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Dissertations / Theses on the topic 'Différenciation in vitro des parasites'
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El, Kadri Mohammad. "Role(s) of glycerol metabolism in the biology of African trypanosomes." Electronic Thesis or Diss., Bordeaux, 2024. http://www.theses.fr/2024BORD0456.
Full textAbstract:
Trypanosoma brucei, un parasite extracellulaire responsable de la trypanosomiase africaine, doit s’adapter à différents environnements dans ses hôtes mammifères et l’insecte vecteur (la mouche tsétsé). Dans le sang des mammifères, le glucose est la principale source de carbone soutenant une croissance rapide du parasite, en alimentant son métabolisme et la production d'ATP. Lorsque les formes sanguines prolifératives « slender » atteignent des densités cellulaires élevées, un quorum sensing induit leur différenciation en formes non réplicatives « stumpy » (stumpy-QS). Ces formes stumpy-QS protègent l’hôte d’une parasitémie létale et sont également compétentes pour la transmission à la mouche tsétsé. Cependant, le glucose peut être remplacé par le glycérol pour alimenter le métabolisme central du parasite, suggérant un rôle significatif in vivo. Cela s'aligne avec la démonstration récente que les trypanosomes résident principalement dans les espaces extravasculaires de la peau et du tissu adipeux, où le glycérol interstitiel est 5 à 20 fois plus concentré que dans le plasma. Le glycérol est produit par les adipocytes via la glycolyse et la lipolyse, cette dernière induite par les trypanosomes, pourrait protéger l'hôte contre l'infection. Ces données suggèrent que les interactions entre les adipocytes et les trypanosomes, potentiellement médiées par le glycérol, jouent un rôle dans le cycle de vie du parasite.Cette thèse explore l’impact du glycérol sur les formes sanguines slender de Trypanosoma brucei. Nos résultats ont démontré que le glycérol induit la différenciation des formes prolifératives en formes non réplicatives (stumpy-Glyc) ressemblant aux formes stumpy-QS, mais avec une survie allongée. Des conditions similaires à celles des tissus (4 mM glucose, 0,2-0,5 mM glycérol) induisent la production de formes intermédiaires prolifératives (intermédiaire-Glyc) capables de se différencier in vitro en formes procycliques (parasites de l’intestin de l'insecte vecteur) et d’infecter les mouches tsétsé. De plus, le glycérol prolonge considérablement la durée de vie des formes stumpy-QS induites par le quorum sensing. Ces données nous ont conduit à proposer un modèle révisé de la transmission du parasite de l’hôte mammifère à l’insecte vecteur, où les formes stumpy-QS protègent l'hôte contre une parasitémie élevée, tandis que les formes intermédiaires-Glyc prolifératives et les formes stumpy à longue durée de vie, induites par le glycérol des adipocytes, assurent la transmission à l’insecte vecteur.Un autre aspect de ma thèse concerne la dissection de la voie de signalisation impliquée dans la différenciation induite par le glycérol. En exploitant la durée de vie prolongée des cellules stumpy-Glyc en culture, nous avons sélectionné des mutants résistants à la différenciation induite par le glycérol. L'analyse génomique comparative entre ces mutants a permis d'identifier des mutations candidates associées au phénotype de résistance. Une mutation a notamment été trouvée dans le gène de la sous-unité régulatrice de la protéine kinase A (PKAR), dont le rôle dans la voie de signalisation a été ensuite validé.Enfin, nous avons exploré la capacité de T. brucei à métaboliser le glycérol sécrété par les adipocytes, même en présence d'un excès de glucose. Pour ce faire, nous avons utilisé un système de co-culture in vitro permettant d'analyser les interactions entre les trypanosomes parentaux ou mutants et les adipocytes. Le profilage métabolique par résonance magnétique nucléaire (RMN) couplé à des approches de marquage au 13C a permis de tracer les métabolites produits par les adipocytes et les trypanosomes. Nos données ont montré que T. brucei utilise efficacement le glycérol sécrété par les adipocytes pour alimenter son métabolisme central, même en présence de grandes quantités de glucose.En conclusion, ces données ont démontré que le glycérol est un acteur clé dans la biologie de Trypanosoma bruceiTrypanosoma brucei, an extracellular parasite responsible for African trypanosomiasis, must adapt to distinct environments in its mammalian hosts and the tsetse fly vector. In the mammalian bloodstream, glucose serves as the primary carbon source, fueling the parasite's central carbon metabolism and ATP production, which supports its rapid growth. Once the parasites reach high cell densities, a quorum-sensing mechanism induces a transition from proliferative slender forms to growth-arrested stumpy forms (stumpy-QS). These stumpy forms help prevent host mortality by limiting parasitaemia and are primed for transmission to the tsetse fly. However, it has been demonstrated that glycerol can effectively replace glucose in feeding the parasite’s central carbon metabolism, suggesting a significant role in vivo. This aligns with findings that trypanosomes predominantly reside in the extravascular spaces of tissues such as the skin and adipose tissue, where interstitial glycerol concentrations are 5 to 20 times higher than in plasma. Glycerol is released from adipocytes through both lipolysis and lipolysis-independent processes such as glycolysis, and it has been suggested that trypanosome-induced adipocyte lipolysis may even protect the host against trypanosome infection. Together, these data suggest that interactions between adipocytes and trypanosomes, potentially mediated by glycerol, play a critical role in the parasite’s life cycle.This thesis explores the impact of glycerol on bloodstream form (BSF) Trypanosoma brucei. Our findings demonstrated that glycerol induces the differentiation of slender BSF into growth-arrested forms that resemble stumpy-QS, but with enhanced survival. Furthermore, under tissue-like conditions, characterized by glycerol levels between 0.2-0.5 mM and glucose at 4 mM, proliferative intermediate forms were generated, which were capable of differentiating into the insect vector stage (procyclics) and sustaining infections in tsetse flies. Additionally, glycerol extended the lifespan of quorum-sensing-induced stumpy forms, which normally have a limited lifespan of a few days. All these data led us to propose a revised model for transmission, in which quorum sensing-induced stumpy-QS forms protect the host from high parasitaemia, while glycerol from adipocytes induces intermediate-Glyc or long-lived stumpy forms that facilitate transmission to the fly.Another key aspect of my thesis concerns the dissection of the signalling pathway involved in glycerol-induced differentiation. By exploiting the extended lifespan of stumpy-Glyc cells in culture, we selected mutants resistant to glycerol-induced differentiation through extended in vitro culturing in a glycerol-containing medium. Comparative genomic analyses between these mutants and cells grown in glucose, which are sensitive to glycerol-induced differentiation, identified candidate mutations associated with the resistance phenotype. Notably, these mutations were found to affect the protein kinase A regulatory subunit (PKAR), whose role in the signalling pathway was validated.Finally, we explored whether T. brucei can metabolize glycerol secreted by adipocytes even in the presence of excess glucose. To investigate this, we used an in vitro co-culture system using a transwell assay, which allowed us to analyse the interactions between parental and mutant trypanosomes and adipocytes. We examined growth and exometabolome profiles using nuclear magnetic resonance (NMR)-based metabolite profiling, coupled with 13C-labeling to trace specific metabolites. Our data showed that T. brucei efficiently utilized glycerol secreted by adipocytes to support its central carbon metabolism, even when glucose was abundant.Together, these data demonstrated that glycerol is a key player in the biology of Trypanosoma brucei
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Leducq, Régine. "Echinococcose alvéolaire : migration et différenciation dans l'hôte intermédiaire expérimental. Aspects morphologiques et biochimiques." Montpellier 2, 1992. http://www.theses.fr/1992MON20181.
Full textAbstract:
Dans le cadre des interactions heterospecifiques durables, une etude des relations hote-parasite est realisee a partir du modele metacestode e. Multilocularis/hote intermediaire experimental (la gerbille de chine meriones unguiculatus). Dans un premier temps, les parametres influencant la dissemination de l'echinocoque (en tant que population clonale) sont etudies au travers de differents protocoles d'infestations secondaires. Les differents types de formes larvaires a l'origine des migrations dans l'hote sont decrits ainsi que les voies de migration preferentiellement empruntees. Une attention particuliere est portee a l'atteinte du systeme lymphatique. Les caracteristiques des infestations secondaires sous-cutanees et intra-peritoneales, sont discutees et comparees a celles de l'echinococcose primaire. Dans un deuxieme temps, les modes de differenciation du metacestode en tant qu'individu sont analyses grace a des etudes morphologiques et biochimiques. Les phases de l'ontogenese du parasite sont etablies en fonction des transformations tegumentaires. Les marquages des glycoconjugues a l'aide de lectines confirment la mise en evidence d'une regionalisation tegumentaire et d'une evolution des relations hote-parasite favorisant le developpement du metacestode. Une etude preliminaire des glycoproteines parasitaires est realisee a l'aide des techniques de sds-page et western blotting. Ces resultats suggerent que l'ontogenese du parasite serait determinee par des facteurs intrinseques et extrinseques (milieux physico-chimiques et immunologiques) evoluant dans le temps et l'espace
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Devine, Maree Anne. "The response of nematodes to stress, in vitro." Thesis, University of Nottingham, 1995. http://ethos.bl.uk/OrderDetails.do?uin=uk.bl.ethos.261149.
Full text
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Grégoire, Arnaud. "Démographie et différenciation chez le Merle noir Turdus merula : liens avec l'habitat et les relations hôtes-parasites." Dijon, 2003. http://www.theses.fr/2003DIJOS039.
Full textAbstract:
L'incidence de l'anthropisation des habitats sur les populations naturelles est actuellement une préoccupation importante dans les domaines fondamentaux ou appliqués. Historiquement, la réaction des espèces face au milieu neuf et singulier que représentent les zones urbaines a été abordée au niveau communautaire. Cependant, si l'urbanisation a des conséquences au niveau des communautés, les pressions et contraintes s'exercent en premier lieu sur les populations et les individus qui les constituent. Le Merle noir Turdus merula est un oiseau originaire des forêts qui a colonisé les habitats urbanisés au XIXème siècle. Ce travail s'est intéressé à comparer des populations urbaines et forestières du Merle noir afin d'explorer leurs fonctionnements démographiques respectifs en liaison avec d'éventuelles contraintes propres aux différents habitats et en intégrant la dimension individuelle. En relation étroite avec ces préoccupations, la structuration génétique et morphologique a été envisagéeThe consequences of human-induced disturbances on wild populations is a stimulating topic raising fundamental as well as applied questions. The effects of urbanization on wild life have been initially studied at the community level. However, even if urbanization influences communities, the selective pressures occur first on populations and individuals. Consequently, it is also crucial to consider the ecological problems at the population level. The Blackbird Turdus merula has colonized urban landscapes in Europe since the middle of the 19th century and provides good opportunities to explore the influence of urbanization on population biology. The aim of this work was to compare urban and forest Blackbird populations in terms of different population characteristics (survival, reproductive success and dispersal) and selective contraints (parasites). Direct (i. E. Capture and census of individuals) and indirect methods (i. E. Genetic) were used in order to assess the dynamics of these populations
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Wakid, Majed Hamdi. "Investigation of flagellar attachment by Leishmania promastigotes in vitro." Thesis, University of Liverpool, 2000. http://ethos.bl.uk/OrderDetails.do?uin=uk.bl.ethos.367826.
Full text
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Asselineau, Daniel. "Différenciation et morphogénèse de l'épiderme humain in vitro : modulation par l'acide rétinoïque." Nice, 1989. http://www.theses.fr/1989NICE4277.
Full textAbstract:
L'étude de la distribution des différents marqueurs de différenciation en fonction de la concentration de l'acide rétinoïque a montré, sur l'épiderme humain, que 1) les marqueurs sont différemment affectés par la concentration en acide rétinoïque, 2) il y a une corrélation étroite entre l'ordre d'apparition des marqueurs dans l'épithélium et leur sensibilité relative à l'acide rétinoïque
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Binet-Vicard, Elisabeth. "Différenciation, in vitro, de cellules de carcinome murin : réponse et sécrétion hormonale." Lyon 1, 1986. http://www.theses.fr/1986LYO1T009.
Full text
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Guironnet, Géraldine. "Étude de la différenciation in vitro de monocytes en cellules dendritiques cutanées." Lyon 1, 2000. http://www.theses.fr/2000LYO1T226.
Full text
9
Ris, Nicolas. "Hétérogénéité spatiale, plasticité phénotypique et trade-off environnementaux : rôle de l'espèce hôte et de la température dans la différenciation génétique des populations du parasitoi͏̈de Leptopilina heterotoma (Hymenoptera)." Lyon 1, 2003. http://www.theses.fr/2003LYO10037.
