Academic literature on the topic 'Grande sous-unité ribosomique'

We report and describe new material of streptaster-bearing Astrophorida sponges collected in Norway: Characellapachastrelloides, Pachastrella nodulosa sp. nov., Poecillastra compressa, Vulcanella cf. aberrans, Thenea abyssorum,Thenea levis, Thenea muricata and Thenea valdiviae. Because many of these species were described in the end of the 19thcentury their original descriptions are often incomplete. The Norwegian specimens are the basis for a revision of themorphology, taxonomy and distribution of these species. These are the first records of C. pachastrelloides and V. cf.aberrans from the Norwegian coast. Pachastrella nodulosa sp. nov. differs from Pachastrella monilifera by (i) its knobbysurface and (ii) the absence of large oxeas, (iii) its amphiasters have on average less actines and are less spiny, finally (iv)microxeas are rare and with a distinct morphology (although there is some doubt concerning their origin). In the presentstudy, Characella tuberosa (from South Africa), Pachastrella abyssi (from the North-West Atlantic) and Thenea schmidti(from the North-East Atlantic) are resurrected. To help their future identifications, all the Norwegian species describedwere associated with DNA barcodes: a cytochrome c oxidase subunit I (COI) gene partial fragment and/or a 28S ribosomalgene partial fragment (C1–D2 domains). Furthermore, a key to the streptaster-bearing Astrophorida of the North-East Atlantic and the Mediterranean Sea is also given (lithistids not included).Nous signalons la présence et décrivons des spécimens d’Astrophorida à streptasters nouvellement récoltés en Norvège:Characella pachastrelloides, Pachastrella nodulosa sp. nov., Poecillastra compressa, Vulcanella cf. aberrans, Theneaabyssorum, Thenea levis, Thenea muricata et Thenea valdiviae. Plusieurs de ces espèces ont été décrites de manièreincomplète à la fin du 19ème siècle. Les spécimens norvégiens sont l’occasion de réviser la morphologie, la taxonomie etla distribution de ces espèces. C’est la première fois que C. pachastrelloides et V. cf. aberrans sont mentionnés sur la côtenorvégienne. Pachastrella nodulosa sp. nov. se distingue de Pachastrella monilifera par (i) sa surface noduleuse et (ii)l’absence de grands oxes, (iii) ses amphiasters ont en moyenne moins d’actines et sont moins épineux, enfin (iv) lesmicroxes sont rares et ont une morphologie distincte (bien qu’il y ait encore des doutes sur leur origine). Au cours de notreétude, Characella tuberosa (d’Afrique du Sud), Pachastrella abyssi (de l’Atlantique Nord-Ouest) et Thenea schmidti (del’Atlantique Nord-Est) sont ressuscités. Afin d’aider leurs identifications futures, toutes les espèces de Norvège décritesont été associées à des code-barres moléculaires: un fragment partiel du gène de la sous-unité I du cytochrome c oxydase(COI) et/ou un fragment partiel du gène ribosomique 28S (domaines C1-D2). De plus, une clé pour identifier les Astrophorida à streptasters de l’Atlantique Nord-Est et de Méditerrannée est également fournie (lithistides non inclus).

Les travaux de ce mémoire portent sur la dynamique d'assemblage, de dissociation et de recyclage des protéines impliquées dans la biogenèse de la grande sous-unité ribosomique chez la levure Saccharomyces cerevisiae. Ils permettent une meilleure compréhension de deux points de contrôle de cette voie métabolique, l'un dans le noyau, l'autre dans le cytoplasme.
Nous avons montré que la protéine nucléaire Nsa2, extrêmement conservée chez les Eucaryotes, est requise pour la maturation correcte de l'intermédiaire d'ARN ribosomique 27SB. Nsa2 est un facteur instable et régulé en fonction de l'activité de la biogenèse des ribosomes ; à ce titre, il pourrait centraliser différents signaux de contrôle de la voie métabolique. Par ailleurs, la technique de SILAC nous a permis de définir des groupes de facteurs pré-ribosomiques précoces ou tardifs par rapport au point d'action de Nsa2.
Dans le cytoplasme, nous avons mis en évidence un réseau de protéines marquant la transition entre la fin de la biogenèse de la grande sous-unité et l'initiation de la traduction. La protéine cytoplasmique Rei1 et la karyophérine Kap121 sont requises pour le recyclage du dimère de facteurs navettes Arx1-Alb1, du cytoplasme vers le noyau. Ce recyclage conditionne la dissociation entre le facteur d'anti-association Tif6 et la grande sous-unité ribosomique, qui peut dès lors se lier à la petite sous-unité ribosomique et participer à la traduction.

