Dissertations / Theses on the topic 'Fagocitosi'

2008/2009
We are exposed daily to a myriad of potential pathogens, mainly through dermal contact, ingestion and inhalation. The innate immune system is of crucial importance in preventing pathogens from colonizing and growing to a point where they can cause life-threatening infections. Different types of cationic antimicrobial peptides (AMP), also known as host defense peptides (HDP), are among the innate immune mechanisms involved in this protective activity. -defensins are an important class of antimicrobial peptides that are present in human beings and have been widely reported to display a direct, salt and medium sensitive bactericidal activity, in vitro, against a broad spectrum of bacteria and fungi. Moreover, there is increasing evidence that they may play a significant role in alerting and enhancing other components of innate and adaptive immunity, thus also playing an indirect role in defense against microbes. Human -defensins are induced in vivo at the sites of microbial invasion, where they are thought to provide a bactericidal barrier, and to form chemotactic gradients that contribute to the recruitment of immune cells to the site of infection. Their interaction with the biological membranes of both microbial and host cells, appears to play a central role in both these types of activities. In this thesis, I was interested in characterizing the role of -defensin hBD2 in modulating activities of important immune host cells, such as monocytes, macrophages and immature dendritic cells, and its ability to bind to and/or be internalized within those cells, in relation to a possible immunomodulatory role. Initially, hBD2 was chosen amongst the human -defensins, and the native peptide synthesized, folded and characterized for antimicrobial activity and cytotoxicity. A fluorescent conjugate, as well as several structural analogues were also designed and prepared, and were respectively used to probe internalization and structure/activity relationships for this defensin. Subsequently, the immunomodulatory potential of hBD2 was probed, considering its possible effects in modulating important processes such as chemotaxis, degranulation, phagocytosis and reactive oxygen species (ROS) production of immune cells it comes into contact with. From this investigation, it emerged that hBD2 displays different effects depending on the cell type which comes into contact with it, and the exposure time. In particular, we confirmed the ability of hBD2 to induced chemotaxis of myeloid derived immature dendritic cells (iDC), contributing to recruitment of these cells to site of infection, although, from our studies, the mechanism of action turned out to be rather more complex than that which had been previously been proposed, and our observations may help reconcile apparently conflicting literature reports. Some novel additional properties of hBD2 were then described. In particular, a short exposure of iDC to hBD2 causes a cell type-dependent degranulation process, which could be involved in the tolerogenic/immunogenic roles of these cells, supporting a further immunomodulatory role for the defensin. A longer term exposure to hBD2 seems to augment the ability iDC to recognize bacteria and interact with them, possibly improving their ability to present antigens and activate adaptive immune responses. An equivalent treatment of macrophages resulted in a significant increase in their phagocytic activity and release of ROS, thus allowing these immune cells to better respond against a bacterial invasion. All these activities were evidenced in vitro at relatively low (micromolar) and sub-cytotoxic concentrations, which are compatible with the likely hBD2 concentration at sites of infection. Moreover, contrary to the direct bactericidal activity, these activities were not found to be salt or medium sensitive, but occur in conditions closely resembling the physiological ones. The activities of hBD2 were also compared to those of the structural analogues to study whether specific structural features of this defensin are required for its activity on immune cells. Results were somewhat puzzling because the evolutionarily conserved defensin scaffold seems to be quite important for exerting some biological function, such as the antimicrobial activity and phagocytosis, but not others, such as chemotaxis. This observation and the time and cell-type dependent activity may point to the concurrent existence of multiple modes of action. In the last part of this thesis, I describe the interaction of fluorescently labelled hBD2 with immune cells, with the aim of determining whether a cellular internalization could play a part for its biological effects. hBD2 was able to interact in a cell specific manner with different types of immune cells, upon short term exposure, leading to differentiated binding and cellular uptake, in a process devoid of cytotoxic or permeabilizing consequences. Macrophages were the most efficient in peptide internalization, whereas iDC seemed to be more avid for peptide surface binding than peptide internalization. The mechanism by which this occurs is as yet unknown, but our preliminary flow-cytometric data indicated that uptake of the defensin was an energy-dependent and temperature-sensitive process, which depends on actin fibers and can reasonably be supposed to involve lipid rafts, and/or clathrin-mediated endocytosis. Moreover, confocal microscopy of macrophages treated with labelled peptide showed that it may interact with specific patches on the membrane and, on binding, the peptide rapidly re-localized in the cytoplasm of cells with a characteristic punctate distribution. Taken together, these data could suggest that the peptide selectively binds to specific sites on membrane, such as lipid rafts, and that endocytosis could be a general mechanism of hBD2 internalization. These observations may thus indicate that hBD2 is capable of modulating activities of host cells not only by interacting with the membrane and surface receptors, but also with cytoplasmic targets. Noi siamo costantemente esposti a una miriade di potenziali patogeni, principalmente attraverso il contatto, l’ingestione e l’inalazione. Il sistema immunitario innato è di importanza cruciale nel prevenire la colonizzazione e la proliferazione dei patogeni che possono causare infezioni pericolose per la sopravvivenza. Tra i diversi meccanismi del sistema immunitario innato coinvolti in questa azione protettiva si contano diversi tipi di peptidi antimicrobici di natura cationica (AMP), anche noti come peptidi di difesa dell’ospite (HDP). Le -defensine sono un’importante classe di peptidi antimicrobici presenti anche nell’uomo che hanno dimostrato di possedere in vitro un’azione battericida diretta sensibile alla concentrazione salina nei confronti di un largo spettro di batteri e funghi. Inoltre è stato dimostrato che esse giocano un ruolo significativo nell’allertare e potenziare altri componenti dell’immunità innata e adattativa, esercitando così anche un’azione indiretta nella difesa contro i patogeni. Le -defensine umane vengono indotte in vivo nei siti dove si verifica un’invasione batterica, formando così una barriera battericida e creando un gradiente chemiotattico che contribuisce a reclutare cellule immunitarie nel sito d’infezione. La loro interazione con le membrane biologiche, sia dei microbi che delle cellule dell’ospite, sembra essere centrale in entrambe le attività. In questa tesi l’interesse principale è caratterizzare il ruolo della -defensina hBD2 nel modulare l’attività di importanti cellule immunitarie, quali monociti, macrofagi e cellule dendritiche immature, e la sua abilità di legarsi a tali cellule e/o di essere internalizzata da esse. Inizialmente, tra le -defensine umane è stata scelta hBD2 e il peptide naturale è stato sintetizzato, “foldato” e caratterizzato per l’attività antimicrobica e la citotossicità. Un coniugato fluorescente e molti analoghi strutturali sono stati inoltre progettati e sintetizzati e sono stati utilizzati, rispettivamente, per indagare l’eventuale internalizzazione e per fare studi di relazione fra struttura e attività. Successivamente è stato analizzato il potenziale immunomodulatorio di hBD2, considerando i suoi possibili effetti nel regolare importanti processi delle cellule immunitarie con cui il peptide viene in contatto, quali ad esempio la chemiotassi, la degranulazione, la fagocitosi e la produzione di specie reattive dell’ossigeno (ROS). Da questa analisi è emerso che hBD2 esercita diverse azioni a seconda del tipo cellulare con cui viene a contatto e del tempo di esposizione delle cellule alla defensina. In particolare, è stata confermata l’abilità di hBD2 a indurre la chemiotassi di cellule dendritiche immature (iDC), contribuendo a reclutare tali cellule al sito d’infezione. Negli studi condotti è però emerso che il meccanismo d’azione potrebbe essere più complesso di quanto proposto fino ad ora; tuttavia le osservazioni proposte in questa tesi appaiono in grado di conciliare i dati contrastanti riportati in letteratura. Sono inoltre emerse alcune nuove proprietà per hBD2. In particolare, un breve tempo di esposizione delle iDC alla defensina causa un processo di degranulazione che risulta dipendente dal tipo cellulare e che potrebbe essere coinvolto nel ruolo immunogenico/tolerogenico di queste cellule, supportando un ruolo immunomodulatorio per hBD2. Un’esposizione per tempi più lunghi a hBD2 sembra incrementare l’abilità delle iDC di riconoscere i batteri e interagire con loro, probabilmente aumentando la loro capacità di presentare gli antigeni e attivare le risposte immunitarie. Un trattamento equivalente sui macrofagi risulta invece in un aumento significativo della loro attività fagocitaria e della produzione di ROS, permettendo così a queste cellule di rispondere meglio ad un’invasione batterica. Tutte queste attività sono state evidenziate in vitro a concentrazioni relativamente basse (micromolari) e sub-citotossiche, compatibili con quelle che hBD2 raggiunge ai siti d’infezione. Inoltre, contrariamente all’attività battericida diretta, l’attività immunomodulatoria non è risultata sensibile alla concentrazione salina, ma si esplica in condizioni simili a quelle fisiologiche. L’attività di hBD2 è stata anche paragonata a quella di analoghi strutturali per studiare quali siano le caratteristiche di questa defensina che sono richieste per le attività sulle cellule immunitarie. I risultati sono per certi versi inspiegabili in quanto la struttura evolutivamente conservata delle defensine sembra essere importante per alcune attività biologiche, come l’attività antimicrobica diretta o la fagocitosi, mentre non lo è in altre, come la chemiotassi. Questa osservazione e la dipendenza dell’attività da tempo di esposizione e dal tipo cellulare considerato potrebbero indicare che esistono diversi meccanismi d’azione. Nell’ultima parte della tesi vengono descritti gli studi effettuati con il coniugato fluorescente di hBD2 con l’obiettivo di determinare se l’internalizzazione del peptide può giocare un ruolo nella sua attività biologica nei confronti delle cellule immunitarie. È emerso che hBD2 è capace di interagire in modo specifico già dopo una breve esposizione con i diversi tipi di cellule immunitarie considerati in questa tesi. Si è evidenziata una diversa capacità di legame e di internalizzazione a seconda del tipo cellulare, ma il processo è risultato sempre non accompagnato da effetti citotossici o permeabilizzazione delle cellule. In particolare, i macrofagi sono risultati i più efficienti nell’internalizzare del peptide, mentre le iDC sembrano più avide nel legare il peptide sulla superficie che nell’internalizzazione. Il meccanismo attraverso cui avvengono legame e internalizzazione è ancora ignoto, ma i nostri dati al citofluorimetro indicano che l’uptake della defensina è un processo che dipendente dall’energia e dalla temperatura, che è legato alla polimerizzazione delle fibre di actina e probabilmente coinvolge un processo di endocitosi mediata dai lipid rafts e/o dalla clatrina. Inoltre, la microscopia confocale di macrofagi trattati con il peptide fluorescente ha mostrato che esso interagisce con specifiche zone della membrana e, dopo il legame, si localizza rapidamente nel citoplasma della cellula con una caratteristica distribuzione puntata. Nell’insieme, questi dati suggeriscono che il peptide si leghi selettivamente a zone specifiche della membrana, come ad esempio i lipid rafts, e che l’endocitosi potrebbe essere un meccanismo generale per l’internalizzazione di hBD2. Tutti queste osservazioni suggeriscono quindi che hBD2 è capace di modulare le attività delle cellule dell’ospite non solo interagendo con le membrane o i recettori di superficie, ma anche con target citoplasmatici.
XXI Ciclo
1981

Orientadora: Magda Maria Sales Carneiro Sampaio
Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia
Made available in DSpace on 2018-07-16T06:55:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Vilela_MariaMarlucedosSantos_D.pdf: 8617265 bytes, checksum: 41aad35f5711c32768ef77e78ed33086 (MD5) Previous issue date: 1985
Resumo: A morbidade por infecção nos portadores de doença falciforme é elevada, não estando ainda completamente elucidadas as causa deste fato. Os estudos imunológicos concentram-se na função esplênica, na atividade de via alternativa do complemento e recentemente, na função fagocitária. O presente trabalho compreende o estudo do sistema fagocitário em crianças com doença falciforme, durante a fase estável. Seu objetivo principal foi de avaliar a função dos fagócitos polimorfo/mononucleares e da atividade sérica opsônica, na expressão da imunocompetência dessas crianças, e conhecer, pelo menos em parte, o que as predispõe à elevada suscetibilidade às infecções graves, especialmente por organismos com cápsulas pollissacarídicas, tais como os pneumococos. Avaliaram-se a quimiotaxia de polimorfonucleares e monócitos periféricos, pela técnica das câmaras de Boyden modificada a capacidade fagocitária de monócitos para eritrócitos de carneiro (E) incubados com anticorpos (A) de classe IgG de coelho anti-E (detecção de receptores para Pc da IgG) para partículas de zimosan incubadas com soro humano fresco ( detecção de receptores para C3). Um grupo de crianças sadias, pareadas por idade ao grupo de pacientes, serviu como controle. A atividade quimiotática de polimorfonucleares e monócitos de pacientes mostrou-se equivalente à do grupo controle. ...Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital
Abstract: Not informed.
Doutorado
Imunologia
Doutor em Ciências Biológicas

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:45:12Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008
Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)
Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)
Paracoccidioidomicose (PCM) é uma doença granulomatosa sistêmica causada pelo fungo dimórfico térmico Paracoccidioides brasiliensis. O principal antígeno desse fungo é uma glicoproteína de 43-KDa. Gp43 possui diferentes funções: participa do mecanismo de evasão durante a instalação da infecção primária e estimula formação de granuloma in vitro, apresentando epítopos reconhecidos por células T que induzem resposta protetora contra o P. brasiliensis. Aqui, investigamos quais epítopos da gp43 poderiam diminuir a função fagocítica de macrófagos e a reação inflamatória correspondente. Diferentes peptídeos da gp43 foram adicionados a culturas de macrófagos derivados de medula óssea. Posteriormente, foram desafiados com zymosan e os índices fagocíticos foram determinados. A expressão dos peptídeos na superfície da molécula foi determinada por análises gráficas usando o módulo Protean; DNAstar Inc. Dois peptídeos que diminuíram índices fagocíticos e estavam expressos na superfície da gp43, P4 e P23, foram selecionados para ensaios posteriores. Mostramos que ambos, P4 e P23 inibiram a liberação de NO por macrófagos estimulados com zymosan enquanto aumentaram liberação de H2O2. A liberação de TNF-α no sobrenadante de cultura de testes fagocíticos in vitro também foi inibida na presença dos peptídeos. Ensaios in vivo com Mycobacterium bovis - bacillus Calmette-Guérin (BCG) demonstraram que estes peptídeos também apresentaram propriedades antiinflamatórias não-específicas a PCM.
Paracoccidioidomycosis (PCM) is a systemic granulomatous disease caused by Paracoccidioides brasiliensis, a thermal dimorphic fungus. Its major antigen is a 43-kDa glycoprotein. Gp43 embodies different functions: it participates in the evasion mechanisms during the installation of primary infection and stimulates granuloma-like formation in vitro, presenting T-cell epitopes that induce protective response against the fungus. Here, we investigated which epitopes from gp43 could inhibit both, macrophage functions and inflammatory reaction. Different gp43 peptides, spanning the entire sequence of the molecule, were added to cultures of bone marrow-derived macrophages. After challenge with zymosan, phagocytic indexes were measured. Peptides expressed on the molecule surface were determined by graphic analysis using the Protean module; DNAstar Inc. Two peptides which decreased phagocytic index and were expressed in surface of molecule, P4 e P23, were selected for further studies. It was shown that both, P4 e P23 inhibited the release of NO by zymosan stimulated macrophages while enhancing release of H2O2. The release of TNF-α in culture supernatants from in vitro phagocytic tests was also inhibited in their presence. In vivo assays with Mycobacterium bovis - bacillus Calmette-Guérin (BCG) demonstrated that these peptides also presented non-specific anti-inflammatory property.
BV UNIFESP: Teses e dissertações

Não disponível
Abstract: Agaricus brasiliensis is a mushroom whose medicinal properties include antitumoral and immunomodulatory activities. The main bioactive substances of this mushroom are polysaccharides obtained from the fruiting bodies, being their immunomodulatory activities attributed mainly to -glucans. In this paper we aimed to study the role of a polysaccharide-rich fraction (ATF) of this mushroom on innate immunity receptors expression such as -glucan and mannose receptors (GR and MR), toll-like receptors (TLRs:TLR2 and TLR4) , phagocytosis of Candida albicans, cytokine production (TNF-, IL-1, IL-12 and IL-10) and H2O2 and NO release by human monocytes. ATF significantly increased Candida adherence/ phagocytosis by modulating TLR2 and TLR4 expression, since this polysaccharide had no effect on GR and MR as well as on H2O2 and NO production. Moreover, this polysaccharide increased IL-1 and TNF- production, being this effect also related to its capacity to increase TLR2 and TLR4 respectively. IL-10 levels were also increased. However an association between this effect and toll like receptors expression was not detected. In summary, our results provide evidence about the role of this extract on host resistance against some infectious agents through modulation of some phagocytic cells activities, including those of human monocytes
Orientador: Ângela M. V. de Campos Soares
Coorientador: Ramon Kaneno
Banca: Iracilda Zeppone Carlos
Banca: Sueli Aparecida Calvi
Banca: Vânia Nieto Brito de Souza
Banca: Andréa Vanessa Ferreira da Silva Pinto
Doutor

Glioblastoma (GBM) es el tumor más agresivo dentro de la clasificación de gliomas y actualmente no tiene cura. Dado que hasta el 30% de las células en GBM son microglia y macrófagos (GAMMs desde ahora, por sus siglas en ingles), decidimos estudiarlos para ayudar en el diseño de posibles futuras inmunoterapias. El primer gran descubrimiento de esta tesis es la presencia de GAMM en las pseudo-empalizadas (PPs, por sus siglas en inglés) in GBM humano. Estas estructuras se cree que pueden contribuir a la capacidad de invasión del tumor, por lo que el papel de los GAMM en este microambiente puede ser crucial. En concreto, describimos que los GAMMs viajan a través de las PPs hacia su foco necrótico, de forma inversa a las células tumorales. Además, los GAMMs parece que ganan persistencia celular, es decir que viajan de forma directa, bajo las condiciones hipóxicas de las PPs y se desplazan de manera haptotáctica, siendo las fibras GFAP+ su sustrato para avanzar. Al llegar al área necrótica, cambian su fenotipo y fagocitan material del tumor, incluyendo fragmentos GFAP+ y núcleos celulares. En segundo lugar, en cultivos celulares hemos inducido la translocación de NF-κB p65 para aumentar la facogitosis de células de glioma (C6) por parte de microglia primaria de rata. Además, por medio de líneas celulares inmortalizadas (BV-2 y GL261) hemos descrito una serie de supuestos pasos que pueden ser importantes en el proceso de fagocitosis, así como la distribución de determinados receptores (CD11b y CD16/32) durante estas etapas. Asimismo, describimos la distribución de Iba-1 en los procesos de interacción fagocítica en modelos animales de glioma. Por último, hemos probado dos estrategias de inmunoterapia en un modelo murino de GBM (ratones C57/BL6 inyectados con células GL261 intracranealmente), descubriendo que estas inmunoterapias tienen efectos distintos: mientras la neutralización de CD47 pareció no ser efectiva, neutralizar SIRP1α parece ser beneficiosa. Así, los animales del grupo denominado CD47 no mostraban un aumento de su supervivencia comparados con los ratones control, incluso mostraban pérdida de peso, indicador de que la terapia pueda producir efectos secundarios sistémicos. Por otro lado, el bloqueo de SIRP permitió el incremento del peso corporal de los animales durante el experimento, y, de hecho, disminuyó el número de células en el centro del tumor incrementando la capacidad fagocítica de los GAMMs en las zonas periféricas de invasión, sin interferir en su capacidad de infiltrar en el tumor. En conclusión, esta tesis contribuye a una mejor comprensión de la función de los GAMMs en GBM y su capacidad fagocítica intrínseca, posiblemente ayudando al desarrollo de nuevas herramientas terapéuticas para luchar contra este tumor.
Glioblastoma (GBM) is the most aggressive form of glioma and currently has no cure. Given that around 30% of the cells within the tumor are microglia/macrophages (glioma- associated microglia/macrophages or GAMM from now on), we decided to study them in order to shed light in possible future immunotherapies. The first discovery during this investigation was the presence of GAMM in pseudopalisades (PPs) of human GBM. These structures are thought to be very important in the contribution of the tumor invasiveness, therefore the knowledge of the role of GAMMs here might be crucial. Particularly, GAMMs were found to be traveling through the PPs towards the necrotic focus, contrasting with the tumor cells. Moreover, the myeloid cells seem to gain cellular persistence with the hypoxic gradient and travel in a haptotactic manner using the gradient of glioma cells as a cue. When they reach the necrotic focus, they shift their phenotype and phagocytose tumor material, including GFAP+ fragments and nuclei. Secondly, by means of cell cultures we achieved to translocate p65 NF-κB and promote phagocytosis of tumor glioma cells (C6) by primary microglia. Moreover, using cell lines (BV-2 and GL261) we described the putative steps of phagocytosis and the distribution of some receptors (CD11b and CD16/32) involved in the process of phagocytosis. Importantly, the distribution of Iba-1 in interacting GAMMs was also defined in the animal models. Finally, we tested two immunotherapy strategies in a immunocompetent GBM animal model (C57/BL6 intracraneally inoculated with GL261 cells), and discovered that both immunotherapies have different outcomes: while CD47 neutralizing antibody seemed to be non-effective, neutralizing SIRP1α had a beneficial outcome. This way, anti-CD47 treated animals did not have any increase on survival rate than control groups; and they showed decreased bodyweight throughout the experiment, suggesting that the therapy had some systemic side effects. On the other hand, blocking SIRP1α allowed the increase of the bodyweight of the animals throughout the experiment, and decreased the cellularity of the tumor core by increasing the phagocytic activity of GAMM at the peripheral area of tumor invasion without interfering in their infiltration capacity. In all, this thesis contributes to a better understanding of the role of GAMMs in GBM and the intrinsic phagocytic capacity they can play, possibly helping in the development of immunotherapeutic tools to fight this fatal tumor.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2007.
Submitted by Luis Felipe Souza (luis_felas@globo.com) on 2008-11-11T16:40:20Z No. of bitstreams: 1 Tese_2007_AldoHenriqueTavares.pdf: 1295574 bytes, checksum: 446210cb07388071f933c7a4666cca6a (MD5)
Approved for entry into archive by Georgia Fernandes(georgia@bce.unb.br) on 2009-01-15T13:44:59Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese_2007_AldoHenriqueTavares.pdf: 1295574 bytes, checksum: 446210cb07388071f933c7a4666cca6a (MD5)
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Paracoccidioides brasiliensis, um fungo termo-dimórfico, é o agente etiológico da mais prevalente micose sistêmica da América Latina, a paracoccidioidomicose. A forma de levedura de P. brasiliensis atua como um patógeno intracelular facultativo, sendo capaz de sobreviver e replicar no interior de macrófagos e neutrófilos não ativados. Essa habilidade tem sido considerada crucial para o desenvolvimento da doença. Dessa maneira, o P. brasiliensis deve ter desenvolvido mecanismos que o permitiu adaptar-se ao ambiente hostil imposto por células fagocíticas. A fim de testarmos essa hipótese avaliamos a resposta transcricional de P. brasiliensis ao microambiente de macrófagos peritoneais murinos por meio da utilização da metodologia de microarranjo. Dos 1152 genes analisados, identificamos 152 genes que foram diferencialmente expressos no interior dos macrófagos. Esses genes estavam relacionados principalmente a limitação de glicose e aminoácidos, construção de parede celular e estresse oxidativo. Em geral, nossos resultados sugerem uma plasticidade transcricional de P. brasiliensis em resposta ao ambiente hostil dos macrófagos, o que auxiliaria a adaptação e conseqüente sobrevivência desse patógeno no hospedeiro. _____________________________________________________________________________________ ABSTRACT
Paracoccidioides brasiliensis, a thermal dimorphic fungus, is the etiologic agent of the most common systemic mycosis in Latin America, paracoccidioidomycosis. The yeast form of P. brasiliensis acts as a facultative intracellular pathogen being able to survive and replicate within the phagosome of nonactivated murine and human macrophages. This ability has been proposed to be crucial to the development of disease. Thus, P. brasiliensis may have evolved mechanisms that counteract the constraints imposed by phagocytic cells. By using cDNA microarray technology we evaluated the early transcriptional response of this fungus to the environment of peritoneal murine macrophages in order to shed light on the mechanisms used by P. brasiliensis to survive within phagocytic cells. Of the 1152 genes analyzed, we identified 152 genes that were differentially transcribed. Intracellularly expressed genes were primarily associated with glucose and amino acid limitation, cell wall construction, and oxidative stress. For the first time, a comprehensive gene expression tool is used for the expression analysis of P. brasiliensis genes when interacting with macrophages. Overall, our data show a transcriptional plasticity of P. brasiliensis in response to the harsh environment of macrophages which may lead to adaptation and consequent survival of this pathogen.