Full textAbstract:
Cette thèse examine le rôle de deux facteurs écologiques majeurs, la température de développement et l'espèce hôte, ainsi que leur interaction sur l'origine et le maintien de la différenciation génétique d'un insecte parasitoi͏̈de, Leptopilina heterotoma (Hymenoptera). Les résultats montrent que l'espèce hôte induit non seulement une forte plasticité phénotypique mais également certaines réponses génétiques qui pourraient avoir des conséquences importantes en terme d'évolution locale des spectres d'hôtes. De plus, il existe de fortes interactions entre l'espèce hôte, la température de développement et le génotype sur des composantes majeures de la fitness (fécondité et survie pré-imaginale notamment). Même si ces interactions génotype-environnement complexes contribuent probablement au maintien de la différenciation des populations, elles ne peuvent l'expliquer à elles seules et d'autres mécanismes doivent être envisagés.
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How, S. J. "Aspects of the in vitro susceptibility of Chlamydia trachomatis to antimicrobial agents." Thesis, University of Liverpool, 1985. http://ethos.bl.uk/OrderDetails.do?uin=uk.bl.ethos.380050.
Full text
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Gangnerau, Marie-Noelle. "Différenciation de la stéroïdogenèse testiculaire chez le rat : ontogénèse et régulation in vitro." Paris 7, 1985. http://www.theses.fr/1985PA077040.
Full textAbstract:
A partir du stade de 15,5 jours p. C. , le testicule foetal de rat a la capacité de sécréter spontanément de la testostérone, in vitro Avant ce stade, des gonades mâles, en présence de précurseurs de la stéroïdogénèse comme le DHA, produisent dès 13 jours 10 heures de la testostérone. Le complexe 3 β-HSD, Δ5-Δ4 isomérase n'est pas le facteur limitant de la biosynthèse de testostérone avant 15,5 jours p. C. Des récepteurs à LH ont été caractérisés en mesurant la fixation d125I-hCG dans des homogénats testiculaires. A 18,5 jours p. C. , la constante d'association apparente KA est de 0,82. 1010M-1 et le nombre de sites Ns de 0,57. 10-12 moles par testicule. Une fixation spécifique d'1251hCG est décelable à partir de 15,5 jours p. C. A ce stade, les récepteurs à LH sont fonctionnels : la production de testostérone est spécifiquement stimulée par LH une augmentation de l'adénylate cyclase est aussi obtenue avec des concentrations d'hormone comparables à celles qui stimulent la stéroïdogénèse. En présence de LH, l'augmentation de l'adénylate cyclase précède d'environ 20 minutes celle de la production de testostérone ; l'AMPc apparait bien comme un intermédiaire de l'action de LH sur la stéroïdogénèse testiculaire fœtale. D'autre part, une différenciation fonctionnelle des gonades fœtales mâles est obtenue in vitro. En effet des gonades mâles explantées à 12,5 jours, 13,5 jours ou 14,5 jours p. C. Acquièrent, en milieu anhormonal, la capacité de synthétiser la testostérone à partir du stade de 15,5 jours p. C. , comme in vivo. -des récepteurs fonctionnels à LH/hCG apparaissent également entre 14,5 et 15,5 jours p. C. Sans l'apport de facteurs extragonadiques. La différenciation et le maintien des récepteurs à LH/hCG a été évaluée : -soit directement par mesure de la fixation spécifique d'125IhCG -soit indirectement par mesure de la réponse stéroïdogène. Bien qu'il n'apparaisse in vitro qu'un nombre limité de récepteurs, cette différenciation est suffisante pour que LH stimule la production de testostérone de façon aussi importante que le dbAMPc. Enfin, une différenciation précoce de récepteurs fonctionnels à LH est obtenue, in vitro, en présence d'androgènes. En effet, des gonades mâles précultivées 24 heures, en présence de DHA, répondent à LH par une production accrue de testostérone dès le stade de 14 jours 18 heures.
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Nogueira, Maria Manuela. "Rôle des protéines Id dans la différenciation hématopoïétique des cellules ES in vitro." Paris 11, 2000. http://www.theses.fr/2000PA11T057.
Full textAbstract:
Certains facteurs de transcription de la famille bHLH (basic helix-loop-helix) sont impliqués dans l'hématopoïèse (SCL Tal-1, protéines E et éventuellement Lyl-1). Leur fonction est régulée par les protéines Id, susceptibles de les "séquestrer" sous forme d'hétérodimères incapables alors de se fixer à l'ADN. Les protéines Id ont donc un rôle potentiel de régulateurs négatifs de l'hématopoïèse. Cette hypothèse a été testée dans le modèle de différenciation hématopoïétique des cellules ES in vitro. Ce modèle présente l'intérêt majeur de donner accès, en plus des progéniteurs myéloïdes et des cellules matures de chaque lignée, à une cellule considérée comme l'hémangioblaste. Une première étape a consisté à étudier le profil d'expression des quatre gènes Id par RT-PCR. Tandis que l'expression du gène ld2 ne varie pas, celle des gènes ld1, ld3 et ld4 diminue au cours de la différenciation hématopoïétique des cellules ES, suggérant la possibilité d'un rôle de ces trois protéines dans la régulation négative de l'hématopoïèse. Dans une deuxième étape, les effets de la surexpression du gène ld1 sur les tissus hématopoïétique et endothélial dérivés des cellules ES ont été examinés. Aucun effet quantitatif ni qualitatif de la surexpression de ce gène sur l'hémangioblaste, les progéniteurs myéloïdes, les cellules hématopoïétiques matures et les cellules endothéliales n'a été observé. Bien que la quantité de protéine ld1 produite à l'aide du vecteur pEF-BOS utilisé soit suffisante pour bloquer la fonction de la protéine MyoD au cours de la différenciation myogénique de la lignée C3H1OT1/2, cette quantité peut être insuffisante pour annuler l'effet des protéines bHLH indispensables à l'hématopoïèse dans notre système. Cependant, nous ne pouvons pas exclure que la protéine ld1 ne joue aucun rôle dans la différenciation hématopoïétique des cellules ES in vitro. La suite du travail consistera à examiner les effets de la surexpression conjointe d'ld1 et d'ld3 dans ce modèleBHLH (basic helix-loop-helix) transcription factors such as SCL/Tal-1, E proteins and probably Lyl-1 are involved in hematopoiesis. Their function is regulated by Id proteins that are able to sequester them as non DNA-binding heterodimers. Thus, Id proteins might be negative regulators of hematopoiesis. We have tested this hypothesis using the in vitro ES cell hematopoietic differentiation madel. This model offers the advantage of giving access, in addition to all myeloid progenitors and mature cells, to a cell that is considered as the hemangioblast. Ln a first step, we studied the expression profile of the four Id genes by RT PCR. While ld2 expression remains constant, ld1, ld3 and ld4 gene expression decreases during the course of ES cell hematopoietic differentiation. These results suggest a possible role of the three proteins in the negative regulation of hematopoiesis. Ln a second step, we examined the effects of ld1 gene overexpression on bath ES cell-derived hematopoietic and endothelial tissues. Neither quantitative nor qualitative effect of this overexpression on the hemangioblast, myeloid progenitors or mature hematopoietic and endothelial cells was observed. Although the pEF-BOS vector produced a sufficient ld1 protein amount to inhibit the MyoD protein function in the C3H10T1/2 cell line myogenic differentiation, this amount could be insufficient to black the effect of hematopoietic bHLH proteins indispensable in our madel. However, we cannot exclude that the ld1 protein does not play any role in the in vitro ES cell hematopoietic differentiation. The following step will consist in examining the effects of bath ld1 and ld3 gene overexpression in the ES cell model
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Staub, Christophe. "Etude in vitro de la différenciation de la lignée spermatogénétique chez le rat." Tours, 2000. http://www.theses.fr/2000TOUR4006.
Full textAbstract:
La spermatogenèse est un processus finement régulé de multiplication et de différenciation cellulaire, conduisant à la production de gamètes mâles au niveau de l'épithélium séminifère du testicule. La mise au point d'un système de culture, permettant aux cellules germinales de réaliser l'étape méiotique de la spermatogenèse in vitro, était l'objectif principal de cette thèse. Des cultures de tubes séminifères ont été réalisées à partir de rats Wistar prépubères, dans des chambres bicamérales permettant de reproduire partiellement la polarité des cellules testiculaires. Le passage de la méiose a été caractérisé grâce a : - l'expression de gènes spécifiques de certaines étapes de la méiose par RT-PCR quantitative relative ; - l'identification des différents types cellulaires en culture en microscopie électronique à transmission ; - la mise en évidence des spermatides par immunocytochimie grâce à un anticorps dirigé spécifiquement contre une protéine acrosomique ; - la détermination de la ploïdie des cellules ; - l'utilisation du BrDU pour suivre la progression des cellules germinales in vitro. Il a été montré, au cours de cultures réalisées à partir d'animaux de 20-22 jours, que des spermatocytes primaires leptotène sont capables de se différencier in vitro jusqu'au stade de spermatide ronde. Pour la première fois, l'étape méiotique de la spermatogenèse est réalisée entièrement en culture, à partir de cellules germinales mâles de mammifères. Une étude comparative de la cinétique de différenciation a été réalisée in vitro et in vivo. Ce travail offre de nouvelles perspectives dans le domaine de la compréhension de la méiose. Il devrait permettre de mettre au point de nouvelles approches dans le domaine de la stérilité masculine ou de la contraception. En outre, la possibilité de produire en culture des cellules germinales dont l'état de différenciation devrait autoriser une fécondation in vitro, pourrait ouvrir les portes de la transgénèse chez les espèces domestiques.
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Mainzer, Carine. "Implication de l’IGF-1R dans la différenciation épidermique et le vieillissement." Thesis, Lyon 1, 2014. http://www.theses.fr/2014LYO10120/document.
Full textAbstract:
Le récepteur à l'IGF1 (IGF-1R) ainsi que ses voies de régulation sous-jacentes ont été largement étudié pour leur importance au cours du développement et leur rôle mitotique sur divers types cellulaires. A l'échelle de la peau, l'IGF-1R contribue à l'homéostasie épidermique et est souvent associé au compartiment basal pour son effet pro-prolifératif. Très peu d'études ont montré son implication au niveau de la différenciation épidermique et celles-ci présentent des résultats contradictoires. Au cours du vieillissement, la peau s'amincit et la barrière épidermique présente des défauts de perméabilité. Parallèlement, l'activité de l'IGF- 1R, maximale à l'adolescence, diminue avec l'âge. Cette étude a contribué à éclaircir le rôle de l'IGF-1R sur la différenciation épidermique et à montrer un lien entre vieillissement, perte en qualité de la peau et diminution d'activité de l'IGF-1R. L'élaboration de modèles 2D et 3D mimant le vieillissement par diminution d'activité de l'IGF-1R, nous a permis de confirmer le rôle mitotique de l'IGF-1R sur les kératinocytes et les progéniteurs et de démontrer son effet régulateur sur la différenciation épidermique par augmentation ou diminution de ces marqueurs. L'IGF-1R renforce l'adhésion cellulaire sur différentes matrices, impliquant de possibles interactions avec les intégrines α6 et β1. Ces résultats ont été corrélés aux observations de biopsies de peaux jeunes et âgées. Nous avons aussi montré que l'IGF-1R conférait un état sénescent aux cellules soumises à de fortes doses d'H2O2. Ces travaux montrent ainsi que l'IGF-1R est nécessaire pour le processus de différenciation épidermique et pour en assurer sa protection face au stress oxydantInsulin-like growth factor 1 receptor (IGF-1R) and its signaling pathway have been widely studied for their growth promoting role on many cell types and their implication in development. On skin, the IGF-1R function has been associated to basal proliferation and contributes to epidermal morphogenesis, but very little is known about its involvement on keratinocytes differentiation and the few studies existing depict contradictory results. IGF-1R activity is maximal during teenage and tend to decrease during aging. Aged skin depicts major thinning and defects in permeability of skin barrier. Our work consisted in clarifying IGF-1R role on epidermal differentiation process and emphasized a correlation between aging, loss of skin quality and IGF-1R activity. By building 2D and 3D aging like models with low IGF-1R activity, we confirmed IGF-1R mitogenic role on both basal and progenitor-like keratinocytes. We demonstrated that IGF-1R activity regulated keratinocytes differentiation by either enhancing or slowing down differentiation markers deposition. More importantly, we highlighted the importance of IGF-1R activity for keratinocytes adhesion on both laminin-332 and collagen I/IV coatings, implying possible interactions with α6 and β1 integrins. This relationship was further correlated on skin biopsies of young and aged donors. In a parallel study, we showed that IGF-1R could induce cell senescence under acute H2O2 stress. Taken together, IGF-1R is necessary for the epidermal differentiation process and protects epidermis from acute oxidative stress induced damages
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Bonnefoy, Jean-Yves. "Contribution à l'étude des glycoprotéines épidermiques humaines in vivo et in vitro." Lyon 1, 1985. http://www.theses.fr/1985LYO11640.
