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Chaves, Ferreira Miguel. "The role of cyclin D1 in lymphopoiesis." Phd thesis, Université René Descartes - Paris V, 2012. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00765134.
Full textAbstract:
D Cyclins play an essential role connecting exogenous stimulation to the intrinsic cell cycle machinery. This family of proteins is composed of three members sharing a highly homologous domain, the cyclin box (coded by exons 1-3), which is responsible for their redundant role in the phosphorylation of the retinoblastoma protein upon association with cydin-dependent kinases Cdk4/6. Both mature T and B-cells have a remarkable division capability after antigen stimulation, essential to the generation of efficient immune responses, raising the interest of D Cyclins in lymphopoiesis. Cyclin Dl, although weakly expressed by lymphocytes, is the D Cyclin most commonly implicated in lymphoid cancers and as having a Cdk-independent transcriptional role. To study the role of Cyclin Dl, we used mice deficient for the Dl cyclin box but sparing exons 4-5. Surprisingly, individual mice have very different phenotypes that we subdivided into four arbitrary groups. Group I mice show the most precocious block in lymphoid lineage differentiation, illustrated by a low cellularity of common lymphoid progenitor cells (CLP). The thymi showed very few CD4*CD8*, double positive (DP) cells, while the CD4 CD8TCR, triple negative (TN) populations were found to be mostly constituted by the early CD44*CD25' (TNI) and few CD44*CD25* (TN2). TNl's early thymocyte progenitors (ETP) were virtually absent. At the B-cell lineage level in the bone marrow (BM) there was a major block in pre-proB differentiation. The number of peripheral T-cells was severely reduced, mainly in LN, since group I T-cells lack CCR7 expression. Group II mice presented moderate thymus atrophy. The block on TN differentiation occurs at a later stage, i.e., in the TN3 to TN4 transition, and the TNI population was characterized by a less severe depletion of the ETP. Group II mice showed a partial pre-proB block and a reduction in pre-B-cells. CLPs were also reduced but to a lesser extent than in group I mice. Group ill and group IV mice appear to have a normal thymocyte population distribution but showed an increase on ETP compartment. Group IV mice displayed thymic hyperplasia while group III mice possessed normal thymus cellularity. B-cell differentiation on both groups appeared to be normal but BM precursors had an increase in both CLP and early haematopoietic progenitor's (LSK) levels as compared with wild type mice. Cyclin Dl involvement in G1 to S transition led us to analyse in vivo division rates. Strikingly, group I mice were virtually devoid of cycling cellsin all lymphoid compartments, explaining why lymphoid lineage cells do not differentiate in these mice. In contrast, in all other groups we observed an increased BrdU incorporation. These contradicting phenotypes correlated with the expression or absence of a truncated Dl protein coded by exons 4-5. The presence of the cyclin Dl truncated mRNA was not found in group I mice but high levels of expression are consistently observed in the remaining groups. In the absence of the Dl truncated protein only trace values of Cyclins D2 and D3 were found, highlighting the role of this protein as a master D cyclin regulator, which further supports the profound aplasia and arrest in lymphoid lineage division on cells that predominantly express Cyclin D2. These results suggest that, while the function of the Dl cyclin box is redundant, the regulatory domain coded by exons 4-5 is fundamental for lymphopoiesis. Full Dl protein was also eliminated by RNA interference both in vitro and in vivo. These experiments reproduced the phenotype of group I mice. We have developed a lentiviral vector with a truncated Dl (exons 4-5) and conditional knockout (KO) mice by floxing exons 4-5 of cyclin Dl. These tools will allow us to show Cyclin Dl Cdk-independent role as a transcription regulator in lymphopoiesis and to attribute this function to exons 4-5. Understanding how exons 4-5 regulate different transcription factors might be a key in...
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Mata, Xavier. "Analyse structurale et fonctionnelle de gènes voisins du "locus" de l'α-lactalbumine caprine : application à la recherche d'éléments "cis"-régulateurs à effet dominant." Limoges, 2003. http://www.theses.fr/2003LIMO0033.
Full textAbstract:
L'utilisation récente de grands fragments d'ADN (BACs et YACs) a permis de s'affranchir de " l' effet de position "en transgénèse. Cela a été le cas pour un BAC caprin de 160 kb contenant le gène de l'a-lactalbumine (BAC 41), suggérant la présence d'éléments cis-régulateurs dominants. Mon sujet de thèse visait à analyser plus finement cet insert. Des expériences de transgénèse utilisant un BAC raccourci dérivé (BAC 6) nous a permis d'effectuer une primo-localisation de ces éléments. Dans cette région deux loci ont été identifiés : celui de la cycline T1 et FLJ20436. Leur caractérisation fonctionnelle a permis de montrer qu'ils sont actifs au sein du BAC et à expression ubiquiste. De façon inattendue, l'utilisation du promoteur de la cycline T1 en transgénèse a conduit à unessur-expression dans la lignée germinale mâle. Le gène FLJ20436 présente un épissage complexe. Ces études nous ont amenés à suspecter la présence de deux domaines chromatiniens putatifs séparant ces gènes à expression ubiquiste de celui de l'a-lactalbumine. L'analyse structurale de ces loci a permis de dresser une carte précise du BAC 41 et de délimiter une région frontière séparant les deux domaines chromatiniens putatifs. Une recherche en son sein d'éléments cis-régulateurs dominants a été initiée. L'identification et l'association de tels éléments au promoteur du gène de l'a-lactalbumine devraient contribuer à la mise au point de vecteurs d'expression efficients pour la transgénèse mammaireThe recent use of large genomic fragment (BACs or YACs) has allowed to avoid this "position effect". This has been observed with a vector that was developed in our laboratory that consists of a 160 kb goat BAC insert (BAC 41) encompassing the a-lactalbumin gene, suggesting the occurrence of dominant cis-regulatory elements. The aim of this thesis was to further analyse this insert. Transgenic experiments using a derived shorter BAC of 60 kb allowed us to localise these regulatory elements in a 5' distal region of the a-lactalbumin locus. In this region two loci were identified: the cyclin T1 and FLJ20436. Characterisation of these genes revealed that they were functional within the BAC 41 and ubiquitously expressed. Surprisingly, the use of the cyclin T1 promoter in transgenics resulted in an ubiquitous expression unexpectedly high only in male germ cells. FLJ20436 pre-mRNA has a very complex splicing pattern that is conserved during evolution. These observations led us to suspect the occurrence of two chromatin domains separating these ubiquitously expressed genes from the a-lactalbumin one. Structural analysis of these genes has allowed to define a precise restriction map of the BAC 41 and to precise the location of the potential border region within the two chromatin domains. Search for cis-regulatory elements within this region was initiated. There identification and association with the a-lactalbumin promoter should contribute to the creation of efficient mammary specific expression vectors
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Gramont, Armand de. "Etude de la cycline B2 et caractérisation des variants d'épissage des cyclines B1v et B2v chez l'homme." Paris 6, 2005. http://www.theses.fr/2005PA066008.
Full text
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Bonnet, Christine. "Un motif sur la cycline B nécessaire à l'activation de CDK1 chez la levure ?" Paris 6, 2002. http://www.theses.fr/2002PA066509.
Full text
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Pontheaux, Florian. "Activité traductionnelle et dynamique mitotique induites par la fécondation chez l’oursin." Electronic Thesis or Diss., Sorbonne université, 2022. http://www.theses.fr/2022SORUS209.
Full textAbstract:
La régulation fine de la traduction pour la dynamique du cycle cellulaire est un sujet important dans la recherche cellulaire. Au cours de ma thèse, j'ai analysé les relations entre l’activité traductionnelle des ARNm et les divisions embryonnaires mitotiques d'oursins. La fécondation de l'œuf déclenche l'activation de la machinerie traductionnelle nécessaire à la reprise des divisions mitotiques. Un réseau de régulation traductionnelle (TlRN), indépendant de la transcription, reste à identifier et à caractériser en amont des acteurs du cycle cellulaire. A la recherche d'activités mitotiques pour visualiser la dynamique spatiale à l'intérieur d'œufs, j'ai obtenu des données originales montrant l'activité dynamique et spatiale du complexe mitotique CyclinB/CDK1 et la phosphorylation de l'histone H3 sur la thréonine 3 (pH3T3) pendant la mitose embryonnaire. Ensuite, j'ai analysé le rôle in vivo de 5'UTR spécifiques pour contrôler le recrutement d'ARNm dans les polysomes actifs après la fécondation. Enfin, j'ai montré que la traduction de l'ARNm codant pour eIF4B (facteur d'initiation eucaryote 4B) contrôle l'activité traductionnelle et la dynamique des deux premières divisions mitotiques induites par la fécondation. Je propose qu'eIF4B agisse comme un régulateur positif au sein du TlRN. Ces données permettront d'étudier l'effet potentiel d'eIF4B sur les activités CDK1 et pH3T3Fine tuning of translation for cell cycle dynamics remains an important topic in cell research. During my thesis, I analyzed the relationships between mRNA translational activity and mitotic cell division using sea urchin embryos. Egg fertilization triggers the activation of the translational machinery, which is required for resuming the first mitotic division, independently of any transcription. A Translational Regulatory Network (TlRN) remains to be identified and characterized upstream of the cell cycle actors. Seeking mitotic activities that can help visualize spatial dynamics inside isolated eggs, I obtained original data showing the spatial and dynamic activity of the mitotic complex CyclinB/CDK1 and the phosphorylation of histone H3 at threonine 3 (pH3T3) during embryonic mitosis. Then, I analyzed the in vivo role of specific 5’UTR for controlling the mRNA recruitment onto active polysome following fertilization. Finally, I showed that the translation of the mRNA encoding for eIF4B (eukaryotic Initiation Factor 4B) controls the translational activity and dynamics of the first two mitotic divisions induced by fertilization. I propose that eIF4B acts as a positive regulator within the TlRN. These data will allow to study the potential effect of eIF4B acting upstream the spatial dynamics of CDK1 and pH3T3 activities
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Bockstaele, Laurence. "Réévaluation de la régulation de l'activité de la CDK4, kinase dépendante des cyclines D, clé de l'engagement dans le cycle cellulaire: rôle de l'inhibiteur p27." Doctoral thesis, Universite Libre de Bruxelles, 2006. http://hdl.handle.net/2013/ULB-DIPOT:oai:dipot.ulb.ac.be:2013/210626.
Full textAbstract:
La progression à travers le cycle cellulaire est assurée par l’activation séquentielle d’une série de complexes cycline-CDK. Les complexes cycline D-CDK4 assurent la progression au cours de la phase G1 du cycle cellulaire en phosphorylant les protéines « antioncogéniques » de la famille Rb. L’activation de la CDK4 nécessite son association à une cycline D et sa phosphorylation sur Thr172 par la CAK nucléaire (CDK activating kinase). Le rôle essentiel des protéines de la famille Cip/Kip dans la régulation de l’activité de ces complexes reste controversé. Les protéines de cette famille (comprenant p27 et p21) ont initialement été identifiées comme des inhibiteurs puissants des complexes cycline-CDK et comme les intermédiaires de l’action antimitogénique de différents signaux intra ou extra-cellulaires. Il a été proposé que la liaison de la p27 ou de la p21 aux complexes cycline D-CDK4 empêche leur phosphorylation activatrice par la CAK et leur activité pRb kinase. Cependant, l’observation que des complexes cycline D-CDK4 associés à p21/p27 possèdent une activité pRb kinase a donné naissance à une seconde hypothèse sur la régulation de ces complexes par la p27 ou la p21. Ces « inhibiteurs » ont été paradoxalement proposés comme facteurs nécessaires et suffisants d’assemblage et de localisation nucléaire des complexes cycline D-CDK4. Dans le modèle physiologiquement relevant des thyrocytes de chien en culture primaire, la mitogénèse dépendante de l’AMPc activée par la TSH diffère des cascades des facteurs de croissance puisqu’elle n’induit pas les cyclines D mais au contraire augmente l’accumulation de l’«inhibiteur» de CDK p27. L’AMPc stimule l’assemblage des complexes cycline D3-CDK4, leur translocation nucléaire et leur association à p27. Dans ce modèle, le TGF&61538; inhibe la mitogénèse dépendante de l’AMPc en inhibant la translocation nucléaire des complexes cycline D3-CDK4 et leur association à la p27.Nous avons étudié l’activité catalytique et l’activation des complexes cycline D3-CDK4-p27 issus des thyrocytes de chien en culture primaire ou produits en cellules d’eucaryotes supérieurs (CHO et Sf9). Nous avons pu montrer que les complexes cycline D3-CDK4-p27 issus des thyrocytes de chien stimulés par la TSH présentent une activité pRb-kinase qui est inhibée par le TGF&61538; En outre, la production des complexes cycline D3-CDK4-p27 en cellules CHO ou Sf9 nous a permis de montrer que l’impact de la p27 sur l’activité catalytique des complexes cycline D3-CDK4 dépend de sa stoechiométrie de liaison à ces complexes. L’analyse du profil de séparation par électrophorèse bidimensionnelle de la CDK4 issue de ces trois systèmes montre que la p27 n’empêche pas la phosphorylation activatrice de la CDK4, même aux concentrations de p27 qui empêchent l’activité pRb kinase du complexe cycline D3-CDK4. Nous avons également montré dans les cellules CHO que la p27 détermine la localisation nucléaire des complexes cycline D3-CDK4, ceux-ci étant relocalisés dans le cytoplasme par la transfection d’un mutant de la p27 dépourvu de son signal de localisation nucléaire. Ces résultats valident les observations réalisées par immunofluorescence dans les thyrocytes de chien dans lesquels nous avons mis en évidence une étroite corrélation au niveau des cellules individuelles stimulées par la TSH entre la translocation nucléaire de la CDK4 et l’apparition de la p27 nucléaire. Cette colocalisation est partiellement inhibée par le TGF&61538; Ces observations renforcent l’hypothèse d’un rôle de la p27 dans l’ancrage nucléaire des complexes cycline D3-CDK4.
