Dissertations / Theses on the topic 'Coxsakie viru'
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Sauter, Pierre. "Infection à coxsackievirus B4 dépendante d'anticorps et diabète de type 1." Lille 2, 2008. http://www.theses.fr/2007LIL2S038.
Full textAbstract:
Les coxsackievirus B (CVB) appartiennent à la famille des picornaviridae, de petits virus à ARN non enveloppés dont la capside est composée de 60 protomères qui sont chacun constitués par quatre protéines structurales : les protéines VP1, VP2 et VP3 qui sont exposées à la surface de la capside, et la protéine VP4 qui est située à l'intérieur de la capside en contact avec le génome. Ces virus, en particulier CVB4 sont impliqués dans la pathogenèse du diabète de type 1. Lors de travaux antérieurs réalisés par notre équipe, nous avons décrit l'infection dépendante d'anticorps des cellules mononuclées du sang périphérique par CVB4. Il a été montré que CVB4 infecte les cellules mononuclées du sang périphérique (CMN) lorsqu'il est incubé en présence de plasma avant d'infecter ces cellules, cette infection étant accompagnée de la synthèse d'IFN-alpha par ces cellules. Il a également été montré par notre équipe que la cible des anticorps accroissant la synthèse d'IFN-alpha des CMN viro-induite par CVB4E2 est la protéine de capside VP4 et que les anticorps anti-VP4 étaient détectés plus fréquemment et en plus grande quantité dans le plasma des patients diabétiques que chez les sujets sains. Le phénomène d'ADE est décrit dans les infections virales in vitro et même pour certains virus in vivo dans des modèles animaux mais il a été peu décrit pour les virus du genre enterovirus. L'objectif de cette thèse est d'améliorer notre connaissance de l'infection dépendante d'anticorps des CMN par CVB4E2 : montrer que la protéine VP4 est la cible des anticorps accroissant l'infection des CMN par CVB4E2 et identifier la zone de VP4 reconnue par les anticorps. L'infection productive des CMN par CVB4E2 a été évaluée à l'aide d'une PCR quantitative en temps réel amplifiant l'ADN complémentaire obtenu par rétrotranscription de l'ARN négatif intracellulaire de CVB4E2. La production d'IFNalpha par les CMN a été évaluée en déterminant les concentrations de cette cytokine dans le surnageant de culture à l'aide d'une méthode immunologique (DELFIA). Afin de déterminer le rôle de la protéine de capside VP4 dans l'infection dépendante d'anticorps des CMN par CVB4E2, nous avons exprimé les protéines de fusion MBPVP4 et MBP dans les bactéries Escherichia coli K12 TB1. A l'aide de ces protéines, nous avons montré que la protéine de capside VP4 est la cible des anticorps accroissant l'infection dépendante d'anticorps des CMN. En effet MBPVP4 et non MBP inhibe la production d'IFNalpha des CMN viro-induite par CVB4E2 dépendante du plasma dans des expériences de compétition entre ces protéines et CVB4E2. De plus des anticorps contenus dans le plasma humain ont été élués à partir de plaques coatées avec les protéines MPBVP4 et MBP. La préincubation avec CVB4E2 de plasma, ou d'anticorps anti-MBPVP4 élués mais non d'anticorps anti-MBP accroît l'infection des CMN, qui est associée à une stimulation de la production d'IFNalpha. Nous avons montré que la zone de la protéine VP4 de CVB4E2 reconnue par les anticorps accroissant la production viro-induite d'IFN-alpha par les CMN se trouve entre les acides aminés 10 à 30. En effet, des expériences de compétition ont été effectuées entre CVB4E2 et des peptides chevauchant couvrant l'intégralité de la séquence de la protéine VP4, vis-à-vis de plasma contenant des anticorps accroissant la production viro-induite d'IFN-alpha par les CMN. Seul le peptide couvrant les acides aminés 10 à 30 de la protéine VP4 de CVB4E2 (VP411-30) entre en compétition dans notre système. De plus, la moyenne des valeurs index des anticorps dirigés contre le peptide VP411-30 et des anticorps dirigés contre la protéine VP4 (native ou recombinante) de CVB4E2 contenus dans les plasmas des sujets sont similaires. Les proportions de plasmas de patients diabétiques de type 1 positifs pour les anticorps dirigés contre le peptide VP411-30 et positifs pour les anticorps dirigés contre la protéine VP4 (native ou recombinante) de CVB4E2 sont similaires. Les valeur index individuelles des anticorps dirigés contre le peptide VP411-30 et celles des anticorps dirigés contre la protéine VP4 (native ou recombinante) de CVB4E2 sont significativement corrélées. Les valeurs index moyennes des anticorps dirigés contre le peptide VP411-30 et des anticorps dirigés contre la protéine VP4 (native ou recombinante) de CVB4E2 sont significativement plus élevées chez les patients diabétiques que chez les sujets sains et la proportion de plasma positifs pour les anticorps dirigés contre le peptide VP411-30 ou contre la protéine VP4 (Native ou recombinante) de CVB4E2 est significativement plus importante chez les patients diabétiques de type 1 que chez les sujets sains. La détection d'anticorps dirigés contre le peptide VP411-30 contenus dans le plasma des patients avec un diabète de type 1 et les valeurs obtenues n'étaient pas associées à des allèles HLA-DR associés à un risque accru de développer la maladie. La fixation d'anticorps à CVB4E2 via la protéine de capside VP4 suppose qu'au moins une partie de cette protéine est accessible aux anticorps. Nous avons étudié la structure de cette protéine : nous avons d'abord séquencé la région de l'ARN génomique de CVB4E2 correspondant à cette protéine en amplifiant l'ADN complémentaire obtenu par rétrotranscription de cette région du génome viral, ensuite nous avons déterminé la séquence de ces amplifiats par une méthode semi-automatique. La séquence nucléotidique ainsi connue a permis de déduire la séquence d'acides aminés de la protéine VP4, ce qui a rendu possible la modélisation de cette protéine à l'aide du serveur Swiss model. Il en découle que la zone de VP4 correspondant au peptide VP411-30 est probablement une séquence d'acides aminés sans structure secondaire liée à un feuillet beta. Cette séquence est accessible aux anticorps anti-VP4, ce qui implique une exposition permanente ou transitoire de cette protéine à l'extérieur de la capside à 37°C. Au total, nos travaux ont permis d'améliorer la connaissance des mécanismes moléculaires de l'infection dépendante d'anticorps des CMN par CVB4E2. Nous avons mis en évidence le rôle de VP4 et des anticorps anti-VP4 dans l'infection à CVB4E2 des CMN et nous avons montré le rôle de la séquence d'acides aminés 11 à 30 de VP4 dans l'accroissement dépendant du plasma de la production viro-induite d'IFN-alpha par CMN. Nos résultats suggèrent que la séquence d'acides aminés 11 à 30 de la protéine VP4 de CVB4E2 peut être utile pour la détection d'anticorps anti-VP4 présents dans le sang des individus et notamment dans le sang des patients avec un diabète de type 1. Nos travaux apportent également des informations concernant la structure de CVB4E2, ils montrent que la protéine VP4 est en partie externalisée à température physiologique (37°C) et n'est pas entièrement contenue à l'intérieur de la capside au contact du génome viral contrairement aux données obtenues par cristallographie aux rayons X avec le poliovirus et CVB3.
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Jaidane, Hela. "Etudes des mécanismes cellulaires et moléculaires de l'infection à coxsackievirus B4 dans un modèle animal." Lille 2, 2007. http://www.theses.fr/2007LIL2S010.
Full textAbstract:
Nombreuses sont les études épidémiologiques ayant associé les infections à entérovirus, et notamment à coxsackievirus B4 (CV-B4), à l'émergence du diabète de type 1 (DT1) chez les sujets génétiquement prédisposés. Les investigations expérimentales suggèrent que plusieurs mécanismes pathogéniques de l'infection à CV-B4 sont en mesure de participer au processus de destruction des cellules β du pancréas. Il ne peut être exclu que l'infection d'autres tissus que le pancréas puisse contribuer à la genèse de la maladie. Le DT1 étant une pathologie auto-immune, il est important de mieux connaître l'impact de l'infection des organes lymphoïdes, et notamment du thymus, siège central d'établissement de la tolérance vis-à-vis des antigènes du soi, dans le développement de la maladie. Pour commencer, il est nécessaire de connaître le devenir de CV-B4 suite à son introduction dans l'organisme par voie naturelle. Ainsi nous avons mis au point un modèle d'infection de souris Swiss par la souche diabétogène CV-B4 E2 inoculée par la voie orale. Le génome viral, recherché par RT-PCR et RT-PCR semi-nichée, a été retrouvé jusqu'à plus de 70 jours post-infection (p. I. ) dans divers tissus : intestin, ganglions mésentériques, coeur, pancréas, mais aussi rate, thymus et sang. Ces résultats suggèrent que CV-B4 E2 peut provoquer une infection systémique avec atteinte des organes lymphoïdes. Afin de mieux comprendre l'interaction entre CV-B4 et le tissu lymphoïde, nous avons infecté des cultures primaires de cellules spléniques et thymiques totales dérivées de souris BALB/c et C3H/HeN par la souche diabétogène CV-B4 E2 et la souche prototype CV-B4 JVB. L'infection est mise en évidence en faisant appel à une approche sensible de RT-PCR semi-nichée. La réplication virale, prouvée par la détection de brins négatifs du génome de CV-B4 dans les cellules et de progénies virales dans les surnageants de culture, semble dépendre du patrimoine génétique de l'hôte puisqu'elle n'a été obtenue qu'avec les cellules dérivées des souris BALB/c. Par ailleurs l'infection ne s'est pas traduite par une réponse IFNα puisque ce dernier, recherché à l'aide d'une méthode biologique, n'a été retrouvé que dans les cultures infectées par le virus de Sendai (SV). L'infection de cellules thymiques par CV-B4 E2 et par CV-B4 JVB, et ses conséquences sur l'expression d'IGF2 ont été étudiées dans un modèle in vitro. IGF2 est une protéine qui participerait à l'éducation des lymphocytes T à tolérer les principaux auto-antigènes des cellules ß. Une lignée murine de cellules épithéliales thymiques, MTE4-14, a été infectée par CV-B4 E2 et CV-B4 JVB. Ces deux souches virales peuvent infecter les MTE de manière persistante avec des conséquences cytologiques différentes : effet cytopathique et cytolyse d'une partie des cellules dans le cas de CV-B4 E2 et pas d'effet notable dans le cas de CV-B4 JVB. L'infection est caractérisée par une production continue de particules infectieuses, des quantités relatives des brins positifs et négatifs d'ARN viral intracellulaire similaires, et dans le cas de CV-B4 E2, par l'infection d'une importante proportion de cellules (attestée par l'immunomarquage de la protéine virale VP1). Par ailleurs, l'infection à CV-B4 E2 s'est traduite par une diminution significative (mise en évidence par une approche semi-quantitative) des transcrits d'IGF2. L'infection de cultures organotypiques de thymus foetal de souris CD-1 a également été étudiée. Nous avons observé que CV-B4 E2, mais pas CV-B4 JVB, peut se répliquer dans ce système comme attesté par la détection de brins négatifs d'ARN viral intracellulaire par RT-PCR quantitative et de particules infectieuses dans le surnageant de culture. CV-B4 E2 ne provoque pas d'altération cytologique ou histologique apparente dans les cultures organotypiques de thymus foetal de souris, mais il est capable d'y entraîner des anomalies des populations thymocytaires (étudiées par cytométrie en flux) suggérant une perturbation du processus de maturation/différenciation des thymocytes. Au total, nos résultats montrent que CV-B4 est capable d'atteindre la rate et le thymus lors d'une infection systémique et que l'infection du thymus peut perturber les fonctions de cet organe. Nos travaux ont permis d'obtenir des données en faveur de l'hypothèse de l' atteinte par CV-B4 du thymus, dont la fonction altérée est susceptible de jouer un rôle dans la pathogenèse du DT1.
