Academic literature on the topic 'Focal Adesion'

A adesão ao tratamento da Hipertensão Arterial se revela como um desafio aos profissionais de saúde. Nesse sentido, este estudo teve como objetivo averiguar a adesão ao tratamento da hipertensão de idosos acompanhados em um grupo e descrever as intervenções de enfermagem possíveis junto a esta clientela. A pesquisa descritiva foi desenvolvida em duas fases entre dezembro/2008 e janeiro/2009. Utilizou-se instrumento de coleta para avaliar a adesão ao tratamento; de fevereiro a abril/2009, técnica de Grupo Focal para investigar as intervenções de enfermagem e Discurso do Sujeito Coletivo para organização das falas. Cerca de 27 idosos foram avaliados e 23 apresentaram algum grau de não-adesão. Selecionaram-se 34 intervenções de enfermagem a serem implementadas na clientela e dez discursos foram consolidados ao final. O estudo revelou as dificuldades de seguimento terapêutico, embora a clientela detenha o conhecimento sobre os meios viáveis de implementação das intervenções de enfermagem.

Visando identificar os condicionantes da adesão do trabalhador de enfermagem às precauções/isolamento na assistência, realizou-se este estudo do tipo descritivo tendo como população alvo enfermeiros representantes de hospitais de médio e grande portes da cidade de São Paulo. Das 79 instituições que se enquadravam nos critérios determinados, 15 (18,98%) constituíram a amostra. Em reunião coletiva, utilizou-se a técnica de grupo focal para a coleta dos dados sendo as discussões gravadas em fita cassete, mediante consentimento dos participantes e, posteriormente, transcritas. Organizaram-se os dados segundo Bardin (1977), extraíram-se os núcleos temáticos e definiram-se duas categorias de análise empíricas, denominadas condicionantes institucionais e individuais.

Este estudo identificou as condições que aumentam a viabilidade, aceitabilidade e potencial de eficácia de uma intervenção para promover a adesão medicamentosa. Trata-se de um estudo qualitativo, de delineamento transversal e a técnica de grupo focal foi utilizada com 15 pacientes e 14 enfermeiros para identificar a opinião sobre a intervenção para adesão aos medicamentos cardioprotetores na atenção primária à saúde. As sessões foram gravadas em áudio, transcritas na íntegra e discutidas detalhadamente para obter concordância entre os avaliadores. A lista de verificação COREQ do EQUATOR foi utilizada. Os participantes sugeriram que a intervenção fosse aplicada de forma escrita e verbal com duração aproximada de 30 minutos e reforço com intervalo de trinta dias. O esquecimento, a complexidade do regime terapêutico, a falta de acesso gratuito aos medicamentos, a compreensão limitada de sua doença e a escolha pessoal do paciente de não aderir, foram mencionados como barreiras à adesão. Os participantes ajustaram o modo de aplicação e a dose da intervenção.

O estímulo mecânico sabidamente provoca deformação de proteínas da matriz extracelular e da célula óssea, as quais se tornam ativas e sinalizam reações intracelulares que determinam o aumento da massa óssea. Estudos apontam a quinase de adesão focal (FAK) como uma proteína fundamental na sinalização da deformação celular causada pelo estímulo mecânico no osso, mas há necessidade de estudos in vivo que comprovem esse papel. Objetivos - Com o ultra-som de baixa potência, investigar a influência do estímulo mecânico na expressão da FAK no osso, e a possibilidade de detectar proteínas envolvidas com a proliferação celular óssea e muscular esquelética. Material e Métodos - Tíbias e fíbulas de ratos foram estimuladas com ultra-som de baixa potência durante 20 min/uma vez ao dia, por períodos de 7, 14 e 21 dias. O grupo controle não foi estimulado. Cada grupo continha 7 ratos. Quinze horas após o último estímulo, a tíbia e a fíbula foram retiradas para realização de immunoblotting, utilizando anticorpos específicos para identificar FAK, FAK-Tyr(P)-397, extracellular signal-regulated kinase-2 (ERK-2), ERK-1/2-Tyr(P)-204, insulin receptor substrate-1 (IRS-1) e IRS-2. O músculo esquelético da região estimulada foi extraído e submetido ao mesmo procedimento. Resultados - Analisando-se os resultados de immunoblotting comparativamente com o grupo controle, não foram detectadas FAK e FAK-Tyr(P)-397 no tecido ósseo, enquanto ERK-2, ERK-1/2-Tyr(P)-204, IRS-1 e IRS-2 foram identificados. No músculo esquelético, todas as proteínas estudadas foram identificadas, exceto IRS-2. Discussão e Conclusão: Os resultados sugerem que não deve haver quantidade suficiente de FAK no osso detectável pelo método utilizado. Por outro lado, observou-se que ERK-2, IRS-1 e IRS-2 são detectáveis no osso e devem responder ao estímulo mecânico. Além disso, o encontro dessas proteínas no tecido muscular abre novas perspectivas no estudo da influência das partes moles no processo de reparação do tecido ósseo.

A dieta sem glúten é utilizada recorrentemente como estratégia para o tratamento de diversas doenças. No entanto, as restrições provocadas por ela a tornam desafiadora, levando a altos percentuais de não adesão. Assim, o presente estudo tem o objetivo de discorrer sobre os diversos fatores que podem prejudicar a adesão à dieta livre de glúten. Para isso, foi realizada uma revisão bibliográfica qualitativa com os descritores dieta, sem glúten, adesão à dieta, adesão ao tratamento e desafios, nas bases de dados Scielo, Pubmed, Science.gov, Scopus e Google Acadêmico. Foram encontradas diversas origens para a não adesão à dieta sem glúten, dentre elas a falta de conhecimento do consumidor e dos manipuladores de alimentos, inadequações nos rótulos e falta de conhecimento na leitura dos mesmos, contaminação cruzada e alto custo dos alimentos sem glúten, falta de disponibilidade e acesso a esses alimentos e características sensoriais desagradáveis, além de questões de natureza individual e social. Diante disso, evidencia-se a variedade de fatores interferentes na adesão e a necessidade de atendimento individualizado como meio de monitoramento à adesão, para que se apliquem intervenções assertivas. Ademais, novos estudos devem focar em intervenções, para que se melhorem os aspectos abordados e, por conseguinte, a autonomia dessas pessoas que necessitam seguir a dieta sem glúten.

Objetivou-se investigar os fatores determinantes à não adesão dos usuários idosos hipertensos quanto ao tratamento da hipertensão arterial sistêmica. Tratou-se de um estudo qualitativo, exploratório com abordagem descritiva. A coleta de dados ocorreu em agosto de 2017 através de um grupo focal com clientes idosos hipertensos que não aderiam ao tratamento da hipertensão arterial sistêmica. Foi visto a falta ou inexistência de medicamentos anti-hipertensivos na unidade de saúde, juntamente com o descuido do próprio cliente, configuram-se como os principais fatores que estavam diretamente relacionados a não adesão ao tratamento da hipertensão arterial sistêmica. Nesse sentido, há necessidade de ações de promoção da saúde que levem a prevenção e a busca destes clientes na para orientações e acompanhamento na Estratégia Saúde da Família, levando estes a um direcionamento adequado na redução e complicações decorrentes.