Alors que la localisation de la CAK est considérée comme exclusivement nucléaire et son activité catalytique constitutive, nous avons pu montrer que la phosphorylation activatrice de la CDK4 associée à la cycline D3 n’est pas affectée par sa localisation sub-cellulaire et qu’elle est régulée par le TGF&61538; dans les thyrocytes de chien et par le sérum dans les cellules T98G indépendamment de l’association de la CDK4 à la p27. De plus, la phosphorylation de la CDK4 sur Thr172 dans les cellules T98G est stimulée par le sérum, alors que la phosphorylation activatrice de la CDK6, son homologue fonctionnel, ne l’est pas. La comparaison de la séquence de ces deux CDKs à proximité des Thr phosphorylées (Thr177 pour la CDK6) révèle, outre une forte similarité de séquence, une différence au niveau de l’acide aminé situé en aval de la thréonine :il s’agit d’une proline dans la CDK4 et d’une sérine dans la CDK6. La mutation P173S de la CDK4 abolit la phosphorylation sur Thr172 et l’activité de la CDK4 associée à la cycline D3 dans les cellules CHO, mais n’affecte pas la phosphorylation et l’activation de la CDK4 par la CAK recombinante in vitro. L’ensemble de ces résultats suggère que la/les CAKs régulée(s) responsables de l’activation de la CDK4 n’ont pas encore été identifiées et que la proline située en aval de la Thr172 de la CDK4 est essentielle pour sa phosphorylation activatrice et son activité pRb kinase.
Doctorat en sciences biomédicales
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Viallard, Jean-François. "Apport de la cytométrie en flux à l'étude des protéines du cycle cellulaire." Bordeaux 2, 1999. http://www.theses.fr/1999BOR28688.
Full text
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Sorrell, David Andrew. "CycD cyclins and cyclin-dependent kinases in tobacco BY-2 cells." Thesis, University of Cambridge, 1999. http://ethos.bl.uk/OrderDetails.do?uin=uk.bl.ethos.624421.
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Delorme, Richard. "Microscopie confocale et cytométrie tridimensionnelle : application à l'étude de la localisation de la cycline A et des CDK associées dans les cellules lymphoïdes." Lyon 1, 1997. http://www.theses.fr/1997LYO1T239.
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Loncle, Nicolas. "Rôles distincts des sous-unités du module CDK8 du complexe médiateur de la transcription au cours du développement de la drosophile." Toulouse 3, 2007. http://www.theses.fr/2007TOU30075.
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Lapillonne, Hélène. "Le contrôle de la phase G1 du cycle cellulaire dans les cellules souches embryonnaires de souris." Lyon 1, 1999. http://www.theses.fr/1999LYO1T129.
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Bendris, Nawal. "Nouvelles fonctions de la Cycline A2 : régulation de l’invasion cellulaire et de la transition épithéliomésenchymateuse." Thesis, Montpellier 2, 2011. http://www.theses.fr/2011MON20079.
Full textAbstract:
L'agressivité des cancers est souvent liée au pouvoir métastatique des cellules tumorales et la dissémination de ces dernières peut survenir suite à un phénomène appelé la transition épithéliomésenchymateuse. Une analyse de l'expression de la Cycline A2 conduite sur des échantillons humains de tumeurs primaires colorectales et de leurs métastases correspondantes révèle que cette protéine est moins abondante dans ces dernières. Le travail décrit dans cette thèse a permis de relier la Cycline A2 au remodelage du cytosquelette d'Actine dans les fibroblastes. Cette régulation requiert la localisation cytoplasmique de la molécule ainsi que son domaine N-terminal qui ne lie pas les CDKs. Nos expériences suggèrent que cette nouvelle activité est la conséquence d'une liaison directe entre la GTPase RhoA et la Cycline A2. La présence de cette dernière augmente l'activation de RhoA par sa GEF in vitro. L'utilisation de cellules épithéliales mammaires normales a permis l'identification d'un autre partenaire, RhoC. Dans ce contexte cellulaire, l'invalidation de la Cycline A2 diminue l'activation de RhoA et, renforce celle de RhoC ce qui conduit à une augmentation de l'invasion cellulaire en matrice de collagène. Ces cellules acquièrent aussi des propriétés mésenchymateuses caractéristiques de l'EMT, et ce phénotype est exacerbé par la présence de RasV12. Ce travail établit donc l'existence de nouvelles fonctions pour la Cycline A2 qui viennent compléter le tableau de régulation de la motilité par les protéines du cycle cellulaire et contribuent à une meilleure compréhension de son rôle dans le cancerCancer aggressiveness is often associated with metastases occurrence and their dissemination can arise following an epithelial to mesenchymal transition (EMT). Cyclin A2 expression is lower in metastases relative to primary colon adenocarcinoma of matched human tumors. This manuscript describes new links between Cyclin A2 and Actin cytoskeleton remodeling in fibroblasts. This regulation requires a cytoplasmic localization of the protein and its N-terminal domain, which is unable to bind CDKs. This new Cyclin A2 activity appears to be mediated by its binding to RhoA. Accordingly, the activity of its GEF is potentiated when Cyclin A2 is present, in vitro. Furthermore, we used a normal mammary epithelial cell line and identified another Cyclin A2 partner, RhoC. Cyclin A2 depletion in this context leads to a reciprocal RhoGTPase activation where RhoA activation is impaired and that of RhoC is increased. Moreover, cell invasiveness is increased in a collagen matrix following Cyclin A2 knockdown in these cells. In addition, the epithelial cells acquire mesenchymal properties, which are exarcerbated by the expression of RasV12 and are characteristic of an EMT. Our work completes the network involving cell cycle proteins in motility. These novel functions of Cyclin A2 will hopefully help to understand the impact of its deregulation in cancer
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Mourgues, Lucas. "Identification d'une nouvelle fonction oncogénique de BMI1 à travers la répression du gène suppresseur de tumeur CCNG2 : une fenêtre thérapeutique potentielle." Thesis, Nice, 2014. http://www.theses.fr/2014NICE4064/document.
Full textAbstract:
BMI1 est une protéine appartenant à la famille des polycombs impliquée dans la régulation épigénétique de la transcription. Il a été montré que cette protéine est essentielle à la régulation de la prolifération, de la sénescence et du métabolisme ainsi qu’à l’auto-Renouvellement des cellules souches hématopoïétiques et cancéreuses. Ce répresseur transcriptionnel au fort potentiel oncogénique est retrouvé surexprimé dans de nombreux types de cancer ; dans le cas de la Leucémie Myéloïde Chronique (LMC) le niveau d’expression de BMI1 augmente avec l’aggravation de la pathologie. Cependant, les voies de signalisation impliquées dans sa surexpression et le rôle qu’il joue au sein de cette maladie demeurent méconnus. En réprimant l’expression de BMI1 par ARN interférence nous avons pu mettre en évidence que ce polycomb était essentiel à la prolifération cellulaire ainsi qu’au potentiel clonogénique des cellules de LMC. Nous avons également démontré pour la première fois que BMI1 soutenait la croissance tumorale à travers la répression d’un processus autophagique délétère pour la cellule cancéreuse. Une approche transcriptomique nous a permis d’identifier la cible transcriptionnelle impliquée dans ce processus, la Cycline G2. Nous avons, pour finir, trouvé une molécule, via une approche bioinformatique, capable de réinduire l’expression de la Cycline G2 dans les cellules de LMC, l’alexidine dihydrochloride. Cette molécule induit une forte autophagie dans les cellules cancéreuses ainsi que de l’apoptose. Elle s’est également montrée capable de resensibiliser à l’imatinib (un inhibiteur de BCR-ABL) une lignée pourtant résistanteThe polycomb protein Bmi1 is a major epigenetic regulator. It has been shown that this protein is essential for the regulation of cell proliferation, senescence and metabolism but also self-Renewal of hematopoïetic and cancer stem cells. This transcriptional repressor, with a strong oncogenic potential, is overexpressed in many types of cancer. In case of Chronic Myeloid Leukemia (CML) the expression level of BMI1 is associated with worsening prognosis. However, the signaling pathways involved in its overexpression and its role in this disease remains unclear. By using RNAi to repress BMI1 expression we highlighted that this polycomb was essential for proliferation and clonogenicity of CML cells. We also demonstrated, for the first time, that BMI1 supported tumor growth through repression of deleterious cancer cell autophagy. A transcriptomic approach allowed us to identify a transcriptional target involved in this process: the Cyclin G2. Through a bioinformatic approach, we finally found a molecule capable of expression re-Induction of Cyclin G2 in CML cells : alexidine dihydrochloride. This molecule induced a high level of autophagy as well as apopotosis in cancer cells. It had also been able to re-Sensitize to imatinib a resistant cell line. In conclusion, our results revealed a new role for the polycomb BMI1 in supporting the CML pathology. Moreover, our work allowed the identification of two new approaches for therapeutically targeting this oncogene functions
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Gibert, Valérie. "Etude des mécanismes moléculaires mis en jeu dans la dégradation de la cycline E à l'aide des extraits d'oeufs de Xénope." Montpellier 2, 2008. http://www.theses.fr/2008MON20215.
Full textAbstract:
Les cellules déficientes en cycline E sont résistantes à la transformation oncogénique in vitro. A l'inverse, la surexpression de la cycline E provoque une instabilité chromosomique élevée qui peut être corrélée à un défaut d'initiation de la réplication. Ce travail avait donc pour but d'étudier les mécanismes moléculaires mis en jeu dans la dégradation de la cycline E et de déterminer si cette dégradation est liée à sa fonction dans la réplication. Alors que la cycline E était décrite comme stable au cours du développement précoce chez le Xénope, nous avons observé que la cycline E est dégradée au moment de l'initiation de la réplication dans les extraits d'œufs de Xénope. Nous avons donc pu déterminer que les voies de dégradation de cycline E sont fonctionnelles dans ce système acellulaire et que les protéines F-box Cdc4 et Skp2, impliquées dans la dégradation de la cycline E via le complexe SCF sont présentes dans les extraits. Par ailleurs, nous avons montré qu'il existe une spécificité d'interaction des F-box vis-à-vis de la cycline E dépendante du cycle cellulaire. Cette reconnaissance est régulée à la fois par des phosphorylations différentielles de cycline E et par modifications des protéines F-box Skp2 et Cdc4Cyclin E-null cells are resistant to the oncogenic transformation in vitro. Conversely, overexpression of cyclin E leads to high chromosomal instability correlated to initiation of replication defect. The aim of this project was to study molecular mechanisms implicated in the degradation of cyclin E and to characterize if cyclin E turnover is tied to its function in DNA replication. Even if cyclin E is described stable during early embryonic development in Xenopus, we observed that cyclin E is degraded during initiation of DNA replication. We shown that the pathways of cyclin E turnover are functional in Xenopus egg extracts and that F-box proteins Cdc4 and Skp2 required for cyclin E turnover via SCF complex are present in Xenopus egg extracts. In addition, we determine that there is a specificity of interaction between F-box protein and cyclin E dependant on cell cycle. This recognition is regulated both by differential phosphorylation of cyclin E and by modification of F-box proteins Skp2 and Cdc4
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Bouftas, Nora. "Control of meiotic divisions in oocytes : a novel role for cyclin B3." Thesis, Sorbonne université, 2019. http://www.theses.fr/2019SORUS176.
Full textAbstract:
La méiose est un processus très réglementé composé de deux divisions successives, la méiose I et II, qui doivent être complétées dans l’ordre pour obtenir des gamètes haploïdes avec le nombre correct de chromosomes. La méiose chez les femelles est un processus sujet aux erreurs, où les erreurs de ségrégation créent des gamètes aneuploïdes. De plus, l'incidence d'aneuploïdie augmente avec l'âge. Comprendre la régulation de la méiose chez les femelles mammifères est donc essentiel. Les divisions méiotiques sont régulées par les cyclines associées à leurs partenaires catalytiques, les Cdks. J'ai étudié le rôle d'une cycline unique, la cycline B3, grâce à l'utilisation de souris cycline B3 KO. J'ai trouvé que l’absence d'activité de cycline B3-Cdk1 dans les ovocytes KO affecte l'activité de l'APC/C et induit un arrêt en métaphase I en raison des taux élevés de cycline B1, de l'activité de la Cdk1 et de la séparase inactive. Étonnamment, la cycline B3 d’autres espèces a pu sauver le phénotype des ovocytes de cycline B3 KO. J'ai aussi pu montrer que la cycline B3 était capable d'inhiber l'arrêt CSF. Les données récentes suggèrent que les ovocytes KO entraînent un arrêt précoce en CSF conduisant à l’arrêt en métaphase I observé. Mon travail de thèse a donc montré que la cycline B3 est essentielle pour la méiose I chez les femelles et pour empêcher un arrêt CSF précoce en méiose IMeiosis is a tightly regulated process made up of two successive divisions, meiosis I and II. They must be completed in an orderly manner to obtain haploid gametes with the correct number of chromosomes. Female mammalian meiosis is an error-prone process where errors in segregation create aneuploid gametes. In addition, incidence of aneuploidy increases in correlation with age. Understanding the regulation of female mammalian meiosis is therefore essential. Meiotic cell divisions are regulated by cyclins associated to their binding catalytic partners Cdks. I investigated the role of a unique cyclin, cyclin B3, through the use of cyclin B3 KO female mice. I found that lack of cyclin B3-Cdk1 activity in KO oocytes affects APC/C activity and induces an arrest at metaphase I due to high cyclin B1 levels, high Cdk1 activity, and inactive separase. Surprisingly, cyclin B3 from other species was able to rescue mouse cyclin B3 KO oocytes. I was also able to show that cyclin B3 is able to inhibit CSF arrest. My recent data suggests that cyclin B3 KO oocytes put in place a precocious CSF arrest, leading to the metaphase I arrest observed. Hence, my PhD work has shown that cyclin B3 is essential for female meiosis I and to prevent precocious CSF arrest in meiosis I instead of meiosis II
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Rivera, Vargas Thaiz Dayana. "La régulation post-transcriptionnelle des Cyclines D1, D3 et G1 par le complexe nucléaire IMP-3 dans les cancers humains." Thesis, Paris 11, 2013. http://www.theses.fr/2013PA11T055.