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Hindersson, Maria. "Coxsackie B virus pathogenesis in mice /." Stockholm : Karolinska institutet, 2006. http://diss.kib.ki.se/2006/20060608hind/.
Full text
4
Orthopoulos, George. "Coxsackie B virus host cell interactions." Thesis, University of Sussex, 2005. http://ethos.bl.uk/OrderDetails.do?uin=uk.bl.ethos.419832.
Full text
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Ioannou, Marina. "Cell surface interactions of Coxsackie A9 virus." Thesis, University of Essex, 2018. http://repository.essex.ac.uk/22325/.
Full textAbstract:
An understanding of how viruses interact with their receptors is vital as this step is a major determinant of host susceptibility and disease. Coxsackievirus A9 (CAV9), an enterovirus, harbours an integrin- recognition motif, RGD (Arg-Gly-Asp), in the capsid protein VP1 and although modes of transmission and pathogenesis are still largely unknown, this motif is believed to be primarily responsible for integrins αvβ6 and αvβ3 binding. The conservation of the RGD +1 position in CAV9 and other picornaviruses showed evidence that this is related to viral tropism and infectiousness of the virus. CAV9 has also been reported to interact with the heparan sulphate/heparin class of proteoglycans (HSPG). This thesis describes work designed to improve our understanding of the involvement of a) the RGD motif and more specifically the RGDX position in CAV9 infection, using a large panel of different RGDX variants and a number of cell lines not previously used in CAV9 research b) the significance of possible interactions between CAV9 and HSPG in infection. Several CAV9 variants were tested in a panel of 8 different cell lines. Infection in each cell line was observed to follow either an RGD- dependant or RGD- independent pathway, although the results did not fully correlate with the receptor expression found on the cell lines used. The RGDX position was found to be critical for efficient infection in cells when an RGD- dependent pathway is used. To understand which integrin is likely to be involved in entry, into one of the RGD-dependent cell lines, A549, blocking antibodies against αvβ3 and αvβ6 were used. Neither antibody gave full protection against CAV9, as has been reported previously, suggesting that other integrins might also be used. Two new HSPG-binding CAV9 mutants were discovered, showing that binding to HSPG can be achieved by several mechanisms. Binding to HSPG was found to be significant in some cells, but not others, again illustrating the complexity of interactions between CAV9 and the cell surface. The results obtained have greatly improved our understanding of how CAV9 infects cells. This will be useful in the design of antivirus drugs and also gives a framework for the modification of CAV9 or other RGD containing picornaviruses for specific targeting of cancer cells for oncolytic therapy.
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TIRONNEAU, FOUQUERAY ANNE. "Infections a coxsackie : revue generale ; a propos de 60 cas recueillis dans un service de medecine interne en 5 ans." Toulouse 3, 1992. http://www.theses.fr/1992TOU31092.
Full text
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HADDAD, ZAHIA. "Association lymphadenopathie angio-immunoblastique et virus coxsakie ? a propos de trois observations personnelles ; hypotheses etiopathogeniques." Lyon 1, 1989. http://www.theses.fr/1989LYO1M025.
Full text
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Thompson, Gillian A. "Immune responses to enteroviruses - coxsakie virus B2, echovirus 7 and echovirus 11." Thesis, University of Newcastle Upon Tyne, 1998. http://ethos.bl.uk/OrderDetails.do?uin=uk.bl.ethos.388725.
Full text
9
ANDRIEU, MARC. "A propos d'un cas de myocardite auto-immune : influence possible d'une coxsackie virose." Toulouse 3, 1992. http://www.theses.fr/1992TOU31011.
Full text
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Cherelyn, Vella. "Coxsackie B4 virus infection of the pancreas - a murine model." Thesis, Queen Mary, University of London, 1989. http://ethos.bl.uk/OrderDetails.do?uin=uk.bl.ethos.281620.
Full text
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Aasa, Chapman Marlen Maria Isabell. "Investigation of DNA vaccines against Coxsackie virus 3 induced myocarditis." Thesis, Imperial College London, 2001. http://ethos.bl.uk/OrderDetails.do?uin=uk.bl.ethos.248448.
Full text
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CHAKRA, GEORGES. "Myocardite pseudo-necrotique a coxsackie b, d'expression clinique severe : a propos de deux observations." Toulouse 3, 1992. http://www.theses.fr/1992TOU31102.
Full text
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Chehadeh, Wassim. "Infection à virus Coxsackie B, interféron alpha et diabète insulino-dépendant." Lille 2, 2000. http://www.theses.fr/2000LIL2MT18.
Full text
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Shaw, Christian A. "An investigation of the Coxsackie and Adenovirus Receptor in striated muscle /." Thesis, McGill University, 2006. http://digitool.Library.McGill.CA:80/R/?func=dbin-jump-full&object_id=111881.
Full textAbstract:
Since its identification in 1997 as the common receptor for Coxsackie and adenovirus (CAR) multiple lines of evidence argue in favor of CAR contributing to aspects of cell adhesion in addition to serving as a viral receptor. Nevertheless, a precise biological role for CAR remains to be identified suggesting the receptor may participate in a variety of cellular functions that reflect its tissue specific and developmentally regulated expression. This thesis elucidates aspects of CAR biology in mature striated muscle by providing studies that encompass (i) its physiological cellular/subcellular localization and expression in mature striated muscle (ii) its expression profile in human diseased skeletal muscle and (iii) the potential consequences of its sustained expression in mature striated muscle where its levels would otherwise be highly attenuated.In non-diseased, mature striated muscle despite low and barely detectable levels of the CAR transcript (cardiac and skeletal muscle respectively), we identified CAR as a novel component of the neuromuscular junction and showed its expression to be isoform-specific in contrast to the intercalated discs, where both predominant CAR isoforms are detected. We then investigated the expression of CAR at the level of human skeletal muscle disease. From these studies we observed that in diseases characterized by active necrosis and regeneration, extrasynaptic CAR expression is detectable in regenerating fibers and co-expressed with other previously described markers of regeneration at a high degree of coincidence. Moreover, extrasynaptic CAR expression appears to be a highly reliable indicator of the regenerative process offering potential use at the diagnostic level. Following these investigations, our final studies involved assessing whether sustained CAR expression might affect the normal homeostasis in skeletal and cardiac muscle using a transgenic mouse model. We discovered that transgenic mice expressing sustained high levels of CAR (as seen in the CAR+/+ transgenics) develop a lethal necrotizing myopathy characterized by dual deficiencies in dystrophin and dysferlin, two proteins pivotal in maintaining plasmalemmal integrity, raising the possibility for a previously unrecognized cause of skeletal muscle dysfunction.
Collectively these findings argue that in non-diseased mature skeletal and cardiac muscle, CAR expression is restricted to the neuromuscular junction and cardiac intercalated discs but in diseases of skeletal muscle characterized by active necrosis and regeneration, extrasynaptic CAR expression is reexpressed at these sites of injury/repair. In addition they raise the possibility that sustained CAR expression in mature skeletal muscle may be associated with altered muscle homeostasis.
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MENU-GUILLEMIN, STEPHAN. "Contribution a l'etude des meningites a virus coxsackie et echovirus a propos de 14 observations de meningites lymphocytaires neonatales." Reims, 1989. http://www.theses.fr/1989REIMM007.
Full text
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Shami, Ashjan. "The effect of coxsackie virus A9 infection on nuclear and nucleolar proteins." Thesis, University of Essex, 2016. http://repository.essex.ac.uk/17579/.
Full textAbstract:
Picornaviuses replicate in the cytoplasm, but there is growing evidence that the cell nucleus is affected by infection e.g. transcription factor cleavage, relocation of nuclear proteins and alteration to nucleo-cytoplasmic shuttling. It was previously observed that Parechovirus genus members affect the distribution of the nuclear paraspeckle protein PS PC-1, which is an RNA-binding protein involved in splicing and RNA export. To investigate if this is a general feature of picornaviruses infection, coxsackie virus A9 (CAV-9) was studied. This is a typical member of the large and most medically-important picornavirus genera Enterovirus, which is genetically divergent from Parechovirus. Using an EGFP-PSPC-1 fusion, we found that infection changes the distribution of PS PC-1 from nuclear paraspeckles to cytoplasmic granules that do not seem to correspond to known cytoplasmic foci of RNA-binding proteins e.g. stress granules and P-bodies. They also do not correspond to CAV-9 replication complexes. Two other paraspeckle proteins (PSF and NONO) colocalise with PSPC-1 in these structures. The effect does not seem to be due to cleavage of these proteins by virus proteases, phosphorylation at two sites known to be involved in PSF translocation or sumoylation. It is dependent on part of PSF, between amino acids 452-606, which is also needed for paraspeckle localization and which is involved in key interactions between PSF, PSPC-1 and NONO. There are few reports on the significance of paraspeckle proteins in virus infection. Our results suggest that we have identified a novel cellular compartment, or a structure induced by virus infection. If this is proved to be required by the virus, then it could be a potential drug target for the development of a new class of antiviral agents against this important group of viruses.
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Wehbi, Amani. "Fonction du coxsackie et adenovirus récepteur (CAR) dans la neurogenénèse adulte." Thesis, Université de Montpellier (2022-….), 2022. http://www.theses.fr/2022UMONT005.
Full textAbstract:
Le récepteur des coxsackies et des adénovirus (CAR) est une molécule d'adhésion cellulaire (CAM) largement exprimée dans différents organes. Dans ma thèse, je me suis concentrée sur l'expression du CAR dans le gyrus denté de l'hippocampe, une structure cérébrale essentielle pour la mémoire et le contrôle de l'humeur et qui joue un rôle majeur dans l'apprentissage et l'oubli. Chez les rongeurs et les humains, de nouveaux neurones sont continuellement générés dans le DG, dans un processus appelé neurogenèse adulte. L'expression de CAR est forte pendant le développement et les stades néonataux, ce qui suggère un rôle pendant le développement, mais elle est également présente dans le cerveau adulte. Savoir où CAR est exprimé dans le cerveau est une étape essentielle pour pouvoir savoir ce que CAR fait dans le cerveau et comment il peut affecter la neurogenèse, la cognition et le comportement et quel est le rôle joué par CAR pendant les maladies de la neurogenèse. Nous avons constaté que CAR se colocalise occasionnellement avec la GFAP, mais cela se limite aux zones associées à la neurogenèse adulte. Ensuite, nous avons utilisé un modèle in vitro dans lequel nous avons éliminé CAR dans les rosettes qui imitent la formation précoce du tube neural pour comprendre le rôle de CAR pendant la neurogenèse précoce. La taille de la lumière des rosettes avec CAR KO a diminué par rapport aux rosettes WT. Ensuite, nous avons exploré la fonction directe et indirecte de CAR pendant la neurogenèse adulte dans des environnements sains et inflammatoires. À l'aide d'un modèle in vivo, nous avons étudié l'expression de CAR et des marqueurs de la neurogenèse dans le gyrus denté de souris soumises à un régime riche en graisses. Le niveau de CAR a diminué en raison d'un environnement inflammatoire, sans changement dans l'expression de GFAP et DCX, par rapport à WT. Nos données suggèrent que la perte de CAR affecte la différenciation, la prolifération ou la survie des cellules in vitro et in vivoThe coxsackie and adenovirus receptor (CAR) is a cell adhesion molecule (CAM) widely expressed in different organs. In my thesis, I focused on the expression of CAR in the dentate gyrus of the hippocampus, a brain structure essential for memory and mood control and has a major role in learning and forgetting. In rodents and humans, new neurons are continuously generated in the DG, in a process called adult neurogenesis. The expression of CAR is strong during development and neonatal stages suggesting a role during development, but is also present in the adult brain. Knowing where CAR is expressed in the brain is an essential step to be able to know what CAR is doing in the brain and how it may affect neurogenesis, cognition and behavior and what is the role played by CAR during neurogenesis diseases. We found that CAR occasionally colocalize with GFAP, this was restricted to areas that are associated with adult neurogenesis. Then, we used an in vitro model where we knock-out CAR, using CRISPR cas9, in rosettes that mimics early neural tube formation to understand the role of CAR during early neurogenesis. The lumen size of rosettes with CAR KO decreased compared with WT rosettes. Second, we explored the direct and indirect function of CAR during adult neurogenesis in healthy and inflammatory environments. Using an in vivo model, we studied the expression of CAR and neurogenesis markers in the dentate gyrus of mice challenged with high fat diet. The level of CAR decreased due to an inflammatory environment with no changes in the expression of GFAP and DCX, compared to WT. Our data suggest that CAR loss affects the differentiation, proliferation or survival of cells in vitro and in vivo
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Hodik, Monika. "Enterovirus Implications in Type 1 Diabetes." Doctoral thesis, Uppsala universitet, Klinisk immunologi, 2013. http://urn.kb.se/resolve?urn=urn:nbn:se:uu:diva-204378.