Les travaux de ce mémoire portent sur la dynamique d'assemblage, de dissociation et de recyclage des protéines impliquées dans la biogenèse de la grande sous-unité ribosomique chez la levure Saccharomyces cerevisiae. Ils permettent une meilleure compréhension de deux points de contrôle de cette voie métabolique, l'un dans le noyau, l'autre dans le cytoplasme. Nous avons montré que la protéine nucléaire Nsa2, extrêmement conservée chez les Eucaryotes, est requise pour la maturation correcte de l'intermédiaire d'ARN ribosomique 27SB. Nsa2 est un facteur instable et régulé en fonction de l'activité de la biogenèse des ribosomes ; à ce titre, il pourrait centraliser différents signaux de contrôle de la voie métabolique. Par ailleurs, la technique de SILAC nous a permis de définir des groupes de facteurs pré-ribosomiques précoces ou tardifs par rapport au point d'action de Nsa2. Dans le cytoplasme, nous avons mis en évidence un réseau de protéines marquant la transition entre la fin de la biogenèse de la grande sous-unité et l'initiation de la traduction. La protéine cytoplasmique Rei1 et la karyophérine Kap121 sont requises pour le recyclage du dimère de facteurs navettes Arx1-Alb1, du cytoplasme vers le noyau. Ce recyclage conditionne la dissociation entre le facteur d'anti-association Tif6 et la grande sous-unité ribosomique, qui peut dès lors se lier à la petite sous-unité ribosomique et participer à la traduction
This work focuses on the dynamics of assembly, dissociation and recycling of proteins involved in the biogenesis of the large ribosomal subunit in Saccharomyces cerevisiae. It sheds some light on two control points in this metabolic pathway, localised in the nucleus and the cytoplasm respectively. We have shown that the nuclear protein Nsa2, which is very conserved throughout the eukaryotic kingdom, is required for the correct maturation of the 27SB ribosomal RNA precursor. Nsa2 is an unstable factor, regulated in correlation with the activity of ribosome biogenesis; it thus constitutes a good candidate for the integration of various signals resulting in the regulation of this metabolic pathway. Besides, using the SILAC technique, we could define groups of early or late acting factors relative to the Nsa2 action time. In the cytoplasm, we identified a protein network, which marks the end of ribosome biogenesis and triggers the entry of new ribosomal subunits into translation. The cytoplasmic protein Rei1 and the karyopherin Kap121 are both required for the recycling from the cytoplasm to the nucleus of a dimer of shuttling factors, Arx1-Alb1. This recycling enables the dissociation of the anti-association factor Tif6 from the large ribosomal subunit, which can consequently bind the small ribosomal subunit and enter translation

La synthèse de sous-unités ribosomiques eucaryotes implique l'assemblage et la maturation de particules précurseurs complexes (particules pré-ribosomiques) contenant des précurseurs de l'ARN ribosomique (ARNr), des protéines ribosomiques (RP ou r-protéines) et une pléthore de facteurs d'assemblage et de maturation (AMF). La première partie de ma thèse à porté sur l'hétérodimère BXDC1-RRS1. BXDC1 et RRS1 sont les homologues humains des facteurs d'assemblage et de maturation de la levure Rpf2 et Rrs1, respectivement. Chez S. cerevisiae, Rpf2 et Rrs1 sont impliqués dans le recrutement de la 5S RNP dans les particules pré-60S. De plus, des études récentes menées dans mon équipe d'accueil à Toulouse ont identifié l'hétérodimère Rpf2-Rrs1 comme un nouveau complexe nucléolaire impliqué dans la régulation de la transcription de Pol I dans les cellules de levure. Dans les cellules humaines, BXDC1 et RRS1 sont également impliqués dans l'incorporation de la 5S RNP dans les pré-ribosomes et jouent en outre un rôle central dans la coordination entre la synthèse des ribosomes et la progression du cycle cellulaire. Ce projet visait à déterminer si, à l'instar de son homologue de levure, le complexe BXDC1 / RRS1 est également impliqué dans la régulation de la transcription de Pol I dans les cellules humaines. Nous avons utilisé des tests d'immunoprécipitation de la chromatine (ChIP) pour déterminer si BXDC1 interagit avec l'ADNr. Nous avons également testé si l'absence de BXDC1 affecte l'association de l'ARN Pol I avec l'ADNr. Malheureusement, nous n'avons pas réussi à démontrer une interaction entre BXDC1 et ADNr et en outre, l'interaction Pol I avec l'ADNr n'a pas été affectée lors de la