burger model well explained the juice creep compliance, and its parameters were associated to the juice structural components. Therefore, the present work described the tomato juice structural and rheological changes due to HPH processing. It was concluded that the HPH process is a valuable tool to promote physical properties changes in food products<br>Doutorado<br>Tecnologia de Alimentos<br>Doutor em Tecnologia de Alimentos

Les HAP contaminent de nombreux sols de friches industrielles. Leur dissipation par biodégradation est limitée par leur faible disponibilité. Nous avons étudié les facteurs contrôlant cette disponibilité dans les sols ainsi que les variables rhizosphériques qui la font varier. Nous avons préalablement défini que la disponibilité des HAP pouvait être estimée par une extraction en 30 heures sur une résine adsorbante, le Tenax®. Ce protocole a permis de comparer la disponibilité dans trois sols de friche et de déterminer les facteurs de contrôle de celle-ci. Le premier facteur est le diamètre des particules de black carbon qui sont la matrice porteuse de HAP. Ensuite, l’intensité d’agrégation par l’intermédiaire de ciments carbonatés est le deuxième facteur de contrôle important de la disponibilité des HAP. Des expériences de laboratoire ont montré que la disponibilité des HAP peut être influencée par des variables rhizosphériques. Ainsi, l’acidification d’un sol calcaire permet la dissolution des ciments carbonatés et augmente la disponibilité des HAP du fait de la désagrégation. L’alcalinisation quant à elle, augmente la disponibilité en diminuant les forces de sorption et parfois en décondensant la phase organique porteuse de HAP. En plus de son rôle acidifiant, l’acide citrique par ses propriétés complexantes permet d’augmenter la disponibilité des HAP de 40%. Les paramètres modifiés artificiellement au laboratoire ne sont pas toujours aussi facilement contrôlable in situ. Dans des expériences de terrain, nous avons vu qu’une alcalinisation artificielle du sol entraînait l’accroissement de la vitesse de dissipation des HAP. La culture de lupin blanc connu pour exsuder de l’acide citrique dans sa rhizosphère, a permis l’augmentation significative de la dissipation de l’anthracène, résultat très encourageant compte-tenu de la courte durée de culture et la relative phytotoxicité des sols étudiés<br>PAHs are present in many industrial wasteland soils. Their remediation using biological techniques remains limited because of their low availability. This work identifies some of the factors controlling this availability in soil and proposes management strategies able to modify it, focusing on plant assisted treatment. First, we have shown that PAHs availability can be estimated by a 30 hours extraction using a Tenax® resin. The analysis of PAHs availability for three wasteland soils showed that the size of black carbon particles, which is the main PAHs reservoir, and the aggregation intensity are the two main availability controlling factors. Laboratory experimentation also showed that this availability can be influenced by rhizosphere parameters. Acidification of a calcareous soil, in dissolving the carbonated cement, can increase PAHs availability by desaggregation. Soil alkalinisation, in decreasing sorption forces between PAHs and the solid matrix, may also increase availability. Citric acid has an effect even more pronounced than the pH alone. Its chelating properties can increase PAHs availability by 40%. Some of these laboratory results have been confirmed by in situ experiments. Indeed, a white lupine culture was able to increase anthracene dissipation for one of the tested wasteland soil over a 5 months period

Le sujet de la thèse porte sur l'élaboration de nouveaux matériaux MOx (M=Ti,Zr) nanostructurés et fonctionnalisés en surface pour l'élimination des micro-polluants HAP dans des effluents aqueux. Compte tenu de la nature des polluants visés, nous avons choisi de travailler sur des fragments organiques (R) mono- ou poly-aromatiques, pouvant former des complexes de transfert de charge (π-stacking) avec les HAPs en solution, étant donné que ces interactions sont effectives en milieu aqueux. Dans le but d'obtenir un greffage efficace et pérenne, nous avons sélectionné des greffons phosphonates R-P(O)(OH)2 plutôt que carboxylates R-COOH. Ce projet a donc consisté en l'élaboration de différents ligands de type acides phosphoniques comportant au moins une insaturation via une addition d'Aza-Michael. La modification de précurseurs hétéroleptiques a pu conduire à la formation de matériaux hybrides en une seule étape par le procédé sol-gel. Cette approche moléculaire « bottom-up &amp; one pot » a permis l'obtention de nanoparticules cristallisées (pour le titane) et