Dissertations / Theses on the topic 'Coculture'
To see the other types of publications on this topic, follow the link: Coculture.
Create a spot-on reference in APA, MLA, Chicago, Harvard, and other styles
Consult the top 50 dissertations / theses for your research on the topic 'Coculture.'
Next to every source in the list of references, there is an 'Add to bibliography' button. Press on it, and we will generate automatically the bibliographic reference to the chosen work in the citation style you need: APA, MLA, Harvard, Chicago, Vancouver, etc.
You can also download the full text of the academic publication as pdf and read online its abstract whenever available in the metadata.
Browse dissertations / theses on a wide variety of disciplines and organise your bibliography correctly.
1
Jing, Duohui. "Mobilisation, Isolation and Coculture of Haematopoietic Stem Cells." Doctoral thesis, Saechsische Landesbibliothek- Staats- und Universitaetsbibliothek Dresden, 2011. http://nbn-resolving.de/urn:nbn:de:bsz:14-qucosa-39915.
Full textAbstract:
Since decades, hematopoietic stem cell transplantation (HSCT) has become a well established treatment modality for hematological malignancies and non-malignant disorders. Autologous and allogeneic hematopoietic stem cells (HSCs) mobilized into the peripheral blood (PB) have been used as a preferred source of transplantable stem cells1-3. And umbilical cord blood (UCB) has been introduced as a more attractive HSC source for HSCT, because fetal stem cells in UCB are speculated to be more primitive in comparison to adult stem cells. However the limited amount of HSCs is limiting their application for stem cell therapy in clinic. Therefore, people started to utilize extra-embryonic tissue to harvest more fetal stem cells, while people also tried to optimize the clinical protocol to mobilize more adult stem cells out of adult bone marrow. The innovative strategies and feasible procedures were discussed in this thesis.
The axis of the chemokine receptor CXCR4 and its ligand SDF-1 is important for trafficking and homing of HSCs. It has already been demonstrated that the bicyclam AMD3100, a CXCR4 antagonist, in combination with G-CSF is able to induce a significant mobilization of CD34+ cells4. And human placenta is a potent hematopoietic niche containing hematopoietic stem and progenitor cells throughout development5. The homing of HSCs to the placenta is probably also mediated by the expression of SDF-1 as demonstrated for the bone marrow niche. In this study (part 1 of the chapter “Results and discussions”), we utilized AMD3100 to mobilize HSCs from placenta. And we can demonstrate that the CXCR4 antagonist AMD3100 mobilise placenta derived CD34+ cells ex utero already after 30 min of incubation and may further enhance the efficacy of harvesting placenta-derived HSC.
The alpha4 integrin CD49d is involved in migration and homing of hematopoietic stem cells (HSC). Therapeutic application of natalizumab, an anti-CD49d antibody, in patients with multiple sclerosis (MS) has been associated with increased levels of circulating CD34+ progenitors. In our study (part 2 of the chapter “Results and discussions”), we compared circulating HSCs from MS patients after natalizumab treatment and HSCs mobilized by G-CSF in healthy volunteers, with regard to their migratory potential, clonogenicity and gene expression. CD34+ cells in the blood and marrow of natalizumab-treated patients expressed less of the stem cell marker CD133, were enriched for erythroid progenitors (CFU-E) and expressed lower levels of adhesion molecules. The level of surface CXCR-4 expression on CD34+ cells from patients treated with natalizumab was higher compared to that of CD34+ cells mobilized by granulocyte-colony stimulating factor (G-CSF) (median 43.9% vs. 15.1%). This was associated with a more than doubled migration capacity towards a chemokine stimulus. Furthermore, CD34+ cells mobilized by natalizumab contained more m-RNA for p21 and less MMP9 compared to G-CSF mobilised HSC. Our data indicate that G-CSF and CD49d blockade mobilize different HSC subsets and suggest that both strategies may be differentially applied in specific cell therapy approaches.