Full textAbstract:
La famille des protéines IMPs (IGF2 mRNA binding proteins) compte trois membres IMP1, 2 et 3. Les IMPs participent au développement embryonnaire. IMP1 et IMP3 sont considérées comme des protéines oncofoetales. En effet, malgré leur faible expression dans les tissus adultes, elles se retrouvent fortement surexprimées dans des cellules tumorales. Malgré la forte homologie entre les membres de la famille, les IMPs présentent des différences fonctionnelles qui restent très mal comprises jusqu’à présent. De nombreuses études montrent que la protéine IMP3 est très abondante dans de nombreux cancers tels que les carcinomes utérin, rénal, pulmonaire, les hépatocarcinomes et les rhabdomyosarcomes. Ces dernières années, IMP3 est devenu un marqueur de mauvais pronostique pour les patients atteins de cancer. Au cours de ma thèse j’ai principalement travaillé sur une lignée cellulaire de rhabdomyosarcomes (RMS). Les RMS sont des tumeurs principalement pédiatriques mais qui peuvent survenir à tout âge. En outre, la moitié des patients atteints des RMS meurent dans l'année suivant leur rechute et 90% des patients meurent dans les cinq ans suivant leur rechute. De nouvelles approches thérapeutiques sont absolument nécessaires. Mon sujet de thèse consiste à comprendre par quels mécanismes moléculaires les IMPs participent au processus oncogénique des RMS embryonnaires (eRMS). Pour cela, je me suis intéressée à la régulation des cyclines par les IMPs. Dans le cadre de mon projet, j’ai étudié l’effet des IMPs sur trois cyclines différentes : D1, D3 et G1. J’ai montré qu’IMP3, à la différence des deux autres, est capable de contrôler l’expression des cyclines D1, D3 et G1 dans les eRMS, ainsi que dans huit autres lignées de cancer humain différentes. Cette régulation a également des effets sur le cycle cellulaire des eRMS, expliquant l’importance d’IMP3 dans les cancers. Par diverses approches biochimiques, j’ai démontré que, sur les trois IMPs, seule IMP3 est très enrichie dans le noyau des eRMS, dans lequel elle forme des complexes avec les ARNm des CCND1, D3 et G1. Les différents résultats obtenus suggèrent un modèle selon lequel ces interactions au sein du noyau semblent indispensables à la régulation de la traduction des trois cyclines en protégeant leurs ARNm du complexe de silencing RISC (RNA induced silencing complex) et constituent donc la clé du mécanisme par lequel IMP3 contrôle la prolifération des cellules cancéreusesRNA-binding proteins of the IMP family (IGF2 mRNA-binding proteins 1-3) are key post-transcriptional regulatory factors of gene expression. They are known to control cell motility, adhesion, and proliferation. In our previous work, we show that all three IMP proteins can directly bind the mRNAs of cyclins D1, D3, and G1 (CCND1, D3, and G1) in vitro. Nevertheless, only IMP-3 regulates their expression in a significant manner in vivo, thus controlling proliferation of a number of human cancer cell lines. Importantly, the nuclear localization of IMP-3 is essential for the post-transcriptional regulation of the expression of CCND1, CCND3, and CCNG1 (CCNs). To elucidate the molecular mechanisms of IMP-3- specific regulation, we have identified its protein partners in human embryonic rhabdomyosarcoma (RMS) cells. We now show that in the nucleus and in the cytoplasm, IMP-3 interacts with a number or RNA-binding nucleocytoplasmic proteins, including DHX9, PTBP1, NF90, NF110, HNRNPA1, HNRNPA2/B1 and HuR. These IMP-3 partners have a dramatic impact on the protein levels of the cyclins. Interestingly, the decrease of CCNs protein synthesis in IMP-3 depleted cells can be fully reversed by down-regulating the key proteins of RNAi machinery, such as AGO2 and GW182. These findings suggest that IMP-3- dependent RNP complexes pre-assembled in the nucleus can protect their target mRNAs from cytoplasmic RNAi-dependent repression in human cancer cells
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Dann, Jeremiah J. "Immunological characterization and histone kinase activity of cyclin B1 and Cdk1 at G1 and G2/M phase of the cell division cycle in one-cell mouse embryos." Virtual Press, 2004. http://liblink.bsu.edu/uhtbin/catkey/1306852.
Full textAbstract:
Cyclin B1 is a cell cycle protein typically associated with the regulation of cellular division (mitosis). Previous studies in this laboratory involving preimplantation mouse embryos found that cyclin B1, or a cyclin B 1-related protein, were present at both G1 and G2/M phase of the cell cycle. Not only was cyclin Bi detected during G1 phase in this study, it was found to be present in higher concentrations at G1 phase through the first three cell cycles. These findings were unexpected, because most of the literature suggests that cyclin B1 is normally degraded during G1 phase. Using immunoprecipitation and immunoblot techniques, a more detailed study of cyclin B1 expression was inititated. Using two different primary antibodies direct against cyclin B1, a 48.97 kDa protein band, which is believed to be cyclin B1, was detected at both G1 and G2/M phases in 1-cell mouse embryos. Using another antibody directed against Cdk1, the kinase that forms a complex with cyclin B1 in order to direct the G2/M transition, a 37 kDa protein band was also detected at both G1 and G2/M phases in 1-cell mouse embryos. In order to determine whether cyclin B1 was present as a complex with Cdk1, immunoblotting with the anti-Cdk1 antibody. Again, a 37kDa protein band was detected at both G1 and G2/M phases. Finally, in order to determine whether the cyclin B1/Cdk1 complex exists in its active form, histone kinase assays were performed using anti-cyclin B1 immunoprecipitates. Kinase activity was detected in immunoprecipitates collected from G2/M phase 1-cell embryos, but no kinase activity was detected from immunoprecipitates collected from G1 phase 1-cell embryos. These data indicate that cyclin B1 and Cdk1 are present and exist as a complex in both G1 and G2/M phases of 1-cell mouse embryos, although the complex only appears to be active at the G2/M phase.Department of Biology
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Martinsson, Hanna-Stina. "Single cell analysis of checkpoints in G₁ /." Stockholm, 2005. http://diss.kib.ki.se/2005/91-7140-455-4/.
Full text
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Ji, Jun-Yuan. "Functions of Cdk1-cyclin B in regulating the early embryonic mitoses in Drosophila /." Thesis, Connect to this title online; UW restricted, 2003. http://hdl.handle.net/1773/5124.
Full text
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Asrar, Ahmad Malik. "Testing the cell cycle phase specificity of cyclins: can an earlier cyclin trigger a later event?" Doctoral thesis, Universitat Autònoma de Barcelona, 2013. http://hdl.handle.net/10803/127221.
Full textAbstract:
Progression through the cell cycle is directed by cyclin dependent kinases (CDKs), which are essential for normal and cancer cell proliferation. CDKs are activated by association with cyclins specific to each cell cycle phase (G1, S, G2, and M). Thus, CDK associated with G1 phase cyclins promote the expression of proteins necessary for DNA replication, but is unable to activate it. CDK associated with S phase cyclins, in turn, triggers the activation of chromosomal origins of replication, but is unable to promote chromosome condensation and segregation of sister chromatids, which is carried out by CDK associated with mitotic cyclins.
Despite the essential role of CDKs in cell cycle progression, how the different cyclins promote specifically the various processes of the cell cycle was still an open question by the time this thesis was initiated. Since the discovery of cyclins by Nobel laureate Tim Hunt [Evans et al. (1983) Cell 33:389] it was assumed that cyclins confer substrate specificity. However, later on, fellow Nobel laureate Paul Nurse proposed an alternative quantitative model, [Stern & Nurse (1996) Trends Genet 12:345], based on the observation that successive waves of cyclins result in increased levels of CDK activity. While low levels of activity (CDK associated with G1 cyclins) are sufficient promote progression through the G1 phase and start the pro-S phase transcription program, would be unable to trigger replication. Moderate levels of activity (CDK associated with S phase cyclins) would be able to activate replication but not mitosic events, which would require the high CDK activity associated with M phase cyclins.
If correct, the quantitative model should fulfill two predictions, but only one was demonstrated by the Nurse lab. Eukaryotic unicellular yeast cells are able to survive with a single mitotic cyclin, which is notwithstanding able to orderly drive the cell through the different cell cycle phases [Fisher & Nurse (1996) EMBO J 15:850]. Therefore M-CDK activity is able to promote the previous phases of the cycle in the fission yeast Schizosaccharomyces pombe However, if a purely quantitative mechanism applies, the complementary prediction should be true as well: an early cyclin to be able to trigger later events if expressed at levels high enough.
To test such prediction we generated a budding yeast Saccharomyces cerevisiae strain carrying a G1 cyclin G1 resistant to degradation, under a strong inducible promoter, and fused to a nuclear localization signal. Our results show that one such cyclin is capable of firing chromosome replication conditions in which the S phase cyclins, G2 and M are suppressed. Therefore, our results support the quantitative model against the requirement of substrate specificity. How eukaryotic cells prevent premature activation of the critical cell cycle processes that lead to genomic instability, seems therefore trust in the regulation of activity levels and limiting the presence of cyclin at specific time and space.
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Zitouni, Sihem. "Régulation du suppresseur de tumeur : la protéine F-box Fbw7." Thesis, Montpellier 2, 2011. http://www.theses.fr/2011MON20096.
Full textAbstract:
Le système ubiquitine-protéasome joue un rôle central dans le contrôle de la progression du cycle cellulaire par la dégradation régulée de nombreuses protéines. Dans ce système, Fbw7 (aussi appelée Fbxw7, hCdc4, hAgo, Sel-10), est l'une des protéines F-box qui sert d'adaptateur de substrats pour l'une des plus importantes familles d'ubiquitine ligases : les complexes SCF (Skp1/Cullin/ F-box). Fbw7 assure la dégradation de plusieurs régulateurs positifs du cycle cellulaire : la cycline E, cMyc, c-Jun, Notch, Aurora A, mTOR, MCL1. En conséquence, l'altération des fonctions de Fbw7 conduit à des défauts de prolifération cellulaire, de différenciation et à de l'instabilité génomique. La mutation de Fbw7 dans les cancers entraîne une dérégulation de l'expression périodique cycline E qui n'est alors plus restreinte à la transition G1/S du cycle cellulaire. Nos résultats montrent qu'une isoforme, Fbw7, est exprimée dans les œufs de xénope matures arrêtés en métaphase II mais n'est pas fonctionnelle, expliquant la présence de grande quantité de cycline E dans les œufs à cette phase mitotique. Nous montrons que Fbw7 est maintenue inactive sous forme poly-ubiquitylée suite à sa phosphorylation par une PKC jusqu'à la fin des cycles embryonnaires rapides, au moment où la cycline E est brutalement dégradée. Nous montrons que la régulation négative de Fbw7 par PKC est conservée au cours des cycles cellulaires somatiques des cellules humaines, et contribue à l'expression périodique de la cycline E. Ces résultats mettent en évidence un nouveau mécanisme critique pour la régulation de Fbw7 au cours du cycle cellulaire et suggèrent que les fonctions de Fbw7 peuvent être altérées par une dérégulation de PKC, un phénomène observé dans de nombreux types de tumeurs humainesThe ubiquitin-proteasome system plays a central role in the control of cell cycle progression through the regulated degradation of numerous critical proteins. In this process, one key family of ubiquitin ligases are the SCF (Skp1/Cul-1/F-box) complexes, in which F-box-bearing proteins act as substrate-recruiting factors. Fbw7 (also known as Fbxw7, hCdc4, hAgo, Sel-10) is one such F-box protein. It controls the stability and thus the levels of several positive regulators of the cell cycle, including cyclin E, cMyc, c-Jun, Notch, Aurora A, mTOR, Mcl1. As a consequence of its biological roles, alterations of the functions of Fbw7 lead to defects in cellular proliferation, differentiation and genetic instability. As seen in cancers, mutation of Fbw7 leads to deregulation of cyclin E expression, which is no more restricted to the G1-S phase boundary of the cell cycle. Here we report that Fbw7, although expressed in mature Xenopus eggs arrested in metaphase II, is not functional, explaining why cyclin E can be stockpiled in this mitotic-like phase. We found that, in these eggs as well as in early Xenopus embryos, Fbw7 is maintained under a PKC-dependent poly-ubiquitylated state until the end of the early rapid cleavage cycles where cyclin E is abruptly degraded. Importantly, we show that this PKC-dependent negative regulation of Fbw7 is conserved during human somatic cell cycles, resulting into the periodic expression of cyclin E. These findings reveal a novel mechanism critical for the temporal regulation of Fbw7 and suggest that the key functions of Fbw7 can be altered by PKC dysregulation, a mechanism known to occur in many types of human tumours
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Prevel, Camille. "Développement de biosenseurs fluorescents et d’inhibiteurs pour suivre et cibler CDK4/cycline D dans le mélanome." Thesis, Montpellier, 2015. http://www.theses.fr/2015MONT3505/document.