fonctionnalisées en surface de façon contrôlée. Ces nanomatériaux ont ensuite été évalués, seuls ou supportés sur textiles, pour l'élimination de 16 HAP (considérés prioritaires par l'agence américaine EPA). Les matériaux nanocomposites (textiles / oxyde) fonctionnalisés ont démontré les mêmes performances d'adsorption des HAPs que les poudres hybrides nano-structurés, tout en apportant l'avantage supplémentaire de traiter efficacement de plus grands volumes d'eaux pollués en un temps plus court. Enfin ces matériaux peuvent être recyclés ce qui est totalement impossible avec les matériaux carbonés usuels du type charbon actif<br>The subject of the thesis concerns the elaboration of new hybrid nanomaterials Mox (M=Ti, Zr)n for the elimination of PAH micro-pollutants in aqueous effluents. Taking into account the nature of such pollutants, we chose to work on organic fragments (R) mono- or poly-aromatic, which could form complexes or transfer (p-stacking) with the HAPs in solution, given that these interactions are effective in aqueous media. In order to obtain an effective and long-lasting grafting, we selected phosphonates R-P (O)(OH)2 ligands rather than carboxylates ones R-COOH. This poject thus consisted of the elaboration of different ligands of phosphonic acid containing at least one insaturation via an Aza-Michael addition. Heteroleptic molecular precursors were obtained by reaction between metallic alkoxides and various phosphonic acids, and led us hybrid nanomaterials in a single stage by sol-gel process. This molecular approach “bottom-up &amp; one pot” allowed the obtaining of crystallized nanoparticles (for the titanium) and the control of the surface functionalization. The performances of these nanomaterialsThe performances of these nanomaterials were then tested, alone or supported on fabrics, for the elimination of HAP (considered as priority by the American agency EPA). The results of adsorption of the HAPs on the various synthesized nanomaterials show an exceptional efficiency of materials to adsorb 16 HAPs. The nanocomposite materials (textile/oxides) demonstrated the same performances of adsorption of the HAPs as the hybrid nano-structured powders, while bringing the additional benefit to treat effectively bigger volumes of waters polluted within shorter time. Finally these materials can be recycled which is totally impossible with the usual carbon materials such as activated charcoal

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro Tecnológico. Programa de Pós-Graduação em Ciência e Engenharia de Materiais.<br>Made available in DSpace on 2012-10-24T08:47:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 265789.pdf: 5353696 bytes, checksum: a6ec4f2d3cb96d0453078d80ad15513e (MD5)<br>Alguns arcabouços (scaffolds) são fabricados usando polímeros como os poliésteres que podem ser biodegradáveis e biorreabsorvíveis. Para se obter melhores propriedades mecânicas, arcabouços têm sido fabricados utilizando-se uma mistura de polímero e cerâmica. Um parâmetro importante em engenharia de tecido ósseo é porosidade e a interconectividade entre os poros. Nesse trabalho, o método de sinterização foi testado utilizando-se o compósito a base de poli(L-ácido láctico) e hidroxiapatita para obtenção de arcabouços porosos. A caracterização foi realizada utilizando-se microscopia eletrônica de varredura, análise de porosidade e teste de resistência à compressão. Utilizou-se para o PLLA duas faixas granulométricas, 106-212 e 212-300 µm. Para a hidroxiapatita foram utilizadas partículas nanométricas e fibras com razão de aspecto próximo a 40. As concentrações mássicas utilizadas para o compósito PLLA/Hap variaram nas proporções de 90/10, 80/20, 70/30%. A partir da combinação dessas variáveis, constituiu-se um grupo de estudo contendo 12 combinações diferentes. Os resultados obtidos mostraram que as amostras que utilizaram fibras de hidroxiapatita apresentaram tempo de programação isotérmica aproximadamente 4 vezes menor do que as amostras que utilizaram partículas. Esse tempo aumentou em função do aumento do tamanho de partícula polimérica devido à redução da energia de superfície e mobilidade atômica das partículas, e em função do aumento da concentração de hidroxiapatita, que atuou como barreira mecânica dificultando o processo de sinterização. Os resultados obtidos mostraram que é possível controlar o processo de sinterização para obtenção de matrizes tridimensionais. Foram obtidas amostras com poros interconectados, tamanho de poro variando entre 150 e 350 µm e porosidade entre 48 e 61%, sendo que as formulações que utilizaram partículas apresentaram maior porosidade. A resistência mecânica média variou entre 1,7 e 12MPa, valores semelhantes ao do osso trabecular, que varia entre 2 e 12MPa.