Full textAbstract:
Ce travail rapporte la caracterisation biochimique des glycoproteines epidermiques humaines normales et psoriasiques reconnues par les lectines cona et pna iodinees. Une proetine de pm 37000 a ete localisee dans la couche granuleuse de l'epithelium essentiellement. On peut la considerer comme un marqueur de la differenciation epidermique
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Tchikaya, Francis Olivier. "Perméabilités calciques modulant la différenciation neuronale in vitro chez l’embryon de xénope (xenopus laevis)." Rennes 1, 2006. http://www.theses.fr/2006REN1S169.
Full textAbstract:
L’objectif de cette thèse a été d’étudier le rôle des canaux calciques, des récepteurs nicotiniques et purinergiques ainsi que de l’IGF-1 dans la différenciation neuronale (DN) chez l’embryon de Xenopus laevis in vitro. Le calcium inhibe cette DN à tous les stades neurula étudiés (stades 13 à 20) et son action peut être partiellement reversée par des doses micromolaires de nickel, de lanthane et de gadolinium. Les canaux impliqués sont insensibles au potentiel de membrane et sont à identifier. Par ailleurs l’action du calcium sur la DN est indépendante de son action sur la pousse neuritique (PN). L’activation des canaux calciques voltage-dépendants de type N, des récepteurs nicotiniques et purinergiques de type P2X augmente la DN tandis que l’activation des récepteurs purinergiques de types P2Y et P1 induit des effets opposés. L’IGF-1 antagonise efficacement l’action inhibitrice du calcium sur la DN et la PN in vitro. L’ensemble de ces résultats montre que la voie d’entrée du calcium dans la cellule détermine son effet spécifique sur l’activité cellulaire.
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Turque, Nathalie. "Effet de l'oncogène V-MYC sur la différenciation de la neurorétine d'oiseau in vitro." Lille 1, 1996. http://www.theses.fr/1996LIL10204.
Full textAbstract:
Par criblage d'une banque d'adnc construite à partir d'arnm provenant de cellules de neuroretine de caille infectées par le rétrovirus mc29 porteur de l'oncogène v-myc, ont été isoles deux clones l'un correspondant au gène pax-qnr, orthologue aviaire du gène pax-6/pax6 codant un facteur de transcription essentiel pour la formation des yeux et le deuxième, qnr-71, codant une protéine du mélanome apparentée au produit du gène silver gène. A cote de son expression déjà documentée dans le système nerveux central, nous avons mis en évidence une expression de pax-6 dans le pancréas, et plus particulièrement le pancréas endocrine. L'expression de pax-6 est sous le contrôle de deux promoteurs, p0 et p1. P1, promoteur interne, est constitutif dans les tissus qui expriment pax-6 alors que p0 s'induit au moment de la différenciation neuronale dans la rétine. Nous avons montre que l'oncogène myc était capable d'induire la différenciation de la rétine pigmentaire en neurones, ces cellules exprimant alors pax-6 à partir de p0. P0 et p1, qui sont actives par la protéine p46 codée par pax-6, sont également stimulés par les produits de la myb, a-myb et c-myb, ces deux facteurs étant exprimés dans la neuroretine. Par ailleurs, nous montrons que les cellules de neuroretine exprimant a-myb prolifèrent en réponse au bfgf, une propriété qui avait déjà été observée pour c-myb. Qnr-71 s'exprime dans les tissus mélanisés, rétine pigmentaire et mélanocytes de la peau. Le promoteur de ce gène, dont l'expression est spécifique des mélanocytes, répond directement à la fois à myc et a mi, deux facteurs de transcription de la famille bhlhlz, par l'intermédiaire de deux sites de fixation catgtg. D'autre part, l'expression sous promotion virale de myc et mi conduit à une expression accrue du gène qnr-71 endogène. Nos travaux montrent que le facteur de v-est capable de reprogrammer la différenciation de la neuroretine vers la voie pigmentaire, et celle de la rétine pigmentaire dans la voie neuronale, suggérant un rôle central pour les facteurs de cette famille dans les phénomènes de différenciation de la rétine.
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Forest, Claude. "Différenciation in vitro de préadipocytes issus des tissus adipeux blanc et brun de souris." Nice, 1986. http://www.theses.fr/1986NICE4062.
Full textAbstract:
Les lignées préadipocytaires clonales HGFU et BFC-1 ont été établies à partir du tissu adipeux blanc péréiepididymaire (HGFu) et du tissu adipeux brun interscapulaire (BFC-1) de souris C57BL/6J non obèses. Les cellules de ces lignées se convertissent en adipocytes et presentent in vitro les principales caractéristiques morphologiques, biochimiques et de réponse hormonale des adipocytes in vivo. Une étude comparative a été effectuée entre la lignée HGFU et la lignée préadipocytaire Ob17 issue de la souris génétiquement obèse. Les résultats de cette étude ont permis de conclure à l'absence de différences intrinsèques significatives entre les deux lignées tant sur le plan de leur développement en adipocytes que sur celui de leurs réponses aux hormones. D'autre part, l'étude de l'ATPase (na+, k+), dépendante infirme l'hypothèse selon laquelle une réduction du niveau de cette enzyme puisse être le défaut primaire responsable de ce type d'obésité. Alors que le processus de différenciation des cellules BFC-1 et Ob17 est similaire, leurs réponses à court et à long terme aux agonistes ß-adrénergiques sont sensiblement différentes
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Maslah, Zouhir. "Élastographie in vitro de cellules par opto-acoustique picoseconde : applications à la différenciation cellulaire." Electronic Thesis or Diss., Bordeaux, 2023. http://www.theses.fr/2023BORD0464.
Full textAbstract:
La mécanique cellulaire est impliquée dans de nombreux processus biologiques tels que l'adhésion, la migration ou la différenciation. Évaluer les propriétés mécaniques des éléments cellulaires est essentiel pour comprendre leur fonction dans ces processus et permet d'anticiper les perturbations en cas d'altérations pathologiques. Cependant, les techniques traditionnellement utilisées pour caractériser mécaniquement les cellules ne permettent pas d’éliminer les interactions entre les différents éléments cellulaires lors des mesures. L’acoustique picoseconde offre une nouvelle opportunité grâce à la génération et à la détection d’ondes acoustiques dont les fréquences peuvent atteindre le térahertz. Nous avons élaboré un protocole expérimental pour effectuer des mesures d’acoustique picoseconde sur des cellules vivantes immergées dans un milieu de culture. À l’aide d’une chambre d’imagerie, conçue pour la microscopie directe et inversée, et d’un transducteur opto-acoustique biocompatible, nous pouvons réaliser des mesures non invasives des propriétés mécaniques avec une résolution spatiale micrométrique. Nous avons ensuite étudié l'impact de la fixation sur la structure interne du noyau, à l'aide de la diffusion Brillouin résolue en temps. Cette étude démontre que la célérité acoustique dans le noyau augmente avec la fixation. Ces changements ne sont pas homogènes, mais affectent principalement les éléments du nucléoplasme présentant la fréquence Brillouin la plus faible. Nous avons également démontré l’importance de maintenir l’hydratation des cellules fixées pour éviter les modifications irréversibles provoquées par la déshydratation. En effet, les cellules réhydratées ne retrouvent pas les mêmes propriétés mécaniques que celles qu’elles avaient avant la déshydratation. Enfin, nous avons étudié, grâce à une analyse statistique sur un grand nombre de cellules souches mésenchymateuses et d’ostéoblastes, comment la structure interne du noyau évolue avec la différenciation. En comparant les cellules incubées pendant 24 heures avec celles ayant été incubées pendant 14 jours dans un milieu ostéogénique, nous avons observé que les cellules différenciées présentaient une concentration de chromatine plus élevée que les cellules non différenciées. Cette concentration se traduit par une augmentation de la fréquence Brillouin, qui est attribuée à un changement de la rigidité du noyauCell mechanics is involved in several biological processes such as adhesion, migration, or differentiation. Evaluating the mechanical properties of cellular elements is essential to understand their function in these processes and allows anticipating disruptions in case of pathological alterations. However, the techniques traditionally used to mechanically characterize cells do not allow eliminating interactions between different cellular elements during measurements. Picosecond acoustics offer a new opportunity thanks to the generation and detection of acoustic waves whose frequencies can reach the terahertz. We have developed an experimental protocol to perform picosecond acoustic measurements on living cells immersed in a culture medium. Using an imaging chamber, designed for direct and inverted microscopy, and a biocompatible opto-acoustic transducer, we can perform non-invasive measurements of mechanical properties with micrometric spatial resolution. We then studied the impact of fixation on the internal structure of the nucleus, using time-resolved Brillouin scattering. This study shows that the acoustic velocity in the nucleus increases with fixation. These changes are not homogeneous but mainly affect the elements of the nucleoplasm presenting the lowest Brillouin frequency. We also demonstrated the importance of maintaining hydration of fixed cells to avoid irreversible modifications caused by dehydration. Indeed, rehydrated cells do not recover the same mechanical properties as they had before dehydration. Finally, we studied, thanks to a statistical analysis on a large number of mesenchymal stem cells and osteoblasts, how the internal structure of the nucleus evolves with differentiation. By comparing cells incubated for 24 hours with those incubated for 14 days in an osteogenic medium, we observed that differentiated cells had a higher chromatin concentration than undifferentiated cells. This concentration results in an increase in Brillouin frequency, which is attributed to a change in nuclear rigidity
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Girard, Mouline Caroline. "Étude de la différenciation ostéoclastique au sein d'un biomatériau destiné à l'ingénierie tissulaire osseuse et étude structure-fonction des produits du gène Atp6v0a3 dans la différenciation ostéoclastique." Nice, 2010. http://www.theses.fr/2010NICE4041.