Full textAbstract:
Les CDK/cyclines jouent un rôle majeur dans la progression du cycle cellulaire et dans le maintien de la prolifération des cellules cancéreuses, constituant ainsi des biomarqueurs clés et des cibles pharmacologiques attractives. Plus particulièrement, l’activité de CDK4/cycline D, kinase responsable de la progression de la phase G1 et de la transition G1/S, est dérégulée dans de nombreux cancers dont le mélanome. Cette hyperactivation est associée à des mutations, à l’amplification ou à la surexpression de CDK4, cycline D, p16INK4a ou encore pRb.Comme aucune approche sensible et directe n’existe pour évaluer l’activité de CDK4/cycline D dans des conditions physiologiques et pathologiques, le premier objectif de ma thèse a consisté à développer un biosenseur fluorescent permettant d’étudier cette kinase in vitro et in cellulo. Une fois caractérisé et validé in vitro, le biosenseur a été appliqué à la détection d’altérations de CDK4/cycline D dans des biopsies de peau humaine et de xénogreffes de mélanome dans des essais fluorescents d’activité kinase, ainsi que dans des cellules cancéreuses vivantes par microscopie de fluorescence et vidéo microscopie.Par ailleurs, peu d’inhibiteurs sont actuellement disponibles pour inhiber CDK4/cycline D et la plupart d’entre eux ciblent la poche de fixation de l’ATP. C’est pourquoi le second objectif de ma thèse a consisté à identifier des inhibiteurs non compétitifs de l’ATP, soit par élaboration rationnelle de peptides, soit par criblage de petites molécules. A cette fin, deux biosenseurs fluorescents ont été développés qui permettent d’identifier respectivement des composés ciblant l’interface entre CDK4 et cycline D ou des inhibiteurs allostériques capables de perturber la dynamique conformationnelle de CDK4. Des essais de criblage par fluorescence réalisés avec ces biosenseurs ont conduit à l’identification de touches qui ont été validées et caractérisées in vitro et dans des essais de prolifération cellulaire, et qui constituent des candidats prometteurs pour une chimiothérapie sélective du mélanomeCDK/cyclins play a central role in coordinating cell cycle progression, and in sustaining proliferation of cancer cells, thereby constituting established cancer biomarkers and attractive pharmacological targets. In particular, CDK4/cyclin D, which is responsible for coordinating cell cycle progression through G1 into S phase, is a relevant target in several cancers including melanoma, associated with mutation of CDK4, cyclin D, p16INK4a and pRb.As there are no sensitive and direct approaches to probe CDK4/cyclin D activity in physiological and pathological conditions, the first goal of my thesis has consisted in engineering a fluorescent biosensor to probe this kinase in vitro and in cellulo. Once characterized and validated in vitro, the biosensor was applied to detect CDK4/cyclin D alterations in biopsies from human skin and melanoma xenografts in fluorescence-based activity assays, and in living cancer cells by fluorescence microscopy and timelapse imaging.Moreover, only few inhibitors are currently available to target CDK4/cyclin D and most of them bind the ATP pocket. As such, the second major goal of my thesis project has consisted in identifying non-ATP competitive inhibitors, either through rational design of peptides or by screening small molecule libraries. To this aim, two fluorescent biosensors were engineered which discriminate compounds that target the interface between CDK4 and cyclin D, or that perturb the conformational dynamics of CDK4, respectively, from ATP-pocket binding compounds. Fluorescence-based screening assays performed with these biosensors lead to identification of hits, which were validated and characterized in vitro and in cell proliferation assays, and which constitute promising candidates for selective chemotherapy in melanoma
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Bhaduri, Samyabrata. "Regulation of CDK1 Activity during the G1/S Transition in S. cerevisiae through Specific Cyclin-Substrate Docking: A Dissertation." eScholarship@UMMS, 2014. http://escholarship.umassmed.edu/gsbs_diss/871.
Full textAbstract:
Several cell cycle events require specific forms of the cyclin-CDK complexes. It has been known for some time that cyclins not only contribute by activating the CDK but also by choosing substrates and/or specifying the location of the CDK holoenzyme. There are several examples of B-type cyclins identifying certain peptide motifs in their specific substrates through a conserved region in their structure. Such interactions were not known for the G1 class of cyclins, which are instrumental in helping the cell decide whether or not to commit to a new cell cycle, a function that is non-redundant with B-type cylins in budding yeast. In this dissertation, I have presented evidence that some G1 cyclins in budding yeast, Cln1/2, specifically identify substrates by interacting with a leucine-proline rich sequence different from the ones used by B-type cyclins. These “LP” type docking motifs determine cyclin specificity, promote phosphorylation of suboptimal CDK sites and multi-site phosphorylation of substrates both in vivo and in vitro. Subsequently, we have discovered the substrate-binding region in Cln2 and further showed that this region is highly conserved amongst a variety of fungal G1 cyclins from budding yeasts to molds and mushrooms, thus suggesting a conserved function across fungal evolution. Interestingly, this region is close to but not same as the one implicated in B-type cyclins to binding substrates. We discovered that the main effect of obliterating this interaction is to delay cell cycle entry in budding yeast, such that cells begin DNA replication and budding only at a larger than normal cell size, possibly resulting from incomplete multi-site phosphorylation of several key substrates. The docking-deficient Cln2 was also defective in promoting polarized bud morphogenesis. Quite interestingly, we found that a CDK inhibitor, Far1, could regulate the Cln2-CDK1 activity partly by inhibiting the Cln2-substrate interaction, thus demonstrating that docking interactions can be targets of regulation. Finally, by studying many fungal cyclins exogenously expressed in budding yeast, we discovered that some have the ability to make the CDK hyper-potent, which suggests that these cyclins confer special properties to the CDK. My work provides mechanistic clues for cyclinspecific events during the cell cycle, demonstrates the usefulness of synthetic strategies in problem solving and also possibly resolves long-standing uncertainties regarding functions of some cell cycle proteins.
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Coronado, Diana. "The brevity of G1 is an intrinsic determinant of naïve pluripotency." Phd thesis, Université Claude Bernard - Lyon I, 2011. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00923648.
Full textAbstract:
Pluripotency can be captured and propagated in vitro from the epiblast of the pre-implantation blastocysts in the form of embryonic stem cells (ESCs). ESCs are capable of unlimited proliferation in an undifferentiated state while maintain the potential to differentiate into cells of all three germ layers in the embryo, including the germline. Two key features the ES cell mitotic cycle are (i) a vastly elevated and uniform expression of Cyclin E and Cyclin E/CDK2 complexes throughout the cell cycle and (ii) a short G1 phase characterized by the lack of RB- and p53-dependent checkpoints, and reduced dependency on MAPK signalling. During my PhD project, we explored whether and how the regulation of the cell cycle actively sustains self-renewal of mouse ESCs (mESCs). We demonstrated that: 1/ the G1 phase of mESCs is a phase of increased susceptibility to differentiation inducers. Thus shortening of G1 might shield undifferentiated cells from differentiation inducers and help ESCs to self-renew in the pluripotent state. 2/ Cyclin E opposes differentiation and supports self-renewal of mESCs by two independent mechanisms, one of which being independent of CDK2 activation. 3/ LIF signalling regulates Cyclin E/CDK2 kinase activity therefore accelerating the G1 to S phase transition. Finally, we propose a model in which LIF signalling stimulates the G1 to S phase transition to shield mESCs from undesired differentiation signals and help them to self-renew in the pluripotent state
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Fousse, Julie. "Study of the coupling between interkinetic nuclear migration and cell-cycle progression in the mouse developing cortex." Thesis, Lyon, 2017. http://www.theses.fr/2017LYSE1320.
Full text
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Omarjee, Soleilmane. "Étude du rôle du récepteur ERa-36 dans la signalisation non génomique des oestrogènes." Thesis, Lyon, 2016. http://www.theses.fr/2016LYSE1041/document.
Full textAbstract:
Nous avons étudié un nouveau varant d'épissage de ERa, nommé ERa36 et son implication dans la signalisation non génomique des œstrogènes. Contrairement à ERa, ce variant a une localisation majoritairement cytoplasmique et membranaire. Il possède une partie C-Terminale unique due à l'épissage alternatif. Nous avons découvert que le domaine C-Termonal de ERa36 contient un D-Domain, qui lui confère la capacité de se lier directement avec des protéines de la famille MAPK. En utilisant des approches in-vitro et in-cellulo, nous avons démontré que ERa36 se lie spécifiquement à la kinase ERK2 en réponse d'une stimulation ostrogénique ou anti-ostrogénique. Nous avons démontré que ERK2 lié à ERa36 lui conférait une résistance à la déphosphorylation par la phosphatase MKP3, conduisant ainsi à une activation soutenue de la voir ERK. Ce mécanisme a des effets profonds sur les cibles de ERK. En effet, l'inhibition pharmacologique de l'interaction ERa36/ERK2 diminue la phosphorylation de la Paxilline, qui a son tour conduit à une répression de la Cycline D1. En plus de ces observations, nous avons démontré, en étudiant l'expression de ERa36 par IHC dans 175 tumeurs de sein, que son expression était un facteur prédictif de métastases à distance et conduit à une diminution de la survie globale. Ce travail pourrait amener à dire que l'expression de ERa36 constitue un nouveau biomarqueur dans le cancer du seinWe study a novel splice variant of ERa, named ERa36, and its involvement in estrogen non genomic signaling. Unlike ERa, this variant has main cytoplasmic/plasma membrane localization and alternative splicing confers it with a unique, previously unidentified C-terminal domain. Interestingly, we found that ERa36 C-terminal domain contains a putative MAPK binding D-Domain for the serine/threonine kinase ERK2. This domain is a docking site for members of the MAPK family. Coupling in-vitro and in-cellulo approaches, we demonstrated that ERa36 binds specifically to ERK2 following estrogen, as well as clinical anti-estrogen (tamoxifen) stimulation.We demonstrated that ERa36 binding to ERK2 inhibits the latter’s dephosphorylation by the dual phosphatase MKP3, thereby leading to a sustained ERK activation. This mechanism had profound effects on ERK’s downstream molecular targets. In fact, pharmacological inhibition of the ERa36/ERK2 interaction abrogated the phosphorylation of Paxillin, which in turn led to a downregulation of CyclinD1 transcription.Futhermore, IHC analysis of ERa36 expression in 175 patient breast tumors revealed that its expression constituted an independent predictor of distant metastasis and influenced on overall survival. In conclusion, ERa36 expression could constitute a new biomarker in breast cancer
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Datar, Sanjeev Ashok. "Developmental regulation of growth and cell cycle progression in Drosophila melanogaster : a larval growth arrest screen, and molecular and genetic analysis of the cyclin D/Cdk4 complex /." Thesis, Connect to this title online; UW restricted, 2000. http://hdl.handle.net/1773/5008.
Full text
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Brioudes, Estelle. "RSK2 et Greatwall, deux AGC kinases actrices de la mitose." Thesis, Montpellier 2, 2010. http://www.theses.fr/2010MON20251/document.
Full textAbstract:
La mitose est une phase importante du cycle cellulaire. Les mécanismes de surveillance s'assurent de l'ordre et de l'exécution correcte des événements du cycle cellulaire dont les erreurs peuvent conduire à l'aneuploïdie. Pendant la mitose, la séparation des chromatides sœurs est régulée par le point de contrôle du fuseau mitotique qui s'assure que tous les chromosomes sont correctement alignés sur la plaque métaphasique. L'entrée et la sortie de mitose sont régulées par l'activation et l'inactivation du complexe cycline B/Cdk1. Cette fine régulation fait intervenir de nombreuses kinases et phosphatases. Dans ce projet nous nous sommes intéressés plus particulièrement à deux AGC kinases : RSK2 et Greatwall (Gwl).Au cours de cette étude nous nous sommes proposés d'analyser l'implication de RSK2, substrat majeur de la MAPK, dans le point de contrôle du fuseau mitotique. Nos résultats montrent que RSK2 est essentielle pour l'activité du point de contrôle du fuseau mitotique dans les extraits d'œufs de xénope ainsi que pour la localisation des autres protéines de ce mécanisme de surveillance localisées aux kinétochores. Nous montrons également que RSK2 participe au point de contrôle dans les cellules humaines. En effet, RSK2 est nécessaire à la localisation aux kinétochores de Mad1, Mad2 et Cenp-E, protéines essentielles à l'activité de ce checkpoint. L'entrée et la sortie de mitose sont régulées par le complexe cycline B/Cdk1 et des phosphatases. Gwl est une nouvelle kinase essentielle à l'entrée en mitose et au maintien de l'état mitotique dans les extraits d'œufs de xénope. En effet, nos résultats montrent que Gwl maintient l'état mitotique indépendamment du complexe cycline B/Cdk1, en régulant négativement PP2A, une phosphatase responsable de la déphoshorylation des substrats mitotiquesMitosis is an important phase of cell cycle. The Spindle Assembly Checkpoint (SAC) verifies the orders and the events correct execution of the cell cycle, as errors may lead to aneuploidy. During the mitosis, the checkpoint delays the anaphase onset until all chromosomes are correctly attached to the spindle‘s microtubules. Entry and Exit of mitosis are regulated by the activation and inactivation of cyclin B/Cdk1. A lot of kinases and phosphatases are involved in this fine regulation. In this project, we are particularly focusing on two AGC kinases: RSK2 and Greatwall (Gwl).In this study, we analyzed RSK2, a major substrates of MAPK, involvement in SAC. Our results show that RSK2 is essential to the activation of SAC in xenopus egg extracts and for the localization at the kinétochores of the others SAC components. We also show that RSK2 participate in the maintenance of the SAC in human cells. Indeed, RSK2 is necessary for Mad1, Mad2 and Cenp-E localization, essential proteins for SAC activation.Entry and exit of mitosis are regulated by cyclin B/Cdk1 complex and phosphatases. Gwl is a new kinase essential to the entry into mitosis and maintenance of the mitotic state in xenopus egg extracts. Indeed, our results showed that Gwl maintains the mitotic state independently of cyclin B/Cdk1 but with the negative regulation of PP2A, which dephosphorylate the mitotic substrates
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Champagne, Julien. "Etude du rôle de la cycline D1 dans la survie cellulaire." Thesis, Montpellier, 2018. http://www.theses.fr/2018MONTT018.
