Academic literature on the topic 'Efflux des médicaments'

L'objectif de notre recherche était d'étudier les effets du Phénylalanine-arginine β-naphthylamide (PABN), seul ou en association avec des aminoglycosides et des macrolides sur des souches cliniques de P. aeruginosa isolées de patients atteints de Fibrose kystique (FK). Pour cela, nous avons comparé les concentrations minimales inhibitrices (CMI) et bactéricides (CMB) obtenues en milieu liquide (bouillon de Mueller-Hinton) du PABN, seul ou en association avec des antibiotiques. Même si PABN est un inhibiteur de la pompe à efflux hautement efficace in-vitro, son niveau élevé d'accumulation dans les organes, en particulier les reins, peut-être toxique (Watkins et collab., 2003, p. 4242). Étant donné que les aminoglycosides sont des substrats de pompes à efflux, l'inhibition de l'efflux devrait augmenter la puissance de ces médicaments contre P. aeruginosa. Nous avons constaté que PABN a augmenté l'activité des aminoglycosides et macrolides contre P. aeruginosa. Cependant, il n'a eu aucun effet sur la souche K2733, qui ne comportait aucune des quatre principales pompes retrouvées chez P. aeruginosa (MexABOprM, MexCD-OprJ, MexEF-OprN et MexXY-OprM). En outre, les bactéries traitées avec le PABN ont été plus sensibles à l'érythromycine, un antibiotique auquel P. aeruginosa est intrinsèquement résistante (Morita, Tomida et Kawamura, 2013).

Malgré des efforts continus dans le développement de nouveaux médicaments, la résistance aux chimiothérapies reste un défi majeur dans le traitement du cancer. L'un des principaux mécanismes responsables de la résistance aux médicaments est l'efflux des agents thérapeutiques hors des cellules cancéreuses par les transporteurs multidrogues.Le récepteur Hedgehog Patched1 (PTCH1), qui fait partie de la voie de signalisation Hedgehog, est surexprimé dans de nombreux cancers. Outre son rôle physiologique de transporteur de cholestérol, PTCH1 est aussi capable de transporter des agents anticancéreux hors des cellules cancéreuses, contribuant ainsi à la résistance aux médicaments avec les transporteurs ABC (ATP binding cassette). Contrairement à ces derniers, qui sont exprimés de manière endogène dans les cellules normales et jouent un rôle crucial dans la survie cellulaire, l'activité d'efflux de PTCH1 n'a lieu que dans les cellules cancéreuses. Cela fait de PTCH1 une nouvelle cible prometteuse pour le traitement du cancer. Trois inhibiteurs de son activité d'efflux ont été identifiés à ce jour : l'astémizole, la méthiothépine et un composé naturel, la panicéine A hydroquinone (PAH). Ces composés augmentent l'efficacité des chimiothérapies contre les cellules de mélanome in vitro et in vivo, prouvant que l'inhibition de PTCH1 est une stratégie anticancéreuse pertinente. Cependant, ils présentent des limites intrinsèques et doivent être optimisés. Par exemple, la PAH a une très faible stabilité métabolique, ce qui empêche d'envisager son développement en tant que médicament.Dans ce contexte, le projet a pour objectif de développer un inhibiteur de l'efflux de PTCH1, en tant que médicament “first-in-class” pour lutter contre la résistance à la chimiothérapie et améliorer la survie des patients grâce à une optimisation rationnelle de la PAH.Nous avons donc étudié l'interaction entre la PAH et PTCH1 au moyen de méthodologies in silico et effectué une comparaison structure-ligand entre les trois inhibiteurs connus. En utilisant un protocole de docking couplé à des simulations de dynamiques moléculaires, nous avons extrait des informations importantes sur la conformation active d'un inhibiteur de PTCH1 et identifié un site de liaison supposé dans le canal hydrophobe de PTCH1.Nous avons mis au point une nouvelle synthèse totale de l'E-PAH qui répond à certaines limitations importantes de la précédente, telles que sa non-stéréosélectivité et sa grande spécificité de substrat. Après optimisation, nous avons finalement obtenu un nouveau protocole de synthèse stéréosélective et robuste pour les E et Z PAH. Ceci a permis de synthétiser plusieurs analogues de PAH dont l'activité a été évaluée sur des cellules de mélanome, en combinaison avec le vemurafenib, dans le but de réaliser une étude structure-activité pour le motif hydroquinone. Nous avons également évalué certaines propriétés pharmacocinétiques de ce motif, telles que la stabilité plasmatique et le profil de sécurité.La partie hydroquinone de la PAH est importante pour son activité biologique, mais c'est aussi l'un de ses principaux inconvénients en raison de son oxydation facile en quinone. En combinant les connaissances acquises grâce aux études in silico et SAR dans la dernière partie de ce projet, nous avons cherché à synthétiser des nouvelles molécules en appliquant un remplacement "bioisostérique", une approche souvent utilisée avec succès en chimie médicinale. Tout d'abord, le remplacement de la double liaison de la PAH par des groupes chimiques biologiquement équivalents a permis une stratégie de synthèse robuste, convergente et efficace, qui s'inscrit dans les tendances modernes des approches de chimie durable. Ensuite, il a été possible de synthétiser facilement un grand nombre de composés, en remplaçant le motif hydroxyquinone, et de cribler l'activité biologique in cellulo d'un espace chimique diversifié avec des résultats biologiques très prometteurs