In order to further improve the clinical outcome of HSC transplantation, many groups are focusing on ex vivo maintain or expand HSC. Unfortunately, the maintenance of HSC in vitro is difficult to achieve because of their differentiation. This is presumably caused by a lack of appropriate cues that are provided in vivo by the microenvironment. Indeed, HSCs located in the bone marrow are interacting with a specific microenvironment referred to as the stem cell niche, which regulates their fate in terms of quiescence, self-renewal and differentiation. An orchestra of signals mediated by soluble factors and/or cell-to-cell contact keeps the balance and homeostasis of self-renewal, proliferation and differentiation in vivo. To investigate the communication between HSCs and the niche, coculture assays with mesenchymal stromal cells (MSCs) were performed in vitro. Here, we can demonstrate that cell-to-cell contact has a significant impact on hematopoietic stem cells expansion, migratory potential and stemness. In this study (part 3 of the chapter “Results and discussions”), we investigated in more detail the spatial relationship between hematopoietic stem cells and mesenchymal stromal cells during ex-vivo expansion. And we defined three distinct localizations of HSCs relative to MSC layer: (i) those in supernatant (non-adherent cells); (ii) cells adhering on the surface of mesenchymal stromal cells (phase-bright cells) and (iii) cells beneath the mesenchymal stromal cells (phase-dim cells). Our data suggest that the mesenchymal stromal cell surface is the dominant location where hematopoietic stem cells proliferate, whereas the compartment beneath the mesenchymal stromal cell layer seems to be mimicking the stem cell niche for more immature cells. Our data provide novel insight into the construction and function of three-dimensional HSC–MSC microenvironments.
In summary, we provided a new method to isolate fetal stem cells from extra-embryonic tissue (i.e. placenta) in the first part, then we discussed an innovative strategy with CD49d blockade to improve clinical modality for adult stem cell mobilization in the second part, and finally we investigated HSC maintenance and expansion in vitro and provided feasible way to mimic HSC niche in vitro in the last part.
This thesis contributes to HSC-based stem cell therapy in two aspects, i.e. 1) fetal and adult stem cell isolation holding great therapeutic potential for blood diseases; 2) ex vivo stem cell manipulation providing a valuable platform to model HSC niche regulation.
2
Apple, Allon Aliza. "Bilaminar coculture of stem cells and instructive cells for tissue regeneration." Diss., Search in ProQuest Dissertations & Theses. UC Only, 2009. http://gateway.proquest.com/openurl?url_ver=Z39.88-2004&rft_val_fmt=info:ofi/fmt:kev:mtx:dissertation&res_dat=xri:pqdiss&rft_dat=xri:pqdiss:3390115.
Full textAbstract:
Thesis (Ph.D.)--University of California, San Francisco with the University of California, Berkeley, 2009.Source: Dissertation Abstracts International, Volume: 71-02, Section: B, page: . Adviser: Jeffrey C. Lotz.
3
Hinkerohe, Daniel. "Effects of cytokines on microglial phenotypes and astroglial coupling in an inflammatory coculture model /." Bochum, 2006. http://opac.nebis.ch/cgi-bin/showAbstract.pl?sys=000253108.
Full text
4
Bernard, Yohann. "Stress oxydatif, inflammation vasculaire et métalloprotéinases : étude in vitro sur un modèle de coculture." Thesis, Nancy 1, 2008. http://www.theses.fr/2008NAN10067/document.
Full textAbstract:
Au cours de l’athérosclérose, l’invasion de la paroi vasculaire par les leucocytes conduit à l’inflammation de ce tissu et à l’établissement d’un stress oxydatif. Ce travail aborde les effets du stress oxydatif et les effets d’interactions potentielles entre un modèle de neutrophiles (?HL60) et des cellules endothéliales (HCAEC) ou musculaires lisses (HCSMC) de coronaires humaines sur les métalloprotéinases (MMPs) cellulaires et la mobilité des ?HL60. Au cours des passages, la lignée promyélocytaire HL60, différenciée en modèle de neutrophiles ?HL60, subit des variations d’expression et de production de MMP9 et de ses propriétés de mobilité. Les espèces réactives de l’oxygène (ERO) d’origine biochimique ou cellulaire ne modifient pas l’activité MMP2 ou MMP9 des HCAEC et HCSMC. Il n’y a pas modification des activités MMPs en coculture ?HL60/HCAEC mais stimulation de l’activité MMP9 en coculture ?HL60/HCSMC. Les HCSMC stimulent les capacités migratoires et favorisent la réponse invasive des ?HL60 au N-formyl-L-Méthionyl-L-Leucyl-L-Phénylalanine. Les enzymes antioxydantes ont peu d’effet sur la mobilité, stimulent expression et production de MMP9 des ?HL60 et semblent diminuer l’effet stimulant des HCSMC sur la production de MMP9 par ?HL60. Les HCSMC expriment et/ou sécrétent certains cytokines (IL8, IL6, IL1?, CCL2, CXCL12) impliquées dans l’athérosclérose. En conclusion, l’interaction ?HL60/HCSMC entraîne une augmentation de production de MMP9, modulée par les ERO, et une stimulation de mobilité des ?HL60. Les cytokines inflammatoires impliquées dans l’athérosclérose et exprimées par les HSCMC sont des acteurs potentiels dans la réponse sécrétoire et/ou migratoire des ?HL60During atherosclerosis leucocytes invade the vascular wall, inducing inflammation and production of oxidative stress by reactive oxygen species (ROS). We tested the effects of an oxidative stress and/or potential interactions between a neutrophil model (?HL60) and human coronary endothelial (HCAEC) or smooth muscle (HCSMC) cells, on ?HL60 mobility and production and activity of cellular metalloproteinases. Cell passaging of the promyelocytic HL60 cell line, differentiated by DMSO in a neutrophil model (?HL60), induces variations in cell mobility and production of MMP9. ROS from biochemical or cellular sources did not modify MMP2 or MMP9 activity in HCAEC or HCSMC. There is no modification of MMPs activities in ?HL60/HCAEC cocultures, but stimulation of ?HL60 MMP9 activity in ?HL60/HCSMC cocultures. Basal migration capacities and N-formyl-L-Methionyl-L-Leucyl-L-Phenylalanine -stimulated invasion abilities of ?HL60 increase in presence of HCSMC. Antioxidant enzymes barely change ?HL60 mobility, increase expression and production of ?HL60 MMP9 and seem to reduce the stimulating effect of HCSMC on ?HL60 MMP9 production. HCSMC also express and/or secrete some cytokines (IL8, IL6, IL1?, CCL2, CXCL12) implicated in atherosclerosis. In conclusion, interactions between ?HL60 and HCSMC induce an increase in MMP9 secretion, which is modulated by ROS, and a stimulation of ?HL60 mobility. Expression by HCSMC of inflammatory cytokines implicated in atherosclerosis allows to identify potential candidates responsible for the secretory and/or migratory response of ?HL60
5
L'Herondelle, Killian. "Etude sur neurones sensoriels et kératinocytes des mécanismes cellulaires et moléculaires impliqués dans le prurit de la ciguatéra." Thesis, Brest, 2016. http://www.theses.fr/2016BRES0115.
Full textAbstract:
La ciguatéra est une forme d’intoxication faisant suite à l’ingestion de poissons contaminés par des toxines appelées « ciguatoxines ». Cette intoxication endémique des régions tropicales est un problème économique et de santé non négligeable qui tend à prendre de plus en plus d’ampleur. L’essor du tourisme, le réchauffement climatique et la hausse des exportations internationales de poissons tropicaux favorisent l’expansion de la ciguatéra aux parties du globe au climat tempéré, jusqu’alors peu concernées par cette maladie. Les enjeux thérapeutiques et économiques de la ciguatéra sont de taille puisqu’il n’existe aucun moyen rapide et fiable de détecter un poisson contaminé et qu’aucun traitement efficace permettant sa prise en charge n’a actuellement été établi.Le prurit, terme médical désignant les démangeaisons est un symptôme notamment associé aux maladies de peau qui impacte grandement la qualité de vie des patients qui en souffrent.Ces dernières décennies, de nombreuses études scientifiques ont permis de mieux comprendre sa physiopathologie. Le prurit est un symptôme fréquemment observé chez les personnes atteintes de ciguatéra, d’où l’appellation « la Gratte », souvent employée pour faire référence à la pathologie.Dans le but d’étudier les mécanismes cellulaires à l’origine du prurit et des autres troubles sensoriels cutanés survenant lors de la ciguatéra, nous avons étudié l’effet des ciguatoxines sur un modèle in vitro de neurones sensoriels cocultivés avec des kératinocytes. Nous avons mis en évidence la libération dans le surnageant des neuropeptides de l'inflammation neurogène, SP et CGRP. L'effet d'antagonistes sélectionnés a été testé afin mettre en évidence les médiateurs impliqués dans la libération de neuropeptides. Par ailleurs, la signalisation cellulaire sous-jacente de cette sécrétion de