Full textAbstract:
Chez la femme, le cancer du sein est le cancer le plus fréquemment diagnostiqué. Différents traitements sont disponibles selon le sous-type tumoral. Cependant, certaines patientes sont réfractaires à ces thérapies et restent vulnérables lors de récidives. Le cancer a longtemps été défini par une division aberrante des cellules, mais aujourd'hui, il est évident que la résistance à la mort cellulaire programmée est un paramètre majeur dans l'étiologie de la maladie.Les cyclines de type D régulent le cycle cellulaire en permettant la transition de la phase G1 à la phase S. Pour cela, elles activent les kinases dépendantes des cyclines 4/6 (CDK4/6) qui phosphorylent les protéines du rétinoblastome ce qui libère le facteur de transcription E2F. La Cycline D1 (CycD1) nucléaire est donc centrale dans le contrôle du cycle. Son gène est amplifié dans les cancers humains et la moitié des patientes atteintes d'un cancer du sein ont une surexpression de CycD1. Par l’activation de CDK4, CycD1 est essentielle à l'apparition et à la progression tumorale. Ainsi, des inhibiteurs spécifiques de CDK4/6 ont été développés contre le cancer du sein. Malheureusement, certaines patientes restent insensibles à ce traitement. À ce titre, le ciblage spécifique de CycD1 pourrait représenter une alternative clinique. En effet, en plus de la régulation du cycle, CycD1 est également impliquée, indépendamment de CDK4, dans la survie des cellules cancéreuses. Cependant, aucun mécanisme de l'impact de CycD1 dans le maintien tumoral n'a été établi pour démontrer ce potentiel thérapeutique. En outre, CycD1 a été décrite dans les organes à l’âge adulte pour réguler le métabolisme du glucose et l'hématopoïèse. Par conséquent, pour éviter tout effet secondaire indésirable, nous avons décidé d’évaluer l’implication potentielle de CycD1 dans les organes adultes. Grâce au Tandem-HTRF, basé sur le transfert d'énergie entre deux anticorps, nous avons révélé la dynamique inattendue de CycD1 dans chaque organe adulte. De plus, nous avons montré que l’altération de l'expression de CycD1 conduit à une diminution des capacités de survie des cellules saines post-mitotiques.Au vu de ces limitations, nous avons développé une nouvelle approche d'ARN interférence spécifique des cellules cancéreuses appelée TAG-RNAi. Cette technologie permet de cibler CycD1 uniquement dans la tumeur afin d'épargner les cellules saines. Cette approche innovante consiste à cibler un tag présent uniquement sur l’ARNm de CycD1 des cellules cancéreuses. Ainsi, nous avons découvert que le ciblage spécifique de CycD1 induit une régression rapide et spontanée des tumeurs dépendantes des oncogènes RAS ou ERBB2. Par protéomique in vivo, j'ai découvert que lors de stress pro-apoptotiques, CycD1 cytoplasmique interagit avec la procaspase-3 et bloque son activation pour empêcher l'apoptose des cellules. Ces travaux démontrent la valeur clinique du ciblage spécifique de CycD1 dans les cancers afin d'améliorer l'efficacité des chimiothérapies.Par conséquent, il restait à déterminer comment appliquer le TAG-RNAi contre CycD1 uniquement dans les cellules cancéreuses des patientes. Puisque le tag exotique présent sur le gène Ccnd1 chez la souris nous a permis de cibler spécifiquement les cellules cancéreuses, nous avons pensé que des mutations retrouvées dans les cancers humains représentaient une option de ciblage. Ainsi, nous avons étendu le concept TAG-RNAi aux mutations somatiques caractéristiques des cancers pour cibler avec succès l'expression des mutants KRAS-G12V ou BRAF-V600E comme exemples. L'idée est donc d'identifier les mutations de Ccnd1 chez les patientes afin d'appliquer le TAG-RNAi comme une thérapie personnalisée afin d’éviter les effets secondaires. Enfin, l'expression de CycD1 représente un nouveau biomarqueur pour le cancer et les troubles liés à l'âge: de faibles taux prédisposent aux maladies dégénératives tandis que des taux élevés indiquent une susceptibilité accrue au cancerBreast cancer is the most frequently diagnosed cancer in women. This cancer is the leading cause of death in women aged from 35 to 65 years old. Different treatments are now available depending on tumor subtypes. However, some patients are still refractory to these therapies and are at risk of disease relapse. Cancer research has long focused on aberrant cancer cell division but today it is evident that the resistance to programmed cell death is also a major characteristic of the disease.D-type cyclins regulate cell cycle by allowing the transition from the G1-phase to the S-phase. These regulatory subunits activate the Cyclin-Dependent Kinases 4/6 (CDK4/6) that phosphorylate the retinoblastoma proteins which then release the E2F transcription factors. Nuclear Cyclin D1 (CycD1) is therefore central in the control of division. The Ccnd1 gene is amplified in human cancers and half of breast cancer patients bare an overexpression of CycD1. CycD1 is required for mammary carcinoma onset and progression in a CDK4 kinase-dependent manner. Hence, specific CDK4/6 inhibitors have been developed and authorized in the clinics against breast cancer. Unfortunately, some patients remain insensitive to this treatment. In this frame, the specific targeting of CycD1 could represent a strategic alternative in clinics to overcome these pitfalls. Indeed, in addition to cell cycle regulation with CDK4, CycD1 is also involved in CDK4-independent features of cancer cells like cell survival. However, to date, no clear mechanism for the impact of CycD1 in tumor maintenance is established to demonstrate the therapeutic value of its targeting.Moreover, recent studies have demonstrated the participation of CycD1 in adult organs to regulate glucose metabolism and hematopoiesis. As a consequence, to avoid any undesirable side effects, we decided to gauge the potential CycD1 implication in post-mitotic organs body-wide. We set up a new hypersensitive technology named Tandem-HTRF based on the energy transfer between two antibodies to reveal the unexpected dynamics of CycD1 expression in adult organ. Then, we discovered that alterations of CycD1 expression induced dramatic functional consequences on the survival capacities of healthy adult post-mitotic cells.Based on these limitations, we developed a novel RNAi approach specific to cancer cells named TAG-RNAi. This technology allows the silencing of CycD1 in cancer cells only to spare healthy cells. This innovative approach consists in the targeting of a mRNA tag only present on CycD1 from cancer cells. Using this technique, we found that the specific silencing of CycD1 induces a rapid and spontaneous regression of tumors driven by the RAS or ERBB2 oncogenes. Then, thanks to a proteomics screening in vivo, I discovered that under pro-apoptotic stresses the cytoplasmic CycD1 interacts with the procaspase-3 protein and blocks its activation to prevent cancer cell apoptosis. Altogether, my work demonstrates the clinical value of the specific targeting of CycD1 in cancers to increase the efficacy of chemotherapeutic treatments.Hence, it remained to be determined how to apply in patients RNAi against CycD1 only in cancer cells. Because the exotic tagging of its gene was instrumental in mice cancer models, we reasoned that human cancer mutations could represent such a specific tag. We have extended the concept of TAG-RNAi to somatic mutations characteristic of human cancers to successfully target the expression of KRAS-G12V or BRAF-V600E mutants as examples. The idea is therefore to identify Ccnd1 mutations in cancer patients in order to apply TAG-RNAi as a custom therapeutic approach that will manage side effects. More unanticipated, CycD1 expression represents a new biomarker for both cancer and age-related disorders: low CycD1 levels predispose to degenerative complications while high CycD1 levels indicate increased susceptibility to cancer and resistance to treatment
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Barette, Caroline. "Régulation de l'expression de cycline C et études fonctionnelles du complexe cycline C-cdk8." Montpellier 2, 1999. http://www.theses.fr/1999MON20209.
Full textAbstract:
Le complexe cycline c-cdk8 peut s'associer, dans differents complexes plus larges, a la machinerie de transcription arn polymerase ii, depuis la levure jusqu'a l'homme. Si aucune evidence n'a ete apportee sur un role direct de ce complexe dans la regulation du cycle cellulaire, son implication dans le controle transcriptionnel est assez bien documentee chez la levure. Les travaux presentes ici permettent de montrer que, par des experiences de synchronisation, l'expression genique de cycline c est activee transitoirement par le serum et independamment du cycle cellulaire, dans des fibroblastes humains normaux primaires ; cependant, les variations du niveau de messager cycline c ne sont pas accompagnees par des variations similaires des taux proteiques, suggerant des mecanismes de regulation supplementaires pour controler le niveau proteique de cycline c. En parallele, l'etude de la fonction de cycline c et de cdk8 dans la cellule, par une approche de surexpression, ont conduit a mettre en evidence un mecanisme original de regulation de la degradation de cycline c par cdk8. Ainsi un ensemble de resultats indique que la cycline c humaine exogene est tres instable, et qu'elle est fortement stabilisee par surexpression de la cdk8 humaine, avec un temps de demi-vie comparable a celui de la cycline c endogene. La stabilisation de la cycline c exogene par cdk8 se fait de facon specifique, dependante du niveau de surexpression de cdk8 et par un mecanisme indirect n'impliquant ni l'activite kinase de cdk8, ni une interaction stable avec cycline c. La cycline c exogene est principalement degradee par la voie du proteasome, apres ubiquitination. Enfin, la fonction de cycline c et cdk8 dans la regulation transcriptionnelle a ete abordee grace a deux systemes rapporteurs d'activation transcriptionnelle in vivo. Les resultats obtenus suggerent que l'activite kinase de cdk8 serait positivement impliquee dans l'activation transcriptionnelle liee a la proteine de fusion gal4-vp16.
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Intravaia, Paul Joseph. "Cycling." OpenSIUC, 2014. https://opensiuc.lib.siu.edu/theses/1509.
Full text
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Loukil, Abdelhalim. "Etude de la cycline A2 : interactions, dégradation et mise en évidence du rôle de l'autophagie." Thesis, Montpellier 2, 2012. http://www.theses.fr/2012MON20115.
Full textAbstract:
Le cycle cellulaire est finement régulé dans le temps et l'espace. Nous avons abordé les aspects dynamiques des interactions que la cycline A2 entretient avec ses partenaires Cdk1, Cdk2 et l'ubiquitine au cours du cycle cellulaire, dans des lignées cellulaires humaines. A cette fin, nous avons eu recours aux approches de FRET (Förster/fluorescence resonance energy transfer) et de FLIM (fluorescence lifetime imaging microscopy). Ceci nous a permis de montrer que les formes ubiquitinylées de la cycline A2 apparaissent principalement sous forme de foyers en prométaphase et se propagent ensuite à l'ensemble de la cellule. En outre, nous avons découvert que l'autophagie participe à la dégradation de cette cycline en mitose. Nous discutons les implications de ces observations quant à un rôle éventuel de la cycline A2 au moment de la formation de l'anneau de constriction, ainsi que de la participation de l'autophagie via cette cycline, dans la réponse aux dommages à l'ADN en mitoseThe cell cycle is finely regulated in time and space. We have studied the dynamical aspect of the interactions between cyclin A2 and its partners Cdk1, Cdk2 and ubiquitin during the cell cycle, in human cell lines. To this aim, we have used FRET (Förster/fluorescence resonance energy transfer) and FLIM (fluorescence lifetime imaging microscopy) techniques. We have thus shown that ubiquitylated forms of cyclin A2 are detected predominantly in foci in prometaphase, before spreading throughout the cell. Moreover, we have shown that autophagy contributes to cyclin A2 degradation in mitosis. We discuss the implications of these observations regarding a possible role of cyclin A2 when the cleavage furrow forms, and the participation of autophagy in DNA damage response in mitosis
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Ganier, Olivier. "Etude des fonctions de la cycline A2 dans la progression du cycle cellulaire des cellules de mammifères." Paris 6, 2007. http://www.theses.fr/2007PA066207.
Full textAbstract:
Le déroulement ordonné des phases G1, S, G2 et M du cycle cellulaire est principalement contrôlé par l'activité des kinases dépendantes des cyclines (CDK). La cycline A2 est présente dès la transition G1/S jusqu'en prométaphase. Afin de déterminer ses fonctions spécifiques dans la progression du cycle cellulaire des cellules de mammifères, nous avons inhibé son expression par interférence à l'ARN. Ceci conduit à une accélération de l'entrée en phase S suivante. Sa ré-expression restreinte au cycle cellulaire précédent est suffisante pour rétablir un "timing" correct d'entrée en phase S. L'inhibition de l'expression de la cycline A2 conduit à une stabilisation anormale de ORC1 sur la chromatine dès la mitose précédente et durant la phase G1 suivante et son expression ectopique conduit également à une accélération de l'entrée en phase S, suggérant que la phase S est régulé lors du cycle cellulaire précédent et que l'action de la cycline A2 sur ORC1 participe à cette régulation.
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Belhachemi, Naima. "Etude de l'entrée en phase M méiotique : rôle des protéines Myt1 et Xe-p9." Paris 6, 2012. http://www.theses.fr/2012PA066352.