O diabetes mellitus é um importante e crescente problema de saúde, estando entre as doenças crônicas não transmissíveis mais prevalentes no mundo. Este estudo teve como objetivo abordar a percepção dos profissionais de saúde em relação aos aspectos facilitadores da adesão ao tratamento do diabetes mellitus. Realizou-se um estudo clínico-qualitativo em formato de grupo focal, que teve como público-alvo os profissionais da Estratégia Saúde da Família (ESF) de um município de pequeno porte do Centro-Oeste de Minas Gerais. Os profissionais apontaram as seguintes práticas como favorecedoras da adesão: construção de vínculo, participação da família, utilização de linguagem acessível, estímulo à participação ativa do paciente no tratamento, realização de acolhimento, práticas que incluem a intersetorialidade, a multidisciplinaridade e a interdisciplinaridade, ações de apoio matricial, interconsultas, atendimentos compartilhados e trabalhos com grupos. Percebe-se que a adesão depende de uma série de fatores interligados, que incluem a proposta de política pública, participação da gestão municipal, organização dos serviços, formação dos profissionais e suas concepções a respeito do processo saúde-doença, concepção de clínica, dinâmica de trabalho das equipes e capacidade dos profissionais de interagirem com a população. A experiência descrita neste artigo pode servir de inspiração para melhorias nas intervenções dos profissionais de saúde na Atenção Primária à Saúde (APS).

O presente artigo é oriundo de uma pesquisa de mestrado, para a qual foi realizado o método de um grupo focal aplicado a professoras de uma instituição privada do município de Porto Alegre. O trabalho teve como objetivo geral investigar o conhe-cimento e a adesão às práticas de Educação Alimentar e Nutricional (EAN) no ambiente escolar privado. Para dar sustenta-ção ao estudo, utilizou-se um referencial teórico baseado principalmente na legislação brasileira e em autores da área da edu-cação. Os resultados do grupo focal foram analisados em três eixos de discussão: eixo 1: a referência do adulto como exem-plo para a formação do sujeito; eixo 2: a importância da formação docente para estabelecer a EAN no ambiente escolar; eixo 3: a importância da EAN no ambiente escolar. A partir da análise realizada, aponta-se a importância da formação ade-quada para os profissionais da educação e do estabelecimento da EAN de maneira organizada no currículo escolar com es-tratégias que incluam tais saberes como parte da cultura escolar, buscando atingir toda a comunidade como um todo.

Este trabalho consiste em uma pesquisa de campo com abordagem qualitativa, onde a coleta de dados foi realizada através da técnica de grupo focal, e como metodologia foi utilizada a análise de conteúdo de Bardin. Foi evidenciada uma baixa adesão ao aleitamento materno exclusivo pelas mães usuárias de uma Unidade de Saúde da Família da cidade de Marília/ SP, e a partir deste dado é que se consistiu o objetivo de identificar os motivos que levaram essas mães a introduzirem outros tipos de alimentos que não o leite materno, antes das crianças completarem seis meses de idade contribuindo para o desmame precoce. Foi possível detectar como fatores mais significativos para a interrupção do aleitamento materno exclusivo as alterações físicas da mãe e o retorno ao trabalho após o período de 120 dias da licença-maternidade.Palavras-Chave: Aleitamento Materno Exclusivo; Desmame Precoce e Estratégia de Saúde da Família.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Química, Programa de Pós-Graduação em Química, 2013.
Submitted by Alaíde Gonçalves dos Santos (alaide@unb.br) on 2014-01-10T10:55:15Z No. of bitstreams: 1 2013_DanielAugustoBarradeOliveira.pdf: 2428120 bytes, checksum: c456b5418b233575e486a336a32f5cb7 (MD5)
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As proteínas quinases são importantes por atuar em processos biológicos conhecidos, como a transdução de sinais. Esses processos estão intimamente relacionados com o desenvolvimento de neoplasias malignas. Desse modo, o conhecimento da atuação de drogas, relacionadas com essas proteínas, é relavante para o tratamento de alguns tipos de câncer. Neste trabalho, procurou-se estudar inibidores da proteína quinase de adesão focal (FAK), a fim de correlacionar propriedades teóricas, obtidas pela química computacional, com atividades biológicas calculadas a partir do IC50, para auxiliar no entendimento entre essas drogas e a FAK. Para realizar os cálculos foram usadas diversas aproximações de modelagem molecular, dentre as quais, mecânica molecular, métodos ab initio, e métodos híbridos. Para a aproximação de mecânica quântica foram usados os métodos Hartree-Fock, teoria do funcional de densidade, e semi-empíricos PM3, PM6 e MNDO, para descrever a interação entre o sítio catalítico da FAK e os inibidores. O programa O programa auto-docking Vina foi usado para o ancoramento rígido. As atividades de inibidores da classe 7-h-pirrolo-pirimidina foram comparadas com dados provenientes da mecânica quântica, cujo resultado mostrou a importância dos orbitais de fronteira próximos ao aminoácido Cys502. Quanto mais estendidos esses orbitais, maior poderá ser atividade de inibição da FAK. São ainda observadas interações moleculares com os aminoácidos Arg424 e Lys454. Os inibidores dasatinib, sulfonamida e tiazole também foram estudados com métodos de química quântica. Esses inibidores mostram tendências químicas semelhantes com aqueles da classe pirrolo pirimidina, no que se refere às interações com os aminoácidos da tríade catalítica, enfatizando a necessidade dessas interações na construção de novos inibidores. Além disso, a partir da análise de componentes principais, foi mostrada uma correlação entre atividades e propriedades eletrônicas. A soma de todos esses estudos leva a novas fronteiras para o entendimento da interação de fármacos inibidores da proteína quinase e, consequentemente, a compreensão da inibição da metástase, que são uma das maiores causas de morte no mundo moderno. _______________________________________________________________________________________ ABSTRACT
The kinases proteins play important role acting in known biological process, as the signal transduction. These processes are strongly related to the development of malignant neoplasms. Therefore, the knowledge of the drug action related to the kinase protein is relevant for the cancer treatment. In this work, it was studied inhibitors of focal adhesion kinase (FAK) protein in order to correlate theoretical properties with biological activity via IC50, to understand the interaction between these drugs with FAK. In order to perform the calculations it was employed several approaches of molecular modeling, as molecular mechanics, ab initio and hybrid methods. For the quantum mechanical approach we have used Hartree-Fock, density functional theory and semi-empirical PM3, PM6, MNDO methods to describe the interaction between the catalytic site of FAK binding and the selected inhibitors. Auto Docking Vina program was employed to perform the rigid docking. The inhibitor activities of 7-h-pirrole-pirimidines were compared to the results of quantum mechanical approaches, and these results shows the important relation to the frontier orbitals close to the Cys502 aminoacid. The largest contribution of these orbitals is closely related to the FAK inhibition. The molecular interaction with Arg454 and Lys454 aminoacids were also showed. Dasatinib, sulfonamide and thiazole inhibitors also presents these main interactions, emphasizing the relevance of catalytic site interaction of FAK with new inhibitors. Furthermore, from the principal component analysis, it was shown a correlation between activity and electronic properties. The present study leads to new frontiers for the understanding the interaction between focal adhesion kinase and the inhibitors, which is related to the metastase, one o the main reason of death in the world.