The CCAAT binding-factor (CBF) is a transcriptional activator conserved in eukaryotes. The CBF in Saccharomyces cerevisiae is a multimeric heteromer termed the Hap2/3/4/5 complex. Hap4, which contains the activation domain of the complex, is also the regulatory subunit and is known to be transcriptionally controlled by carbon sources. However, little is known about Hap4 regulation. In this report, I identify mechanisms by which Hap4 is regulated, including: (1) transcriptional regulation via two short upstream open reading frames (uORFs) in the 5' leader sequence of HAP4 mRNA; (2) proteasome-dependent degradation of Hap4; and (3) identification of two negative regulators of HAP4 expression, CYC8 and SIN4. I also report differential patterns of Hap4 cellular localization which depends on (1) carbon sources, (2) abundance of Hap4 protein, and (3) presence or absence of mitochondrial DNA (mtDNA).

Els mecanismes de regulació de l'expressió gènica a bactèries, i concretament a "E.coli", han estat àmpliament estudiats, no nomès per la seva importànica per la comprensió del funcionament de la cel.lula bacteriana, sinó també pel seu interès en el desenvolupament de sistemes d'expressió i producció de proteïnes clonades. És evident que el coneixement dels mecanismes que regulen l'expressió gènica a "E.coli" pot facilitar la manipulació d'aquesta bactèria per tal d'utilitzar-la com a hoste amb la finalitat de produir determinades proteïnes d'interès biotecnològic.<br/><br/>El treball que es presenta en aquesta Tesi comprèn diferents aspectes relacionats amb la mutació "hha", especialment pel que fa referència al seu paper regulant l'expressió gènica a "E.coli" i a la utilització d'aquesta mutació i d'altres amb la finalitat d'augmentar la producció de proteïnes heteròlogues.<br/><br/>Una part del treball es va centrar en l'estudi de diferents aspectes del gen "hha". Aquest gen ha estat identificat en funció del seu paper en la modulació de l'expressió de l'alfa-hemolisina clonada al plàsmid multicòpia pANN202·312 (Godessari el al., 1988). Les soques portadores de mutacions en el gen "hha" lenen incrementada la sinlesi d'hemolisina, Aquesta mutació és pleotròpica, causant efectes similars sobre l'expressió d'algunes proteïnes heteròlogues clonades (Nieto et al., 1987; Blanco et al., 1991; Carmona, Tesi Docloral, 1992). El gen "hha" codifica per la proteïna Hha, d'un pes molecular d'aproximadament 8 kDa. Aquesta proteïna està implicada en els mecanismes de regulació de l'expressió de l'hemolisina, acluant a nivell transcripcional. Els darrers estudis sobre el mecanisme pel qual la proteïna Hha modula l'expressió de l'hemolisina suggereixen que la regulació està relacionada amb canvis en la topologia del DNA (Carmona, Tesi Doctoral, 1992). La comparació de les seqüències d'aminoàcids de la proteïna YmoA de "y. enterocolitica" (Cornelis et al" 1991) i de la proteïna Hha va permetre trobar un elevat grau d'homologia. La proteïna YmoA exerceix un paper en la regulació per temperatura de l'expressió de determinats gens implicats en la virulència d'aquesta bactèria. Resultats preliminars semblen indicar que aquesta regulació es produiria per canvis en el grau de superenrotllament del DNA.<br/><br/>S'ha postulat que aquestes dues proleïnes, Hha i YmoA, formarien part d'una nova familia de proteïnes que modularien l'expressió gènica per canvis conformacionals en el DNA (De La Cruz et al., 1992).