Orientador : Maria Marluce dos Santos Vilela
Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia
Made available in DSpace on 2018-07-14T01:08:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 CondinoNeto_Antonio_M.pdf: 5893022 bytes, checksum: 48818a6844bd38fed28977e10c1d9184 (MD5) Previous issue date: 1990
Resumo: Estudamos 30 crianças portadoras de asma crônica, sendo 16 do sexo feminino e 14 do sexo masculino, 17 portadoras de infecções recorrentes do trato respiratório, cuja idade variou de 5 a 15 anos. Com o objetivo de identificar alguns fatores de risco com relevância na determinação da maior susceptibilidade às infecções nestes pacientes, bem como os possíveis efeitos inibitórios da teofilina sobre a migração dos fagócitos PMN e MON, fizemos o acompanhamento clínico destes doentes e instintuímos o seguinte protocolo de investigação: (A): constatado o diagnóstico de asma crônica, os pacientes passaram a usar somente teofilina na dose de 20mg/kg/dia, divididas em 4 doses durante 10 dias. Decorrido este prazõ, foram coletados os seguintes exames laboratoriais: hemogramai quimiotaxia de PMN e MONi dosagem sérica de imunoglobulinas, complemento, AMPc e teofilina. (B): após acompanhamento por uma equipe multidisciplinar, na medida que os pacientes apresentassem melhora clínica, a ponto de permanecer 7 dias sem receber qualquer medicação, colhemos os seguintes exames: hemograma, - quimiotaxia de PMN e MONi dosagem sérica de AMPc e teofilina. análise dos resultados, nos permitiu tirar as seguintes conclusões: (A): o perfil clínico dos pacientes aqui estudados, é semelhante ao obtido por RIBEIRO, (1987), em outro trabalho realizado neste mesmo servi~o. (B): os níveis séricos das frações C3 e C4, bem como a atividade CH50 do complemento em nossos doentes, estão dentro da normalidade. (C): os níveis séricos de IgM e IgE estão significativamente elevados quando comparados aos de crianças normais, os níveis de IgG e IgA estão dentro da normalidade, com exceção de um caso onde a IgA sérica estava H (D); o nível sérico médio de teofilina em nossos doentes é de 10,63 microgras/ml. (E): as migrações espontânea de PMN e estimulada de PMN e MON, na ausência do uso terapêutico de teofilina nas doses recomendadas, encontram-se diminuídas em relação aos controles. (F): a teofilina, provavelmente, exerce um efeito inibitório sobre a migração espontânea e estimulada dos PMN e MON, pois os baixos valores de migração encontrados na ausência do uso terapêutico da droga foram !- acentuados ainda mais, quando esta foi utilizada pelos pacientes. Tal efeito, aparentemente não dose dependente, parece se da,' sobre as cél u I as. (G): durante o uso da teofilina, os níveis plasmáticos de AMPc encontram-se significativamente elevados. (H): não há correlação entre os níveis séricos de teofilina e os de AMPc, mostrando uma tendência biológica individual de resposta à droga. (1): não há correlação entre os níveis séricos de IgE e os valores da migração espontânea ou estimulada dos PMN e MON . (J): o comportamento dos parâmetros encontrados entre os grupos de pacientes portadores ou não de infecções recorrentes do trato respiratório, foi em todo semelhante neste trabalho, o que não nos permitiu identificar fatores de risco na maior susceptibilidade às infecções
Mestrado
Mestre em Ciências Biológicas

A melatonina é uma indolamina sintetizada principalmente pela glândula pineal, cuja função está associada à marcação do escuro. Além deste papel cronobiótico, a melatonina também tem papel na defesa e é sintetizada por outros sítios podendo exercer ação parácrina e autócrina, como em células imunocompetentes. Concentrações substancialmente elevadas de melatonina são encontradas no liquido cefalorraquidiano (LCR) que tem sido vinculada à síntese de melatonina por células do sistema nervoso central (SNC), como as microglias. Sabendo-se que estas células são os macrófagos residentes no SNC e que a síntese de melatonina por estes fagócitos já é comprovada, nosso trabalho teve por objetivo avaliar se microglias cerebelares sintetizam essa indolamina e se esta atua potencializando a fagocitose destas células. Nossos resultados mostram que o bloqueio dos receptores de melatonina com o antagonista luzindol, diminuiu tanto a fagocitose induzida por melatonina exógena, quanto à fagocitose basal, indicando que há síntese de melatonina por microglias cerebelares que, por sua vez, age na fagocitose. Esses resultados são relevantes e indicam que a melatonina sintetizada pela microglia, pode estar relacionada com a homeostase do ambiente neural. Sendo assim, nossos dados podem contribuir com estudos que estabeleçam novas estratégias terapêuticas para doenças neuroinflamatórias.
Melatonin is a indolamine synthesized primarily by the pineal gland, whose function is associated with the marking of the dark phase. Beyond this chronobiotic function, melatonin also plays a role in defense and is synthesized by other sites. It may exert paracrine and autocrine action, like in immunocompetent cells. High substantially concentrations of melatonin are found in the cerebrospinal fluid (CSF) that has been linked to the synthesis of melatonin by the central nervous system cells (CNS), such as microglia. Knowing that these cells are the resident macrophages in the CNS and that melatonin synthesis by these phagocytes is proven, our study aims to assess whether cerebellar microglia synthesize this indolamine and whther this acts enhancing phagocytosis of these cells. Our results show that blocking the melatonin receptors with the antagonist, luzindole, both the exogenous melatonin-induced phagocytosis and the basal phagocytosis decreased, indicating that there is melatonin synthesis by cerebellar microglia which acts on phagocytosis. These results are significant and indicate that melatonin synthesized by microglia may be related to the neural environment homeostasis. In this way, our data can contribute, for example, in studies to establish new therapeutic strategies for neuroinflammatory diseases.

Orientadores: Lilian Tereza Lavras Costallat, Antonio Condino Neto
Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas
Made available in DSpace on 2018-08-09T12:17:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Marini_Roberto_D.pdf: 3713656 bytes, checksum: b887d714038bf2be93852a33e34f15ad (MD5) Previous issue date: 2007
Resumo: O lúpus eritematoso sistêmico (LES) é uma doença auto-imune inflamatória, crônica, em que ocorre importante dano tissular principalmente por deposição de imunecomplexos circulantes. O ânion superóxido (SO) liberado pelos fagócitos durante o processo inflamatório é lesivo aos tecidos. Em estudos feitos em adultos com LES a liberação do SO se correlacionou com a atividade inflamatória da doença, porém, não há estudos em pacientes com LES juvenil (LESJ). O objetivo deste trabalho foi estudar as liberações espontânea e estimulada de SO pelos polimorfonucleares (PMN) e monócitos (MO) de pacientes com LESJ. É um estudo analítico da liberação de SO, expressa em nmol por 106 células, em seis instantes de tempo de incubação, de 23 pacientes (3M:20F) com LESJ segundo os critérios de Tan (1982). A primeira análise comparou o grupo de pacientes com LESJ e o grupo controle (35 indivíduos sadios). A segunda análise comparou o grupo controle com dois subgrupos do grupo LESJ, classificados, quanto à atividade da doença, pelo SLEDAI, em um subgrupo inativo (< 5 pontos) (15 pacientes) e outro subgrupo em atividade (8 pacientes). Utilizou-se a análise de variância, o teste de Mann-Whitney e o de Bonferroni sempre com nível de significância de 5%. Os resultados obtidos revelaram que no ensaio dos MO espontâneos houve menor liberação de SO no grupo LESJ em relação ao grupo controle. No ensaio dos PMN estimulados houve maior liberação de SO pelo grupo LESJ quando comparado ao controle. Não houve diferença significativa na liberação de SO entre os dois subgrupos do LESJ em nenhum ensaio. A menor liberação de SO pelo grupo com LESJ nos ensaios espontâneos pode ser devida à ação antiinflamatória e imunossupressora dos medicamentos utilizados para o controle da doença. A significativa maior liberação de SO pelo grupo com LESJ nos ensaios estimulados, principalmente nos momentos iniciais do ensaio dos PMN, a ¿explosão respiratória¿, pode ser interpretada como decorrente do estado inflamatório potencializado dos leucócitos que, devido ao LESJ, estariam ¿primados¿. Os PMN estimulados de crianças com LESJ liberam mais SO quando comparados aos controles
Abstract: Systemic lupus erythematosus (SLE) is an autoimmune inflammatory disease with tissular injury due to immune complex deposition. The superoxide anion (SO) released by phagocytes during the inflammatory process is dangerous to the tissues. Studies performed with SLE adults revealed that SO liberation is correlated with the inflammatory activity. There are no studies with patients with juvenile SLE (JSLE). The main objective of this analytic study was to analyze the spontaneous and stimulated liberation of SO by the polimorphonucleates (PMN) and monocytes (MO) of 23 patients (3M:20F) with JSLE according to Tan criteria (1982). Such liberation of SO was expressed in nmol by 106 cells, in six different times of incubation. A first analysis compared the JSLE group with a control group of 35 healthy people. A second analysis compared the control group with two subgroups of the JSLE group, which was classified by SLEDAI, in one subgroup inactive (score < 5 ) (15 patients) and another subgroup with activity (score > 5) ( 8 patients). Variance analysis, Mann-Whitney and Bonferroni test were used with 5% of significance level. The results showed that in the spontaneous MO assay there was less liberation of SO in the JSLE group than in the control group. In the PMN stimulated assay there was more SO liberation in the JSLE group than in the control. There was no significant difference in SO liberation between the two subgroups of JSLE in any assay. The lower liberation of SO by the JSLE group in the spontaneous assays could be due to the anti-inflammatory and immunosupressor actions of the treatment drugs. The significative higher liberation of SO in the assays of the stimulated PMN, mainly in the initial moments, the so called ¿respiratory burst¿ could be attributed to the inflammatory state of the phagocytes, that due to the JSLE, would be in a high excitatory level. The stimulated PMN of children with JSLE released more SO when compared with controls
Doutorado
Pediatria
Doutor em Saude da Criança e do Adolescente

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:25Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-02-26Bitstream added on 2014-06-13T20:24:56Z : No. of bitstreams: 1 martins_pr_dr_botfm.pdf: 814218 bytes, checksum: a428b5a7e245fda024b1ef4b3eff8b8f (MD5)
Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)
Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)
Agaricus brasiliensis is a mushroom whose medicinal properties include antitumoral and immunomodulatory activities. The main bioactive substances of this mushroom are polysaccharides obtained from the fruiting bodies, being their immunomodulatory activities attributed mainly to -glucans. In this paper we aimed to study the role of a polysaccharide–rich fraction (ATF) of this mushroom on innate immunity receptors expression such as -glucan and mannose receptors (GR and MR), toll-like receptors (TLRs:TLR2 and TLR4) , phagocytosis of Candida albicans, cytokine production (TNF-, IL-1, IL-12 and IL-10) and H2O2 and NO release by human monocytes. ATF significantly increased Candida adherence/ phagocytosis by modulating TLR2 and TLR4 expression, since this polysaccharide had no effect on GR and MR as well as on H2O2 and NO production. Moreover, this polysaccharide increased IL-1 and TNF- production, being this effect also related to its capacity to increase TLR2 and TLR4 respectively. IL-10 levels were also increased. However an association between this effect and toll like receptors expression was not detected. In summary, our results provide evidence about the role of this extract on host resistance against some infectious agents through modulation of some phagocytic cells activities, including those of human monocytes

Orientador: Mary Luci de Souza Queiroz
Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas
Made available in DSpace on 2018-07-22T03:20:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Fernandes_MarciaDias_M.pdf: 2104234 bytes, checksum: f6ddb940e92ef6ade2a98d85f613bf58 (MD5) Previous issue date: 1997
Resumo: Neste trabalho estudamos alguns dos efeitos dos inseticidas, organofosforados e carbamatos, sobre o sistema imunológico. Foram estudados 40 indivíduos expostos ocupacionalmente a estes inseticidas e 40 indivíduos-controle, sem história de exposição ocupacional a estes compostos. A atividade das colinesterases no sangue foi utilizada como indicador de exposição. Os testes imunológicos utilizados foram: . resposta imune-inespecífica avaliada através da atividade fagocitária e lítica dos neutrófilos tfente aos antígenos Candida albicans e Candida pseudotropicalis, capacidade do neutrófilo se reduzir o corante nitroblue tetrazolium (NBT) e locomoção de neutrófilos (Quimiotaxia) resposta imune-humoral avaliada através das dosagens séricas das imunoglobulinas IgG, IgA e IgM. Os resultados demonstraram uma redução significativa na atividade lítica de neutrófilos, tfente ao antígeno C. albicans nos indivíduos expostos aos inseticidas; no entanto, a atividade fagocitária estava normal. As atividades fagocitária e lítica dos neutrófilos frente ao antígeno C. pseudotropicalis, permaneceram inalteradas. Observaamos também uma diminuição significativa na produção de superóxidos, avaliada pelo teste de redução do corante NBT. Através da quimiotaxia, observamos uma diminuição significativa na locomoção de leucócitos. Em relação às dosagens séricas da imunoglobulinas, não observamos nenhuma alteração quando comparadas ao grupo controle
Abstract: In this work, some effects of the organophosphate and carbamate insecticides on the immune response were investigated. We have studied forty workers ocupationally exposed to these insecticides and forty non-exposed control individuaIs. To monitor exposure we used cholinesterase activity in red bfood cells as an indicator of exposure. Phagocytosis and killing of Candida a/bicans and Candida pseudotropicalis by neutrophils, neutrophil chemotaxis, nitroblue tetrazolium reduction and leve1s of IgG, IgM and 19A were measured. The results obtained demonstrated that the phagocytic function of neutrophi1s in exposed workers did not differ from that of the control individuals. On the other hand, lysis of C. à/bicans by neutrophi1s was significantly decreased even in those workers with normal cholinesterase activity. Conversely, the lysis of C. pseudotropicalis by neutrophils was not altered. We also observed a significant decrease of nitrqblue tetrazolium reduction and neutrophil chemotaxis in the exposed group. Regarding the levels of IgM, 19A and IgG we observed no significant alterations as compared to controls
Mestrado
Farmacologia
Mestre em Ciências

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, 2011.
Submitted by Gabriela Ribeiro (gaby_ribeiro87@hotmail.com) on 2011-09-01T18:37:56Z No. of bitstreams: 1 2011_CharleneBarretoPonte.pdf: 1193218 bytes, checksum: 059d1531f12cab0b7b2679f1d24a9e9a (MD5)
Approved for entry into archive by Repositorio Gerência(repositorio@bce.unb.br) on 2011-10-25T18:45:40Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_CharleneBarretoPonte.pdf: 1193218 bytes, checksum: 059d1531f12cab0b7b2679f1d24a9e9a (MD5)
Made available in DSpace on 2011-10-25T18:45:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_CharleneBarretoPonte.pdf: 1193218 bytes, checksum: 059d1531f12cab0b7b2679f1d24a9e9a (MD5)
As leishmanioses têm gerado impacto na saúde pública e fazem parte do grupo de doenças negligenciadas segundo a Organização Mundial de Saúde (OMS). O tratamento constitui um desafio de alta complexidade por se tratar de uma doença de difícil controle e cujos medicamentos disponíveis são injetáveis, têm alta toxicidade e são passíveis de falha terapêutica. A miltefosina (hexadecilfosfocolina) oral tem se mostrado eficaz e segura no tratamento da leishmaniose cutânea, mucocutânea e visceral, no entanto, pouco se sabe sobre seu mecanismo de ação e seus efeitos sobre os macrófagos, células parasitadas pelas leishmânias. Este estudo teve como objetivo avaliar, in vitro, o efeito da miltefosina sobre a viabilidade dos macrófagos, além de testar a influência da droga sobre a capacidade fagocitária e sobre a produção de espécies oxidativas por macrófagos peritoneais dos camundongos da linhagem C57BL/6. Para os testes de viabilidade celular, utilizou-se o método do MTT (3-(4,5-dimetil-2-tiazol)-2,5-difenil-2-H brometo de tetrazolium) e partiu-se das concentrações de 1200 e 1600μg/mL da miltefosina e as demais foram obtidas por diluição seriada. Para os demais testes foram empregadas as doses: 10, 50 e 100μg/mL de miltefosina. A capacidade fagocitária foi avaliada utilizando-se 4 x 106 Saccharomyces cerevisiae, sensibilizadas ou não com o soro dos camundongos. A produção de óxido nítrico foi determinada pela reação de Griess e o peróxido de hidrogênio determinado pelo teste de oxidação do vermelho de fenol na presença de peroxidase. Os resultados indicaram um aumento na atividade mitocondrial, portanto as células permaneceram viáveis na presença de diferentes doses de miltefosina. Isso foi demonstrado pelo progressivo aumento no percentual de redução do MTT (p<0,05, teste t pareado). A droga aumentou em 53% a fagocitose na presença de S. cerevisiae não sensibilizadas nas preparações incubadas com 50μg/mL de miltefosina (p<0,001, teste de Wilcoxon), devido ao aumento no percentual de macrófagos envolvidos na fagocitose, embora tenha diminuído a média de leveduras fagocitadas. Na presença de S. cerevisiae sensibilizadas houve aumento do índice fagocitário com 10μg/mL, alterando a mediana de 202,0 para 382,5; e com 50μg/mL da droga, alterando a mediana de 202,0 para 602,0 (p<0,001, teste de Wilcoxon), pois aumentou o percentual de macrófagos envolvidos na fagocitose e a média de S. cerevisiae ingeridas pelos macrófagos. Todas as concentrações de miltefosina testadas diminuiram, pelo menos 93%, a produção de óxido nítrico pelos macrófagos em relação à produção basal (33,1 ± 15,0) ou estimulada com lipopolissacarídeo (50,2 ± 17,4) (p<0,001, teste t pareado); porém, não afetou a produção de peróxido de hidrogênio (p>0,05, teste t pareado). Portanto, este estudo mostrou que a miltefosina foi capaz de influenciar importantes funções do sistema imune inato dos macrófagos, principalmente potencializando a fagocitose. Além disso, a inibição da produção de óxido nítrico e a não alteração da produção de peróxido de hidrogênio sugerem que a ação microbicida da droga ocorre independente da produção destes radicais, por ação direta da miltefosina sobre o parasito. Isso pode trazer importantes implicações para o emprego deste medicamento na prática clínica, podendo trazer bons resultados aos indivíduos imunodeprimidos; além de também favorecer a redução dos efeitos deletérios gerados pelo excesso de radicais e, consequentemente, diminuir a imunopatogênese da leishmaniose. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT
The leishmaniasis have generated impact on public health and are part of the group of neglected diseases according to World Health Organization (WHO). Treatment is a highly complexity challenge because it is a difficult disease to control and whose medications available are injectable, have high toxicity and are susceptible of therapeutic failure. The oral miltefosine (hexadecylphosphocholine) is an effective and safe treatment of cutaneous leishmaniasis, mucocutaneous and visceral; however, little is known about its mechanism of action and its effects on macrophages, cells infected by leishmania. This study aimed at evaluating, in vitro, the effect of miltefosine on the viability of macrophages, and at testing the influence of drug on the phagocytic capacity and the production of oxidative species by peritoneal macrophages of mice C57BL/6. For the tests of cell viability, the MTT (3-(4,5-dimetil-2-tiazol)-2,5-difenil-2-H brometo de tetrazolium) metod was used and started from the concentrations of 1200 and 1600μg/mL of miltefosine and the others were obtained by serial dilution. For all other tests doses of 10, 50 and 100μg/mL de miltefosine were used. The phagocytic capacity was assessed using 4 x 106 Saccharomyces cerevisiae, sensitized or not with the serum of mice. Nitric oxide production was determined by Griess reaction and the hydrogen peroxide production was determined by the phenol red oxidation in the presence of peroxidase. The results indicated a progressive increase in mitochondrial activity and therefore the cells remained viable in the presence of different doses of miltefosine. This was demonstrated by the progressive increase in the percentage of MTT reduction (p<0,05, paired t test). The drug increased phagocytosis by 53% using nonsensitized S. cerevisiae in preparations incubated with 50μg/mL of miltefosine (p<0,001, Wilcoxon test) due to the increased percentage of macrophages involved in phagocytosis, although the average number of phagocytosed yeasts has decreased. In the presence of sensitized S. cerevisiae, the phagocytic index increase with 10μg/mL by changing the median of 202,0 to 382,5; and with 50μg/mL, changing the median of 202,0 to 602,0 (p<0,001, Wilcoxon test), because the percentage of macrophages involved in phagocytosis and the average number S. cerevisiae ingested by macrophages was increased. All concentrations of miltefosine tested decreased at least 93%, nitric oxide production by macrophages in relation to the basal production (33,1 ± 15,0) or stimulated with lipopolysaccharide (50,2 ± 17,4) (p<0,001, paired t test); however, it did not affect the hydrogen peroxide production (p>0,05, paired t test). Therefore, this study showed that miltefosine was able to influence important functions of the innate immune system of macrophages, especially enhancing phagocytosis. Furthermore, the inhibition of nitric oxide production and the no change in the hydrogen peroxide production suggests that the antimicrobial action of the drug happens independently of production of these radicals, by direct action of miltefosine against the parasite. This can bring important implications for the use of this drug in clinical practice, and it can generate good results to the immunosuppressed individuals, in addition to also promote the reduction of harmful effects caused by excess of radicals and, consequently, reduce the immunopathogenesis of the leishmaniasis.

Made available in DSpace on 2012-05-07T14:43:56Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 000003.pdf: 37187397 bytes, checksum: 6fdd9554a1d40712c5c26cc6688ceabd (MD5) Previous issue date: 2006
No presente estudo nós usamos microscopia eletrônica e confocal a laser para caracterizar morfologicamente os hemócitos de ninfas de quinto estádio em Rhodnius prolixus, bem como a resposta imune celular deste inseto contra partículas bióticas e abióticas ...