Orientador: Kleber Gomes Franchini
Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas
Made available in DSpace on 2018-08-03T18:22:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Clemente_CarolinaFernandaManfrediZambon_M.pdf: 19532548 bytes, checksum: 4a95bc20b2e4dd3ebc6b97a62309141d (MD5) Previous issue date: 2003
Resumo: A linhagem celular C2C12 é um modelo bem estabelecido para a diferenciação miogênica in vitro. Quando os mitógenos são retirados do meio de cultura (privação de soro fetal bovino), fatores de transcrição específicos são ativados, levando a indução de expressão de miogenina e outros fatores miogênicos. A expressão de miogenina marca o comprometimento dos mioblastos ao processo de diferenciação em músculo esquelético....Observação: O resumo, na integra, podera ser visualizado no texto completo da tese digital
Abstract: The cellular lineage C2C12 is a well established model ofmyogenic differentiation in vitro. Upon mitogen withdrawal (bovine serum starvation), specific transcription fàctors are activated, leading to the induction of myogenin and other myogenic factors. Myogenin expression marks the commitment ofmyoblasts to the differentiation pathway... Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations
Mestrado
Mestre em Ciências Médicas

A montagem e desmontagem das adesões focais (AF) desempenham um papel fundamental em diversos processos celulares, incluindo migração celular e sobrevivência. Resultados prévios do nosso laboratório mostram que fibroblastos nulos ou silenciados para miosina-Va sofrem um atraso na desmontagem das adesões, sugerindo um papel para a miosinaVa neste processo. Neste trabalho, visamos analisar a dinâmica de montagem das AF em fibroblastos murinos imortalizados NIH3T3, utilizando sondas fluorescentes para visualização de componentes de adesão focal. A formação das AF foi analisada após estímulo por soro de células quiescentes, o que leva a intensa polimerização de actina, reorganização do citoesqueleto e montagem das AF. A cinética de montagem das AF foi observada em ensaios ao longo do tempo, de células fixadas em 0, 5, 15, 30, 120 minutos após estímulo, e marcadas para miosina-Va fosforilada (p-miosina-Va, S1650), FAK fosforilada (p-FAK, Y397), vinculina, dinamina-2, integrina-?1, faloidina, Ki67 e DAPI. Os nossos resultados mostraram um aumento de fluorescência de p-miosina-Va por todo o citoplasma após a estímulo com soro, e revelaram que a p-miosina-Va co-localiza com pFAK nas AF logo após o estímulo, essa localização da p-miosina-Va nas AF diminui ao passar do tempo e retorna após 120 minutos. Isto é consistente com os resultados anteriores de um papel da miosina-Va na dinâmica das AF. Também é possível perceber uma maior concentração de p-miosina-Va e dinamina-2 na região perinuclear, 5 minutos após estímulo, e o espalhamento de ambas as proteínas pelo citoplasma com o passar do tempo. Demonstramos, por Western blotting, que o estímulo por soro não causa alteração na quantidade total de miosina-Va em nenhum dos tempos analisados em relação à condição de quiescência, mas induz, após 5 e 15 minutos, um aumento apreciável de p-miosina-Va, que sofre queda e variações nos tempos posteriores. Para nosso conhecimento, esta é a primeira demonstração de que a fosforilação da miosina-Va aumenta em resposta ao soro e estamos investigando se este evento está ligado à dinâmica das adesões focais em fibroblastos
The assembly and disassembly of focal adhesions (FA) play a critical role in several cellular process, including cell migration and survival. Previous work from our laboratory showed that fibroblasts without myosin-Va show a delay in focal adhesion disassembly, suggesting a role for myosin-Va in this process. In this work, we aim at imaging the dynamics of focal adhesion disassembly and reassembly in cells, with fluorescent probes for visualization of focal adhesion components. Here, we used murine NIH3T3 fibroblasts to analyze FA formation after serum stimulation of quiescent cells, which leads to intense polymerization of actin and reorganization of the cytoskeleton and FA assembly. The kinetics of FA assembly was observed in a time-course assay of cells fixed at 0, 5, 15, 30 and 120 min after serum stimulation, and stained for phosphorylated myosin-Va (p-myosin-Va, S1650), phosphorylated FAK (p-FAK, Y397), vinculin, phalloidin and DAPI. Our results showed an increase of pmyosin-Va staining throughout the cytoplasm upon serum stimulation, and revealed that pmyosin-Va does not colocalize with FAK in FA at early time points. However, colocalization is observed after 30 to 120 min. This is consistent with previous results of a role for myosin-Va in FA disassembly. It is also possible to observe a higher concentration of p-myosin-Va and dynamin-2 in the perinuclear region 5 minutes after stimulation, and the spreading of both proteins in the cytoplasm over time. We demonstrate by Western blotting that serum stimulation does not cause change in total amount of myosin-Va, in any of the times analyzed in relation to the quiescent condition, but induces, after 5 and 15 minutes, an appreciable increase of pmyosin-Va suffering drop and variations in the later times. To our knowledge, this is the first demonstration that phosphorylation of myosin-Va increases in response to serum and we are investigating whether this event is connected to the dynamics of focal adhesions in fibroblasts

Gliomas são tumores altamente invasivos, resistentes aos tratamentos disponíveis atualmente e com alta taxa de mortalidade. A superexpressão de RECK na linhagem de glioma humano T98G comprometeu a capacidade das células de migrar e invadir in vitro, com rearranjo do citoesqueleto e alteração na distribuição espacial de FAK fosforilado. Entretanto, o possível mecanismo envolvido na inibição da migração mediada por RECK não foi desvendado. Para estudarmos os mecanismos envolvidos nesta alteração da capacidade migratória, as células T98G foram transfectadas com o vetor plasmidial pCXN2-hRECK (RECK+). A via das integrinas, a atividade de alguns membros da família das RhoGTPases e elementos do citoesqueleto foram avaliados através de imunoblotting, imunomarcação e ensaios de pull-down para as células RECK+ em comparação com células T98G não-transfectadas (WT), células T98G transfectadas com vetor pCXN2 na ausência do gene RECK (vetor) e fibroblastos primários humanos (FF287). Nossos resultados mostram um aumento na expressão de integrina β1 e uma diminuição da fosforilação de FAK no sítio de auto-fosforilação Tyr397 que, juntamente com o aumento das fibras de estresse e a diminuição dos lamelipódios, sugerem um fenótipo menos migratório da célula. Porém, quando avaliada a atividade de Rac1, esta se mostrou aumentada, embora uma das vias de ativação de Rac1 seja através da fosforilação de FAK levando à formação dos lamelipódios. A hipótese é que RECK inibe a quebra das adesões focais que participam do processo de migração, dificultando a mobilidade celular. Como as células continuam recebendo o estímulo para migrar, estas ativam Rac1 através de uma via independente de FAK. Além disso, a imunomarcação de paxilina mostrou um aumento no tamanho das adesões focais nas células RECK+, indicando que RECK pode influenciar nas estruturas responsáveis pelo contato célula-matriz.
Gliomas are highly invasive, treatment-resistant and lethal tumors. Overexpression of RECK in human glioma cell line T98G decreased cell migration and invasion in vitro, lead to cytoskeleton rearrangement and caused changes in phospho-FAK distribution. However, the pathway involved in RECK-mediated inhibition of cell migration has not been elucidated yet. To study the mechanisms by which RECK affects cell motility, T98G cells were transfected with pCXN2-hRECK vector (RECK+). Some proteins involved in the integrin pathway, activity of some proteins of RhoGTPase family and cytoskeleton proteins were analyzed through immunoblotting, immunostaining and pull-down assay in RECK+ cells and compared with non-transfected T98G cells, T98G transfected with pCXN2 without RECK gene and human primary fibroblasts (FF287). Our results showed an increase in integrin β1 expression and a decrease in FAK phosphorylation in the Tyr397 site, which together with the increase of stress fibers and decrease of lamellipodia, suggest a less migratory phenotype. Despite this, Rac1 activity was increased even though one of Rac activation pathways is through phospho-FAK, leading to lamellipodium formation. Our hypotheses is that RECK affects focal adhesion turnover, diminishing cell motility. As cells are still receiving a positive signal to migrate, they activate Rac1 through a FAK-independent pathway. Besides that, paxillin immunostaining showed that focal adhesions are larger in RECK+ cells, indicating that RECK can influence structures related with cell-matrix contact.