neuropeptides a été étudiée par des expériences d’imagerie calcique réalisées sur neurones et kératinocytes.Les résultats obtenus valident notre coculture en tant que modèle de choix pour l’étude in vitro des mécanismes cellulaires, et plus généralement, dans les troubles neurocutanés impliqués dans le prurit ciguatérique. Parmi les antagonistes testés, une molécule s’est avérée particulièrement intéressante pour inhiber les effets constatés de la toxine. Ces résultats originaux, obtenus avec l’antagoniste d’un médiateur du prurit, présentent une perspective thérapeutique nouvelle et prometteuse, pour répondre à un enjeu de santé publique futurCiguatera fish poisoning (CFP) is a seafood poisoning occurring after contaminated fish fleshes ingestion containing toxins called « ciguatoxines » (CTXs). This illness, originating from tropical and subtropical areas, is an economic and health problems which becomes substantial in relation to international tropical fishes export and tourism development, as well as global warming rise. Those factors contribute to CFP sprouting in non-endemic temperate climate regions which were not until then concerned by CFP. Economic and health stakes of CFP are important since no reliable and ready-to-use detection system for CTXs in fishes have been developed, along with no relevant cure has been established to treat CFP.Pruritus, medical term refer to itch, is a clinical sign usually associated to skin diseases which strongly alter patients’ quality of life. Last decades, several studies allowed to better understand pruritus pathophysiology. Interestingly, people suffering from CFP frequently present pruritus, hence designation “La Gratte” or “La Gratel (le)” employed in endemic areas.The aim of these works was to study cellular and molecular mechanisms of CTXs at the root of neurological cutaneous troubles occurring in CFP. Here, we evaluated CTXs effects on in vitro model composed of sensory neurons cocultived with primary keratinocytes, quantifying neuropeptides known to be involved in pruritus. Compiling knowledges about CFP and pruritus pathophysiology, some antagonists were tested to neutralize CTXs-mediated neuropeptide release. To deal with signaling pathways in depth of neuropeptide exocytosis induced by CTXs, mechanism known to be accurately regulated by calcium homeostasis, calcium imaging experiments were performed.Results obtained in this project confirm the use of such a model to elucidate cellular mechanism of CFP pruritus, but also constitute an alternative in vitro tool to study chemicals inducing abnormal cutaneous senses. Among antagonists tested, one stands out from the crowd and was proved to be effective to inhibit CTXs-evoked effects studied. Those originals results, collected with antagonist of pruritus mediator, show new and promiscuous therapeutic prospects for future health concern
6
Janny, Laurent. "Coculture embryonnaire en fecondation in vitro humaine : etude d'une serie prospective randomisee de 606 ponctions." Clermont-Ferrand 1, 1994. http://www.theses.fr/1994CLF1BOO1.
Full text
7
Lease, Christopher William Minto, and Lease Chris@saugov sa gov au. "Biodegradation of High Molecular Weight Polycyclic Aromatic Hydrocarbons in Soils by Defined Bacterial and Fungal Cocultures." Flinders University. Biological Sciences, 2006. http://catalogue.flinders.edu.au./local/adt/public/adt-SFU20060803.114120.
Full textAbstract:
Despite microbial degradation being the primary route of degradation of PAHs in soils, high molecular weight polycyclic aromatic hydrocarbons (such as benzo[a]pyrene) have consistently proven to e resistant to microbial attack. However, recent research has demonstrated the potential for bacterial-fungal co-cultures to achieve biodegradation of high molecular weight PAHs. The aim of this research was to determine the efficacy of co-culture bioaugmentation for the remediation of high molecular weight PAHcontaminated soils.
PAH degrading bacteria were enriched on multiple PAHs and isolated on pyrene from both contaminated (soil from a former manufactured gas plant) and uncontaminated (agricultural soil, termite mound matrix and kangaroo faeces) sources. The bacterial isolates were identified using 16SrRNA analysis as Mycobacterium sp. Strain BS5, Mycobacterium sp. Strain KA5 and Mycobacterium sp. Strain KF4 or fatty acid methyl ester (FAME) analysis as Ralstonia pickettii and Stenotrophomonas maltophilia.