depletion de BXDC1 médiée par l'ARNi. Ces données obtenues ne nous ont pas encouragés à approfondir cette partie de ma thèse. La deuxième partie de ma thèse a consisté à etudier la fonction du snoARN a boîte C/D snR190 et son interaction avec la DEAD-box ATPase Dbp7 chez la levure. SnR190 a longtemps été prédit d'agir comme un guide de méthylation snoRNA ciblant un nucléotide du centre peptidyl transférase (PTC) de l'ARNr 25S, bien que la méthylation cible n'ait jamais été détectée. Ce snoARN interagit préférentiellement avec un module protéique composé de cinq facteurs appelés "complexe Npa1", suggéré de jouer un rôle clé dans la compaction de l'ARNr 25S au sein des particules pré-60S précoces. Nous montrons que snR190 est nécessaire pour une prolifération optimale des levures et une maturation efficace des particules pré-60S précoces. Nous proposons que snR190 fonctionne comme un nouveau snoARN chaperon, qui coopère avec le complexe Npa1 pour favoriser la compaction du pré-ARNr dans les premières particules pré-60S, grâce à deux éléments antisens conservés de manière évolutive. Notre étude a en outre révélé un nouveau lien génétique entre snR190 et l'hélicase ARN Dbp7, qui présente des interactions génétiques avec tous les membres du complexe Npa1. Nous montrons en outre que l'absence de Dbp7 conduit à une rétention aberrante dans les particules pré-60S de snR190 et plusieurs snoARNs guides de modification ciblant la région PTC de l'ARNr 25S. De plus, le knock-out de snR190 dans une souche dépourvue de Dbp7 atténue partiellement son défaut de croissance et restaure dans une certaine mesure la maturation précoce des particules pré-60S. Nous proposons que l'hélicase ARN Dbp7 régule l'appariement de bases dynamique entre snR190 et le pré-ARNr au sein des premières particules pré-60S, participant ainsi à la structuration de la région PTC de la grande sous-unité ribosomique
Synthesis of eukaryotic ribosomal subunits involves assembly and maturation of complex precursor particles (pre-ribosomal particles) containing ribosomal RNA (rRNA) precursors, ribosomal proteins (RPs or r-proteins) and a plethora of assembly and maturation factors (AMFs). The first part of my thesis focused on the BXDC1-RRS1 heterodimer. BXDC1 and RRS1 are the human homologues of the yeast assembly and maturation factors Rpf2 and Rrs1, respectively. In S. cerevisiae, Rpf2 and Rrs1 are involved in the recruitment of the 5S RNP into pre-60S particles. Moreover, recent studies performed in my host team in Toulouse identified the Rpf2-Rrs1 heterodimer as a novel nucleolar complex involved in the regulation of Pol I transcription in yeast cells. In human cells, BXDC1 and RRS1 are also implicated in the incorporation of the 5S RNP into pre-ribosomes and further plays a central role in the coordination between ribosome synthesis and the cell cycle progression. This project aimed to determine whether, similarly to its yeast counterpart, the BXDC1/RRS1 complex is also involved in the regulation of Pol I transcription in human cells. We used Chromatin Immunoprecipitation (ChIP) assays to determine whether BXDC1 interacts with rDNA. We also tested if the absence of BXDC1 affects RNA Pol I association with rDNA. Unfortunately, we failed to demonstrate any interaction between BXDC1 and rDNA and furthermore, Pol I interaction with rDNA was not affected upon RNAi-mediated depletion of BXDC1. These obtained data did not encourage us to further explore this part of my thesis. The second part of my thesis consisted in deciphering the function of the box C/D snoRNA snR190 and its interplay with the DEAD-box ATPase Dbp7 in yeast. snR190 has long been predicted to act as a methylation guide snoRNA targeting a nucleotide of the peptidyl transferase center (PTC) of the 25S rRNA, although the target methylation has never been detected. This snoRNA interacts preferentially with a protein module composed of five factors called the "Npa1 complex", suggested to play a key role in the compaction of the 25S rRNA within the earliest pre-60S particles. We show that snR190 is required for optimal yeast proliferation and efficient maturation of early pre-60S particles. We propose that snR190 functions as a novel snoRNA chaperone, which cooperates with the Npa1 complex to promote the compaction of the pre-rRNA in the first pre-60S particles, through two evolutionarily conserved antisense elements. Our study further revealed a novel genetic link between snR190 and the Dbp7 RNA helicase, which displays genetic interactions with all members of the Npa1 complex. We further show that the absence of Dbp7 leads to an aberrant retention within pre-60S particles of snR190 and several modification guide snoRNAs targeting the PTC region of the 25S rRNA. In addition, knockout of snR190 in a strain lacking Dbp7 partially alleviates its growth defect and restores early pre-60S particle maturation to some extent. We propose that the Dbp7 RNA helicase regulates the dynamic base-pairing between snR190 and the pre-rRNA within the earliest pre-60S particles, thereby participating in the structuring of the PTC region of the large ribosomal subunit