<br/><br/>En aquest treball s'han completat i comprovat diferents aspectes relacionats amb la caracterització del gen Ma. Mitjançant la utilització de sondes del gen marcades i les tècniques d'amplificació de DNA per la metodologia de la PCR, s'ha localitzat el gen "hha" al cromosoma d'E.coli. A més a més, s'han realitzat estudis enfocats a determinar quina és la distribució d'aquest gen entre diferents soques d'E. coli i d'altres géneres d'enterobactéries: S. typhimurium, S. marcescens, K. pneumoniae i Y. enlerocolitica. Els resultats mostren una distribució pràcticament homogénia entre les soques d'E.coli que s'han utilitzat, mentre que no és detectable a pràcticament cap altra soca d'enterobacléria. El gen "hha" només ha estat detectat a la soca C3 de K. pneumoniae i a la soca V754 de y. enterocolitica. Tenint en compte que tolo i que les proteïnes Hha i YmoA presenten un elevat grau d'homologia, les sondes del gen "hha" no proporcionen senyals d'hibridació amb el cromosoma de Y.enterocolitica, es qüestiona la utililzació de les tècniques d'hibridació de tipus "Southern" i de PCR com a sistemes de detecció de la producción de proteïnes semblants a Hha o YmoA en els microorganismes analitzats.<br/><br/>Donat l'efecte pleotrópic de la mutació "hha", i amb la finalital de modificar el fons genétic d'una soca d'E.coli per tal d'optimitzar l'expressió de proleïnes clonades, es va plantejar l'obtenció de la mutació "hha" a una soca d' E.coli amb genotip recA, ja que les soques "hha" de les que es disposava fins el moment no eren delicients per les funcions de recombinació homòloga, el que pot implicar la inestabilitat dels plàsmids portadors dels gens que es volen expressar. Utilitzant el transposó TnS com a element mutagènic, es van obtenir mutants hha derivats de la soca HB l01. La caracterització d'aquests clons va conduir a l'observaci6 d'un fenomen inesperat. En les successives ressembres de clons "hha" apareixien colònies no productores d'hemolisina. L'estudi d'aquest tipus de clons va permetre determinar que el seu origen es devia a transposicions secundàries de TnS des de la inserció inicial al gen hha cap al gen hlyA, gen estructural de l'hemolisina clonada a pANN202·312. Aquestes insercions impedeixen la sintesi de la toxina i causen el fenotip no productor d'hemolisina.<br/><br/>L'expressió de proteïnes clonades a E.coli és dependent dels mecanismes de regulación de l'expressió gènica d'aquest microorganisme, Aquests mecanismes poden actuar a nivell transcripcional, a nivel d'estabilitat del missatger, a nivel traduccional i a nivell post-traduccional. En aquest darrer nivell s'inclouen els mecanismes de modificactó post-traduccional, que condueixen a la formació de la proteïna activa, o el transport de la proteïna a la seva localització especifica. Però en aquest mateix nivell també es produeixen fenòmens de degradació proteolitica; aquests mecanismes tenen especial importànica quan es volen expressar proteïnes heteròlogues clonades a E.coli, ja que majoritàriament aquestes proteïnes són degradades. A E.coli es coneixen diferents proteases, però se'n sap molt poc del seu paper en la degradació de proteïnes helerologues, i a més en pocs casos s'han relacionat amb el gen que les codifica (Miller, 1987; Gotessman, 1987). Amb la finalitat d'optimitzar una soca d'E.coli per l'expressió de proteïnes heteròlogues, una part d'aquest treball ha consistit en l'intent de localitzar per mutagènesi gens que codifiquin per proteases intracel.lulars. Per això es va triar un model de proteïna heteròloga que és degradada quan s'expressa a E.coli, la proteïna quimèrica ABI508 clonada al plàsmid pJMKam4 (Bishai el al., 1987). Per l'expressió d'aquesta proteïna es va utilitzar la soca d' E.coli Hha·2 ("hha"), ja que l'expressió de la proteïna ABIS08 també és afectada per la pleotropia d'aquesta mutació, produïnt·se un increment de la seva síntesi (Carmona, Tesi Doctoral, 1992). S'ha posat a punt una metodogia de detecció de clons defectius en activitats proteolitiques intracel.lulars. Malgrat els resultats no han conduït a la identificació de cap mutació que afecti alguna proteasa intracel.lular, la metodologia s'ha mostrat vàlida per aquesta finalitat.