Despite the continuous efforts in the design and development of new drugs with innovative mode of action, resistance to both chemo- and targeted therapy remains a major challenge in cancer treatment. One of the major mechanisms responsible for multidrug resistance is the efflux of therapeutics out of cancer cells by multidrug transporters.The Hedgehog receptor Patched1 (PTCH1), part of the Hedgehog signaling pathway, is over-expressed in many cancers. In addition to its physiological role as cholesterol transporter, PTCH1 is also able to transport anticancer agents out of cancer cells, thus contributing to multidrug resistance together with the ATP binding cassette (ABC) transporters. Unlike ABC transporters which are endogenously expressed in normal cells and play a crucial role in cell survival, PTCH1 efflux activity takes place only in cancer cells. This makes PTCH1 a new attractive target for cancer treatment. Three inhibitors of PTCH1 efflux activity have been identified to date, namely, astemizole, methiothepin and the natural compound panicein A hydroquinone (PAH). These compounds increased the efficacy of both conventional and targeted chemotherapies against melanoma cells in vitro and in vivo, showing the proof of concept of PTCH1 inhibition as a successful anticancer strategy. However, they have some intrinsic limitations and require optimization. For instance, PAH, has a very low metabolic stability which prevents its advance in a drug development pipeline towards the clinics.In that context, this PhD project is aimed at the ultimate goal of developing a PTCH1 drug efflux inhibitor as a first-in-class drug candidate to fight chemotherapy resistance and improve patient survival. In particular, it comprehends the medicinal chemistry efforts made in the direction of rational optimization of the natural compound PAH.To this aim we studied the interaction between PAH and PTCH1 by means of in silico methodologies and we performed structure- and ligand based comparison between the three known inhibitors. By using an ensemble docking protocol coupled to molecular dynamics simulations of the ligands we extracted important information about the active conformation of a PTCH1 inhibitor and we identified a putative binding site within the hydrophobic channel on PTCH1.We developed a new total synthesis for E-PAH which addresses some important limitations of the previous one, such as its non-stereoselectivity and high substrate specificity. We applied several strategies and eventually obtained a stereoselective and robust new synthesis protocol for E and Z PAH. This allowed for the synthesis of several PAH analogs whose activity was evaluated on melanoma cells, in combination with vemurafenib, with the aim to assess a structure-activity relationship for the hydroquinone scaffold. We further evaluated some PK properties of the hydroquinone scaffold such as plasma stability and safety profile.The hydroquinone moiety of PAH is important for its biological activity but it is also one of its major drawbacks due to its easy oxidation to quinone. By combining the knowledge acquired from the in silico and SAR studies on the hydroquinone, in the last part of this PhD project we aimed at the synthesis of innovative scaffolds by applying a “bioisosteric” replacement on the hydroquinone, an approach often successfully used in medicinal chemistry. First, the replacement of the double bond of PAH with biologically equivalent chemical groups allowed for a robust, convergent and efficient synthetic strategy, which is line with the modern trends of sustainable chemistry approaches. Next, it made possible to readily synthesize a large number of compounds, substituting the hydroxyquinone motif, and screen the in cellulo biological activity of a diversified chemical space with quite promising biological results