L'activité de traduction des ribosomes est portée directement par les ARN ribosomiques (ARNr) qui composent ses deux sous-unités. La grande sous-unité (60S) est formée par les ARNr 25S, 5.8S et 5S et la petite sous-unité (40S) est formée par l'ARNr 18S. Un des principaux buts de la biogenèse des ribosomes est de convertir les ARNr en molécules correctement repliées et donc actives. La production des sous-unités ribosomiques est le résultat d'étapes successives de maturation de particules précurseurs, les pré-60S et les pré-40S, précurseurs de la grande (60S) et la petite (40S) sous-unité ribosomique, respectivement. Des protéines ribosomiques, des facteurs d'assemblage (FA) et des petites particules ribonucléoprotéique (snoRNPs) sont impliquées dans ces étapes successives. Ces facteurs jouent des rôles importants dans l'organisation spatiale et le maintien de l'intégrité structurelle des ARNr. Les ARN hélicases forment le plus grand groupe des FA et peuvent moduler les interactions ARN-ARN et ARN-protéine. Elles forment des candidates potentielles du repliement tridimensionnelle des ARNr. Cependant, les mécanismes par lesquels ces enzymes participent à la production des ribosomes restent vagues. Dans cette étude, on se focalise sur la fonction de l'ARN hélicase à boîte DEAD Dbp6 dans la structuration précoce de l'ARNr de la grande sous-unité ribosomique (60S). Dbp6 est essentielle pour la production de la grande sous-unité ribosomique. En son absence la production de la première particule pré-60S est inhibée. Néanmoins, l'importance des activités enzymatiques de Dbp6 pour la production de la première particule pré-60S n'ont pas été évalué et ses substrats ARN n'ont pas été déterminé. Dans notre étude, nous avons démontré que Dbp6 montre les activités biochimiques attendues, tels que l'hydrolyse d'ATP et la liaison à l'ARN. Dbp6 n'a pas montré une activité de dissociation de brins d'ARN (hélicase) dans les conditions testées dans le laboratoire. Nous avons pu identifier et étudier une activité d'association de brins (annealing) qui est contrôlée par l'ATP. En étudiant des mutants de Dbp6 qui ciblent les motifs conservés du cœur hélicase, nous avons établi que l'hydrolyse ATP est importante mais pas essentielle pour la survie cellulaire. Cependant, l'activité d'annealing semble jouer un rôle clé dans la fonction moléculaire de l'enzyme. Nous avons ensuite identifié les substrats in vivo de Dbp6 par l'expérience de pontage aux UV et analyse de l'ADNc (CRAC). Cela a montré que Dbp6 interagie principalement avec des snoARN qui se lient dans la région 5' de l'ARNr 25S et parmi lesquels certains sont des snoARN orphelins qui ne guident pas de modifications chimiques de nucléotides. Ces résultats soutiennent la notion que Dbp6 pourrait participer à l'organisation spatiale de cette région de l'ARNr de la grande sous-unité par l'intermédiaire des snoARN chaperons
The translation activity of ribosomes is directly held by the ribosomal RNAs (rRNAs) composing its two subunits. The large ribosomal subunit (60S) is formed of the 25S, 5.8S and 5S rRNAs and the small ribosomal subunit (40S) of the 18S rRNA. One of the main goals of ribosome biogenesis is to turn the rRNAs into correctly folded and active molecules. The production of the ribosomal subunits is the result of successive processing and maturation steps of precursor particles, the pre-60S and the pre-40S particles, precursors of the large (60S) and small (40S) ribosomal subunits, respectively. Ribosomal proteins (RPs), assembly factors (AFs) and small ribonucleoprotein particles (snoRNPs) are implicated in these successive steps. These factors play important roles in the spatial organization and in maintaining the structural integrity of the rRNAs. RNA helicases form the largest group of AFs and can modulate RNA-RNA and