Full textAbstract:
Human enteroviruses (HEVs), particularly Coxsackie B viruses (CVBs), might trigger the onset of type 1 diabetes (T1D), either by direct infection of the insulin-producing beta-cells or by an indirect inflammatory response. The overall aim of this thesis was to study the tropism of HEVs in isolated human pancreatic cell clusters in vitro including virus effects on islet function, gene-expression and ultrastructure. Furthermore, the expression of the major CVB-receptor, CAR, was investigated in pancreatic tissue from T1D-related subjects and CVB-infected islets. Also, tissues and isolated islets from two adult organ-donors who died close to disease onset were studied.The results showed that beta-cells were destroyed through lytic infections with different strains of CVBs and that islets function did not depend on replication per se but on the degree of islet destruction. Virus particles were observed in beta-cells in association with insulin granules, however no virus replication or particles could be observed in the exocrine cell clusters, as opposed to in mice models. The virus-infected islets had a decreased expression of insulin mRNA and CAR mRNA/protein, possibly reflecting virus-killed beta-cells. Infected beta-cells contained a high number of insulin granules, which might indicate an impaired function.The in vivo studies showed presence of virus proteins in the islets of both donors who died close to onset of T1D and elevated expression of innate immunity genes, potentially indicating viral infection, but direct evidence is lacking. Both donors were immune-reactive for insulin but the isolated islets had an impaired or completely lacking glucose response. Ultrastructural analysis showed both damaged beta-cells and normal-looking beta-cells, indicating that the latter might still have the potential to function but were blocked. CAR-expression was significantly increased in T1D-related subjects which might indicate tissue damage and/or inflammation in these subjects.To conclude, these results showed that CVBs could infect human primary beta-cells, likely by binding to CAR and lead to functional abnormalities, indicating that they could cause T1D in vivo. Exocrine cells were not permissive to CVB, which raises the question if mice-models should be used to study human pancreatitis. Also, unique materials from two T1D organ-donors were described.
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Andreoletti, Laurent. "Etude du role des coxsackievirus b dans la physiopathologie des cardiomyopathies dilatees (doctorat : virologie)." Lille 2, 1997. http://www.theses.fr/1997LIL2T014.
Full text
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Bevan, Adrian Llewellyn. "Induction of nitric oxide synthase in experimental Coxsackie B3 virus-induced myocarditis in mouse." Thesis, Imperial College London, 2002. http://ethos.bl.uk/OrderDetails.do?uin=uk.bl.ethos.397954.
Full text
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Said, Aparecida Celli de Almeida 1956. "Estudo do provavel papel do virus Coxsackie B4 na diabetes Mellitus dependente de insulina." [s.n.], 1997. http://repositorio.unicamp.br/jspui/handle/REPOSIP/316527.
Full textAbstract:
Orientador: Antonio Fernando Pestana de Castro, Nando K. ChatterjeeTese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia
Made available in DSpace on 2018-07-22T03:33:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Said_AparecidaCellideAlmeida_D.pdf: 3937580 bytes, checksum: 1feafe1349dfd970ab48b2c5fcf4d58f (MD5) Previous issue date: 1997
Resumo: A similaridade entre a proteína P2-C do vírus Coxsackie B4 e GAD humano e o possível papel dessa homologia de epótopos no desenvolvimento de uma resposta imune específica na diabetes mellitus dependente de insulina (DMDI) foi investigada. Foram produzidos anticorpos contra os peptídios sintéticos P2-C, GAD6s e GAD67 e sua imunoreatividade ftente a GAD total purificado de cérebro e pâncreas de camundongos foi analisada através do ELISA e Immunoblotting. Além disso, anticorpos anti-P2-C e anti-GAD foram pesquisados de camundongos infectados com vírus Coxsackie B4 e nos soros de pacientes com diabetes mellitus dependente de insulina. Os antissoros anti-peptídios (anti-P2-C , anti-GAD6s e anti-GAD67) reagIram fortemente com os respectivos peptídios homólogos; o antissoro anti-P2-C reagiu cruzadamente com GAD6s tão eficientemente quanto anti-GAD6s com P2-C, porém não foi detectada reação cruzada entre P2-C e GAD67, embora a reação entre os dois GADs tenha sido bastante intensa. O antissoro P2-C formou imunocomplexo com GAD6s purificado de cérebro e pâncreas de camundongo, enquanto que anti-GAD6s e anti-GAD67 também mostraram capacidade de formar imunocomplexos com GAD dessas duas fontes. A maioria dos soros de camundongos infectados foram reativos a GAD purificado de cérebro e pâncreas de camundongo e ao peptídio P2-C, enquanto que somente alguns soros reagiram ao peptídio GAD65 e muito poucos ao peptídio GAD67. Muitos soros diabéticos reagiram com GAD65 purificado e também com os peptídios P2-C e GAD65 mas somente muito poucos reagiram com o peptídio GAD67. A imunoreatividade dos soros de camundongos e dos soros humanos foi bloqueada por absorção com GAD purificado de cérebro de camundongo. Os resultados sugerem que o mimetismo molecular deve ter um papel na patogênese da Diabetes mellitus dependente de insulina (DMDI)
Abstract: The possible role of amino acid sequence and epitope homologies between a protein P2-C of Coxsackie virus B4 and human GAD in the development of host-specific immune response in insulin-dependent diabetes mellitus (100M) (molecular mimicry) was investigated. Peptide antibodies to the P2-C protein, GAD65 and GAD67 were raised to analyze their immunoreactivity by enzyme-linked immunosorbent assay and immunoblotting with GAD purified from the brain and pancreas of mice that develop hyperglycemia after the infection. Additionally, antibody reactivity to these peptide antigens was assessed in sera from the virus-infected mice and IDDM patients. All three peptide antisera reacted very strongly with homologous peptides; P2-C antiserum cross-reacted with GAD6s as efficiently as GAD65 antiserum with P2-C, but no cross-reaction was detected between P2-C and GAD67 although cross-reaction between the two GADs was quite pronounced. P2-C antiserum immunocomplexed with GAD65 from mouse brain or pancreas, whereas GAD65 and GAD67 antisera both immunocomplexed with the two GADs from these sources. Most of the sera from virus-infected mice were reactive to brain and pancreas GAD65 and also to P2-C peptide, whereas some reacted to GAD65 and a few to GAD67 peptides. A number of rnOM sera reacted with mouse GAD65 and also with P2-C and GAD65 peptides, whereas only a few reacted with GAD67 peptide. The immunoreactivity of the mouse and IDDM sera to P2-C and GAD65 peptides was blocked by pre-adsorption with mouse GAD. The results suggest that molecular mimicry may play a role in the pathogenesis of the disease
Doutorado
Doutor em Ciências
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Gharabaghi, Farhad. "Analyse d'un variant du coxsackievirus B4 : apport des techniques d'analyse génétique." Lyon 1, 1990. http://www.theses.fr/1990LYO1T162.
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CHIEUX, VINCENT. "Proteine mxa : activite antivirale et interet medical." Lille 2, 2000. http://www.theses.fr/2000LIL2T003.
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Leparc-Goffart, Isabelle. "Modèles de persistance des entérovirus : myocardiopathie expérimentale murine à coxsackievirus B3 et syndrome post-poliomyélitique chez l'homme." Lyon 1, 1995. http://www.theses.fr/1995LYO1T294.
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Desailloud, Rachel. "Entérovirus et thyroïde." Lille 2, 2008. http://www.theses.fr/2008LIL2S029.
