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Dissertations / Theses on the topic 'Cultures cellulaires – Modèles animaux'
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Ganem, Joseph-Yves. "Mise en culture et hétérotransplantation de tumeurs carcinoi͏̈des humaines et animales : études biochimique et ultrastructurale." Paris 5, 1988. http://www.theses.fr/1988PA05P622.
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Solassol, Jérôme. "Développement de modèles cellulaires humain et bovin des maladies à prion, approches thérapeutiques expérimentales et étude d'un nouvel agent de décontamination." Montpellier 1, 2003. http://www.theses.fr/2003MON1T027.
Full textAbstract:
LES ENCEPHALOPATHIES SUBAIGUES SPONGIFORMES TRANSMISSIBLES (ESST), ENCORE APPELEES MALADIES A PRIONS, SONT UN GROUPE D'AFFECTIONS NEURODEGENERATIVES DONT LES PLUS CONNUES SONT LA MALADIE DE CREUTZFELDT-JACOB CHEZ L'HOMME, ET L'ENCEPHALOPATHIE SPONGIFORME BOVINE OU MALADIE DE LA "VACHE FOLLE" CHEZ L'ANIMAL. CES MALADIES SONT CARACTERISEES PAR L'ACCUMULATION D'UNE PROTEINE APPELEE PrPsc QUI CORRESPOND A UNE FORME ALTEREE D'UNE PROTEINE NORMALE, LA PrPc. NOTRE PREMIER OBJECTIF DE THESE A ETE LE DEVELOPPEMENT DE NOUVEAUX MODELES DE CULTURES CELLULAIRES INFECTEES PAR L'AGENT HUMAIN ET/OU BOVIN DU PRION. MALGRE L'UTILISATION DE DIFFERENTES APPROCHES METHODOLOGIQUES, NOUS NE SOMMES PAS PARVENUS A L'ETABLISSEMENT DE TELLES LIGNEES. PARALLELEMENT A CETTE ETUDE, NOUS NOUS SOMMES INTERESSES A L'ETUDE DES DENDRIMERES PHOSPHORES COMME AGENT ANTI-PRION. APRES AVOIR MONTRE L'EFFICACITE DE CES AGENTS SUR LA REPRODUCTION DE PrPsc ET SUR L'INFECTIVITE DE CELLULES INFECTEES PAR L'AGENT MURIN DES PRIONS, NOUS AVONS POURSUIVI NOS INVESTIGATIONS SUR ANIMAUX DE LABORATOIRE ET AVONS CONFIRME L'ACTIVITE THERAPEUTIQUE DE CES MOLECULES. PAR LA SUITE, NOTRE TRAVAIL NOUS A CONDUIT A ETUDIER L'ACTION DE PLUSIEURS IONS METALLIQUES, PRINCIPALEMENT LE CUIVRE, ASSOCIES A L'H2O2 COMME AGENT DE DECONTAMINATION DANS UNE ETUDE IN VITRO ET IN VIVO.
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Bardoul, Michèle. "Récepteurs AMPA et kai͏̈nate précoces dans le tronc cérébral embryonnaire : effets de leur blocage ou de leur stimulation "in vitro"." Montpellier 2, 1997. http://www.theses.fr/1997MON20177.
Full textAbstract:
L'expression de recepteurs fonctionnels -amino-3-hydroxy-5-methyl-isoxazole-propionate (ampa)/kainate a des stades precoces du developpement du systeme nerveux central (snc) souleve la question de leur role au cours de l'embryogenese. Nous avons d'abord analyse, chez le rat, les effets du blocage ou de la stimulation des recepteurs ampa/kainate sur des cellules dissociees de rhombencephale en culture, modele qui facilite le controle des parametres experimentaux. L'exposition a des antagonistes (competitifs aussi bien que non competitifs) provoque une mort cellulaire importante si le traitement a lieu pendant les premiers jours in vitro (jiv). En revanche, l'application de kainate ou de trifluoromethyl-ampa n'entraine des pertes cellulaires neuronales que si elle est plus tardive. L'exposition precoce aux agonistes modifie le niveau d'activite des recepteurs permeables aux cations divalents sans affecter la survie cellulaire. Le deficit en neurones (mais pas en cellules gliales) observe dans les cultures traitees est du essentiellement a une forte augmentation de la mort cellulaire (en partie de type apoptotique) et non a une baisse de la proliferation. Un deuxieme modele (cultures de tranches de rhombencephale et de moelle epiniere d'embryons de rat de 13 et 14 jours) a confirme la sensibilite des cellules embryonnaires au blocage ou a la stimulation des recepteurs. Ensemble, ces donnees suggerent que les cellules neurales dotees de recepteurs ampa/kainate, et peut-etre secondairement d'autres cellules, necessitent un niveau approprie d'activation de ces recepteurs pour leur survie et leur maturation. Nous avons pu constater que des recepteurs ampa/kainate fonctionnels existent chez l'homme a des stades embryonnaires. La consommation maternelle de substances susceptibles d'alterer l'activite de ces recepteurs pourrait perturber la formation du snc, si ces substances traversent la barriere placentaire.
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Audet, Caroline. "Optimisation des conditions de culture des cellules endothéliales cornéennes félines pour la reconstruction d'un endothélium cornéen autologue." Thesis, Université Laval, 2010. http://www.theses.ulaval.ca/2010/27172/27172.pdf.
Full textAbstract:
Les cellules endothéliales cornéennes constituent un tissu à la fois extrêmement particulier et d’une importance singulière. En effet, celui-ci est pourvu d’une capacité régénératrice pratiquement nulle, mais son intégrité est essentielle à la transparence cornéenne et donc à la vision. Par contre, l’endothélium cornéen fait défaut dans diverses pathologies telles que la dystrophie de Fuch et la kératopathie bulleuse du pseudophaque. La méthode traditionnelle pour le remplacement d’un endothélium cornéen pathologique est la greffe de cornée pleine épaisseur. Par contre, la greffe lamellaire postérieure est une alternative chirurgicale en plein essor, très intéressante, puisqu’elle permet de remplacer seulement la portion malade de la cornée. Cette technique chirurgicale a ouvert la porte à une nouvelle possibilité au niveau du génie tissulaire. En effet, il est maintenant envisageable de greffer un endothélium produit en laboratoire. Un défi supplémentaire, que s’est imposé notre équipe, est de reconstruire non seulement un endothélium complet, mais d’en reconstruire un qui serait également autologue, l’immunogénicité jouant un rôle non négligeable lors d’échec de greffes.
Mon rôle dans ce projet était donc d’évaluer la faisabilité de reconstruire par génie tissulaire un endothélium cornéen autologue pour notre modèle animal, et ce, à des fins de greffes. D’abord en optimisant les conditions de culture afin de permettre la croissance des cellules endothéliales cornéennes animales. Puis en reconstruisant in vitro un endothélium à partir d’une biopsie cornéenne de taille minimale. Un endothélium sain similaire au tissu natif a ainsi été reconstruit.
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Marret, Stéphane. "Développement des astrocytes et des oligodendrocytes dans les cultures de cerveaux de rats nouveau-nés : influence de deux composants de la matrice extra-cellulaire ; l'hyaluronane et l'hyaluronectine." Rouen, 1993. http://www.theses.fr/1993ROUE06NR.
Full textAbstract:
Le développement des cellules gliales (astrocytes et oligodendrocytes) et l'influence de deux facteurs de la matrice extra-cellulaire: l'hyaluronane, glycosaminoglycane non sulfaté de haut poids moléculaire, et l'hyaluronectine, protéine se liant spécifiquement à l'hyaluronane, ont été étudiés dans des cultures de cerveaux de rats nouveau-nés. Nous avons montré que l'hyaluronane est sécrété par les astrocytes de type 1; qu'il est un marqueur des cellules immatures de la lignée oligodendrogliale et des astrocytes de type 2, mais n'est pas trouvé sur les oligodendrocytes matures; qu'il est un inhibiteur spécifique de la prolifération des cellules immatures et de la formation des oligodendrocytes s'opposant en particulier aux effets du facteur de croissance dérivé des plaquettes, à la différence des autres glycosaminoglycanes qui n'ont pas cet effet. L'hyaluronectine n'est pas trouvée sur les cellules gliales immatures mais est un marqueur des oligodendrocytes matures et de leurs précurseurs immédiats par lesquels elle est sécrétée; elle agit indirectement sur le nombre de cellules de la lignée oligodendrogliale en s'opposant aux effets de l'hyaluronane et en le liant spécifiquement. Ces résultats nous permettent de faire l'hypothèse que l'hyaluronane a un rôle important dans le cerveau en développement sur la lignée oligodendrogliale; que le rapport hyaluronane / hyaluronectine est un facteur important de la myélinisation. L'hypoxie in vitro et la caféine à dose élevée entraînent toutes deux une augmentation de la synthèse cellulaire d'acide hyaluronique, suggérant un effet négatif sur la myélinisation.
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Cardin-Bernier, Guillaume. "Simplification de modèles mathématiques représentant des cultures cellulaires." Thèse, Université de Sherbrooke, 2015. http://hdl.handle.net/11143/8159.
Full textAbstract:
L’utilisation de cellules vivantes dans un procédé industriel tire profit de la complexité inhérente au vivant pour accomplir des tâches complexes et dont la compréhension est parfois limitée. Que ce soit pour la production de biomasse, pour la production de molécules d’intérêt ou pour la décomposition de molécules indésirables, ces procédés font appel aux multiples réactions formant le métabolisme cellulaire. Afin de décrire l’évolution de ces systèmes, des modèles mathématiques composés d’un ensemble d’équations différentielles sont utilisés. Au fur et à mesure que les connaissances du métabolisme se sont développées, les modèles mathématiques le représentant se sont complexifiés. Le niveau de complexité requis pour expliquer les phénomènes en jeu lors d’un procédé spécifique est difficile à définir. Ainsi, lorsqu’on tente de modéliser un nouveau procédé, la sélection du modèle à utiliser peut être problématique. Une des options intéressantes est la sélection d’un modèle provenant de la littérature et adapté au procédé utilisé. L’information contenue dans le modèle doit alors être évaluée en fonction des phénomènes observables dans les conditions d’opération. Souvent, les modèles provenant de la littérature sont surparamétrés pour l’utilisation dans les conditions d’opération des procédés ciblées. Cela fait en sorte de causer des problèmes d’identifiabilité des paramètres. De plus, l’ensemble des variables d’état utilisées dans le modèle n’est pas nécessairement mesuré dans les conditions d’opération normales. L’objectif de ce projet est de cibler l’information utilisable contenue dans les modèles par la simplification méthodique de ceux-ci. En effet, la simplification des modèles permet une meilleure compréhension des dynamiques à l’oeuvre dans le procédé. Ce projet a permis de définir et d’évaluer trois méthodes de simplification de modèles mathématiques servant à décrire un procédé de culture cellulaire. La première méthode est basée sur l’application de critères sur les différents éléments du modèle, la deuxième est basée sur l’utilisation d’un critère d’information du type d’Akaike et la troisième considère la réduction d’ordre du modèle par retrait de variables d’état. Les résultats de ces méthodes de simplification sont présentés à l’aide de quatre modèles cellulaires provenant de la littérature.
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Colleville, Bérénice. "Identification de nouvelles cibles thérapeutiques dans le rétrécissement aortique." Thesis, Normandie, 2019. http://www.theses.fr/2019NORMR084/document.
Full textAbstract:
Le rétrécissement aortique calcifie (RAC) est la valvulopathie la plus fréquente dans les pays occidentaux et touche environ 2% des sujets de plus de 65 ans. Initialement considérée comme une dégénérescence passive de la valve aortique liée à l’âge, le RAC est actuellement considéré comme une pathologie complexe et hautement régulée et qui aboutit à un épaississement et à une calcification des feuillets valvulaires aortiques. A ce jour les mécanismes initiateurs et favorisant la progression du RAC ne sont pas complètement élucidés, et d’autre part, aucun traitement ne s’est avéré efficace pour ralentir ou stopper son évolution. Le remplacement valvulaire aortique (chirurgical ou percutané) reste le seul traitement en cas de rétrécissement aortique serré. D’autre part, il n’existe aucun modèle animal fiable et reproductible du RAC permettant de mieux comprendre la physiopathologie de cette valvulopathie et de tester de nouvelles cibles thérapeutiques. Dans le laboratoire, nous avons fait l’hypothèse que la dysfonction de l’endothélium valvulaire jouait un rôle important dans l’initiation et la progression du RAC, et nous souhaitons utiliser un modèle animal permettant d’évaluer l’effet de nouvelles thérapeutiques. Ce travail porte donc sur l’évaluation du rôle du système endothélinergique dans la sténose aortique calcifiée et le développement d’un nouveau modèle animal murin de RAC. Dans notre première étude, nous nous sommes intéressés au modèle de souris EgfrWa2/Wa2. Ce modèle est induit par la substitution du résidu amine glycine par une valine. Les souris EgfrWa2/Wa2 homozygotes pour la mutation voient leur activité tyrosine kinase diminuée de 90%. Ce modèle induit un épaississement fibreux des feuillets valvulaires avec peu de calcifications. Cependant, l’augmentation du flux transaortique n’est pas liée a un RAC mais a une insuffisance aortique (IA). Nous avons évalué dans ce modèle l’effet d’un régime enrichi en graisse et d’une supplémentation en vitamine D3. Malgré une augmentation des taux sériquesdu cholestérol, de la vitamine D3 et de la calcémie, nous n’avons pas observé d’augmentation de la calcification. Le modèle EgfrWa2/Wa2 reste essentiellement un modèle d’IA avec le développement d’un RAC qui reste rare ou absent. Dans notre seconde étude, nous avons évalué le rôle du système endothélinergique dans des cultures primaires de cellules valvulaires interstitielles (hVICs) et endothéliales (hVECs) humaines, prélevées lors d’un remplacement valvulaire aortique chirurgical chez des patients ayant un RAC serré. Les valves de patients traités par une intervention de Bentall ont été utilisées comme groupe contrôle. Nous avons tout d’abord observé, par RT-PCR quantitative, que les hVECs issues de valves sténosées présentaient une augmentation non significative de l’ARNm codant pour l’endothéline et une augmentation significative de l’ARNm codant pour le récepteur ET-B, ainsi qu’une diminution significative de l’enzyme de conversion de l’endothéline dans les hVECs par rapport aux hVECs issues de valves contrôles. Le récepteur ET-B était également surexprimé dans les hVICs par rapport aux valves contrôles. En revanche, nous n’avons pas retrouvé de variation d’expression du récepteur ET-A dans les hVICs. Nous avons ensuite évalué l’effet de l’endotheline-1 (ET-1) dans les hVICs. Nous avons retrouvé que les hVICs calcifient lorsqu’elles sont en présence d’ET-1. Ces données suggèrent une implication du système endothélinergique dans la calcification valvulaire aortique. Des études complémentaires sont nécessaires pour mieux comprendre son implication, notamment en évaluant l’effet d’antagoniste des récepteurs de l’endothéline dans des cultures de hVICs puis dans un modèle animal fiable mimant cette pathologieAortic stenosis (AS) is the most common valvulopathy in Western countries and affects approximately 2% of subjects over 65 years of age. Originally considered a passive age-related degeneration of the aortic valve, AS is currently considered a complex and highly regulated pathology that results in thickening and calcification of aortic valve leaflets. To date the mechanisms initiating and promoting the progression of AS are not completely understood and secondly, no treatment has been effective to slow or stop its evolution. Aortic valve replacement (surgical or percutaneous) remains the only treatment for severe aortic stenosis. On the other hand, there is no reliable and reproducible animal model of AS to better understand the pathophysiology of this valvulopathy and to test new therapeutic targets. In the laboratory, we hypothesized that valvular endothelial dysfunction plays an important role in the initiation and progression of AS and we wish to use an animal model to evaluate the effect of new therapeutics. This work focuses on assessing the role of the endothelinergic system in AS and the development of a novel mouse animal model of AS. First, we used the EgfrWa2/Wa2 mouse model. This model is induced by the substitution of the amino glycine residue by a valine. The EgfrWa2/Wa2 mice homozygous for the mutation have their tyrosine kinase activity decreased by 90%. This model induces fibrous thickening of the leaflets with little calcification, but the increase in transaortic flow is not related to AS but to aortic regurgitation (AR). In this model we evaluated the effect of a fat-enriched diet and vitamin D3 supplementation. Despite increased serum levels of cholesterol, vitamin D3 and serum calcium, we did not observe an increase in calcification. The EgfrWa2/Wa2 model remains essentially a model of AR whereas AS remains rare or absent. Second, we evaluated the role of the endothelinergic system in primary cultures of human interstitial valvular (hVICs) and endothelial (hVECs) cells, obtained from AS patients treated by surgical aortic valve replacement. The valves of patients treated by a Bentall procedure were used as a control group. We first observed, by quantitative RT-PCR, that stenotic valves showed an increase in mRNA encoding endothelin and for its ET-B receptor and a decrease in the endothelin converting enzyme in the hVECs compared to the control valves. The ET-B receptor was also overexpressed in the hVICs compared to the control valves. We did not find any variation in expression of its ET-A receptor in hVICs. We then assessed the effect of endothelin-1 (ET-1) in the hVICs. We found that hVICs calcify when they are in the presence of ET-1. These data suggest involvement of the endothelinergic system in aortic valve calcification. Further studies are needed to better understand its involvement, notably by evaluating the effect of endothelin receptor antagonist in hVICs cultures and then in a reliable animal model mimicking this pathology
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L'Espérance, Sylvain. "Développement de nouveaux modèles cellulaires et animaux de cancer ovarien." Mémoire, Université de Sherbrooke, 2005. http://savoirs.usherbrooke.ca/handle/11143/3391.