RNA-protein interactions. They form potential candidates for the tridimensional folding of the rRNAs. However, the mechanisms by which these enzymes participate in ribosomal particles production remain vague. In this study, we focus on the DEAD-box RNA helicase Dbp6's function in the early structuring of rRNAs of the large ribosomal subunit (60S). Dbp6 is essential for the production of the large ribosomal subunits. In its absence the production of the first pre-60S particle is impaired. Nevertheless, Dbp6 enzymatic activities' importance for the first pre-60S particle production has not been assessed nor have its RNA substrates been determined. In our study, we demonstrated that Dbp6 displays expected biochemical activities, such as ATP hydrolysis and RNA binding. Dbp6 did not show any RNA strands dissociation activity (helicase activity) in the conditions tested in the laboratory. We were able to identify and study a strand association activity (annealing activity) that is controlled by ATP. By studying Dbp6's mutants targeting the conserved helicase core motifs, we established that ATP hydrolysis is important but not essential for cell survival. However, the annealing activity seems to play a key role in the molecular function of the enzyme. We then identified Dbp6 in vivo substrates by in vivo cross-linking and analysis of cDNA experiment (CRAC). This showed that Dbp6 mostly interacts with snoRNAs that bind the 5' region of the 25S rRNA of which several are orphan snoRNA that do not guide the chemical modification of nucleotides. These findings support the notion that Dbp6 might participate in the spatial organization of this region of the large subunit rRNA by the intermediate of chaperoning snoRNAs

Les ribosomes sont les molécules présentes dans toutes les cellules du règne vivant. Ils résultent de l'assemblage d'ARN ribosomiques (ARNr) et de protéines ribosomiques, constituant des particules ribonucléoprotéiques (RNP). Ils jouent un rôle majeur en décodant l'information génétique contenue dans les ARN messagers (ARNm) afin de les traduire en protéines lors du processus de traduction. La production des ribosomes chez les eucaryotes est initiée par la transcription par l'ARN pol I d'un pré-ARNr ribosomique (pré-ARNr) précurseur des ARNr matures 18S, 5.8S et 25S/28S, qui sera modifié chimiquement et digéré par des endo- et exoribonucléases pour aboutir aux ARNr matures. Le pré-ARNr en cours de synthèse s'associe avec des protéines ribosomiques, des petites particules ribonucléoprotéiques (snoRNP) et des protéines dites " non ribosomiques " conduisant à l'assemblage de la particule 90S initiale. Cette particule est ensuite scindée en particules pré-ribosomiques pré-40S et pré-60S, qui vont suivre des voies de maturation indépendantes pour aboutir aux sous unités ribosomiques 40S et 60S mature. La production des ribosomes eucaryotes requiert l'intervention de plus de 200 protéines dites " non ribosomiques ", qui s'associent avec les particules pré-ribosomiques et sont absentes des ribosomes cytoplasmiques matures. Des données obtenues en collaboration suggèrent que cinq protéines non-ribosomiques impliquées dans les étapes précoces de la formation de la grande sous-unité ribosomique, Npa1p, Npa2p, Nop8p, Dbp6p et Rsa3p forment un complexe en l'absence d'ARN ribosomique. Il s'agirait du plus gros complexe connu composé uniquement de protéines, requis pour la formation des sous unités ribosomiques. Nop8p contient un domaine de liaison à l'ARN et pourrait permettre de fixer le complexe au pré-ARNr, et Dbp6p est une potentielle ARN hélicase. Les composants du complexe pourraient constituer des régulateurs et/ou des cibles de Dbp6p. Les objectifs de ma thèse étaient de déterminer si les protéines Npa1p, Npa2p, Nop8p, Dbp6p et Rsa3p forment effectivement un complexe en dehors des pré-ribosomes, de caractériser les interactions protéine/protéine au sein du complexe et sa structure et d'étudier les fonctions de ses composants. Au cours de ma thèse, j'ai mis en évidence que Nop8p, Dbp6p et Rsa3p sont associées aux pré-ARNr 35S, 32S et 27SA2 et font donc partie des mêmes particules pré-ribosomiques que Npa1p et Npa2p. Les protéines Npa1p, Npa2p, Nop8p et Rsa3p forment un complexe stable, qui persiste une fois dissocié des particules pré-ribosomiques. L'observation au microscope électronique à transmission des complexes purifiés révèle la présence de deux types de complexes de tailles différentes. Par ailleurs, l'hélicase