Introdução: Sepse é uma síndrome complexa definida por resposta inflamatória sistêmica, de origem infecciosa e caracterizada por manifestações múltiplas que podem determinar disfunção ou falência de um ou mais órgãos ou sistemas. É a principal causa de morte em unidades de terapia intensiva em pacientes críticos e tem representado uma fonte constante de preocupação para os sistemas de saúde em todo o mundo, devido, principalmente, às taxas elevadas de morbimortalidade. O tratamento da sepse é um desafio e continua a ser uma tarefa difícil devido a inúmeros fatores interferentes. Um estudo do nosso grupo demonstrou que a Escherichia coli (E. coli) é capaz de se ligar CD16 de um modo independente de opsonina, levando a um aumento na resposta inflamatória e a inibição da sua própria fagocitose, por conseguinte, procurou-se identificar os peptídeos no proteoma da E. coli envolvidos neste cenário. Metodologia: Utilizando a metodologia de Phage Display, que consiste numa técnica de clonagem, que permite a expressão de diversas sequências de peptídeos na superfície de bacteriófagos, nós identificamos 2 peptídeos que obtiveram interação com CD16. Após a seleção dos peptídeos identificamos uma proteína de membrana de E.coli que possui alta similaridade com um de nossos peptídeos selecionados. Nós acreditamos que esta proteína de membrana possa estar envolvida no processo de evasão imune desenvolvida pela E.coli e parece ser um forte candidato como uma nova opção terapêutica para controlar infecções por E. coli. Conclusão: A identificação de proteínas capazes de induzir inibição de fagocitose, através do receptor CD16, pode ser usada como uma nova forma de tratamento da sepse, assim como explorada no tratamento de doenças autoimunes
Introduction: Sepsis is a complex syndrome defined by a systemic inflammatory response of infectious origin and characterized by multiple manifestations that can determine dysfunction/failure of one or more organs and systems. It is the leading cause of death in intensive care units and represents a major health problem around the world, mainly due to its high mortality and morbidity rates. The treatment of sepsis is challenging and remains a difficult task due to numerous interfering factors. A study from our group demonstrated that Escherichia coli (E. coli) is able to bind CD16 in an opsoninindependent manner, leading to an increase in the inflammatory response and inhibition of its own phagocytosis, therefore we sought to identify the peptides in the E. coli proteome involved in this scenario. Methods and Results: Using the Phage Display technique, which is a cloning technique that allows the expression of various peptide sequences on the surface of bacteriophages (phages) and selecting these on the basis of affinity for a target molecule, we identified two peptides that interact with CD16. Next, using bioinformatic tools, we found an E. coli membrane protein that has high similarity with one of our selected peptides. We believe this membrane protein is involved in the process of immune evasion developed by E. coli and it is a strong candidate as a new therapeutic option to control E. coli infections. Conclusion: The identification of proteins capable of inducing inhibition of phagocytosis through the CD16 receptor, can be used as a new treatment of sepsis, as well as exploited in the treatment of autoimmune diseases

O objetivo do estudo foi avaliar as interações entre macrófagos e Candida albicans quanto à fagocitose, capacidade de matar C. albicans e propriedade dos diferentes isolados de C. albicans em causar condensação de cromatina nuclear e apoptose de macrófagos. Os macrófagos foram obtidos de camundongos pré-tratados com PBS ou concanavalina-A (Con-A) por 72 horas e co-incubados com C. albicans (CR15, 577, CR1) por 1 hora a 37 oC. C. albicans opsonizadas com soro foram co-incubadas com macrófagos pré-tratados com Con-A, que apresentaram 80% de fagocitose para cepa CR1, 40% para cepa 577 e 50% para cepa CR15; levando a redução do inóculo de 2 vezes mais do que os macrófagos de animais tratados com PBS. As cepas CR15 e CR1 quando opsonizadas induziram a condensação de cromatina nuclear em 30% dos macrófagos; sendo que a cepa 577 não induziu apoptose. Uma das características da apoptose é a exposição da fosfatidilserina de macrófagos, sendo que macrófagos que fagocitaram a cepa CR15 entraram em apoptose, evidenciado pela ligação com anexina V-FITC. A ativação de macrófagos por Con-A causou uma maior atividade de receptores de manose e maior eficácia na morte de C. albicans, os quais foram mais resistentes a indução de apoptose por cepas CR1 e CR15 enquanto os macrófagos de animais tratados com PBS foram menos ativados; fagocitaram pouco via receptores de manose e muito através de receptores para o complemento e por não terem potencial candidacida como os ativados por Con-A, ficaram mais susceptíveis à apoptose induzida por cepas CR1 e CR15. Portanto, a Con-A é um imunomodulador que contribuiu com a eliminação de C. albicans através de macrófagos.
The objective of this study was to evaluate the interactions between macrophages and Candida albicans in relation to phagocytosis, and their capacity to kill C. albicans and the capacity of the different isolates of C. albicans in to cause nuclear chromatin condensation and apoptosis of the macrophages. The macrophages were obtained from mice pre-treated with PBS or concanavalin-A (Con-A) for 72 hours and co-incubated with C. albicans (strains: CR15, 577 and CR1) for 1 hour at 37 oC. C. albicans initially opsonized with serum and co-incubated with macrophages pre-treated with Con-A, presented 80% of phagocytosis for CR1 strain, 40% for 577strain and 50% for CR15 strain; the inoculum was reduced twice the number of the macrophages for each animal treated with PBS. Strain CR15 and CR1 when opsonized, induced the nuclear chromatin condensation in 30% of the macrophages; while 577 strain did not induce apoptosis. The macrophages that phagocytized CR15 strain presented apoptosis that was evidenced by the link with anexina V-FITC. The activation of macrophages by Con-A caused a higher activity of the mannose receptors and greater effectiveness in the C. albicans death, since they were more resistant to the induction of apoptosis by CR1 and CR15. The macrophages of animals treated with PBS were less activated; they phagocytized little via receptors mannose and a lot via receptors complement. And also, they don't have candidacidal potential as the ones activated by Con-A and they were more susceptible to apoptosis induced by CR1 and CR15. In conclusion it was observed that Con-A is an immunomodulator that contributes to the elimination of C. albicans by macrophages.

β2-glicoproteína I (β2GPI) é encontrada (200µg/mL) no plasma, 60% livre e 40% em lipoproteínas. Esta proteína de fase aguda, com afinidade por superfícies negativas pode ser clivada pela plasmina. Fragmentos são purificados como dímeros ou multímeros de β2GPI. Formas monomérica e dimérica de β2GPI foram purificadas de soro humano e identificadas por SDS-PAGE, imunoblot e ELISA Somente a forma monomérica foi detectada no teste ELISA Os efeitos de ambas as formas sobre o burst respiratório de polimorfonucleares humanos (PMN), estimulados in vitro com zymosan opsonizado, foram estudados por quimioluminescência amplificada por luminol ou lucigenina e citometria de fluxo, pela oxidação do OCFH. A forma monomérica inibiu a quimioluminescência amplificada por luminol (-43.6 x -7.33 AEU/s), mas não por lucigenina, e aumentou a oxidação de DCFH e a produção de Óxido Nítrico (•NO). É provável que o •No, via peroxinitrito, medeie os efeitos de β2GPI sobre o burst respiratório de PMN.
Circulating blood contains approximately 200µg/mL of β 2-glycoprotein I (β2GPI), either free (60%) or lipoprotein bound (40%). This acute phase protein, with affinity for negative surfaces, can be cleaved by plasmin. Fragments purify as dimeric or multimeric (β2GPI. Both (β2GPI forms were purified from human sera and identified by SDS-PAGE, immunoblotting and ELISA. ELISA reactivity was dependent on the monomeric status of (β2GPI. The effects of dimeric and monomeric (β2GPI upon respiratory burst of human polimorphonuclear neutrophils (PMN) stimulated in vitro with opsonized zymosan were studied. Respiratory burst was evaluated by luminol- or lucigenin-amplified chemiluminescence, or by DCFH oxidation (flow-cytometry assay). The monomeric, but not the dimeric form, inhibited the luminol chemiluminescence of zymosan-stimulated PMNs (-43.6 x -7.33 AEU/s). Lucigenin chemiluminescence was insensitive to (β2-GPI. Monomeric (β2GPI increases both DCFH oxidation and nitric oxide production. Nitric oxide, probably through peroxynitrite reactions, mediates (β2GPI effects upon PMNs respiratory burst.

Avaliamos o papel dos leucotrienos (LTs), as vias de sinalização e o efeito da insulina na fagocitose via FcgR por macrófagos alveolares (MAs) de ratos sadios (RS) e diabéticos (RD). Vimos que a) MAs de RD fagocitam menos que os de RS; b) a fagocitose é dependente de LTs endógenos em RS mas não em RD; c) a adição de LTB4 ou LTD4 aos MAs em cultura aumenta a fagocitose em RS e RD; d) MAs de RS e RD produzem quantidades equivalentes de LTB4 e LTC4; e) a adição de insulina aos MAs aumenta a capacidade fagocitica em ambos os grupos; f) em RS, a fagocitose via FcgR induz fosforilação de Akt e PKC-d, que é amplificada por LTs endógenos, enquanto que em RD ocorreu fosforilação somente da PKC-d. A foforilação de Akt e PKC-d amplificada por LTs produzidos sob estímulo do FcgR em MAs de RS parece ser, de alguma forma, dependente da ação da insulina, pois MAs provenientes de RD fagocitam menos, a fagocitose não é dependente de LTs endógenos e o estímulo via FcgR não é capaz de ativar a Akt.
We evaluated the role of leukotrienes (LTs), the signaling pathways and the effect of insulin in phagocytosis via FcgR by alveolar macrophages (AMs) from healthy (HR) and diabetic (DR) rats. The results showed that: a) AMs from DR showed lower phagocytic capacity than AMs from healthy rats; b) the phagocytosis was dependent of endogenous LTs in AMs from HR but not DR; c) addition of LTB4 and LTD4 to cultures enhanced the phagocytosis by AMs from HR and DR; d) AMs from HR and DR rats produced similar levels of LTB4 and LTC4; e) addition of insulin to AMs enhanced the phagocytic capacity in HR and DR; f) in HR, the phagocytosis via FcgR induced Akt and PKC-d phosphorylation, which is amplified by endogenous LTs, whereas in DR, only PKC-d was phosphorylated. The phosphorylation of Akt and PKC-d, amplified by LTs produced under FcgR engagement in AMs from HR, seems to be, in a way, dependent of insulin action, because AMs from DR have lower phagocytic capacity, the phagocytosis is not dependent of endogenous LTs and the FcgR engagement is not capable to activate Akt.

Submitted by Tatiana Oliveira (tsilva@icict.fiocruz.br) on 2012-06-05T18:34:39Z No. of bitstreams: 1 Tatiana Oliveira Fulco.pdf: 6352891 bytes, checksum: 35625276b78761742a718df841963873 (MD5)
Made available in DSpace on 2012-06-05T18:34:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tatiana Oliveira Fulco.pdf: 6352891 bytes, checksum: 35625276b78761742a718df841963873 (MD5) Previous issue date: 2010
Fundação Oswaldo Cruz.Instituto Oswaldo Cruz. Rio de janeiro, RJ, Brasil
Estudos anteriores de nosso grupo demonstraram que o Mycobacterium leprae induz apoptose de monócitos humanos por uma via dependente de proteasoma. No presente trabalho nós demonstramos que o M. leprae induz a produção de TNFa e induz apoptose de monócitos por uma via dependente de NF-?B. A talidomida, utilizada no tratamento do Eritema Nodoso Hansênico, possui atividade anti-TNF por um mecanismo ainda não completamente elucidado. Nós demonstramos que a Talidomida suprime a produção de TNF por uma via dependente de p38 MAPK e NF-?B. O papel da remoção de células apoptóticas também foi avaliado. Apesar de macrófagos ativados pela via alternativa ou Mf2 possuírem maior capacidade de associação com o M. leprae quando comparados a macrófagos ativados pela via clássica ou Mf1, o estímulo com células apoptóticas levou ao aumento na associação do M. leprae em macrófagos Mf1, mas não Mf2. Esse aumento na associação do M. leprae com macrófagos Mf1 estimulados com células apoptóticas está associado ao aumento da expressão gênica de COX-2 e elevados níveis de PGE2, IL-10 e TGF-ß, com redução dos níveis de IL-6 e IL-15. Em conjunto, tais dados sugerem que na presença de células apoptóticas, macrófagos pró-inflamatórios estimulados com o M. leprae, desviam para um fenótipo antiinflamatório o que pode explicar o estabelecimento da infecção em pacientes com a forma tuberculóide da doença
Previous studies o four group revealed that Mycobacterium. leprae induces apoptosis of human monocytes by a proteasome-dependent pathway. In the present work we demonstrated that M. leprae induces TNFa and apoptosis by a NF-?B-dependent pathway. Thalidomide, drug used in treatment of erithema nodosum leprosum, has been described by its anti-TNFa activity although the mechanism is not fully understood. We demonstrated that thalidomide suppress TNFa production by p38 MAPK and NF-?B – dependent pathways. The role of apoptotic cell clearance was also evaluated. Although macrophages activated by alternative pathway or Mf2 have increased phagocytic activity when compared to macrophages activated by classical pathway or Mf1, apoptotic cell uptake increased the association of M. leprae with Mf1 but not Mf2. The increase in M. leprae association with apoptotic cell stimulated Mf1 is associated with the increased COX-2 gene expression and higher levels of PGE2, IL-10 and TGF-ß, with reduced levels of IL-6 and IL-15. Together, these data suggest that in the presence of apoptotic cells, M. leprae stimulated pro-inflammatory macrophages deviates to an anti-inflammatory phenotype that could explain the establishment of M. leprae infection in patients with the tuberculoid form of the disease

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:30Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-07-23Bitstream added on 2014-06-13T18:40:42Z : No. of bitstreams: 1 dias_dc_dr_jabo.pdf: 505801 bytes, checksum: 4f054c2e44763c07663b9f83c1ed8586 (MD5)
Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)
Universidade Estadual Paulista (UNESP)
O objetivo deste projeto foi avaliar a influência do probiótico composto de Bacillus subtillis no desenvolvimento produtivo, hematologia e migração de macrófagos de matrinxã, Brycon amazonicus, nas fases de desenvolvimento (reprodução, larva e engorda). O experimento foi dividido em três etapas: 1) Reprodução: dois grupos de matrizes foram alimentadas durante oito meses, constituindo o T1 (controle - sem adição de probiótico) e T2 (10 g de probiótico.kg- 1 de ração). No período reprodutivo, 10 fêmeas e 10 machos de cada tratamento foram selecionados para reprodução induzida. Para as análises hematológicas, utilizaram-se 20 peixes, que foram anestesiados e retiradas alíquotas de sangue por punção do vaso caudal. Outros 10 matrinxãs foram utilizados para a avaliação da atividade fagocítica dos macrófagos e também para as análises de lipídios. Os resultados mostraram que as matrizes que receberam a dieta suplementada com probiótico apresentaram aumento do número de ovócitos e, consequentemente, nas taxas de fertilização e eclosão das larvas e significativo aumento da atividade fagocítica dos magrófagos, indicando melhora no sistema imune dos reprodutores. Os parâmetros hematológicos sofreram alterações quando comparados com o momento zero e os valores de cortisol e glicose foram mais elevados em fêmeas. Os valores de lipídios totais em músculo e fígado foram inferiores nos peixes que receberam alimentação suplementada com probiótico; 2) Larvicultura: esta fase foi constituída de seis tratamentos, T1 - controle (sem adição de probiótico), T2 - 2,5 g de probiótico, T3 - 5,0 g de probiótico, T4 - 7,5 g de probiótico, T5 - 10,0 g de probiótico e T6 - 12,5 g de probiótico. As doses utilizadas foram adicionadas por litro de cultivo de Artemia salina, que serviram como bioencapsuladores do probiótico...
The aim of this study was evaluate the influence of the probiotic Bacillus subtilis in the growth performance, hematology and macrophage migration of matrinxã, Brycon amazonicus at different stages (breeding, larval and growth). The experiment was presented in three stages: 1) Reproduction: two groups of breeders were fed during 8 months: T1 (control – without probiotic) and T2 (10 g probiotic kg-1 ration). During the reproductive period, 20 animals (10 females and 10 males) from each treatment, were selected and induced for breeding whit crude carp pituitary extract. For hematological 3 analysis, 20 fish were used, anesthetized and aliquots of blood was withdrawn by caudal vessel punction. Another 10 fish were used to evaluate the phagocytic´s activity macrophages and for lipid’s analysis. The results showed that the breeders, who received the supplemented diet, showed a slight increase in the number of oocytes and, consequently, the fertilization and hatching rates of larvae, a significant increase in macrophage’s phagocyte activity, indicating an improvement in the immune system of the breeding. Hematological parameters unchanged when compared with the zero time and the values of cortisol and glucose were higher in females. The values of total lipids in muscle and liver were lower in fish fed with probiotic supplementation, 2) Hatchery: this phase consisted of 6 treatments, T1 - control (without probiotic), T2 - 2.5 g of probiotic T3 - 5.0 g of probiotic, T4 - 7.5 g of probiotic, T5 - 10.0 g of probiotic and T6 - 12.5 g of probiotic. The doses used were added per liter of Artemia salina culture, used as bioencapsulated probiotic, 4 h before the larvae feeding. After seven days, the larvae began to be fed on commercial feed (40% CP) and the probiotic... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Mary Luci Souza Queiroz
Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas
Made available in DSpace on 2018-07-20T22:52:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Silveira_JosianePerin_M.pdf: 2900540 bytes, checksum: 55f0f2037f67a65e1cc1726ba61582d8 (MD5) Previous issue date: 1995
Resumo: Este trabalho faz parte de um projeto maior intitulado "Projeto Integrado de Estudo da Hemotoxidade do Benzeno e Pesticidas", um estudo multidisciplinar que visa uma avaliação sistêmica de funcionários e ex-funcionários das Empresas Químicas e Siderúrgicas de Cubatão, São Paulo, Brasil. Estudamos um grupo de trabalhadores expostos aos compostos organoclorados. Avaliamos a imunidade inespecífica através da atividade fagocitária e lítica de neutrófilos e a imunidade humoral através dos níveis séricos das imunoglobulinas. A função hepática e a dosagem dos níveis sangüíneos de hexaclorobenzeno (HCB) foram realizadas por um outro grupo dentro deste projeto. Todos os indivíduos avaliados apresentaram níveis detectáveis de HCB no sangue, sendo que este foi utilizado como o indicador biológico de exposição. Nossos resultados demonstraram redução significativa na atividade lítica de neutrófilos frente aos antígenos Candida albicans e Candida pseudotropicalis. Este fato pode estar relacionado a um desequilíbrio nos mecanismos anti-oxidantes da célula provocada pelos compostos organoclorados, levando a uma condição tóxica e conseqüente redução na atividade funcional da mesma. Observamos também, um aumento nos níveis séricos de IgG e IgM que foi associada com a alteração hepática destes trabalhadores. Estes resultados indicaram que o estudo da função lítica de neutrófilos e os níveis séricos das imunoglobulinas, constituem indicadores sensíveis de efeitos tóxicos dos compostos organoclorados na população exposta
Abstract: This work is part of a larger project intitled "Integrated Project for the Study of the Hematotoxicity of Benzene and Pesticides", which is a multidisciplinary study for the systemic evaluation of workers and ex-workers of the Empresa Química de Cubatão, São Paulo, Brazil. We have studied in a group of workers exposed to chlorinated compounds the inespecific immune response, as measured by the evaluation of the engulfment and killing capabilities of the neutrophils, and humoral immune response, as measured by the levels of immunoglobulins in serumo Hepatic function and the blood levels of hexachlorobenzene (HCB), which was chosen as a biological indicator of exposure, were determinated by other scientists in the group. Ali the workers studied had detectable levels of HCB in the blood. Our results demonstrated a significant reduction in the litic activity of the neutrophils in the presence of both antigens, Candida albicaons and Candida pseudotropicalis. These findings might be related to a derangement in the qntioxidant mechanisms of the cell caused by the chlorinated compounds. This would lead to a toxic condition with consequent reduction. in the functional activity of the cell. The have also observed an increase in the levels of IgG and IgM in the serum, which was associated with the changes in hepatic function observed in these workers. The results indicate that the study of the litic function of the cell and the serum levels of immunoglobulins provide a sensitive functional indicator of the toxic effects of chlorinated compounds in exposed populations
Mestrado
Mestre em Farmacologia

Orientadores: Mary Luci de Souza Queiroz, Giselle Zenker Justo
Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas
Made available in DSpace on 2018-07-25T19:39:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Melo_Adrianade_M.pdf: 2789353 bytes, checksum: 87cf638a789bb737a520a262c9ac8b40 (MD5) Previous issue date: 1999
Resumo: Neste trabalho, investigamos os efeitos imunomoduladores do composto MAPA nas atividades fagocitária, lítica e quimiotática de neutrófilos frente aos antígenos Candida albicans e Candida kefyr in vitro, bem como sobre o crescimento e diferenciação de células progenitoras hematopoiéticas da medula óssea para a série granulócito-macrófago (CFU-GM) de animais infectados com Listeria monocytogenes. A capacidade fagocitária apresentou-se aumentada com todas as concentrações de MAPA utilizadas (25, 50, 75 e 1000 j.lg/mL) frente à C. albicans. Por outro lado, em presença de C. kefyr houve um aumento com as três maiores concentrções (50, 75 e 1000 f.lg/mL). Quanto à capacidade lítica, houve um aumento nas três menores concentrações frente à C. albicans e com as três maiores concentrações frente à C. kefyr, indicando uma ação do composto na aderência dos fagócitos, bem como no processo de desgranulação de neutrófilos. A capacidade do neutrófilo de reduzir o corante nitroblue tetrazolium apresentou-se aumentada nas duas maiores concentrações testadas (50 e 75 f.lgfmL), sugerindo uma ação do composto MAPA na produção de óxido nítrico. A quimiotaxia foi utilizada para o estudo quantitativo da locomoção de leucócitos polimorfonucleares, quando incubados com as concentrações de 25, 50 e '75 j.lgfmL de MAPA. Esta atividade apresentou-se aumentada apenas quando as células polimorfonucleares foram incubadas com a concentração de 75 j.lgfmL. Para a realização dos experimentos in vivo os animais foram tratados por 7 dias, consecutivos nas doses de 0,5; 2,0; 5,0 e 7,5 mglKg de MAPA. Ao final do tratamento, os animais foram infectados com uma dose subletal de Listeria monocytogenes. Após a infecção ocorreu uma diminuição dos números de CFU-GM na medula óssea dos animais. Os animais previamente tratados com MAPA apresentaram um aumento no número de CFU-GM da medula óssea com as doses de 2,0 e 5,0 mg/Kg às 48 e 72 horas após a infecção, em relação ao controle e ao grupo infectado. Para avaliar a resistência destes animais à infecção pela L. monocytogenes realizamos uma curva de sobrevida, utilizando uma dose letal da bactéria (3 x 108 bactérias/animal). Trinta e quarenta por cento dos animais previamente tratados com as doses de 0,5 e 5,0 mgIKg de MAPA, respectivamente, sobreviveram à dose letal da L. monocytogenes, enquanto 100% dos animais do grupo controle infectado morreram em oito dias. No entanto, com 7,5 mg/Kg de MAPA todos os animais morreram em até oito dias, não havendo proteção contra a infecção. Diante dos resultados obtidos neste trabalho, podemos sugerir que o composto MAPA aumenta a resistência dos camundongos BALB/c infectados com a L. monocytogenes através do aumento dos precursores hematopoiéticos da medula óssea
Abstract: ln this work, we investigated the effeets of MAPA on the immune response. We have stlldied the neutrophils exposed to these eompound of six normal individuaIs. Phagoeytosis and killing of Candida albicans and Candida ke.fyr by neutrophils, neutrophil ehemotaxis and nitroblue tetrazolium reduetion were measured. The results obtained demonstrated - an inerease in the phagoeytie funetion of neutrophils in exposed to MAPA. On the other hand, lysis of C. albicans and C. kefyr by neutrophils was signifieantly inereased. We also observed a signifieant inerease of nitroblue tetrazolium reduetion and neutrophil ehemotaxis in these eells. e also investigated the effeets of magnesium ammonium phospholinoleatepalmitoleate anhidryde (MAPA), a roteie aggregated polymer isoleted from Aspergillus orizae, on the growth and differentiation of granuloeyte-maerophage progenitor eells (CFU-GM) in normal and Listeria monocytogenes infeeted miee. MAPA was administred subeutaneously (0.5-7.5 mg/Kg) for 7 days. ln the MAPA treated/infeeted groups L. monocytogenes was administred at the end of MAP A treatment. A signifieant reduetion in the numbers ofCFU-GM was observed at 48 h after the infection, followed by a slight restoration at 72 h. Treatment of, these animaIs previously to infection stimulated marrow myelopoiesis in a dosedependent manner. The 5.0 mg/Kg MAPA was the optimal biological aetive dose in infected mice and this dose shedule also stimulated myelopoiesis in normal mice. The 0.5 and 5. O mg/Kg doses given prior to in.fection with a lethal dose of 3 x 108 bacterialanimal led to a 30% and 40% survival, respectively. These results demonstrated that MAPA produces a significant increase in the resistanee of the animaIs infeeted with L. monocytogenes, and that this protection is due, at least in part to increased CFU-GM in the bone marrow ofinfeeted animals
Mestrado
Mestre em Farmacologia