Full textAbstract:
En Amérique du Nord, le cancer de l’ovaire est parmi les cancers gynécologiques les plus mortels. Seulement au Canada, en 2004, on estime que le taux de mortalité causé par ce type de cancer est de 66%. Plusieurs équipes de recherche partout à travers le monde mettent beaucoup d’efforts afin de comprendre la physiopathologie de cette maladie. Cependant, un des obstacles majeurs à l’avancement des connaissances dans ce domaine est le nombre restreint de bons modèles cellulaires et animaux. Afin de pouvoir fournir de nouveaux modèles de cellules cancéreuses au monde de la recherche, deux nouvelles lignées cellulaires de cancer ovarien (OVC-116-A et COV-2) ont été établies et caractérisées. Celles-ci ont été caractérisées au niveau de leurs paramètres de croissance (courbe de croissance, clonogénécité, croissance en sphéroïde) et ces analyses ont montré que les deux modèles cellulaires se comportent de façon sensiblement similaire en culture. De plus, le statut de plusieurs marqueurs cellulaires tels les récepteurs de la famille EGFR, les cadhérines classiques ainsi que des récepteurs hormonaux a été évalué pour chaque lignée cellulaire. La tumorigénicité in vivo a aussi été étudiée par des injections sous-cutanées de cellules cancéreuses dans des souris SCID et des souris NUDE et par des injections intrapéritonéales dans des souris SCID. Les deux nouvelles lignées cellulaires croissent dans les animaux. De façon spécifique, la lignée OVC-116-A a montré une croissance très rapide in vivo (environ 14 jours sous-cutanés pour former une tumeur de 1 centimètre de diamètre et 28 jours intrapéritonéal) alors que la lignée COV-2 a montré le phénotype contraire, soit une croissance lente in vivo, lorsqu’injectée dans les animaux. D’autres analyses moléculaires comme des analyses de mutations des gènes TP53, BRCA1, BRCA2 et KRAS ainsi que des caryotypes ont été faits sur chacune des lignées. La lignée OVC-116-A présente une mutation dans l’exon 7 du gène TP53 et une mutation dans le codon 13 du gène de KRAS. Cette lignée cellulaire présente aussi un caryotype simple caractérisé principalement par une trisomie 10 et une translocation entre le chromosome 6 et le chromosome 15. La lignée cellulaire COV-2, quant à elle, montre aussi une mutation dans l’exon 8 du gène TP53 mais aucune mutation dans le gène KRAS. Le caryotype de cette lignée est de type complexe présentant plusieurs trisomies, des tétrasomies et des translocations multiples sur des chromosomes. Finalement, la sensibilité des nouvelles lignées cellulaires aux agents chimiothérapeutiques les plus utilisés durant traitement du cancer ovarien (Cisplatin et Taxol) a été évaluée. Suite à ces résultats, la lignée COV-2 semble être un bon modèle pour étudier la chimiorésistance, car cette lignée semble être résistante à ces drogues. Des études de la viabilité en sphéroïde et à la résistance à l’anoïkose ont démontré que la lignée OVC-116-A est un bon modèle de résistance à l’anoïkose. Par des essais qualitatifs, il a été montré que lorsque cette lignée cellulaire croît en sphéroïde, elle ne montre que très peu de signes de mortalité cellulaire. De plus, par des essais semi-quantitatifs, il a été suggéré que OVC-116-A a la capacité de pouvoir proliférer lorsque celle-ci est maintenue en suspension. Aussi, par une technique quantitative comme un ELISA de type sandwich, il a été possible de montré aucune induction de l’anoïkose que lorsque OVC-116-A croît en sphéroïde. Des immunobuvardages de type Western ont confirmé ces résultats en observant que la pro-caspase 9 et la pro-caspase 3 n’étaient pas activées et que la protéine PARP, substrat de la caspase 3 n’était pas clivée. De plus, les résultats ont montré une surexpression de la protéine Bcl-2 dans les sphéroïdes OVC- 116-A. Cette constatation a permis d’émettre l’hypothèse que la protéine Bcl-2 pourrait jouer un rôle déterminant dans la survie en suspension des cellules de cancer ovarien. Nos résultats suggèrent donc que les nouvelles lignées cellulaires OVC-116-A et COV-2 représentent de bons modèles cellulaires pour étudier la résistance à l’anoïkose des cellules de cancer ovarien et la résistance aux drogues chimiothérapeutiques.
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Calmels, Nadège. "Développement et applications de modèles cellulaires pour l'ataxie de Friedreich." Université Louis Pasteur (Strasbourg) (1971-2008), 2008. http://www.theses.fr/2008STR13110.
Full textAbstract:
Ce travail de thèse porte sur le développement de modèles cellulaires murins de l'ataxie de Friedreich, maladie neurodégénérative autosomique récessive due à une perte de fonction de la frataxine. Le premier modèle reproduit le déficit partiel en frataxine observé chez la grande majorité des patients, grâce à l'utilisation d'un ribozyme. Ce modèle cellulaire a été utilisé pour cribler une chimiothèque d'un millier de composés à la recherche de molécules thérapeutiques. J'ai par la suite mis en place une stratégie d'invalidation complète du gène murin de la frataxine par utilisation d’une recombinase fluorescente et d’un allèle conditionnel. Alors que l'invalidation complète de la frataxine dans des fibroblastes immortalisés entraîne un phénotype létal, l'expression transgénique de différents variants de frataxine humaine porteurs de mutations faux-sens (G130V et I154F) permet de restaurer la viabilité des cellules totalement déficientes en frataxine murine endogène. Ces premiers modèles cellulaires porteurs de mutations faux-sens présentent un phénotype spécifique de la pathologie , corrélé à la sévérité clinique des mutationsFriedreich ataxia (FRDA) is an autosomic recessive neurodegenerative disease due to a loss of function of frataxin. My thesis project was to develop cellular models to unravel frataxin function and FRDA physiopathology and to identify new therapeutic molecules. The first model reproduced frataxin partial deficiency, as observed in a vast majority of patients, by using a ribozyme strategy targeted against murine frataxin. This cellular model has been used to screen a one-thousand compounds library for therapeutic molecules. Moreover I have set up a strategy based on complete inactivation of the murine frataxin gene by using a fluorescent recombinase associated with frataxin conditional allele. Complete frataxin deficiency in murine immortalized fibroblasts led to cell death. However this lethal phenotype could be rescued by transgenic expression of some human frataxin missense mutants (G130V and I154F). These first missense mutants cellular models displayed a spontaneous phenotype specific for Friedreich ataxia and the severity of the model was correlated with the clinical consequences of the mutations
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Barrette, Benoit. "Facteurs cellulaires et moléculaires influençant la régénération axonale dans les systèmes nerveux central et périphérique." Doctoral thesis, Université Laval, 2008. http://hdl.handle.net/20.500.11794/20332.
Full textAbstract:
Tableau d’honneur de la Faculté des études supérieures et postdoctorales, 2008-2009Les réponses cellulaires et moléculaires qui sont mises en place après une lésion de la moelle épinière et des nerfs périphériques diffèrent. Les processus de réparation qui veillent à rétablir l’intégrité tissulaire favorisent la régénération axonale seulement dans le système nerveux périphérique (SNP) lésé. Des inhibiteurs associés aux débris de myéline exerceraient un blocage de la repousse axonale dans le système nerveux central (SNC) lésé. L’objectif de cette étude visait, dans un premier temps, à répertorier et à mesurer l’expression génique des récepteurs connus de ces inhibiteurs dans toutes les régions encéphaliques de la souris avant et à la suite d’une contusion de la moelle épinère. Les résultats démontrent que les expressions des récepteurs NGR1, NGR2 et LINGO-1 sont les plus importantes et disséminées dans tout le cerveau. L’expression du co-récepteur p75NTR est plus restreinte, mais détectable dans certaines voies surpra-spinales, tandis que l’expression de TROY est presque inexistante. L’expression de ces récepteurs ne varie pas suivant un traumatisme de la moelle épinière au niveau thoracique. À l’opposé, les débris de myéline sont rapidement neutralisés par les cellules immunitaires dans le SNP lésé, ouvrant la voie à la régénération axonale. Pour évaluer la corrélation possible entre la régénération axonale et le recrutement des cellules immunitaires, nous avons étudié la repousse des axones du nerf sciatique chez la souris transgénique CD11b-TKmt-30 dans laquelle des traitements au ganciclovir entraînent la mort des cellules myéloïdes, normalement recrutées au site de lésion et dans le segment nerveux distal. Les résultats indiquent qu’en diminuant l’apport en cellules immunitaires myéloïdes (CD11b+), le rétablissement des fonctions sensori-motrices est compromis et associé à une absence de régénération axonale, une accumulation des débris de myéline, une déprivation en neurotrophines et à une déstablilisation de la vasculature et/ou une inhibition de l’angiogénèse. Ainsi, les cellules immunitaires (CD11b+) sont requises pour supporter la régénération axonale par de multiples mécanismes. En contrepartie, les cellules immunitaires ont un accès restreint au SNC ce qui abrogerait la régénération des voies supra-spinales lésées par l’action des inhibiteurs associés à la myéline reconnaissant leur récepteur à la surface des cônes de à croisssance.
The cellular and molecular responses that are activated after spinal cord and peripheral nerve injuries are quite distinct. These processes help restore tissue integrity and facilitate axonal regeneration in the injured peripheral nervous system (PNS). In the injured central nervous system (CNS), axonal regrowth is believed to be prevented by several myelin-associated inhibitors. The goal of this study is to examine and measure mRNA expression for the most studied myelin-associated inhibitors in the brain before and after a spinal cord contusion. Results show that NGR1, NGR2 and LINGO-1 are widely expressed throughout the mouse brain. In contrast, the co-receptor p75NTR is more specifically expressed in neuronal descending pathways from the brainstem, whereas TROY mRNA expression is absent. Notably, expression for these receptors was not modulated after trauma. Because myelin debris are efficiently cleared by immune cells after PNS lesion, axonal regeneration can proceed. To prove the link between axonal regeneration and the recruitment of immune cells, we have studied sciatic nerve regeneration in the CD11b-TKmt-30 transgenic mouse model in which the recruitment of myeloid cells is severely impeded by ganciclovir treatments. Results demonstrate that depletion of myeloid CD11b+ cells leads to severe deficits in recovery of sensory-motor functions that are associated with axonal regeneration failure, myelin debris accumulation, decrease of neurotrophin expression, and vascular destabilization and/or angiogenesis inhibition. Thus, CD11b+ myeloid cells are required to stimulate axonal regeneration via multiple mechanims. These results also suggest that the limited access of immune cells in the injured CNS could be, at least partly, responsible for the lack of regeneration of central axons.
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Chol, Marie. "Apports des modèles animaux et cellulaires dans l'étude de la pathophysiologie de la cystinose." Paris 5, 2007. http://www.theses.fr/2007PA05P607.
Full textAbstract:
La cystinose est une maladie héréditaire due à des mutations dans le gène CTNS, qui code pour un transporteur lysosomal de cystine, la cystinosine. L'alrération de la cystinosine induit une accumulation lysosomale de cystine associée à une atteinte rénale sévère puis à une atteinte multiviscérale. Nous avons montré dans des fibroblastes CTNS-/- un déficit en glutathion, pouvant être compensé par l'apport de précurseurs de cystéine, et une induction de la superoxyde dismutase, marqueur du stress oxydatif. Ces déficits n'ont pas été retrouvés dans des lignées de cellules tubulaires proximales murines Ctns-/- que nous avons générées et caractérisées. Enfin, nous avons généré deux lignées de souris Ctns-/- sur fonds génétiques purs C57BL/6 et FVB/N. Bien que les deux lignées accumulent la cystine, seule la lignée C57BL/6 Ctns-/- développe une atteinte rénale qui mime en partie celle observée chez les patients. Cette lignée pourra être utilisée pour tester de nouvelles thérapeutiquesCysinosis is an inherited disorder due to mutations in the CTNS gene, encoding a lysosomal transporter of cystine, cystinosin. Abnormal cystinosin leads to an intralysosomal accumulation of cystine which is associated with major kidney defects and multisystemic disease. We have shown that CTNS-/- fibroblasts contain decreased glutathione levels which can be replenished by cysteine precursors. In addition these cells are subject to oxidative stress, as demonstrated by the induction of superoxyde dismutase. We failed to detect such defects in Ctns-/- mouse proximal tubular cells that we generated and characterized. In addition two different congenic Ctns-/- strains were generated on C57BL/6 and FVB/N genetic backgrounds. Although both strains accumulate cystine, only the C57BL/6 Ctns-/- mice present with renal symptoms that partially mimic those observed in patients. Therefore these mice should be useful to test new therapeutic approaches
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Delort, Florence. "Utilisation de modèles cellulaires et animaux dans l’étude des mécanismes moléculaires impliqués dans les desminopathies." Thesis, Sorbonne Paris Cité, 2017. http://www.theses.fr/2017USPCC051.