L’objet de ces recherches était de trouver de nouveaux EPIs du système d’efflux AcrAB-TolC dans les groupes de dérivés d’amine de la 5-arylidenehydantoine et de la 5-arylideneimidazolone. Dans la première étape de recherche, 32 nouveaux dérivés ont été obtenus après modification de la structure lead P2.Un screening théorique du risque toxique et la prédiction des propriétés médicamenteuses des composés ont été réalisés en utilisant le programme OSIRIS qui calcule différentes propriétés médicamenteuses pertinentes basées sur la structure planaire de la molécule.Dans l’étape suivante de la recherche, l’activité des composés a été évaluée par des études microbiologiques sur souches d’Enterobacter aerogenes avec différentes expressions de la pompe d’efflux AcrAB. La première étude effectuée était un test de sensibilité pour déterminer les CMI des composés afin de trouver une concentration à laquelle les utiliser avec des antibiotiques sans avoir l’influence de leur activité intrinsèque. Puis l’effet des composés sur la sensibilité des antibiotiques tels que l’acide nalidixique, le chloramphénicol, la doxycycline et l’érythromycine a été étudié. Après, le type de coopération avec les antibiotiques a été déterminé par la construction d’isobologrammes et le calcul de l’index de FIC. Les dernières études microbiologiques réalisées sont des tests d’efflux en temps réel qui utilisent un colorant fluorescent 1,2’-dinaphthylamine et ont permis de suivre directement le fonctionnement de la pompe. L’étude des relations structure-activité souligne le rôle essentiel de la nature amphiphile des EPIs dérivés de groupes arylidene de l’hydantoine et de l’imidazolone
The purpose of this research was to find new EPIs of the AcrAB-TolC efflux system in groups of amine derivatives of 5-arylidenehydantoin and 5-arylideneimidazolone. In the first stage of the research 32 new derivatives of 5-arylidenehydantoin were obtained as a result of modifications of the lead structure P2. Theoretical screening of the toxicity risk as well as the prediction of drug-like properties of hydantoins/imidazolones synthesised were performed by using the OSIRIS program which calculates various drug-relevant properties based on a planar structure of the molecule.In the next stage of the research the activity of compounds was evaluated in microbiological studies. Strains of Enterobacter aerogenes with different expressions of the AcrAB efflux pump were used. The first study carried out was a susceptibility test determining the MICs of compounds in order to find a concentration that could be used in combination with antibiotics without the influence of an intrinsic antibacterial activity of the compounds. Then the effect of the compounds on bacterial susceptibility to antibiotics such as nalidixic acid, chloramphenicol, doxycycline and erythromycin was examined. After, the type of cooperation with antibiotics was determined based on isobolograms and the FIC index calculated. The last of microbiological studies was the real-time efflux (RTE) assay which used the fluorescent dye 1,2’-dinaphthylamine and allowed the functioning of the pump to be monitored directly. The structure-activity relationship (SAR) analysis emphasized the essential role of the amphiphilic nature of the EPIs from the group of arylidene derivatives of hydantoin and imidazolone

La résistance à la chimiothérapie peut-être étudiée comparativement à l’étude de la résistance chez les microorganismes. Parmi les superfamilles de protéine identifiées comme étant responsables de résistance aux drogues, il y a les RND. Ses membres sont très répandus dans les organismes bactériens, mais aussi les archaea et les eucaryotes. Ptch1, protéine transmembranaire récepteur du morphogène Hedgehog (Hh), membre des RND, a une activité d’efflux de cholestérol, mais aussi de médicaments chimiothérapeutiques qui confère aux cellules cancéreuses une résistance à la chimiothérapie. Or, une activité aberrante de la voie de signalisation Hh a été observée dans près de 25 % des cancers. Parmi les caractéristiques communes à la résistance aux drogues des RND, il y a la capacité de ces protéines transmembranaires à faire de l’efflux d’un large spectre de substrats et de drogues, et ce, en utilisant la force proton motrice.L’objectif de ce projet est l’étude structurale du mécanisme d’efflux de drogues de Ptch1.Dans un premier temps, n’ayant pas encore accès à une structure de Ptch1, nous avons réalisé une analyse des nombreuses structures disponibles de son homologue bactérien AcrB, modèle paradigme des RND responsable de résistance aux antibiotiques chez les bactéries gram négatives, afin de mieux comprendre le mécanisme d’efflux de drogues de ces protéines. Nous avons mis en place une stratégie d’analyse conformationnelle de l’ensemble des structures disponibles de façon à expliquer le mécanisme complexe, notamment ceux d’efflux de drogues de ces protéines, en fonction des propriétés structurales et dynamiques de sous-domaines. Les outils développés ont été mis à disposition de la communauté.Les structures de Ptch1 publiées en 2018 et 2019 ont révélé que le mécanisme d’efflux de drogues de Ptch1 était probablement très différent de celui d’AcrB. Dans un second temps, en utilisant ces structures, nous avons étudié le mécanisme d’efflux de cholestérol de Ptch1 par dynamique moléculaire afin d’étudier par la suite celui des drogues. Nous avons ainsi identifié certaines caractéristiques des changements conformationnels pouvant avoir lieu afin de permettre cet efflux. Enfin, le docking des agents chimiothérapeutiques transportés par Ptch1 suggère que les drogues utilisent les mêmes sites d’interaction que le cholestérol et potentiellement le même mécanisme d’efflux