Full textAbstract:
La thyroïdite lymphocytaire chronique est l'une des pathologies autoimmunes les plus fréquentes. Les facteurs génétiques et environnementaux tels que les virus semblent impliqués dans leur survenue. Les entérovirus, virus impliqués dans d'autres pathologies autoimmunes, sont des candidats séduisants. Le rôle des entérovirus et notamment celui des coxsackievirus B4, virus nus à ARN positif, dans la pathogenèse du diabète de type 1 est suspecté. Il est fréquent d'observer chez les patients diabétiques de type 1 une thyroïdite lymphocytaire chronique. Dans ce contexte, nous avons émis l'hypothèse du rôle des virus dans la survenue de l'auto-immunité thyroïdienne. Peu d'études ont été réalisées dans ce domaine et le présence d'entérovirus au sein de tissus thyroïdiens n'a jamais été décrite. Première partie : étude in vivo objectif: Rechercher la présence d'ARN entéroviral dans des prélèvements de tissu thyroïdien avec et sans infiltrat lymphocytaire, l'infiltrat étant le marqueur histologique des thyroïdites. Méthodes: 86 patients adressés pour thyroïdectomie ont été prélevés. Les prélèvements thyroïdiens étaient réalisés et congelés à 80°C par le service d'anatomopathologie. Les données cliniques, biologiques, histologiques ont été recueillies. La recherche d'ARN viral était réalisée par RT-PCR en temps réel. Résultats: La recherche d'ARN entéroviral est positive (moins de 36 cycles) ou faiblement positive (de 37 à 39 cycles) chez 22 patients. La recherche d'ARN entéroviral est positive ou faiblement positive chez 5/27 (18. 5%) des prélèvements avec infiltrat lymphocytaire versus 17/59 (29%) des prélèvements sans infiltrat lymphocytaire (P= 0. 4). La recherche d'ARN entéroviral est positive ou faiblement positive chez 3 des 11 patients (27. 3%) diagnostiqués thyroïdites versus 18 des 74 patients ayant un diagnostic anatomopathologique autre (goître multinodulaire, adénomes ou carcinome) (p=0,5). Aucune corrélation n'a été mise en évidence entre la présence d'entérovirus et la positivité des anticorps anti-TPO. Conclusion: Nous montrons ici pour la première fois que l'ARN entéroviral est présent dans les prélèvements de tissus thyroïdiens mais sans relation avec la présence d'un infiltrat lymphocytaire. Des études complémentaires sont nécessaires afin d'évaluer le rôle de ces virus dans les pathologies thyroïdiennes. Deuxième partie : étude in vitro Objectifs : étudier in vitro l'infection de thyrocytes par coxsackievirus B4E2 (souche diabétogène) et évaluer les conséquences de l'infection sur la viabilité et la fonctionnalité des cellules. Méthodes : la culture des thyrocytes de la lignée de carcinome papillaire K1 est réalisée en plaques de 24 puits à raison de 5. 105 cellules par puits. A 24 h, les thyrocytes sont infectés avec la souche CVB4E2. Les virus sont laissés en contact 3 jours au-delà desquels le milieu est régulièrement renouvelé. La progénie virale est déterminée à J1, J3, J6, J13, J21. P. I. Par l'obtention d'une infection des cellules HEp-2 and Vero par l'addition des surnageants de culture et quantifiée par la méthode TCID50. L'infection des cellules est étudiée au niveau moléculaire par la recherche d'ARN viral positif (+) et négatif (-) (intermédiaire de réplication) à l'aide de la RT-PCR et par la recherche de la protéine de capside VP1 par immunofluorescence indirecte. La viabilité des cultures est évaluée à l'aide d'une méthode reposant sur l'incorporation de MTT. Des cellules K1 non infectées servent de contrôle. Résultats : Il n'y a pas d'effet cytopathogène spécifique visible au microscope optique dans les cultures de cellules K1 infectées. L'infection des cellules est productive avec un titre viral maximal à J1 pour décroître ensuite progresivement et se négativer à J21. La détection d'ARN + et d'ARN est positive avec une prédominance d'ARN- détecté pendant toute la durée de la culture jusque J21 post-infection. Le nombre de cellules VP1+ diminue rapidement de J1 à J6 (280 cellules par puits à 110 cellules à J3 11 cellules à J6 dans une expérience représentative. La fixation VP1 est aussi observée dans des fragments cellulaires. Les viabilités à J3 J6 J14 J21 des cultures de cellules contrôles et de cellules infectées sont comparables. Cependant les thyrocytes infectés d'aspect polygonal en début de culture acquièrent un aspect différent avec des prolongements à type de ramifications cytoplasmiques. La coloration par Hoechst Dye permet d'observer des images d'apoptose à type de noyaux fragmentés et de fluorescence intense. Conclusion : Le virus se multiplie dans notre modèle de thyrocytes (lignée K1) dans les premiers jours de culture (ARN+/ARN- et VP1) puis persiste dans les cellules pendant toute la durée de l'étude (21 jours) sous forme ARN avec prédominance d'ARN négatif. Le virus n'altère pas la viabilité de la culture. Nous montrons pour la première fois que l'infection à CVB4 de thyrocytes est possible. L'étude de l'infection et de ses effets dans les cellules thyroïdiennes est à poursuivre car ils pourraient jouer un rôle dans la survenue des pathologies autoimmunes
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Ferlin, Juliette. "Etude de la voie de signalisation GBF1-ARF au cours de la réplication virale." Thesis, Lille 2, 2018. http://www.theses.fr/2018LIL2S047.
Full textAbstract:
Depuis une décennie, GBF1 a émergé comme étant un facteur cellulaire essentiel à la réplication de plusieurs virus à ARN de polarité positive (ARN(+)), issus de différentes familles. GBF1 est un facteur d’échange nucléotidique de petites protéines G de la famille Arf, connu pour son action régulatrice des étapes précoces de la voie de sécrétion. En étudiant le virus de l’hépatite C (VHC) comme virus modèle, nous avons montré que le rôle de GBF1 dans la réplication virale est distinct de sa fonction régulatrice de la voie de sécrétion. En effet,GBF1 participe à la réplication du VHC par l’intermédiaire de la paire Arf4 et Arf5, alors que c’est la paire Arf1et Arf4 qui est impliquée dans la voie sécrétion. Pour déterminer si ce mécanisme d’action est conservé parmi les virus à ARN(+), nous avons d’abord montré que GBF1 est impliquée dans l’infection par le virus de la fièvre jaune (YFV), le virus sindbis (SINV), le coronavirus 229E humain (HCoV-229E) et le coxsackievirus B4(CVB4). Puis, nos résultats indiquent que les infections YFV, SINV et HCoV-229E dépendent, tout comme le VHC, des protéines Arf4 et Arf5. Toutefois, le YFV et le SINV utiliseraient également une autre paire d’Arf,Arf1 et Arf4, lors de leur cycle viral. Par ailleurs, l’infection par le coxsackievirus B4 (CVB4) est dépendante de GBF1 mais ne semble pas dépendre des protéines Arf. Bien que GBF1 soit un facteur crucial pour la réplication des virus ARN(+), son mécanisme d’action ne semble donc pas être conservé.La paire Arf4-Arf5 semble impliquée dans la réplication de plusieurs virus à ARN(+). Cependant, ces deux Arf ont été très peu étudiées, contrairement à la protéine Arf1. Nous faisons l’hypothèse que la paire Arf4-Arf5 agit en régulant une série d’effecteurs spécifiques qui sont importants pour la réplication virale. Nos résultats montrent que la déplétion simultanée de Arf4 et de Arf5 perturbe la morphologie de l’appareil de Golgi, qui devient condensé, et des gouttelettes lipidiques (GL), qui s’accumulent et grossissent en périphérie cellulaire.Toutefois, une analyse lipidomique de cellules déplétées de Arf4 et Arf5 montre une composition lipidique inchangée, ce qui suggère un effet sur la morphologie des GL et non pas sur le métabolisme des lipides. Une analyse transcriptomique nous a permis de mettre en évidence une série de protéines, dont l’expression est modulée, suite à la déplétion de Arf4 et Arf5. Nous avons évalué l’implication potentielle de certaines d’entre elles dans l’infection du VHC, mais aucune ne s’est révélée importante pour ce virus. En conclusion, nos résultats ont permis de mettre en évidence de nouvelles fonctions de GBF1, médiées par la paire de protéines Arf4 et Arf5. Arf4 et Arf5 sont impliquées dans la régulation de la morphologie de l’appareil de Golgi et des GL ainsi que dans la réplication de plusieurs virus à ARN(+). Il reste à évaluer si ces fonctions sont indépendantes les unes des autres ou liées entre elles et quels effecteurs spécifiques elles font intervenirGBF1 has recently emerged as a cellular factor essential for the replication of single-stranded positive-sense RNA ((+)RNA) viruses from different families. GBF1 is a guanine-nucleotide exchange factor of small G proteins of the Arf family, known to regulate the early secretory pathway. By studying the hepatitis C virus (HCV) as a model, we have shown that the role of GBF1 in viral replication is distinct from its regulatoryfunction of the sercretory pathway. Indeed, GBF1 function in HCV replication is mediated by Arf4 and Arf5,whereas another pair, Arf1 and Arf4, mediates the regulation of the secretion. To determine if this mechanism ofaction is conserved among (+)RNA viruses, we showed that GBF1 is involved in yellow fever virus (YFV),sindbis virus (SINV), human coronavirus 229E (HCoV-229E) and coxsackievirus B4 (CVB4) infection. Our results indicate that YFV, SINV and HCoV-229E infections are Arf4 and Arf5 dependent, as we previouslyshowed for HCV. However, YFV and SINV would also use another Arf pair, Arf1 and Arf4, during their lifecycle. In addition, CVB4 infection depends on GBF1, but doesn’t seem to depend on any Arf. Although GBF1 is required for (+)RNA viruses replication, its mechanism of action appears not to be conserved.The Arf4-Arf5 pair appears to be involved in the replication of several (+)RNA viruses. However, these twoproteins have been poorly studied so far, contrary to Arf1. Our hypothesis is that the Arf4-Arf5 pair regulatesspecific effectors involved in viral replication. Our results indicate that Arf4 and Arf5 simultaneous depletionalters the morphology of the Golgi apparatus, which becomes condense, and of lipid droplets (LD), whichaccumulate and grow bigger at the cell periphery. However, a lipidomic analysis of Arf4 and Arf5 depleted cellsdisplayed an unaltered lipid composition, which suggests a morphologic impact on LD, rather than a disruptionof the lipid metabolism. A transcriptomic analysis identified proteins up- or down-regulated after Arf4 and Arf5 depletion. We assessed the function of some of these proteins in HCV replication, but none of them proved implicated.In conclusion, our results hightlighed new GBF1 functions, mediated by the pair Arf4-Arf5. Arf4 and Arf5 are involved in regulating the morphology of Golgi complex and of LDs, as well as the replication of (+) RNA viruses. It remains to assess if these functions are independent or related to each other, and which specific effectors they use
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Ghazarian, Liana. "Protection against type 1 diabetes upon Coxsackievirus B4 infection and iNKT cell stimulation : role of suppressive macrophages." Phd thesis, Université René Descartes - Paris V, 2013. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-01071267.
Full textAbstract:
INKT cells are non-conventional T lymphocytes that are restricted to glycolipid presenting CD1d molecule. iNKT cells express an invariant TCR a chain (Va14-Ja18 in mice and Va28-Ja18 in humans). Their particularity is to rapidly produce copious amounts of cytokines (IFN-? and IL-4) after activation and to activate other cells of the immune system such as dendritic cells, NK cells and T lymphocytes. iNKT cells, therefore, form a bridge between innate and adaptive immune responses. Type 1 diabetes is an autoimmune disease characterized by the destruction of pancreatic ß cells whose role is to produce insulin. While diabetes development can clearly be associated with genetic polymorphisms, environmental factors were also implicated in the etiology of the disease. Numerous studies suggest that viral infections, particularly infections with Coxsackievirus B4 (CVB4), could be implicated in the development of type 1 diabetes. Our study was performed with NOD mice that develop type 1 diabetes around 15 weeks of age and with proinsulin 2 knockout NOD mice (Pro-ins2-/-) which become diabetic around 8 weeks of age. Our results show that CVB4 infection induces accelerated diabetes in around half of NOD and Pro-ins2-/- mice compared to uninfected mice. However, the activation of iNKT cells with their agonist, aGalactosylceramide (aGalCer), at the time of infection greatly decreases diabetes incidence. CVB4 infection induces a strong recruitment of macrophages into the pancreas. Interestingly, iNKT cell activation modifies the function of these macrophages. Indeed, pancreatic macrophages of CVB4 infected mice strongly express IL-1, IL-6 and TNF-a, indicating their pro-inflammatory character. On the contrary, macrophages of mice infected with CVB4 and treated with aGalCer express low levels of these cytokines, but strong levels of suppressive enzymes iNOS (inducible NO synthase), IDO (Indoleamine 2,3-dioxygenase) and arginase I. The use of inhibitors of these enzymes showed that diabetes prevention is induced by IDO. We have also observed that autoreactive T cells strongly infiltrate the pancreatic islets after CVB4 infection. It is interesting to note that the high diabetes incidence of CVB4 infected mice is associated with an increased frequency of IFN-? producing autoreactive T cells in pancreatic islets. On the contrary, the frequency of these cells is very low in infected mice treated with aGalCer. The inhibition of IFN-? production is dependent on IDO enzyme, since the use of its inhibitor strongly increases IFN-? production by anti-islet T cells and diabetes incidence. To summarize, our results show that iNKT cell activation during the infection with CVB4 induces immunosuppressive macrophages in the pancreas. These cells inhibit the function of autoreactive T cells and prevent diabetes development.