Full textAbstract:
Les desminopathies, appartiennent aux myopathies myofibrillaires (MMF) et sont dues à des mutations du gène DES, codant la desmine. C'est un filament intermédiaire, essentiel pour l'alignement structural et fonctionnel puis l'ancrage des myofibrilles ainsi que le positionnement des organites et d’éléments de signalisation. De plus, parmi les soixante-dix mutations du gène DES, certaines peuvent produire différents phénotypes familiaux, suggérant que les facteurs environnementaux influent aussi sur l’état pathologique. Par ailleurs, les protéines musculaires des patients présentent des caractéristiques oxydatives qui évoquent un lien entre le stress oxydatif et l'agrégation des protéines dans les MMF. Pour améliorer notre compréhension des desminopathies, nous avons développé des modèles cellulaires dans des myoblastes afin d’observer, dans un contexte isogénique, le comportement de la desmine humaine de type sauvage ou portant des mutations pathologiques lors de la formation d'agrégats intra-cytoplasmiques. Nous avons préalablement démontré que seule la substitution D399Y localisée dans le domaine 2B présente une réponse agrégative induite par le stress oxydatif contrairement à deux autres mutations de la tête et la queue de la protéine. De plus, un prétraitement à la NAC mais également avec des molécules pro-autophagiques prévient cette agrégation. Dans la continuité de ce travail, j'ai donc étudié le phénotype de lignées cellulaires exprimant d'autres mutations du domaine 2B. Ainsi, j'ai montré qu'en réponse aux stress DesQ389P et DesD399Y partagent un caractère agrégatif commun sans modification structurale semblable. DesR406W présente également des agrégats, mais plus petits et plus dispersés dans le cytoplasme. De plus cette agrégation est également évitée par prétraitement à la NAC pour les trois lignées cellulaires. Au contraire, il n’y a pas d'agrégation inductible par le stress pour la mutation A357P. Par ailleurs, l’analyse des contenus redox intra-cytoplasmiques ainsi que les modifications post traductionnelles de la desmine dans nos modèles cellulaires présentent une variabilité propre à chaque mutation qui peut être corrigée par la NAC. Afin d’analyser la capacité anti-agrégative de la NAC in vivo, des modèles animaux ont aussi été construits. Ainsi, la surexpression de la desmine D399Y induit des caractéristiques physiopathologiques similaires à celles observées chez les patients. En conclusion, nos résultats confirment que chaque mutation conduit à ses propres mécanismes moléculaires pathologiques et il sera important d'intégrer ces comportements spécifiques à chaque mutant pour envisager les traitements futursDesminopathies, belonging to the myofibrillar myopathies (MFM), are due to mutations in the DES gene, encoding desmin protein. It is an intermediate filament protein, essential for structural and functional alignment plus anchorage of myofibrils as well as the positioning of cell organelles and notably signaling events. Moreover among seventy mutations of DES gene, some can produce different phenotypes within a family, suggesting that environmental factors influence disease states. Beside this, patient muscle proteins show oxidative features and support a link between oxidative stress, protein aggregation and abnormal protein deposition in MFM. To improve our understanding of desminopathies, we have developed skeletal muscle cell models to observe desmin behavior upon formation of intra-cytoplasmic aggregates, in an isogenic context. These cells express human desmin carrying Wild Type or pathological mutations. We have already demonstrated that only the D399Y substitution localized in the desmin 2B domain presents an aggregative answer induced by oxidative stress, two other mutations in the head and the tail of the protein do not. Furthermore, a pretreatment with NAC but also with pro-autophagic molecules prevents this aggregation. In the continuity of this work, I thus studied the cellular phenotype of lineages expressing other mutations of the domain 2B. So, I showed that in answer to stress DesQ389P and DesD399Y share a common aggregative character without common structural modification. DesR406W also exhibits aggregates, but smaller and more spread in the cytoplasm. Of more this aggregation is also avoided by pretreatment with NAC for these three cell lines. In contrast, there is no stress inducible aggregation in DesA357P. Besides, the analysis of the redox intra-cytoplasmic contents as well as desmin posttranslational modifications in our cell models present variability for each mutation which can be corrected by the NAC. To analyze NAC anti-aggregative capacity in vivo, animal models were also built. So the surexpression of the desmin D399Y leads to similar physiopathological characteristics to those observed in patients. In conclusion, our results confirm that each mutation leads to its own pathological molecular mechanisms and it will be important to integrate these specific mutant behaviors to consider future treatment
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Poitelon, Yannick. "Explorations de modèles animaux et cellulaires de la maladie de Charcot-Marie-Tooth de type AR-CMT2A." Aix-Marseille 2, 2009. http://www.theses.fr/2009AIX20710.
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Pagé, Julie. "Régulation et fonctions du récepteur GPR84 dans le cerveau dans des conditions inflamatoires." Master's thesis, Université Laval, 2009. http://hdl.handle.net/20.500.11794/20739.
Full textAbstract:
Lors d'études antérieures, l'analyse du transcriptome des cellules micro gliales à l'aide de micropuces à ADN nous a permis d'identifier le récepteur transmembranaire GPR84. Dans la présente étude, nous avons testé l 'hypothèse que la transcription du GPR84 est augmentée dans la microglie durant l'inflammation. Plus précisément, nous avons étudié la régulation du GPR84 dans le cerveau durant une endotoxinémie et une encéphalomyélite autoimmune expérimentale (EAB) . Nos résultats ont montré une augmentation de l'expression du GPR84 au cours de ces deux conditions inflammatoires, et ce uniquement dans la microglie. Nous avons ensuite tenté d'identifier le rôle du GPR84 en testant l 'hypothèse selon laquelle ce récepteur modulerait le développement des symptômes dûs à l'inflammation. À l'aide de souris déficientes en GPR84, nous avons évalué l'influence de ce récepteur durant une EAB, une endotoxinémie et une encéphalite induite par le virus de l 'herpès simplex de type 1. Nous n'avons observé aucune influence du GPR84 dans ces modèles. Nous concluons que le GPR84 est exprimé non spécifiquement dans plusieurs conditions neuroinflammatoires, mais qu'il n'y exerce pas toujours un effet significatif et que son rôle reste inconnu.
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Brasselet-Sicé, Sabrina. "Mise en place de modèles cellulaires pour l'étude de l'absorption des médicaments." Nice, 2006. http://www.theses.fr/2006NICE4031.
Full textAbstract:
Le passage des barrières épithéliales constitue une étape limitante pour l’absorption des médicaments. Dans le but de tester in vitro l’efficacité de lipoaminoacides, promoteurs d’absorption breveté par la société Physica Pharma, j’ai mis en place au laboratoire deux modèles cellulaires de barrières épithéliales. Le premier modèle est un modèle de barrière épithéliale intestinale constitué par la lignée cellulaire humaine immortalisée, les cellules de colon Caco-2. Le deuxième modèle est un modèle de barrière épithéliale nasale constitué par des cultures primaires de cellules épithéliales nasales humaines issues d’actes chirurgicaux. La perméabilité de quatre principes actifs a été étudiée sur ces modèles, en présence ou en absence de différents lipoaminoacides. Les études in vitro ont montré une augmentation de la perméabilité des molécules d’intérêt, liée à l’ouverture des jonctions intercellulaire, en présence des promoteurs d’absorption. A l’issu de ce travail, plusieurs formulations ont été sélectionnées pour des études précliniques sur l’animal entier. Le modèle de barrière intestinale n’a pas permis de prédire l’absorption in vivo. En effet, les études de l’administration par voie orale in vivo chez le chien n’ont pas pu être corrélées avec les résultats in vitro. En revanche, ce travail de thèse a permis de valider un modèle de barrière épithéliale nasale pour l’étude de la perméabilité de molécules à destinée nasale, qui a été validé par des études in vivo chez le mouton. Les cultures cellulaires mises en place ont donné un aspect qualitatif et non quantitatif des évènements complexes qui se produisent in vivoThe passage of the epithelial barriers constitutes a stage limiting for the absorption of drugs. With the aim of testing in vitro the effectiveness of lipoaminoacids, patented by the company Physica Pharma, as promoters of absorption, I set up at the laboratory two cellular models of epithelial barriers. The first model is a model of intestinal barrier constituted by immortalized human cells, the colon Caco-2 cell line. The second model is a model of nasal epithelial barrier consisting of primary cultures of human nasal epithelial cells available from surgical acts. The permeability of four active drugs was studied on these models. The in vitro studies showed an increase in the permeability of drugs, in the presence of different lipoaminoacids, owing to the opening of the intercellular junctions. From this work, several formulations were selected for preclinical studies on the whole animal. The intestinal model barrier didn’t predict absorption in vivo. Indeed, the in vivo oral absorption studies carried out on the dog could not be correlated with the in vitro results. On the other hand, this work validates an epithelial nasal barrier model for permeability studies of molecules administered by nasal airway, which was validated by in vivo studies in the sheep. Cell cultures gave a qualitative but not a quantitative aspect of the complex events which occur in vivo
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Cottard, Virginie. "Développement et utilisation de vecteurs viraux et cellulaires en thérapie génique anti-inflammatoire : application à un modèle de polyarthrite rhumatoïde." Paris 7, 2003. http://www.theses.fr/2003PA077029.
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Gagnon, Vicky. "Étude des interactions entre les nerfs sensoriels et les follicules pileux dans un modèle in vitro de peau reconstruite par génie tissulaire." Thesis, Université Laval, 2005. http://www.theses.ulaval.ca/2005/22895/22895.pdf.
Full textAbstract:
L’objectif du présent projet était d’optimiser le modèle de peau reconstruite par génie tissulaire déjà mis au point par notre équipe afin qu’il stimule le processus de régénération nerveuse après greffe pour améliorer la récupération tactile des grands brûlés. Nous avons utilisé des follicules pileux murins et des neurones sensoriels extraits des ganglions de la racine dorsale de fœtus de souris et avons posé comme hypothèse que les poils avaient une influence positive sur la migration axonale. Une élongation vigoureuse des neurites a été détectée à l’intérieur du derme reconstruit. En présence de cellules épithéliales, il y a eu une migration préférentielle des axones vers les follicules pileux immatures implantés dans le modèle, migration qui a été suivie d’une association étroite des axones et des follicules pileux. Nous avons donc développé avec succès un modèle nous permettant d’étudier les effets de l’épiderme et des follicules pileux sur la croissance des nerfs.
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Desangle, Valérie. "Recherche d'un phénomène d'induction des cytochromes P450 par un xénobiotique : utilisation d'hépatocytes de rat adulte en culture primaire." Paris 5, 1992. http://www.theses.fr/1992PA05P181.
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Ouvrard-Pascaud, Antoine. "Rôle physiopathologique du récepteur minéralocorticoïde dans le rein et dans le coeur : approches utilisant des modèles conditionnels cellulaires et animaux." Paris 7, 2004. http://www.theses.fr/2004PA077235.
Full textAbstract:
Le récepteur minéralocorticoïde est un facteur de transcription dépendant de sa liaison à l'hormone, l'aldostérone, qui régule la réabsorption terminale de sodium dans le néphron distal (tubule collecteur cortical), participant au contrôle de la volémie et de la pression artérielle. Les cibles moléculaires et voies de signalisation impliquées dans ce processus n'ont pas toutes été déterminées. De plus ce récepteur s'exprime dans d'autres tissus, dont le cœur, où sa fonction reste largement inconnue. A partir d'une lignée cellulaire de rat, nous avons établi un clone permettant l'expression inductible (Cre-lox) d'une protéine de fusion entre le récepteur minéralocorticoïde humain et un marqueur eGFP fluorescent (Ouvrard-Pascaud et al. 2004), qui a été utilisé dans une étude proposant que la translocation nucléaire du récepteur ne soit pas requise pour stimuler la réabsorption du sodium au cours de la phase précoce de la réponse hormonale (1 à 2 heures) (Le Moellic et al. 2004). Nous avons développé des souris transgéniques pour l'expression inductible (tet-OFF) du récepteur minéralocorticoïde humain spécifiquement dans les cardiomyocytes. 50% de ces animaux meurent au cours du développement embryonnaire sans défaut de cardiogenèse. L'histologie cardiaque adulte est normale. Des études d'électrophysiologie sur cellules isolées montrent un allongement du potentiel d'action. Des électrocardiogrammes montrent des extrasystoles et tachycardies ventriculaires. Ce phénotype évoque la survenue de morts subites par troubles du rythme, suggérant une fonction du récepteur dans la signalisation électrique cardiaque et sa possible implication dans des pathologies intégrant des arythmiesThe mineralocorticoid receptor is a transcription factor whose activity dépends on the binding to the hormone, aldosterone, that mediates sodium absorption in the distal nephron (cortical collecting duct), playing a critical role in the control of volemia and arterial pressure. Nevertheless, all the molecular targets and signalization pathways have not yet been identified. Further more, among other tissues, this receptor is also expressed in the heart myocardium where its precise functions remain to be elucidated. Using a rat cell line, we generated a subclone allowing conditional expression (Cre-lox) of a functional fusion protein between the human mineralocorticoid receptor and an eGFP fluorescent tag (Ouvrard-Pascaud et al. 2004). This subclone was used in a study proposing that the nuclear translocation of the receptor is not required for stimulating sodium absorption during the early phase of the hormonal response (1-2 hours) (Le Moellic et al. 2004). We generated two transgenic mice lines that over-express the human mineralocorticoid receptor (tet-OFF) specifically in cardiomyocytes. 50% of the mice die during the embryonic development without any apparent defects on cardiogenesis. Tissue analysis of adult animals indicated normal histology. Electrophysiological studies of isolated cardiomyocytes showed lengthened action potentials. Electrocardiograms revealed conduction defaults with the occurrence of premature ventricular complex and tachycardia. This phenotype suggests a role for the mineralocorticoid receptor in the heart electrical conduction signal and its possible implication in pathologies associated with arrhythmias and an increased risk of sudden death
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Cuffley, Kristine. "Développement par génie tissulaire d'un modèle d'étude in vitro des voies de signalisation des cellules souches du follicule pileux." Thesis, Université Laval, 2005. http://www.theses.ulaval.ca/2005/23211/23211.pdf.
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Gallet, de Saint-Aurin Romain. "Utilisation de dérivés cellulaires d'origine cardiaque au cours de l’ischémie reperfusion et du remodelage post-ischémique." Thesis, Paris Est, 2018. http://www.theses.fr/2018PESC0084/document.