Full textAbstract:
L’objectif de cette thèse visait à améliorer la compréhension des mécanismes de contrôle des divisions méiotiques, un événement crucial en biologie de la reproduction et du développement. Il repose sur l’utilisation de l’ovocyte de Xénope, cellule bloquée en prophase de première division méiotique dans les ovaires. La reprise de la méiose a lieu lors de l’ovulation, en réponse à une hormone stéroïde, la progestérone. Elle se caractérise par la mise en place d'un premier fuseau de métaphase, l’expulsion du premier globule polaire et la formation du fuseau de métaphase de deuxième division méiotique, stade auquel l’ovocyte se bloque jusqu'à la fécondation. Le passage de la prophase I à la métaphase II est appelé maturation méiotique et est utilisé comme modèle d’étude de la transition G2-M du cycle cellulaire. La reprise de la méiose se caractérise par l’activation du MPF (M-phase Promoting Factor ou complexe Cdc2/Cycline B), facteur universel d’entrée en phase M chez les cellules eucaryotes. Nous nous sommes intéressés à l’étude des mécanismes régulant l’activation du MPF au cours de la reprise de la méiose. Cette activation repose sur la conversion du stock de pré-MPF inactif (stock de Cdc2/Cycline B maintenu inactif grâce à deux phosphorylations inhibitrices sur les résidus Thr14 et Tyr15 de Cdc2) en MPF actif, par un mécanisme d'auto-amplification. Pour que cet événement ait lieu un préalable est nécessaire : un changement d'équilibre des activités des enzymes régulant le niveau de phosphorylation des Thr14 et Tyr15 ; la phosphatase Cdc25 et la kinase Myt1. Dans un premier temps, nous avons montré que l’activité de Myt1 était indispensable dans le maintien des ovocytes en prophase I. Par la suite nous avons mis en évidence un mécanismes initiateur de l'entrée en méiose : des complexes de MPF actifs, nouvellement formés par les Cyclines synthétisées en réponse à la progestérone et du Cdc2 libre, prennent en charge l'inhibition initiale de Myt1, ce qui change l'équilibre Cdc25/Myt1 et lance la conversion du pré-MPF en MPF actif. Dans un deuxième temps, nous nous sommes intéressés à l’implication des protéines de la famille Cks, partenaires peu étudiés des Cdk/Cyclines, lors de la reprise de la méiose. Nous avons montré que la protéine Xe-p9, homologue de Cks chez le Xénope, forme un complexe avec un pool spécifique de la protéine Cdc2, non associée à une Cycline et phosphorylée sur le résidu Thr161. L'association de cette réserve spécifique de Cks/Cdc2 avec les Cyclines nouvellement synthétisées en réponse à la progestérone, aboutirait à la formation des néo-complexes de MPF actif, déjà phosphorylés sur la Thr161 et qui serviraient à lancer la boucle d'auto-amplification du MPF. Nos résultats suggèrent donc que la protéine Xe-p9 joue un rôle positif essentiel dans l'activation du MPF et l’initiation de la méiose dans l'ovocyte de XénopeThe main objective of this Thesis was to unravel the mechanisms allowing the activation of the molecular engine driving entry into M-phase in eukaryotic cells: MPF (M-Phase promoting Factor). For this purpose, meiotic divisions of the Xenopus oocytes were selected as a model system. Xenopus oocytes are naturally arrested in prophase of the first meiotic division. After progesterone stimulation, they complete the first meiotic division, form a metaphase I spindle and resume the first meiotic division with the extrusion of the first polar body. They immediately enter the second meiotic division by the formation of a metaphase II spindle and arrest at this stage until fertilization. This process depends the tight regulation of MPF activity (M-phase promoting factor), a complex between Cyclin B and the Cyclin-dependent kinase, Cdc2. Progesterone-triggered meiosis resumption ultimately leads to conversion of pre-MPF (a stockpile of inactive MPF due to two inhibitory phosphorylations, on Thr14 and Tyr15) into active MPF by an auto-amplification mechanism. MPF activation through removal of the inhibitory phosphorylations, is controlled by the activities of the Ccd25 phosphatase and the counteracting Myt1 kinase. The main results of this work are : 1) Myt1 function is required to maintain prophase I arrest in oocytes and Myt1 inhibition is an early event of meiosis resumption, controlled by neo-synthesized Cyclins, thus newly formed Cdc2/Cyclin B complexes. We propose a model in which the significant upregulation of Cyclin B synthesis following progesterone stimulation produces a small population of active Cdc2-Cyclin B, which is responsible for early Myt1 inhibition; this change in the balance between Cdc25 and Myt1 ensures rapid and complete conversion of pre-MPF into active MPF. 2) We then studied the implication of Cks proteins, Cdk-associated proteins, in the resumption of meiosis. We showed that the Xenopus Cks homolog Xe-p9 is present in oocytes and associated to a special fraction of free Cdc2, carrying the activating phosphorylation on Thr161. Furthermore, a functional approach allowed us to establish that Xe-p9 protein has an essential role in Xenopus meiotic M-phase entry. Overall our results led us to propose a model in which Cks-bound Cdc2, and already phosphorylated on Thr161, associates with newly synthesized Cyclins and the resulting active and ready-to-use MPF molecules act as the molecular trigger of meiosis re-entry
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Baus, Fabienne. "Rôle de p21Waf1, un inhibiteur des kinases dépendantes des cyclines, dans l'arrêt en phase G2 du cycle cellulaire en réponse aux stress génotoxiques." Montpellier 2, 2003. http://www.theses.fr/2003MON20044.
Full text
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Pécrix, Yann. "Analyse moléculaire de la formation des microgamètes non-réduits chez Rosa spp." Thesis, Aix-Marseille, 2013. http://www.theses.fr/2013AIXM4374.
Full textAbstract:
Dans l’histoire évolutive des végétaux, la polyploïdisation a été un phénomène récurrent qui a façonné les génomes, aurait contribué à l’avènement de grandes étapes évolutives et aurait favorisé la survie de nombreuses lignées lors de crises écologiques majeures. Le principal mécanisme d’apparition d’espèces polyploïdes est la polyploïdisation sexuelle, qui implique la formation de gamètes 2n résultant de modifications de la division méiotique. Récemment plusieurs mutants produisant des taux élevés de gamètes 2n ont été identifiés chez A. thaliana. Chez cette espèce, la perte de fonction du gène AtPS1 conduit à la mise en place de fuseaux parallèles en méiose II et celle du gène AtCYCA1;2/TAM à l’omission de la seconde division méiotique. L’objectif de cette thèse a été de déterminer des facteurs et mécanismes responsables de la formation de gamètes 2n, en utilisant le rosier comme modèle végétal. Ces travaux ont permis : (i) d’identifier un facteur abiotique, la température élevée, comme inducteur de production de forts taux de gamètes 2n, (ii) de montrer que la fenêtre de sensibilité à ce facteur est restreinte à la méiose et (iii) de révéler que ces gamètes 2n produits sont principalement issus de la mise en place de fuseaux parallèles en méiose II. Afin de déterminer les mécanismes moléculaires à l’origine de leur formation, deux gènes candidats, RhPS1 et RhCYCA1 ont été identifiés chez Rosa. L’analyse de leur expression a révélé : (i) en condition non inductible, leur forte expression dans les étamines au stade méiose et (ii) la répression rapide de leurs niveaux de transcrits en condition d’induction de gamètes 2n. La fonction méiotique du gène RhPS1 a été validée par complémentation du mutant atps1-1 d’A. thaliana et par l’obtention d’une lignée rosier transgénique p35S::ARNi-RhPS1. Compte tenu de ces résultats, l’étude de la polyploïdisation et de ses mécanismes peut désormais être replacée dans le contexte actuel de changement climatiqueIn the evolutionary history of plants, polyploidization has been a recurring phenomenon that has shaped the genomes, might have contributed to the occurrence of major evolutionary step and might have facilitated the survival of many plant families during major ecological crises. The main mechanism of polyploidization is sexual polyploidization, which involves the formation of 2n gametes resulting from meiotic division changes. Recently, mutants highly producing 2n gametes have been isolated in A. thaliana. Loss of AtPS1 gene function leads to parallel spindles orientation in meiosis II and loss of AtCYCA1;2/TAM gene function leads to the omission of the second meiotic division. The aim of this PhD project was to identify factors and mechanisms responsible for the 2n gametes formation, using Rosa as a model. This work permitted to: (i) discover an abiotic factor, high temperature, that can induce a high production of 2n gametes, (ii) show that the sensitivity window to this factor is narrow and restricted to meiosis and (iii) reveal that 2n gamete production in inductive condition, results from parallel spindle orientation in meiosis II. To determine molecular mechanisms responsible for their formation, two candidate genes, RhPS1 and RhCYCA1 were identified in Rosa. Analysis of their expression revealed: (i) their high expression level in stamens at meiosis stage in non-inductive condition and (ii) the rapid repression of their transcript levels under inductive condition. Meiotic gene function of RhPS1 was validated by complementation of atps1-1 mutant and by generating a rose transgenic line p35S:: RNAi-RhPS1. According to these results, polyploidization and its mechanisms can now be replaced in the context of the current climate
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Williams, Lisa Marie. "Cell cycle inhibitors in control of chronic gammaherpesvirus infection /." Connect to abstract via ProQuest. Full text not available online, 2007.
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Thesis (Ph.D. in Microbiology) -- University of Colorado Denver, 2007.Typescript. Abstract available online via ProQuest Digital Dissertations. Includes bibliographical references (leaves 207-223).
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Deforzh, Evgeny. "Le complexe IMP3 protège ses ARNm cibles de la répression traductionnelle dépendante de Argonaute/GW182/miRNA." Thesis, Université Paris-Saclay (ComUE), 2015. http://www.theses.fr/2015SACLS203/document.
Full textAbstract:
Les protéines se liant à l’ARN de la famille IMP sont les protéines oncofoetales conservées, qui régulent le transport, la stabilité et la traduction de plusieurs ARNm cibles. Les IMPs sont impliqués dans la tumorigenèse et dans le développement embryonnaire par le contrôle de la prolifération cellulaire, la différenciation, la migration, la polarisation et d`autres processus cellulaires. IMP-3 est difficilement détectable dans des tissus adultes normaux, mais il est surexprimé dans les nombreux cancers, où il a été caractérisé comme un marqueur d’agressivité et de la croissance tumorale rapide, ainsi que d’un pronostic défavorable pour les patients. Dans notre étude, nous avons utilisé une lignée cellulaire RD de rhabdomyosarcome (RMS), où IMPs étaient initialement décrits comme des protéines régulatrices de l`ARNm de IGF-2. Nous avons essayé d'élucider le mécanisme par lequel IMP3 régule l’expression des cyclines D1 et D3, contribuant ainsi à la compréhension des processus oncogéniques dans les RMS et autres cancers.Nous avons montré que IMP3 régule l'expression des cyclines D1 et D3 d'une manière significative in vivo. Nous avons également démontré, qu'en absence de IMP3, les ARNm des cyclines sont exportés vers le cytoplasme et s’associent avec les polyribosomes, mais ne sont pas traduits. En outre, l'inhibition d`IMP3 n'a pas d'influence sur la stabilité des ARNm des cyclines. Nous démontrons que dans des cellules cancéreuses humaines, IMP3 interagit avec plusieurs protéines se liant à l'ARN, et que nombre de ces protéines a un effet sul l’expression des cyclines, ce que suggère l'existence d'un complexe régulateur multiprotéique sur les 3'UTR des cyclines D1 et D3. Nos résultat montrent que l'inhibition de deux protéines clés de RNA-induced silencing complex (RISC) (AGO2 et GW182/TNRC6), rétablit les niveaux d'expression des cyclines D1 et D3, qui ont été considérablement diminués en l’absence d’IMP3 ou de ses partenaires protéiques ILF3/NF90 et PTBP1. Nous concluons que les complexes d`IMP3 et RISC peuvent concourir pour la régulation des ARNm des cyclines. Nous avons également identifié les miARNs qui peuvent être impliqués dans ce processus, ainsi que les domaines fonctionnellement importants dans les 3 'UTR des cyclines, où se passe la competition entre les complexes d’IMP-3 et RISC. Nos résultats sont compatibles avec l'existence de IMP3 - contenant complexe multiprotéique, qui est associé à 3'UTRs des cyclines et régule leur traduction en les protégeant contre la répression traductionnelle par miRISCRNA-binding proteins of the IMP family (IGF2 mRNA-binding proteins 1-3) are conserved oncofetal proteins, regulating transport, stability and decay of multiple mRNAs. IMPs are involved in embryonic developement and tumorigenesis by controlling cell proliferation, differentation, migration, polarization and many other important aspects of cell function. IMP-3 is hardly detectable in normal adult tissues, but is overexpressed in many cancers, where it has been reported as a marker of tumor aggressiveness, rapid growth, and bad prognosis for patients. In our research we utilized a rhabdomyosarcoma (RMS) cell line RD, where IMPs were first described as IGF-2 mRNA regulating proteins. We aimed to elucidate the mechanism by which IMP3 regulates the expression of cyclins D1 and D3, thereby contributing to the understanding of oncogenic processes in RMS.In this study, we show that IMP3 regulates the expression of cyclin D1 and D3 in a significant manner in vivo. We also demonstrate that in the absence of IMP3, the mRNAs of the cyclins are exported to the cytoplasm and associated with polyribosomes, but not translated. IMP3 inhibition does not influence the stability of cyclin mRNAs. We demonstrate that in human cancer cells, IMP3 interacts with multiple RNA-binding proteins, and that a number of these IMP-3 partners impacts on the expression of cyclins D1 and D3. These observations suggest the existence of a regulatory IMP-3 containing RNP complex on the 3’UTR of mRNAs of cyclin D1 and D3. Our results show that an inhibition of two key proteins of RNA-induced silencing complex (RISC) (AGO2 and GW182/TNRC6) rescues the expression of cyclin D1 and D3 proteins, which is significantly decreased in the absence of IMP3 or its protein partners ILF3/NF90 and PTBP1. Therefore, IMP3 and RISC complexes can compete for cyclin mRNAs translational repression/activation. We also identified a number of miRNAs that can be involved in this process, and characterized functionally important regions within 3’ UTRs of the cyclins, where the competition between IMP-3 and RISC complexes takes place. Our results are consistent with the existence of IMP3 - containing multiprotein complex, which is associated with 3’UTRs of the cyclins and regulates their translation by protecting them from miRISC-dependent translational repression
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Merger, Alexis Nicole. "Life Cycling: Cardiovascular Benefits of Cycling for Women." Thesis, The University of Arizona, 2015. http://hdl.handle.net/10150/579421.