Resistance to chemotherapy can be studied comparatively to the study of resistance in microorganisms. Among the protein superfamily identified as being responsible for multidrug resistance are RND. Its members are widespread in bacterial organisms, but also in Archaea and Eukaryotes. Ptch1, a transmembrane protein, receptor of morphogen Hedgehog (Hh), a member of the RND, has cholesterol efflux activity, but also of chemotherapeutic drugs which confers resistanceto chemotherapy to cancer cells. In fact, an aberrant activity of the Hh signaling pathway has been observed in nearly 25% of cancers. Among the common features of multidrug resistance in RND is the ability of these transmembrane proteins to efflux a broad spectrum of substrates and drugs using protonmotive force.The goal of this project is the structural study of the drug efflux mechanism of Ptch1.In a first step, since we did not yet have access to a structure of Ptch1, we have performed an analysis of the numerous available structures of its bacterial counterpart AcrB, the RND paradigm model responsible for antibiotic resistance in gram-negative bacteria, in order to better understand the drug efflux mechanism of these proteins. We have implemented a strategy of conformational analysis of all available structures in order to explain the complex mechanism, including the drug efflux mechanism of these proteins, as a function of the structural and dynamic properties of sub-domains. The tools developed have been made available to the community.The structures of Ptch1 published in 2018 and 2019 revealed that the drug efflux mechanism of Ptch1 was probably very different from that of AcrB. In a second step, using these structures, we studied the cholesterol efflux mechanism of Ptch1 by molecular dynamics in order to subsequently study the drug efflux mechanism. We thus identified certain characteristics of the conformational changes that cantake place to allow this efflux. Finally, the docking of chemotherapeutic agents carried by Ptch1 suggests that drugs use the same interaction sites as cholesterol and potentially the same efflux mechanism

La multi-résistance aux drogues des bactéries est un problème majeur en clinique. L’un des mécanismes de résistance consiste à effluer les composés toxiques hors de la cellule grâce à des protéines de la membrane interne nommées pompes d’efflux. Ces protéines appartiennent à cinq familles (MFS, RND, MATE, SMR et ABC) et peuvent fonctionner en association avec deux autres types de protéines (protéine du périplasme et protéine de la membrane externe) pour former un canal. Dans le cadre d’une thématique de recherche basée sur l’étude des mécanismes de résistance auxdrogues de la bactérie pathogène Legionella pneumophila, une approche bioinformatique menée sur lesgénomes de trois souches séquencés (souches Lens, Paris et Philadelphia) a permis d’identifier des protéinespouvant participer à l’efflux. Notre but a été de vérifier l’implication de ces protéines dans la résistance auxdrogues et dans la virulence de Legionella en ciblant un ou plusieurs gènes codant pour des composants desystèmes d’efflux. Pour inactiver les gènes, nous avons choisi une stratégie de recombinaison homologue. Lesrecombinants ont été testés pour leur sensibilité à des composés toxiques afin de voir si les gènes ciblés jouentun rôle dans l’efflux d’E. coli. Un de ces mutants, le mutant MF201, altéré pour le gène codant pour une protéinehomologue à TolC chez E. coli s’est avéré être 2 à 16 fois plus sensible aux drogues testées comparé à lasouche sauvage. De plus, ce mutant présente un défaut important de virulence dans Acanthamoeba castellanii,Dictyostelium discoideum et les macrophages U937. Ce premier résultat implique que la protéine TolC-like deLegionella aurait un rôle clef dans la relation hôte pathogène et sous-tend un lien entre multi-résistance auxdrogues et virulence. Par ailleurs une étude de l’expression des gènes codant pour des pompes à efflux a étéinitiée afin de comprendre leur rôle au cours du cycle infectieux de Legionella