Full textAbstract:
Le tissu osseux est renouvelé en permanence dans le but de maintenir son intégrité. Deux types cellulaires sont à la base de ce processus de remodelage : les ostéoblastes, responsables de la formation du tissu osseux, et les ostéoclastes, responsables de la résorption de celui-ci. Au cours de mon projet de thèse, je me suis principalement intéressée à l’étude des ostéoclastes. Dans la première partie de mon travail, j'ai étudié l’ostéoclastogenèse dans un modèle de culture tridimensionnelle in vitro en utilisant un biomatériau composite constitué de plasma coagulé et de microparticules de phosphate de calcium biphasé (BCP). En analysant l’expression des marqueurs de la différenciation ostéoclastique, nous avons démontré que ce biomatériau constituait un microenvironnement favorable à la différenciation des précurseurs ostéoclastiques en ostéoclastes. De plus, nous avons mis en évidence que les ostéoclastes générés au sein de ce biomatériau produisaient des facteurs chimio-attractants pour les cellules souches mésenchymateuses (MSC) précurseurs des ostéoblastes, mais aussi des facteurs impliqués dans la vascularisation. Après une étape initiale de résorption, les ostéoclastes présents au sein de ce biomatériau pourraient, comme dans le processus de remodelage osseux, favoriser la néo-vascularisation et le recrutement des précurseurs ostéoblastiques, accélérant ainsi la synthèse d’os nouveau. Des expériences sont en cours afin de tirer parti de ce biomatériau facilement manipulable, pour étudier les interactions s'établissant entre les ostéoclastes et d'autres types cellulaires impliqués dans la physiologie du tissu osseux. Dans une deuxième partie de mon travail, je me suis intéressée aux produits du gène Atp6v0a3, les protéines a3 et Tirc7. A3 est une protéine nécessaire à la fonction de résorption des ostéoclastes alors que Tirc7 est impliquée dans l'activation des lymphocytes T où elle est exprimée au niveau de la membrane plasmique. Les deux protéines présentent le même domaine C-terminal puisque la structure primaire de Tirc7 est identique à celle de a3, à l'exception des 216 premiers acides aminés situés à l'extrémité N-terminale et qui sont absents dans Tirc7. Sachant que le domaine C-terminal de Tirc7 est exprimé à l’extérieur de la cellule, et qu'il existe de multiples preuves des interactions fonctionnelles existant entre le lymphocyte T et l'ostéoclaste, nous avons émis l’hypothèse que le domaine extracellulaire de Tirc7 pouvait être physiquement impliqué dans ces interactions. En utilisant un peptide correspondant à ce domaine, nous avons démontré qu’il induisait directement la différenciation de précurseurs ostéoclastiques en cellules géantes multinucléées capables de résorption. Ces expériences nous ont permis de proposer que, en plus de la molécule Rankl, la protéine Tirc7 pourrait constituer un nouvel effecteur impliqué dans les interactions entre le lymphocyte T activé et les précurseurs ostéoclastiques. Enfin, en utilisant des cellules souches d'origine humaine, nous avons montré que le domaine C-terminal de la protéine Tirc7 exerçait aussi un effet stimulant sur la différenciation ostéoblastique et chondrocytaire, tout en inhibant la différenciation adipocytaire. Cette étude permet donc de mettre en évidence un lien existant potentiellement entre des cellules du système immunitaire exprimant le domaine C-terminal de Tirc7 à leur surface et les cellules du tissu osseuxBone tissue undergoes constant remodeling to maintain its homeostasis. Osteoclasts and osteoblasts are the two cell types responsible for this process. During my thesis, I focused primarily on the study of osteoclastogenesis. In a first part, I studied osteoclastogenesis within a 3D cell culture model using a composite biomaterial made of clotted plasma around microparticles of biphasic calcium phosphate (BCP). We demonstrated that this biomaterial provided osteoclast precursor cells with a microenvironment favoring their differentiation into osteoclasts. Moreover, we observed the production of pro-angiogenic factors, as well as the expression of SDF1, a chemoattractant molecule for mesenchymal stem cells (MSC). Together, our data suggest that, after a first step of resorption, osteoclasts present within the composite could promote vascularization and osteoblastic precursor cells recruitment, this accelerating the rate of new bone synthesis. Additional experiments are underway to study the interactions occurring within this biomaterial between osteoclasts and other cell types involved in the physiology of bone tissue. In a second part, I studied Atp6v0a3 gene products, namely a3 and Tirc7. A3 is a protein required for osteoclast functioning, and Tirc7 is involved in T lymphocyte activation. Both proteins display identical C-termini and, in activated T cells, Tirc7 C-terminal domain is express extracellularly. Considering the whole set of evidences documenting the interactions between T lymphocyte and osteoclasts, we hypothesized that Tirc7 C-terminus could be involved in cell-to-cell interactions between the two cell types. Using a peptide corresponding to the C-terminal portion of Tirc7 protein, we demonstrated that this peptide induced the differentiation of precursor cells into giant multinucleated cells capable of resorption. This experiment allowed us to propose that, in addition to Rankl, Tirc7 could constitute a novel effector involved in interactions between activated T lymphocytes and osteoclast precursor cells. Moreover, using human precursor cells, we demonstrated that the same peptide stimulated osteoblastic differentiation while adipocyte differentiation was inhibited. As a whole, these results evidenced potential interactions between immune cells expressing Tirc7 protein and bone tissue cells
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De, Iaco Rossana. "In vitro et in vivo analysis of the molecular mechanisms triggering glia specification." Strasbourg 1, 2006. http://www.theses.fr/2006STR13012.
Full textAbstract:
Chez la Drosophile, la détermination gliale est prise en charge par deux gènes homologues, glide/gcm et glide2, qui sont spécifiquement exprimés dans tous les lignages gliaux. L’expression ectopique de glide/gcm ou glide2 dans le système nerveux central (SNC), abouti à la différenciation de cellules gliales surnuméraires aux dépens des neurones. À l’inverse, la perte des deux gènes élimine toute cellule gliale, qui sont transformées en neurones. Bien que glide et glide2 soient requis pour l’induction de la gliogénèse, ces gènes ne contrôlent pas la spécification gliale car ils ont exprimé dans tous les précurseurs gliaux. En effet, la spécification gliale nécessite une étroite régulation spatiale et temporelle de la transcription de glide. Dans le but de déterminer les gènes qui contrôlent la spécification gliale, nous avons analysé le promoteur de glide in vivo et ainsi identifié des éléments régulateurs en cis spécifiques de certains lignages gliaux. Mon travail de thèse nous a permis de comprendre et d’analyser l’un des mécanismes clé de la détermination gliale versus neuronale chez la DrosophileIn Drosophila melanogaster a single locus accounts for all glial promoting activity. This locus contains two homologous genes, glide/gcm and glide2, which are specifically expressed in all glial lineages. Ectopic expression of glide/gcm or glide2 throughout the nervous system leads to the differentiation of supernumerary glial cells at the expense of neurons. Lack of both products eliminates all glial cells, which are transformed into neurons. Although glide and glide2 are necessary to induce gliogenesis, they do not control glial specification, a process that depends on when and where is glide activated. In an attempt to determine the genes that control glial specification, we have analyzed the glide promoter in vivo and have identified cis-regulatory elements specific for distinct lineages. By in vivo and in vitro analyses I defined the molecular pathway that allows glial differentiation in the NGB1-1 and the molecular role of huckebein transcription factor
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Haas, Alexis. "Évaluation in vitro des effets biologiques des ondes millimétriques sur un modèle de différenciation neuronale." Thesis, Rennes 1, 2015. http://www.theses.fr/2015REN1S131/document.
Full textAbstract:
Les ondes millimétriques (OMM), et en particulier la bande autour de 60 GHz, sont de plus en plus utilisées pour les télécommunications sans fil. Une précédentes études in vitro menée au laboratoire avait montré, par analyse de micro-puces, une diminution d’expression de l'ARN TRPV2 dans des cultures primaires de cellules de peau humaines exposés pendant 1, 6 ou 24 heures à 60,4 GHz avec une densité de puissance incidente moyenne de 1,8 mW / cm². Afin de déterminer si l'exposition aux OMM peut aussi affecter l'expression de TRPV2 au niveau protéique, nous avons effectué des immunocytochimies sur une lignée cellulaire pseudo-neuronale en cours de différenciation (PC12), exposée à 60,4 GHz pendant 24h avec une densité de puissance incidente moyenne de 10 mW/cm². De plus, l’impact des OMM sur l’expression de plusieurs autres marqueurs impliqués dans la nociception, la différenciation neuronale et le stress protéotoxique a aussi été étudié. En utilisant un système d'imagerie semi-haut débit, permettant l'étude de multiples paramètres, nous n’avons pas trouvé de différence dans l'expression protéique des récepteurs membranaires impliqués dans la nociception TRPV1, TRPV2 et P2X3, la protéine de choc thermique Hsp70, et le marqueur neuronal β3-tubuline. Cependant, une augmentation de la poussée neuritique, bien que non significative, a été observée dans les cellules exposées. Les contrôles ont montré que cette augmentation était liée à un effet thermique des OMM. En outre, l'analyse cellule par cellule a montré qu'il n'y avait aucune sous-population distincte de cellules présentant une sensibilité particulière. Enfin, des expositions à 5 mW / cm², suivies par une analyse par HPLC, ont également été effectuées afin d’étudier l'impact des OMM sur le métabolisme dopaminergique. Aucun effet de l'exposition n’a été observé sur la recapture de la dopamine. Seul un effet thermique non significatif a été trouvé sur l'accumulation du DOPAC extracellulaire. Globalement, ces résultats négatifs sont en accord avec les précédentes études in vitro qui ont évalué l'impact des ondes millimétriques sur l'expression génétique, et sont rassurantes sur le fait que l'exposition aiguë aux OMM ne peut pas perturber significativement la physiologie cellulaireMillimeter waves (MWW), in particular the 60-GHz band, are increasingly used for wireless communications. A previous in vitro study conducted by our group showed, using microarray analysis, a decrease in TRPV2 RNA expression in primary human skin cells exposed for 1, 6, or 24 h at 60.4 GHz with an average incident power density of 1.8 mW/cm². To investigate if MMW exposure can also affect TRPV2 expression at the protein level, we performed immunocytochemistry on a neuron-like differentiating cell line (PC12), exposed at 60.4 GHz during 24h with an average incident power density of 10 mW/cm². Moreover, the impact of MMW on several markers involved in nociception, neuronal differentiation and proteotoxic stress was also investigated. Using a semi-high throughput imaging system, allowing the study of multiple parameters, we did not find any difference in the protein expression of pain-related membrane receptors TRPV1, TRPV2, and P2X3, heat shock protein Hsp70, and neuronal marker β3-tubulin. However, an upward trend in neurite outgrowth, although not significant, was found in exposed cells. Controls showed that this increase was related to a thermal effect of MMW. Besides, cell-by-cell analysis showed that there is no distinct subpopulation of cells with particular sensitivity. Moreover, exposures at 5 mW/cm², followed by HPLC analysis, were also done to investigate the impact of MMW on dopaminergic metabolism. No impact of exposure on dopaminergic turnover was observed. Only an insignificant thermal effect was found on extracellular DOPAC accumulation. Altogether, those negative results are in line with previous in vitro studies which assessed the impact of MMW on genetic expression, and are reassuring in the fact that acute MMW exposure cannot dramatically disrupt cell physiology
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Marchand, Mélanie. "Différentiation in vitro des cellules embryonnaires de souris en cellules pancréatiques." Lyon, École normale supérieure (sciences), 2006. http://www.theses.fr/2006ENSL0367.
Full textAbstract:
Les cellules souches embryonnaires (cellules ES) sont des candidates prometteuses pour la thérapie cellulaire de nombreuses pathologies, dont le diabète de type I. Pour favoriser la différenciation in vitro des cellules ES en cellules pancréatiques endocrines et exocrines, nous avons développé des nouvelles stratégies reposant sur l’expression ectopique de facteurs de transcription (Pdx-1, Hlxb9, p48, Ngn-3, NeuroD1, Pax4, Isl-1, Nkx2. 2, Nkx6. 1) impliqués dans le développement du pancréas. Nous avons utilisé des vecteurs lentiviraux pour établir 12 lignées de cellules ES exprimant stablement un, deux, trois ou quatre facteurs et des vecteurs adénoviraux pour exprimer transitoirement certains facteurs dans les cellules ES en cours de différenciation. Les résultats obtenus montrent que l’expression combinée de p48 et Pdx-1 stimule la différenciation exocrine et l’expression combinée de NeuroD1 et Pax-4 stimule la différenciation endocrine in vitro des cellules ESEmbryonic stem (ES) cells are promising candidates for cell replacement therapies of various disorders including type I diabetes. Experimental strategies were developed to promote differentiation of mouse ES cells into endocrine and exocrine cells. These strategies were based on forced expression of transcription factors (Pdx-1, Hlxb9, p48, Ngn-3, NeuroD1, Pax4, Isl-1, Nkx2. 2, Nkx6. 1) expressed at different stages of pancreas development. Twelve ES cell lines stably expressing one, two, three and four transcription factors were generated by means of lentiviral vectors and adenoviral vectors were used to express factors in the course of cell differentiation. The results show that overexpression of p48 and Pdx-1 increases the exocrine differentiation and overexpression of NeuroD1 and Pax4 stimulates endocrine differentiation of ES cells
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Bloch-Gallego, Evelyne. "Développement du motoneurone embryonnaire spinal : étude de sa survie et de sa différenciation "in vitro"." Montpellier 2, 1993. http://www.theses.fr/1993MON20008.
Full textAbstract:
Nous avons etudie les facteurs de croissance influencant la survie du motoneurone spinal embryonnaire et le role potentiel de facteurs transcriptionnels sur la differenciation neuronale. Nous avons pu mettre au point une nouvelle methode de purification des motoneurones, basee sur l'expression specifique de l'antigene sc1. Par combinaison de cette technique de panning et de la technique classique de purification sur coussin de metrizamide, nous avons mis en evidence deux populations de motoneurones dont les exigences trophiques vis-a-vis de l'extrait musculaire sont differentes au stade e5. Aucun des facteurs trophiques teste - ngf, fgfb, cntf et tfg - n'a ete capable a lui seul de permettre la survie des motoneurones. Seules l'association de fgfb et de tgfb a ete en mesure de permettre leur survie avec une efficacite comparable a celle de l'extrait musculaire neonatal. Le pouvoir trophique du muscle denerve est superieur a celui du muscle innerve. Nous avons par ailleurs mis en evidence un effet d'un peptide a homeoboite, pantp, sur la croissance axonale des motoneurones. L'absence d'effet de trois peptides mutants de pantp ayant perdu leur capacite a lier l'adn laisse supposer que l'effet morphologique engendre par le peptide sauvage necessite sa liaison a des sequences genomiques specifiques, et vraisemblablement une competition avec les homeoproteines endogenes
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Le, Provost Gabrielle. "Implication de la lysyl oxydase au cours de la différenciation épidermique en modèles in vitro." Thesis, Lyon 1, 2010. http://www.theses.fr/2010LYO10107.