Full textAbstract:
Cardiovascular disease is the leading killer of both men and women in the United States. Though prevalent in both genders, certain risk factors leave women especially susceptible to cardiovascular disease. Aerobic exercise has been shown to both prevent and control major risk factors. Through public awareness and outreach, women within the community will have the opportunity to learn about their risks and begin steps towards a healthier lifestyle. This paper will inform the average reader about the anatomy and physiology of the cardiovascular system, the risk factors associated with cardiovascular disease, and the history and heart-health benefits of cycling all while taking special consideration to note female-specific factors. Its purpose is to encourage women to evaluate their lifestyle, understand their cardiovascular risk factors, and begin cycling and eating well in order to live a healthier, longer life.
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Silva, Alexandre Manuel Oliveira da. "Cycling cities." Master's thesis, Universidade de Lisboa, Faculdade de Arquitetura, 2019. http://hdl.handle.net/10400.5/19235.
Full textAbstract:
Dissertação de Mestrado Integrado em Arquitetura, com a especialização em Urbanismo apresentada na Faculdade de Arquitetura da Universidade de Lisboa para obtenção do grau de Mestre.A presente investigação centra-se na temática de promoção da mobilidade ciclável e a devida integração com os transportes ferroviários, tendo em consideração a orografia do terreno. Num momento em que a procura por soluções sustentáveis no âmbito da mobilidade em cidade tem vindo a crescer, constata-se que a mobilidade com recurso à bicicleta nas deslocações diárias poderá atenuar as dificuldades existentes, podendo esta ser considerada como um dos modos de transporte mais eficazes nas deslocações urbanas. Numa fase inicial, a revisão dos conceitos aborda as questões relacionadas com esta temática, onde as posições de diversos autores fundamentam a importância que a mobilidade ciclável desempenha nas mais diversas áreas, desde da gestão e planeamento territorial às vertentes sociais, económicas, ambientais e culturais. Numa segunda fase, desenvolve-se um estudo sobre a aptidão ciclável no município de Vila Franca de Xira, procurando estudar a possibilidade de integrar a bicicleta enquanto modo de transporte diário de ligação às estações ferroviárias da Linha da Azambuja. Este estudo procura responder às adversidades encontradas aquando do processo de planeamento de redes cicláveis e tenta acomodar a questão orográfica, através do estudo prévio dos declives do terreno. O objetivo passa por entender de que forma é possível atenuar esta condicionante e, assim, promover junto da comunidade local o uso da bicicleta nas suas deslocações diárias de e para as diversas estações ferroviárias do concelho.
ABSTRACT: The present research focuses on the theme of promoting cycling mobility, currently conditioned by terrain orography and its effective integration with rail transport. At a time when the search for sustainable solutions in city mobility has been growing, it is clear that cycling mobility in daily commutes may alleviate existing difficulties and may be considered as one of the most effective urban modes of transport At an initial phase, the review of the concepts addresses issues related to this theme, where the positions of several authors justify the importance of cycling mobility in a broad variety of areas, ranging from territorial management and planning to social, economic, environmental and cultural aspects. At a second phase, a study is developed focusing on the cycling ability in the municipality of Vila Franca de Xira, seeking to study the possibility of integrate the bicycle as a daily mode of transport in the connections to Linha da Azambuja railway statios. This study seeks to respond to the the adversities encountered during the planning process of cycling networks and to accommodating the orographic question, through a preliminary study of the terrains slopes. The objective is to understand how the condition of the slopes may be mitigated and, thus, to promote bicycle use in the daily commute to and from the various railway stations in the municipality.
N/A
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Putey, Aurélien. "Synthèses d'analogues indoliques de la famille des aldisines." Lyon 1, 2007. http://www.theses.fr/2007LYO10286.
Full textAbstract:
La famille des aldisines, extraites d’éponges marines, présente un intérêt tant du point de vue synthétique que biologique. Dans cette optique, différentes voies de synthèse d’analogues et de dérivés indoliques de cette famille ont été développées. Ainsi, dans un premier temps, une étude bibliographique détaillant les composés les plus connus de la famille des aldisines et leurs synthèses a été réalisée. Puis, dans une seconde partie, une synthèse générale et efficace d’analogues structuraux de la latonduine A est décrite via une réaction d’arylation intramoléculaire pallado-catalysée. Certains des composés préparés possèdent une activité antiproliférative sub-micromolaire sur diverses lignées de cellules tumorales. Une troisième partie de ce travail a permis la préparation de nouvelles 4-hydroxy-2,3,4,5-tétrahydro[1,4]diazépino[1,2-a]indol-1-ones, dérivées de l’aldisine, à partir d’indole-2-carboxylates d’alkyle. Ces composés montrent une activité d’inhibition significative des kinases dépendantes des cyclines, cibles thérapeutiques de choix dans le traitement du cancer. Enfin, une nouvelle voie d’accès simple et efficace aux 2,3-diiodoindoles a également été découverte à partir d’acides indole-2-carboxyliquesThe family of aldisines, isolated from marine sponges, presents a great interest not only for the synthetic pathways but also for biological aspects. To complete this work, various syntheses of indolic analogues and derivatives of this family were developed. A bibliographic study showing the most known compounds of the aldisines’ family and their syntheses will be reported in a first part. Then, in a second part, a general and efficicent synthesis of structural analogues of latonduine A was carried out via a palladium-catalysed intramolecular reaction of arylation. Several of these final compounds show a sub-micromolar antiproliferative activity on various tumoral human cell lines. The third part of this work reports the preparation of new 4-hydroxy-2,3,4,5-tetrahydro[1,4]diazepino[1,2-a]indol-1-ones (derivated from the aldisine) from alkyl indole-2-carboxylates. These compounds show a significant activity on Cyclin-Dependent Kinases (CDKs) which is one of the main therapeutic targets for the cancer treatment since the last decade. Finally, a non-classical route to 2,3-diiodoindoles from indole-2-carboxylic acids is described in a fourth part
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Blondel, Marc. "Etude de la degradation des cyclines g1." Paris 11, 1996. http://www.theses.fr/1996PA112481.
Full textAbstract:
Ce travail, effectue dans son ensemble sur l'organisme modele s. Cerevisiae a demarre avec la recherche de mutants coletaux avec cdc28-1n, le seul allele connu de cdc28 qui affecte specifiquement la transition g2/m. De la sorte, nous esperions caracteriser des proteines interagissant, pour le passage de la mitose, avec cdc28. Nous avons ainsi isole un nouvel allele de rpb1, le gene qui code pour la grande sous-unite de l'arn polymerase ii. Ce nouvel allele, rpb1-1n, presente un phenotype cdc d'arret uniforme a la transition g2/m, similaire a celui observable pour cdc28-1n. La proteine rpb1 possede une partie carboxy-terminale particuliere, le ctd, qui est constitue de 27 repetitions en tandem d'un heptamere contenant plusieurs sites potentiels de phosphorylation. Le ctd est hyperphosphoryle in vivo mais la nature de la (ou les) kinase(s) qui le phosphoryle(nt) reste a determiner. La coletalite que nous avons observee entre rpb1-1n et cdc28-1n constitue une indication que cdc28 pourrait etre un bon candidat. Nous avons essaye de localiser la mutation rpb1-1n: elle n'est pas situee dans le ctd. Nous avons ensuite isole elm1-1n, un nouvel allele de elm1, un gene codant pour une serine/threonine kinase impliquee dans la differenciation pseudohyphale. Comme la stabilisation des cyclines g1 semblait impliquee dans la differenciation pseudohyphale, nous avons examine la demi-vie de cln1 et de cln2 dans le mutant elm1-1n. Les resultats obtenus montrent que la kinase elm1 est impliquee dans un systeme d'activation dose-dependante de la degradation des cyclines g1. Quand la quantite de cyclines g1 depasse un certain seuil, leur degradation est activee, et cette activation depend de elm1. De la sorte, nous nous sommes ensuite interesses a la regulation de la degradation des cyclines g1, ainsi qu'au mecanisme de proteolyse lui-meme. Nous avons ainsi montre que, contrairement au modele communement admis, la proteolyse des cyclines g1 n'est pas constitutive, et qu'elle est, au contraire, regulee. Nous montrons aussi que cette regulation depend des cyclines g2, ce qui permet de mieux comprendre pourquoi les cyclines g1 disparaissent quand les cyclines g2 apparaissent. Concernant le mecanisme de proteolyse des cyclines g1 il etait deja connu qu'il necessite des reactions d'ubiquitination. L'ubc (ubiquitin conjugating enzyme) cdc34 est, de facon generale, consideree comme le meilleur candidat pour etre l'enzyme qui catalyse ces reactions d'ubiquitination. Nos premiers resultats vont dans ce sens: nous montrons que cln1 et cln2 sont fortement stabilisees dans les mutants cdc34-2 et cdc4-1 (cdc4 est une proteine de fonction biochimique inconnue, mais qui interagit tres etroitement avec cdc34). Par contre, nous montrons par la suite que le role de cdc34 et cdc4 dans la proteolyse des cyclines g1 ne pourrait etre qu'indirect et lie uniquement a leur implication dans la degradation de sic1. La proteine sic1 etant un inhibiteur de toutes les cyclines g2, sa stabilisation dans les mutants cdc34-2 et cdc4-1 inactive totalement les cyclines g2, qui ne peuvent ainsi plus activer la degradation des cyclines g1. Nous avons alors cherche quelle autre ubc pouvait etre directement impliquee dans l'ubiquitination de cln1 et de cln2. Nous montrons que ubc9 pourrait etre un bon candidat. Enfin, en observant une stabilisation significative de cln1 et de cln2 dans le mutant pre3-2, qui affecte une sous-unite essentielle du proteasome 26s, nous montrons que ce dernier est implique dans la proteolyse des cyclines g1 prealablement ubiquitinees
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Kurzawa, Laetitia. "Développement de biosenseurs peptidiques fluorescents pour la détection des Cdk-cyclines dans les cellules vivantes." Thesis, Montpellier 2, 2011. http://www.theses.fr/2011MON20086.
Full textAbstract:
Chez les eucaryotes supérieurs, la progression ordonnée du cycle cellulaire est régie par une dizaine de kinases Cdk-cyclines. Les altérations génétiques ou épigénétiques impliquant des oncogènes ou des gènes codant pour des suppresseurs de tumeurs sont souvent associées à l'expression ou l'activation aberrante des Cdks, favorisant ainsi la prolifération cellulaire incontrôlée et notamment le développement de cancers. Malgré la pertinence oncogénique et thérapeutique de ces protéines, leur détection est restée jusqu'à présent limitée à des méthodes indirectes et invasives. Dans ce contexte, mes travaux de thèse ont permis de développer un biosenseur peptidique fluorescent permettant de reconnaître spécifiquement les Cdk-cyclines. Associé à une stratégie de vectorisation non invasive basée sur l'utilisation de peptides vecteurs pénétrants, le biosenseur a été délivré efficacement dans les cellules. La mise au point d'une quantification ratiométrique du signal a par ailleurs permis d'évaluer l'abondance relative des Cdk-cyclines endogènes. Deux variants plus spécifiques de certains complexes ont pu être développés. Enfin, d'autres versions du biosenseur ont quant à elles permis d'évaluer sa biodistribution in vivo et de mettre au point un essai cellulaire en vue d'un criblage de petites molécules ayant un effet sur l'abondance relative des Cdk-cyclinesCdk-cyclins represent key regulators of cell cycle progression among superior eukaryotes. Genetic and epigenetic alterations involving oncogenes or tumor suppressor genes are often associated with aberrant expression or activation of Cdks, leading to the sustained proliferation of cells and by the way to the development of cancers. Despite the oncogenic and therapeutic relevance of these proteins, their detection has so far remained limited to indirect and invasive methods. My Ph.D. thesis work aimed in this context at developing peptidic fluorescent biosensors that specifically recognize Cdk-cyclins. Combined to cell-penetrating peptides, the biosensor was efficiently delivered into cells. Following the development of the signal ratiometric quantification, the relative abundance of endogenous Cdk-cyclins was directly evaluated in living cells. Two other variants, that are more specific towards specific Cdk-cyclin complexes, were also designed. Finally, the development of novel versions of the biosensor allowed us to evaluate its biodistribution in vivo and to set up a cell-based assay to screen small molecules having an effect on Cdk-cyclin relative abundance
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Planchais, Séverine. "Controle de la transition g2/m chez arabidopsis thaliana : caracterisation d'un inhibiteur de kinases dependantes des cyclines analyse de la regulation de la transcription du gene codant la cycline mitotique arath ; cycb1 ; 1." Paris 11, 2000. http://www.theses.fr/2000PA112267.