The initial phase of assessment of PAH degradation by fungal and bacterial coculture components was undertaken using liquid media. Two fungal isolates from a previous investigation into the coculture process (Penicillium janthinellum) and the American Type Culture Collection (Phanerochaete chrysosporium) were assessed for their ability to degrade benzo[a]pyrene in minimal media and MYPD. The fungal isolates were found to be able to degrade benzo[a]pyrene cometabolically in MYPD. The bacterial isolates and two others from previous investigations were assessed for their ability to degrade single PAHs (fluorene, phenanthrene, fluoranthene, pyrene and benzo[a]pyrene) in liquid culture. This process was used as an initial screen to select the best bacterial isolates for further investigation of PAH degradation by axenic cultures and cocultures with the fungal isolates using a PAH mixture. Based on the results of these experiments four bacterial isolates (VUN 10,010, Mycobacterium 1B, Mycobacterium sp. Strain BS5 and Mycobacterium sp. Strain KA5) and the two fungal isolates were selected to investigate further using a PAH mixture composed of the previously mentioned PAHs. It was found that the use of a fungal bacterial coculture increased the degradation of the PAH mixture beyond that of axenic bacterial cultures. Based on these experiments, the coculture composed of P. janthinellum and VUN 10,010 was selected for assessment of its ability to degrade the same PAH mixture in spiked soil microcosm experiments.
Natural attenuation, axenic P. janthinellum, axenic VUN 10,010 and a coculture of these two organisms were assessed for PAH degradation in soil microcosms over a 100 day period. Inoculation of microcosms with the coculture resulted in the removal of benzo[a]pyrene by 11 mg/kg (± 1.21 mg/kg) (30%) over the 100 day incubation period. Substantial PAH degradation was also observed in the microcosms assesing natural attenuation.
Using an alternative sequential inoculation method, initially inoculating with P. janthinellum then 50 days later with VUN 10,010 significantly enhanced the removal of benzo[a]pyrene. After 100 days incubation, benzo[a]pyrene was degraded below detection limits in two of three microcosms, compared to a 4.95 mg/kg (± 4.64 mg/kg) (14.7 %) reduction in soil microcosms inoculated using an alternative inoculation process of VUN 10,010 followed by P. janthinellum.
Attempts were made to optimise the process using sequential inoculation and soil amendments intended to enhance the performance of the fungal component using distilled water and 1% glucose. The addition of distilled water was not observed to substantially influence the ability of the coculture to degrade PAHs, whereas the addition of 1% glucose was found to inhibit PAH degradation.
8
Xu, Ruiling. "Investigating stroma-mediated resistance to gemcitabine, using a novel fluroescence-based coculture model of pancreatic cancer." Thesis, University of Cambridge, 2015. http://ethos.bl.uk/OrderDetails.do?uin=uk.bl.ethos.709342.
Full text
9
Huppert, Cécile. "Développement d’un modèle de coculture cellules dendritiques lymphocytes T pour l’évaluation du danger des substances sensibilisantes." Thesis, Université de Lorraine, 2018. http://www.theses.fr/2018LORR0195/document.
Full textAbstract:
Les allergies représentent un problème majeur dans le domaine des maladies professionnelles et ont un impact sérieux sur la vie des travailleurs. Les allergies professionnelles sont principalement cutanées et respiratoires ; elles peuvent être causées par des produits chimiques de bas poids moléculaire. Dans le passé, les tests destinés à identifier les produits susceptibles d’entraîner des allergies étaient réalisés sur l’animal. Or, la législation européenne engage à limiter le recours à l’expérimentation animale pour évaluer le pouvoir sensibilisant des substances chimiques, incitant à développer des tests in vitro de substitution. C’est dans ce contexte que nous avons cherché à développer des modèles de cultures cellulaires destinés à identifier les substances sensibilisantes. Un premier modèle utilisant des cellules dendritiques dérivées de moelle osseuse (BMDC) de souris BALB/c a été développé et a donné des résultats prometteurs pour l’identification des produits sensibilisants et leur catégorisation selon leur puissance sensibilisante. De plus, la voie de signalisation Nrf2/Keap1 semble être impliquée dans la réponse de ce modèle cellulaire aux sensibilisants. Dans le but de compléter ce modèle et d’évaluer la capacité des BMDC à activer les lymphocytes T (LT), un modèle de coculture de BMDC et LT a été mis au point avec un sensibilisant de référence avant d’être testé sur un ensemble de produits de référence (sensibilisants cutanés et respiratoires, irritants et non sensibilisants). Les BMDC de notre modèle, exposées à des sensibilisants, se sont révélées capables d’activer les LT en coculture. Enfin, des