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Schreiber, Jadwiga [Verfasser]. "The cell adhesion molecule coxsackie virus and adenovirus receptor (CAR) modulates intracellular Ca2+ concentration and Cl- conductance in cultivated mouse cortical neurons / Jadwiga Schreiber." Berlin : Freie Universität Berlin, 2010. http://d-nb.info/1023958511/34.
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Herrmann, Leonie [Verfasser]. "Role of Coxsackie- and adenovirus receptor (CAR) genetic variants, CAR- and adenovirus-based synthetic peptides, and CAR-shedding in CAR-mediated virus entry / Leonie Herrmann." Bielefeld : Universitätsbibliothek Bielefeld, 2021. http://d-nb.info/1229086161/34.
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Siafakas, Nikolaos. "Molecular classification of coxsackie A virus reference and wild type strains on the basis of RFLP analysis and sequencing of the 5'-UTR : structural and evolutionary aspects." Thesis, University of Essex, 2002. http://ethos.bl.uk/OrderDetails.do?uin=uk.bl.ethos.369367.
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Wehbe, Michel. "Etude de l’activité de réplication des formes de Coxsackievirus B3 complètes et tronquées dans la région 5’non codante dans un modèle de cardiomyocytes humains primaires en culture." Thesis, Reims, 2016. http://www.theses.fr/2016REIMS042.
Full textAbstract:
Les Entérovirus humains du groupe B (EV-B) et plus spécifiquement les virus Coxsackie B sont considérés comme une cause majeure des myocardites infectieuses aigues et chroniques dont 10% peuvent évoluer vers la cardiomyopathie dilatée (CMD). Les mécanismes moléculaires viraux impliqués dans la progression de la myocardite aiguë vers le stade de la CMD ne sont pas élucidés.L’analyse par séquençage NGS a montré chez 8 (33%) des 24 patients atteints de CMD inexpliquée l’existence de populations majoritaires tronquées de 19 à 50 nucléotides associées à des formes virales minoritaires complètes. La proportion de populations tronquées s’est révélée négativement corrélée au ratio ARN+/ARN- et à la charge virale. Des études immuno-histologiques et par hybridation in situ des tissus cardiaques ont montré que le clivage de la dystrophine était uniquement retrouvé dans les cardiomyocytes infectés par les EV-B. Pour étudier les activités de réplication des populations d’EV-B persistants, un réplicon (CVB3-emGFP) a été généré à partir d’une souche cardiotrope (CV-B3/28). La transfection d’ARN de synthèse complets et tronqués (d50) dans des cultures de cardiomyocytes humains primaires a mis en évidence des mécanismes de recombinaison et/ou de trans-complémentation entre ces 2 formes virales induisant de faibles activités de réplication.Nos résultats démontrent l’existence de mécanismes de coopération moléculaire entre des populations d’EV-B tronquées et complètes qui pourraient expliquer la mise en place du mécanisme de persistance virale observée au cours de la phase clinique de CMD. Ces résultats pourraient contribuer au développement de nouvelles stratégies thérapeutiques pour prévenir et traiter les infections cardiaques à EV-BEnteroviruses group B (EV-B) and more specifically Coxsackievirus B are recognized as major causes of acute and chronic infectious myocarditis, which 10% may progress towards dilated cardiomyopathy (DCM). Viral molecular mechanisms involved in the progression from acute myocarditis to the clinical stage of DCM remain unknown.Deep sequencing analysis showed in 8 (33%) of 24 unexplained DCM patients the existence of major CVB3 populations with deletions of 19 to 50 nucleotides associated with a minority of complete viral forms. The proportion of deleted viral populations was negatively correlated with RNA+/RNA- ratio and the viral load levels. Immuno-histological and in situ hybridization assays of DCM cardiac tissues demonstrated that the cleavage of dystrophin was found only in cardiomyocytes infected with EV-B. To study the replication activities of persistent EV-B populations, a replicon (CVB3-emGFP) was generated from a cardiotropic strain (CV-B3/28). Transfection of synthesized complete and truncated (d50) viral RNAs in primary human cardiomyocytes cultures revealed mechanisms of recombination and / or trans-complementation between these two viral forms inducing low replication activities.In conclusions, our original results demonstrated the existence of new molecular mechanisms of cooperation between EV-B deleted and complete viral populations that could explain the development of a viral persistence mechanism observed during the clinical phase of DCM. These findings may contribute to the development of new therapeutic strategies to prevent and treat persistent heart EV-B infections
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Alidjinou, Enagnon Kazali. "Infection à coxsackievirus B4, inflammation et persistance." Thesis, Lille 2, 2016. http://www.theses.fr/2016LIL2S022/document.
Full textAbstract:
Les coxsackievirus du groupe B (CVB) sont des petits virus à ARN appartenant à au genre Enterovirus et à la famille des Picornaviridae. Chez, l’homme, les CVB sont responsables de nombreuses infections aiguës bénignes ou sévères. Ils sont également incriminés dans le développement de maladies chroniques telles que le diabète de type 1 (DT1). En effet, plusieurs données épidémio-cliniques sont en faveur d’un lien entre les entérovirus et notamment les CVB et le DT1. Deux mécanismes majeurs ont été proposés pour expliquer cette pathogenèse entérovirale du DT1. Il s’agit de l’activation « en passant » d’un environnement inflammatoire et la persistance virale qui concourent à l’initiation du processus auto-immun. Les études présentées dans cette thèse visent à comprendre les caractéristiques et conséquences de l’infection à CVB qui pourraient expliquer l’implication de ces mécanismes. Les résultats obtenus suggèrent que CVB4 (utilisé comme modèle des CVB) est un virus inflammatoire. In vitro, il induit la production de grandes quantités d’IFNα par les cellules mononuclées du sang (CMN). Néanmoins cette induction d’IFNα n’est possible qu’en cas de facilitation de l’infection par des anticorps non neutralisants, qui se traduit par une entrée importante du virus dans les cellules. Dans nos travaux, l’IFNα a été détecté dans le plasma de sujets diabétiques, et fréquemment associé à la présence d’ARN entéroviral. De même, parmi les CMN, les monocytes ont été identifiés comme les principales cellules cibles du virus. En dehors de l’IFNα, nous avons montré que CVB4 peut induire la synthèse de plusieurs autres cytokines pro-inflammatoires notamment l’IL-6 et le TNFα. De façon intéressante, l’infection des cellules n’est pas indispensable car cette induction est possible par des particules non infectieuses. Cette production de cytokines pro-inflammatoires par les CMN peut également être amplifiée par la facilitation de l’infection en présence de particules infectieuses de CVB4. Nous avons montré que les macrophages, cellules effectrices importantes de l’immunité innée au niveau tissulaire, peuvent produire en présence de CVB4 de l’IFNα et d’autres cytokines pro-inflammatoires. Les macrophages dérivés de CMN en présence de M-CSF (mais pas de GM-CSF) sont infectables par CVB4 et le virus peut persister dans ces cellules. CVB4 peut également établir une infection chronique productive de type « état porteur » dans des cellules canalaires pancréatiques. Les cellules chroniquement infectées peuvent être guéries grâce à un traitement par de la fluoxétine. Cette molécule utilisée dans le traitement de troubles psychiatriques, présente in vitro une activité antivirale vis-à-vis de certains entérovirus, et permet d’éliminer complètement en quelques semaines le virus des cellules chroniquement infectées par CVB4. Des modifications cellulaires ont été observées au niveau des cellules chroniquement infectées notamment une diminution de l’expression de PDX-1, une résistance à la lyse au cours d’une réinfection par CVB4, ainsi qu’une diminution très importante de l’expression du récepteur CAR. Ces modifications cellulaires acquises au cours de l’infection chronique pouvaient persister après l’élimination du virus. Les cellules chroniquement infectées présentent également un profil de microARNs très différent de celui des cellules non infectées. Une évolution du virus a été également observée avec des changements phénotypiques et génotypiques. L’ensemble de nos observations montre que les caractéristiques de l’infection à CVB4 sont compatibles avec les mécanismes évoqués dans la pathogenèse entérovirale du DT1 et renforcent l’hypothèse de l’implication des CVB dans cette maladieGroup B coxsackieviruses (CVB) are small RNA viruses belonging to Enterovirus genus and to the Picornaviridae family. In humans, CVB can cause numerous mild and severe acute infections. They are also thought to be involved in the development of chronic diseases such as type 1 diabetes (T1D). Several epidemiological and clinical data support a link between enteroviruses, especially CVB and T1D. Two main mechanisms have been described to explain this enteroviral pathogenesis of T1D including a “bystander activation” of an inflammatory environment and viral persistence. These mechanisms contribute to initiation of the autoimmune process. Our studies aimed to understand the features and outcomes of CVB infection that could explain their involvement in these mechanisms. The results suggest that CVB4 (used as CVB model) is an inflammatory virus. CVB4 induces in vitro the production by peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) of high amounts of IFNα. However this induction is only possible when CVB4 infection is enhanced by non-neutralizing antibodies, resulting in increased viral entry in cells. We also reported detection of IFNα in plasma of T1D patients, commonly associated with enteroviral RNA. In addition, monocytes have been identified as major targets of enteroviruses among PBMCs. Besides IFNα, CVB4 can induce the synthesis of other proinflammatory cytokines, mainly IL-6 and TNFα. Interestingly, infection is not needed, since inactivated viral particles can induce these proinflammatory cytokines. In addition, the enhancing of CVB4 infection in PBMCs results in increased production of these cytokines. We have shown that macrophages that are known as major innate immunity effectors can produce IFNα and other proinflammatory cytokines upon infection with CVB4. Macrophages derived from PBMCs in presence of M-CSF (but not GM-CSF) can be infected by CVB4, and the virus can persist in these cells. CVB4 can also establish a productive, carrier-sate persistent infection in pancreatic ductal-like cells. The virus can be completely cleared from chronically-infected cells using fluoxetine. This molecule already used in the treatment of depression and other mental disorders, has displayed antiviral activity against many enteroviruses, and can completely clear CVB4 from chronically-infected cells within few weeks. Cellular changes have been observed during chronic infection including a reduced expression of PDX-1, a resistant profile to lysis upon superinfection with CVB4, and an important decrease of CAR expression. These changes can linger even after the clearance of CVB4. In addition the miRNA profile in chronically-infected ductal-like cells was clearly different from that of mock-infected cells. Some phenotypic and genotypic changes were also observed in the virus derived from chronic infection. Altogether, these findings show the features of CVB4 infection are compatible with mechanisms reported in the enteroviral pathogenesis of T1D, and support the hypothesis of involvement of CVB in this disease
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Bouin, Alexis. "Etude des caractères génétiques des Entérovirus persistants dans les tissus cardiaques de sujets atteints de cardiomyopathie dilatée idiopathique." Thesis, Reims, 2015. http://www.theses.fr/2015REIMS015.