Orientador : Maria Marluce dos Santos Vilela
Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas
Made available in DSpace on 2018-07-31T15:01:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Amoras_AnaLidiaBraga_M.pdf: 16753114 bytes, checksum: d704d73dbf02424f587fbb18b6726b51 (MD5) Previous issue date: 2001
Resumo: A Imunodeficiência Comum Variável (ICV) é uma sindrome incompletamente definida, caracterizada por defeito na formação de anticorpos. Devido ao fato da ICV apresentar ainda inúmeros pontos não esclarecidos, propusemo-nos analisar evolutivamente a apresentação clinico-laboratorial de 17 pacientes com diagnóstico de ICV, em seguimento no Ambulatório de Imunologia-Alergia e Pneumologia do Hospital de Clinicas da Universidade Estadual de Campinas(Unicamp). Os pacientes foram avaliados quanto à idade de início dos sintomas e à forma de apresentação clinica e imunológica. A função fagocitária de monócitos foi avaliada in vitro através da quimiotaxia, fagocitose mediada via Fc, CRI e CR3 e atividade do sistema NADPH oxidase. A concentração dos níveis séricos de IgM, IgG, IgA e subclasses de IgG foi determinada por nefelometria e as subpopulações linfocitárias e células NK por citometria de fluxo. Todos os pacientes apresentaram as primeiras manifestações clinicas antes dos quatro anos de idade, evoluíram com infecções de repetição e, em 8 pacientes havia associação de manifestações gastrointestinais e em 7 fenômenos autoimunes. Ao diagnóstico, a média da concentração de IgM, IgG e IgA foi 17 mg/dl, 365 rng/dl e 7,85 mg/dl, respectivamente. Observou-se nos pacientes com ICV, redução significativade todas as subclassesde IgG (IgGI, p=0,0001; IgG2, p=0,002; IgG3, p=0,006 e IgG4, p=0,0001), em relação ao grupo controle. A porcentagem de células NK foi significantemente reduzida (P=0,006) quando comparada aos indivíduos normais. A porcentagem de células-T CD3+(p=0,013)e CD8+ (P=0,004)foi significantemente aumentada e a relação CD4/CD8 (P=0,013) foi significantemente reduzida nos pacientes com ICV em relação ao grupo controle. Entretanto, a porcentagem de células-T CD4+ não demonstrou diferença entre os doisgrupos. Redução do número de' células-B circulantes com valores inferiores a 2% foi observado em 47% dos pacientes com ICV. A fagocitose mediada via Fc, CRI, CR3 (p=0,0001)de monócitos e quimiotaxia (p=0,0027)foram significantemente reduzidas nos pacientes com ICV em relação ao controle normal. Entretanto, não houve diferença na produção de ânion superóxido entre os dois grupos. Devido a heterogeneidade de apresentação clínica entre nossos pacientes e dos relatados na literatura sugere-se que a ICV possa ser a expressão fenotípica de várias doenças, e que defeitos na quimiotaxia e fagocitose de monócitos podem ser caracterizados em um grupo de pacientes, determinando uma nova direção na fisiopatologiada ICV
Abstract: Common variable immunodeticiency is an incompletely detined syndrome, characterized by a defect in antibody formation. Since CVI presents numerous, as yet unclarified, defects we proposed to analyze the evolution of the clínical-laboratorial presentations of 17 patients diagnosed with CVI from the Immunology-Allergy and Pneumology Clínic ofthe Hospital de Clínicas at the State University of Campinas, Brazil. The patients were evaluated according to their age at the initiation of symptoms and their clínical and immunological evolutional presentation. Blood monocyte phagocytic functions were evaluated in vitro by chemotaxis, phagocytosis mediated by Fc, CRI and CR3 and NADPH-oxidase activity. Concentrations of the serum levels of IgM, IgG, IgA and subclasses of IgG were determined by nephelometry and the lymphocyte subset and NK cells were evaluated by flow cytometry. All the patients presented initial clínical manifestations before four years of age, developing repeated infections and, in 8 patients, there was an association of gastrointestinal manifestations and 7 patients presented autoimmune phenomenons. At the time of diagnosis, the mean concentrations of IgM, IgG and IgA were 17.0 rng/dL, 365.0 mg/dL and 7.85 rng/dL, respectively. In CVI patients, significant reductions in all the subclasses of IgG (IgGI, p=0.0001;IgG2, p=0.002; IgG3, p=0.006 and IgG4, p=0.0001) were observed in relation to the control group. The elative number of NK cells was significantly reduced (p=0.006) whencompared with normal individuals. The percentage of CD3+ (p=0.013) and CD8+ T cells (p=0.004) were significant1yreduced in patients with CVI in relation to the control group. However a percentage of CD4+ T cells did not demonstrate any differences between the two groups. A reduction in the number of circulating B cells was also observed, with values lower than 2 % in 47 % of the patients with CVI. Phagocytosis measured via Fc, CRI, CR3 (p=0.0001) of monocytes and chemotaxis (p=0.0027) were significant1yreduced in the patients with CVI in relation to the normal controls. However, there was no difference in the superoxide production between the two groups. Due to the heterogeneity of the clinicalpresentations of our patients and those related by the literature, it may be suggested that CVI may be a phenotypic expression of various diseases and that the defects in the chemotaxis and phagocytosis of monocytes may be characterized in a group of patients, determining a new direction in the physiopathology of CVI
Mestrado
Pediatria
Mestre em Saude da Criança e do Adolescente

Resumo: O objetivo deste projeto foi avaliar a influência do probiótico composto de Bacillus subtillis no desenvolvimento produtivo, hematologia e migração de macrófagos de matrinxã, Brycon amazonicus, nas fases de desenvolvimento (reprodução, larva e engorda). O experimento foi dividido em três etapas: 1) Reprodução: dois grupos de matrizes foram alimentadas durante oito meses, constituindo o T1 (controle - sem adição de probiótico) e T2 (10 g de probiótico.kg- 1 de ração). No período reprodutivo, 10 fêmeas e 10 machos de cada tratamento foram selecionados para reprodução induzida. Para as análises hematológicas, utilizaram-se 20 peixes, que foram anestesiados e retiradas alíquotas de sangue por punção do vaso caudal. Outros 10 matrinxãs foram utilizados para a avaliação da atividade fagocítica dos macrófagos e também para as análises de lipídios. Os resultados mostraram que as matrizes que receberam a dieta suplementada com probiótico apresentaram aumento do número de ovócitos e, consequentemente, nas taxas de fertilização e eclosão das larvas e significativo aumento da atividade fagocítica dos magrófagos, indicando melhora no sistema imune dos reprodutores. Os parâmetros hematológicos sofreram alterações quando comparados com o momento zero e os valores de cortisol e glicose foram mais elevados em fêmeas. Os valores de lipídios totais em músculo e fígado foram inferiores nos peixes que receberam alimentação suplementada com probiótico; 2) Larvicultura: esta fase foi constituída de seis tratamentos, T1 - controle (sem adição de probiótico), T2 - 2,5 g de probiótico, T3 - 5,0 g de probiótico, T4 - 7,5 g de probiótico, T5 - 10,0 g de probiótico e T6 - 12,5 g de probiótico. As doses utilizadas foram adicionadas por litro de cultivo de Artemia salina, que serviram como bioencapsuladores do probiótico... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo)
Abstract: The aim of this study was evaluate the influence of the probiotic Bacillus subtilis in the growth performance, hematology and macrophage migration of matrinxã, Brycon amazonicus at different stages (breeding, larval and growth). The experiment was presented in three stages: 1) Reproduction: two groups of breeders were fed during 8 months: T1 (control - without probiotic) and T2 (10 g probiotic kg-1 ration). During the reproductive period, 20 animals (10 females and 10 males) from each treatment, were selected and induced for breeding whit crude carp pituitary extract. For hematological 3 analysis, 20 fish were used, anesthetized and aliquots of blood was withdrawn by caudal vessel punction. Another 10 fish were used to evaluate the phagocytic's activity macrophages and for lipid's analysis. The results showed that the breeders, who received the supplemented diet, showed a slight increase in the number of oocytes and, consequently, the fertilization and hatching rates of larvae, a significant increase in macrophage's phagocyte activity, indicating an improvement in the immune system of the breeding. Hematological parameters unchanged when compared with the zero time and the values of cortisol and glucose were higher in females. The values of total lipids in muscle and liver were lower in fish fed with probiotic supplementation, 2) Hatchery: this phase consisted of 6 treatments, T1 - control (without probiotic), T2 - 2.5 g of probiotic T3 - 5.0 g of probiotic, T4 - 7.5 g of probiotic, T5 - 10.0 g of probiotic and T6 - 12.5 g of probiotic. The doses used were added per liter of Artemia salina culture, used as bioencapsulated probiotic, 4 h before the larvae feeding. After seven days, the larvae began to be fed on commercial feed (40% CP) and the probiotic... (Complete abstract click electronic access below)
Orientador: Maria José Tavares Ranzani de Paiva
Coorientador: Elisabeth Romagosa
Banca: Margarida Maria Barros
Banca: Fernando Corleto Maiorino
Banca: Eduardo Makoto Onaka
Banca: Sérgio Henrique Canello Schalch
Doutor

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, 2011.
Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2012-03-12T15:48:43Z No. of bitstreams: 1 2011_ValeriaMartinsAraujoCarneiro.pdf: 37117688 bytes, checksum: d7ec9e07b5c0fea5c98f8e99532570ac (MD5)
Approved for entry into archive by Marília Freitas(marilia@bce.unb.br) on 2012-03-20T12:29:15Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_ValeriaMartinsAraujoCarneiro.pdf: 37117688 bytes, checksum: d7ec9e07b5c0fea5c98f8e99532570ac (MD5)
Made available in DSpace on 2012-03-20T12:29:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_ValeriaMartinsAraujoCarneiro.pdf: 37117688 bytes, checksum: d7ec9e07b5c0fea5c98f8e99532570ac (MD5)
Periodontite consiste em uma doença inflamatória de etiologia infecciosa, causada pelo desequilíbrio entre os efeitos do biofilme bacteriano e a resposta imunoinflamatória do hospedeiro. Neutrófilo e monócito constituem, por meio da fagocitose e produção de radicais de oxigênio, o principal mecanismo de defesa frente aos desafios bacterianos presentes no sulco gengival e na bolsa periodontal. Os estudos longitudinais sobre a fagocitose por neutrófilo do sangue periférico são escassos e os resultados apresentados, controversos. A função do monócito relativa à fagocitose na periodontite, por sua vez, não foi avaliada até o momento. Métodos: Avaliou-se o índice fagocitário de neutrófilo (IFN), monócito (IFM) e capacidade oxidativa do sangue periférico pelo teste de Nitroblue tetrazolium (NBT) na periodontite, antes e após terapia periodontal. A amostra incluiu 28 indivíduos com periodontite e 27 indivíduos sem doença periodontal (grupo controle). Para análise da fagocitose, Saccharomyces cerevesiae morta foi previamente sensililizada ou não com o soro do indivíduo. O índice fagocitário (IF) foi determinado pela multiplicação da média de Saccharomyces cerevesiae aderidas/ingeridas por fagócitos pelo % de fagócitos em fagocitose. Resultados: A terapia periodontal resultou em melhora significantiva do estado periodontal clínico (P≤ 0,0002). O IFN foi restabelecido em ambas as análises: não sensibilizado antes da terapia foi 1,5, pós-terapia, 3,5, (P= 0,001); sensibilizado antes da terapia, 113, pós-terapia, 157, (P=0,01). O restabelecimento foi compatível com os valores encontrados no grupo controle: IFN não sensibilizado foi 2,25 e IFN sensibilizado, 157. Resultados semelhantes foram encontrados para o IFM não sensibilizado: antes da terapia, 13,25, pós-terapia, 43,28, (P= 0,01). Diferentemente, para a análise da fagocitose com o soro do indivíduo, os valores alcançados no IFM pós-terapia foram maiores do que os encontrados no grupo controle: IFM grupo controle foi 98, pós-terapia, 110 (P= 0,04) Resultados semelhantes para a mediana do NBT: NBT basal grupo controle, 76,25, pós terapia, 84,50, (P= 0,009), enquanto o NBT estimulado no grupo controle foi 69,5 e pós-terapia, 80,75, (P=0,003). Não houve diferença estatisticamente significante na produção de radical de oxigênio estimulado e basal entre o grupo controle e grupo periodontite antes da terapia. Conclusão: A doença periodontal causou enfraquecimento na função fagocitária tanto em neutrófilo como em monócito, enquanto que a terapia periodontal restabeleceu a função neutrofílica. Assim, observou-se o papel modulador da infecção nas células fagocitárias. Os resultados do IFM e NBT pós-terapia, no grupo periodontite, sugerem hiperatividade celular intrínseca, o que reforça a necessidade de controles periódicos no grupo periodontite objetivando prevenir a recidiva da doença periodontal. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT
Periodontitis is an inflammatory disease of infectious etiology, caused by an imbalance between the effects of the bacterial biofilm and the host immunoinflammatory response. Neutrophil and monocyte through phagocytosis and production of oxygen radicals, are the main defense mechanism against bacterial challenges in the gingival crevice and periodontal pocket. In the literature there are few longitudinal studies on phagocytosis by neutrophils in peripheral blood and, the results are controversial. While the function of phagocytosis by monocyte in periodontitis has not been evaluated so far. Methods: We evaluated the phagocytic index (PhI) by neutrophil, monocytes and oxidative capacity by nitroblue tetrazolium test (NBT) in peripheral blood of periodontitis, before and after periodontal therapy. The sample included 28 subjects with periodontitis and 27 subjects without periodontal disease (control roup). For analyzes of phagocytosis killed Saccharomyces cerevesiae was previously sensitized or non-sensitized with the serum of the individual. The phagocytic index (PhI) was determined by multiplying the average of Saccharomyces cerevesiae attached / ingested by phagocytes by the % of phagocytes in phagocytosis. Results: The periodontal therapy significantly improved clinical periodontal status (P ≤ 0.0002). PhI by neutrophil was restored in both analysis: non-sensitized before therapy 1.5, after therapy 3.5 (P = 0.001), sensitized before therapy 113, post-therapy 157 (P = 0.01). The recovery was consistent with the values found in the control group: PhI by non-sensitized neutrophil 2.25, PhI by sensitized neutrophil 157. Similar results were found for the PhI by monocyte: non-sensitized before therapy 13:25, post-therapy 43.28 (P = 0.01). In contrast to the analysis of phagocytosis with the serum of the individual, the values achieved in the PhI by monocytes after therapy were higher than those found in the control group: PhI by monocyte in the control group 98, post-therapy 110 (P = 0.04). Similar results for the median of NBT. NBT in the control group 76.25, post- therapy 84.50 (P = 0.009), while the stimulated NBT in the control group 69.5 and post- therapy 80.75 (P = 0.003). There was no statistically significant difference in oxygen radical production in the control group and periodontitis group before therapy. Conclusion: Periodontal disease caused a reduction in both phagocytic function of neutrophils and monocytes, while periodontal therapy restored neutrophil function. Thus, there is the modulating role of infection in phagocytic cells. The results of the PhI by monocyte and NBT test after therapy in periodontitis group, suggest an intrinsic cell hyperactivity. This reinforces the need for periodic controls in periodontitis group in order to prevent recurrence of periodontal disease.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2013.
Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2013-05-13T13:38:11Z No. of bitstreams: 1 2013_PedroHenriqueVianaSaavedra.pdf: 1314251 bytes, checksum: ee5b0094f71f46179c6f13bef2a69329 (MD5)
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Cryptococcus neoformans é um fungo encapsulado patogênico humano que afeta principalmente indivíduos imunossuprimidos. Sua cápsula é um dos mais importantes fatores de virulência, e está envolvida com os processos de evasão da resposta imune e disseminação no hospedeiro. Neste trabalho foi investigado a ativação do inflamassoma por C. neoformans e o papel de sua cápsula nesse processo. Observou-se que o mutante acapsular de C. neoformans induziu elevados níveis da secreção de IL-1β e ativação da protease caspase-1. A secreção de IL-1β foi analisada em macrófagos derivados de medula deficientes para as proteínas ASC, caspase-1, NLRP3 e NLRC4, demonstrando que essa secreção depende do inflamassoma NLRP3, mas não de NLRC4. Além disso, os componentes do inflamassoma se mostraram dispensáveis para fagocitose e atividade antifúngica frente a infecção. Os mecanismos envolvidos no processamento de IL-1β foram dependentes de catepsina B frente ao dano lisossomal e sinalização via quinase Syk. Foi demonstrado também que a sinalização por IL-1β não aumenta a atividade antifúngica de macrófagos. No entanto, ela participa na restrição da taxa de infecção por mecanismos desconhecidos. Estes resultados mostram pela primeira vez que C. neoformans ativa o inflamassoma NLRP3 de forma dependente de caspase-1 através da liberação de catepsina B e sinalização via Syk, levando a produção de IL-1β e restrição da taxa de infecção. Adicionalmente, esses dados demonstram que os isolados encapsulados conseguem diminuir a ativação do inflamassoma. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT
Cryptococcus neoformans is an encapsulated human pathogenic fungus that affects primarly immunocompromised individuals. It has a prominent capsule that is an important virulence factor, which is involved in immune response evasion and fungal dissemination. In the present study we investigated whether C. neoformans was able of triggering inflammasome activation and the role of its capsule in this event. The results showed that the acapsular mutant induced high levels of IL-1β secretion and caspase-1 activation. IL-1β -/- -/-secretion induced by C. neoformans was assessed in WT, Asc , Casp1 , -/- -/- Nlrp3 and Nlrc4 bone marrow-derived macrophages, showing IL-1β secretion to be dependent on NLRP3, but independent on NLRC4 inflammasome. In addition, inflammasome components were dispensable for C. neoformans uptake or killing. The mechanisms underlying IL-1β processing and release were dependent on cathepsin B release following lysosomal destabilization and Syk tirosine kinase signaling. We also demonstrate that IL- 1β signaling is not required to restrict intracellular yeast, but limited the rate of infection by an unknown mechanism. Together, our data show for the first time that acapsular C. neoformans activates the NLRP3 inflammasome and IL-1β secretion in a caspase-1 dependent manner and that the mechanisms involved in this event rely on cathepsin B released during lysosomal damage and Syk signaling, leading to restriction of infection rate. Furthermore, our results show that encapsulated C. neoformans is able to dimish inflammasome activation.

Orientador: Maria Marluce dos Santos Vilela
Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas
Made available in DSpace on 2018-07-24T15:47:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Silva_MarcosTadeuNolascoda_D.pdf: 6274682 bytes, checksum: 8f5e7a38fc458fa958f10663a8995a6b (MD5) Previous issue date: 1998
Resumo: A suscetibilidade das células da linhagem monocitária à infecção pelo vírus da imunodeficiência humana (IllV) pode resultar em deficiências de suas funções efetoras e reguladoras. Mesmo células não parasitadas podem ser afetadas pelas anormalidades de imunomodulação associadas à infecção. Estes mecanismos podem estar asssociados a algumas características da Síndrome da Imunodeficiência Adquirida (SIDA) em pediatria, como a alta prevalência de infecções por patógenos intracelulares. A função monocitária de 33 crianças infectadas pelo HIV-I e 18 crianças expostas soro-reversoras foi avaliada por meio de um ensaio de fagocitose de monócitos para Zimosan (ZYM) e para hemácias de carneiro (EA), mediada pelos receptores CRI, CR3 e Fc, respectivamente. O ensaio para ZYM foi realizado com ZYM não-opsonizado, opsonizado com soro de indivíduos normais e de paciente. Foram determinados o índice fagocitário (porcentagem de células com fagocitose efetuada em uma lâmina) e a capacidade fagocitária (número de partículas.fagocitadas em 100 células). Simultaneamente à coleta de sangue para o ensaio de fagocitose, foram avaliados parâmetros hematológicos (hemograma completo), e imunológicos, ligados ao sistema T (subpopulações linfocitárias), ao sistema B (dosagem de imunogiobulinas), e à interação entre ambos (resposta à vacina anti-hepatite B). Os índices e capacidades fagocitários das crianças expostas ao IDV-I foram comparados a valores de um grupo de referência saudáveL Os resultados do ensaio de fagocitose mostraram uma redução da fagocitose mediada por CRI e CR3 em crianças infectadas, comparadas às soro-reversoras, e da fagocitose mediada por CRI, CR3 e Fc entre os grupos infectado e de referência. Comparadas ao grupo de referência, crianças soro-reversoras mostraram uma redução na fagocitose mediada por CRI, CR3 e Fc. No grupo de crianças infectadas, os seguintes fatores foram positivamente associados à intensidade da disfunção fagocitária: idade menor que 5 anos; início dos sintomas no I Q ano de vida; níveis mais elevados de linfócitos T CD4+ e CD8+; níveis mais elevados de carga viral sérica; níveis de IgG acima de 2.000 mg/dL. No ensaio de fagocitose mediada por CRI e CR3, a opsonização do ligante (ZYM) com soro de "pool" de indivíduos saudáveis não levou a uma atenuação da disfunção fagocitária. A detecção da disfunção fagocitária em crianças infectadas pelo mv -1 destaca a necessidade de uma compreensão mais detalhada das conseqüências imunopatogênicas, clínicas e terapêuticas da interação entre o mv e as células da linhagem monocitária na população pediátrica. As conseqüências da exposição precoce ao mv sobre a função imune das crianças soro-reversoras precisam ser melhor caracterizadas
Abstract: The uptake of human immunodeticiency virus (HIV) by the CD4 monocyte receptor may result in deticiencies of monocyte effector and regulatory functions. Even non infected cells may be affected by immunomodulatory abnormalities associated with HIV infection. These mechanisms may be associated with some clinical features of pediatric AIDS, such as the high prevalence of intracellular pathogen infections. Monocyte function was evaluated in 33 HIV -1-infected and 18 exposed seroreverter children with an assay of peripheral blood monocyte phagocytosis for Zymosan (ZYM) and sheep red blood cells (EA), mediated by the CRl,CR3 and Fc receptors, respectively. The ZYM assay was conducted with non-opsonized ZYM and opsonized ZYM with patient serum or serum ITom a normal blood donor pool. The phagocytic index (percentage of cells having phagocytosis on a slide) and the phagocytic capacity (number of phagocytized particles in 100 cells) were determined. Simultaneously with the collection of blood for the phagocytic assay, blood was collected for complete blood count, lymphocyte subsets determination (CD3+, CD4+, CD8+) and immunoglobulin levels (IgA, IgG, IgM). The response to Hepatitis B vaccine was also studied in infected children. The phagocytic indices and capacities of exposed children were compared to values ITom a healthy reference group. The results of the phagocytic assay sh~wed an impairment in CRI and CR3mediated phagocytosis between infected and seroreverter children, and in CRI, CR3 and Fcmediated phagocytosis between infected and reference groups. Compared to the reference group, seroreverter children had an impairment in CRI, CR3 and Fc-mediated phagocytosis. In the group of infected children, the factors positively associated with the severity of phagocyte disfunction were: age less than 5 year -old; begitJ11Íng of symptoms in the tirst year of life; higher levels of CD4+ and CD8+ T -lymphocytes; higher serum viral load; IgG levels higher than 2,000 mg I 100 rnL. In the assay for CRI and CR3-mediated phagocytosis, opsonization of the ligand (ZYM) with pooled serum ITom healthy adults did not improve phagocyte function. The detection of phagocyte dysfunction in HIV -l-infected children, warrants the need for a better understanding of the immunopathogenetical, clinical and therapeutical outcomes of HIV -monocyte / macrophage interactions in the pediatric population. The consequences of exposure to HIV -1 on the immune function of seroreverter children deserve more detailed studies
Doutorado
Doutor em Pediatria

Los objetivos han sido: 1) valorar la evolución clínica de los pacientes quemados y su relación con el estado inmunológico medido por la fagocitosis, la vía del complemento y el estado nutricional. 2) valorar el aporte nutricional de los pacientes con quemaduras severas con especial referencia a la ingesta de taurina y arginina. 3) estudiar los niveles de fagocitosis en sujetos normales y en pacientes con quemaduras de diferentes grados de severidad. 4) estudiar "in vitro" el efecto de los aminoácidos arginina y taurina sobre la fagocitosis tanto en sujetos normales como en pacientes con diferentes grados de quemadura.
Se han estudiado un total de 220 sujetos, 166 fueron sanos (grupo: A, B, C) y 54 pacientes con diferentes grados de quemaduras (grupo D) incluyendo 6 subgrupos.
Se calculó la SCQ, ABSI, aporte hídrico y aporte nutricional con el programa Dietsource optimizado en lo que se refiere a: a la composición de los platos, tamaño de la ración y contenido de taurina en los alimentos. La fagocitosis se se midió con el método del NBT (nitroblue de tetrazolio). En los grupos en los que se adicionaron aminoácidos in vitro, las dosis utilizadas fueron de 300 mM para la taurina y 380 mM para la arginina equivalentes unas 3-5 veces los valores fisiológicos. Durante las primeras 24 horas, al 7º, 15º y al 21º días de la quemadura se determinaron los parámetros hematológicos: hemoglobina, hematocrito, contaje celular, formula leucocitaria, fragmentos C3 y C4 del complemento y los bioquímicos: la glucosa, sodio, potasio, proteínas totales, albúmina, colesterol, triglicéridos e inmunoglobulinas. En las pruebas estadísticas que utilizamos , se aceptó un nivel de significación estadística de p < 0,05.
Los típos de complicaciones más frecuente fueron: la sepsis, seguida de las infecciones y la hemorragia digestiva que se asocian a un ABSI elevado.
Conclusiones. La causa más frecuente de muerte ha sido el fallo multiorgánico. En las quemaduras severas hay alteraciones del perfíl hematológico y bioquímico que no se normalizan a los 21 días. Existe una notable asociación estadística del ABSI con SCQ, IGM y la fagocitosis. El aporte energético en los pacientes con quemaduras severas desciende por debajo de los requeriminetos teóricos, con una disminución máxima en los primeros 15 días. En sujetos sanos la adición de taurina y arginina in vitro produce un incremento de la fagocitosis. En los pacietes con quemaduras severas la adición de taurina y arginina in vitro produce un incremento significativo de la fagocitosis, aunque inferior al que se observa en los sujetos sanos.