essais préliminaires utilisant des cellules de souris de souche C57BL6/J dans notre modèle de coculture ont donné des résultats comparables à ceux obtenus avec des cellules issues de la souche BALB/c. Les modèles de cultures cellulaires BMDC et de coculture BMDC-LT sont prometteurs dans le cadre du développement de méthodes de substitution à l’expérimentation animale pour l’évaluation du pouvoir sensibilisant de substances chimiquesAllergies constitute an important issue in the field of occupational health and have a serious impact on the lives of workers. Occupational allergies are mainly contact and respiratory allergies and can be caused by low molecular weight chemicals. In the past, the tests that were used to identify the potential allergens were carried out on animals. However, European legislation has provided the impetus for reducing the use of animal testing to assess the sensitization potential of chemicals and promoted the development of alternative in vitro tests. In this context, we aimed to develop cell culture models to identify sensitizers. A first model using bone marrow derived dendritic cells (BMDC) from BALB/c mice was developed and showed promising results for identifying sensitizers and classify them according to their allergenic potency. Moreover, the Nrf2/Keap1 pathway seems to be involved in the response of this cell model to sensitizers. In order to supplement this model and to assess the functionality of BMDC, a BMDC-T cell (TC) coculture model was developed with a reference sensitizer before being tested on a range of reference sensitizers (cutaneous and respiratory sensitizers, irritants and non-sensitizers). The BMDC of our model, while exposed to sensitizers, were able to activate TC in coculture. Finally, preliminary tests using the cells of C57BL6/J mice in our coculture model showed that similar results to those obtained with cells from the BALB/c strain. The models of BMDC cultures and BMDC-TC coculture are promising for the development of alternative methods to animal experimentation assessing the sensitizing potential of chemicals
10
Madiedo-Podvršan, Sabrina. "Development of a lung-liver in vitro coculture model for the risk assessment of inhaled xenobiotics." Electronic Thesis or Diss., Compiègne, 2022. http://www.theses.fr/2022COMP2703.
Full textAbstract:
L’urbanisation et la mondialisation sont des phénomènes de société qui multiplient et complexifient les sources de pollution. Parmi elles, la pollution atmosphérique impacte notablement la santé humaine à l’échelle mondiale de par son caractère transfrontière. L’appareil respiratoire est une voie d’absorption de nombreux xénobiotiques, sous forme de gaz, d’aérosols ou de nanoparticules. Une fois dans les voies respiratoires, les substances inhalées sont susceptibles d’interagir avec les cellules pulmonaires. Les mécanismes par lesquels des xénobiotiques inhalés induisent des dommages pulmonaires sont complexes, notamment en raison de l’hétérogénéité cellulaire des poumons. En raison de cette complexité, les modèles animaux constituent un outil de référence pour les études toxicologiques prédictives, cependant, dans le contexte européen de réduction de l’expérimentation animale (REACH, et les règles 3R), le développement de méthodes alternatives fiables est devenu une nécessité. Les modèles in vitro sont de bons candidats car plus simple et moins couteux à mettre en oeuvre que les modèles vivo et permettent de travailler avec des cellules ou des tissus d’origine humaine ce qui contribue à améliorer la pertinence des résultats. Cependant, l’extrapolation limitée du vitro au vivo est souvent liée à un manque de complexité des modèles, notamment en raison de l’absence de communication inter-organes. Les technologies des multi-organes sur puce cherchent à surmonter ces limitations en connectant plusieurs organoïdes métaboliquement actifs au sein d’un même circuit de culture afin de reproduire des interactions de type systémiques. Dans ce contexte, nous décrivons un modèle permettant de connecter in vitro, par le biais de la microfluidique, une barrière pulmonaire (voie d’entrée des xénobiotiques inhalés) à un organe détoxifiant tel que le foie, afin d’évaluer la toxicité liée à un stress inhalatoire de façon plus systémique. Cette approche permet de considérer la biotransformation des composés inhalés et l’interaction inter-organes comme possible modulateurs de la toxicité. Le projet étant dans les premières phase de développement, la robustesse expérimentale était au coeur du projet. L’objectif principal était de prouver qu’une substance modèle était capable de transiter dans le dispositif, au travers des deux compartiments tissulaires, afin de pouvoir étudier la dynamique inter-organes poumon/foie en condition de stress xénobiotique. Le projet a été articulé en trois phases expérimentales : - Caractérisation des réponses biologiques spécifiques aux tissus pulmonaire