La Leucemia Linfatica Cronica (LLC) è una malattia linfoproliferativa caratterizzata dall’espansione e accumulo di linfociti B nel sangue, nel midollo osseo e nei tessuti linfoidi. La patogenesi coinvolge fattori intrinseci e estrinseci, come la deregolazione dell'apoptosi e l’alterato signaling del BCR. Il decorso della malattia è molto eterogeneo e può variare da una condizione indolente ad una forma molto aggressiva; per questo è fondamentale identificare nuove caratteristiche che possano dare indicazioni sulla prognosi dei pazienti. Infatti, la ricerca di molecole coinvolte nella sopravvivenza e nella resistenza ai farmaci delle cellule leucemiche è sempre più attuale. In questo contesto, abbiamo indagato sulla chinasi di adesione focale (FAK), proteina di 125kDa che, in seguito a fosforilazione, viene attivata e può reclutare numerose proteine di segnale. Specialmente nei tumori solidi, FAK controlla l’adesione, la migrazione, l’apoptosi e la proliferazione. La chinasi partecipa inoltre al turnover delle adesioni focali, processo regolato dal taglio proteolitico di FAK da parte di Calpaina, enzima dipendente dal calcio. Gli stessi meccanismi di motilità cellulare sono regolati anche da HS1 (Hematopoietic lineage cell Specific protein-1) e Cortactina, entrambe over-espresse e associate a prognosi infausta nella LLC. Con queste premesse, e considerando che HS1 e Cortactina possono interagire con FAK, abbiamo ipotizzato che la stessa FAK potrebbe svolgere un ruolo nella patogenesi della LLC. Lo scopo di questo progetto è stato, quindi, caratterizzare le funzioni di FAK nelle cellule di LLC. Abbiamo dimostrato che l'espressione di FAK nei pazienti con LLC era variabile, con i casi U-LLC a prognosi sfavorevole che mostravano una down-modulazione della forma full-length (0,39±0,36 vs M-LLC, 0,73±0,72; p<0,01, test t di Student). Analizzando la presenza di altre forme della chinasi, abbiamo dimostrato che FAK era presente anche come bande a peso molecolare di 92/94, 84 e 50kDa, compatibili con un clivaggio mediante Calpaina. Questi frammenti sono stati trovati in maggiore quantità nei pazienti con BCR responsivo, cioè con signaling più attivo, nei quali abbiamo anche riscontrato una tendenza verso un’aumentata espressione di Calpaina, rispetto ai pazienti non-responsivi. Queste forme clivate erano anche fosforilate in Y397, cioè attive, e in grado di muoversi nella cellula, poiché prive del dominio di localizzazione in membrana; FAK clivata, infatti, era presente nel nucleo, specialmente nei pazienti responsivi. Analizzando la relazione con molecole coinvolte nell'aggressività della LLC, come HS1 e Cortactina, mediante citofluorimetria e analisi RPPA, abbiamo dimostrato che l’attivazione di FAK era significativamente correlata con la sovra-espressione di queste due molecole, suggerendo che FAK stessa potrebbe essere coinvolta in un pathway che favorisce l’aggressività della malattia. Per studiare il ruolo di FAK nella sopravvivenza delle cellule tumorali abbiamo trattato i linfociti di LLC con Defactinib, inibitore selettivo della chinasi. Dopo 24 ore di trattamento in vitro, abbiamo dimostrato una riduzione della vitalità delle cellule leucemiche (33±24% vs controllo non trattato, 62±17%, p<0,0001, test t di Student per dati appaiati). In conclusione, ipotizziamo che FAK e i suoi frammenti clivati siano coinvolti nella patogenesi della LLC o, in particolare, nel fenotipo più aggressivo. La capacità di traslocare nel nucleo e le riportate funzioni pro-sopravvivenza suggeriscono che FAK sia implicata in un pathway di resistenza all'apoptosi. Inoltre, la correlazione con molecole legate all'aggressività della LLC, ovvero HS1 e Cortactina, indicano un coinvolgimento di FAK nel fenotipo maligno della malattia. Gli effetti apoptotici dell'inibizione di FAK hanno dato un'ulteriore dimostrazione della partecipazione della chinasi a un meccanismo di sopravvivenza nella LLC.
Chronic Lymphocytic Leukemia (CLL) is a neoplastic disorder characterized by the clonal expansion and accumulation of B lymphocytes in peripheral blood, bone marrow and lymphoid tissues. CLL pathogenesis involves both intrinsic and extrinsic factors, such as apoptosis dysregulation and altered B-cell receptor (BCR) signaling. The heterogenous disease course can range from an indolent condition to a very aggressive form of leukemia; thus, it is important to identify novel biological features to predict patients’ prognosis. Indeed, the research for molecules involved in increased survival and drug resistance of neoplastic B cells is ongoing. In this context, we focused on the role of Focal Adhesion Kinase (FAK), a 125kDa protein which, upon phosphorylation on Y397, is activated and can recruit numerous signaling molecules. Especially in solid tumors, FAK can regulate several cellular processes, like adhesion, migration, apoptosis, and proliferation. Besides, as a component of focal adhesions, this kinase participates in the dynamic turnover of these structures, a process regulated through proteolytic cleavage by Calpain, a Ca2+-dependent enzyme. The same cellular mechanisms of cytoskeleton remodeling and motility of the tumor cell are regulated by hematopoietic lineage cell-specific protein 1 (HS1) and its homolog Cortactin, over-expressed in CLL and associated with disease aggressiveness. With this as a background and provided that Cortactin and HS1 can interact with FAK, we hypothesized that FAK might play a key role in CLL pathogenesis and/or maintenance. Therefore, the aim of this three-year PhD project was to characterize FAK functions in CLL cells. We found that FAK expression was variable among CLL patients, with poor prognosis U-CLL cases showing a down-modulation of the 125kDa full-length form (n=56, 0.39±0.36 vs n=67 M-CLL, 0.73±0.72; p<0.01, Student’s t test). Analyzing the presence of other forms of the kinase, we proved that FAK was present also as lower molecular weight bands of 92/94, 84 and 50kDa, compatible with Calpain cleaved fragments. These fragments were found in great amount in the BCR responsive patients, whose receptor signaling is more active, and in which we found a trend toward increased Calpain expression. These cleaved forms were also phosphorylated in Y397, meaning active, and able to relocate inside the cells, since they lacked the domain for the localization near the membrane. We found that cleaved FAK was present inside the nucleus, especially of the responsive patients. Analyzing the relationship with other molecules involved in CLL aggressiveness, like HS1 and Cortactin, both through flow cytometry and RPPA analysis, we demonstrated that FAK activation was significantly correlated with the over-expression of the two molecules, suggesting that FAK itself may be involved in a pathway for increased aggressiveness of the disease. To investigate FAK role in tumor survival, we treated CLL cells with 5µM Defactinib, a selective inhibitor for the kinase. After 24 hours of in vitro treatment, we demonstrated a reduction in the viability of leukemic lymphocytes (n=46; 33±24% vs untreated control, 62±17%, p<0.0001, paired Student’s t test). In conclusion, we hypothesized that FAK and its cleaved fragments by Calpain are involved in CLL pathogenesis or, in particular, in the more aggressive disease phenotype. Its ability to translocate inside the nucleus and the reported pro-survival functions suggest that FAK is implicated in pathways participating in apoptosis resistance. In addition, the correlation with other molecules linked to CLL aggressiveness, namely HS1 and Cortactin, indicate an involvement of FAK in promoting a malignant disease phenotype. The apoptotic effects of the FAK inhibitor Defactinib gave further demonstration of the kinase participation in a survival mechanism in CLL.