Full textAbstract:
Les maladies ischémiques du myocarde sont actuellement la principale cause de mortalité dans les pays développés. Malgré la diminution des délais de reperfusion et l’amélioration de la prise en charge médicale, la mortalité de l’infarctus du myocarde reste stable. Le développement de nouvelles solutions thérapeutiques reste donc nécessaire. Parmi ces nouveaux traitements, les dérivés cellulaires d'origine cardiaque (obtenues après mise en culture de fragments de biopsies) semblent prometteurs. Ces cellules sont obtenues à partir de biopsies myocardiques qui mises en culture vont spontanément s’organiser en cluster multicellulaires tridimensionnels appelés cardiosphères. La modification des conditions de culture permet ensuite d’obtenir une population de cellules uniques appelés cellules dérivés des cardiosphères (CDCs). Ces CDCs sont capables de diminuer la taille de l’infarctus dans l’infarctus constitué (études précliniques et cliniques) ainsi que dans l’infarctus aigu (ischémie reperfusion). Cependant plusieurs études réalisées chez le petit animal suggèrent que 1. Les cardiosphères pourraient avoir un potentiel thérapeutique supérieur à celui des CDCs et 2. Les exosomes sécrétés par les CDCs semblent être les médiateurs de leur effet, et l’injection des exosomes seuls pourraient permettre d’obtenir le même effet. Néanmoins, aucune étude n’a jusqu’à présent évalué les cardiosphères et les exosomes dans un modèle pre-clinique de gros animal. L’objectif de cette thèse sera donc de comparer les effets des cardiosphères, des CDCs et des exosomes sécrétés par les CDCs dans des modèles porcins d’ischémie reperfusion et d’infarctus constitué.Méthodes : Dans un premier temps, la technique de délivrance du traitement, la dose optimale et la sécurité seront évaluées ; dans un 2e temps des études randomisées contre placebo seront réalisées pour évaluer l’efficacité. Le modèle animal utilisé sera un modèle porcin d’un infarctus du myocarde reperfusé réalisé par occlusion de l’artère interventriculaire antérieure (après la première diagonale) par un ballon d’angioplastie. Pour les études d’ischémie reperfusion, les animaux seront traités 30 minutes après la reperfusion et suivi pendant 48 heures. Pour les études dans l’infarctus constitué, les animaux seront traités 4 semaines après l’infarctus puis suivi 4 semaines supplémentaires. L’efficacité sera évaluée par histologie (étendue du no-reflow et taille de l’infarctus) pour l’ischémie reperfusion, et par IRM (taille de la cicatrice et fonction ventriculaire gauche) pour l’infarctus constitué.Résultats attendus : nous espérons confirmer les résultats obtenus chez le petit animal à savoir démontrer une efficacité de cardiosphères supérieure à celle des CDCs, et une efficacité des exosomes au moins égale à celles des CDCs mais avec un profil de sécurité (notamment immunologique) supérieurBackground: Ischemic heart disease is the first cause of death in western countries. Despite early reperfusion and improvement of medical care, myocardial infarction (MI) mortality remains constant. Therefore new treatments are desirable. Among those new treatments, heart derived cells (obtained from cardiac explants) are promising. Those cells are grown from cardiac explants which, in culture, will spontaneously self-organized in three-dimensional multicellular cluster named cardiospheres. When replated in adherent surface, those cardiospheres will yield to a population of single cells named cardiosphere-derived cells (CDCs). Allogenic CDCs have been shown to decrease infarct size both in convalescent MI (pre-clinical and clinical studies) and in ischemia-reperfusion. However several small animal studies suggest that 1. Cardiospheres may be more potent than CDCs and 2. CDC-secreted exosomes are likely to be the mediator of CDC effect and their injection may recapitulate the effect of CDCs. Nevertheless, no study has assessed the efficacy of cardiospheres and CDC-derived exosomes in a relevant pre-clinical large-animal model. We aim to compare the effect of cardiospheres, CDCs and CDC-derived exosomes in pig models of convalescent MI (adverse remodeling) and acute MI (ischemia reperfusion).Methods: First, delivery, optimal dose and safety will be optimized. Then, randomized placebo-controlled study will be performed to assess efficacy. For all studies, MI will be performed by balloon occlusion of the left anterior descending artery after the 1st diagonal. For the acute studies, pigs will be treated 30 minutes after reperfusion and followed for 48 hours. For the chronic studies, pigs will be treated 4 weeks after MI and followed for 4 additional weeks. Efficacy will be evaluated by histology (no-reflow and infarct size) for the acute studies and by MRI (scar size and left ventricular function) for the chronic studies.Expected results: we expect to confirm the results obtained in small animal models. Efficacy of cardiospheres may be better than CDCs, and exosomes should be at least as effective as CDCs but with a more favorable safety profile (especially immunological)
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Michaud, Jean-Philippe. "Phagocytes mononucléaires dans la maladie d'Alzheimer : caractérisation et stimulation de mécanismes cellulaires promouvant l'élimination de bêta-amyloïde." Doctoral thesis, Université Laval, 2015. http://hdl.handle.net/20.500.11794/25913.
Full textAbstract:
Tableau d'honneur de la Faculté des études supérieures et postdorales, 2014-2015La maladie d’Alzheimer (MA) est la plus fréquente cause de démence mondialement et son incidence augmente en parallèle au vieillissement de la population. La pathogenèse de cette maladie neurodégénérative, actuellement sans traitement curatif, est associée à l’accumulation de bêta-amyloïde (Aβ) dans le parenchyme et la vasculature du cerveau en réponse à l’élimination déficiente de ce peptide neurotoxique. Des évidences épidémiologiques et expérimentales soulignent le rôle crucial du système immunitaire inné dans la MA. Plus précisément, plusieurs études suggèrent que les phagocytes mononucléaires (microglies, monocytes et macrophages cérébraux) constituent des cellules pivots pour combattre l’accumulation d’Aβ. Les études incluses dans cette thèse de doctorat avaient comme objectif d’accroitre les connaissances concernant le rôle des phagocytes mononucléaires dans la pathologie du modèle murin APP/PS1 de la MA. Un nombre croissant d’études indique que les Toll-like receptors (TLRs) seraient critiques pour la clairance d’Aβ par les phagocytes mononucléaires. Nous avons donc étudié le rôle de la protéine adaptatrice myeloid differentiation factor 88 (MyD88), qui permet la transduction du signal intracellulaire de la plupart des TLRs. Nous avons observé une augmentation des niveaux d’Aβ solubles et une aggravation des déficits cognitifs dans les souris APP/PS1 avec une signalisation MyD88 défectueuse, vraisemblablement suite à une réduction de la phagocytose des phagocytes mononucléaires et une coordination défaillante de la réponse immunitaire innée. La stimulation des TLRs pourrait ainsi avoir un grand potentiel thérapeutique pour la MA. Nous avons démontré que des injections systémiques répétées du ligand TLR4 monophosphoryl lipid A (MPL) dans les souris APP/PS1 ont mené à une réduction significative des niveaux d’Aβ et une amélioration des fonctions cognitives. Le MPL induit une forte réponse phagocytique des phagocytes mononucléaires tout en générant une réaction inflammatoire modérée. Finalement, en utilisant la microscopie intravitale biphotonique, nous avons dévoilé que les monocytes patrouilleurs en état basal sont attirés et rampent sur la face luminale de veines contenant de l’Aβ, capturent l’Aβ et ont la capacité de regagner à nouveau la circulation sanguine. L’ablation sélective des monocytes patrouilleurs dans les souris APP/PS1 a induit une augmentation significative des niveaux d’Aβ dans le cortex et l’hippocampe. Ensemble, ces données démontrent que les phagocytes mononucléaires sains et fonctionnels peuvent promouvoir l’élimination d’Aβ et constituent une cible thérapeutique prometteuse pour la MA.
Alzheimer’s disease (AD) is the most common cause of dementia worldwide and its incidence is rising in parallel with the aging population. The pathogenesis of this neurodegenerative disease, currently without curative treatment, is associated with the accumulation of amyloid-β (Aβ) in the brain parenchyma and cerebral vasculature in response to the impaired clearance of this neurotoxic peptide. Epidemiological and experimental evidence underline the crucial role of the innate immune system in AD. More precisely, several studies suggest that mononuclear phagocytes (microglia, monocytes and cerebral macrophages) constitute pivotal cells to fight the accumulation of Aβ. The studies enclosed in this doctoral thesis intended to better understand the role of mononuclear phagocytes on the pathology of the APP/PS1 mouse model of AD. Accumulating evidence indicates a critical role of Toll-like receptors (TLRs) in the clearance of Aβ by mononuclear phagocytes. We thus investigated the role of the myeloid differentiation factor 88 (MyD88), which is the adaptor protein for most of these innate immune receptors, transducing the intracellular signal from TLRs to the nucleus. We observed increased soluble levels of A oligomers and enhanced cognitive deficits in APP/PS1 mice with impaired MyD88 signalling, likely through reduced phagocytosis of mononuclear phagocytes and an impaired coordination of the innate immune response. Compounds that stimulate TLRs to clear Aβ may therefore have great therapeutic potential in AD patients. We demonstrated that repeated systemic injections of the TLR4 ligand monophosphoryl lipid A (MPL) in APP/PS1 mice led to a significant reduction in Aβ load and improved cognitive function. MPL induced a potent phagocytic response by mononuclear phagocytes while triggering a moderate inflammatory reaction. Finally, using live intravital two-photon microscopy, we discovered that patrolling monocytes in steady state are attracted and crawl onto the luminal walls of Aβ-positive veins, uptake Aβ and are able to circulate back into the bloodstream. Selective removal of patrolling monocytes in APP/PS1 mice induced a significant increase of Aβ load in the cortex and hippocampus. Overall, these studies demonstrate that healthy and functional mononuclear phagocytes can promote the elimination of Aβ and constitute a promising therapeutic target for AD.
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Beauchamp, Philippe. "Effets protecteurs du préconditionnement de cellules endothéliales de rat en culture. Effets sur l'adhésion des neutrophiles et sur l'expression d'ICAM-1 après anoxie et réoxygénation." Rouen, 1999. http://www.theses.fr/1999ROUES069.
Full textAbstract:
Lors de l'ischémie, le rétablissement de la circulation sanguine est la solution la plus utilisée malgré la survenue d'anomalies cardiaques et vasculaires. Les effets délétères de l'ischémie et de la reperfusion ne se limitent pas au myocarde mais s'étendent à la paroi vasculaire et en particulier aux cellules endothéliales. Au vu du rôle majeur de ces cellules dans la régulation des fonctions vasculaires, la prévention des altérations endothéliales induites par la reperfusion post-ischémique constitue une cible thérapeutique majeure. Le préconditionnement par des épisodes brefs d'ischémie correspond à l'intervention anti-ischémique la plus puissante connue à ce jour. Ses effets protecteurs, décrits initialement au niveau myocardique, s'étendent également à la cellule endothéliale coronaire. Néanmoins, les mécanismes des effets protecteurs du préconditionnement au niveau endothélial restent inconnus. L'étude de ces mécanismes ne peut pas être réalisée in vivo, du fait des effets indirects liés à la protection myocardique, et nécessite la mise en place de modèles in vitro. Ces études permettent d'évaluer l'interaction neutrophile-endothélium qui constitue un mécanisme central des lésions endothéliales lors de la reperfusion. Dans ce but, un protocole d'anoxie-réoxygenation de cellules endothéliales en culture est développé pour mimer l'ischémie et le préconditionnement. Une augmentation de l'adhésion de neutrophiles aux cellules endothéliales est corrélée avec l'induction de l'ARNm et de la protéine ICAM-1 apràs anoxie-réoxygenation. Ces inductions et l'adhésion de neutrophiles sont en partie prévenues par le préconditionnement. La phase précoce du préconditionnement est médiee par les radicaux libres, le NO et la PKC. Tandis que la phase retardée est caractérisée par l'augmentation spécifique de l'activité de la Cu/ZnSOD et du taux de glutathion, garantissant un potentiel antioxydant à la cellule, et elle est régulée par l'activation du facteur de transcription AP-1, conduisant à la transcription et la traduction de la NO-synthétase II, effecteur potentiel du préconditionnement retardé. Les effets protecteurs endothéliaux du préconditionnement sont donc liés à une expression de molécules d'adhésion réduite, conduisant à une moindre adhésion des neutrophiles à l'endothélium.
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Mordant, Pierre. "Cancer bronchique primitif, voies de signalisation intra-cellulaires et modèles précliniques." Phd thesis, Université Paris Sud - Paris XI, 2012. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00809668.
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Contexte. Le cancer bronchopulmonaire (CBP) demeure la première cause de mortalité par cancer dans le monde. Malgré l'espoir suscité par le développement des thérapies ciblées, son pronostic demeure sombre, particulièrement dans les cas de CBP à petites cellules (CBP-PC) et de CBP non à petites cellules (CBP-NPC) présentant une activation de l'oncogène KRAS. Matériel et Méthodes. Nous avons mené 3 études successives, visant à (i) radiosensibiliser des modèles de CBP-PC par l'ajout d'un inhibiteur de BCL2, (ii) cibler des modèles de CBP-NPC mutés KRAS par l'association d'un inhibiteur de mTOR et d'un inhibiteur de RAF, et (iii) créer un modèle préclinique orthotopique murin de CBP reproduisant la progression tumorale observée en clinique. Résultats. Dans la première étude, l'inhibiteur de BCL2 oblimersen a présenté un effet radiosensibilisant sur des modèles de CBP-PC, in vitro et in vivo. Dans la seconde étude, l'association de l'inhibiteur de mTOR everolimus et de l'inhibiteur de RAF/VEGFR RAF265 a présenté un effet synergique sur des lignées cellulaires de cancers présentant la double mutation de KRAS et de PIK3CA, in vitro et in vivo. Dans la troisième étude, l'injection orthotopique d'une lignée bioluminescente de CBP-NPC chez des souris nude a permis d'établir des tumeurs intra pulmonaires évoluant vers une extension métastatique ganglionnaire et hématogène, et de détecter la présence de cellules tumorales circulantes. Conclusion. L'association d'un inhibiteur de BCL2 à la radiothérapie est une stratégie intéressante dans le CBP-PC, l'association d'un inhibiteur de mTOR et d'un inhibiteur de RAF/VEGFR est une stratégie intéressante dans le CBP-NPC présentant une double mutation KRAS-PIK3CA, mais ces données doivent être confirmées sur des modèles orthotopiques afin de gagner en pertinence avant d'envisager un transfert en clinique.
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Bouchard, Caroline. "Régulation transcriptionnelle du GPR84, un nouveau récepteur couplé aux protéines G exprimé par la microglie dans des conditions inflammatoires." Thesis, Université Laval, 2007. http://www.theses.ulaval.ca/2007/24392/24392.pdf.
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Genty, Christian. "Réponse in vitro des cellules ostéoformatrices aux stimuli mécaniques : étude en microgravité réelle et sur les modèles animaux après surcharge et décharge mécanique." Saint-Etienne, 1993. http://www.theses.fr/1993STET4013.