Orientador: Alexandra Ivo de Medeiros
Banca: Alexandre Salgado Basso
Banca: Alexander Batista-Duharte
Resumo: A fagocitose, por células dendríticas (CD), de células apoptóticas (CA) infectadas induz a produção de TGF-β, IL-6 e IL-23, propiciando um microambiente com condições ideais para diferenciação de células Th17. Recentes resultados obtidos por nosso grupo demonstram que a fagocitose, por CD, de células apoptóticas infectadas resulta também na produção de altos IL- 1 e PGE2. A presença destes mediadores solúveis foi capaz de induzir a diferenciação de células Th17, in vitro, no entanto, a inibição da síntese de PGE2, pelo tratamento com inibidor não seletivo da COX (Indometacina), resultou no aumento da porcentagem destes linfócitos. Neste estudo foi avaliado o efeito da fagocitose de células apoptóticas infectadas com Escherichia coli (CA+Ec) na diferenciação de células Th17 in vivo e o efeito de PGE2 neste processo. A instilação de animais com CA+Ec, induziu a produção das citocinas IL-6, IL-1β e TGF-β no pulmão, o que sugere que a presença de CA+Ec é capaz de gerar um microambiente favorável para induzir a diferenciação Th17. A instilação de CA+Ec promoveu a diferenciação de células Th17, assim como a produção de IL-17. Porém, o tratamento com inibidor de COX resultou no aumento na porcentagem e no número de células Th17 no pulmão. A presença destas células resultou no aumento na porcentagem de neutrófilos no tecido pulmonar que parece refletir na diminuição da carga bacteriana recuperada do pulmão, quando comparado com animais que não receberam o tratamento. Assim, o conjunto destes resultados sugere que a fagocitose de CA+E. coli promove a diferenciação de células Th17. No entanto, a secreção de PGE2, pela fagocitose destas CA+Ec suprime a diferenciação e/ou migração de células Th17 para o pulmão, levando a inibição do recrutamento de neutrófilos e aumento da suscetibilidade às infecções pulmonares.
Abstract: The phagocytosis of infected-apoptotic cells (iAC) by dendritic cells (DC) induces the production of TGF-β, IL-6 and IL-23, providing a microenvironment to Th17 cell differentiation. Recent data obtained in our group showed that the phagocytosis of infected- apoptotic cells by CD also results in high levels of IL-1β and PGE2. The presence of these soluble mediators was able to induce the differentiation of Th17 cells, in vitro. However, the inhibition of PGE2 synthesis, by non-selective COX inhibitor (indomethacin), result the increase of percentage of Th17. In this study, it was evaluated the effect of phagocytosis of infected-apoptotic cells (AC+E. coli) during the Th17 cell differentiation, in vivo, and the effect of PGE2 in this process. The inoculation of AC+ Ec (in.) into lung induced the production of IL-6, IL-1β and TGF-β in lung, suggesting that the presence of AC+Ec is able to induce a microenvironment favorable to Th17 cell differentiation. The instillation of AC+Ec induced the differentiation of Th17 cells. However, the treatment of the animals with COX inhibitor resulted in an increase in the percentage, and number, of Th17 cells in the lung. The presence of these cells increased in the percentage of neutrophils in the lung and that apparently reflect in bacterial clearance from the lung, compared to animals that received no treatment. Taken all together, the phagocytosis of AC+Ec promotes the Th17 cell differentiation. However, the production of PGE2 by efferocytosis suppresses the differentiation and / or migration of Th17 cells to the lungs, impair the recruitment of neutrophils and increase the susceptibility to lung infections.
Mestre

A fagocitose de células apoptóticas, também denominada eferocitose, é um processo dinâmico e de fundamental importância para homeostase dos tecidos após uma injúria. Estudos demonstraram previamente que a fagocitose de células apoptóticas promove a síntese de mediadores anti-inflamatórios como PGE2, TGF-? e IL-10, podendo resultar num microambiente supressor e aumento da susceptibilidade do hospedeiro contra agentes infecciosos. Entretanto, a fagocitose de células apoptóticas infectadas por células dendríticas promove a geração não apenas de citocinas anti-inflamatórias como TGF-?, mas também de IL-6 e IL-23, levando a um efeito imunoestimulador, a diferenciação de células Th17. A atuação da PGE2 na imunidade adaptativa vem sendo investigada quanto à diferenciação e ativação de linfócitos Th1, Treg e Th17. Nossos resultados demonstram que a fagocitose de células apoptóticas infectadas com E. coli promove a ativação e migração de células dendríticas, assim como a produção de citocinas pró- e anti-inflamatórias e altos níveis de PGE2. No entanto, diferente da hipótese inicial, a presença de altas concentrações de PGE2 inibe drasticamente a diferenciação de células Th17 no contexto de fagocitose de células apoptóticas infectadas com E. coli por células dendríticas, in vitro. O tratamento de linfócitos T CD4+naive com antagonistas e agonistas de EP2/EP4 demonstram que o efeito supressor de PGE2 é mediado primordialmente pelo receptor EP4. Por fim, nossos resultados in vivo comprovam os resultados obtidos in vitro, demonstrando o papel supressor de PGE2 na diferenciação de células Th17 no contexto de fagocitose de células apoptóticas infectadas em modelo de infecção pulmonar.
The phagocytosis of apoptotic cells, also called efferocytosis, is a dynamic process critical for tissue homeostasis after injury. We and other groups previously have shown that phagocytosis of apoptotic cells promotes the synthesis of anti-inflammatory mediators such as PGE2, TGF-? and IL-10, that may result in the suppression of host defense against microorganisms. However, an elegant study using infected apoptotic cells showed that phagocytosis of these cells promote not only the generation of anti-inflammatory cytokines such as TGF-? but also IL-6 and IL-23, resulting in an immunostimulatory effect, the differentiation of Th17 cells. The role of PGE2 in adaptive immunity has been investigated regarding differentiation and activation of Th1, Th17 and Treg. Our results demonstrate that engulfment of E.coli infected apoptotic cells promotes the activation and migration of dendritic cells as well as production of pro and anti-inflammatory cytokines together with high levels of PGE2. However, differing from our hypothesis, high levels of PGE2 inhibits drastically the differentiation of Th17 cells on the context of engulfment of E.coli infected apoptotic cells by dendritic cells in vitro. The treatment of T CD4+naive cells with antagonist or agonists of EP2/EP4 receptors demonstrates the suppressor effect is mainly mediated by EP4 receptor. Finally, the instillation of E.coli infected apoptotic cells in E.coli infected animals resulted on modest Th17 increase but treatment with cox inhibitor increased Th17 cell differentiation. Therefore, our in vivo results prove the in vitro results.

Made available in DSpace on 2016-04-28T20:17:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 1998 - Jose Luis de Carvalho.pdf: 155465 bytes, checksum: 7d8adfe2d500eb89d6de012ebb6c3718 (MD5) Previous issue date: 1998-09-22
The present thesis was concerned to imnunoassays, carried out in order to evaluate the aflatoxin interference on the inflammatory mechanisms. Experiments were done by in vivo procedures. In the in vivo experiments, chickens (Hubard x Hubard) received 100 μg / g de aflatoxin, 2 hours before infection with Escherichia coli. The blood clearance of Escherichia coli, was determined by haemoculture and quantification of the bacteria colonies in tryptose agar medium at different intervals ( 5, 10, 15, 30, 45, 60, 120 minutes). A significant decrease of the number of colonies recovering was observed at the 15 minutes period, of aflatoxin-trated chikens. From there on, animals intoxicated with aflatoxin were not able to eliminate the circulating bacterias. Aflatoxin-trated chikens, there were detectable a significant decrease of number of bacteria colonies on the organ, than in the control group. The per cent of bacterias were found in the spleen and liver, with the rate of 91.9 % and 7.6 %, respectively. The results have been shown, aflatoxin to be a micotoxin hepatotoxic and nephrotoxic.
O presente trabalho foi realizado com o intuito de determinar a extens?o dos preju?zos causados ao sistema imunit?rio pela aflatoxina. A modula??o inflamat?ria foi avaliada atrav?s de ensaios in vivo, realizados em aves Hubard x Hubard, previamente expostos ? aflatoxina (100 μg / g de peso vivo - 2 horas antes da infec??o). Os experimentos in vivo basearam-se na elimina??o ( clearance ) de Escherichia coli (amostra k-12 - FIOCRUZ), apartir de infec??es experimentais, seguidas de sangria, hemocultivo e contagem do n?mero de bact?rias circulantes em diferentes intervalos de tempo. Observou-se uma acentuada diminui??o do n?mero de bact?rias circulantes durante os 15 minutos de avalia??o no grupo tratado. Apartir de ent?o, os animais intoxicados mostraram-se incapazes de eliminar bact?rias circulantes, evidenciando ter havido uma supress?o da resposta inflamat?ria. Nos animais intoxicados, foi dectado uma acentuada diminui??o do n?mero de bact?rias nos ?rg?os em compara??o com os n?o tratados . O percentual de bact?rias foi maior no ba?o e f?gado, com uma taxa de 91,9% e 7,6% respectivamente. Os resultados mostraram a hepatoxicidade e nefrotoxicidade das aflatoxinas.

Made available in DSpace on 2018-07-27T18:26:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-06-03. Added 1 bitstream(s) on 2018-07-27T18:30:37Z : No. of bitstreams: 1 000873683.pdf: 2162420 bytes, checksum: 8020e5fc7625f96c8be7397dc9a7ec86 (MD5)
Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)
Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)
Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)
A fagocitose, por células dendríticas (CD), de células apoptóticas (CA) infectadas induz a produção de TGF-β, IL-6 e IL-23, propiciando um microambiente com condições ideais para diferenciação de células Th17. Recentes resultados obtidos por nosso grupo demonstram que a fagocitose, por CD, de células apoptóticas infectadas resulta também na produção de altos IL- 1 e PGE2. A presença destes mediadores solúveis foi capaz de induzir a diferenciação de células Th17, in vitro, no entanto, a inibição da síntese de PGE2, pelo tratamento com inibidor não seletivo da COX (Indometacina), resultou no aumento da porcentagem destes linfócitos. Neste estudo foi avaliado o efeito da fagocitose de células apoptóticas infectadas com Escherichia coli (CA+Ec) na diferenciação de células Th17 in vivo e o efeito de PGE2 neste processo. A instilação de animais com CA+Ec, induziu a produção das citocinas IL-6, IL-1β e TGF-β no pulmão, o que sugere que a presença de CA+Ec é capaz de gerar um microambiente favorável para induzir a diferenciação Th17. A instilação de CA+Ec promoveu a diferenciação de células Th17, assim como a produção de IL-17. Porém, o tratamento com inibidor de COX resultou no aumento na porcentagem e no número de células Th17 no pulmão. A presença destas células resultou no aumento na porcentagem de neutrófilos no tecido pulmonar que parece refletir na diminuição da carga bacteriana recuperada do pulmão, quando comparado com animais que não receberam o tratamento. Assim, o conjunto destes resultados sugere que a fagocitose de CA+E. coli promove a diferenciação de células Th17. No entanto, a secreção de PGE2, pela fagocitose destas CA+Ec suprime a diferenciação e/ou migração de células Th17 para o pulmão, levando a inibição do recrutamento de neutrófilos e aumento da suscetibilidade às infecções pulmonares.
The phagocytosis of infected-apoptotic cells (iAC) by dendritic cells (DC) induces the production of TGF-β, IL-6 and IL-23, providing a microenvironment to Th17 cell differentiation. Recent data obtained in our group showed that the phagocytosis of infected- apoptotic cells by CD also results in high levels of IL-1β and PGE2. The presence of these soluble mediators was able to induce the differentiation of Th17 cells, in vitro. However, the inhibition of PGE2 synthesis, by non-selective COX inhibitor (indomethacin), result the increase of percentage of Th17. In this study, it was evaluated the effect of phagocytosis of infected-apoptotic cells (AC+E. coli) during the Th17 cell differentiation, in vivo, and the effect of PGE2 in this process. The inoculation of AC+ Ec (in.) into lung induced the production of IL-6, IL-1β and TGF-β in lung, suggesting that the presence of AC+Ec is able to induce a microenvironment favorable to Th17 cell differentiation. The instillation of AC+Ec induced the differentiation of Th17 cells. However, the treatment of the animals with COX inhibitor resulted in an increase in the percentage, and number, of Th17 cells in the lung. The presence of these cells increased in the percentage of neutrophils in the lung and that apparently reflect in bacterial clearance from the lung, compared to animals that received no treatment. Taken all together, the phagocytosis of AC+Ec promotes the Th17 cell differentiation. However, the production of PGE2 by efferocytosis suppresses the differentiation and / or migration of Th17 cells to the lungs, impair the recruitment of neutrophils and increase the susceptibility to lung infections.
FAPESP: 11/17611-7

Orientador: Jose Francisco Figueiredo
Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia
Made available in DSpace on 2018-07-28T02:45:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Belline_Paula_D.pdf: 5802227 bytes, checksum: 5e741aa3b11f4fc27b7fe698e1c43b88 (MD5) Previous issue date: 2001
Resumo: O Sistema Renina Angiotensina (SRA) é um mecanismo importante para a regulação da homeostase cardiovascular via balanço de sódio em indivíduos normais e hipertensos. Recentemente, diversos trabalhos têm comprovado a existência de um SRA local em diferentes tecidos, inclusive em células do Sistema Imunológico. Nosso estudo teve como objetivo analisar em cultura a ação de Angiotensina II (AlI) sobre algumas funções de macrófagos provenientes do peritôneo de camundongos (BALB/c e NOD - Diabéticos Não Obesos). Primeiramente, determinamos a curva dose-resposta de Angiotensina II (AII) com relação à atividade fagocitária nos períodos de 1 e 3 horas de tratamento. Verificamos que a dose de AII que estimulou a fagocitose foi 10-12 M. Para verificarmos a presença de receptores de AII, determinamos também uma curva dose-resposta do antagonista do receptor ATl, DuP 753, conhecido comercialmente como Losartan®. O protocolo com DuP 753 foi realizado na presença e ausência de AII. Nossos resultados mostraram que apesar de inibirmos a atividade fagocitária em diferentes concentrações de DuP, a maior inibição, tanto em animais normais quanto em animais diabéticos, foi com a dose de 1 O-6 M. Em seguida resolvemos avaliar o efeito citotóxico de DuP 753 para comprovarmos que seu efeito inibitório não foi causado por uma alteração da viabilidade celular. Realizamos 3 testes de citotoxicidade: MTT (Brometo de [3-( 4,5-dimetiltiazol-2-il]-2,5 difeniltetrazolio), análise do conteúdo de ácidos nucléicos (CAN) e a liberação de lactato desidrogenase (LDH). Os 3 testes comprovaram que DuP 753 nas concentrações utilizadas não exerceu efeito tóxico para macrófagos em cultura. Além da atividade fagocitária, analisamos também a produção do radical superóxido através da redução do ferricitocromo c. Nossos resultados demonstraram que a dose estimuladora de AII (10-12 M) e a dose inibitória de DuP (10-6 M) com relação à atividade fagocitária das células, não alteraram a produção do ânion superóxido. Isto mostra que a função fagocitária e a produção do radical superóxido são ativadas provavelmente por concentrações diferentes de AII. Finalmente demonstramos por imunofluorescência os tipos de receptores de AII presentes em macrófagos BALB/c e NOD. Verificamos a existência de receptores do tipo ATI e AT2 e que o tratamento das células com AII e DuP parece alterar o número destes receptores. Isto comprova a influência do SRA sobre a função fagocitária de uma das células do Sistema Imunológico
Abstract: The Renin Angiotensin System (RAS) is an important regulatory mechanism of cardiovascular homeostasis in normal and hypertensive subjects. Recently, several reports have been showed the existence of a local RAS in different cells and tissues, inclusive immunological cells. The aim of this study was evaluated in culture the effect of Angiotensin II (AII) on peritoneal mice macrophages (BALB/c and Non Obese Diabetic - NOD). The dose response curve of AII on phagocytic activity was determined during 1 and 3 hours of treatment and the stimulant dose of the phagocytosis was AII 10-12 M. To verify if this stimulus was obtained through AT1 receptor, the dose response curve of DuP 753 was determined. The protocol with DuP 753 was realized in the presence and absence of AII. The results showed that the inhibition of the phagocytic activity occurred in different concentrations of DuP, but the higher inhibition, in normal and diabetic animals, it was with 10-6 M. In order to evaluate the cytotoxic effect of DuP 753 and to show that the inhibition effect was not caused by an alteration of the cellular viability, were realized 3 cytotoxic assays: MTT reduction, analysis of nucleic acid content (NAC) and lactate dehydrogenase release (LDH). All assays indicated that cell viability was maintained afier treatment with DuP 753 in concentrations used. In addition of the phagocytic activity, the effect of AII and DuP 753 in production of superoxide anions was also investigate through the ferricytochrome c reduction. The results demonstrated that the phagocytic stimulant dose of AII (10-12 M) and the inhibition phagocytic dose of DuP (10-6 M) did not influence the superoxide production of macrophages. These results showed that the phagocytic function and superoxide production are probably activated by different concentrations of AII. Finally, an immunofluorescence study was performed in order to identify the type of AII receptors are present in BALB/c and NOD macrophages. The treatment of the cells with AII and DuP changed the immunoreactive of AT1 and AT2 receptors. This shows the influence of RAS on the function and metabolism of lmmunological Cell System
Doutorado
Bioquimica
Doutor em Biologia Funcional e Molecular

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Pós-graduação em Medicina Tropical, 2015.
Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2016-06-21T16:20:41Z No. of bitstreams: 1 2015_HelaneCatarineDantasdoNascimentoRibeiro.pdf: 5640990 bytes, checksum: f577306d6c7e1c7f705450e010cf2e22 (MD5)
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As parasitoses intestinais apresentam uma alta prevalência no mundo. Estudos revelam o aumento das doenças alérgicas e da asma e concomitantemente redução das doenças infectoparasitárias em crianças. A existência de uma correlação é estudada demonstrando a ação imunossupressora dos parasitos intestinais sobre a resposta imunitária sistêmica. Os objetivos do presente trabalho foram avaliar o estado de ativação dos eosinófilos e as funções dos fagócitos comparativamente em crianças com asma, com parasitoses intestinais e na associação de ambas. Foi realizado estudo transversal com 68 crianças residentes no Riacho Fundo II e na Cidade Estrutural, em Brasília/Distrito Federal. Os pacientes foram separados nos grupos: A) crianças com parasitoses intestinais; B) crianças asmáticas sem parasitoses intestinais; C) crianças com parasitoses intestinais e asma e D) grupo controle. Após técnica de aderência em lâmina, foram avaliados: o estado de ativação dos eosinófilos do sangue periférico por parâmetros morfológicos; a fagocitose pelos monócitos (MON) e neutrófilos (NEU) por receptores para padrões moleculares de patógenos (rPMP) e para opsoninas (rOps), como também a produção de ânions superóxido (O-) pelo teste do nitroblue tetrazolium (NBT). As análises estatísticas foram realizadas pelos testes de ANOVA ou Kruskal-Wallis. Observamos, além da baixa renda familiar e reduzidas condições de escolaridade, a prática de evacuações no peridomicílio pelas crianças e a ausência de tratamento domiciliar da água de beber. Os parasitos intestinais mais prevalentes foram Ascaris lumbricoides e Giardia lamblia, seguida por Hymenolepis nana e houve associação de parasitos intestinais em 38% dos pacientes parasitados. A ativação dos eosinófilos foi menor nas crianças com enteroparasitoses, quando analisados o percentual de eosinófilos normais, espraiamento, liberação de pequenas quantidades de grânulos e emissão de pseudópode único, comparativamente às crianças asmáticas. A capacidade fagocitária pelos rPMP dos NEU das crianças parasitadas exclusivamente por protozoários foi menor do que a das crianças asmáticas. Quando a fagocitose foi avaliada pelos rOps, a capacidade fagocitária dos MON das crianças asmáticas e também parasitadas foi maior do que a das crianças controle, pela maior ingestão de leveduras pelos MON. A produção de O- pelos fagócitos foi menor nas crianças parasitadas por protozoários do que nas crianças asmáticas e parasitadas por protozoários. Contudo, a produção dos O- foi maior nas crianças parasitadas por helmintos do que nas crianças asmáticas. Em conclusão, a infecção parasitária e o quadro de asma tiveram efeitos opostos sobre as diversas funções da imunidade inata estudada. O tipo de resposta dependeu do tipo de parasito e helmintos e protozoários determinaram repostas opostas: enquanto os protozoários, particularmente a Giardia intestinalis, diminuíram a capacidade fagocitária dos NEU pelos rPMP, os helmintos estimularam a fagocitose pelos MON pelos rOps. Em adição, enquanto no quadro de asma observamos certo grau de ativação dos eosinófilos, nas crianças parasitadas, essa ativação dos eosinófilos no sangue periférico não ocorreu, possivelmente por fatores supressores produzidos pelos parasitos. Tais achados podem contribuir para o esclarecimento sobre a resposta imune inata aos parasitos e suas repercussões no indivíduo, auxiliando na abordagem das parasitoses e no desenvolvimento de novas terapêuticas para a asma e atopias.
Intestinal parasites have a high prevalence worldwide, mainly in developing countries in places showing poor sanitary and socio-economic conditions. Several studies point to an increase in allergic diseases and asthma over the years, and show a concomitant reduction in infectious and parasitic diseases in children. The existence of such a correlation or causal factor has been investigated in experimental models with animal and human beings, leading to findings that demonstrate the immunosuppressive action of the parasites on the systemic immune response. Factors depending on the host, such as genotype, immune competence and nutritional status; and factors depending on the parasite, as the parasite load and the pathogenicity and virulence of helminths or protozoans, will determine the type of immune response triggered in infected individuals. In this context, this work aimed to evaluate eosinophil activation status and phagocytes' functions comparatively in children with asthma, intestinal parasites and in combination of both. A cross-sectional study was done in 68 children living in Riacho Fundo II and Chácara Santa Luzia in Cidade Estrutural, in Brasilia/Federal District, Brazil. The socio-economic-cultural evaluation of the families, and clinical, laboratory and stool testing of each child were made. Four groups were studied: A) Helminths or/and protozooan parasitized children; B) asthmatic children; C) asthmatic and parasitized children; and D) control group. The blood eosinophil activation status was assessed by morphologic parameters after adherence to glass. The phagocytic capacity of monocytes and neutrophils was evaluated by pathogen-associated molecular pattern receptors (PAMPr) and the opsonin receptors, as well as superoxide anions production by nitroblue tetrazolium test (NBT). Statistic analyses were performed by ANOVA or Kruskal-Wallis test. Eosinophils were lower activated in children with intestinal parasites than in asmathic children, by percentage of normal eosinophils, spreading, releasing of small quantities of granules and emission of a single pseudopod. The phagocytic capacity of neutrophils of children exclusively parasitized by protozoan was lower than that of asthmatic children, by pathogen-associated molecular pattern receptors. When the phagocytosis was evaluated by opsonin receptors, phagocytic capacity of monocytes in asthmatic children concomitantly parasitized was higher than that of controls. Superoxide anions production was lower in children parasitized by protozoan than in children with asthma plus protozoan. However, superoxide anions production was higher in children who were parasitized by helminths than in asthmatic children. In conclusion, our data showed that parasitic infection and asthma had opposite effects on several immune innate functions. Furthermore, immune response depended on the type of parasite, and helminths and protozoa determined opposite responses: whereas protozoan, mainly Giardia intestinalis, decreased phagocytic capacity by neutrophils by PAMPr, helminths stimulated phagocytosis by monocytes by opsonin receptors. In addition, whereas in asthmatic children there were some eosinophil activation, in parasitized children there was no blood eosinophil activation possibly determined by suppressive factors produced by parasites. These findings may contribute to make clear the innate immune response to parasites and their impact on individual, assisting to understand parasites and in development of new therapies for treatment of asthma and atopies.