Full textAbstract:
La lysyl oxydase (LOX) est une enzyme extracellulaire dont le rôle canonique est de catalyser la réticulation des fibres de collagènes et de l’élastine, assurant ainsi l’intégrité des tissus conjonctifs. La LOX agit également dans plusieurs types cellulaires comme régulateur de différents processus biologiques, soulignant des fonctions à la fois extra et intracellulaires. Ces travaux de thèse ont contribué à améliorer la compréhension du rôle de LOX dans l’épiderme, et plus précisément au cours de la différenciation des kératinocytes. Le développement d’un modèle de culture en monocouche à confluence, et d’un modèle tridimensionnel d’épiderme reconstruit ont permis d’aborder l’étude de LOX au cours de l’induction du programme de différenciation des kératinocytes et du processus de différenciation terminale conduisant à la formation d’un épiderme pluristratifié, cornifié et fonctionnel. L’expression de LOX est induite au cours des premières étapes de la différenciation de kératinocytes primaires ainsi que d’une lignée de kératinocytes immortalisés. Grâce à l’établissement de lignées de kératinocytes éteignant l’expression de LOX de façon stable, nous avons mis en évidence l’implication de la protéine LOX, indépendamment de son activité enzymatique, dans la régulation des premières étapes de différenciation des kératinocytes. En absence de LOX, l’initiation du programme de différenciation est perturbée, affectant la différenciation terminale et fonctionnelle des épidermes reconstruits. Ainsi, une régulation fine de l’expression de LOX est nécessaire au déroulement normal du processus de différenciation des kératinocytes, et donc au maintien de l’homéostasie épidermiqueLysyl oxidase (LOX) is an extracellular enzyme that catalyzes the cross-linking of fibrillar collagens or elastin, thereby regulating the structural integrity of connective tissues. Moreover, LOX displays multiple roles in different cell types, acting as a regulator of various biological processes at both extra and intracellular levels. The aim of the present work was to shed light on LOX functions in the epidermis, especially during keratinocyte differentiation. The development of culture models, consisting of confluent monolayers or reconstructed-epidermis allowed us to study LOX functions during the induction of the differentiation program, and furthermore during the terminal differentiation process leading to the formation of a pluristratified, cornified and functional epidermis. LOX expression is induced at the onset of the commitment to differentiation, both in primary and immortalized keratinocytes. Stable silencing of LOX expression affects the induction of the differentiation program and strongly impairs terminal and functional epidermal differentiation in reconstructed-epidermis. Therefore, LOX protein acts during the first steps of keratinocyte differentiation, independently of its enzymatic activity, and is implied for subsequent commitment into terminal differentiation. Taken together, these results suggest that a finely regulated expression of LOX is required for normal keratinocyte differentiation, and thus for maintenance of epidermal
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Mitais, Nathalie. "SCO-spondine : rôle dans la survie et la différenciation cellulaire in vitro et in vivo." Clermont-Ferrand 1, 2008. http://www.theses.fr/2008CLF1MM03.
Full textAbstract:
La SCO-spondine est une glycoprotéine de grande taille qui est sécrétée par l'organe sous commissural. Elle comprend de nombreux domaines dont 26 motifs thrombospondin type 1 repeats (TSR) et appartient à la superfamille des protéines à motifs TSR. Certaines des protéines de cette famille sont exprimées dans le système nerveux central comme la thrombospondine 1 et la F-spondine. Ces protéines jouent un rôle dans le guidage axonal et la migration cellulaire pendant le développement du SNC et elles sont capables d'induire une synaptogenèse. En utilisant un peptide de séquence connu et dérivé des acides aminés les plus conservés des domaines TSR de la SCO-spondine, nous en avons étudiés les effets sur la différenciation neuronale et sur les phénomènes de survie/apoptose sur des modèles in vitro (modèle de cellules B104, modèle de cultures primaires de neurones corticaux d'embryon de rat et modèle de culture primaire d'hépatocytes de rat) et in vivo (modèle de section de nerf olfactif chez le poussin) par différentes techniques de biologie cellulaire et de biologie moléculaire. Le peptide est capable d'induire une différenciation des cellules nerveuses qu'elles soient issues de la lignée des cellules B104 ou de cultures primaires de neurones corticaux ainsi qu'une synaptogenèse dans les cultures de cellules B104. Le peptide TSR ne présente pas de toxicité pour des cultures d'hépatocytes de rat et possède aussi un effet neuroprotecteur pour les cellules de l'épithélium olfactif dans le modèle d'apoptose induite par lésion du nerf olfactif chez le poussin. De part ces propriétés neuroréparatrice et neuroprotectrice, ce peptide présente un intérêt pour un futur développement cliniqueSCO-spondin is a large glycoprotein secreted by the subcommissural organ. This protein contains various domains including 26 thrombospondin type 1 repeats (TSR) and belongs to the superfamily of proteins with TSR domains. Some proteins of this superfamily like thrombospondin-1 or F-spondin expressed in the CNS have been shown to play a role in axonal pathfinding and cell migration during the CNS development and they can induce synaptogenesis. Using a TSR peptide derived from the most highly conserved amino acids of SCO-spondin TSR domains, we investigated its effect on neuronal differentiation and survey/apoptosis balance on in vitro models (B104 cells, primary cultures of cortical neurons, hepatocytes) and in vivo models (lesion of chicken olfactory nerve) using cellular and molecular biology methods. TSR peptide induces differentiation ans synaptogenesis in B104 cells cultures and primary cultures of cortical neurons. TSR peptide has no toxicity on primary cultures of hepatocytes and has also a neuroprotective effect on cells of olfactory epithelium after olfactory nerve section. Regarding these neuroregenerative and neuroprotective capacities, TSR peptide derived from SCO-spondin could be a useful tool in treatment of neurodegenerative diseases or CNS traumas after clinical development
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Labalette, Myriam. "La dynamique des lymphocytes T CD8+ humains du compartiment lymphocytaire périphérique : de l'in-vivo, l'infection à cytomégalovirus chez les receveurs d'organes, à l'in-vitro, la différenciation des cellules T CD8+CD28+ nai͏̈ves." Lille 2, 2000. http://www.theses.fr/2000LIL2MT12.
Full text
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Ahdjoudj, Souhila. "Différenciation des cellules stromales osseuses pluripotentes : régulation in vitro et dans un modèle d'ostéopénie in vivo." Paris 7, 2001. http://www.theses.fr/2001PA077161.
Full text
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La, Porte Sabine de. "Etude in vitro des interactions neurone-muscle dans la différenciation de la jonction neuromusculaire des mammifères." Bordeaux 2, 1989. http://www.theses.fr/1989BOR22013.
Full textAbstract:
Les cellules presynaptiques liberent des facteurs susceptibles d'influencer la synthese par la cellule musculaire de molecules de la lame basale. L'activite de l'acetylcholinesterase (ache) semble etre modulee par des variations du taux de ca#+ libre. Le taux de l'ache et le nombre de sites recepteurs a l'acetylcholine sont regules par des mecanismes differents l'ache est synthetise par les cellules musculaires. Le role du mononeurone serait de concentrer les molecules d'enzyme au site synaptique: l'addition de cellules de moelle epiniere a des cellules musculaires en culture ne modifie ni le taux, ni la repartition intra et extra cellulaire de l'ache et de ses differentes formes moleculaires
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Villeval, Jean-Luc. "Étude cellulaire des temps précoces de l'érythropoièse humaine normale et leucémique : phénotype et régulation "in vitro"." Paris 12, 1987. http://www.theses.fr/1987PA120019.
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Laborit, Labrada Beisy. "Inhibition of dedifferentiation in primary mouse hepatocytes in vitro to generate a functional hepatic study model." Master's thesis, Université Laval, 2021. http://hdl.handle.net/20.500.11794/69373.
Full textAbstract:
L'obésité et ses pathologies associées telles que la résistance à l'insuline, le diabète de type 2 et la stéatose hépatique non-alcoolique deviennent des enjeux de santé publique. Le foie est un organe majeur dans le contrôle de l'homéostasie du glucose corporel. À l'heure actuelle, les modèles de lignées cellulaires d'hépatome sont les principaux modèles d'étude in vitro disponibles pour approfondir la physiologie hépatique. Malheureusement, l'expression et les fonctions des protéines dans ces cellules diffèrent de la réalité in vivo. Les hépatocytes primaires représentent une plateforme attractive dans l'étude des maladies métaboliques car ils conservent la plupart des fonctions hépatiques in vivo. Une limitation fondamentale de la culture des hépatocytes primaires de souris correspond au déclin métabolique après leur isolement. En quelques jours, les cellules primaires se dédifférencient en une lignée cellulaire inférieure entraînant une perte des fonctions spécifiques et une modification de l'expression des gènes. Avec ce projet, nous avons étudié les hépatocytes primaires de souris en culture en présence de petites molécules modulant des voies spécifiques liées à la transition épithéliale à mésenchymateuse, un processus conduisant à la dédifférenciation dans les hépatocytes primaires isolés de souris. Nous avons constaté que des petits inhibiteurs chimiques du remodelage du cytosquelette préservaient partiellement l'expression de certains marqueurs hépatiques et épithéliaux tels que l'albumine, la Zonula-1 et l'occludine. De plus, nos résultats ont révélé que les hépatocytes primaires de souris en culture perdaient la réponse à l'insuline mais maintenaient la réponse au glucagon sur la gluconéogenèse bien que les valeurs soient beaucoup plus faibles après 7 jours de culture par rapport au jour 1. L'ensemble de nos résultats suggèrent que la réduction mécanique de la tension via l'inhibition du remodelage du cytosquelette pourrait être une voie à suivre pour générer un modèle in vitro fonctionnel d'hépatocytes primaires de souris à long-terme dans l'étude des maladies métaboliques.Obesity and its related pathologies insulin resistance, type 2 Diabetes and non-alcoholic fatty liver disease are becoming one of the major health hazards of modern world. The liver is a major organ in the control of body glucose homeostasis. Nowadays, hepatoma cell lines are in vitro study models available to further study liver physiology. Unfortunately, protein expression and functions in these cells differ from the in vivo reality. Primary hepatocytes are an attractive platform in the study of metabolic diseases because they retain most in vivo hepatic functions. A fundamental limitation of the culture of primary mouse hepatocytes is the metabolic decline taking place after isolation in these cells. Within few days isolated primary cells dedifferentiate into an inferior cell lineage losing specific functions and changing gene expression. Here, we studied primary mouse hepatocytes in culture in the presence of small molecules that modulate specific pathways related to epithelial to mesenchymal transition, a process leading to dedifferentiation in isolated primary mouse hepatocytes. We found that small chemical inhibitors of cytoskeletal changes partially preserved the expression of some hepatic and epithelial markers such as albumin, Zonula-1 and occludin. Furthermore, our results revealed that primary mouse hepatocytes in culture lost the response to insulin but maintained the response to glucagon on gluconeogenesis although the values decreased after 7 days in culture compared to day 1. Taken together, our results suggest that reducing mechanical tension by inhibiting cytoskeletal remodeling could be a way to follow to generate a functional in vitro model of long-term primary mouse hepatocytes to study metabolic diseases.
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Montiel, Grégory. "Etude fonctionnelle des facteurs de transcription AGL12 et CrMYC2 dans les processus de différenciation morphologique et de différenciation métabolique de racines et de cellules végétales cultivées in vitro." Tours, 2003. http://www.theses.fr/2003TOUR4008.
Full textAbstract:
Ce travail de thèse a consisté à étudier les rôles joués par les facteurs de transcription AGL12 et CrMYC2 dans les processus de différenciation morphologique et/ou métabolique au niveau d'embryons somatiques de noyer et de suspensions cellulaires de Catharanthus roseus. L'expression du gène Agl12 d'Arabidospis thaliana stimule le développement des racines des embryons somatiques de noyer. Les cellules de C. Roseus exprimant Agl12 permet s'organisent en pseudo-tissu et synthétisent de l'ajmalicine. Ces résultats assignent un rôle important à AGL12 lors de la différenciation racinaire. CrMYC2 est capable d'interagir avec la G-box du promoteur du gène Str, et est rapidement et transitoirement induit dans des cellules de C. Roseus en réponse à un eliciteur fongique et au méthyl jasmonate. La sur-expression de CrMYC2 dans les suspensions cellulaires n'a pas d'effet sur la régulation de l'expression du gène Str, mais semble avoir un effet inhibiteur sur l'expression des gènes Dxs et ChsThe goal of this work was to characterize the roles of two transcription factors (AGL12 and CrMYC2) during the morphological and metabolic differentiation occuring in walnut somatic embryos and Catharanthus roseus cell suspensions. Overexpression of the Agl12 gene from Arabidopsis thaliana enhances the rooting abilities of walnut somatic embryos. C. Roseus transgenic cells expressing this gene are grouped in globular body and biosynthetize ajmalicine. Taken together, these results suggest that AGL12 plays an important role in root differentiation processes. The CrMYC2 transcription factor, which interact with the G-box localized within the Str gene promoter, is rapidly and transiently induced in C. Roseus cells in response to a treatment with a fungal elicitor or methyl jasmonate. The expression of CrMYC2 in transgenic cells has no significant impact on the regulation of the Str gene expression but seems to have an inhibitory effect on the expression of the Dxs and Chs
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Tremblay, Rochette Josiane. "Une niche pour la différenciation : La réponse in vitro des lymphocytes B à mémoire aux cytokines de leur environnement." Thesis, Université Laval, 2011. http://www.theses.ulaval.ca/2011/28343/28343.pdf.