Full textAbstract:
Les Entérovirus, et notamment les coxsackievirus B (CV-B), sont une cause commune de myocardite. Cette maladie peut évoluer vers une myocardite chronique jusqu’au stade de cardiomyopathie dilatée (CMD). Le mécanisme moléculaire permettant le passage de l’infection aigue à l’infection persistante dans le tissu cardiaque humain reste méconnu. Pour étudier les activités de réplication des CV-B persistant, un réplicon a été généré à partir d’une souche cardiotrope. Il a permis de caractériser les activités de réplication de CV-B persistant dans des cellules cardiaques humaines. Une analyse par séquençage à moyen débit a permis de mettre en évidence la sélection de variants tronqués dans le cœur pouvant expliquer la progression de la myocardite virale vers la CMD. De plus, l’existence de populations majoritaires tronquées de 19 à 50 nucléotides associées à des formes virales minoritaires complètes a été mise en évidence chez 8 patients atteints de CMD. La proportion de populations tronquées s’est révélée négativement corrélée au ratio ARN+/ARN- et à la charge virale (R2=0,748; P=0,016; R2= 0,36, P=0,038, respectivement). Des études immuno-histologiques et par hybridation in situ des tissus cardiaques ont montrées que le clivage de la dystrophine était uniquement retrouvé dans les cardiomyocytes infectés par les CV-B. La transfection d’ARN de synthèse complets et tronqués dans des cultures de cardiomyocytes humains primaires a mis en évidence une trans-complémentation entre les 2 formes virales induisant de faibles activités de réplication. Nos résultats démontre l’existence d’un nouveau mécanisme moléculaire de coopération entre des populations persistantes d’entérovirus B tronquées et complètes qui contribue à la physiopathologie de la CMDEnteroviruses, especially group B coxsackieviruses (CV-B) are considered to be a common cause of acute human myocarditis, a disease that is a precursor of chronic myocarditis cases as well as dilated cardiomyopathy (DCM). The molecular mechanisms related to the switch from the acute to the CV-B chronic persistent infection in human cardiac tissues are still unknown. To study the replication activities of CV-B a replicon from a cardiotropic prototype strain was generated and was used to study persistent CV-B replication activities into human cardiac cells. Using NGS analyses, our results evidenced that the molecular selection of TD viral forms in heart could explain pathophysiological progression from acute viral myocarditis to DCM. Moreover, we demonstrated in 8 end-stage DCM patients the existence of CV-B major populations characterized by 5’NTR deletions ranging from 19 to 50 nucleotides that were associated with minor full-length viral forms. The amounts of persistent deleted populations appeared to be negatively correlated to RNA(+)/RNA(-) minus ratio and viral load values (R2=0.748; P=0.016; R2= 0.36, P=0.038, respectively). In situ hybridization and immunohistological assays in cardiac tissues demonstrated that the dystrophin disruption was only present in EV-B infected cardiomyocytes. Transfection of deleted and full-length RNA-populations in cultured primary human cardiomyocytes evidenced a trans-acting genomic complementation system between the two viral forms resulting in low viral replication activities. Our findings suggest a new molecular mechanism through which persistent low replicative EV-B deleted and full-length collaborative populations contribute to the pathogenesis of idiopathic DCM cases
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Thevenin, Thomas. "Pouvoir virucide de désinfectants à l'encontre de coxsackievirus B4 et d'autres virus en suspension ou en surface." Thesis, Lille 2, 2011. http://www.theses.fr/2011LIL2S052.
Full textAbstract:
La résistance au séchage des virus dépend de plusieurs facteurs : le type de support, la température, l'humidité et la composition de l'enveloppe ou de la capside. Un virus déposé sur une surface peut conserver son pouvoir infectieux pendant plusieurs jours voire plusieurs mois si les conditions sont réunies. Inactiver des virus présents sur différentes surfaces est un enjeu majeur dans la lutte contre la propagation des maladies nosocomiales. Cette problématique est importante et elle nécessite de réaliser des travaux pour connaître davantage la sensibilité des virus aux substances et produits utilisés dans ce but. [...] Dans le cadre de cette thèse des méthodes ont été développées pour comparer l'activité virucide de désinfectants sur des virus en suspension ou sur une surface (acier inoxydable ou support non tissé-fonctionnalisé). Deux approches ont été mises en oeuvre : la première afin de tester l'activité virucide de supports préalablement fonctionnalisés, la seconde afin de comparer l'activité virucide de produits sous forme liquide ou diffusés par voie aérienne à l'encontre de virus en suspension ou séchés sur un support solide. [...]The resistance of viruses to drying relies on several factors : the type of surface, temperature, humidity and the compositon of the viral envelope or capsid. A virus adsorbed on a surface can remain infectious for several days or months if the conditions are met. [...] In this thesis, methods were developed to compare the virucidal activity of disinfectants towards viruses in suspension and on surfaces (stainless steel or non-woven fuctionalized textiles). Two approaches were implemented : the first to test the virudical activity of functionalized surfaces
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Loustalot, Fabien. "Study of CAR membrane dynamics in adenovirus infection and CAR endogenous role in healthy and diseased brain." Thesis, Montpellier, 2015. http://www.theses.fr/2015MONTT029.
Full textAbstract:
Les pathogènes neurotropiques représentent une banque d’outils biologique afin de cibler spécifiquement le système nerveux central (SNC), pour son étude mais aussi dans l’optique d’une thérapie. Parmi eux, l’adénovirus canin de type 2 (CAV-2) est un vecteur prometteur pour cibler le SNC. CAR a été principalement étudié en tant que récepteur viral. Cependant, plusieurs études montrent que CAR est essentiel dans le développement du cœur ainsi que du système lymphatique. De manière intéressante, CAR est fortement exprimé pendant le développement du SNC, suggérant un rôle dans l’établissement des réseaux neuronaux. Dans ce travail, nous avons confirmé que CAR est lié aux mécanismes d’endocytoses et au trafic intracellulaire. L’endocytose de CAR est ligand dépendant. La partie intracellulaire de CAR régule son endocytose. Nos données suggèrent que CAR est l’unique récepteur pour CAV-2. Le présent travail de recherche montre aussi que CAR ne semble pas participer à la formation du SNC. En revanche, au niveau du SNC mature, CAR est impliqué dans la plasticité synaptique, dans la neurogénèse adulte et participe à l’homéostasie des synapses, mécanismes impliqués dans les processus mnésiquesThe coxsackievirus and adenovirus receptor (CAR) is a single-pass transmembrane protein belonging to the CTX subfamily of the immunoglobulin superfamily. CAR has been extensively studied as a viral receptor for coxsackie B viruses and some adenoviruses (AdVs). CAR is essential for the development of the cardiovascular and lymphatic system. Interestingly, CAR is highly expressed in the developing brain and has been hypothesized to regulate the establishment of the neuronal networks. In my PhD work, I showed that CAR can be link to the endocytic pathways and intracellular trafficking. CAR endocytosis is ligand-dependent and is regulated by CAR intracellular domain (ICD), suggesting strongly that CAR is most likely the unique receptor for canine adenovirus type 2 (CAV-2). Moreover, we demonstrated that CAR depletion in the developing brain did not significantly perturb brain development. In the healthy adult brain, CAR is relatively abundant and we demonstrated that CAR loss of function affected hippocampal plasticity, adult neurogenesis and synapse homeostasis, which affect cognition
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Sane, Famara. "Infection à Coxsackievirus B4 et prévention." Phd thesis, Université du Droit et de la Santé - Lille II, 2012. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00793386.
Full textAbstract:
Le diabète de type 1 (DT1) est une maladie chronique multifactorielle. Les infections entérovirales, en particulier à Coxsackievirus du groupe B (CVB), et notamment CVB4, transmises par voie digestive, constituent le facteur de risque le plus souvent évoqué dans la littérature. Plusieurs mécanismes physiopathologiques sont proposés pour expliquer cette relation entre CVB4 et diabète de type 1. Il s'agit, entre autres, du tropisme préférentiel de CVB4 pour les ilots et les cellules β pancréatiques et l'inflammation qui s'ensuit, de la persistance du virus au niveau des cellules infectées qui pourrait constituer un facteur déterminant dans le processus d'altération des cellules endocrines, de l'exacerbation possible de l'infection par des d'anticorps facilitateurs ou encore du mimétisme moléculaire entre les auto-antigènes et les antigènes viraux. Par ailleurs des auteurs ont montré que la cause de la déplétion des cellules β chez des souris infectées par la souche diabétogénique CVB4E2 est un défaut de régénération plutôt qu'une destruction directe de ces cellules par le virus. La présence de constituants entéroviraux dans les cellules ductales du pancréas de patients diabétiques a été observée. Le diabète de type 1, qui serait l'expression finale d'un long processus, survient généralement chez des sujets jeunes, c'est pourquoi l'hypothèse que le tissu pancréatique jeune serait plus permissif aux infections à CVB4 n'est pas exclue. La prévention des infections virales reste le meilleur moyen de protéger les individus contre les maladies qu'elles provoquent. Un intérêt particulier est aujourd'hui accordé à la mise en évidences et à la caractérisation d'inhibiteurs antiviraux à large spectre. L'absence d'allaitement maternel est associé à un risque plus élevé de diabète de type 1, mais la nature du ou des facteurs du lait conférant une protection est mal connue, et l'activité anti-CVB4 du lait maternel n'a pas été étudiée jusqu'à présent. Objectifs : Nous avons émis l'hypothèse que CVB4 pouvait infecter des cellules humaines précurseurs de cellules endocrines, impliquées dans la régénération des îlots. L'infection de ces cellules par CVB4E2 et ses conséquences ont été étudiées ; nous avons utilisé des cellules humaines précurseurs canalaires primitives et la lignée continue de cellules Panc-1, dont la différenciation in vitro est possible. La permissivité au CVB4 du tissu pancréatique selon l'âge a été étudiée ex vivo chez le rat et l'existence d'inhibiteurs antiviraux à large spectre est notamment explorée dans l'intestin de souris. L'activité anti-CVB4 du lait maternel susceptible de protéger, à un âge critique, le jeune enfant vis-à-vis d'un virus diabétogène a été étudiée in vitro et l'hypothèse que le lait humain pourrait prévenir le déclenchement du DT1 chez la souris NOD a également été évaluée in vivo.
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El, Kfoury Khalil Antoine. "Interactions coxsackievirus B4, bactéries intestinales et lait maternel : application à la pathogenèse et à la prévention du diabète de type 1." Thesis, Lille 2, 2016. http://www.theses.fr/2016LIL2S044/document.
Full textAbstract:
La présente étude vise à étudier le potentiel de bifidobactéries à protéger les cellules contre l’infection par le Coxsackie B4 (CV-B4). Le criblage de bifidobactéries a identifié deux des cinq souches qui protégeaient les cellules HEp-2 lorsque les bifidobactéries sont pré-incubées avec les particules virales avant l'inoculation sur les cellules Hep-2. En revanche, aucun effet protecteur n'a été observé en incubant les cellules Hep-2 avec des bifidobactéries avant l'inoculation de CV-B4. Les lipoprotéines des parois cellulaires (LpAs) sécrétées par les souches sélectionnées sont testées pour leur activité antivirale. Les deux LpAs présentaient une activité antivirale quand ils sont incubés avec les particules virales avant d’être inoculées aux cellules HEp-2. Aucun effet protecteur n'a été induit par incubation des LpAs avec les cellules HEp-2 avant l'inoculation de CV-B4. La protéine recombinante présente une activité antivirale identique. Pour identifier les séquences peptidiques interagissant avec les particules virales, les protéines de LpAs sont alignées avec les séquences peptidiques du nord bord du canyon et avec l’empreinte de la région puff sur le Coxsackievirus et sur le récepteur de l’adénovirus (CAR). L'étude d'amarrage moléculaire in silico (Docking) utilisant le CV-B3 en tant que modèle a montré une faible énergie de liaison indiquant un système stable pour les peptides sélectionnés et par conséquent une interaction probable avec le CV-B. Les peptides de B.longum et de B.breve qui sont homologues à l’empreinte du rebord nord viral sur la séquence CAR, forment des liaisons d’hydrogène avec plusieurs résidus viraux dans la région du rebord nord du canyon, qui sont déjà décrits pour leur interaction avec le CAR.En conclusion, les protéines de LPAS bifidobactéries peuvent inhiber l'infection par le CV-B4 probablement par liaison aux acides aminés de la capside qui interagissent avec le CARThe present study aims at investigating the potential of bifidobacteria in protecting cells from Coxsackievirus B4 (CV-B4) infection. The bifidobacterial screening identified two out of five strains that protected HEp-2 cell viability when bifidobacteria were incubated with the viral particles prior inoculation. In contrast, no effect was shown by incubating HEp-2 cells with bifidobacteria prior CV-B4 inoculation. Cell-wall lipoproteins secreted by the selected strains (LpAs) were assayed for their anti-viral activity. The two LpAs exhibited anti-viral activity when they were incubated with the viral particles prior inoculation to HEp-2 cells. No effect was induced by incubating LpAs with HEp-2 cells prior CV-B4 inoculation. The recombinant LpAs derived-protein exhibited identical anti-viral activity. To identify the peptide sequences interacting with the virus particles, LpAs proteins were aligned with the peptide sequences of north canyon rim and puff footprint onto coxsackievirus and adenovirus receptor (CAR). The in silico molecular docking study using CV-B3 as template showed a low energy binding indicating a stable system for the selected peptides and consequently a likely binding interaction with CV-B. B.longum and B.breve peptides homologous to the viral north rim footprint onto CAR sequence formed hydrogen bonds with several viral residues in the north rim of the canyon, which were already predicted as interacting with CAR. In conclusion, proteins from bifidobacterial LpAs can inhibit the infection with CV-B4 likely through binding to the capsid aminoacids that interact with CAR
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Benkahla, Mehdi Ayech. "Infection à entérovirus in vitro et in vivo." Thesis, Lille 2, 2016. http://www.theses.fr/2016LIL2S053/document.