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Les variations de contraintes mécaniques appliquées sur l'os entrainent des modifications du métabolisme osseux. La diminution des contraintes mécaniques telle qu'elle existe dans le modèle du rat suspendu, induit une perte osseuse rapide dès le début de la suspension qui se stabilise par la suite. L'augmentation des contraintes par un exercice de type dynamique (la course sur tapis roulant) induit un gain osseux. Les mécanismes cellulaires responsables de ces modifications sont encore mal connus. Grâce à la mise au point d'une méthode d'isolement des cellules ostéoformatrices à partir du tibia de rat, nous avons pu isoler les cellules des facteurs environnementaux et les maintenir en culture primaire. Les études in vitro sur les différents modèles animaux précités, ont permis de montrer que la diminution de contrainte entraine une inhibition de la maturation des ostéoblastes conduisant à une perte osseuse, qui cesse dès que les contraintes sur l'os se retrouvent au niveau initial. Inversement, l'exercice stimule la différenciation des ostéoblastes en ostéoblastes matures aboutissant à un gain osseux qui diminue les contraintes mécaniques de l'os. Nous avons pu étudier l'effet direct de la microgravité sur les cellules ostéoblastiques grâce au développement d'un module de culture et de techniques d'investigations adaptées aux conditions expérimentales du vol spatial biocosmos x. Les résultats de cette expérience ont montré que la cellule ostéoblastique est capable de s'adapter à son nouvel environnement physique en modifiant son activité cellulaire et l'organisation de son cytosquelette. Nous pensons que les contraintes mécaniques pourraient avoir une influence sur le cytosquelette des ostéoblastes qui modifierait l'activité cellulaire, permettant à l'os de s'adapter à son nouvel environnement
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Barateau, Alice. "Effets pléiotropes de la lamine A mutée en un site responsable de dystrophie musculaire congénitale : recherche translationnelle, de la clinique aux modèles cellulaires et animaux." Thesis, Sorbonne Paris Cité, 2016. http://www.theses.fr/2016USPCC134/document.
Full textAbstract:
Des centaines de mutations du gène LMNA codant les lamines A/C, protéines nucléaires de la famille des filaments intermédiaires, causent des pathologies. Pour ma thèse, j’ai étudié la mutation LMNA p.R388P, nouvellement identifiée comme responsable de dystrophie musculaire congénitale (L-CMD) associée à une lipodystrophie. Mes objectifs étaient de caractériser les propriétés des lamines mutées et leur impact dans des cellules et dans un muscle squelettique.Résultats : 1) La culture ex vivo de fibroblastes de peau de la patiente a révélé leur entrée prématurée en sénescence. 2) Dans des modèles de cellules immortalisées, la lamine A mutante surexprimée, qui s’accumule exclusivement dans le nucléoplasme et est anormalement soluble a modifié les propriétés de ses partenaires LAP2α et émerine, augmenté le nombre de gènes liés par les lamines A, diminué la compaction de la chromatine et induit des dysmorphies nucléaires. Le traitement des cellules avec des inhibiteurs d’histones acétyltransférases ou désacétylases n’a pas restauré la forme des noyaux. 3) Dans le muscle tibial antérieur de souris injecté avec des virus adéno-associés codant les lamines A mutantes, le nombre de fibres oxydatives de type IIA est diminué et l’expression de quelques gènes est modifiée.Conclusion : Nous avons montré que les lamines A R388P altèrent la structure du noyau, l’intégrité de l’enveloppe nucléaire et l’organisation/expression du génome, avec des conséquences sur le typage des fibres de muscle squelettique. De par ses effets pléiotropes, la lamine A mutante apparaît particulièrement toxique, en accord avec la sévérité de la pathologie observée chez la patienteHundreds of mutations in the LMNA gene coding lamins A/C, nuclear intermediate filament proteins, cause several diseases. For my thesis, I studied the p.R388P LMNA mutation, newly identified as responsible for congenital muscular dystrophy (L-CMD) associated with lipodystrophy. My goals were to determine the properties of the mutant lamin A and its impact in cells and a skeletal muscle.Results: 1) Ex vivo culture of patient skin fibroblasts revealed their premature entry into senescence. 2) In immortalised cell lines, the overexpression of the mutant lamin A, which accumulates exclusively in the nucleoplasm and is abnormally soluble, modified the properties of two partners, LAP2α and emerin, increased the amount of genes bound by lamin A, decreased the compaction of chromatin and induced nuclear dysmorphies. Treatment of cells with histone acetyltransferase or deacetylase inhibitors did not rescue nuclear shape. 3) In mouse tibialis anterior muscle injected with adeno-associated virus coding for mutant lamin A, the number of oxidative type IIA myofibres was decreased and expression of few genes modified. Conclusion: We showed that R388P lamins A alter the structure of nuclei, nuclear envelope integrity and the organisation/expression of the genome, with consequences on skeletal muscle fibre typing. Because of its pleiotropic effects, the mutant lamin A appears particularly toxic, in agreement with the severity of the patient’s disease
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Warter, Lucile. "Etude des déterminants de la réplication du virus GB-B en culture cellulaire et in vivo : développement d'un modèle d'étude du virus de l'hépatite C." Paris 7, 2008. http://www.theses.fr/2008PA077076.
Full textAbstract:
L'infection par le virus de l'hépatite C représente un problème majeur de santé publique. L'étude de l'infection par ce virus, ainsi que le développement de thérapies spécifiques au VHC sont néanmoins freinés par l'absence de petits modèles animaux sensibles à ce virus. Dans ce contexte, le virus GB-B (GBV-B), un virus hépatotrope et le plus proche parent du VHC, qui infecte des petits primates du nouveau monde (marmousets et tamarins), constitue un modèle de substitution intéressant pour étudier le VHC. Dans cette thématique, nous avons construit un système d'ARN sous-génomique du GBV-B, ou réplicon, capable de réplication en culture cellulaire. Grâce à ce système, nous avons mis en évidence le rôle déterminant des domaines I et II de la région 5' non codante (5'NC), ainsi que des protéines non structurales NS3, NS4A et NS5A du GBV-B, dans la réplication du génome viral en culture cellulaire. Le système de réplicon a également permis de montrer que 3 mutations identifiées comme étant essentielles à l'infectiosité chez le tamarin d'un génome chimérique du GBV-B contenant le domaine III de la région 5'NC du VHC, n'ont pas d'effet sur la traduction et la réplication de l'ARN chimérique en culture cellulaire. Par ailleurs, nous nous sommes attachés à construire des réplicons chimériques du GBV-B codant la polymérase NS5B du VHC, dans l'objectif de tester chez le petit primate infecté par un virus chimérique GBV-B/VHC correspondant des antiviraux ciblant spécifiquement NS5B du VHC. Enfin, nous avons exploré l'infectiosité chez le marmouset du clone moléculaire du GBV-B utilisé au laboratoireHepatitis C virus (HCV) infection represents an important public health concern. The study of HCV infection, as well as the development of specific drugs to combat this infection, have been hampered by the lack of small animal models susceptible to HCV. In this context, GB virus B (GBV-B), an hepatotropic virus which infects small South America non-human primates (marmosets and tamarins) and which is closely related to HCV, constitutes an interesting surrogate model to study HCV. For these reasons, we have developed a dicistronic subgenomic GBV-B RNA (replicon) which autonomously replicates in cell culture. Using this replicon System, we showed that proximal domains I and II of the GBV-B 5' nontranslated region (5'NTR), as well as GBV-B nonstructural proteins NS3, NS4A and NS5A are critical determinants for RNA réplication in vitro. Using the GBV-B replicon, we also showed that mutations within the 3'NTR and NS5A encoding sequence identified as essential for the in vivo infectivity of a chimeric GBV-B genome comprising the domain III of the HCV 5'NTR, do not act in translation or replication of the chimeric replicon in cell culture, but rather at a later stage of the virus life cycle, possibly for viral particle assembly. Moreover, we have undertaken to create GBV-B/HCV chimeric replicons encoding HCV polymerase NS5B, in the aim to develop a System to assess the efficiency of antiviral drugs targeting HCV NS5B in small primates infected by a corresponding GBV-B/HCV chimeric virus. Finally, we have investigated the infectivity of the GBV-B molecular clone used in the laboratory in marmosets
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Boa, Olivier. "Analyse in vivo du remodelage à long terme de la peau reconstruite endothélialisée et de son réseau vasculaire et étude in vitro de la pseudo-vasculogénèse lors du développement tumoral au sein de la peau reconstruite endothélialisée." Thesis, Université Laval, 2007. http://www.theses.ulaval.ca/2007/24705/24705.pdf.
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Mokondjimobe, Etienne. "Hexosaminidase (HEX) et phosphatase alcaline (PAL) du cartilage articulaire de lapin et des chondrocytes en culture ; modifications au cours du vieillissement et de l'arthrose (modèles in-vivo et in-vitro)." Paris 5, 1990. http://www.theses.fr/1990PA05P607.
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Guyot, Christelle. "Caractérisation et activation des différentes cellules fibrogéniques hépatiques : utilisation du modèle "tranche de foie" en culture." Bordeaux 2, 2006. http://www.theses.fr/2006BOR21344.
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La fibrose hépatique est caractérisée par l'accumulation de matrice extracellulaire synthétisée par les cellules fibrogéniques activées : les myofibroblastes. Nous avons développé un modèle de culture de tranches de foie de précision (TFP) permettant le maintien de l'architecture hépatique. Nous avons étudié l'effet d'acides biliaires sur les TFP et montré qu'ils présentent des effets individuels spécifiques sur l'activation, la survie et l'apoptose des cellules hépatiques. Nous avons étudié des tissus fibreux en culture de TFP et mis en évidence des différences dans le remodelage de ce tissu en fonction des cellules fibrogéniques impliquées : cellules étoilées du foie ou fibroblastes portaux. Nous avons montré via l'étude de l'expression de la smootheline que les cellules musculaires lisses pouvaient acquérir un phénotype myofibroblastique et particiuper à la fibrogenèse. Ces données renforcent le concept d'hétérogénéité des cellules myofibroblastiques impliquées dans la fibrogenèseHepatic fibrosis results from excessive extracellular matrix deposition by activated fibrogenic cells deriving from precursor cells, hepatic stellate cells (HSC) and portal fibroblasts (PF) which acquire a myofibroblastic phenotype. We have developed an organotypic model of precision cut liver slice (PCLS) culture in which cell-cell and cell-matrix interactions are maintained. We studied the effect of bile acids on PCLS and we shown that individual bile acids induce specific effects on activation, proliferation and apoptosis of hepatic cells. We studied fibrotic tissue remodeling in PCLS, and our data showed that fibrogenic cells behave differently in cultured PCLS depending on the fibrogenic cell type involved : HSC or PF. Finally, studying the expression of smoothelin, we showed that smooth muscle cells may also acquire a myofibroblastic phenotype and participate in fibrotic lesions. These data strengthen the concept of liver fibrogenic cell heterogeneity participating in fibrotic lesions
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Rebaudo, François. "Modélisation de la dynamique spatio-temporelle d'insectes ravageurs des cultures dans des systèmes socio-écologiques." Phd thesis, Université Pierre et Marie Curie - Paris VI, 2012. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00836104.
Full textAbstract:
Les systèmes socio-écologiques sont omniprésents et la compréhension de leur fonctionnement est devenue une priorité pour aborder de manière commune et précise les questions soulevées par l'action de l'homme sur son environnement, mais aussi pour identifier des trajectoires et explorer des scénarios prospectifs sur la base desquels, une stratégie de pilotage pourrait être envisagée. Appliquée à un ravageur des cultures dans le nord des Andes, l'approche de ces systèmes par un modèle d'automate cellulaire a permis d'identifier les facteurs humains clefs de sa dispersion et de disposer de cartes de probabilité de présence. Par la suite, l'intégration de variabilité génétique par un modèle individu-centré a facilité l'exploration de scénarios de structuration des populations de ravageurs. Pour une meilleure compréhension de la dynamique spatio-temporelle de ces derniers, une approche à base d'agents, théorique puis empirique, a fourni des éléments d'explication des délais observables entre la mise au point d'une technique de protection des cultures et son application par les agriculteurs d'une petite région agricole, par un modèle de diffusion de l'information couplé aux approches précédentes. Afin d'exploiter ces résultats et suite à une recherche participative fructueuse dans la zone d'étude, une méthode innovante basée sur un modèle a été insérée dans un programme de formation d'agriculteurs pour souligner la nécessité d'une approche systémique pour une protection des cultures efficace. Malgré certaines limitations, ces approches pourraient être applicables plus largement à tout programme agricole dans des systèmes socio-écologiques.
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Clément, Laurence. "Effets des lipides sur le contrôle nerveux de l'homéostasie glucidique chez le rat : aspects cellulaires et moléculaires." Paris 11, 2002. http://www.theses.fr/2002PA11T025.
Full textAbstract:
Le diabète de type 2 représente aujourd'hui 90 à 95% des cas de diabète. Il est caractérisé par une insulino-resistance et une altération de la fonction sécrétrice des cellules β-pancréatiques, responsables d'une hyperglycérrùe chronique. Les mécanismes mis en cause dans cette atteinte pancréatique restent actuellement mal compris. Dans une étude préliminaire nous avons démontré que le dysfonctionnement de la cellule β-pancréatique est partiellement dû à une action délétère des acides gras sur le système nerveux sympathique. L'objectif de cette thèse a été de déterminer les mécanismes cellules et moléculaires mis en jeu par les lipides pour altérer la régulation nerveuse de l'homéostasie glucidique. Grâce à un modèle de rat Wistar perfusé par voie intracérébroventriculaire d'une émulsion de triglycérides et d'héparine, nous avons démontré que les lipides peuvent agir sur le système nerveux central pour induire une hyperréponse insulino-sécrétoire au glucose. L'effet des lipides pourrait être relayé par une diminution du tonus sympathique pancréatique, comme en témoigne la mesure du renouvellement pancréatique de la noradrénaline. La sensibilité hépatique à l'insuline est également altérée chez ces rats, associés à une hypercorticostéronémie. Notre objectif a ensuite été de déterminer les mécanismes moléculaires mis en jeu par les lipides au niveau central. L'analyse du transcriptome de l'hypothalamus de ces rats nous a permis de montrer que les lipides induisent des modifications d'expression de certains gènes pouvant être impliqués dans ces altérations métaboliques, notamment le récepteur de la leptine. Nous nous sommes également intéressés à l'effet de l'augmentation des taux d'acides gras circulants sur les caractéristiques de liaison des récepteurs α2A adrénergiques des cellules β pancréatiques, responsables de l'inhibition de la réponse insulino-sécrétoire au glucose par la noradrénaline. Nous avons observé une diminution du nombre de ces récepteurs et une augmentation de leur affinité qui pourrait être liée à des remaniements de la composition membranaire en phospholipides des îlots de Langerhans. Pour conclure, toutes ces données indiquent que l'effet diabétogène des acides gras n'est pas seulement dû à des modifications du métabolisme du glucose, mais aussi à des altérations de la transmission de l'influx nerveux vers le pancréas, et à des modifications neurophysiologiques, probablement via un effet sur l'hypothalamusType 2 diabetes represents 90 to 95% of all cases of diabetes and is characterised by insulinresistance along with an alteration pancreatic β-cell insulin secretion, resulting in chronic hyperglycemia. The mechanisms responsible for such alterations are not fully understood. In a preliminary study, we found that β-cell dysfunction partly results from a deleterious effect of free fatty acids (FFA) on the sympathetic nervous system. The aim of this work was to determine the molecular and cellular mechanisms implicated in the alteration of nervous regulation of glucose homeostasis by lipids. In Wistar rats infused intracerebroventricularly with a triglyceride emulsion and heparin, we found that lipids may act on the central nervous system (CNS) to induce an increase in glucose-induced insulinsecretion (GIIS). As shown by the pancreatic turnover of norepinephrine, the effect of lipids is probably mediated by a decrease in the sympathetic output to the pancreas. We also found a decreased liver insulin sensitivity in these rats, associated with a hypercorticosteronernia. Consequently, our aim was to determine the molecular mechanisms les mécanismes cellulaires implicated in the action of lipids on the CNS. Microarray studies of the hypothalamic RNA of these rats showed that lipids induce transcriptional changes of specifie genes, which could account for the metabolic alterations, such as the leptine receptor. We then focused on the binding characteristics of pancreatic β-cell α2A adrenergic receptors in response to elevated circulating FFA levels. These receptors have been shown to mediate inhibition of GIIS by norepinephrine. We found a decreased number and an increased affinity of these receptors. We also found that FFA induce changes in islet membrane phospholipidic composition, which may account for the increased affinity of the receptors. We conclude that these data suggest that the diabetogenic effect of FFA may not only result from changes in glucose metabolisme, but also from alterations in the sympathetic nervous output to the pancreas, and to neurophysiologie modifications, probably mediated by changes in hypothalamic activity
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Krezymon, Alice. "Altérations cellulaires hippocampiques liées à l'âge et récupération cognitive induite par un enrichissement environnemental chez les souris Tg2576 modèles de la maladie d’Alzheimer." Toulouse 3, 2012. http://thesesups.ups-tlse.fr/1923/.