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Pandrau, Dominique. "Étude de la prolifération et de la différenciation in vitro des précurseurs leucémiques lymphoïdes B de l'enfant." Lyon 1, 1993. http://www.theses.fr/1993LYO1T056.
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Sérandour, Aurélien. "Dynamique de méthylation et d’hydroxyméthylation de l’ADN des enhancers au cours de la différenciation cellulaire in vitro." Rennes 1, 2011. http://www.theses.fr/2011REN1S074.
Full textAbstract:
Le transcriptome et le positionnement cis-tridimensionnel des domaines chromatiniens subissent conjointement des modifications profondes lors de la différenciation et de la reprogrammation cellulaire. Dans les cellules souches embryonnaires, des facteurs de transcription maîtres comme Pou5f1/Oct4, Nanog, Sox2 et Klf4 sont responsables d’un réseau de régulation qui va architecturer une chromatine aux propriétés pluripotentes. Au cours de la différenciation, cette chromatine peut être modifiée de manière spécifique à chaque destinée cellulaire, afin de spécialiser et de restreindre le répertoire de gènes exprimés. Ce processus va notamment mettre en jeu l’activation d’enhancers liés par des facteurs de transcription exprimés de novo. Par des méthodes de cartographies épigénomiques dans différentes lignées cellulaires, nous avons observé que l’ADN des enhancers actifs est hypométhylé et que la différenciation cellulaire in vitro s’accompagne d’une hydroxyméthylation de novo de certains enhancers activésTranscriptome and cis-tridimensional positioning of chromatin domains undergo deep modifications during cell differentiation and reprogramming. In embryonic stem cells, master genes such as Pou5f1/Oct4, Nanog, Sox2 and Klf4 are implicated in a regulatory network which builds a pluripotent chromatin. This chromatin can be modified in a cell fate-specific manner during differentiation, allowing specialization and restriction of gene expression patterns. Specific enhancers bound by de novo expressed transcription factors become activated during this process. Using epigenomic mapping technologies in different cell lines, we observed that DNA of active enhancers is hypomethylated and that DNA of activated enhancers can be de novo hydroxymethylated during in vitro cell differentiation
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Villars, Franck. "Etude in vitro du rôle des cellules endothéliales humaines dans la différenciation ostéoblastique : modèle de coopération cellulaire." Bordeaux 2, 2000. http://www.theses.fr/2000BOR28765.
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Ribeiro-Fleury, Tatiana. "Evaluation in vitro de la fonction hématopoïétique des cellules souches mésenchymateuses médullaires au cours de leur différenciation." Thesis, Tours, 2010. http://www.theses.fr/2010TOUR3305/document.
Full textAbstract:
Les cellules sanguines proviennent d’une cellule souche hématopoïétique (CSE), présente dans la moelle osseuse chez l’homme adulte, qui nécessite d’être en contact étroit avec une zone particulière du microenvironnement médullaire (appelée niche hématopoïétique) pour sa différenciation et son autorenouvellement. La nature exacte des cellules qui composent cette niche (appelée cellules stromales) n’est pas encore bien connue, en particulier concernant sa relation avec les cellules souches mésenchymateuses (CSM). Le but de cette thèse a été d’étudier le rôle des CSM dans la régulation de l’hématopoïèse en fonction de leur type et leur stade de différenciation mésenchymateuse et d’évaluer leur rôle dans la migration des progéniteurs hématopoïétique (PH). Nous montrons que les CSM non différenciées possèdent la capacité de soutien de l’hématopoïèse primitive la plus importante (par culture à long terme pendant 5 semaines) et que cette capacité est rapidement perdue dès 3 jours de différenciation adipogénique, otéogénique et vasculaire musculaire lisse. Par ailleurs, nous montrons que le G-CSP agit directement sur les CSM pour augmenter la migration des CSH/PH hors de la niche (par un test de migration trans-stromale) via un mécanisme MMP-2 dépendantBlood cells arise from a hematopoietic stem cell (HSC), present into bone marrow (3M) in adult humans, which needs close contacts with a special zone of 3M micro environment (named hematopoietic niche) for its differentiation and self’-renewal. The precise nature of the niche-forming cells (named stromale cells) are not yet well known, particularly in their relationship with mesenchymal stem cells (MSCs). The aim of the study was to investigate further the role of the MSCs in the hematopoiesis control according to their differentiation pathway and state and to evaluate their role in the migration process of hematopoietic progenitor cells (HPÇ,[ We show that non-differentiated MSCs display the best hematopoietic supporting activity (using 5-week long term cultures) that is completely lost after in vitro differentiation into adipocytes, osteoblasts and vascular smooth muscle cells. In addition, we show that G-CSP stimulation of 3M MSCs promotes HSC/HPC migration (using trans-stromal migration assay) via a MMP-2-dependent mechanism
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Sindikubwabo, Fabien. "Réseau régulatoire de HDAC3 pour comprendre les mécanismes de différenciation et de pathogenèse de Toxoplasma gondii." Thesis, Université Grenoble Alpes (ComUE), 2017. http://www.theses.fr/2017GREAV047/document.
Full textAbstract:
Apicomplexan parasites are leading causes of human and livestock diseases such as toxoplasmosis and malaria caused by Toxoplasma gondii and Plasmodium falciparum respectively. These organisms are varied in their morphologies and astoundingly complex on their life cycles that include infections of more than one host organism, differentiation through several morphologically distinct forms, and both sexual and asexual replication. What we and others have initially proposed was that the control of gene expression and cellular differentiation are particularly interesting in these organisms, as the apparent lack of large families of recognizable transcription factors typically found in other eukaryotic organisms suggests that they may be unusually reliant on epigenetic mechanisms. The initial hypothesis had to be re-assessed in light of the discovery in Apicomplexa of an expanded family of plant-like transcription factors (TFs) harbouring APETALA2 (AP2)-like domains. Yet, a growing body of evidence tends to favor epigenetic as one of the main contributor to parasite developmental programs and adjustments to fluctuant environment. One way to examine dynamic changes in post-translations modifications (PTMs) patterns is to alter the histone code writing. We therefore took advantage of HDAC inhibitors and showed that specific inhibition of TgHDAC3 by the cyclopeptide FR235222 disrupts the genome wide steady-state level of histone H4 acetylation inducing derepression of stage-specific genes. Yet, many questions about TgHDAC3 modus operandi remain unanswered. During my thesis, I uncovered the TgHDAC3-regulated proteome-wide acetylome typified by the presence of non-histone proteins including AP2 TFs and novel PTMs, e.g. the acetylation at Lys31 within the globular domain of histone H4. H4K31ac promotes a relaxed chromatin state at the promoter of active genes through nucleosome disassembly in both parasites. We identified TgGCN5B and TgHDAC3 as two antagonist enzymes regulating H4K31 acetylation in T. gondii. In contrast, H4K31monomethylation is enriched throughout the gene body of T. gondii active genes and contributes to transcription, whereas it is enriched at transcriptionally inactive pericentromeric heterochromatin regions in P. falciparum, a region that is lacking H3K9me3 and heterochromatin protein 1 in this parasite. We also showed that treating T. gondii cystogenic strains with a low dose of FR235222 induces the levels of proteins known to be expressed exclusively in cat (sporozoite and merozoite) or in murine chronic stage (bradyzoite). Lastly, we determined the specific interactome of TgHDAC3 and found as partners a MORC protein (CR230), several AP2 TFs, and ELM2 domain-containing scaffolding proteins. Collectively, these data established TgHDAC3 family as a central regulator of gene expression and stage conversion in T. gondii and, likely, other ApicomplexaApicomplexan genome architecture is typified by a binary chromatin structure, with a major fraction of the bulk genome packaged as transcriptionally permissive euchromatin while few loci are embedded in silenced heterochromatin. There is evidence that histone modifications occurring at the lateral surface of the nucleosome play a substantial role in shaping chromatin structure, yet our understanding of the exact mechanism of action is poor. Here, we address how versatile modifications at Lys31 within the globular domain of histone H4 contribute to genome organization and expression in Apicomplexa. H4K31 acetylation was found at the promoter of active genes. The residue lies where the DNA wraps around the histone and its acetylation may enhance nucleosome disassembly, thereby favoring a more relaxed, open chromatin state. This residue tends also to be monomethylated and depending of the parasite examined different patterns were found. H4K31me1 was enriched in the core body of Toxoplasma active genes, yet its occupancy was inversely correlated with transcripts levels likely because the mark by reducing histone turnover impedes RNA polymerase progression across transcribed units. In contrast to the methylation of H3, it is the first time that a methylated residue of H4 has been clearly associated with transcriptional regulation. In Plasmodium, H4K31me1 was exclusively enriched at transcriptionally inactive genomic regions and peculiarly at pericentromeric heterochromatin, likely to replace the missing H3K9me3 that commonly decorated pericentric nucleosomes in other species
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Fatih, Nadia. "Caractérisation in vitro de régulateurs de l'expression de l'hepcidine dans un modèle d'hépatocytes de souris différenciés." Rennes 1, 2010. http://www.theses.fr/2010REN1S008.
Full textAbstract:
Le fer est un élément essentiel. L’hepcidine, protéine sécrétée par les hépatocytes, joue un rôle prépondérant dans la régulation des sources de fer. Une expression altérée de l’hepcidine est souvent à l’origine de pathologies du métabolisme du fer. Le but de ce travail a été d’étudier les mécanismes qui contrôlent l’expression de l’hepcidine, ce qui permettra une meilleure prise en charge des patients atteints des pathologies liées à une expression anormale d’hepcidine. Nous avons développé un modèle de coculture qui permet un maintien des fonctions hépatocytaires différenciées. Nos résultats mettent en exergue le rôle de la voie STAT3 dans le contrôle de l’expression de l’hepcidine. L’impact négatif d’inhibiteurs de STAT3 sur l’expression de l’hepcidine, que nous avons mis en évidence, doit conduire à examiner leur intérêt potentiel dans le traitement des hyperhepcidinémies. Le modèle de coculture a permis de préciser la place d’Atoh8 dans la régulation de l’expression de l’hepcidine. ATOH8 pourrait être un répresseur de l’expression de l’hepcidine et sa régulation impliquerait les voies de signalisation BMP/SMAD et IL6/STAT3Iron is essential. Hepcidin, a protein synthesized by hepatocytes, plays a predominant role in regulation of iron origins. An altered hepcidin expression often causes iron metabolism diseases. The aim of this work was to study mechanisms that control hepcidin expression, in order to permit an improvement in the follow up of patients with abnormal hepcidin expression. We developed a coculture model which permits maintenance of hepatocyte differentiated functions. Our results highlight the role of STAT3 pathway in the control of hepcidin expression. We showed the impact of STAT3 inhibitors on hepcidin expression and it should lead to study their potential benefit in the treatment of hyperhepcidinemias. Our coculture model allowed us to analyse Atoh8 biological role in hepcidin regulation. ATOH8 could be a repressor of hepcidin expression and its regulation could involve BMP/SMAD and IL6/STAT3 pathways
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Mainzer, Carine. "Implication de l'IGF-1R dans la différenciation épidermique et le vieillissement." Phd thesis, Université Claude Bernard - Lyon I, 2014. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-01064069.