Orientador : Kleber Gomes Franchini
Tese (Doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas
Made available in DSpace on 2018-08-22T00:30:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Antunes_JoaoEustaquio_D.pdf: 5472161 bytes, checksum: d84f6389e6baf3e2959126f6345e6a14 (MD5) Previous issue date: 2013
Resumo: A compreensão de como a quinase de adesão focal (FAK) contribui para os processos de hipertrofia, insuficiência cardíaca e câncer são de grande interesse científico. Um dos nossos objetivos específicos é desenvolver inibidores desta tirosina quinase com vistas à sua aplicação terapêutica no tratamento de insuficiência cardíaca e câncer. Portanto, foi realizado planejamento racional e a síntese de inibidores farmacológicos para a FAK. Estudos computacionais de docking e farmacocinéticos permitiram selecionar 28 estruturas de quinazolina mais promissoras em relação à capacidade de inibir a FAK. Desta forma, economiza-se tempo e dinheiro para obter-se a síntese apenas de 6 das estruturas pré-selecionadas. Uma quinazolina denominada 4-BZLO foi sintetizada após o planejamento racional. Tal quinazolina foi capaz de inibir em 50% da atividade da FAK in vitro com aproximadamente 1nM. Os testes de pureza da síntese, absorção por via oral, melhor resultado em triagem em células que superexpressam a FAK e o melhor resultado para triagem em duas linhagens de célula leucêmicas e tumor sólido permitiram direcionar o 4- BZLO para ser o composto líder deste estudo. O composto 4-BZLO apresentou resultado promissor para experimentos com camundongos submetidos à coarctação da aorta, que induz hipertrofia cardíaca. Para avaliar se o tratamento preventivo seria eficiente para hipertrofia cardíaca, foi realizado experimento em animais tratados com 30mg/Kg/dia durante 30 dias. Após este período, foi realizada cirurgia de coarctação da aorta para induzir a hipertrofia cardíaca nos animais e os mesmos foram tratados por mais 30 dias. Parâmetros tais como: peso médio do ventrículo esquerdo sobre peso corpóreo de cada animal (LVW/BW), medida da espessura da parede do ventrículo esquerdo (LVWT) e parâmetros histológicos (diâmetro dos miócitos cardíacos) demonstrou que nos animais tratados houve regressão da hipertrofia comparada ao controle (animais sem tratamento). Outro estudo realizado no qual os animais foram tratados de maneira curativa, ou seja, o tratamento foi realizado somente após a coarctação da aorta demonstrou uma melhora no quadro de hipertrofia e função cardíaca. O modelo de fibrose cardíaca foi usado para avaliar se tratamento com 4-BZLO é capaz de reduzir a fibrose cardíaca nos animais. Os resultados obtidos demonstraram que os animais tratados com 4-BZLO por 30 dias apresentaram redução da acumulação de colágeno, que é um indicador de fibrose, em relação ao controle. Nosso laboratório desenvolveu camundongos transgênicos específicos para a FAK que desenvolve moderada hipertrofia cardíaca. Assim, tal modelo permitiu testar o tratamento com o 4-BZLO para hipertrofia cardíaca induzida pela FAK. Os animais transgênicos específicos para a FAK foram tratados com o composto líder e houve melhora dos parâmetros cardíacos. Os resultados obtidos permitiram concluir que a quinazolina denominada 4-BZLO é um bom candidato a fármaco como inibidor da FAK
Abstract: Understanding how the focal adhesion kinase (FAK) contributes to the processes of hypertrophy, heart failure and cancer are of great scientific interest. One of our goals is to develop specific inhibitors of this tyrosine kinase with potential therapeutic application in the treatment of heart failure and cancer. In this view, we used rational design to select a group of possible FAK inhibitors. Computational studies such as docking and pharmacokinetic studies allowed us to select 28 structures most likely to inhibit FAK. In this way, we saved up time and money in devising the synthesis of 6 pre-selected structures. Accordingly, quinazoline 4-BZLO was prepared and was able to inhibit the in vitro activity of FAK by 50% at a concentration of approximately 1nM. Several factors contributed to 4-BZLO being chosen as the lead compound in this study: 1) the degree of purity achieved during synthesis; 2) good oral bioavailability; 3) the best inhibition values in cells over expressing FAK in screening, 4) the best result against two leukemic cell lines and one solid tumor target. 4-BZLO showed promising results in experiments with mice subjected to aortic coarctation, which develops cardiac hypertrophy. To assess whether 4- BZLO would be effective for the preventive treatment of cardiac hypertrophy, an experiment was conducted in animals treated with 30 mg/kg/day for 30 days. After this period, an aortic coarctation was performed surgically in order to induce cardiac hypertrophy in animals, and these were further treated for 30 days. Parameters such as left ventricular weight per body weight ratio (LVW/BW), measurement of the left ventricle wall thickness (LVWT), and histological parameters, such as the diameter of cardiac myocytes in treated animals showed that there was a regression of hypertrophy, compared to untreated animals (control). A similar study, where treatment with 4-BZLO was performed only after aortic coarctation showed an improvement regarding hypertrophy and cardiac function. A cardiac fibrosis model was used and the results obtained demonstrated that animals treated with 4-BZLO for 30 days showed a reduction of collagen accumulation, which is an indicator of fibrosis, equal to the control group. Our laboratory has developed transgenic mice specific for FAK, which develop moderate cardiac hypertrophy. Consequently, this model allows us to test 4-BZLO for the treatment of FAK induced cardiac hypertrophy. The transgenic animals were treated with 4-BZLO, leading to an improvement of the cardiac parameters. These results showed that synthetic quinazoline 4-BZLO is a good drug candidate for the inhibition of the FAK enzyme
Doutorado
Farmacologia
Doutor em Farmacologia