Full textAbstract:
Le genre Enterovirus comporte de nombreux virus à ARN non enveloppés regroupés en espèces EV-A-J et Rhinovirus A-C. Les coxsackievirus B (CV-B) appartiennent à l’espèce EV-B. Le rôle des CV-B et notamment de CV-B4 dans la pathogenèse du diabète de type 1 (DT1) est fortement suspecté. Coxsackievirus-B4 E2 (CV-B4 E2) isolé à partir du pancréas d’un patient souffrant de DT1 est capable d’induire une hyperglycémie chez des souris. Les mécanismes de la pathogenèse entérovirale du diabète ne sont pas encore bien connus. Il a été montré que les monocytes humains sont infectés par CV-B4 in vitro grâce à des anticorps anti-VP4 formant des complexes avec le virus, et que les macrophages humains également sont infectés par CV-B4 in vitro. Les études réalisées in vitro sont riches d’informations mais des modèles d’infection in vivo sont nécessaires pour explorer d’avantage les mécanismes des infections à entérovirus. Malgré l’impact des entérovirus en pathologie les moyens de lutte contre ces virus sont limités.Nos principaux objectifs étaient i) d’étudier l’infection à CV-B4 E2 chez la souris et de déterminer si les monocytes/macrophages sont des cibles du virus in vivo ii) de mettre en œuvre un modèle de diabète induit par CV-B4 E2 chez la souris iii) d’étudier l’activité anti-CV-B4 de diverses molécules in vitro iiii) de mettre en évidence la survenue d’infections entérovirales naturelles chez des animaux.L'ARN viral est présent in vivo dans les monocytes (CD14+) et macrophages (F4/80+) de la rate et dans les cellules de la moelle osseuse de souris ICR-CD1 inoculées avec CV-B4 E2. In vitro, CV-B4 E2 infecte les cellules CD14+ et les cellules F4/80+ de la rate. Les macrophages dérivés de la moelle osseuse cultivés en présence de M-CSF sont infectés par CV-B4 in vitro. Le sérum de souris infectée par CV-B4 E2 facilite l’infection in vitro des cellules spléniques par CV-B4 E2, mais pas celle des macrophages dérivés de la moelle osseuse. Chez des souris ICR-CD1 préalablement traitées par des doses sub-diabétogènes de streptozotocine β (STZ), l’inoculation de CV-B4 E2 provoque une hyperglycémie associée à une hypo-insulinémie. La charge virale du pancréas évaluée par RT-PCR quantitative n’est pas différente chez les animaux diabétiques (STZ/CV-B4 E2) par rapport aux animaux inoculés avec le virus mais non diabétiques. L'analyse histologique du pancréas d’animaux diabétiques (STZ/CV-B4 E2) met en évidence des foyers d’inflammation au niveau des ilots de Langerhans. Des dérivés de pirodavir, molécules qui se fixent à la capside des entérovirus inhibent l’infection à echovirus 7 et 11 mais pas à CV-B4 E2 in vitro. Par contre la fluoxétine a fait preuve d’un effet anti-CV-B4 E2 dans un modèle de culture de fragments de pancréas et de cellules béta pancréatiques murins. La détection d’anticorps sériques anti-VP4 par ELISA, à l’aide d’un peptide de 50 acides-aminés de la protéine VP4 d’EV-G1 (un entérovirus porcin), a été appliquée à la mise en évidence de l’infection de jeunes porcs par des entérovirus. Une homologie de 88% de la séquence du peptide VP4 d’EV-G1 avec celle des protéines VP4 d’ autres EV-G suggère que des anticorps dirigés contre ces virus distincts d’EV-G1 puissent être détectés.En conclusion, CV-B4 E2 peut infecter les monocytes et les macrophages in vitro et in vivo dans un système murin, et le virus peut provoquer un diabète chez des souris préalablement exposées à de faibles doses de STZ. La fluoxétine inhibe l’infection à CV-B4 E2 de cellules pancréatiques in vitro. La détection d’anticorps anti-VP4 d’EV-G1 a permis de mettre en évidence des infections naturelles à entérovirus chez des jeunes porcs. Ce modèle porcin pourrait être mis à profit pour étudier la physiopathologie des infections à entérovirus et tester des moyens de lutte contre ces virusEnterovirus genus encompasses a number of non-enveloped RNA viruses grouped into 12 species, EV-A-J and Rhinovirus A-C. Group B coxsackieviruses (CV-B) belong to the EV-B species. CV-B and particularly CV-B4 is thought to be involved in the development of chronic diseases like type 1 diabetes (T1D). A strain of CV-B4 (CV-B4 E2) was isolated from the pancreas of a patient with T1D, and was able to induce a hyperglycemia in mouse. The mechanisms of the enteroviral pathogenesis of T1D are not well known yet. It has been observed that the infection of human monocytes with CV-B4 E2 in vitro can be enhanced by anti-VP4 antibodies bound to the virus, and human macrophages are also infected by CV-B4 in vitro. The in vitro studies are rich with information but in vivo infection models are needed to better understand the mechanisms of enterovirus infections. Despite the effect of enterovirus on health, the means in the fight against these viruses are limited.Our main objectives were i) to investigate CV-B4 E2-infection in mice and to determine whether monocytes / macrophages are targets of the virus in vivo ii) to implement a CV-B4 E2-induced diabetes model in mice iii) to study the anti-CV-B4 activity of various molecules in vitro iiii) To highlight the natural occurrence of enterovirus infections in animals.Viral RNA was found in vivo in monocytes (CD14+) and macrophages (F4/80+) of the spleen and in bone marrow cells of ICR-CD1 mice inoculated with CV-B4 E2. In vitro, CV-B4 E2 infected the CD14+ and the F4/80+ cells of the spleen. Bone marrow-derived macrophages (BMDM) were infected by CV-B4 in vitro. The serum of CV-B4 E2- infected mice enhanced in vitro the infection of spleen cells by CV-B4 E2 but not the infection of BMDM. ICR-CD1 mice, treated with a sub-diabetogenic dose of Streptozotocin β (STZ), and afterwards inoculated with CV-B4 E2 developped hyperglycaemia and hypoinsulinemia. The viral load of pancreas assessed by quantitative RT-PCR was not different in diabetic animals (STZ/CV-B4 E2) compared to non-diabetic animals inoculated with CV-B4 E2. Histological analysis of diabetic animals highlighted an inflammation of pancreas isletsPirodavir-derived molecules, which bind to the enteroviruses capsid, inhibited the infection with echovirus 7 and 11 but not the infection with CV-B4 E2 in vitro. On the other hand, it was displayed that an anti-CV-B4 E2 effect of fluoxetine in cultures of mouse pancreas fragments and mouse beta cells. The detection of anti-VP4 antibodies in serum by ELISA using a 50 amino acids peptide of VP4 from EV-G1 (a porcine enterovirus) was applied to piglets to highlight enterovirus infections. A strong sequence homology (88%) between the VP4 of EV-G1 and of other EV-G suggests that antibodies directed against viruses other than EV-G1 can be detected.In conclusion, CV-B4 E2 can infect monocytes and macrophages in vitro and in vivo in a murine system, and the virus can cause diabetes in mice previously exposed to low doses of STZ. Fluoxetine inhibits the infection of pancreatic cells with CV-B4 E2 in vitro. The detection of anti-EV-G1-VP4 antibodies highlighted natural enterovirus infections in young pigs. This porcine model could be used to study the pathophysiology of enterovirus infections and to evaluate approaches aimed to fight these viruses
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SIMEONI, Sara. "Role of coxsakie virus B4 in the pathogenesis of type 1 diabetes mellitus." Doctoral thesis, 2009. http://hdl.handle.net/11562/337457.
Full textAbstract:
Il diabete mellito tipo I è una malattia metabolica caratterizzata da iperglicemia, conseguente alla distruzione selettiva delle cellule beta pancreatiche. L’eziologia del diabete mellito tipo I è multifattoriale ed è legata all’interazione fra predisposizione genetica, fattori immunitari e fattori ambientali. L’ipotesi di una patogenesi autoimmune di questa malattia è stata avanzata da molti anni ed è supportata dal riscontro di autoanticorpi nel siero dei pazienti (ICA,GAD,IA2). Si ritiene che il processo sia scatenato o accelerato in un soggetto geneticamente predisposto da agenti ambientali ed in particolare da virus che, come in altre malattie autoimmuni, sembrerebbero implicati mediante un meccanismo di mimetismo molecolare. Numerosi studi supportano l’ipotesi di un’associazione diretta tra l’infezione da parte di enterovirus (ed in particolare il Coxsackievirus virus B4) e disfunzione delle beta cellule pancreatiche nell’uomo.
Lo scopo di questo studio è stato quello di identificare sia nuovi target autoantigenici rilevanti dal punto di vista patogenetico sia agenti infettivi coinvolti nella patogenesi della malattia attraverso l’uso di una libreria peptidica.
La popolazione studiata include 58 pazienti con diagnosi di diabete mellito tipo 1 all’esordio (35 maschi e 23 femmine), età compresa tra 1–18.7 anni (media = 8.3 ), il secondo gruppo include 30 bambini sani di pari età e sesso.
La libreria peptidica e’ una metodica per l’identificazione di ligandi degli anticorpi in una determinata malattia autoimmune quando l’autoantigene non e’ noto. Questo approccio identifica epitopi lineari e conformazionali e puo’ essere usato per analizzare target antigenici specifici di malattia attraverso un pool di immunoglobuline sieriche ottenute da piu’ pazienti affetti dalla medesima patologia. Abbiamo pertanto testato una libreria peptidica con un pool di immunoglobuline IgG derivate dal siero dei pazienti e dei controlli. Al termine della procedura abbiamo ottenuto un peptide che è stato sintetizzato e testato mediante ELISA sul siero di ogni paziente. Gli anticorpi IgG purificati contro il peptide identificato sono stati ottenuti dal siero dei pazienti mediante processo di dialisi su colonna di sefarosio.