Full textAbstract:
La morphogenese des plantes superieures est liee a une regulation tres precise de deux processus coordonnes, la division cellulaire et l'elongation. Les kinases dependantes des cyclines (cdk) et leurs sous-unites regulatrices, appelees cyclines, jouent un role primordial dans la progression du cycle cellulaire. Les effets de la roscovitine, un compose inhibant selectivement certaines cdk chez les animaux, ont ete testes chez les plantes et plus particulierement dans la suspension cellulaire de tabac by-2. La roscovitine inhibe in vitro l'activite kinase de complexes cdk-cycline purifies a partir de cellules bloquees en g1 et en debut de mitose. De plus, la roscovitine induit l'arret des cellules de tabac by-2 aux transitions g1/s et g2/m. Ceci demontre qu'un complexe cdk actif est necessaire chez les plantes au passage des transitions g1/s et g2/m. Les cyclines de type b sont des proteines regulatrices du cycle cellulaire exprimees specifiquement en g2 et en mitose. L'etude du promoteur du gene codant la cycline mitotique d'arabidopsis thaliana arath; cycb1;1 a ete entreprise pour comprendre les mecanismes qui regulent cette transcription periodique. Des suspensions cellulaires de tabac by-2 ont ete transformees de maniere stable avec des genes chimeres consistant en des deletions successives en 5 du promoteur d'arath; cycb1;1 fusionnees avec le gene rapporteur gus codant la -glucuronidase. Apres une analyse de chaque souche synchronisee, il a ete demontre que 202 pb avant l'atg sont suffisantes pour induire une expression specifique en phases g2 et m. De plus, la region situee entre 202 et 108 pb avant l'atg est necessaire pour conferer une transcription g2/m specifique. Cette region contient une sequence de 18 pb avec un site de fixation des facteurs myb, aacgg. Cette sequence est capable d'activer la transcription d'un gene rapporteur quelle que soit son orientation et sans que l'expression soit specifique de la phase m. Des experiences de retard sur gel ont permis de montrer que des complexes proteiques d'arabidopsis se fixent specifiquement a cette sequence et que la sequence consensus myb est necessaire pour la fixation de ces complexes. Une purification des complexes par affinite proteine-adn a ete entreprise et leur identite a ete revelee par des analyses en spectrometrie de masse. Ceci nous a conduit a l'identification d'un facteur de transcription myb avec un domaine c-terminal acide et une proteine hypothetique qui a une leucine zipper et un domaine de dimerisation de type myc. Ces facteurs proteiques pourraient reguler la transcription du gene arath; cycb1;1 en activant son promoteur.
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Gonnot, Fabrice. "Relations fonctionnelles entre les régulateurs de pluripotence et le cycle cellulaire dans les cellules souches embryonnaires pluripotentes." Thesis, Lyon, 2016. http://www.theses.fr/2016LYSE1149.
Full textAbstract:
Les cellules souches embryonnaires de souris (mESC) présentent un cycle cellulaire atypique caractérisé par l'absence d'une voie Rb fonctionnelle et la forte expression de la cycline E pendant toutes les phases du cycle cellulaire. En conséquence, les mESC sont constitutivement amorcées pour la réplication de l'ADN. Pour comprendre comment la cycline E, un régulateur clé de la transition de la phase G1 à S, est régulée dans les mESC, nous avons analysé la régulation transcriptionnelle de son gène Ccne1 par des facteurs de transcription du réseau de pluripotence naïve. Nous avons observé que les facteurs Esrrb, Klf4 et Tfcp2l1 se lient à la région du promoteur de Ccne1 sur plusieurs sites situés entre 0 et 1kb en amont du site d'initiation de la transcription. Un test luciférase nous a permis de monter qu'une mutation de ces sites de liaison diminue ou abolie l'activité transcriptionnelle du promoteur. De plus, la surexpression inductible à la doxycycline des facteurs Esrrb, Klf4 et Tfcp2l1 augment le niveau d'expression d'ARNm de Ccne1. Ces résultats suggèrent que Esrrb, Klf4 et Tfcp2l1 contrôlent l'expression de la cycline E. Ils mettent en évidence un lien direct entre le réseau de pluripotence naïve et la régulation du cycle mitotique dans les mESC. Nous avons utilisé le système rapporteur FUCCI pour étudier en fonction du cycle cellulaire l'expression des facteurs de transcription qui forment le réseau de pluripotence naïve. Nous avons observé que l'expression de Esrrb, Klf4, Tfcp2l1 et Nanog oscille au cours du cycle cellulaire avec une diminution de l'expression entre la phase G1 précoce et le début de S, puis une ré-augmentation entre le début de S et la phase G2/M. Ces résultats suggèrent que le réseau de pluripotence naïve est déstabilisé transitoirement lors du passage de la phase G1 à la phase S du cycle cellulaireMouse embryonic stem cells (mESCs) display an unorthodox cell cycle characterised by the lack of a functional Rb pathway and robust expression of cyclin E during all cell cycle phases. Therefore, mESCs are constitutively primed for DNA replication. To understand how cyclin E, a key regulator of the G1-to-S phase transition, is regulated in mESCs, we analysed the transcriptional regulation of Ccne1 by transcription factors of the naive pluripotency network. We observed that Esrrb, Klf4 and Tfcp2l1 bound the Ccne1 promoter region on multiple sites between 0 and 1kb upstream transcription start site. Disrupting the binding sites reduced or abolished transcriptional activity in a luciferase assay. Moreover, the doxycyclin-inducible expression of Essrb, Klf4 and Tfcp2l1 up-regulated the Ccne1 mRNA level. Taken together, these results strongly suggest that Essrb, Klf4 and Tfcp2l1 control Cyclin E expression and highlight a direct connection between the naïve pluripotency network and regulation of the mitotic cycle in mESCs. We used the FUCCI reporter system to study cell-cycle dependent expression of the transcription factors that form the naïve pluripotency network. Esrrb, Klf4, Tfcp2l1 and Nanog expression oscillated during the cell cycle with a down-regulated expression between the early G1-phase and the beginning of S-phase, and then up-regulated expression between the beginning of S-phase and the G2/M-phase. These results suggest that the naive pluripotency network is destabilized transiently during the transition from the G1-phase to the S-phase of the cell cycle
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Guo, Yuchen. "L’inactivation de la cycline A2 contribue à la carcinogenèse colorectale en perturbant l'homéostasie colique et induisant une inflammation chez la souris." Thesis, Montpellier, 2018. http://www.theses.fr/2018MONTT009.
Full textAbstract:
La cycline A2 est un régulateur essentiel du cycle cellulaire qui, en association avec des kinases dépendantes des cyclines (CDK) régule la réplication de l'ADN et l’entré des cellules en mitose. Dans de nombreux types de cancers humains, la cycline A2 a été considérée comme un facteur de prolifération contribuant à la cancérogenèse de par ses fonctions dans la régulation du cycle cellulaire. Récemment, la complexité des fonctions de cycline A2 a été révélée. Certaines études in vitro ont démontré que l'inactivation de la cycline A2 induit une augmentation de la motilité cellulaire et de l'invasion dans les fibroblastes consécutive à une activation défective de RhoA. De plus, il a été montré que l'inactivation de la cycline A2 induit la EMT par l’intermédiaire d’une augmentation de l'activité transcriptionnelle de la β-caténine, mais aussi via la voie TGFβ/Prefoldin. Ces études suggèrent que des niveaux réduits de cycline A2 sont liés à une invasion accrue et à l’apparition de métastases dans certains types de cancer. A l’aide d’un modèle de souris mutante pour la cycline A2, une étude récente a établi une fonction de cette dernière, indépendante des CDK, dans la réparation des cassures double brin de l'ADN et a montré que la perte de la cycline A2 favorise l’apparition de cancers de la peau et du poumon. L’ensemble de ces études met en évidence l’existence de multiples fonctions pour la cycline A2. Mon travail de thèse a consisté à explorer le rôle de la cycline A2 dans l'homéostasie du colon et le développement du Le cancer colorectal.Pour évaluer la valeur pronostique de la cycline A2 dans le CCR, nous avons analysé l'expression de la cycline A2 par IHC sur un grand nombre d'échantillons tumoraux dérivés de patients atteints de CCR de différents stades. Nous avons trouvé que les niveaux élevés de la cycline A2 sont corrélés avec un mauvais pronostic et une survie plus faible chez les patients atteints de CCR de stade I et II. Cependant, une diminution de l'expression de la cycline A2 a été détectée aux stades III et IV par comparaison aux biopsies de CCR de stade I et II. Il est tentant de proposer que le profil d'expression de la cycline A2 reflète ses rôles distincts au cours de la cancérogenèse du côlon, comme la prolifération cellulaire au stade précoce, lorsqu'elle est fortement exprimée, mais favorise l'invasion et l'agressivité à des stades plus avancés, lorsque ses niveaux d’expression sont réduits.En complément de cette étude clinique, nous avons généré des modèles murins porteurs d’une mutation constitutive ou inductible de la cycline A2 dans l’épithélium intestinal. Nous avons montré que la déplétion de la cycline A2 dans l'épithélium intestinal de la souris provoque une rupture de la crypte colique, une inflammation, une augmentation de la prolifération des cellules épithéliales et l’apparition de dysplasies de bas et haut grade, reconnues comme lésions précancéreuses dans le CCR. Ces observations suggèrent un rôle majeur pour la cycline A2 dans la régulation de l'homéostasie du côlon et l'initiation de la tumorigénèse. Une analyse plus poussée a révélé une proportion accrue de lésions au niveau de l'ADN et une activation aberrante de la β-caténine, anomalies couramment détectées chez les patients humains atteints de CCR et considérées comme les premières altérations de cette pathologie. En outre, nous avons détecté une expression élevée de NFkB et YAP1 chez les souris mutantes pour la cycline A2, voies qui jouent un rôle critique dans la régénération tissulaire et peuvent conduire la dédifférenciation des cellules épithéliales du côlon contribuant ainsi à la tumorigenèse. Finalement, les souris mutantes cycline A2 ont été soumises à un protocole de colite associé au cancer et ont développé une proportion accrue d'inflammation, mais aussi de dysplasies et d'adénocarcinomes, en taille et en nombre, suggérant que la perte de la cycline A2 participe à la carcinogenèse colorectale chez la sourisCyclin A2 is an essential cell cycle regulator required for accurate DNA replication and mitotic entry in association with cyclin-dependent kinases (CDKs). In multiple types of human cancers, cyclin A2 was considered as a proliferation driver contributing to carcinogenesis based on its function to promote cell cycle.Recently, the complexity of cyclin A2 functions has been revealed. Some in vitro studies demonstrated that cyclin A2 inactivation induces increased cell motility and invasiveness of mouse fibroblasts due to defective RhoA activation. Moreover, cyclin A2 inactivation has been shown to induce EMT through the upregulation of β-catenin transcriptional activity, but also via the TGFβ/Prefoldin pathway. These studies suggest that reduced levels of cyclin A2 are linked to increased invasiveness and metastasis in some cancer types. Using a cyclin A2 mutant mouse model, a recent study established the CDK-independent function of cyclin A2 in the repair of double-stranded DNA breaks and showed that loss of cyclin A2 promotes tumorigenesis in skin and lung due to deficient DSBs repair.Altogether, these studies highlight the multiple functions cyclin A2 can execute. The aim of my thesis was to explore the role of cyclin A2 in colon homeostasis and colorectal cancer development.To evaluate the prognostic value of cyclin A2 in CRC, we analyzed cyclin A2 expression by IHC on tumor samples derived from CRC patients of different stages. We found that high levels of cyclin A2 correlate with bad prognosis and lower survival in patients with stage I and II CRC. However, decreased cyclin A2 expression was detected in stage III and IV by comparison to stage I and II CRC biopsies. Complementary to the clinical study, we generated tissue-specific mutant mouse models bearing either a constitutive or inducible cyclin A2 deletion in the intestinal epithelium. We showed that depletion of cyclin A2 in mouse intestinal epithelium causes colonic crypt disruption, inflammation, increased proliferation of epithelial cells and occurrence of low- and high-grade dysplasia, recognized as precancerous lesions of CRC. These observations suggest a major role for cyclin A2 in the regulation of normal colon homeostasis and tumor initiation. Further analysis revealed an increased proportion of DNA damage and aberrant activation of β-catenin, commonly detected in human patients with CRC and which are considered as the first occurring alterations in this pathology. Furthermore, we detected elevated expression of NFkB and YAP1 in the colons of cyclin A2 mutant mice, pathways that have been previously shown to play critical roles for tissue regeneration after tissue damage and to drive dedifferentiation of colonic epithelial cells thus contributing to tumorigenesis. Finally, cyclin A2 mutant mice were subjected to a modified colitis-associated CRC model and developed increased proportion of inflammation, but also dysplasia and adenocarcinomas, in size and numbers, suggesting that loss of cyclin A2 contributes to inflammation-associated colorectal carcinogenesis in mice
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Sutter, Thomas. "Bedeutung der Cycline für die kolorektale Karzinogenese." [S.l.] : [s.n.], 2003. http://deposit.ddb.de/cgi-bin/dokserv?idn=969432976.
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Lapasset, Laure. "Régulation de la traduction de la cycline B durant la maturation ovocytaire chez l'étoile de mer." Montpellier 1, 2005. http://www.theses.fr/2005MON1T013.
Full textAbstract:
Le déroulement de la méiose dépend des traductions d'ARNm maternels spécifiques. Chez les vertébrés, l'augmentation de la traduction nécessite la polyadénylation des ARNm, qui résulte de la fixation sur un motif caractéristique CPE (Cytoplasmatic Polyadenylation Element), de la partie 3' non traduite, d'une protéine spécifique CPEB (CPE Binding Protein), puis de sa phosphorylation par la kinase Aurora. Nous avons cherché un mécanisme équivalent dans les ovocytes d'étoile de mer qui sont incapables de synthétiser la cycline B lorsqu'ils sont énucléés. Les effets de l'énucléation sont abolis par microinjection d'un inhibiteur de la phosphatase I, qui restaure aussi l'activation d'Aurora et la phosphorylation de CPEB. Mais CPEB est phosphorylée par cdc2 et non par Aurora. L'implication d'un autre mécanisme régulateur, portant sur la partie 5' non traduite, a été testée avec la drogue rapamycine : il y a alors réduction de la synthèse de protéine, sauf de la cycline B, et la méiose est incomplète.
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Joubès, Jérôme. "Contribution à l'étude du développement précoce du fruit de tomate Lycopersicon esculentum Mill : rôle des gènes du cycle cellulaire dans le contrôle de l'organogé̀nèse du fruit." Bordeaux 2, 1999. http://www.theses.fr/1999BOR28705.
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Pratt, M. J. "Cyclides in geometric modelling." Thesis, Cranfield University, 1991. http://ethos.bl.uk/OrderDetails.do?uin=uk.bl.ethos.305474.
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