Orientador: Kleber Gomes Franchini
Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas
Made available in DSpace on 2018-08-17T19:53:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Santos_AlineMarados_D.pdf: 7023687 bytes, checksum: ccd063ea57be631b6b555f86e24af597 (MD5) Previous issue date: 2011
Resumo: A tirosino-quinase de adesão focal (FAK) tem papel crítico na mediação da migração, sobrevivência e proliferação celular. Estudos anteriores de nosso laboratório demonstraram que a FAK é ativada pelo estresse mecânico em miócitos cardíacos e que ela se coimunoprecipita com a miosina sarcomérica. No presente trabalho foi demonstrado que o domínio FERM da FAK medeia à interação com a miosina sarcomérica, sendo que esta interação leva a inibição da autofosforilação da FAK, enquanto que a ativação prévia da FAK reduz sua interação com a miosina in vitro. Ensaios de cross linking acoplado a espectrometria de massas e espalhamento de raios X a baixos ângulos demonstraram que a miosina interage em uma fenda localizada entre os subdomínios do domínio FERM. Experimentos de microscopia confocal demonstraram que estas proteínas estão colocalizadas em miócitos cardíacos de ratos neonatos e adultos. Ensaios de imunoprecipitação revelaram que aproximadamente 40% da FAK está basalmente associada à miosina sarcomérica enquanto que, após o estiramento celular esta associação reduziu paralelamente à ativação da FAK. A porcentagem de FAK associada à miosina não se alterou com a ativação da FAK após tratamento com fenilefrina, diferente da ativação pelo estresse mecânico. A interferência na interação FAK/miosina pelo silenciamento gênico da miosina culminou com a ativação da FAK e o tratamento dos miócitos cardíacos com o peptídeo FP-1, derivado do subdomínio F2 do domínio FERM, levou a uma diminuição na interação FAK/miosina e ao aumento na fosforilação/ativação da FAK. O tratamento prolongado com FP-1 resultou em hipertrofia dos miócitos cardíacos de ratos neonatos, efeito concomitante à ativação da via de sinalização Akt, TSC2 e S6Kinase. Tanto o silenciamento da FAK quanto o tratamento com rapamicina bloquearam a hipertrofia decorrente do tratamento com FP-1. Os dados deste trabalho indicam que a interação da FAK com a miosina sarcomérica é sensível ao estresse mecânico e que possui papel regulatório na manutenção da quiescência basal da FAK e no controle das vias de sinalização mediadas por esta quinase, como a via de crescimento celular AKT/mTOR/S6Kinase, em miócitos cardíacos em cultura
Abstract: The Focal Adhesion Kinase (FAK) plays a critical role in mediating the migration, survival and cell proliferation. Previous studies from our laboratory demonstrated that FAK is activated by mechanical stress in cardiac myocytes and it co-immunoprecipitate with sarcomeric myosin. Here, we demonstrated that the FAK FERM domain mediates the interaction with sarcomeric myosin, and that this interaction leads to inhibition of FAK autophosphorylation in vitro, whereas the previous activation of FAK reduces its affinity to myosin. A model based on small angle X-ray scattering analyses and crosslinking technology coupled with mass spectrometry indicated that a cleft in FERM domain is critical to the interaction of FAK to myosin. Confocal microscopy experiments showed that these proteins are colocalized in cardiomyocytes of neonatal and adult rats. Immunoprecipitation assays revealed that approximately 40% of FAK is basally associated with sarcomeric myosin while cardiomyocyte stretching reduced this association in parallel with FAK activation. The percentage of FAK associated with myosin was not change in response to FAK activation by treatment with phenylephrine, unlike in response to FAK by mechanical stress. The interference in the FAK/Myosin interaction by myosin silencing approach culminated with the activation of FAK. The treatment of cells with the FP-1 peptide, derived from the FAK FERM domain, lead to a decrease in the interaction with sarcomeric myosin and an increase in FAK activation. Prolonged treatment with FP-1 resulted in morphological hypertrophy of neonatal rat cardiomyocytes which was an effect concomitant with activation of the Akt, TSC2 and S6Kinase signaling pathway. Both FAK silencing and the rapamycin treatment blocked the morphological hypertrophy resulting of the treatment with FP-1. This study indicated that the interaction of FAK with sarcomeric myosin is sensitive to mechanical stress and it has regulatory role in maintaining of FAK quiescence and control of signaling pathways mediated by this kinase, such as cell growth via AKT/mTOR/S6Kinase in cardiac myocytes in culture
Doutorado
Biologia Estrutural, Celular, Molecular e do Desenvolvimento
Doutor em Ciências

Orientador: Kleber Gomes Franchini
Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas
Made available in DSpace on 2018-08-11T13:49:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Clemente_CarolinaFernandaManfrediZambon_D.pdf: 14683053 bytes, checksum: 740572fd1e2c19884bc045a5fafe828f (MD5) Previous issue date: 2008
Resumo: Doenças do coração cursam frequentemente com hipertrofia do miocárdio. Estímulos mecânicos e neuro-humorais são sinalizadores críticos para o crescimento hipertrófico dos cardiomiócitos nos vários processos patológicos. Neste contexto, estudos indicam que a quinase de adesão focal (FAK), uma proteína tirosino-quinase que participa dos mecanismos de sinalização por integrinas, é uma mediadora importante do crescimento hipertrófico do ventrículo esquerdo (VE). Este estudo teve como objetivo avaliar a influência da FAK na indução da hipertrofia e na deterioração do VE induzidas por sobrecarga pressórica crônica em camundongos através de estratégia de interferência por RNA. A coarctação da aorta em camundongos induziu a hipertrofia do VE acompanhada pelo aumento da expressão e atividade da FAK no miocárdio. A infusão de siRNA específico para FAK (siRNAFAK), via veia jugular, levou ao silenciamento gênico prolongado da FAK (~70%) no VE normal e também no hipertrófico. O knockdown da FAK foi confirmado nos miócitos e fibroblastos cardíacos provenientes do VE de camundongos. O silenciamento da FAK foi acompanhado tanto da prevenção como regressão da hipertrofia do VE. A função do VE foi preservada e a taxa de sobrevivência foi maior nos camundongos tratados com siRNAFAK, apesar da persistência da sobrecarga pressórica. Estes achados foram paralelos a atenuação do crescimento hipertrófico dos cardiomiócitos e da expressão do marcador de hipertrofia ß-MHC no VE sob sobrecarga pressórica. O silenciamento da FAK também atenuou o aumento da fibrose intersticial, conteúdo de colágeno e atividade da metaloproteinase-2 (MMP-2) no VE submetido ao estímulo mecânico. Em fibroblastos extraídos de corações hipertróficos, o silenciamento da FAK foi concomitante à diminuição da expressão de MMP-2. Assim, estes dados indicam que a sinalização mediada pela FAK é necessária não apenas para o desenvolvimento, mas também para sustentar a hipertrofia em resposta a sobrecarga pressórica crônica
Abstract: Hypertrophy is a critical event in the onset of failure in chronically overloaded hearts. Mechanical stress and neurohumoral factors signaling factors have been considered the main triggering stimuli for the installation of hypertrophy in cardiac myocytes in a variety of pathological process. In this context, focal adhesion kinase (FAK), a key protein of the integrin signaling pathway, has attracted particular attention as a mediator of hypertrophy induced by increased load. This study was performed to address the influence of FAK in the pathophysiology of cardiac hypertrophy and failure induced by chronic pressure overload in mice using RNA interference methodology. Aortic constriction in mice induced left ventricle (LV) hypertrophy and increased expression and phosphorylation of FAK. Intrajugular delivery of specific small interfering RNA induced prolonged FAK silencing (~70%) in both normal and hypertrophic LVs. Studies in cardiac myocytes and fibroblasts harvested from LVs confirmed the ability of the systemically administered specific small interfering RNA to silence FAK in both cell types. Myocardial FAK silencing was accompanied by prevention, as well as reversal, of load-induced left ventricular hypertrophy. The function of LVs was preserved and the survival rate was higher in banded mice treated with small interfering RNA targeted to FAK, despite the persistent pressure overload. Further analysis indicated attenuation of cardiac myocyte hypertrophic growth and of the rise in the expression of ß-myosin heavy chain in overloaded LVs. Moreover, FAK silencing was demonstrated to attenuate the rise in the fibrosis, collagen content, and activity of matrix metalloproteinase-2 in overloaded LVs, as well as the rise of matrix metalloproteinase-2 protein expression in fibroblasts harvested from overloaded LVs. This study indicate that FAK is necessary not only to the development but also to sustain LV hypertrophy in response to chronic pressure overload
Doutorado
Medicina Experimental
Doutor em Fisiopatologia Medica