Bacterial multi-drug resistance is of major concern in the case of clinic. One of the resistance mecanisms used by bacteria is the efflux of noxious compounds out of the cell thanks to inner membran proteins called efflux pumps. This proteins belong to five families (MFS, RND, MATE, SMR and ABC) and can function in close association with two partners (periplasmic protein and outer membrane protein) to form a canal. In our new research axis based on the study of the drug resistance of the bacterium Legionella pneumophila, we conducted a bioinformatical approach to identify efflux pumps proteins coded by the sequenced genome of three strains (strains Lens, Paris and Philadelphia). Our goal was to study the role of this proteins in Legionella drug resistance and in its virulence. The bioinformatic approach data allowed us to choose one or several genes coding for potential efflux pump components for genetic invalidation by an homologousrecombination strategy. The bacterial mutants were exposed to different noxious compounds in order to know ifthe target genes invalidated were implicated in the efflux of drugs. One of this mutants, strain MF201, which isdeleted for the gene encoding a protein homologous to E. coli TolC protein, revealed to be 2 to 16 times moresensitive to the drug tested compared to the wild-type strain. Furthermore, this mutant showed an importantvirulence defect in Acanthamoeba castellanii, Dictyostelium discoideum and U937 macrophages. This first resultsmeans that the TolC-like protein of Legionella could be a key factor in host-pathogen interaction and stronglysuggests a link between multi-drug resistance and virulence. We also initiated a transcriptomic approach to studyefflux pump genes expression in order to understand their role during the infectious cycle of Legionella

Burkholderia pseudomallei est l’agent causal de la mélioïdose, une maladie tropicale endémique dans le Nord de l’Australie et en Asie du Sud-Est. Nous avons analysé le système d’efflux, mécanisme majoritairement impliqué la multi-résistance aux antibiotiques. Nous avons chercher à identifier des mutations dans les pompes d’efflux et des modulation de l’expression de ces dernières afin d’expliquer ces phénotypes de résistance. Les techniques de séquençage de l’ADN et de transcriptomique par RT-qPCR nous ont permis d’identifier deux mécanismes chez des souches cliniques. Un mécanisme transitoire responsable d'une résistance croisée du Cotrimoxazole, avec les quinolones, et le chloramphénicol, pour lequel nous suspectons une modulation de l’expression de l’efflux. Le second, impliqué dans la résistance au méropénème, par surexpression de l'efflux suite à une mutation dans le régulateur de la pompe AmrAB-OprA.Dans un second axe de recherche, nous avons également criblé plusieurs molécules afin d'identifier des candidats inhibiteurs de l'efflux, dérivant de la famille des phénothiazines et capables de restaurer une sensibilité aux antibiotiques. Nous avons analysé l’impact de ces molécules sur des souches modèles de multi-résistance (Burkholderia thailandensis) et sur des souches cliniques et environnementales de B. pseudomallei. Ces molécules sont capables d’impacter l’expression de l’efflux, mais nous pensons que le mécanisme majeur d’inhibition de cette famille de molécules reste l’entrée en compétition avec les antibiotiques efflués. Nous avons identifié une molécule, AST17, capable de restaurer la sensibilité au Cotrimoxazole, ainsi qu'aux quinolones
Burkholderia pseudomallei is thecausal agent of melioidosis, a tropical disease, endemic in Notrhern Australia and South-East Asia. We have analyzed efflux systeme, known to be one of the main mecanism implicated in antibiotic resistance phenotypes. We have looked for mutations in efflux pumps and for transient modulations of the efflux pumps expression, that could explain resistance phenotypes. Whole genome sequencing and a the targeted method of RT-qPCR allowed us to identified two mecanisms in clinical strains. A transient mecanism, responsible of a cross-resistance to Cotrimoxazole, quinolones and chloramphenicol, and we suspect an implication of modulation of efflux. The second one is implicated in meropenem resistance by an overexpression of the AmrAB-OprA efflux pumps, due to a mutation of its regulator. In a second time, we also have screened several compounds, all derivated from phenothiazines, in order to identify efflux pump inhibitors for a restoration of the antibiotic susceptibility. We have analyzed the impact of these molecules in multi-resistant strain models, and on several clinical and environnemental strains. These molecules are able to modulate efflux pumps expression, however, we think that the main inhibition mecanism of these derivatives is about a competition between the molecule and the antibiotics. We have identified one molecule, AST17, that is able to restore Cotrimoxazole and quinolones susceptibilities