Il peptide identificato è stato comparato con le sequenze di proteine virali e batteriche note, attraverso BLAST (basic local alignment search tool program-tramite il National Center for Biotechology Information-NCBI) ed è emerso che questo peptide mostra numerose similitudini con la proteina virale VP1 espressa sul capside virale del Coxsackievirus. Questo peptide di 12 amminoacidi (da noi chiamato T1DM) è riconosciuto dal 74% (43/58) dei sieri dei pazienti ma da nessuno dei sieri dei controlli (p<0.0001). Una simile percentuale di sieri riconosce la proteina VP1 del Coxsackie B4. Il peptide virale omologo al peptide T1DM è stato da noi chiamato peptide Coxsa. Abbiamo quindi comparato la sequenza del peptide T1DM con le sequenze di proteine umane note (attraverso BLAST) e abbiamo evidenziato un’alta omologia di sequenza con alcuni domini di tre proteine umane presenti nelle cellule beta pancreatiche: la fogrina (una proteina localizzata nei granuli secretori contenti l’insulina delle cellule beta ed espressa in superficie con la secrezione di insulina ), la 6 fosfofrutto chinasi (6PKF- un enzima che catalizza uno step importante della glicolisi) ed il canale del calcio che nella cellula beta pancreatica è di fondamentale importanza nella secrezione di insulina. Abbiamo rilevato che gli anticorpi contro il peptide T1DM riconoscono il peptide Coxsa e legano la proteina VP1 del virus Coxsackie; nello stesso modo gli anticorpi anti peptide T1DM a anti peptide Coxsa riconoscono la fogrina, la 6PKF ed il canale del calcio e legano la fogrina e la 6PKF delle cellule pancreatiche murine (evidenziato mediante FACS).
Attraverso il test dell’apoptosi abbiamo inoltre mostrato che gli anticorpi contro il peptide T1DM e contro il peptide Coxsa inducono apoptosi delle cellule beta pancreatiche.
Questo studio risulta particolarmente importante perché permette di ipotizzare che il virus coxsackie B4 possa indurre una risposta immune contro la proteina VP1 cross-reattiva con auto antigeni attraverso un meccanismo di mimetismo molecolare, portando alla distruzione delle cellule beta fino all’esordio clinico del diabete mellito tipo 1.Aetiopathogenesis of Type 1 Diabetes Mellitus (T1DM) includes genetic, immunologic and environmental factors. An autoimmune origin had been suggested based on the findings of auto-antibodies (ICA,GAD,IA2). Among enviromental factors interesting findings on the role played by Enteroviruses, such as Coxsackie B4, have been reported. However much more data are necessary to establish a clear association between viruses and T1DM in humans. To identify pathogenetically relevant autoantigens targets in patients with T1DM and to evaluate the possible involvement infection agents in the pathogenesis of T1DM we used a peptide library approch. We enrolled 58 patients (35 M, 23 F) aged 0.8-18.7 years with newly-diagnosed T1DM and 30 healthy age-and sex matched individuals as controls. We screened a random peptide library with a pool of immunoglobulins G derived from sera of patients and controls. A set of peptides, obtained from the last biopanning round, was synthetized and used in an ELISA assay to test individual patients’ sera as well as control IgG immunoglobulins. We identified an immunodominant peptide of 12 aa (that we call peptide T1DM) that was recognised by 43/58 (74%) of patients' sera but by none of the controls’sera. The peptide was compared with know microbial sequences using BLAST network service. We found hight degree of homology with viral VP1, a protein expressed on Coxsackie virus capside (the omologus peptide was called Coxsa peptide). IgG antibodies against the T1DM peptide were affinity purified from patients' sera and were able to recognise the viral protein VP1 and the Coxsa peptide. We then compare the peptide T1DM sequence with know human sequence using BLAST network service and found hight degree of homology with three human proteins in beta cells: phogrin (a protein localized in secretory granules of beta cells), 6-phosphofructo-1-kinase (6PKF an enzyme that catalyzes an important step of glycolysis) and L-type calcium channel that in beta cell is of great importance in insulin secretion. Anti T1DM and anti Coxa peptides antibodies recognized phogrin, 6PKF and L-type calcium channel by immunoprecipitetion of beta cell lysates and bind phogrin and 6PKF (demonstred using FACS analysis) in beta cells. Finally we found that antipeptides antibodies were able to induce apoptosis of pancreatic beta cells. Therefore we suggest that in genetically predisposed subjets Coxsackievirus virus B4 infection may induce an antiviral response able to trigger destruction of beta cells through a molecular mimicry mechanism between VP1 protein of coxsackie virus B4 and human autoantigens (phogrin, 6PKF and L-type calcium channel) leading to the onset of type 1 diabetes mellitus.
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Jaquenod, De Giusti Carolina. "Patogénesis molecular en la infección experimental por virus Coxsackie B3." Tesis, 2013. http://hdl.handle.net/10915/26368.
Full textAbstract:
Objetivo general
Estudiar los mecanismos patogénicos moleculares en tipos celulares claves en la infección experimental por CVB3.
Objetivos específicos e hipótesis de trabajo
1. Estudiar la expresión de los receptores celulares y su correlación con la susceptibilidad a la infección por virus Coxsackie B (CVB) en células cardíacas murinas y humanas y en ratones de distintas cepas
Acorde a trabajos previos (Kandolf et al. 1985; Gomez et al. 1993), los cardiomiocitos murinos y humanos son susceptibles a la infección por CVB. Partiendo de la hipótesis que la susceptibilidad a la infección correlaciona con la expresión del o los receptores virales, se propone estudiar en modelos in vitro de cardiomiocitos humanos derivados de células embrionarias madres totipotenciales (hESC-C) y en cardiomiocitos murinos recién nacidos y adultos, la infección con CVB a nivel de la replicación viral, y la sobrevida celular y su correlación con los niveles de expresión del receptor viral CAR y DAF, en el caso humano.
Asimismo se buscará determinar si existen cambios en los niveles de CAR entre distintas cepas de ratones y la asociación de estos eventuales cambios con la susceptibilidad a la infección viral. Para ello se procederá a inocular ratones de distintas cepas con CVB3 para determinar en los mismos los niveles de replicación viral en corazón; el grado de injuria tisular y los niveles tisulares de CAR.
Estos estudios podrán determinar la susceptibilidad de hESC-C a la infección por CVB3, la correlación con la expresión de los receptores y las eventuales diferencias en el sistema murino donde DAF no es utilizado y clarificar el rol de la expresión de CAR en la miocarditis y si aquellas cepas de ratones que expresan más o menos CAR son más o menos susceptibles a la replicación viral y a la subsecuente enfermedad.
2. Estudiar la infección de macrófagos por CVB
Considerando como hipótesis de trabajo que los macrófagos juegan un rol esencial en la miocarditis y sus secuelas, se intentará caracterizar la infección de CVB3 en macrófagos teniendo en cuenta los niveles de replicación viral, el estado de activación y/o diferenciación celular y el efecto en la síntesis de moléculas con eventual rol en la patogénesis de la infección por CVB3.
3. Estudiar el rol de macrófagos en la miocarditis viral y la fibrosis
Partiendo de la hipótesis ya mencionada, se analizará el rol de los macrófagos en la replicación de CVB3 in vivo y su estado de activación en los distintos estadios de la infección viral.
Asimismo se buscará correlacionar la activación de macrófagos, la expresión de Gal-3 y la activación de fibroblastos con la fibrosis cardíaca y las consecuencias por la depleción de macrófagos.
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Chen, Yi-Ting, and 陳宜霆. "Development of a monoclonal antibody for neutralizationof Coxsackie B4 virus." Thesis, 2007. http://ndltd.ncl.edu.tw/handle/48939987972846669358.
Full textAbstract:
碩士高雄醫學大學
醫學研究所碩士班
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Abstract Enterovirus infections are the most common infections in the world. The diseases range from respiratory symptom, hand- foot- andmouth disease (HFMD), aseptic meningitis, meningoencephalitis, pancreatitis and myocarditis, acute flaccid paralysis (AFP) to acute hemorrhagic conjunctivitis (AHC).The Coxsackievirus B (serotypes B1–B6) are members of the Human enterovirus B (HEV B) species in the Enterovirus genus within the Picornaviridae family .CVB are small non-enveloped virus (30 nm), their single-stranded plus-sense RNA genome is packaged in an icosahedral capsid protein. CVB leads to severe inflammation, a heightened immune response, and is often fatal .Six serotypes of group B coxsackieviruses (CVB), in particular CVB4, infections appear to initiate or facilitate the pathogenetic processes leading to type 1 diabetes (T1DM), and is also one of the causation agents of human pancreatitis and myocarditis, especially in children. Therefore, developed a therapeutic methods are very important for CVB infection in clinic. Many reports have investigated the potential for therapeutic methods by using soluble virus receptor fusion proteins (CAR, DAF) to control CVB infection. However, the reports shown that DAF analog fail inhibit virus infection effectively, through CAR analog reduced the development of CVB-mediated pancreatitis in animal model. The results from this study offered new mAbs which were critical for the early detection and block of CB4. In present study, we have developed neutralization monoclonal antibodies to CVB4. Using CPE and MTT assay, our results shown the antibody could block the infection of CVB4 for RD cell. Furthermore, it had also neutralization effect for CVB3 and CVB5 infection of RD cells. In ICR animal model, myocardial inflammation were significantly reduced in the treatment groups. And the survival rates were higher in ICR mice treated with the neutralization monoclonal antibody. The neutralization antibody may provide a valuable method to prevent the CVB4 infection in future.
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Wu, Te-Chia, and 吳得嘉. "Cross-reactivity of Coxsackie A16 virus protects Enterovirus 71 infection in mice." Thesis, 2006. http://ndltd.ncl.edu.tw/handle/28152399758202115359.
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碩士國立成功大學
微生物及免疫學研究所
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Previous studies suggest that there are intratypic as well as intertypic cross-reactions among enteroviruses. Therefore, we hypothesized that this cross-reaction may play a role in the pathogenesis of Enterovirus 71 (EV71) infection. Because other study showing that Coxsackie A16 virus (CA16) and EV71 shared same epitopes, we chose CA16 as the intertypic enterovirus to test our hypothesis. One-day-old mice orally immunized with either avirulent EV71 strain (4643) or CA16 developed antibodies against EV71 with neutralization titer of 1:16 and 1:2, respectively. Both EV71 avirulent strain (4643)- and CA16-immunized mice were more resistant to subsequent challenge by virulent EV71 strain (MP4). Hyperimmune serum (HI) against CA16 contained antibodies that could bind EV71 antigens in both ELISA-based and indirect immuno-fluorescence assays. Furthermore, CA16 HI could neutralize EV71 but not Coxsackie B3 virus or poliovirus at a titer of 1:4. Passive immunization with CA16 HI reduced the clinical score, diminished organ viral load and increased survival rate of mice after EV71 challenge. Splenocytes from CA16-immunized mice proliferated and produced IFN-g upon EV71 or CA16, but not Coxsackie B3 antigen stimulation. These results illustrated that the immunity induced by CA16 indeed not only could cross react with EV71 but also offer partial protection against EV71. This intertypic reactivity of enteroviruses may play an important role in the pathogenesis of EV71.
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"Estudo do provavel papel do virus Coxsackie B4 na diabetes Mellitus dependente de insulina." Tese, Biblioteca Digital da Unicamp, 1997. http://libdigi.unicamp.br/document/?code=vtls000114793.
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