Orientador: Kleber Gomes Franchini
Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas
Made available in DSpace on 2018-08-13T09:40:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Costa_AnaPaulaDalla_M.pdf: 3504258 bytes, checksum: c5455cd7943b5dcb62c07cb63be2f681 (MD5) Previous issue date: 2009
Resumo: Mudancas dinamicas que ocorrem no intersticio do coracao contribuem diretamente para o remodelamento miocardico decorrente de doencas cardiacas tais como infarto do miocardio, cardiopatia hipertensiva e cardiomiopatias. As metaloproteinases de matriz extracelular (MMPs) sao importantes no remodelamento destas doencas. Estimulos mecanicos e neuro-humoral regulam a expressao e atividade de MMPs atraves de multiplos processos. Em estudos previos verificamos que o silenciamento da FAK no VE de camundongos inibe a fibrose e reduz a atividade de MMP2. Objetivamos avaliar o papel da FAK no controle da ativacao de fibroblastos cardiacos de ratos(FCRNs), induzidos por estiramento mecanico. Os FCRNs foram cultivados em placas Bioflex e submetidos a estiramento ciclico (10%) por ate 8 horas, exceto os controles. A expressao e atividade da FAK foram avaliadas por imunoblottings com anticorpos especificos para FAK ou pFAK Tyr397, respectivamente. A expressao das MMPs 2 e 9 foi avaliada em imunoblottings e a atividade por zimografia ambas no sobrenadante da cultura. O estiramento provocou aumento de 2.4 vezes da quantidade de FAK fosforilada em Tyr397, alem da expressao e a atividade de MMP 2 e 9. Alem disto, modificou os parametros de proliferacao dos FCRNs, mostrando aumento de celulas positivas para Ki67 e BrdU. Do mesmo modo, a diferenciacao em miofibroblastos foi ativada(celulas positivas para a-actina de musculo liso (a-SMA). A inibicao genica da FAK atraves da tecnica de interferencia de RNA (siRNAFAK), nos FCRNs, inibiu a expressao de a-SMA, a atividade e a expressao das MMPs 2 e 9. Alem disso, a deplecao da FAK em FCRNs promoveu a diminuicao da fosforilacao em AKT Ser473, TSC-2 Thr1462, e S6 quinase Thr389 em resposta ao estiramento mecanico. A ativacao dos FCRNs foi impedida pelo pre-tratamento com o inibidor do complexo mTOR, rapamicina. Assim mostramos que a FAK medeia a ativacao de FCRNs invocado pelo estresse mecanico, possivelmente atraves da coordenacao da via de sinalizacao mTOR. Os resultados do presente estudo indicam a ativacao da FAK pode ter um papel critico na proliferacao e diferenciacao, e na ativacao de MMPs em FCRNs quando submetidos a estiramento, e ainda o knockdown da FAK apresenta efeitos contrarios, logo, infere-se o papel da FAK na ativacao de fibroblastos cardiacos.
Abstract: Dynamic changes that occur in the heart interstitium contribute directly to the myocardial remodeling due to heart disease such as myocardial infarction, hypertensive heart disease and cardiomyopathies. The extracellular matrixmetalloproteinases (MMPs) play an important role in remodeling in these diseases. Mechanical and neuro-humoral stimuli regulate the MMPs expression/activity through several processes which include the control of expression, activation by cascades of own MMPs and endogenous inhibitors. In recent studies from our laboratory showed that the FAK silencing in the left ventricle of mice inhibits the fibrosis development, and in parallel reduced the MMP2.activity and expression. The purpose of this study was to evaluate the role of FAK in controlling the MMP 2 and 9 expression and activity in rat cardiac fibroblasts. Cardiac fibroblasts from neonatal rat (FCRNs) were grown on silicon plates and then subjected to cyclic stretch (10%) for up to 8 hours, except the controls. The FAK expression and activity were assessed for imunoblottings through with specific antibodies to FAK or phospho -FAK Tyr397, respectively. The expression of MMP 2 and 9 was evaluated with specific antibodies in imunoblottings and activity through zimography both in the supernatant culture. Furthermore, FCRNs depleted of FAK was defective in AKT Ser473, TSC-2 Thr1462, and S6 kinase Thr389 phosphorylation in response to cyclic stretch. The activation of CF-P3/80 invoked by cyclic stretch was prevented by pre-treatment with the mTOR complex inhibitor rapamycin. These findings demonstrate that FAK signaling plays a critical role in mediating the activation of cardiac fibroblasts invoked by mechanical stress possibly by coordinating the downstream mTOR signaling pathway. The results of this study indicate that the activation of FAK can have a critical role to MMPs activation in cardiac fibroblasts, as well as, the proliferation and differentiation of these cells when subjected to stretching, and the FAK knockdown presents contrary effects, therefore, to corroborate infer the FAK role in differentiation and proliferation cell, and the MMPs balance in cardiac fibroblasts.
Mestrado
Biologia Estrutural, Celular e do Desenvolvimento
Mestre em Fisiopatologia Médica