Full textAbstract:
Afin comprendre les mécanismes cellulaires qui sous-tendent le développement de la maladie d'Alzheimer (MA), nous avons utilisé des souris transgéniques (Tg2576) qui développent des altérations phénotypiques mimant certains aspects de la MA. Nous avons révélé qu'au cours du développement de la MA, la neurogenèse hippocampique est altérée chez les jeunes souris Tg2576 et qu'un remodelage du réseau neuronal de l'hippocampe pourrait contribuer aux déficits de mémoire. D'autre part, il a été suggéré que les facteurs environnementaux pourraient diminuer le risque de développer la MA chez l'Homme. L'hypothèse de la "réserve cognitive" propose que les stimulations cognitives induisent des modifications durables du cerveau, le rendant plus résistant à la démence et aux atteintes cellulaires. L'exposition précoce des souris à un environnement enrichi restaure les performances de mémoire et réduit la formation de plaques amyloïdes dans le cerveauTo understand the cellular mechanisms underlying the development of Alzheimer's disease (AD), we used transgenic mice (Tg2576) that develop phenotypic alterations mimicking some aspects of AD. We found that during the development of AD, hippocampal neurogenesis is impaired in young Tg2576 mice and a remodeling of the neural network of the hippocampus may contribute to memory deficits. On the other hand, environmental factors have been suggested to impact the risk and development of AD. The "cognitive reserve" hypothesis proposes protective effects of complex experiences, such as sustained cognitive engagement, against dementia. We found that transient enriched housing of young mice to an enriched environment restores memory performance and decreases senile plaque formation in neo-cortical areas
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Puig, Stéphanie. "Etude intégrée des variations comportementales, neurochimiques et cellulaires de la cocaïne : Analyse des variations à court et à long terme : Importance du profil d’administration et anticipation de l’effet renforçant de la drogue." Thesis, Paris 5, 2012. http://www.theses.fr/2012PA05P620/document.
Full textAbstract:
La prise répétée de cocaïne entraine la mise en place d’une addiction durable. Cette maladie neuropsychiatrique est un problème de santé public majeur en France et dans le monde. Les effets aigus de la cocaïne sont maintenant bien connus mais il est encore difficile d’établir un consensus des conséquences d’une administration répétée de ce psychostimulant au niveau central. En effet, les résultats rapportés dans la littérature actuelle présentent de nombreuses disparités. Nous pensons que cela pourrait être dû aux différences de protocole d’administration utilisés par chaque laboratoire. Nous émettons l’hypothèse que si à l’heure actuelle il n’existe pas de traitement efficace pour traiter les cocaïnomanes, c’est que les thérapies ne prennent pas en compte les différentes modifications neurobiologiques induites par les différents profils de consommation. Afin de tester cette hypothèse, nous avons comparé deux profils d’administration différents de cocaïne chez le rat. Nous nous sommes intéressés aux conséquences comportementales, neurochimiques et cellulaires après un sevrage court et un sevrage long. Nous avons mis en évidence que les adaptations comportementales (activité locomotrice et exploratoire), neurochimiques (dopamine extracellulaire) et cellulaires (récepteurs dopaminergiques) basales et en réponse à une dose de rappel, sont différentes selon le profil d’administration de cocaïne. Nous avons également mis en évidence une anticipation neurochimique dopaminergique et locomotrice, exactement à l’heure habituelle d’injection et qui varie selon le profil d’administration. Dans un deuxième temps, nous avons montré que le BDNF (Brain Derived Neurotrophic Factor), qui est une neurotrophine du système catécholaminergique, varie à la fois au niveau central et au niveau périphérique, de façon spécifique pour chaque profil d’administration de cocaïne. L’utilisation en clinique de ce biomarqueur périphérique (BDNF), permettrait d’évaluer les variations neurobiologiques centrales chez les patients cocaïnomanes et d’établir un traitement thérapeutique approprié à leur profil de consommation. L’ensemble des résultats obtenus au cours de cette thèse, ont permis de montrer que le profil d’administration a une grande importance sur les conséquences neurobiologiques de la cocaïnePas de résumé en anglais
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Gingras, Marie. "Application du génie tissulaire à l'étude du système nerveux périphérique sensoriel et moteur." Thesis, Université Laval, 2007. http://www.theses.ulaval.ca/2007/24182/24182.pdf.
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Morin, Sophie. "Relations cellulaires et moléculaires entre myoblastes et fibroblastes au cours de la régénération musculaire chez le mutant mdx, modèle murin de la myopathie de Duchenne." Bordeaux 2, 1994. http://www.theses.fr/1994BOR28320.
Full textAbstract:
La relation murine mdx est une mutation liée au sexe qui présente des caractéristiques biochimiques et histopathologiques communes avec la myopathie de Duchenne. Notre objectif est de déterminer pourquoi le muscle mdx ne présente pas la dégénérescence progressive que l'on observe dans le muscle humain DMD. Nous avons développé pour cela deux hypothèses non-exclusives qui concernent d'une part la capacité de réplication des fibroblastes musculaires et d'autre part la composition de la lame basale musculaire. L'analyse de la capacité de réplication des fibroblastes musculaires mdx in vitro a montré que la multiplication de ces cellules est diminuée pendant la phase aigue de la maladie et totalement inhibée chez les souris mdx âgées de 8 semaines. La préparation de milieu conditionné a permis de déterminer que les fibroblastes libèrent un facteur qui inhibe spécifiquement leur propre réplication. L'étude de la MEC en immunofluorescence a montré que la cellule musculaire mdx est plus riche en laminine et en HSPG que celle du muscle témoin. L'analyse par immunoblot et densitométrie a confirmé cette observation. Par contre, dans le cas du muscle DMD, l'intensité de fluorescence est plus faible pour la laminine et l'HSPG que sur les coupes de muscle humain témoin. A partir de ces résultats nous pouvons émettre l'hypothèse selon laquelle l'augmentation des composants de la lame basale et l'arrêt de réplication des fibroblastes pourraient être au moins partiellement responsables de la régénération musculaire observée chez la souris mdxThe mdx mouse is an X-linked muscular dystrophic mouse presenting biochemical and histopathological features similar to those seen in DMD. Our purpose was to understand why mdx muscle fails to show the progressive degeneration which is observed in DMD. We have hypothesized that this difference may be associated 1) with the proliferation capacity of muscle fibroblasts and 2) with a modfication of the expression of basal lamina components. The in vitro analysis of mdx muscle fibroblast proliferation showed that during the acute phase of the disease the muscle fibroblasts lost approximately 50 % of their replication capacity, and 8-week-old mdx mouse muscle fibroblasts failed to replicate. Conditioned medium experiments revealed that these cells release an inhibition factor, specific for fibroblasts. The study of ECM showed an increase in immunofluorescence staining of laminin and HSPG in mdx muscle, especially in regenerating areas. Immunoblot and densitometric analysis confirmed these observations. On the contrary, DMD muscle, laminin and HSPG levels were lower than in control human muscle. These results suggest that the increase of basal lamina components and the proliferation arrest of muscle fibroblasts could be, at least partly, responsible for the successful regenerative process observed in mdx mouse muscle
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Montbarbon, Muriel. "Régulation de la réponse inflammatoire intestinale par la fumée de cigarette : caractérisation des mécanismes cellulaires et moléculaires chez la souris." Phd thesis, Université du Droit et de la Santé - Lille II, 2013. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00951219.
Full textAbstract:
L'étiologie et le développement des maladies inflammatoires chroniques de l'intestin (MICI), dont la maladie de Crohn (MC) et rectocolite hémorragique (RCH), sont encore mal compris. Il s'agit de maladies multifactorielles caractérisées par une dérégulation de la réponse immunitaire des muqueuses chez des individus génétiquement prédisposés, sous l'influence de facteurs environnementaux. À ce jour, seuls le tabagisme et l'appendicectomie sont décrits comme capables d'influencer le développement des MICI. Le rôle du tabac est ambivalent : il protège de la RCH mais aggrave le risque d'apparition de la MC. Néanmoins, malgré une littérature relativement abondante, il est à l'heure actuelle impossible d'assigner définitivement des propriétés immunomodulatrices particulières au tabac. De plus, aucun des modes d'actions du tabac proposés n'explique l'ambivalence observée entre la MC et la RCH. L'hypothèse la plus probable est celle d'un effet du tabac différent sur le côlon et l'intestin grêle.Partant de ces observations cliniques, ce travail a pour but de caractériser un (ou plusieurs) des mécanismes impliqués dans le rôle immunomodulateur du tabac d'une part au niveau du côlon et d'autre part au niveau de l'iléon, afin de réaliser une analyse différentielle sur ces deux organes.Deux modèles d'étude ont été mis en place sur des souris C57Bl/6. Les souris sont pré-exposées pendant 2 semaines à la fumée de cigarette via un protocole standardisé qui permet de mimer au mieux le tabagisme humain. Lors de la troisième semaine, l'inflammation est provoquée soit au niveau du côlon (traitement au DSS (Dextran Sodium Sulfate)), soit au niveau du grêle (traitement à l'indométacine). Chez les souris sauvages, l'exposition à la fumée de cigarette réduit significativement l'expression clinique de la colite et diminue l'expression des cytokines pro-inflammatoires Th1/Th17 dans le côlon. Cette protection est spécifique au côlon : aucune différence n'a pu être observée sur les paramètres cliniques de l'inflammation dans le modèle d'iléite.L'analyse des populations cellulaires met en évidence une augmentation de la proportion de lymphocytes iNKT au niveau du foie et du côlon (mais pas au niveau du grêle) des souris exposées. Ces cellules sont indispensables à l'effet protecteur lié à la fumée de cigarette au niveau du colon. En effet, la protection contre la colite au DSS liée à la fumée est abolie chez des souris déficientes en cellules NKT fonctionnelles. Par contre, dans le modèle d'iléite à l'indométacine, les souris déficientes en NKT montrent une sensible diminution de l'inflammation iléale lorsqu'elles sont exposées à la fumée de cigarette.Ces résultats semblent indiquer que les cellules iNKT joueraient un rôle différent en fonction de leur localisation dans le tractus intestinale, ou que des sous-populations différentes de cellules iNKT seraient impliquées dans le contrôle immunitaire dans le côlon et l'intestin grêle.Ce travail démontre clairement que, expérimentalement, la fumée de cigarette protège les souris de la colite mais pas de l'iléite. Pour la première fois, les cellules iNKT ont été identifiées comme ayant un rôle majeur dans la protection du côlon liée à la fumée de cigarette, tout en jouant potentiellement un rôle différent au niveau de l'iléon.Cette thèse apporte des données nouvelles et originales dans le domaine de la régulation de l'inflammation intestinale notamment par la fumée de cigarette, un facteur environnemental largement répandu. En outre, cibler les cellules iNKT pourrait constituer un nouveau moyen de contrôle de l'inflammation intestinale. La conception de nouvelles molécules agissant sur la polarisation des cellules iNKT pourrait faire l'objet d'une nouvelle voie thérapeutique visant à diminuer l'inflammation colique, en particulier au cours de la RCH.
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Ragazzon, Bruno. "Contrôle hormonal de la stéroïdogenèse et tumorigenèse cortico-surrénalienne : utilisation de la trangenèse chez la souris pour le développement de nouvelles lignées cellulaires et de modèles animaux de pathologies tumorales par oncogenèse ciblée." Phd thesis, Université Blaise Pascal - Clermont-Ferrand II, 2005. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00686939.
Full textAbstract:
L'utilisation de transgènes actifs dans le cortex surrénalien de souris a permis de dériver de nouvelles lignées cellulaires de la zone fasciculée de la corticosurrénale (lignées ATC) et de tester le pouvoir transformant de gènes candidats au développement de tumeurs corticosurrénaliennes. Les cellules ATC produisent de la corticostérone et expriment l'ensemble des gènes impliqués dans la stéroïdogenèse sous le contrôle de l'ACTH. Elles ont permis d'explorer les rôles antagonistes des facteurs de transcription SF1 et DAX1 dans le mécanisme d'action de l'ACTH. Les modèles cellulaires et murins surexprimant IGF2 ou ayant perdu en partie l'expression de p57kip2 ont conduit à rejeter leur implication individuelle dans le développement des corticosurrénalomes. Nous avons montré que l'expression dans la corticosurrénale de souris d'une sous unité régulatrice RIalpha tronquée de la PKA reproduit l'hyperactivité endocrine rencontrée dans les hyperplasies micronodulaires pigmentées des surrénales
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Wautot, Virginie. "Le gène de prédisposition aux Néoplasies Endocriniennes Multiples de type 1 : analyse des mutations chez les patients et étude de l'expression et de l'inactivation du gène NEM1 dans des modèles cellulaires et animaux." Lyon 1, 2001. http://www.theses.fr/2001LYO1T065.
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Plachez, Céline. "Etude des transporteurs du glutamate au cours du développement "in vitro" des neurones hippocampiques." Montpellier 2, 2001. http://www.theses.fr/2001MON20002.