Os leucotrienos aumentam a fagocitose e a atividade microbicida contra uma série de patógenos. Em macrófagos alveolares, LTB4 e LTD4 aumentam a fagocitose via FcγR de modo dependente de PKC. Entretanto, o papel das isoformas específicas da PKC, das MAPK, e da PI3K neste processo, ainda não é conhecido. Além disso, pouco se sabe sobre a importância dos leucotrienos na fagocitose via outros receptores. Os objetivos deste trabalho são: a) ampliar o conhecimento sobre as vias de sinalização ativadas pelos leucotrienos durante a fagocitose de hemácias opsonizadas por IgG; b) avaliar o efeito dos leucotrienos na fagocitose de Candida albicans, por macrófagos alveolares e as vias de sinalização intracelular envolvidas. Observou-se que os leucotrienos endogenamente produzidos ou adicionados aos macrófagos alveolares, aumentam a fagocitose via FcγR e para isso utilizam distintas vias de sinalização intracelular. A ação do LTB4 envolveu predominantemente a via ERK1/2 e PKCα. E com menor intensidade da PKCδ. A ação do LTD4 envolveu exclusivamente a via p38 e PKCδ. Ambos leucotrienos utilizaram a PI3K para aumentar a fagocitose via FcγR. Na fagocitose de C.albicans, os macrófagos alveolares produziram LTB4. Tanto o LTB4 quanto o LTD4 endógenos contribuíram para a fagocitose da C.albicans que ocorre predominantemente via receptor manose. A fagocitose via receptor manose foi potencializada pela adição tahto do LTB4 quanto do LTD4 cγ de modo dependente da ativação da PKCδ e da PI3K. As vias da PKCα., ERK1/2 e p38 não estão envolvidas na potencialização da fagocitose de C.albicans por leucotrienos. O esclarecimento das moléculas sinalizadoras envolvidas na interação de macrófagos alveolares com patógenos poderá contribuir para o desenvolvimento de alvos específicos e refinados no controle e tratamento de infecções pulmonares. Analisados em conjunto, os resultados mostram que os leucotrienos são importantes moduladores das funções dos macrófagos alveolares, por aumentar a fagocitose tanto através dos receptores para Fcγ como do receptor manose. Além disso, os LTB4 e LTD4 ativam programas de sinalização distintos para potencializar a fagocitose via receptor Fcγ, enquanto na fagocitose via receptor manose os LTB4 e LTD4 usam as mesmas vias.
Leukotrienes enhance phagocytosis and microbicidal activity against several pathogens. In alveolar macrophages, LTB4 and cysteinyl LT both enhance Fcγ receptor - mediated phagocytosis. While both LTB4 and LTD4 enhances phagocytosis dependent on PKC activity, only LTB4 requires the protein tyrosine kinase syk to do so. However, the role of specific PKC isoforms, MAPKs (p38 and ERK1/2), and PI3K in mediating LT-enhanced FcγR-mediated phagocytosis is unknown. In addition, the importance of LT in the phagocytosis via other receptors is also understudied. In the present work we sought to determine the importance of the above kinases during IgG-opsonized phagocytosis and if both classes of LT enhance the ingestion of C. albicans; the receptors and the molecular mechanisms involved. Studies with isoform-selective inhibitors indicated that LTB4 effects were dependent on both PKCα. And PKCδ, while LTD4 effects were exclusively due to PKCδ activation. Although both exogenous LTB4 and LTD4 enhanced p38 and ERK1/2 activation, LTB4 required only ERK1/2, while LTD4 required only p38 activation. Activation by both LT was dependent on PI3K activation. It was found that exogenously added LTB4 and LTD4 both enhanced PKC& and PKCα. Phosphorylation during FcγR engagement. Regarding the studies concerning the importance of LT in the ingestion of C.albicans, both endogenous and exogenous LTB4 and LTD4 enhanced C.albicans phagocytosis. LT effects were dependent exclusively on PKCδ and P13K. We also demonstrated that the LT effect on C.albicans was due to the mannose receptor activation. Taken together, leukotrienes are potente immunomodulators of the phagocyte function, by enhancing phagocytosis both via FcγR and mannose receptor. Moreover, LT receptors activate different signaling programs to enhance FcγR-mediated phagocytosis, while the signaling elicited to enhance C.albicans ingestion is similar for both classes of LTs. Thus the nature of the signaling elicited by the phagocytic receptors dictates the signaling induced by LT.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:26:43Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-01-25Bitstream added on 2014-06-13T20:34:31Z : No. of bitstreams: 1 souza_tp_me_arafcf.pdf: 2625945 bytes, checksum: 1db91800580287c4786df2ee6a0192b3 (MD5)
Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)
Os receptores scavenger (SR) são os principais receptores de reconhecimento padrão (PRR) envolvidos na fagocitose de Streptococcus pneumoniae por macrófagos alveolares (AMs), células estas consideradas a primeira linha de defesa no pulmão. Sabe-se que indivíduos acometidos por doenças pulmonares obstrutivas crônicas (DPOC) são susceptíveis a infecções bacterianas recorrentes e apresentam um intenso acúmulo de células apoptóticas (ACs) no parênquima pulmonar. A hipótese deste estudo fundamenta-se em que o acúmulo de ACs e a fagocitose destas por AMs poderia suprimir as funções efetores destas células, através da liberação de mediadores anti-inflamatórios, tais como TGF- e PGE2. No entanto, nada se sabe quanto aos mecanismos pelos quais PGE2 poderia suprimir esses mecanismos efetores de macrófagos alveolares contra S. pneumoniae, via SR. Nossos resultados demonstram que a presença de ACs promove a inibição da fagocitose e a atividade microbicida de AMs contra S. pneumoniae. A inibição da fagocitose de S. pneumoniae mediada pela eferocitose foi revertida pela inibição da síntese de PGE2 endógena, assim como pelo tratamento com antagonistas deEP2 e pela inibição da enzimaadenililciclase. No entanto, estes efeitos supressores de PGE2 decorrentes da eferocitose por AMs foram independentes da ação de PKA. Desta forma, podemos sugerir que a presença de ACs no pulmão de indivíduos com DPOC poderia desencadear a síntese exacerbada de PGE2 e contribuir na supressão das funções efetoras de AMs contra infecções bacterianas, como S. pneumoniae. Portanto, o tratamento com inibidores da COX, concomitante à terapia antimicrobiana, poderia levar a uma melhora no quadro de imunossupressão desencadeado pela ação de PGE2 no microambiente pulmonar e, portanto, restauração das funções efetoras de AMs
The scavenger receptors (SR) are the major receptors involved in the Streptococcus pneumonia phagocytosis by alveolar macrophages (AMs) that act as the first line of defense in the lung. The increase of susceptibility to bacterial infections has been demonstrated in chronic inflammatory pulmonary disease in which there is an intense accumulation of apoptotic cells (ACs). Our hypothesis is that the uptake of ACs by macrophages could suppress immune responses by releasing anti-inflammatory mediators, such as TGF- and PGE2. However, the way in which PGE2 suppress the effector mechanisms against Streptococcus pneumonia by SR in alveolar macrophages is unclear. We found that the preincubation with AC inhibited the ingestion and killing of S. pneumonia by AMs. The inhibition of S. pneumonia phagocytosis by efferocytosis was partially reverted when endogenous PGE2 production was repressed with a COX inhibitor, EP2 antagonist and likewise with an adenylate cyclase inhibitor. However, this suppressive effect was PKA independent. Moreover, we demonstrated that the inhibition of S. pneumonia phagocytosis by efferocytosis was more pronounced in scavenger receptors class B (SR-B). Thus, we suggest that the presence of ACs in the lungs of patients with COPD could trigger the synthesis of PGE2 and promote the suppression of effector functions of AMs against bacterial infections, such as S. pneumoniae. Therefore, treatment with COX inhibitors, concomitant-microbial therapy, could lead to an improvement in the immunosuppression triggered by the action of PGE2 in the lung microenvironment and thus restoration of effector functions of AMs

A cromoblastomicose é infecção da pele e do tecido subcutâneo que resulta da implantação traumática transcutânea de propágulos originários de diversas espécies fúngicas. A doença é insidiosa e as lesões causadas pelos mesmos apresentam evolução lenta e os pacientes cronicamente infectados deixam de responder a alguns tratamentos. Considerando a importância dos macrófagos na interação dos sistemas imune inato e adaptativo, bem como na ativação de células T, no presente trabalho foram realizados ensaios de fagocitose empregando conídios das principais espécies fúngicas causadoras da cromoblastomicose (Fonsecaea pedrosoi, Cladophialophora carrionii, Rhinocladiella aquaspersa e Phialophora verrucosa), viabilidade de conídios seguidos da dosagem de citocinas. Verificamos que os receptores de manose atuaram significativamente no processo de fagocitose dos fungos Fonsecaea pedrosoi e Rhinocladiella aquaspersa. Além da da manose, outros açúcares como glicose e lactose, também inibiram a fagocitose desses fungos. Já os conídios fagocitados por macrófagos, provocaram diminuição significativa na expressão de suas moléculas de superfície, tais como CD80, CD86 e MHC classe II. Foi demonstrado que os fungos Rhinocladiella aquaspersa, Phialophora verrucosa e Cladophialophora carrionii permaneceram viáveis após 72 horas de interação com os macrófagos no processo fagocítico. Assim como observamos que ocorreu uma produção elevada de NO no período de 12 horas principalmente na presença de Fonsecaea pedrosoi, entretanto, o fungo não foi eliminado pelo macrófago. Ao analisarmos a síntese de IL-1β e IL-6, os fungos Rhinocladiella aquaspersa e Cladophialophora carrionii produziram esta citocina significativamente. Ao contrário, na síntese de TNF-α, todos os agentes da cromoblastomicose secretaram esta interleucina. Esses resultados sugerem que apesar dos diferentes fungos causarem a mesma patologia, os vários agentes etiológicos na cromoblastomicose pode levar a uma resposta imunológica diferente e conseqüentemente alterar a evolução da doença.
Abstract not available.

Orientador: Alexandra Ivo de Medeiros
Banca: Cleslei Fernando Zanelli
Banca: Vânia Luiza Deperon Bonato
Resumo: Os receptores scavenger (SR) são os principais receptores de reconhecimento padrão (PRR) envolvidos na fagocitose de Streptococcus pneumoniae por macrófagos alveolares (AMs), células estas consideradas a primeira linha de defesa no pulmão. Sabe-se que indivíduos acometidos por doenças pulmonares obstrutivas crônicas (DPOC) são susceptíveis a infecções bacterianas recorrentes e apresentam um intenso acúmulo de células apoptóticas (ACs) no parênquima pulmonar. A hipótese deste estudo fundamenta-se em que o acúmulo de ACs e a fagocitose destas por AMs poderia suprimir as funções efetores destas células, através da liberação de mediadores anti-inflamatórios, tais como TGF- e PGE2. No entanto, nada se sabe quanto aos mecanismos pelos quais PGE2 poderia suprimir esses mecanismos efetores de macrófagos alveolares contra S. pneumoniae, via SR. Nossos resultados demonstram que a presença de ACs promove a inibição da fagocitose e a atividade microbicida de AMs contra S. pneumoniae. A inibição da fagocitose de S. pneumoniae mediada pela eferocitose foi revertida pela inibição da síntese de PGE2 endógena, assim como pelo tratamento com antagonistas deEP2 e pela inibição da enzimaadenililciclase. No entanto, estes efeitos supressores de PGE2 decorrentes da eferocitose por AMs foram independentes da ação de PKA. Desta forma, podemos sugerir que a presença de ACs no pulmão de indivíduos com DPOC poderia desencadear a síntese exacerbada de PGE2 e contribuir na supressão das funções efetoras de AMs contra infecções bacterianas, como S. pneumoniae. Portanto, o tratamento com inibidores da COX, concomitante à terapia antimicrobiana, poderia levar a uma melhora no quadro de imunossupressão desencadeado pela ação de PGE2 no microambiente pulmonar e, portanto, restauração das funções efetoras de AMs
Abstract: The scavenger receptors (SR) are the major receptors involved in the Streptococcus pneumonia phagocytosis by alveolar macrophages (AMs) that act as the first line of defense in the lung. The increase of susceptibility to bacterial infections has been demonstrated in chronic inflammatory pulmonary disease in which there is an intense accumulation of apoptotic cells (ACs). Our hypothesis is that the uptake of ACs by macrophages could suppress immune responses by releasing anti-inflammatory mediators, such as TGF- and PGE2. However, the way in which PGE2 suppress the effector mechanisms against Streptococcus pneumonia by SR in alveolar macrophages is unclear. We found that the preincubation with AC inhibited the ingestion and killing of S. pneumonia by AMs. The inhibition of S. pneumonia phagocytosis by efferocytosis was partially reverted when endogenous PGE2 production was repressed with a COX inhibitor, EP2 antagonist and likewise with an adenylate cyclase inhibitor. However, this suppressive effect was PKA independent. Moreover, we demonstrated that the inhibition of S. pneumonia phagocytosis by efferocytosis was more pronounced in scavenger receptors class B (SR-B). Thus, we suggest that the presence of ACs in the lungs of patients with COPD could trigger the synthesis of PGE2 and promote the suppression of effector functions of AMs against bacterial infections, such as S. pneumoniae. Therefore, treatment with COX inhibitors, concomitant-microbial therapy, could lead to an improvement in the immunosuppression triggered by the action of PGE2 in the lung microenvironment and thus restoration of effector functions of AMs
Mestre