Full textAbstract:
Le récepteur à l'IGF1 (IGF-1R) ainsi que ses voies de régulation sous-jacentes ont été largement étudié pour leur importance au cours du développement et leur rôle mitotique sur divers types cellulaires. A l'échelle de la peau, l'IGF-1R contribue à l'homéostasie épidermique et est souvent associé au compartiment basal pour son effet pro-prolifératif. Très peu d'études ont montré son implication au niveau de la différenciation épidermique et celles-ci présentent des résultats contradictoires. Au cours du vieillissement, la peau s'amincit et la barrière épidermique présente des défauts de perméabilité. Parallèlement, l'activité de l'IGF- 1R, maximale à l'adolescence, diminue avec l'âge. Cette étude a contribué à éclaircir le rôle de l'IGF-1R sur la différenciation épidermique et à montrer un lien entre vieillissement, perte en qualité de la peau et diminution d'activité de l'IGF-1R. L'élaboration de modèles 2D et 3D mimant le vieillissement par diminution d'activité de l'IGF-1R, nous a permis de confirmer le rôle mitotique de l'IGF-1R sur les kératinocytes et les progéniteurs et de démontrer son effet régulateur sur la différenciation épidermique par augmentation ou diminution de ces marqueurs. L'IGF-1R renforce l'adhésion cellulaire sur différentes matrices, impliquant de possibles interactions avec les intégrines α6 et β1. Ces résultats ont été corrélés aux observations de biopsies de peaux jeunes et âgées. Nous avons aussi montré que l'IGF-1R conférait un état sénescent aux cellules soumises à de fortes doses d'H2O2. Ces travaux montrent ainsi que l'IGF-1R est nécessaire pour le processus de différenciation épidermique et pour en assurer sa protection face au stress oxydant
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Ponzio, Louis. "Plasmodium falciparum en culture : incidence sur la parasitémie de l'enrichissement in vitro de la membrane érythrocytaire en cholestérol et en bande 3." Toulouse 3, 1994. http://www.theses.fr/1994TOU30045.
Full textAbstract:
Les mecanismes de l'endocytose, phenomene actif impliquant l'interaction de structures parietales de l'hematie hote et du plasmodium parasite sont encore tres imparfaitement elucides. Cette recherche se propose de preciser le role de deux constituants de la membrane erythrocytaire: le cholesterol et les dimeres proteiques de la bande 3, dans l'endocytose plasmodiale. Pour cela, des hematies humaines ont ete enrichies en cholesterol par le biais de liposomes jusqu'a atteindre un enrichissement effectif (evalue par la methode de liebermann) de 28%, a la limite de l'hemolyse. La bande 3 a ete purifiee a partir de membranes erythrocytaires, d'abord par chromatographie sur resine echangeuse d'ions, puis d'apres une methode utilisant une colonne de thiol-sepharose. La paroi des erythrocytes a ete enrichie en bande 3 en utilisant des liposomes multilamellaires de phosphatidylcholine. Les hematies ainsi modifiees et enrichies, soit en cholesterol, soit en bande 3, ont servi de substrat pour la culture de p. Falciparum selon la methode de trager et jensen. Cette culture in vitro des formes de la schizogonie intra-erythrocytaire de p; falciparum souche sge 1 et l'evaluation des parasitemies observees dans les differentes conditions de l'experimentation, ont permis une evaluation chiffree des resultats. Ceux-ci demontrent que la teneur en cholesterol n'influence en aucune facon l'endocytose de p. Falciparum contrairement aux conclusions de breuer. Pour la bande 3, ils suggerent qu'elle intervient effectivement dans le processus d'invasion car dans les diverses conditions realisees au cours de l'experimentation, des variations considerables de la parasitemie ont ete relevees en fonction du niveau d'enrichissement des erythrocytes servant de substrat a la culture et des conditions du contact globule rouge-liposome (conditions d'incubation)
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Caliaro, Marie-Josée. "Contrôle de la prolifération cellulaire d'adénocarcinomes ovariens, in vitro, par l'acide tout trans rétinoi͏̈que : intérêt potentiel de son association avec le cisplatine, en thérapeutique." Toulouse 3, 1996. http://www.theses.fr/1996TOU30102.
Full text
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Benhaddou, Ataaillah. "Study of the role of transcription factor TEAD4 in the control of myogenic differentiation of C2C12 myoblastes in vitro." Strasbourg, 2010. https://publication-theses.unistra.fr/public/theses_doctorat/2010/BENHADDOU_Ataaillah_2010.pdf.
Full textAbstract:
La famille de facteurs de transcription TEF/TEAD joue un rôle important dans les maladies impliquant l’hypertrophie et l’arythmie cardiaque. TEAD4/TEF3 est fortement et spécifiquement exprimé dans le muscle squelettique lors du développement et est une cible des facteurs de transcription MyoD et Myogenin qui induisent son expression lors de la différenciation des myoblastes C2C12 in vitro. Afin de comprendre le rôle de TEF3 dans la différenciation des cellules C2C12 , nous avons généré des lignées où l’expression de TEAD4 est fortement diminuée par l’expression stable d’un short hairpin RNA (shRNA). La perte de fonction de TEAD4 provoque un défaut de différenciation caractérisé par la présence de myotubes bien plus courts dans les cellules exprimant le shRNA. TEAD4 joue un rôle important dans la fusion des myoblastes pour former des myotubes. Des expériences d’immunoprécipitation de la chromatine (ChIP) couplée à l'hybridation à des puces à ADN (ChIP-chip) ont montré que TEAD4 occupe les promoteurs de plus de 800 gènes, notamment ceux de Myod1 et Myogenin, des microRNAs spécifiques du muscle squelettique tel que mir-206, mir-1 et mir-133a et un ensembles de gènes structuraux impliqués dans la formation de fibres contractiles et les sarcomères. Des expériences de RT-qPCR et des immunoblots à partir des cellules exprimant le shRNA contre TEAD4 ou un shRNA contrôle montrent que TEAD4 est nécessaire à l’expression de Myogenin lors de la différenciation. De plus, TEAD4 régule l’expression de la Dysferlin et de mir-206 qui ont été impliqués récemment dans le control de la fusion des myoblastes ainsi que Caveolin3 et Calpain1, des marqueurs de fusion des moyoblastesThe TEF / TEAD family of transcription factors play important roles in diseases involving hypertrophy and cardiac arrhythmia. TEAD4/TEF3 is highly and specifically expressed in skeletal muscle during development and is a target of MyoD and Myogenin transcription factors that induce its expression during C2C12 myoblasts differentiation in vitro. To understand the role of TEF3 in differentiating C2C12 cells, we generated strains in which TEAD4 expression is greatly diminished by stable expression of short hairpin RNA (shRNA). TEAD4 loss of function causes a differentiation defect characterized by the presence of myotubes much shorter in cells expressing the shRNA than in control cells. TEAD4 plays an important role in the myoblasts fusion to form myotubes. Chromatin immunoprecipitation (ChIP) experiments coupled with hybridization to DNA microarrays (ChIP-chip) whowed that TEAD4 occupies the promoters of more than 800 genes, including those of MyoD1 and Myogenin, muscle specific microRNAs like mir-206, mir-1 ,mir-133a and a sets of structural genes involved in the formation of contractile fiber and sarcomeres. To determine whether TEAD4 regulates the expression of these target genes we carried out RT-qPCR and westernoblots experiments from cells expressing shRNA control or shRNA against TEAD4. Our results show that TEAD4 is necessary for the expression of Myogenin during C2C12 differentiation. In addition, TEAD4 regulates the expression of dysferlin and mir-206 that have recently been involved in the control of myoblast fusion and Caveolin3 and Calpain1, the markers of moyoblasts fusion
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Jebeniani, Imen. "Etude in vitro et in vivo d'une cardiomyopathie secondaire à une laminopathie." Thesis, Aix-Marseille, 2017. http://www.theses.fr/2017AIXM0025.
Full textAbstract:
La mutation LMNA H222P est responsable de dystrophie musculaire d’Emery Dreifuss autosomale dominante (DMED-AD). Les patients atteints de DMED-AD souffrent d’une dystrophie musculaire et de cardiomyopathie dilatée. Les mécanismes moléculaires impliqués dans cette pathologie sont encore peu connus. Dans mes travaux de thèse, je me suis servie de cellules souches pluripotentes murines ainsi que de souris portant la mutation LMNA H222P afin d’étudier une approche thérapeutique potentielle. L'échocardiographie des souris LMNA H222P in utero révèle une dilatation des cœurs embryonnaires dès E13.5, ce qui indique une origine développementale de la maladie. La différenciation cardiaque des cellules souches pluripotentes murines est altérée dès le stade mésoderme. Aussi, les niveaux d’expression de Mesp1, snail1 et twist, gènes impliqués dans la transition épithélio-mésenchymateuse (TEM) sont diminués dans les cellules mutées en comparaison avec les cellules sauvages en cours de différenciation. L'immunoprécipitation de la chromatine dans les cellules différenciées révèle une diminution spécifique de la marque d'histone H3K4me1 sur des régions régulatrices de Mesp1 et Twist. L'inhibition de LSD1, une déméthylase spécifique de H3K4me1 rétablit le taux de la marque H3K4me1 sur les régions génomiques étudiées dans les cellules mutées. De plus, la baisse de LSD1 améliore la contraction des cardiomyocytes différenciés obtenus à partir des cellules souches embryonnaires portant la mutation LMNA H222P. L'inhibiteur de LSD1, utilisé dans les essais cliniques en cancérologie, pourrait être une molécule thérapeutique potentielle pour le traitement des laminopathies à phénotype cardiaqueThe LMNA H222P missense mutation in autosomal dominant Emery-Dreifuss muscular dystrophy patients is responsible for a muscular dystrophy and dilated cardiomyopathy. The molecular mechanisms underlying the origin and development of the pathology are still unknown. Herein, we used mouse pluripotent stem cells as well as a mutant mouse, all harboring the LMNA H222P mutation, to investigate potential therapeutic approaches. Echocardiography of LMNA H222P mice in utero revealed dilatation of heart as early as E13.5, pointing to a developmental origin of the disease. Cardiac differentiation of mouse pluripotent stem cells was impaired as early as the mesodermal stage. Expression of Mesp1, a mesodermal cardiogenic gene as well as snail1 and twist, involved in epithelial-mesenchymal transition (EMT) of epiblast cells, was decreased in mutated cells when compared to wild type in the course of differentiation. In turn, cardiomyocyte differentiation was impaired. Chromatin immunoprecipitation assays of the H3K4me1 epigenetic mark in differentiating cells revealed a specific decrease of this histone mark on regulatory regions of MesP1 and Twist. Downregulation or inhibition of LSD1, that specifically demethylates H3K4me1, rescued the epigenetic landscape in mutated cells. In turn downregulation of LSD1 rescued contraction in cardiomyocytes differentiated from LMNA H222P pluripotent stem cells. Our data point to LSD1 inhibitor, used in clinical trials in cancerology, as potential therapeutic molecule for laminopathies with a cardiac phenotype
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Fecteau, Jessie-Farah. "Étude comparative de la réponse des lymphocytes B humains naïfs et mémoires in vitro." Thesis, Université Laval, 2007. http://www.theses.ulaval.ca/2007/24431/24431.pdf.
Full textAbstract:
L’immunité humorale, que les lymphocytes B chapeautent via la production d’anticorps, fournit à l’organisme des armes solubles et spécifiques permettant de combattre une infection en cours, et d’en conserver une mémoire immunologique. Traditionnellement, on associe la réponse des lymphocytes B naïfs à la première apparition d’un antigène et celle des cellules mémoires à l’apparition subséquente d’un antigène déjà rencontré. Ces deux sous-populations, pouvant être distinguées par l’expression différentielle de la molécule CD27, circulent simultanément en périphérie chez l’humain. Au cours de ce projet de doctorat, la réponse in vitro des lymphocytes B naïfs (CD27) et mémoires (CD27+) isolés du sang a été étudiée, dans un système exploitant l’interaction CD40-CD154, normalement médiée par les lymphocytes T, en présence de facteurs solubles. Cette étude a mis en évidence la réponse distincte des cellules naïves et mémoires lorsque stimulées séparément, reflétant la disparité de leurs besoins. La comparaison de leur stimulation simultanée ou séparée a mis au jour une possible interaction entre les cellules B naïves et mémoires, suggérant une vision nouvelle de l’initiation de la réponse primaire in vivo. De plus, cette étude a permis l’identification d’une sous-population de cellules mémoires distinctes en périphérie, au phénotype CD27-IgG+, remettant en question l’utilisation du CD27 comme marqueur de cellules B mémoires chez l’humain. La comparaison des populations stimulées suggère qu’un rôle régulateur pourrait être associé à ces cellules mémoires, pouvant contribuer à contenir la réponse des cellules naïves une fois l’infection prise en charge. En bout de ligne, ce projet a permis de modéliser la réponse humorale primaire et secondaire en tenant compte de cette nouvelle sous-population mémoire, ainsi que des interactions entre cellules B pouvant intervenir in vivo.Humoral immunity, managed by B lymphocytes and their antibody production, provides to the body soluble and specific weapons to clear current infections and to preserve an immunological memory. Traditionally, naive B cell response is associated with the first encounter with an antigen, while memory cell response is related to its subsequent appearance. Both populations, circulating in human peripheral blood, can be distinguished by the differential expression of the CD27 molecule. During this project, the in vitro response of peripheral naive (CD27) and memory B cells (CD27+) was studied, in a system exploiting CD40-CD154 interaction, normally provided by T cells, in the presence of soluble factors. This study highlighted a distinct response from naive and memory cells when separately stimulated, reflecting their different requirements. Comparison between their stimulation, together and separately, also underlined possible B-B cell interactions, suggesting a new vision of primary response initiation in vivo. Furthermore, this study conducted to the identification of a distinct memory cell subset in periphery, displaying a CD27IgG+ phenotype, which questions the use of CD27 as a memory B cell marker in humans. A potential regulatory role has also been suggested for the CD27-IgG+ memory subset, presumably aimed to suppress naive cell response once the infection is controlled. Overall, this project supports the elaboration of a model for primary and secondary humoral responses, taking into account the new memory subset identified and the interactions among B cells that likely occur in vivo.