La résistance aux médicaments antiépileptiques (MAEs) est un des problèmes majeurs des épilepsies infantiles, comme par exemple le syndrome de Dravet. La pharmacoresistance de l’épilepsie pourrait s’expliquer par une diminution du passage des MAEs dans le cerveau, à travers la Barrière Hémato-Encéphalique (BHE). La BHE comporte des transporteurs des familles « ATP-binding cassette » (ABC) et « SoLute Carrier » (SLC) localisés au niveau de la membrane des cellules endothéliales qui contrôlent leur passage entre le sang et le cerveau. La pharmacoresistance des épilepsies a été associée à ces transporteurs car des MAEs ont été identifiés comme substrats de transporteurs comme la glycoprotéine-P (P-gP) et la « Breast Cancer Resistance Protein » (BCRP). L’hypothèse de cette relation est confortée par l’observation de l’augmentation de l’expression de ces transporteurs d’efflux dans le foyer épileptogène et par l’identification des polymorphismes dans les gènes des transporteurs chez des patients pharmacorésistants. L’interaction au cours du développement cérébral entre les cellules endothéliales et les neurones et astrocytes pourrait modifier le profil des transporteurs de la BHE. Les MAEs sont aussi connus pour être soit des inducteurs, soit des inhibiteurs des enzymes du métabolisme des médicaments et des transporteurs membranaires. Ces données nous permettent de faire les hypothèses suivantes: 1) La BHE en développement présente un profil de transporteurs différent de la BHE mature qui pourrait modifier le passage des MAEs vers le cerveau ; et 2) le traitement chronique administré au cours du syndrome de Dravet pourrait changer le phénotype des transporteurs de la BHE en développement. Nous résultats ont montré que la P-gP et la BCRP augment leur expression au cours du développement. La maturation de la BHE a aussi un impact sur le passage des MAEs étudiés. Nous avons constaté une augmentation de l’expression des différents transporteurs ABC et SLC étudiés pendant le développement de la BHE, suite au traitement chronique avec la thérapie du Syndrome de Dravet. L’acide valproïque, un des MAEs utilisé dans ce traitement, diminue l’activité d’efflux de la P-gP chez les rats en développement et adultes, ce qui a été confirmé dans un modèle in-vitro de BHE immature. Ces résultats mettent en évidence l’interaction entre la BHE en développement et le traitement chronique par les MAEs peut modifier leur distribution au niveau du cerveau et la réponse aux MAEs
Resistance to Antiepileptic Drugs (AEDs) has been a major concern in infantile epilepsies such as for example the Dravet Syndrome. One hypothesis concerning the pharmacoresistance in epilepsy is that a decreased delivery of these drugs to the brain may occur in relation to changes in the Blood-Brain Barrier (BBB) function. BBB exhibits ATP-binding cassette (ABC) and SoLute Carrier (SLC) transporters at the surface of endothelial cells that control the blood-brain transport. Pharmacoresistance in epilepsy may be linked to changes in the functions of these transporters since some AEDs are substrates of the P-glycoprotein (P-gP) and Breast Cancer Resistance Protein (BCRP) transporters. The increased expression of efflux transporters in epileptogenic tissue and the identification of polymorphisms in the efflux transporters genes of resistant patients further support this potential relationship. The interaction of endothelial cells with astrocytes and neurons during brain development could change the pattern of transporters in the BBB. AEDs are also known as either inducers or inhibitors of drug metabolic enzymes and membrane transporters. Taken together, these facts led us to test the following hypothesis: 1) the developing BBB in immature animals presents a different pattern of transporters that could change AEDs disposition in the brain of immature subjects; and 2) the chronic pharmacotherapy used in infantile epilepsies such as the Dravet Syndrome may change the transporters phenotype of the BBB. Our work showed that the expression of P-gP and BCRP increases during development as a function of age. We also showed the maturation of the BBB has an impact on brain disposition of the studied AEDs. We finally observed an increase in the expression of various ABC and SLC transporters induced by the pharmacotherapy of the Dravet Syndrome in immature animals. One of the drugs used, valproic acid, appeared nonetheless to reduce the efflux activity of P-gP in developing and adult animals, which was confirmed in an in-vitro model of the immature BBB. Taken together, these results demonstrated that the interaction between the developing BBB and the AEDs chronic treatment may lead to differences in brain disposition of the AEDs that may impact on the response to AEDs