Trichophyton rubrum, importante agente de dermatofitoses, é um fungo queratinofílico, capaz de parasitar tecidos como pele e unha. É o principal responsável pelas dermatofitoses crônicas e refratárias ao tratamento e como é uma espécie antropofílica encontra-se muito bem adaptado ao parasitismo humano. Por tratar-se de uma micose cutânea, torna-se necessário o estudo dos fenômenos que ocorrem durante o encontro deste fungo com uma das principais células do sistema imunológico que primeiramente reconhecem o antígeno. Assim sendo, o objetivo deste trabalho é estudar a interação de T.rubrum com macrófagos, para aumentar o conhecimento dos mecanismos envolvidos na resposta imunológica nesta importante patologia. Para isso, foram realizados ensaios de fagocitose de conídios de T.rubrum, seguidos da análise da expressão de moléculas de superfície celular, dosagem de citocinas e viabilidade de macrófagos. Verificamos que o exoantígeno de T.rubrum provocou diminuição da fagocitose de conídios e partículas de zymosan pelos macrófagos. Entretanto, o exoantígeno não interferiu na expressão de moléculas de superfície celular e não foi capaz de estimular os macrófagos a secretar TNF-α, IL-12, IL-10 e óxido nítrico. Já os conídios fagocitados por macrófagos, provocaram diminuição significativa na expressão de suas moléculas de superfície, tais como MHC classe II, CD80 e CD54. Após fagocitose de conídios, os macrófagos foram capazes de secretar uma grande quantidade de TNF-α e IL-10 e após 8 horas de cultivo, os conídios internalizados iniciaram processo de formação de hifa, provocando lise e a conseqüente morte destas células. Por estes achados e pelos estudos prévios já realizados com o T.rubrum, pensamos que a persistência desta infecção fúngica possa estar relacionada com a ação inibitória do fungo sobre os macrófagos, levando à cronicidade observada nestas lesões.
Trichophyton rubrum is the most common pathogen causing dermatophytosis, accounting for approximately 80% of the reported cases of onychomycosis. Since 90% of the chronic dermatophyte infections are caused by T. rubrum, it is likely that this pathogen must have evolved mechanisms that evade or suppress cell-mediated immunity. Several reports have highlighted the participation of phagocytes in the immune defense against fungi; however, few studies have addressed the role of these cells in dermatophytosis. In this study, we investigated the interactions of resident and peritoneal macrophages with T. rubrum. We show here that the interaction of T. rubrum conidia with resident macrophages results in the production of TNF-α and IL-10 but not IL-12 and nitric oxide. Infected macrophages down-regulated the expression of co-stimulatory molecules (CD80 and CD54). We also show that phagocytosis of T. rubrum conidia is inhibited by the addition of fungal exoantigens or mannan. Cytotoxicity assays indicated that after 8 h of conidia ingestion macrophage viability decreased drastically. Electron microscopy revealed that the ingested conidia grow and differentiate into hyphae inside macrophages leading to rupture of the macrophage membrane.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Pós-graduação em Medicina Tropical, 2015.
Submitted by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2017-03-03T17:43:05Z No. of bitstreams: 1 2015_ShirleyClaudinoPereiraCouto.pdf: 2005336 bytes, checksum: 109e6489df275decec29166652ec4123 (MD5)
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A malária continua sendo um importante problema de saúde pública mundial acometendo milhões de pessoas principalmente nas regiões tropicais, e resulta em aproximadamente em 600 mil mortes por ano. As drogas antimaláricas influenciam indiretamente as respostas do sistema imunitário pela capacidade de diminuir a carga parasitária, diminuindo a quantidade de antígenos capazes de ativar o sistema imunitário. Entretanto, ainda está pouco esclarecida a ação das drogas antiplasmodiais sobre os mecanismos de defesa contra o plasmódio. A fagocitose encontra-se entre os principais mecanismos de eliminação do parasito, principalmente pela produção de radicais de oxigênio e nitrogênio pelos monócitos. A biogênese dos corpos lipídicos encontra-se aumentada na malária e pode estar envolvida na defesa e na fisiopatogenia da malária grave. O objetivo desse trabalho foi avaliar a influência do efeito imunomodulador do artemeter, lumefantrina e mefloquina na malária, pela avaliação da influência dessas drogas na fagocitose das formas eritrocitárias do plasmódio, na produção de óxido nítrico e peróxido de hidrogênio e na biogênese de corpos lipídicos. A influência do artemeter, da lumefantrina ou da mefloquina sobre a fagocitose por monócitos de indivíduos normais foia valiada in vitro utilizando 106 eritrócitos parasitados pelo Plasmodium falciparum, pelos receptores para padrões moleculares de patógenos (rPMP) e pelos receptores para opsoninas (rOps). Os monócitos e/ou os eritrócitos foram tratados previamente com as drogas por 60 min. O índice fagocitário foi determinado pela média de eritrócitos parasitados ingeridos por monócito multiplicado pela proporção de monócitos envolvidos na fagocitose. A produção de óxido nítrico foi avaliada pela reação de Griess e a produção de peróxido de hidrogênio foi avaliada pela oxidação do vermelho fenol na presença de peroxidase, sendo os monócitos estimulados pelos eritrócitos parasitados. Os corpúsculos lipídicos foram avaliados pela coloração com Oil Red O. As drogas foram utilizadas in vitro considerando os picos séricos observados quando do tratamento in vivo, sendo 360 ng/mL para o artemeter, 4,9g/mL para a lumefantrina e 687ng/mL para a mefloquina. Quando foi feito o tratamento dos monócitos e dos eritrócitos com o artemeter, observamos diminuição no IF quando avaliado pelos rOps (7,6x 5,2) (p= 0,02). A diminuição da fagocitose foi semelhante quando quantificada para hemozoína (p=0,036). Para a lumefantrina, houve diminuição do IF de 8,4 para 4,6 (p=0,02), quando apenas os monócitos foram tratados e a fagocitose avaliada pelos rPMP. Também houve diminuição do IF para esquizontes pelos rPMP, quando apenas os monócitos foram tratados (p=0,006). Quando os monócitos foram estimulados com os eritrócitos parasitados pelos rPMP, as três drogas diminuíram a expressão de corpúsculos lipídicos (p<0,05). Entretanto, quando os monócitos foram estimulados com os eritrócitos infectados sensibilizados, pelos receptores para opsoninas, houve aumento da expressão dos corpúsculos lipídicos pelo tratamento com a lumefantrina e a mefloquina (p<0,05). O estímulo dos monócitos com os eritrócitos parasitados aumentou a produção de peróxido de hidrogênio (p=0,009). E a mefloquina diminuiu a produção basal de H2O2 pelos monócitos (p<0,05). A diminuição da expressão de corpúsculos lipídicos nos monócitos estimulados com eritrócitos parasitados pelo P. falciparum pelos rPMP e seu aumento pelos rOps indica que a expressão dos corpúsculos lipídicos foi dependente da via pelo qual o monócito foi estimulado pelo eritrócito parasitado. A lumefantrina deprimiu a fagocitose dos eritrócitos parasitados pelos rPMP, enquanto a depressão da fagocitose ocasionada pelo artemeter foi dependente da ingestão do parasito pelos receptores para complemento. Nossos dados mostraram que o artemeter, a lumefantrina e a mefloquina modulam as respostas dos monócitos aos eritrócitos parasitados pelo P. falciparum em aspectos fundamentais relacionados com a defesa inata, nas interações iniciais do parasito com as células de defesa do hospedeiro. Mostrando, portanto, que a ação desses fármacos não depende exclusivamente de sua atividade antiparasitária, mas que o resultado final da ação desses medicamentos depende também da modulação de diversos mecanismos de defesa inato contra o parasito.
Malaria remains a worldwide public health issue, affecting millions of people, especially those living in tropical regions. Statistics confirm the magnitude of this disease, with, approximately, 600 thousand deaths each year. Antimalarial drugs indirectly influence immune response through its capacity to reduce parasite load, reducing the quantity of antigens that are capable of activating immune system. However, the role played by antiplasmodial drugs on defense against Plasmodium is still not well established. Phagocytosis remains one of the main mechanisms of eliminating parasites, especially through production of radical oxygen and nitrogen molecules by monocytes. The lipid body biogenesis is also enhanced in malaria e may be involved in defense and pathophysiology of severe disease. Therefore, the objective of the current study was to evaluate the immunomodulatory effect of arthemeter, lumefantrine and mefloquine drugs in malaria, based on the role of these drugs on phagocytosis of Plasmodium falciparum-infected erythrocytes, on the production of nitric oxide and hydrogen peroxide and on the biogenesis of lipid bodies. The influence of arthemeter, lumefantrine and mefloquine on phagocytosis by monocytes in healthy individuals was evaluated in vitro using 106 Plasmodium falciparum-infected erythrocytes, through pathogen-associated molecular pattern receptors (PAMPr) or opsonin receptors. Monocytes and/or erythrocytes were previously treated with the drugs for 60 minutes. The phagocitic index was determined by the product of the mean number of parasitized erythrocytes ingested by monocyte and the proportion of monocytes involved in phagocytosis. The production of nitric oxide was evaluated through the Griess reaction, while de hydrogen peroxide production through the red phenol oxidation in presence of peroxidase. Lipid body formation was evaluated by oil red O staining. The drug concentrations used in vitro were obtained by the higher serum levels observed in vivo after ingestion of the drugs, which was 360 ng/mL for arthemeter 4,9 μg/mL for lumefantrine and 687ng/mL for mefloquine. When monocytes and erythrocytes were treated with arthemeter, it was observed a decrease in the phagocitic index when analyzed through opsonin receptors (7,5x5,2) (p=0,02). The reduction in phagocytosis was similar when quantified by hemozoine ingestion (p=0,02). Regarding the lumefantrine treatment, a reduction from 8,4 to 4,6 was observed in the phagocytic index when only monocytes were treated and phagocytosis was assessed through pathogen-associated molecular pattern receptors. An additional reduction was also observed in phagocytic index for esquizonts, through PAMPr when only monocytes were treated (p=0,006). When monocytes were stimulated with parasitized erythrocytes by PAMPr, all three drugs diminished the lipid body formation. However, when monocytes were stimulated with sensitized infected erythrocytes by the opsonin receptors, an increase in lipid body formation was observed when lumefantrine or mefloquine treatment were done (p>0,05). When monocytes were stimulated with Plasmodium falciparum-infected erythrocytes there was an increase in hydrogen peroxide production (p=0,009), whereas mefloquine treatment reduced the basal production of H2O2 by monocytes (p<0,05). Reduction observed in lipid body production after monocyte stimulation with Plasmodium falciparum-infected erythrocytes by PAMPr and its increase when monocyte stimulation occurred by opsonin receptors show that lipid body formation depended on the intracellular pathway by which monocytes were stimulated. Lumefantrine reduced phagocytosis of infected erithrocytes through PAMPr, while reduction caused by arthemeter was observed when phagocytosis occurred by complement receptors. Our dada show that arthemeter, lumefantrine and mefloquine modulate monocyte functions in defense against P. falciparum. Therefore, we conclude that beside the antiparasitic action of these drugs they also modulate the innate defense against parasite.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-graduação em Biotecnologia.
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SOUZA, Iêda Pereira. Alterações hematológicas e funcionais causadas por venenos de subespécies brasileiras de Crotalus durissus e suas frações isoladas. 2006. 157 f. Tese (Doutorado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2006.
Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2012-06-11T14:03:15Z No. of bitstreams: 1 2006_tese_ipsouza.pdf: 3598629 bytes, checksum: d2c825e9725328ccc51084a6e4a36355 (MD5)
Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2012-06-11T15:30:23Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2006_tese_ipsouza.pdf: 3598629 bytes, checksum: d2c825e9725328ccc51084a6e4a36355 (MD5)
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Venomous snake accidents represent a serious public health problem in tropical countries, as much as for their frequency of occurrence and/or morbidity and mortality that they caused. In Brazil, the genus Crotalus comprise only one species, termed Crotalus durissus, which is divided into six subspecies. The aim of our study was to evaluate the effects promoted by venoms of Crotalus durissus cascavella, originated from the States of Ceará (Cdcc) and Maranhão (Cdcm); C. durissus collilineatus (Cdcol); C. durissus ruruima (Cdru) and its isolated components, such as crotoxin (CTXru) and phospholipase A2 (PLA2ru), in the biological processes of cellular spreading, phagocytosis, hematological alterations and antifungal activity. Male Swiss mice were inoculated intraperitoneally with the venom doses of 120, 50, 27, 20, 10 and 10 µg/Kg, respectively to the snakes described above. After two hours of inoculation blood samples and exudate were collected from orbital plex and peritoneum, respectively. Statistical evaluation was performed using Student-T test with significance level set at 95%. We compared the treated animals with a control group, where animals were inoculated with saline 0.9%. Cdcm and CTXru caused the most severe alterations in the erythrogram. We noticed that 37.5% of the erythrocytes showed macrocytic and microcytic morphology; 25.5% were hipocromic; 25% showed anisocytosis and the presence of polycromasia. We also found Howell Jolly bodies in 16.8% of the examined erythocytes. The total counting of leukocytes was reduced statistically after administration of Cdcc (82.9%), Cdcm (70.1%) and Cdru (83.8%). Cellularity was altered after the inoculation of Cdcc, Cdru and CTXru for all evaluated cells. We noticed a statistic increase of peritoneum total cells caused by Cdcc, Cdcol, Cdru and CTXru. In addition, macrophage was the most predominant cell after peritoneum differential cell counting. However, only Cdcol showed a statistic increase of macrophages (62.3%). We found significant reduction of cellular spreading after administration of all venoms ranging from 52.7 to 65.7%. Phagocytosis was statistically reduced by Cdcc in the periods of 30, 60, 90 and 120 minutes. However, Cdru reduced phagocytosis only at 30, 60 and 90 minutes, Cdcm decreased phagocytosis at 30 and 90 minutes and CTXru in the periods of 60 and 120 minutes. Cdcol and CTXru showed significant fungicide activity against C. albicans in the periods of 30, 60, 90 and 120 minutes, but Cdcc showed similar results at 60, 90 and 120 minutes. We conclude that distinct venoms interfered differently in the intensity of each functional and hematological response. In addition, we postulate that macrophages maybe partially responsible for these alterations. Further studies should be evaluated for the use of venoms as fungicides.
Os acidentes ofídicos de serpentes representam um sério problema de Saúde Pública nos países tropicais, tanto pela freqüência com que ocorrem e/ou pela morbi-mortalidade que ocasionam. As serpentes do gênero Crotalus estão representadas no Brasil pela espécie Crotalus durissus, a qual se divide em seis subespécies. Nosso trabalho teve como objetivo avaliar os efeitos dos venenos das serpentes Crotalus durissus cascavella originadas do estado do Ceará (Cdcc) e Maranhão (Cdcm); Crotalus durissus collilineatus (Cdcol); Crotalus durissus ruruima (Cdru) e suas frações, Crotoxina (CTXru) e Fosfolipase A2 (PLA2ru), nos processos biológicos de espraiamento celular, fagocitose, atividade fungicida e alterações hematológicas. Camundongos Swiss, machos, foram inoculados por via intraperitonial com os venenos descritos acima, nas doses de 120, 50, 27, 20 (venenos) e 10µg/Kg (frações), respectivamente. Duas horas após inoculação foram coletadas amostras de sangue do plexo orbital e o exsudato peritonial. A análise estatística utilizada foi o teste t de Student com significância de 95%. Os animais tratados foram comparados com o grupo controle (inoculados com salina 0,9%). Cdcm e a CTXru causaram as maiores alterações no eritrograma. 37,5% dos eritrócitos apresentaram morfologia macrocítica e microcítica; 25,5% hipocrômia; 25% com anisocitose e presença de policromasia. Foram observados 16,8% de corpúsculos de Howell Jolly. A contagem global de leucócitos foi reduzida significantemente após administração do Cdcc (82,9%), Cdcm (70,1%) e Cdru (83,8%). A celularidade foi alterada depois da inoculação de Cdcc, Cdru e CTXru, em todos os tipos de células. A contagem global de células do peritônio aumentou após inoculação de Cdcc, Cdcol, Cdru e a CTXru. Em adição, o macrófago foi à célula predominante na contagem diferencial de células peritoniais, contudo, somente a Cdcol apresentou significância estatística para macrófago (62,3%). Foi encontrada redução significativa do espraiamento celular depois da administração de todos os venenos variando de 52,7 a 65,7%. A fagocitose foi estatisticamente reduzida pela Cdcc nos períodos de 30, 60, 90 e 120 minutos. Cdru reduziu a fagocitose apenas em 30, 60 e 120 minutos, Cdcm em 30 e 90 minutos e CTXru nos tempos de 60 e 120 minutos. A Cdcol, e a CTXru mostraram significância na atividade fungicida contra C. albicans nos períodos de 30, 60, 90 e 120 minutos, mas a Cdcc mostrou resultado similar em 60, 90 e 120 minutos. Conclui-se que o veneno interfere diferentemente na resposta hematológica e funcional. Em adição pode-se postular que os macrófagos foram responsáveis por estas alterações. Estudos futuros deverão ser realizados na perspectiva da identificação de provável ação fungicida de venenos ofídicos e suas frações.

O lúpus eritematoso sistêmico (LES) é uma doença autoimune e a suscetibilidade às infecções está associada as suas anormalidades imunológicas e a sua terapia imunossupressora e citotóxica. Dentre as alterações que predispõem às infecções no LES estão anormalidades moleculares e funcionais dos neutrófilos: clearance e fagocitose ineficientes de imunocomplexos (IC) e bactérias, neutropenia, defeitos na quimiotaxia, redução do burst oxidativo e redução da expressão de receptores para IgG (Fc?R) e para complemento (CR). Além disso, os polimorfismos genéticos dos Fc?R têm sido associados com as disfunções imunes do LES. Os Fc?R são importantes mediadores das funções efetoras do neutrófilo e atuam em sinergismo com os CR (CR1 e CR3). O polimorfismo dos genes Fc?RIIA e Fc?RIIIB determina a expressão de variantes alélicas com diferenças funcionais, as quais podem influenciar as respostas biológicas e a suscetibilidade e o prognóstico das doenças infecciosas. Em particular, o alótipo Fc?RIIa-R131, tem menor afinidade para a IgG2, o que resulta em prejuízo na fagocitose mediada por esta imunoglobulina. A IgG2 é essencial contra bactérias encapsuladas e os pneumococos são responsáveis por 6-18% das infecções bacterianas no LES. O objetivo deste estudo foi investigar a influência dos polimorfismos genéticos dos Fc?R na fagocitose e desgranulação dos neutrófilos, associados ao polimorfismo do CR3, e à ocorrência de infecções bacterianas no LES. Os genótipos foram determinados por reações da polimerase em cadeia para os polimorfismos das variantes alélicas; a fagocitose e desgranulação foram estimuladas por IC contendo IgG (IC-IgG) e por IC-IgG e complemento (IC-IgG/SHN); a fagocitose de IC por neutrófilos e a expressão dos Fc?R e CR3 foram avaliadas por citometria de fluxo; e a desgranulação dos neutrófilos estimulada por IC foi medida pela liberação de elastase e lisozima. Os resultados mostraram: maior frequência para o genótipo R-131 no LES; associação do genótipo HNA-4a negativo para o CR3 com a suscetibilidade para o LES e associação do HNA-4a positivo com proteção; fagocitose menor em neutrófilos de pacientes com LES com genótipo HR-131 comparados aos neutrófilos do grupo controle com genótipo R-131 (IC-IgG e IC-IgG/SHN); no polimorfismo do Fc?RIIIb, a fagocitose e a lisozima foram menores em neutrófilos de pacientes com LES com genótipo HNA-1b e maior para HNA-1a/1b comparados aos controles com os respectivos genótipos (IC-IgG/SHN); a ocorrência de infecções foi mais frequentemente associada à presença do alelo R-131 e HNA-1b; nenhuma diferença foi observada para o polimorfismo HNA-4a do CR3, bem como para e elastase. Este estudo contribui para o entendimento das anormalidades nas funções dos neutrófilos no LES e para a identificação de indivíduos, cujo polimorfismo dos Fc?R e CR3 possa conferir suscetibilidade ou proteção às infecções.
Systemic lupus erythematosus (SLE) is an autoimmune disease in which disease-related and genetic factors and immunosuppressive and cytotoxic therapies all contribute to an increased susceptibility to infections. Factors predisposing to infection include defects in chemotaxis, abnormalities in neutrophil phagocytic activity, decreased immune complex (IC) and bacteria clearance, neutropenia, reduced oxidative burst, abnormalities in the expression of Fc?R (Fc?R) and complement (CR) receptors. Recent data have provided evidence that genetic polymorphism of Fc?R is associated with immune abnormalities and risk to development of SLE. Fc?R can mediate neutrophil effector functions and play a synergistic action with CR. Fc?RIIa and Fc?RIIIb display functionally relevant genetic polymorphisms, which allelic variants can influence the biological responses and the susceptibility to and course of infectious diseases. In particular, the presence of the Fc?RIIa-R131 allotype results in lower affinity binding to IgG2, a subclass of IgG specific for encapsulated bacteria. Since pneumococci accounts for 6-18% of all bacterial infections in SLE, the R131 allele can be relevant as a risk factor for infections. The aim of this study was to investigate the influence of the Fc?R polymorphisms on the phagocytosis and degranulation of neutrophils, associated with CR3 polymorphism, and bacterial infections in SLE. Genotypes were determined by polymerase chain reactions for the polymorphisms of the allelic variants; the phagocytosis and the degranulation were stimulated with IC-containing IgG (IC-IgG) and IC-IgG and complement (IC-IgG/NHS); the phagocytosis of IC by neutrophils and expression of Fc?R and CR3 were evaluated by flow cytometry, and degranulation of neutrophils stimulated with IC was measured by the release of lysozyme and elastase. The results showed a higher frequency for the genotype R-131 in SLE and association of genotype HNA-4a negative for the CR3 with susceptibility to SLE and association of HNA-4a with protection; the phagocytosis was lower in neutrophils from patients with SLE with HR-131 genotype than those in neutrophils from control group with genotype R-131 (IC-IgG and IC-IgG/NHS); in the Fc?RIIIb polymorphism, the phagocytosis and lysozyme were lower in neutrophils from patients with SLE with genotype HNA-1b and higher for HNA-1a/1b than those controls with the respective genotypes (IC-IgG/NHS); the occurrence of infections was more frequently associated with the presence of the allele R-131 and HNA-1b; no difference was observed for polymorphism HNA-4a of the CR3, neither for elastase. This study can contribute for the understanding of neutrophil abnormalities in SLE and identifying genetic markers that would predict patients Who are at high risk for infections.

Defocusing microscopy, a novel, recently developed, approach on quantitative analysis of bright field optical microscopy images, was used for real-time in vivo observation and quantification of both morphological and dynamical characteristics of the structures formed on the membrane surface of murine bone marrow macrophages. Two distinct types of membrane shape fluctuations were detected and studied: small, random fluctuations, uniformly distributed over all membrane surface at any time, and large, localized, propagating structures, commonly referred as membrane ruffles. Data collected from these fluctuations allowed determination of membrane bending modulus and cytoplasm viscosity of the macrophages. The effects of several drugs and treatments on the behavior of the structures studied were also investigated. The combined use of defocusing microscopy and optical tweezers allowed membrane surface dynamics to be followed closely during phagocytosis of parasites (Leishmania amazonensis). Analysis of the changes in ruffling activity in a large area of membrane around the forming phagosomes indicated that ruffles may be related to the acceleration of the engulfment of the parasites. Investigation of temperature decrease effects on the fluctuations observed and on the phagocytosis of the parasites provided evidence of how these phenomena share the same basic origin, directly related to cytoskeleton dynamics.
Neste trabalho aplicamos a técnica de microscopia de desfocalização, recentemente desenvolvida em nosso laboratório, ao estudo quantitativo in vivo das características morfológicas e dinâmicas das estruturas formadas na superfície da membrana plasmática de macrófagos derivados da medula óssea de camundongos. Dois tipos distintos de flutuações de formato da membrana foram detectadas e estudadas: pequenas flutuações aleatórias, presentes, de maneira uniforme, sobre toda a superfície da célula, em todos os instantes, e grandes estruturas localizadas, conhecidas como ruffles, que se propagam sobre a membrana. A partir dos dados obtidos destas flutuações pudemos determinar o módulo de curvatura da membrana e a viscosidade do citoplasma dos macrófagos. O efeito de vários fármacos e tratamentos sobre o comportamento das estruturas estudadas também foi avaliado. Através do uso combinado das técnicas de microscopia de desfocalização e pinçamento óptico, pudemos estudar o comportamento da membrana durante a fagocitose de parasitas (Leishmania amazonensis). A análise das mudanças observadas na quantidade de ruffles presente em regiões da membrana periféricas aos fagosomos em formação indicou que estas estruturas podem estar associadas à aceleração do processo de fagocitose. A investigação dos efeitos da redução da temperatura sobre as flutuações observadas e a fagocitose de parasitas resultou em dados que demonstram como estes fenômenos compartilham a mesma origem comum, diretamente relacionada à dinâmica do citoesqueleto celular.

Submitted by Isaac Francisco de Souza Dias (isaac.souzadias@ufpe.br) on 2016-02-25T19:12:03Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) TESE Ana Paula Sampaio Feitosa.pdf: 3707255 bytes, checksum: 56c270d2bf8dd01798cd86abcc07a877 (MD5)
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CNPQ
O Rhipicephalus sanguineus (Acari: Ixodidae) é um ectoparasita de cães domésticos e possui grande importância médica e veterinária por está associado à transmissão de inúmeros patógenos, entre eles existe a suspeita do mesmo está associado à transmissão da Leishmania infantum. O objetivo do presente estudo foi avaliar a resposta imune inata celular e humoral através da caracterização morfológica e ultraestrutural de hemócitos, avaliação da dinâmica hemocitária no 1º, 2º e 5º dia após infecção (dpi) com L. infantum, fagocitose com 1º dpi, atividade da fenoloxidase no 1º, 2º e 5º dpi, produção de óxido nítrico no 1º, 2º e 5º dpi, expressão gênica da denfesina e Glutationa S-transferase em Rh. sanguineus no tempo 0 e no 1º, 2º, 5º e 7º dpi, além de avaliar a permanência do parasita no tempo 0 e nos dias 1, 2, 5 e 7 após a infecção com L. infantum (dpi). Foram identificados cinco tipos celulares, prohemócitos, plasmatócitos, granulócitos, esferulócitos e adipohemócitos na hemolinfa do Rh. sanguineus. A partir da contagem total e diferencial dos hemócitos circulantes na hemolinfa de fêmeas de Rh. sanguineus a média do número total de hemócitos no grupo inoculado com L. infantum apresentou-se significantemente elevado (P < 0.001), no 1° e 2° dpi em relação ao grupo controle. Na contagem diferencial de hemócitos observou-se que a percentagem de plasmatócitos e granulócitos no grupo infectado, aumentou significantemente no 1°, 2° e 5° dpi (P < 0.001). Nos ensaios de fagocitose observou-se que plasmatócitos e granulócitos foram capazes de realizar fagocitose de partículas de látex e promastigotas de L. infantum, no 1dpi. A produção de NO aumentou significativamente (P < 0.05) no 2° e 5° dpi e a atividade da PO apresentou aumento significativo (P < 0.05) no 5° dpi. A expressão do gene 18S ribossomal de L. infantum teve um aumento significativo (P < 0.05) no 2°, 5° e 7° após a infecção em relação ao tempo 0. A expressão da GST foi maior no 1º e 2º dpi e o gene defensina foi maior apenas no 5º dpi. Embora não existam estudos sobre a resposta do Rh. sanguineus frente a infecção com L. infatum, estes resultados sugerem, que após a infecção com L.infantum a resposta imune celular e humoral em Rh. sanguineus é ativada, porém mais estudos são necessários para avaliar o impacto dessa resposta no combate a infecção.
The Rhipicephalus sanguineus (Acari: Ixodidae) is an ectoparasite of domestic dogs and has great medical and veterinary importance for being associated with the transmission of many pathogens, among them there is a suspicion of it is association with the transmission of Leishmania infantum. The aim of this study was to evaluate the innate cellular and humoral immune response by morphological and ultrastructural characterization of hemocytes, hemocyte dynamics evaluation, phagocytosis, phenoloxidase activity, nitric oxide production at the 1st, 2nd and 5th dpi, gene expression of denfesina and Glutathione S-transferase in Rh . sanguineus and on days 1, 2, 5 and 7 after infection with L. infantum and to evaluate the persistence of the parasite at time 0 and on days 1, 2, 5 and 7 after infection with L. infantum (dpi). Five cell types were identified, prohemocytes, plasmatocytes, granulocytes, and spherulocytes adipohemocytes in Rh. sanguineus hemolymph. From the total and differential counts of circulating hemocytes in the hemolymph of Rh. sanguineus females the average of total number of hemocytes in the group inoculated with L. infantum showed to be significantly higher (P <0.001), on 1st and 2nd dpi in comparison to control group. In differential counting of hemocytes, it was observed that the percentage of granulocytes and plasmatocytes in the infected group, increased significantly at the 1st, 2nd and 5th dpi (P <0.001). In phagocytosis assays, it was observed that plasmatocytes and granulocytes were able to perform phagocytosis of latex particles and promastigotes of L. infantum, 1 day after infection. NO production increased significantly (P < 0.05) in the 1st, 2nd and 5th dpi and the PO activity increased significantly (P < 0.05) in the 5th dpi. The expression of the 18S ribosomal gene expressed by L. infantum had a significant increase (P < 0.05) in the 2st, 5th and 7th after infection in comparison to time 0. The expression of GST was higher in the 1st and 2nd dpi and the defensin gene was higher only in 5 dpi. Although there are no studies on Rh. sanguineus response against infection with L. infatum, these results suggest that after infection with L.infantum cellular and humoral immune response in Rh. sanguineus is activate, nevertheless more studies are needed to assess the impact of such response in fighting infection.