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Itoua, Maïga Rayelle. "Étude de la différenciation in vitro de lymphocytes B humains en plasmocytes. Microenvironnement et caractérisation des plasmocytes générés." Thesis, Université Laval, 2013. http://www.theses.ulaval.ca/2013/30140/30140.pdf.
Full textAbstract:
Les plasmocytes, cellules responsables de la sécrétion d’anticorps, sont au cœur de la réaction immunitaire humorale. Cette caractéristique en fait des cellules intéressantes en thérapie cellulaire pour offrir une protection humorale aux patients immunosupprimés suite à une transplantation de cellules souches hématopoïétiques. Afin d’obtenir ces cellules, notre équipe à Héma-Québec propose d’utiliser la capacité de différenciation des lymphocytes B mémoires in vitro. Notre hypothèse est qu’il serait possible de différencier ces derniers en contrôlant leur microenvironnement de culture. Ce projet porte donc sur l’étude de l’interaction cellulaire CD27-CD70 combinée aux facteurs de survie APRIL et CXCL12. Les résultats montrent que cette interaction induit une différenciation rapide des lymphocytes B tandis que l’addition des facteurs solubles n’a pas d’impact sur la survie cellulaire. De plus, l’utilisation des marqueurs de surface CD31 et CD39 a permis de mettre en évidence l’hétérogénéité des plasmocytes générés in vitro et ceux retrouvés in vivo.
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Rougier-Larzat, Nathalie. "Différenciation et fonction des cellules dendritiques générées in vitro à partir de précurseurs CD34+ du sang de cordon ombilical : modèle in vitro de sensibilisation de contact." Lyon 1, 1998. http://www.theses.fr/1998LYO1T252.
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Oikonomakos, Ioannis. "Vers la génération de cellules corticosurrénales à partir de cellules souches pluripotentes." Electronic Thesis or Diss., Université Côte d'Azur, 2021. http://www.theses.fr/2021COAZ6038.
Full textAbstract:
A corticosurrénale(CS)est un organe central stéroïdogénique qui joue un rôle clé dans le maintien de l'homéostasie de l'organisme. Plusieurs maladies des surrénales(par exemple l'hyperplasie congénitale des surrénales(HCS))pourraient en principe être réparées en corrigeant la mutation (par exemple par recombinaison) ou en introduisant un transgène portant une forme sauvage du gène muté pour restaurer de façon permanente l'activité enzymatique. Les données de notre groupe et d'autres groupes démontrent un renouvellement rapide du cortex surrénalien. Ainsi, les cellules stéroïdogéniques(CSG) qui ont été génétiquement modifiées sont susceptibles d'être rapidement remplacées par amplification des progéniteurs pouvant encore porter la mutation. La correction génétique devra donc cibler les populations de cellules souches surrénaliennes(CSS)plutôt que les CSGs entièrement différenciées, et l'approche in vitro semble être la meilleure. En principe, deux voies alternatives pourraient être envisagées :1) Génération de IPSC à partir d'un patient, correction de la mutation et différenciation ultérieure vers la lignée surrénalienne avec transplantation dans la surrénalienne du patient.2) Isolement et culture de CSS, correction in vitro suivie d'une transplantation chez le patient. Le but de ce projet est d'établir un protocole pour la différenciation in vitro de cellules ES de souris(mESCs)en cellules progénitrices surrénaliennes.Pour atteindre cet objectif, j'ai décidé de développer une procédure de différenciation par étapes qui suit autant que possible le développement normal. Le primordium adréno-gonadique(AGP)se développe à l'interface du mésoderme intermédiaire antérieur et du mésoderme latéral. J'ai développé un protocole robuste qui permet la différenciation in vitro de mESC via l'état EpiSC et l'état de ligne primitive, en mésoderme intermédiaire antérieur et latéral. Une différenciation correcte a été démontrée par l'expression de marqueurs spécifiques du type cellulaire, notamment T pour la ligne primitive, Osr1, LIM1, PAX2, Foxf1, Prrx1 et WT1 pour la lignée du mésoderme. Les voies de signalisation qui sous-tendent la spécification des organes stéroïdogéniques ne sont pas encore bien établies. Pour mieux comprendre ce processus, nous avons établi une collaboration avec le professeur Serge Nef(Université de Genève),dont le laboratoire a réalisé des expériences RNA-Seq sur cellules uniques à des moments clé de la différenciation adréno-gonadique et de la séparation du AGP en AP et GP. En utilisant les informations extraites de cet atlas cellulaire, et en testant divers activateurs et inhibiteurs de voies, j'ai pu orienter davantage la différenciation vers le destin stéroïdogénique précoce, comme le démontre la régulation à la hausse de Nr5a1, un régulateur principal de la stéroïdogénèse. En testant une série de protéines de la matrice extracellulaire, j'ai pu montrer que la FN1 augmentait la production de cellules positives NR5A1. L'induction de la voie PKA a d’avantage augmenté les niveaux d'expression de NR5A1 dans ces conditions, tant au niveau de l'ARN que de la protéine ; mais toujours en nombre limité pour revendiquer une grande efficacité de protocole. En outre, la culture des cellules en 3D a induit Nr5a1 et d'autres marqueurs précoces de progéniteurs surrénaliens par rapport aux marqueurs gonadiques dans des conditions spécifiques. Des recherches supplémentaires sur les aspects clés de la différenciation in vitro sont nécessaires pour établir un protocole robuste d'organoïdes surrénaliens. Enfin, j'ai pu partiellement transposer le protocole aux hIPSC, dans lesquelles les cellules étaient correctement destinées à la lignée des progéniteurs stéroïdogéniques précoces. L'ensemble de ces résultats fournit une feuille de route pour la différenciation des cellules souches pluripotentes en progéniteurs surrénaliens et constituera la base de futurs travaux sur les thérapies de transplantation des maladies surrénaliennesThe adrenal cortex (AC) is a central steroidogenic organ with key functions in maintaining body homeostasis. Several adrenal diseases (eg Congenital adrenal hyperplasia (CAH)) could in principle be repaired by correcting the mutation (e.g. via recombination) or introduction of a transgene carrying a wildtype form of the mutated gene to permanently restore enzyme activity. However, data from our and other groups demonstrate a rapid turnover of the adrenal cortex. Thus, steroidogenic cells that have been genetically modified are likely to be rapidly replaced by amplifying progenitors that may still carry the mutation. Genetic correction will therefore need to target adrenal stem cell (ASC) populations rather than fully differentiated steroidogenic cells, and in vitro seems to be the better approach. In principle two alternative routes could be envisaged: 1) Generation of induced pluripotent cells (IPSC) from a patient, correction of the mutation using a CRISPR/Cas9 approach and subsequent differentiation towards the adrenal lineage with transplantation in/under the patient's adrenal capsule. 2) Isolation and culture of ASCs, correction in vitro followed by transplantation back into the patient. Aim of this project is to establish a protocol for the in vitro differentiation of mouse ES cells (mESCs) into adrenal progenitor cells and to evaluate their suitability for transplantations under the adrenal capsule. To achieve this goal, I decided to develop a stepwise differentiation procedure that follows as much as possible normal development. The adreno-gonadal primordium (AGP) develops at the interface of the anterior intermediate and lateral plate mesoderm. I developed a robust protocol that allows in vitro differentiation of mESCs via the EpiSC and primitive streak state, into the anterior intermediate and lateral plate mesoderm. Proper differentiation was demonstrated by the expression of cell type specific markers including Brachyury (T) for the primitive streak, Osr1, Gata4 and WT1 for mesodermal lineage, LIM1 and PAX2 for the anterior intermediate, and Foxf1 with Prrx1 for lateral plate mesoderm. The pathways underlying the specification of steroidogenic organs are not yet well established. To obtain further insight into this process, we established a collaboration with Prof. Serge Nef (University of Geneva), whose laboratory has performed single cell RNA-Seq experiments at critical time points of adreno-gonadal differentiation and separation of the adreno-gonadal primordium (AGP) into adrenal primordium (AP) and gonadal primordium (GP). Using information extracted from this cell atlas, and by testing various pathway activators and inhibitors, I was able to further orient differentiation towards the early steroidogenic fate as demonstrated by the upregulation of Nr5a1, a master regulator of steroidogenesis. By testing a range of extracellular matrix proteins, I could show that fibronectin 1 (FN1) enhanced the production of NR5A1 positive cells. Moreover, induction of the PKA pathway using a cAMP derivative (8-Br-cAMP) further increased NR5A1 expression levels in these conditions, both at the RNA and protein level; but still in limiting numbers to claim high efficiency of the protocol. In addition, culturing cells in 3D induced Nr5a1 and other early adrenal progenitor markers over gonadal ones in specific conditions. Further investigation for key aspects of the in vitro differentiation is needed to establish a robust adrenal organoid protocol. Finally, I could partially translate the protocol to hIPSCs, in which the cells were fated correctly for the early steroidogenic progenitor lineage. Taken together these results provide a road map for differentiation of pluripotent stem cells into adrenal progenitors and will form the basis for future work towards transplantation therapies of adrenal diseases
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Guillotin, Bertrand. "Etude in vitro des interactions cellulaires et moléculaires entre les cellules endothéliales et les ostéoprogéniteurs humains." Bordeaux 2, 2004. http://www.theses.fr/2004BOR21147.
Full textAbstract:
L'ostéogenèse repose sur une coordination étroite entre l'activité de formation et l'activité de résorption du tissu osseux, mais aussi avec l'angiogenèse. Nous nous sommes donc intéressés au rôle potentiel des cellules responsables de la formation osseuse. Pour ce faire, nous avons utilisé un modèle in vitro de co-culture entre des cellules endothéliales humaines de veine ombilicale (HUVEC) et des ostéoprogéniteurs humains (HOP). Pour étudier spécifiquement l'effet des HUVEC sur le phénotype des HOP, nous avons validé une technique de séparation de ces deux types cellulaires après co-culture à l'aide de billes magnétiques. Nous avons pu montrer que les HUVEC régulent le phénotype des HOP, aussi bien sur le plan de leur différenciation que de leur capacité à produire une matrice extracellulaire de type osseux. Les jonctions communicantes seraient impliquées dans cette interaction cellulaireOsteogenesis relies on a tightly regulated balance between bone formation and bone resorption. This process also occurs in striking interaction with angiogenesis. Assuming that endothelial cells are located in the very close vicinity of bone formation sites, we have been inerested in the potential involvement of endothelial cells and the gap jonctionnal Connexin43 in osteoprogenitors differentiation. To assess this question, we took advantage of the in vitro model of Human Umbilical Vein Endothelial Cells and Human Osteoprogenitors in a co-culture with physical contact. In order to analyze any effect of the co-culture on the phenotype of the HOP specifically, we validated an immuno-magnetic based cell enrichment method. Then, we are able to show that the co-culture triggers complex transcriptome alterations in the HOP, in terms of osteoblatic lineage differentiation as well as bone-related matrix production. Cx43 should be involved in this process
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Djamiatun, Kis. "In vitro studies on induction of lymphocyte and cytokine responses to the gut protozoans Giardia lamblia and Giardia muris." Thesis, McGill University, 1996. http://digitool.Library.McGill.CA:80/R/?func=dbin-jump-full&object_id=23882.
Full textAbstract:
In mice infected with 10$ sp4$ Giardia muris cysts, a peak lymphocyte proliferation in the spleen and Peyer's patches in response to Giardia extract occurred during the elimination and latent phases, respectively. This shows that the Peyer's patch cells are more responsive than the spleen to Giardia infection. Th2-type cytokines produced by Peyer's patch cells may play a protective role during the latent and acute phases. Th1-type cytokines may contribute to this production during the elimination phase. Cytokine production in response to Giardia extract in vitro was observed in mice immunized with this extract, but not in control mice. Therefore, Giardia antigen can induce cytokine production in vitro in a specific manner.