Full textAbstract:
Le glutamate, principal neurotransmetteur excitateur du snc de mammifere adulte, a un role neurotrophique au cours du developpement. La regulation de son taux extracellulaire par des transporteurs s'avere importante. Cinq transporteurs existent : glast et glt localises sur les astrocytes et eaac, eaat4 et eaat5 situes sur les neurones. L'expression et la fonctionnalite de glast, glt et eaac ont ete etudiees au cours du developpement in vitro de neurones hippocampiques de rat. Eaac, est exprime par les neurones, mais glast et glt, presents sur les cellules gliales, sont aussi exprimes transitoirement par les neurones. A de fortes concentrations de glutamate, l'activite de transport croit avec l'age de la culture. A de faibles concentrations, un pic transitoire de capture est observe. Ce pic, n'etant pas altere par le dihydrokainate, un inhibiteur specifique de glt, pourrait etre relie a l'activite de glast sur les neurones. Pour elucider la disparition de l'expression neuronale de glast et de glt, des milieux conditionnes par des astrocytes matures ont ete ajoutes a des cultures neuronales, et des neurones ont ete cultives sur un tapis glial mature (co-culture). Seule l'expression neuronale de glast disparait sous l'effet de milieux conditionnes gliaux. Les expressions neuronales de glast et de glt sont reprimees dans les co-cultures. Ces expressions sont donc regulees par des interactions neurones-glie, mais par des mecanismes differents. L'immunohistochimie d'hippocampes a des stades precoces du developpement montre que glast et glt sont exprimes in vivo par des neurones. Cette expression neuronale de glast et de glt pourrait jouer un role au cours du developpement.
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Mateu, Guylaine. "Toxicité du glutamate sur des cultures primaires de neurones mésencéphaliques de la substance noire de rat." Montpellier 2, 1997. http://www.theses.fr/1997MON20257.
Full textAbstract:
Le glutamate est le principal neurotransmetteur excitateur du systeme nerveux central des vertebres. Il est implique dans de nombreuses fonctions physiologiques. Cependant, des perturbations de la transmission glutamatergique sont a l'origine de la degenerescence neuronale survenant au cours de diverses pathologies aigues du systeme nerveux central. Bien que non clairement demontree, la neurotoxicite du glutamate pourrait egalement etre impliquee dans l'etiologie de certaines maladies neurodegeneratives chroniques. Dans cette etude, nous caracterisons la toxicite du glutamate sur des cultures primaires de substance noire de rat, region du cerveau ou sont localises les corps cellulaires dopaminergiques qui sont selectivement atteints dans la maladie de parkinson. Nous montrons que l'ensemble des neurones presents dans les cultures sont sensibles a l'excitotoxicite de type glutamatergique que celle-ci soit due au glutamate ou au nmda. Cependant, le glutamate et le nmda ont des proprietes neurotoxiques qui ne sont pas identiques. Les effets neurotoxiques du glutamate se manifestent par deux mecanismes de mort cellulaire, la necrose et l'apoptose. Nous rapportons egalement que la toxicite glutamatergique se manifeste differemment sur l'ensemble de la population neuronale et sur les neurones dopaminergiques. Les neurones dopaminergiques ne presentent pas de vulnerabilite particuliere a l'excitotoxicite mais les recepteurs impliques dans la mediation de la mort neuronale sont differents. La presence de cellules cibles striatales ou non cibles provenant du cervelet module la sensibilite des neurones dopaminergiques a l'excitotoxicite. D'autre part, nous montrons que l'-methyl-dl-aspartate est toxique pour les neurones et les astrocytes en culture.
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Audoy, Julie. "Mécanismes de régulation des macrophages cérébraux dans des maladies du système nerveux central." Thesis, Université Laval, 2010. http://www.theses.ulaval.ca/2010/27079/27079.pdf.
Full text
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Le, Coz Carole. "Quelle contribution du centre germinatif et de ses composants moléculaires et cellulaires dans la physiopathologie du lupus ?" Thesis, Strasbourg, 2014. http://www.theses.fr/2014STRAJ077.
Full textAbstract:
Le lupus érythémateux disséminé est une maladie auto-immune systémique très invalidante dont les atteintes sont multiples, les plus fréquentes étant cutanées, articulaires et rénales. Dans ce type de maladie, le système immunitaire, hyperactif, ne se limite pas à lutter contre des agents extérieurs mais s'attaque à ses propres cellules, entre autres par le biais d'auto-anticorps. Ces anticorps délétères sont produits par des plasmocytes, cellules issus de la différenciation des lymphocytes B. Ce processus se déroule principalement au sein des centres germinatifs (GC) dans les organes lymphoïdes secondaires, et fait intervenir de nombreux acteurs moléculaires et cellulaires. Mon projet de thèse a porté sur l'étude de la contribution du GC et de ses constituants, tels que les cellules auxiliaires folliculaires (Tfh) et l'IL-21, au cours du lupus. Au cours de ce travail, nous avons mis en évidence une altération à la fois quantitative et qualitative des cellules Tfh chez des patients lupiques et dans un modèle murin, altération entre autres responsable de taux anormalement élevés d'IL-21. Nous avons également observé une sensibilité accrue des cellules B de souris lupiques à cette cytokine, dont la cause est une surexpression de molécules clés telles que STAT3, et dont la conséquence est un surcroit de différenciation plasmocytaire. Tous les éléments sont donc présents pour favoriser l'interaction "Tfh-B" et la réaction du GC, et amplifier la réponse autoimmune. Enfin, la découverte de l'existence de GC ectopiques fonctionnels dans les reins de souris lupiques permet d'envisager l'existence de réponses locales au sein même des organes cibles. Les données obtenues, fondamentales, sont prometteuses et laissent entrevoir de nouvelles perspectives de biothérapies, plus ciblées, pour le traitement de la maladie lupiqueSystemic lupus erythematosus is a disabling chronic autoimmune disease characterized by B cell hyperactivity leading to the production of autoantibodies, some of which exerting pathogenic effects. Autoantibodies are produced by plasma cells, which originate from the differentiation of B cells through a process that mainly takes place in germinal centers (GC) in secondary lymphoïd organs and involves many molecular and cellular parameters. The aim of my PhD project was to analyze the individual contribution of GC components, such as follicular helper T cells (Tfh) and IL-21, to lupus development. During this work, we have shown both a quantitative and qualitative impairment of Tfh cells in lupus patients and in a mouse model, leading, among other things, to high IL-21 levels. We also observed that B cells from lupus mice display a specific intrinsic sensitivity to this cytokine, due to over-expression of key molecules such as STAT3, which results in increased plasma cell differentiation. Thus, all elements are gathered that favor "Tfh-B" cell interactions and the GC reaction, and therefore the autoimmune response. Finally, the discovery of functional ectopic GC in the kidneys of lupus mice allows envisaging that local responses occur within the target organs and likely participate to kidney injury. The fundamental data we obtained are promising and anticipate new and better targeted biotherapies for lupus treatment
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Marin, Matthieu. "Xénobiotique et détoxication cellulaire : couplage d'un mécanisme de détoxication cellulaire de type MDR/MXR à des courants chlorures osmorégulés." Le Havre, 2005. http://www.theses.fr/2005LEHA0055.
Full textAbstract:
Parmi les acteurs moléculaires de la détoxication, les P-glycoprotéines (P-gp) constituent une première barrière refoulant des composés variés hors de la cellule. Ces protéines ont été initialement identifiées dans des tumeurs néoplasiques (phénotype MDR, Multi Drug Resistance). Ce concept a par la suite été étendu à la notion de phénotype MXR (Multi Xenobiotic Resistance), ensemble de mécanismes de défense des organismes contre les xénobiotiques. Dans les années 90, des travaux ont suggéré l'existence d'un dialogue entre l'activité MXR et la régulation du volume cellulaire. Le but de ce travail est de mettre en évidence les interactions entre les canaux chlorures osmorégulés et les mécanismes de détoxication MDR/MXR. Notre stratégie consiste à comparer les mécanismes MXR er MDR en terme d'activité enzymatique, de régulation, de viabilité/survie cellulaire et de modulation des courants osmorégulés, dans des cellules MCF-7, exprimant ou non la P-gp et des cellules de moule bleueAmong the molecular actors of cellular detoxification, P-glycoproteins (P-gp) represent a first line of defense against various toxic compounds. These proteins were first identified in neoplastic tumors (MDR phenotype, Multi Drug Resistance). This concept was the enlarged to MXR phenotype (Multi Xenobiotic Resistance), a set of defense mechanisms against toxins in aquatic organisms. In 90's, studies proposed that MXR was coupled to volume regulation. The aim of the study was to highlight cross regulations between osmoregulated chloride channels and MXR-MDR mechanisms in terms of enzymatic activity, regulation, cell viability and modulation of osmoregulated chloride currents, in MCF-7 cell line, expressing or not P-gp, and in primary-cultured cells of the blue mussel
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Liu, Xuanli. "Rôle de la leucocidine de Panton-Valentine dans l'infection oculaire staphylococcique : étude des cibles cellulaires et des conséquences inflammatoires tissulaires rétiniennes sur des modèles d'endophtalmie in vivo et ex vivo chez le lapin." Thesis, Strasbourg, 2018. http://www.theses.fr/2018STRAJ076/document.
Full textAbstract:
Staphylococcus aureus est une bactérie responsable de nombreuses infections. Divers facteurs de virulence sont décrits comme ayant un rôle aggravant dans l’infection staphylococcique. La leucocidine de Panton-Valentine (LPV) en est un. Elle interagit par l’intermédiaire du récepteur de C5a (C5aR) avec les leucocytes et les cellules neuronales dans différents tissus, mais son action au niveau rétinien est méconnue. Nous avons recherché des cibles rétiniennes cellulaires de l’intoxination à la LPV et étudié ses conséquences cellulaires et inflammatoires précoces dans les tissus rétiniens. AINSI, deux modèles de lapins ont été créés : l'injection intravitréenne in vivo et les explants rétiniens ex vivo. Dans les deux modèles, les cellules ganglionnaires étaient les principales cibles cellulaires rétiniennes de la LPV et le seul type de neurones rétiniennes qui exprimait C5aR. Les cellules de Müller comme la microglie étaient activées. L’explant rétinien était facilement manipulé, ils peuvent servir à la recherche de la LPV sur la rétine. La LPV seule pourrait induire une inflammation rétinienne après avoir ciblé spécifiquement les cellules neuronalesStaphylococcus aureus is responsible for many infections. It secretes various virulence factors aggravating the staphylococcal infections. Panton-Valentine leucocidin (PVL) is a virulent leukotoxin from S. aureus and presents active effects towards leukocytes and neuronal cells via the C5a receptor (C5aR). The effects of PVL on retina is little known. We explored PVL retinal cell target and early retinal inflammation and tried to find the processes of bacterial toxins aggravating bacterial endophthalmitis. We employed two different rabbit models to study the PVL effects on retina: intravitreal injection in vivo and retinal explant ex vivo. In the two models, retinal ganglion cells were the only retinal neurons which express C5aR and the major cell targets of PVL in retina. PVL induced retinal Müller and microglial cell activation. The retinal explants were easily manipulated and showed obvious cellular targets of PVL and glial cell activations, they can contribute to research the effects of PVL on retina in future. PVL alone without S. aureus could induce great retinal inflammation after targeting specifically retinal neurons
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De, Conto Véronique. "Importance du microenvironnement dans les modèles cérébraux in vitro pour le criblage phénotypique." Thesis, Université de Lille (2018-2021), 2021. http://www.theses.fr/2021LILUS046.
Full textAbstract:
Environ 90% des candidats-médicaments échouent en phase clinique, pour des raisons d’efficacité ou de toxicité qui impliquent souvent le système nerveux central (SNC). Ce fort taux d’échec souligne un manque de pertinence des modèles expérimentaux utilisés en amont, dont les modèles in vitro de cellules humaines. En effet, ces derniers ne prennent pas en compte toute la complexité du SNC, où les neurones organisés en 3 dimensions (3D) interagissent avec leur microenvironnement composé de cellules, de facteurs solubles et des molécules de la matrice extracellulaire (MEC). Les objectifs de ce travail étaient i) d’étudier l’influence de ces trois composantes du microenvironnement sur les cellules neuronales dans des modèles cérébraux in vitro par imagerie cellulaire automatisée, et ii) de développer des modèles cérébraux in vitro plus pertinents pour évaluer les effets neurotoxiques ou thérapeutiques de molécules par criblage phénotypique, notamment dans le cadre de la maladie de Parkinson (MP).Dans un premier temps, la technologie BIOMIMESYS® Brain a été développée. Cette matrice à base d’acide hyaluronique permet de mimer la MEC et de cultiver des cellules cérébrales en 3D dans des plaques 96 puits. La sensibilité des cellules Luhmes, une lignée de neurones dopaminergiques, aux inducteurs de la MP a été étudiée : les cellules ont montré une sensibilité plus faible dans BIOMIMESYS® Brain qu’en 2 dimensions (2D). Cette différence a pu être expliquée par deux phénomènes : une rétention partielle des molécules toxiques dans la matrice, et un phénotype de neurone dopaminergique moins mature qu’en 2D. L’importance du microenvironnement cellulaire a ensuite été étudiée au travers d’une co-culture de cellules Luhmes et d’astrocytes primaires humains en 2D. Cette co-culture a ensuite été transposée dans la matrice BIOMIMESYS®, formant ainsi un modèle complexe incluant à la fois le microenvironnement glial et le microenvironnement matriciel.En parallèle, l’influence du microenvironnement moléculaire a été étudiée sur les cellules SH-SY5Y, une lignée cellulaire issue d’un neuroblastome, couramment utilisée pour évaluer la neurotoxicité de molécules. Dans cette étude, les 24 principaux milieux décrits dans la littérature pour différencier ces cellules en neurones ont été criblés. Les 3 conditions les plus différenciantes en matière de ralentissement de la prolifération cellulaire et de croissance des neurites ont été sélectionnées : l’acide rétinoïque, la staurosporine, et l’Adénosine Monophosphate cyclique (AMPc) associée à du supplément B21. L’expression de marqueurs protéiques neuronaux et la sensibilité des cellules à des composés de toxicités connues ont été mesurées, en 2D et en 3D dans BIOMIMESYS® Brain. La maturité neuronale et la sensibilité aux composés neurotoxiques différaient selon le milieu, en étant les plus hautes en milieu B21+AMPc. La culture en 3D modifiait aussi la réponse des cellules, avec une sensibilité plus faible comparée aux cellules cultivées en 2D.Cette thèse a mis en évidence que le microenvironnement des neurones, qui inclut la MEC, les cellules gliales et les facteurs solubles, modifie la réponse neuronale in vitro et devrait par conséquent être considéré avec attention dans la recherche académique comme industrielle, dès les étapes de criblage de nouveaux médicamentsAbout 90% of drug candidates fail in clinical trials, for efficacy- and toxicity-related reasons, which often involve the Central Nervous System (CNS). This high failure rate highlights a lack of relevance in experimental models used upstream, including human in vitro models. Indeed, they do not take into account the complexity of the CNS, in which neurons are organized in 3 dimensions (3D) and interact with their microenvironment, composed of cells, soluble factors and extracellular matrix (ECM). The objectives of this PhD were i) to study the influence of these three microenvironment components on neuronal cells in cerebral in vitro models by automatized cellular imaging, and ii) to develop more relevant cerebral in vitro models for phenotypic screening, to assess neurotoxic or therapeutic effects, in the frame of Parkinson’s Disease (PD).First, the BIOMIMESYS® Brain technology has been developed. This acid hyaluronic based-matrix allows the simulation of the ECM and a 3D culture of cerebral cells in 96-well plates. The sensitivity of Luhmes cells, a dopaminergic neuronal cell line, to PD inducers has been studied: the cells displayed a lower sensitivity in BIOMIMESYS® Brain compared to cells cultured in 2 dimensions (2D). This difference was explained by two phenomena: a partial retention of toxic molecules in the matrix, and a lower neuronal maturity compared to cells cultured in 2D.The importance of the cellular microenvironment has been studied through a co-culture of Luhmes cells and primary human astrocytes in 2D. This co-culture has then been transposed in BIOMIMESYS® matrix, to form a complex model including both the glial and the matricial microenvironments.In parallel, the influence of the molecular microenvironment has been studied on the SH-SY5Y cells, a cell line derived from a neuroblastoma, commonly used for neurotoxicity assessment. In this study, the 24 major differentiation media described in the literature to differentiate these cells into neurons have been screened. The 3 most differentiating conditions in terms of proliferation slowdown and neurite elongation have been selected: retinoic acid, staurosporine, and cyclic Adenosine Monophosphate (cAMP) combined to B21 supplement. The neuronal protein marker expression and the cell sensitivity to compounds of known-toxicity have been measured, in 2D and in 3D in BIOMIMESYS® Brain. Both maturity and sensitivity of these neurons varied according to the differentiation medium, and were higher in B21+cAMP. The 3D cell culture modified also the cell response, with a lower sensitivity of cells cultured in 2D.This PhD highlighted that the microenvironment of neurons, including the ECM, the glial cells and the soluble factors, can modify the neuronal response in vitro, and should thus be considered carefully in academic research and as early as possible in the drug discovery industrial process
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Jaeger, Catherine. "Organisation tissulaire de l'horloge circadienne dans la rétine de rongeur." Thesis, Strasbourg, 2014. http://www.theses.fr/2014STRAJ066/document.