<br/><br/>D'altra banda es pretenia cercar altres mutacions, diferents d'hha, que afectin gens que modulin l'expressió de proteïnes heteròlogues, de manera que mutacions en aquests gens puguin proporcionar un augment de la seva expressió. Es va triar un model de proteïna heteròloga expressada a E.coli, l'aerolisina d'Aeromonas hydrophila, toxina amb activitat hemolitica, clonada al plàsmid multicòpia pHPC3·700 (Chakraborty el al., 1986; Nieto el al., 1987). Aquesla toxina és secretada al medi extern a "Aeromonas hydrophila" seguint la via de la seqüència senyal. Quan s'expressa a E.coli, l'aerolisina s'acumula al periplasma (Chakraborty el al., 1986; Howard i Buckley, 1986).<br/><br/>Es van fer experiments de mulagènesi de la soca d' E.coli 5K (pHPC3·700) amb Tn5, amb la finalitat de trobar mutacions que poguessin afectar la sintesi o secreció de l'aerolisina. Els experiments de mutagènesi van conduir a l'obtenció de dos mutants, denominats hap-6 i hap-9 (hap per "high aerolysin production"), que presentaven, a diferència de la soca parental, grans halos d'hemòlisi en plaques d'agar-sang. La caracterització preliminar i el mapatge aproximat de les dues mutacions va mostrar que es tractava de mutacions diferents, pel que es va decidir caracteritzar únicament la mutació hap-9, S'ha estudiat l'expressió d'aerolisina per part de la soca mutant CM209 (hap·9). S'ha comprovat que aquesta mutació modifica tant la sintesi d'aquesta proteïna com la seva secreció al medi extern. S'ha demostrat que la sortida d'aerolisina al medi extern no és deguda a una secreció real de la proteïna, ja que va acompanyada de la presència de determinats enzims periplasmàtics al medi extern. S'ha constatat que l'augment en la producción és moderat, aproximadametl de 1,35 vegades més respecte la soca parental. D'altra banda, l'anàlisi de les envoltes de la soca mutant ha permès constatar que a la membrana externa de les cèl.lules de la soca CM209 hi manca la proteïna LamB, present als extractes de la soca parental.<br/><br/>Així mateix, s'ha pogut observar que l'expressió de l'aerolisina, en el cas de la soca CM209, altera la composició de la membrana externa, afectant la presència i quantitat d'algunes proteïnes de baix pes molecular. També ha estat evidenciada la pleotropia de la mulació "hap-g", demostrant que l'expressió d'una altra proteïna heteróloga, una endoglucanasa de Bacillus polymyxa, està incrementada a la soca CM209.<br/><br/>El mapatge de la mutació "hap-g" per conjugació amb soques Hfr::Tn10 i cotransducció de marcadors amb PI , va permetre localitzar la mitació al minut 16,7 del mapa de lligament del cromosoma d'E.coli, L'estudi dels gens censats en aquesta regió va suggerir que els unics gens que podrien estar relacionats amb la mutació "hap·g" eren els gens tolQRAB. Ha estat descrit que mutacions en aquests gens presenten diversos efectes pleotròpics, entre els que cal destacar l'alliberament de proteïnes periplasmàtiques al medi extern (mutacions "Leary", Webster, 1991). Tant l'anàlisi de l'expressió de l'aerolisina a soques mutants pels gens tolA i tolB, com l'espectre de resistències a colicines de la soca CM209, suggereix que la mutació hap-9 correspon a una mutació en un dels gens tolQ, tolR o tolA. Ja ha estat descrit que mutacions en aquests gens poden causar efectes pleotrópics en l'alliberament de proteïnes periplasmàtiques, i que aquesl electe ptl anar acompanyat d'un moderat increment en la seva sintesi (Fognini-Lelebvre i Ponalier, 1984).