Orientadores: Renata de Oliveira Mattos Graner, Flávia Sammartino Mariano Rodrigues
Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba
Made available in DSpace on 2018-08-26T11:30:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Oliveira_ThaisRossinide_M.pdf: 1438459 bytes, checksum: a127a667898930e41649ac3faebb8d1a (MD5) Previous issue date: 2014
Resumo: Streptococcus sanguinis é uma espécie pioneira comensal das superfícies dos dentes, que também está envolvida na endocardite infecciosa. Sua alta prevalência na cavidade oral indica capacidade de adaptar-se e sobreviver a diversos fatores de defesa presentes nesse nicho. Para se adaptar ao ambiente e a fatores do hospedeiro, as bactérias utilizam-se de sistemas reguladores de transcrição de dois componentes (SDC), que modulam a regulação de genes em respostas a diferentes estímulos. Neste estudo avaliou-se o papel do SDC VicRK e CovR, na susceptibilidade de S. sanguinis a opsonização pelo sistema complemento. Para isso, foram analisados os níveis de deposição de C3b / iC3b na presença de soro em um total de sete cepas clínicas de S. sanguinis, e as frequências de fagocitose por polimorfonucleares (PMNs) do sangue humano foram comparados entre as cepas S. sanguinis SK36 e mutantes knockout de vicK (SKvic) e covR (SKcov), genes estes que codificam componentes VicK e CovR, respectivamente. A cepa de S. mutans U159 foi utilizada como referência. Resumidamente, as cepas foram incubadas com soro humano a 2 ou 20% por 30 min (37 ° C, 10% de CO2), lavadas, e a presença de C3b associada à superfície foi detectado utilizando anticorpos anti-C3b humano (conjugado com FITC), sendo quantificadas por citometria de fluxo. Para avaliar as frequências de fagocitose por PMNs, as cepas foram incubadas com sangue humano durante tempos de 5, 15, 30 e 60 min (37 ° C, 10% de CO2), fixadas e coradas com Giemsa. PMNs com bactérias intracelulares, foram contados utilizando um microscópio de luz (1000 x) e os resultados expressos em relação a análise de um total de 200 PMNs. Resultados: As percentagens de deposição de C3b em SKvic, SKcov e SK36 foram de 11,3 (± 2,61), 40,2 (± 1,46) e 37,9% (± 3,97), respectivamente. Percentagem de superfície C3b foi significativamente menor em cepas de S. sanguinis em comparação a cepa de S.mutans (Kruskal Wallis, p <0,05), e em SKvic em comparação a cepa SK36 (Kruskal Wallis, p <0,05). As frequências médias de fagocitose por PMNs não foram afetadas, e foram 88, 99,3 e 99% em SKvic, SKcov e SK36, respectivamente. Conclusão: a inativação do VicK, mas não de CovR, reduz a deposição de C3b em S. sanguinis SK36. Cepas de S. sanguinis também são menos suscetíveis a deposição de C3b em comparação a S. mutans
Abstract: Streptococcus sanguinis is a commensal pioneer species of the tooth surfaces, which is also involved in infectious endocarditis. Its high prevalence in the oral cavity indicates ability to survive to several host defense factors present in the oral niches. To sense and respond to environmental and host factors, bacteria apply regulatory two-component systems (TCSs), which modulate gene transcription in response to different stimuli. This study evaluated the role of TCS VicRK and CovR in S. sanguinis susceptibility to opsonization by the complement system. To this aim, a total of seven S. sanguinis strains were analyzed, and levels of deposition of C3b/iC3b on the present of serum, and the frequencies of phagocytosis by polymorphonuclear (PMNs) in human blood were compared between parent S. sanguinis strain SK36 and knockout mutants of vicK (SKvic) and covR (SKcov) (genes encoding VicK and CovR components, respectively). S. mutans strain U159 was used as reference. Briefly, strains were incubated with 2 or 20% of human serum during 30 min (37°C, 10%CO2), washed, and the presence of surface-associated C3b was detected using anti-human C3b antibodies (FITC conjugated), which were quantified by flow cytometry. To assess the frequencies of phagocytosis by PMN, strains were incubated with human blood during 5, 15, 30 and 60 min (37°C, 10% CO2), fixed and stained with Giemsa. PMN with intracellular bacteria were counted using a light microscope (1000 x) and expressed in relation to a total of 200 PMN analyzed. Results: The percentages of C3b deposition on SKvic, SKcov and SK36 were 11.3 (± 2.61), 40.2 (± 1.46) and 37.9% (± 3.97), respectively. Percentage of surface C3b was significantly lower in S. sanguinis strains compared to S. mutans (Kruskal Wallis, p < 0.05), and in SKvic compared to SK36 (Kruskal Wallis, p < 0.05). The mean frequencies of phagocytosis by PMN was not affected, and were 88, 99.3 and 99% in SKvic, SKcov and SK36, respectively. Conclusion: the inactivation of the vicK, but not of covR, reduces the deposition of C3b in S. sanguinis SK36. S. sanguinis strains are also less susceptible to C3b deposition compared to S. mutans
Mestrado
Microbiologia e Imunologia
Mestra em Biologia Buco-Dental

Made available in DSpace on 2015-12-10T14:22:52Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-05-15. Added 1 bitstream(s) on 2015-12-10T14:29:05Z : No. of bitstreams: 1 000851662_20160515.pdf: 427931 bytes, checksum: 4ef8d142c5c5234191158ab7c2efea52 (MD5) Bitstreams deleted on 2016-05-16T14:18:42Z: 000851662_20160515.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2016-05-16T14:19:23Z : No. of bitstreams: 1 000851662.pdf: 1696866 bytes, checksum: d81719395199b25212968ab82e23a88e (MD5)
Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)
Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)
Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)
A fagocitose de células apoptóticas é um processo dinâmico importante para a homeostase dos tecidos após injúria. Os macrófagos além de atuarem na remoção de células apoptóticas, também colaboram na defesa contra microrganismos. Existem ao menos duas populações de macrófagos classificadas como macrófagos M1 (pró-inflamatórios) e macrófagos M2 (anti-inflamatórios). Estes leucócitos diferem quanto ao fenótipo e funções efetoras dependendo, primordialmente, do microambiente e dos microrganismos com que interagem no tecido. Em uma situação de injúria pulmonar estéril (inalação de agentes tóxicos), há acúmulo de células apoptóticas sem a presença de agente microbiano. Por outro lado, durante uma infecção pulmonar bacteriana, ocorre intensa migração de células para o local da infecção na tentativa de conter a proliferação bacteriana, resultando em intenso acúmulo de células apoptóticas infectadas neste tecido. Portanto, nesse trabalho foi avaliado, in vitro e in vivo, o efeito da fagocitose de células apoptóticas infectadas (AC-Sp) ou estéreis (AC) na polarização de macrófagos M1/M2, bem como suas funções efetoras, e o efeito da PGE2 nesse contexto de eferocitose. Macrófagos M0 co-cultivados com AC ou AC-Sp apresentam um fenótipo intermediário entre M1 e M2, com secreção de altos níveis de IL-6, TNF-α, PGE2, TGF-β e NO e a expressão de genes relacionados ao perfil M1, iNOS, e ao perfil M2, Arginase 1. Além disso, macrófagos M0 cultivados com AC ou AC-Sp, apresentam supressão da função microbicida quando desafiados com S. pneumoniae. A presença de PGE2 dirige a polarização de macrófagos M0 a um perfil M2 e a presença de inibidores de COX promove a reversão do fenótipo de polarização destes macrófagos. Os resultados in vivo demonstram que a instilação de AC ou AC-Sp promove distintos microambientes no pulmão destes animais, que influenciam na resolução da infecção.....
The phagocytosis of apoptotic cells is dynamic and crucial for homeostasis after injury. Macrophages act on the clearance of apoptotic cells and collaborate with defense against microorganisms. There are at least two distinct macrophage populations classified as M1 macrophages (pro-inflammatory) and M2 macrophages (anti-inflammatory). Both cells differ on the state of polarization and effectors function depending primarily on the microenvironment and microorganisms that interact into the tissue. In a situation of sterile lung injury (inhalation of toxic agents), there are accumulation of apoptotic cells without the presence of pathogen. On the other hand, during a bacterial pulmonary infection there is intense cell migration to the infection site in an attempt to impair bacterial growth, resulting in a large accumulation of infected-apoptotic cells in the tissue. Therefore, this study has evaluated in vitro and in vivo, the effect of the phagocytosis of infected-apoptotic cells (AC-Sp) or sterile cells (AC) on the polarization of M1/M2 macrophages, as well as in their effector functions and the effect of PGE2 in the context of efferocytosis. M0 macrophages co-cultured with AC or AC-Sp show an intermediate phenotype between M1 and M2 with high secretion levels of IL-6, TNF-α, PGE2, NO and TGF-β, and gene expression profile related to M1, iNOS, and M2, arginase 1. Furthermore, M0 macrophages cultured with AC or AC-Sp show strong suppression of the macrophage microbicidal function when challenged with S. pneumonia. The presence of PGE2 drives the polarization of M0 macrophages to a M2 profile, and in the presence of COX inhibitors, it reverses the polarization of this macrophage phenotype. The in vivo results demonstrate that the instillation of AC or AC-Sp promotes distinct microenvironments in the lungs of these animals, which influence the resolution of the infection. All these results suggest that the presence of AC or AC-Sp promotes, ...

Orientador : Alexandra Ivo de Medeiros
Banca: Vania Luiza Deperon Bonato
Banca: Carlos Rossa Junior
Resumo: A fagocitose de células apoptóticas é um processo dinâmico importante para a homeostase dos tecidos após injúria. Os macrófagos além de atuarem na remoção de células apoptóticas, também colaboram na defesa contra microrganismos. Existem ao menos duas populações de macrófagos classificadas como macrófagos M1 (pró-inflamatórios) e macrófagos M2 (anti-inflamatórios). Estes leucócitos diferem quanto ao fenótipo e funções efetoras dependendo, primordialmente, do microambiente e dos microrganismos com que interagem no tecido. Em uma situação de injúria pulmonar estéril (inalação de agentes tóxicos), há acúmulo de células apoptóticas sem a presença de agente microbiano. Por outro lado, durante uma infecção pulmonar bacteriana, ocorre intensa migração de células para o local da infecção na tentativa de conter a proliferação bacteriana, resultando em intenso acúmulo de células apoptóticas infectadas neste tecido. Portanto, nesse trabalho foi avaliado, in vitro e in vivo, o efeito da fagocitose de células apoptóticas infectadas (AC-Sp) ou estéreis (AC) na polarização de macrófagos M1/M2, bem como suas funções efetoras, e o efeito da PGE2 nesse contexto de eferocitose. Macrófagos M0 co-cultivados com AC ou AC-Sp apresentam um fenótipo intermediário entre M1 e M2, com secreção de altos níveis de IL-6, TNF-α, PGE2, TGF-β e NO e a expressão de genes relacionados ao perfil M1, iNOS, e ao perfil M2, Arginase 1. Além disso, macrófagos M0 cultivados com AC ou AC-Sp, apresentam supressão da função microbicida quando desafiados com S. pneumoniae. A presença de PGE2 dirige a polarização de macrófagos M0 a um perfil M2 e a presença de inibidores de COX promove a reversão do fenótipo de polarização destes macrófagos. Os resultados in vivo demonstram que a instilação de AC ou AC-Sp promove distintos microambientes no pulmão destes animais, que influenciam na resolução da infecção.....
Abstract: The phagocytosis of apoptotic cells is dynamic and crucial for homeostasis after injury. Macrophages act on the clearance of apoptotic cells and collaborate with defense against microorganisms. There are at least two distinct macrophage populations classified as M1 macrophages (pro-inflammatory) and M2 macrophages (anti-inflammatory). Both cells differ on the state of polarization and effectors function depending primarily on the microenvironment and microorganisms that interact into the tissue. In a situation of sterile lung injury (inhalation of toxic agents), there are accumulation of apoptotic cells without the presence of pathogen. On the other hand, during a bacterial pulmonary infection there is intense cell migration to the infection site in an attempt to impair bacterial growth, resulting in a large accumulation of infected-apoptotic cells in the tissue. Therefore, this study has evaluated in vitro and in vivo, the effect of the phagocytosis of infected-apoptotic cells (AC-Sp) or sterile cells (AC) on the polarization of M1/M2 macrophages, as well as in their effector functions and the effect of PGE2 in the context of efferocytosis. M0 macrophages co-cultured with AC or AC-Sp show an intermediate phenotype between M1 and M2 with high secretion levels of IL-6, TNF-α, PGE2, NO and TGF-β, and gene expression profile related to M1, iNOS, and M2, arginase 1. Furthermore, M0 macrophages cultured with AC or AC-Sp show strong suppression of the macrophage microbicidal function when challenged with S. pneumonia. The presence of PGE2 drives the polarization of M0 macrophages to a M2 profile, and in the presence of COX inhibitors, it reverses the polarization of this macrophage phenotype. The in vivo results demonstrate that the instillation of AC or AC-Sp promotes distinct microenvironments in the lungs of these animals, which influence the resolution of the infection. All these results suggest that the presence of AC or AC-Sp promotes, ...
Mestre

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2013.
Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2013-11-07T14:50:58Z No. of bitstreams: 1 2013_CarmenLiviaFariaSilviaMartins.pdf: 16116688 bytes, checksum: 5dcfefeee434226dbfb8c1c483e66182 (MD5)
Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2013-11-12T11:02:55Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_CarmenLiviaFariaSilviaMartins.pdf: 16116688 bytes, checksum: 5dcfefeee434226dbfb8c1c483e66182 (MD5)
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Introdução e justificativa: A asma é doença inflamatória crônica e o corticóide padrão ouro de tratamento, entretanto, o efeito dele na imunidade inata carece esclarecimento, urge marcadores inflamatórios não invasivos na pediatria para avaliar e acompanhar o tratamento. O objetivo do trabalho foi avaliar influência do tratamento com corticóide inalatório (CI) por seis meses na ativação dos eosinófilos e na função fagocitária de neutrófilos e monócitos do sangue periférico em crianças e adolescentes com asma. Metodologia: Sangue venoso periférico foi coletado de 149 crianças e adolescentes asmáticos e 26 crianças controle normais. A ativação dos eosinófilos foi avaliada pelas alterações morfológicas (emissão de pseudópodes generalizados ou localizados, emissão de grânulos em pequena, moderada ou grande quantidade, espraiamento, presença de vacúolos citoplasmáticos, eosinófilos em degeneração, contato entre células) após aderência em lâmina, e a fagocitose de Saccharomyces cerevisiae, bem como a produção de ânions superóxido por monócitos e neutrófilos, antes do tratamento com CI, aos 3 e 6 meses. O teste de Mann-Whitney comparou crianças asmáticas antes do tratamento e controles normais e o teste de Kruskal-Wallis/Dunn a influência do CI antes, aos 3 e 6 meses. Resultados: Houve uma maior porcentagem de eosinófilos ativados nas crianças asmáticas que no controle, antes do tratamento, e dentre as alterações morfológicas, espraiamento em crianças APL (P=0,003), grânulos pequena quantidade em APM (P=0,0003), grânulos moderada quantidade em APL (P=0,0001), pseudópodes localizados em APM (P=0,0062), contato entre células em APL (P=0.028), degeneração celular em APL (P=0,007). Seis meses de tratamento diminuíram espraiamento em crianças APL(P=0,0009), grânulos em pequena quantidade em APM (P=0,0006), grânulos em moderada quantidade em APL (P<0.0001), grânulos em grande quantidade em APG (P=0,038), pseudópodes localizados em APL (P=0,0033), contato entre células em APG (P=0,0033) e degeneração celular em APM (P=0,04). A fagocitose dos monócitos e neutrófilos via receptores ou por opsoninas em crianças asmáticas, antes do tratamento, foi menor que nos controles (P<0.05) sem influencia da gravidade da asma. CI por 6 meses não normalizou fagocitose dos neutrófilos e monócitos, embora melhore clínicamente. Produção de ânions superóxido foi menor em crianças asmáticas antes do tratamento e o CI normalizou a produção em crianças com APL quando avaliado sem estímulo, havendo diminuição da produção quando estimulado (p<0,05). Conclusões: A imunodeficiência dos fagócitos permaneceu mesmo após seis meses de tratamento com CI. Entretanto, houve melhora na ativação dos eosinófilos em crianças com APL e APM. Assim, analisar quantitativamente alterações morfológicas nos eosinófilos é fácil e possível, e pode objetivar a avaliação da inflamação durante o tratamento com CI. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT
Introduction and aim: Asthma is a chronic inflammatory disease and corticosteroids are the first-line therapy for the disease. However, the effect of corticosteroids on the innate immune system remains unclear. Furthermore, there aren’t non-invasive reliable markers of inflammation to follow-up the treatment. The aim of this work was to evaluate the influence of inhaled corticosteroid therapy (ICT) for 6 months on the activation of eosinophils and phagocyte functions in asthmatic children. Methods: Peripheral venous blood was collected from 149 children with asthma and 26 healthy control children. The percentage of eosinophils with morphological changes (emission of single or multiple pseudopods, releasing a small, moderate, or large quantity of granules, spreading, presence of cytoplasmic vacuoles, eosinophil death, and contact between cells) was quantified after the adherence to a slide before, after 3 and 6 months ICT. The phagocytosis of Saccharomyces cerevisiae by blood monocytes and neutrophils and the production of superoxide anions were assessed before and after three and six months of ICT. The Mann-Whitney was used to compare asthmatic children before and after treatment and the Kruskal-Wallis/Dunn was used to analyze the influence of ICT thoughout the treatment. Results: The percentage of activated eosinophils was hingher in asthmatic children than in healthy control. The more significant increase before treatment were spreading in children with mPA (P=0,003); releasing a small quantity of granules in mPA (P=0,0001); releasing moderate quantity of granules in mPA (P=0,0001); emission of single pseudopods in MPA (P=0,0062); eosinophils in contact between cells in mPA (P=0.028); and eosinophil death MPA (P=0,007). After 6 months treatment there was a decrease in the following morphological changes: spreading in children with mPA (P=0,0009); releasing a small quantity of granules in MPA (P=0,0006); releasing moderate quantity of granules in mPA ( P<0.0001); releasing a large quantity of granules in SPA (P=0,038); emission of single pseudopods in mPA (P=0,0033); eosinophils in contact between cells in SPA (P=0,0033) and eosinophil death in MPA (P=0,04). The phagocytosis via opsonines receptors was lower in asthmatic children before treatment and was independent from asthma severity. ICT treatment for 6 months was insufficient to normalize phagocytosis function. Superoxide anion production was also decreased in the asthmatic children before treatment, and ICT -normalized the O production only for children with mild persistent asthma when assessed at baseline but caused this function to decrease after stimulation. Conclusion: The phagocyte immunodeficiency remained lower after 6 months of treatment. However, there was an improvement in several morphological changes in eosinophils characteristic of activation in children with mPA and MPA. Quantifying the morphological changes in eosinophils is feasible, easy and reliable and therefore might to be used as an objective mark to follow up inflammation during ICT.

Orientador: João Martins Pizauro
Coorientador: Samir Issa Samara
Coorientador: Marco Antonio de Andrade Belo
Banca: Eduardo Maffud Cilli
Banca: Monica Valdyrce dos Anjos Lopes Ferreira
Banca: Fabiana Garcia
Banca: Luiz Flávio José dos Santos
Resumo: A Aeromonas hydrophila é um patógeno oportunista com capacidade de infectar peixes, mamíferos e humanos. É cosmopolita e responsável por infecções hospitalares em humanos e causadora da aeromonose em peixes. O uso de antibióticos na água, como forma terapêutica na aquicultura, apesar de controlar a infecção, favorece o desenvolvimento de resistência microbiana através do efeito residual destes fármacos no peixe e consequentemente no consumidor final humano, tornando-se um agravo para a saúde pública. Pensando nisso, foi produzido uma imunoglobulina Y (IgY), extraída da gema do ovo de galinhas poedeiras, específica para as proteínas de membrana e citoplasmática de A. hydrophila. No início, a IgY foi validada quanto a capacidade de detectar o patógeno no tecido de tilápias-do-nilo (Oreochromis niloticus) infectadas com a bactéria homóloga. Após a validação da IgY anti- A. hydrophila, a mesma foi testada in vitro na imunoterapia, e seus efeitos na atividade fagolisossômica de macrófagos (MΦs) de tilápias-do-nilo, infectados com A. hydrophila viva opsonizada/ neutralizada ou não. Os resultados provaram a eficácia e a aplicação da IgY para o ensaio de imunofluorescência direta (IMF) e imuno-histoquímica (IHC) validando a IgY para o diagnóstico e estudo fisiopatológico da infeção por A. hydrophila em tilápias-do-nilo. Na imunoterapia in vitro a IgY anti-A. hydrophila teve efeito positivo no controle da infecção, postulando ainda, o uso dos MΦs da tilápia-do-nilo como um importante ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo)
Abstract: Aeromonas hydrophila is an opportunistic pathogen with the capacity to infect fish, mammals and humans. It is cosmopolitan and is responsible for hospital infections among humans and for aeromonosis in fish. Although using antibiotics in water for therapeutic purposes in fish-farming has the effect of controlling infection, it also favors development of microbial resistance through the residual effect of these drugs on fish and consequently on the final human consumers. Thus, their use has become a public health hazard. With the aim of investigating alternative ways of combating A. hydrophila, an immunoglobulin Y (IgY) extracted from the yolk of the eggs of laying hens that was specific for the proteins of the membrane and cytoplasm of A. hydrophila was produced. This IgY was firstly validated regarding its capacity to detect A. hydrophila in the tissues of Nile tilapias (Oreochromis niloticus) that were infected with the homologous bacterium. The anti-A. hydrophila IgY was then tested in vitro for immunotherapy to determine its effects on the phagolysosomal activity of macrophages (MΦs) in Nile tilapias that were infected with live A. hydrophila that was either opsonized/neutralized or not. The results demonstrated that application of IgY was effective. Direct immunofluorescence (IMF) tests and immunohistochemical (IHC) analysis validated IgY for diagnosing the presence of A. hydrophila and for conducting physiopathological studies on A. hydrophila in Nile tilapias. In in vi... (Complete abstract click electronic access below)
Doutor

Macrófagos (Mf) produzem PAF e PAF-R e eliminam partículas alteradas via CD36. Uptake de oxLDL requer associação CD36/PAF-R. Avaliamos isto na eferocitose. Bloqueio do PAF-R e de lipid rafts (LR) inibiu eferocitose. Esta induziu associação PAF-R/CD36 e destes com flotilina-1 (marca LR). Eferocitose induziu IL-10 e IL-12p40. Bloqueio do PAF-R inibiu mais IL-10 e inibição da COX-2 teve efeito similar, sugerindo que eferocitose depende da interação PAF-R/CD36 em LR e que isto induz prostanoides e perfil regulador. Mf adquirirem diferentes fenótipos. Estudamos a participação do PAF-R. Bloqueio do PAF-R antes dos estímulos (IFN-g/LPS, IL-4 ou IgG-SRBC/LPS) inibiu marcadores MCP-1, TNF-a, iNOS, receptor manose, arginase-1 e IL-10, mas não IL-12p40, sugerindo que PAF-R modula fenótipo de Mf. PAF e PAF-like são gerados por estressores oxidativos. Ativação do PAF-R induz imunossupressão sistêmica (IS). Mostramos que terapia fotodinâmica (PDT) in vitro gerou ligantes do PAF-R e in vivo inibiu reação de CHS em WT, mas não em PAF-R KO, sugerindo que PDT induz IS via PAF-R.
Macrophages (Mp) produce PAF and PAF-R and scavenge altered particles via CD36. oxLDL uptake requires association CD36/PAF-R. We analyzed that on efferocytosis. PAF-R and lipid rafts (LR) blockage inhibited efferocytosis. Efferocytosis induced association CD36/PAF-R and both with LR marker protein, and induced IL-10 and IL-12p40. PAF-R and COX-2 blockage inhibited more IL-10, suggesting that efferocytosis depends on PAF-R/CD36 interaction in LR and that this induces prostanoids and regulatory profile. Mp acquire different phenotypes. PAF-R participation in that was analyzed. PAF-R blockage before stimuli (IFN-g/LPS, IL-4 or IgG-SRBC/LPS) inhibited markers MCP-1, TNF-a, iNOS, mannose receptor, arginase-1 and IL-10, but not IL-12p40, suggesting that PAF-R modulates Mp phenotype. PAF and PAF-like are generated by oxidative stressors. PAF-R activation induces systemic immunosuppression (SI). We showed that photodynamic therapy (PDT) in vitro generated PAF-R ligands and in vivo inhibited CHS reaction in WT, but not PAF-R KO, suggesting that PDT induces SI via PAF-R.