Full textAbstract:
La rétine a une physiologie rythmique contrôlée par une horloge circadienne dont la localisation et l’organisation sont peu connues chez les mammifères. Nous avons étudié in vitro l’horloge rétinienne du rat et de la souris grâce au suivi par bioluminescence des rythmes d’expression d’éléments de son mécanisme moléculaire, le gène Period1 et la protéine PERIOD2 respectivement. Nous avons montré que chacune des trois couches rétiniennes contient un oscillateur circadien fonctionnel, mais que la période de leurs oscillations est très rallongée par rapport à celle du tissu entier et dépend d’un couplage asymétrique entre les couches. Nous avons montré par pharmacologie que le glutamate, le GABA, la glycine et la dopamine ne sont pas indispensables à ce couplage, et que les caséine kinases 1δ et 1ε modulent largement la période de l’horloge rétinienne. Finalement, nous avons observé un couplage au niveau cellulaire également, qui met en jeu, au moins en partie, les jonctions communicantesThe retina exhibits physiological rhythms that are under the control of a circadian clock whose location and organization are poorly understood in mammals. We studied the retina clock in rat and mouse through in vitro bioluminescence monitoring of the rhythmic expression of molecular elements of the clockwork: the Period1 gene and the PERIOD2 protein respectively. We showed that each of the three retinal layers harbors a functional circadian oscillator, which period is strikingly longer than in the whole retina and depends on asymmetric coupling between layers. We pharmacologically investigated the nature of the coupling signals and showed that glutamate, GABA, glycine and dopamine are dispensable. We nevertheless highlighted that casein kinases 1δ and 1ε strongly modulate the period of the retina clock. Finally, we observed that the retina clock also entails cell-to-cell coupling that involves at least partially gap-junctions
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Drapeau, Annie. "Effet d'un traitement au témozolomide par infusion intra-artérielle avec ou sans ouverture osmotique de la barrière hémato-encéphalique." Mémoire, Université de Sherbrooke, 2017. http://hdl.handle.net/11143/11311.
Full textAbstract:
Le glioblastome (GBM) est la tumeur cérébrale primaire la plus fréquente et agressive chez l’adulte. Son traitement, une exérèse chirurgicale maximale suivi d’un traitement adjuvant (radiothérapie et témozolomide [TMZ]), n’offre qu’un bénéfice modeste de survie médiane (14.6 mois vs. 12.1 mois pour radiothérapie post-chirurgie seule) (STUPP et al., 2005). Le TMZ demeure l’agent de choix pour le traitement du GBM. Malgré sa biodisponibilité approchant 100% suivant son administration per os (PO) (Diez et al., 2009), sa pénétration dans le liquide céphalorachidien n’est que de 20% (Ostermann et al., 2004). Ainsi, il se peut que les limites thérapeutiques du TMZ soient reliées aux barrières hémato-encéphalique (BHE) et hémato-tumorale (BHT). Plusieurs stratégies alternatives tentent de contourner ces barrières comme l’administration intra-artérielle (IA) avec une ouverture osmotique de la BHE (OBHE). Cette technique permet une plus grande distribution d’agent thérapeutique au système nerveux central (SNC). L’utilisation de cette stratégie avec le témozolomide n’a jamais été étudiée à ce jour. Nous avons émis l’hypothèse que son utilisation permettra d’augmenter la concentration de TMZ dans le SNC et que, lorsque combiné avec la radiothérapie, permettra de rehausser son activité anti-tumorale.
Les objectifs du projet sont : (1) l’évaluation de la sensibilité des cellules F98 au TMZ in vitro; (2) la caractérisation de la neuropharmacocinétique du TMZ in vivo, selon différents modes d’administration; et (3) l’évaluation de l’effet anti-tumoral du TMZ in vivo, selon différents modes d’administration. Les expérimentations in vivo ont été exécutées dans le modèle syngénique Fischer-F98, porteur de tumeur gliale. L’expérimentation in vitro a démontré une résistance importante des cellules F98 au TMZ. La méthodologie développée a permis de démontrer que l’infusion IA avec et sans OBHE augmente la concentration maximale et l’aire sous la courbe du TMZ dans la tumeur cérébrale et dans le parenchyme cérébral ipsilatéral du rat Fischer-F98. Par contre, aucun bénéfice de survie n’a été observé en utilisant ces stratégies alternatives. Au contraire, l’acheminement augmenté du TMZ au SNC semble toxique. Un bénéfice de survie a été mesuré suite à l’ajout d’un traitement de radiothérapie, mais de façon indépendante au mode de livraison de TMZ ou de solution saline normale (groupe contrôle). Enfin, nos résultats témoignent de l’impact du mode d’acheminement sur la distribution d’un agent thérapeutique au SNC. En détournant la BHE, l’utilisation judicieuse d’approches alternatives combinée à un agent thérapeutique approprié a un grand potentiel clinique dans le traitement des GBM.Abstract : Glioblastoma (GBM) is the most frequent and aggressive primary brain tumor in adults. Its’ standard treatment, maximal surgical resection followed by an adjuvant treatment (radiotherapy and temozolomide [TMZ]) offers only a modest median survival benefit of 14.6 months (vs. 12.1 months with post-surgery radiotherapy alone) (Stupp et al., 2005). TMZ remains the therapeutic agent of choice for the treatment of GBM. Despite its bioavailability approaching 100% after a per os administration (Diez et al., 2009), its cerebrospinal fluid penetration is only of 20% (Ostermann et al., 2004). Thus, TMZ’s therapeutic limitations could be due to the blood-brain barrier (BBB) and blood-tumor barrier (BTB). Alternative routes of drug delivery attempt to bypass these barriers. For example, intra-arterial (IA) administration with an osmotic blood-brain barrier disruption (OBBBD) allows greater drug distribution to the central nervous system (CNS). Its use with TMZ, with or without radiotherapy, has never been studied. We hypothesized that it will increase TMZ concentration in the CNS and that, when combined to radiotherapy, it will intensify its anti-neoplastic activity. The project was divided in three parts: (1) the evaluation of F98 cells’ in vitro sensitivity to TMZ; (2) the in vivo caracterization of TMZ’s neuropharmacokinetics, following different routes of administration; and (3) the in vivo evaluation of TMZ’s anti-tumoral effect, following different routes of administration. The syngenic glioma Fischer-F98 model was used in all in vivo experiments. Our results showed the F98 cells to be resistant to TMZ in vitro. The methodology developed showed that an IA infusion with and without OBBBD increased TMZ’s peak concentration and area under the curve in the brain tumor and ipsilateral brain parenchyma in the Fischer-F98 rat. All the while limiting systemic exposure. However, no survival benefit was observed with the use of these alternative strategies. More so, TMZ’s enhanced delivery to the CNS seemed toxic. A survival benefit was measured following the addition of radiotherapy. This was independent of the route of delivery of TMZ or normal saline. In summary, our results provide evidence that the method of TMZ administration does impact its CNS delivery. By bypassing the BBB, the judicious use of local delivery approaches combined with the appropriate therapeutic agent can have a great clinical potential in the treatment of glioblastomas.
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Jabaudon, Gandet Matthieu. "Approche translationnelle de la voie RAGE au cours du syndrôme de détresse respiratoire aiguë : implications diagnostiques, physiopathologiques et thérapeutiques." Thesis, Clermont-Ferrand 1, 2016. http://www.theses.fr/2016CLF1MM09.
Full textAbstract:
Le syndrome de détresse respiratoire aiguë (SDRA) est caractérisé par des lésions alvéolaires diffuses menant à un œdème alvéolaire lésionnel et une insuffisance respiratoire aiguë hypoxémique. Malgré les progrès récents dans la prise en charge des patients de réanimation, le SDRA reste un syndrome fréquent et associé à une morbimortalité importante. Deux mécanismes principaux du SDRA semblent associés à une mortalité plus élevée et à des réponses thérapeutiques différentes : la déficience de la clairance liquidienne alvéolaire (AFC, pour alveolar fluid clearance), l’incapacité pour l’épithélium alvéolaire de résorber l’œdème alvéolaire, et la présence d’un phénotype « hyper-inflammatoire ». Les approches pharmacologiques du traitement du SDRA restent limitées et il est nécessaire de poursuivre l’étude des voies biologiques impliquées dans la pathogénie du SDRA et dans sa résolution afin de développer des approches innovantes des prises en charge diagnostique et thérapeutique du SDRA. RAGE, le récepteur des produits de glycation avancée, est un récepteur multi-ligands, exprimé abondamment par les cellules épithéliales alvéolaires du poumon (pneumocytes), qui module de nombreuses voies de signalisation intracellulaire. De nombreuses études récentes suggèrent que sRAGE, la forme soluble principale de RAGE, pourrait servir de marqueur lésionnel du pneumocyte de type I, et que RAGE pourrait jouer un rôle-pivot dans la pathophysiologie du SDRA, en initiant et en entretenant la réponse inflammatoire alvéolaire. Nos objectifs étaient de caractériser les rôles de RAGE au cours du SDRA, grâce à une approche translationnelle combinant études cliniques et précliniques. D’abord, des études cliniques observationnelles et interventionnelles ont été conduites afin de caractériser sRAGE comme un véritable biomarqueur dans le SDRA. Ensuite, des cultures in vitro de cellules épithéliales et de macrophages, ainsi qu’un modèle expérimental in vivo de SDRA murin par instillation trachéale d’acide chlorhydrique ont été utilisés pour décrire les effets de la voie RAGE sur les mécanismes d’AFC et l’inflammation macrophagique médiée par l’inflammasome « Nod-Like Receptor family, Pyrin domain containing 3 » (NLRP3). Enfin, l’effet d’une inhibition de RAGE, par sRAGE recombinant ou par anticorps monoclonal anti-RAGE, était testée en modèle murin. Nos résultats issus des études cliniques suggèrent que sRAGE présente toutes les caractéristiques d’un biomarqueur au cours du SDRA, avec un intérêt dans le diagnostic, le pronostic et la prédiction du risque de développer un SDRA dans une population à risque. Pris ensemble, notre travail suggère que la voie RAGE joue un rôle important dans la régulation de l’atteinte pulmonaire, de l’AFC et de l’activation macrophagique au cours du SDRA. Toutefois, les mécanismes précis de cette régulation restent incertains. La forme soluble de RAGE (sRAGE), lorsqu’elle est dosée dans le plasma, présente toutes les caractéristiques d’un biomarqueur pouvant être utile en pratique clinique, mais son intérêt dans la sélection de sous-groupes (ou « phénotypes ») de patients pouvant bénéficier de traitements ciblés reste à étudier. La voie RAGE pourrait enfin représenter une cible thérapeutique prometteuse. Bien que des études de validation restent nécessaires, ces résultats pourraient ouvrir de nouvelles perspectives dans la prise en charge des patients atteints de SDRAThe acute respiratory distress syndrome (ARDS) is associated with diffuse alveolarinjury leading to increased permeability pulmonary edema and hypoxemic respiratory failure. Despite recent improvements in intensive care, ARDS is still frequent and associated with high mortality and morbidity. Two major features of ARDS may contribute to mortality and response to treatment: impaired alveolar fluid clearance (AFC), i.e. altered capacity of the alveolar epithelium to remove edema fluid from distal lung airspaces, and phenotypes of severe inflammation. Pharmacological approaches of ARDS treatment are limited and further mechanistic explorations are needed to develop innovative diagnostic and therapeutic approaches. The receptor for advanced glycation endproducts (RAGE) is a multiligand pattern recognition receptor that is abundantly expressed by lung alveolar epithelial cells andmodulates several cellular signaling pathways. There is growing evidence supporting sRAGE (the main soluble isoform of RAGE) as a marker of epithelial cell injury, and RAGE may be pivotal in ARDS pathophysiology through the initiation and perpetuation of inflammatory responses. Our objectives were to characterize the roles of RAGE in ARDS through a translational approach combining preclinical and clinical studies. First, observational and interventional clinical studies were conducted to test sRAGE as a biomarker during ARDS.Then, cultures of epithelial cells, macrophages and a mouse model of acidinduced lung injury were used to describe the effects of RAGE pathway on AFC and inflammation, with special emphasis on a macrophage activation through NodLikeReceptor family, Pyrindomain containing 3 (NLRP3) inflammasome. Acidinjured mice were treated with an antiRAGE monoclonal antibody or recombinant sRAGE to test the impact of RAGE inhibition on criteria of experimental ARDS. Results from clinical studies support a role of sRAGE as a biomarker of ARDS, withdiagnostic, prognostic and predictive values. In addition, plasma sRAGE is correlated with a lung imaging phenotype of nonfocal ARDS and could inform on therapeutic response. Herein, we also describe in vivo and in vitro effects of RAGE activation on transepithelial fluid transport and expression levels of epithelial channels (aquaporin 5, αNa,KATPaseandαENaC) and on macrophage activation through NLRP3 inflammasome. Finally, RAGE inhibition improves AFC and decreases lung injury in vivo. Taken together, our findings support a role of RAGE pathway in the regulation of lung injury, AFC and macrophage activation during ARDS, albeit precise regulatory mechanisms remain uncertain. sRAGE has most features of a validated biomarker that could be used in clinical medicine, but whether it may help to identify subgroups (or phenotypes) of patients that would benefit from tailored therapy remains underinvestigated. Modulation ofRAGE pathway may be a promising therapeutic target, and though validation studies are warranted, such findings may ultimately open novel diagnostic and therapeutic perspectivesin patients with ARDS