Orientador: Kleber Gomes Franchini
Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas
Made available in DSpace on 2018-08-03T15:16:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Constancio_SabataSilva_M.pdf: 4387958 bytes, checksum: 4ec6e1b83b76a1d5540b9aa925937a9a (MD5) Previous issue date: 2003
Resumo: O estiramento mecânico leva a respostas hipertróficas em miócitos cardíacos terminalmente diferenciados. Anteriormente, já foi demonstrado que a ativação do complexo de sinalização Fak/Src media a ativação de vias de crescimento e sobrevivência celular em coração de rato adulto. O presente trabalho demonstra que o estiramento cíc1ico in vitro de miócitos ventriculares de rato neonato (MVRN) em cultura aumenta a atividade da Fak, detectada por anticorpo fosfoespecífico para a Tyr-397. A ativação da Fak é seguida pela alteração da localização da proteína nos MVRN, densamente concentrada na região perinuc1ear em células não-estiradas, para agregados ao longo dos miofilamentos em células estiradas. Além disso, quatro horas de estiramento cíclico induz aumento da transcrição do rnRNA do Fator Natriurético Atrial (ANF) e ativação do promotor do ANF associado ao gene repórter luciferase (ANF-LUC) em cerca de 2,7 vezes. A supressão da sinalização via Fak tanto pela hiperexpressão da proteína com o sítio de auto-fosforilação Tyr-397 inativo, quanto pelo uso de inibidor famacológico da Src (PP2) atenuam a ativação da Fak induzida pelo estiramento e a agregação (clusterização) nos miofilamentos, e inibem a ativação do ANF LUC. Por outro lado, a hiperexpressão da Fak selvagem aumenta a quantidade de proteína detectada com anticorpo anti-py397, mas não altera a atividade do ANF, tanto basal quanto a das células estiradas, quando comparada com MVRN não-transfectados. Esses resultados mostram que a Fak é um elemento crítico na resposta precoce ao estiramento em miócitos cardíacos, indicando que essa proteína pode coordenar a maquinaria de sinalização celular, que controla o programa de expressão gênica associado com hipertrofia de mióctos cardíacos
Abstract: Previously, was reported that the rapid activation of Fak/Src multicomponent signaling complex mediates load-induced activation of growth and survival signaling pathways in adult rat heart. This work reports that a in vitro cyclic stretch (10 and 120 min) increased Fak activity in neonatal rat ventricular myocytes (NRVMs) by 3-fold as detected by phosphospecific antibody to Tyr-397 (anti-Fak-py397). This activation was accompanied by a dramatic change in Fak location in NR VMs fiom densely concentrated in the perinucIear regions in non-stretched to aggregates regularly distributed along the myofilaments in stretched cells. Furthermore, a 4-hour cyclic stretch increased the mRNA ANF transcripts and ANF promoter-Iuciferase reporter gene (ANF-LUC) activity (2.7-fold) in NRVMs. Undermining Fak signaling by expression ofinactive Fak obtained by mutation of tyrosine 397 or by a c-Src tyrosine kinase pharmacological inhibitor (PP-2), markedIy attenuated stretch-induced Fak activation and clustering at myofilaments, and inhibited the stretch induced ANF gene activation. On the other hand, overexpression of wild type Fak (WT-Fak) construction did not change the baseline Fak phosphorylation at Tyr-397, but increased the amount of protein detected with anti-Fak-py397. However, WT-Fak overexpression did not enhance the baseline nor the stretch-induced ANF expression and ANF-LUC activity compared to the responses of non-transfected NRVMs. These findings identify Fak as a critical element in the early responses induced by stretch in cardiac myocytes, indicating that it may coordinate the cellular signaling machinery that controIs the gene expression program associated with load-induced cardiac myocyte hypertrophy
Mestrado
Mestre em Farmacologia

Garantir a privacidade das informações no ambiente mhealth é considerado um desafio para sua adesão e uso, sendo tratada em muitas pesquisas da área sob o viés da segurança da informação, com a proposição de métodos e técnicas que impedem o acesso não autorizado às informações. Esta pesquisa traz uma abordagem diferente de privacidade: a que diz respeito aos desejos e preferências dos usuários da tecnologia no compartilhamento de suas informações de saúde. Mobile mhelath, além de permitir a coleta de dados por longos períodos de tempo e acesso a uma gama mais ampla de informações relacionadas, diretamente ou não, com a saúde do paciente, essas tecnologias permitem compartilhar informações de saúde com diversas partes envolvidas no cuidado, como profissionais de saúde, cuidadores, familiares etc. Esses fatores fazem com que os desejos e preferências de privacidade dos usuários sejam dinâmicos, alterando-se baseados em diversos contextos. Esses contextos dinâmicos (ponto focal nesta pesquisa) não são diretamente tratados em pesquisas sobre o assunto, tornando a questão da privacidade um dos fatores de impacto na aceitação e uso da tecnologia.

Introdução: A Pseudomonas aeruginosa é uma das bactérias mais virulentas entre patógenos oportunistas e seu perfil virulento está relacionado ao seu genoma complexo e uma grande variedade de fatores de virulência, como a capacidade de formar biofilmes, que além de exercer papel fundamental na proteção das bactérias, é considerado um mecanismo facilitador da colonização, principalmente em equipamentos cirúrgicos, devido à sua contribuição para a adesão. Objetivo: Descrever a formação de biofilme de Pseudomonas aeruginosa e sua incidência em casos agudos e crônicos de infecção pulmonar. Material e métodos: Foram realizadas buscas nas bases de dados PubMed e MEDLINE, com os descritores: Pseudomonas aeruginosa, “biofilm”, “lungs”. Não foram selecionados filtros nos bancos de dados e foram selecionados artigos dos últimos 8 anos relacionados com nosso objetivo. Resultados: Foram selecionados 10 artigos para o desenvolvimento do trabalho. A produção de biofilme por parte das pseudomonas ocorre quando há um quorum, A partir disto, irão desencadear a produção de N-acil-homoserina lactona, responsável pela ativação da expressão de genes produtores de polissacarídeos que estarão intimamente associados com a rede de adesão, unindo tanto os microrganismos entre si, como à superfície. Há diferenças genotípicas e fenotípicas em isolados de P. aeruginosa de infecções agudas e crônicas, na qual agudas apresentam maior expressão de fatores de virulência como estruturas da superfície, produtos extracelulares e sistemas de secreção, enquanto as crônicas focam em obter alta expressão de exopolissacarídeos, gerando cepas mucóides que formam biofilmes resistentes aos antimicrobianos e ao sistema imune em geral, tornado difícil erradicação e depleção da função pulmonar. Essa tendência à cronificação e complicações pulmonares são observadas em pacientes com lesões por aparelhos hospitalares e pacientes com fibrose cística, devido a mutação no gene CFTR que causa desequilíbrios como aumento da viscosidade do muco, beneficiando tanto P. aeruginosa como outros microrganismos formadores de biofilme. Conclusão: A formação do biofilme contribui para a perduração da infecção e, em alguns casos, cronicidade, causando principalmente a resistência antimicrobiana. Entender os mecanismos de formação do biofilme é extremamente importante para o desenvolvimento de novas drogas, visto o caráter oportunista da infecção e a fragilidade imunológica dos pacientes acometidos.