Dbp6p interagit avec ce complexe, mais de manière plus labile car elle en est dissociée en présence d'une forte concentration en magnésium. Les analyses de déplétion de chaque membre du complexe montrent que l'absence de Nop8p n'empêche pas les interactions entre Npa1p, Npa2p et Rsa3p, et que l'absence de Npa2p n'empêche pas les interactions entre Npa1p, Nop8p et Rsa3p. En revanche, l'absence de Npa1p déstabilise totalement le complexe. La perte d'expression de Dbp6p affecte également l'efficacité de co-précipitation de ces pré-ARNr, mais dans une moindre mesure. En parallèle, nous avons débuté une étude des interactions protéine/protéine qui s'établissent entre les membres du complexe. Des données préliminaires suggèrent des interactions directes entre Npa1p, Npa2p et Dbp6p et entre Npa1p et Rsa3p. Nous avons également commencé à effectuer des tests d'activité in vitro de l'hélicase Dbp6p qui suggèrent qu'elle présente une activité ATPase. Enfin, nous avons également localisé le site de fixation sur le pré-ARNr de Npa1p situé à proximité de la protéine ribosomique Rpl3, suggérant qu'ils pourraient collaborer dans la compaction du pré-ARNr
Ribosomes are huge molecular complexes present in all cells of living things. They result from the assembly of ribosomal RNA (rRNA) and ribosomal proteins, constituting ribonucleoproteins (RNP). They play a major role in decoding the genetic information contained in messenger RNA (mRNA) to translate them into proteins during translation. Production of eukaryotic ribosomes is initiated by transcription of a pre-ribosomal rRNA (pre-rRNA) precursor of mature 18S rRNA, 5.8S and 25S / 28S by RNA polymerase I, which is chemically modified and trimmed with endo- and exoribonucleases, in order to form mature rRNAs. The nascent pre-rRNA associates with ribosomal proteins, small ribonucleoprotein particles (snoRNP) and proteins called "non-ribosomal", leading to the assembly of an initial pre-90S particle. This particle is then split into pre-ribosomal pre-40S and pre-60S particles that follow independent maturation pathways leading to mature ribosomal 40S and 60S subunits. Synthesis of eukaryotic ribosomes requires the intervention of more than 200 non-ribosomal proteins that associate with pre-ribosomal particles and are absent from mature cytoplasmic ribosomes. Data obtained in collaboration suggest that five non-ribosomal proteins involved in the early maturation steps of the large ribosomal subunit Npa1p, Npa2p, Nop8p, Dbp6p and Rsa3p form a complex in the absence of ribosomal RNA. It would be the biggest and only known protein module required for the formation of ribosomal subunits. Nop8p contains a RNA binding domain and could tether the complex with pre-rRNA, and Dbp6p is a putative RNA helicase. Components of the complex may constitute regulators and / or Dbp6p targets. The objectives of my thesis were to determine whether Npa1p, Npa2p, Nop8p, Dbp6p and Rsa3p can form a complex outside the context of pre-ribosomes, characterize protein / protein interactions within the complex, and also to study its structure and function. During my thesis, I demonstrated that Nop8p, Dbp6p and Rsa3p are associated with 35S, 32S and 27SA2 pre-rRNAs, and are therefore constitutive of the same pre-ribosomal particles than Npa1p and Npa2p. Npa1p, Npa2p, Nop8p and Rsa3p can form a stable complex that exists once dissociated pre-ribosomal particles. Electron microscopic observation reveal two types of complexes. Furthermore, Dbp6p helicase can interact with this complex, but in a more labile fashion, since it is dissociated in presence of a high concentration of magnesium. Depletion experiments show that the absence of Nop8p does not prevent interactions with Npa1p, Npa2p and Rsa3p, and that the absence of Npa2p does not prevent interactions with Npa1p, Nop8p and Rsa3p. However, the absence of Npa1p strongly destabilizes the complex. Loss of expression of Dbp6p also affects the efficiency of co-precipitation of 35S, 32S and 27SA2 pre-rRNAs, but to a lesser extent. In parallel, we began a study of protein / protein interactions between members of the complex. Preliminary data suggest a direct interaction between Npa1p or Npa2p and Dbp6p, and Npa1p and Rsa3p. We also began conducting an in vitro study of Dbp6p that suggest it has a helicase activity. Finally, by CRAC analysis we show that Npa1p binds adjacent to large ribosomal protein Rpl3 on 25S rRNA, and could collaborate with it in local rRNA folding