<br/><br/>Com a part final del treball, s'ha intentat la construcció d'una soca d'E.coli en la que fa combinació de les mutacions hha i hap·9 pugui contribuir a optimitzar l'expressió de proteïnes heterólogues clonades.<br><i>In this work we have studied different aspects concerning the "hha" mutation, and other mutations that could cause an increase in the expression of heterologous proteins cloned into "Escherichia coli". The "hha" gene is involved in regulatory mechanisms of gene expression by changing DNA topology. We have studied the "hha" gene distribution between different strains of "E.coli" and other enteric bacteries: S. typhimurium, S. marcescens, K .pneumoniae and Y. enterocolitica. There is a homology of 83% between the Hha protein and YmoA protein of Y. enterocolilica. Using hybridization and PCR techniques, we have detected the "hha" gene in most of "E.coli" strains, in C3 strain of K. pneumoniae and Y754 strain of Y.enterocolilica. Furthermore, we have isolated mutants "hha" in HB101 (recA), by Tn5 mutagenesis. This study has allowed us to determine a phenomenon of instability of Tn5 insertions in the "hha" gene.<br/><br/>On the other hand, we have developed a methodology in order 10 select mutants in intracellular protease activity. In this work we have isolated a mutation, named "hap-9", that increases the expression of the aerolysin of Aeromonas hydrophila cloned into E. coli. This mutation, which causes a leaky phenotype, was mapped near minute 17.<br/><br/>This suggests us a relation between this mutation and tolQRAB genes. The sensibility to colicins of CM209 strain (hap-9) and the expression of aerolysin in mutant strains in "Tol" genes, indicates that the "hap-9" mutation is caused by an insertion of Tn5 in the gene cluster tolQRA. In addition, we have constructed a strain carrying both the "hha" and the "hap-g" mutations, in order to obtain a strain with optimized expression of heterologous proteins cloned into "E.coli".<br/></i>

L'objectif était d'étudier la mobilité des HAP contenus dans un sol industriel pollué. Après une caractérisation physico-chimique du sol, les différentes expériences de lixiviations menées sur ce sol ont montré que la mobilité des polluants concernait à la fois les polluants sous forme dissoute et sous forme particulaire. Malgré une pollution massive du sol, le relargage des HAP sous forme dissoute est très limité en particulier pour des températures voisine de 15°C. Par contre le relargage devient significatif lorsque la fraction particulaire est prise en compte. Tandis que le relargage de la fraction dissoute est régulier dans le temps, le relargage particulaire n'est que temporaire : il apparaît lorsque la force ionique de la solution lixiviante est suffisamment faible et se termine quand le potentiel de HAP particulaires du sol est épuisé<br>The aim of this work was to study the mobility of PAH contained in a polluted industrial soil. After having established the physical and chemical features of the soil, the various lixiviation tests have revealed that both dissolved and particulate pollutants were concerned by the mobility of PAH. In spite of a heavy pollution of the soil, the release of dissolved PAH is limited particularly when the temperature during lixiviation is about 15°C. On the opposite, the release is quite significant when the particulate part is taken into account. The study revealed that the release of the dissolved part is regular, even with time whereas is temporary. It occurs when ionic strength of the leaching is low enough and it ends when there is no more particulate PAH in the soil