et hépatique en réponse à un stress. La viabilité, la fonctionnalité et les activités métaboliques des monocultures ont été évaluées après exposition à une substance modèle. - Adaptation et préparation des monocultures aux conditions de co-culture afin de préserver la viabilité et la fonctionnalité des tissus. - Les compartiments pulmonaire et hépatique ont été cultivés jointement dans un circuit de culture microfluidique fermé. La co-culture a été exposée à une substance modèle à travers la barrière pulmonaire afin d’imiter un mode d’exposition inhalatoire. Les paramètres de viabilité et de fonctionnalité des tissus ont été évalué post-culture afin de mettre en évidence quelconque phénomène d’interaction inter-organe. La caractérisation du modèle de co-culture a été réalisé grâce à l’exposition d’un agent hépatotoxique de référence, largement étudié dans la littérature : l’acétaminophène aussi connu sous le nom de paracétamol (APAP). L’exposition à la barrière pulmonaire n’est pas physiologique mais permet d’observer quantitativement le passage et la circulation du xénobiotique à travers le dispositif car l’APAP interfère avec la viabilité et les performances métaboliques hépatique, permettant ainsi de vérifier que le compartiment hépatique peut avoir accès à l’exposition effectuée à travers la barrière pulmonaireUrbanization and globalization are prevailing social phenomena that multiply and complexify the sources of modern pollution. Amongst others, air pollution has been recognized as an omnipresent life-threatening hazard, comprising a wide range of toxic airborne xenobiotics that expose man to acute and chronic threats. The defense mechanisms involved in hazardous exposure responses are complex and comprise local and systemic biological pathways. Due to this complexity, animal models are considered prime study models. However, in light of animal experimentation reduction (3Rs), we developed and investigated an alternative in vitro method to study systemic-like responses to inhalationlike exposures. In this context, a coculture platform was established to emulate interorgan crosstalks between the pulmonary barrier, which constitutes the route of entry of inhaled compounds, and the liver, which plays a major role in xenobiotic metabolism. Both compartments respectively comprised a Calu-3 insert and a HepG2/C3A biochip which were jointly cultured in a dynamically-stimulated environment for 72 hours. The present model was characterized using acetaminophen (APAP), a well-documented hepatotoxicant, to visibly assess the passage and circulation of a xenobiotic through the device. Two kinds of models were developed: (1) the developmental model allowed for the technical setup of the coculture, and (2) the physiological-like model better approximates a vivo environment. Based on viability, and functionality parameters the developmental model showed that the Calu-3 bronchial barrier and the HepG2/C3A biochip can successfully be maintained viable and function in a dynamic coculture setting for 3 days. In a stress-induced environment, present results reported that the coculture model emulated active and functional in vitro crosstalk that seemingly was responsive to high (1.5 and 3 mM) and low (12 and 24 μM) xenobiotic exposure doses. Lung/liver crosstalk induced modulation of stress response dynamics, delaying cytotoxicity, proving that APAP fate, biological behaviors and cellular stress responses were modulated in a broader systemic-like environment
11
MICHEL, MARTINE. "Interets et limites des cocultures cellulaires : a propos de deux exemples." Strasbourg 1, 1991. http://www.theses.fr/1991STR15078.
Full text
12
Ke, Xuedan. "Effet de l'homocystéine sur le phénotype des cellules musculaires lisses artérielles : effet direct ou dysfonction endothéliale ?" Thesis, Aix-Marseille 2, 2010. http://www.theses.fr/2010AIX22952/document.
Full textAbstract:
La modulation phénotypique des cellules musculaires lisses (CML) artérielles d’un phénotype contractile vers un phénotype synthétique en réponse à des stimuli pathogènes est impliquée dans le développement de l’artériosclérose. Il est clairement établi que l'homocystéine (HCY) induit un remodelage de type artériosclérose au niveau des artères élastiques. Ce remodelage pathologique induit par l'HCY est dominé par l'accumulation de CML présentant un phénotype synthétique associée à une dysfonction endothéliale. Cependant, l'effet de l'HCY sur le phénotype des CML n’a pas été clairement décrit. Compte tenu du rôle déterminant des cellules endothéliales dans la modulation du phénotype des CML artérielles, l’objectif de notre travail est de déterminer dans quelle mesure l’effet de l’HCY sur le phénotype des CML est direct ou est dépendant d’une dysfonction endothéliale. Nous avons montré que des concentrations pathologiques d’HCY augmentent la prolifération de CML d’artères ombilicales humaines en culture et augmentent leur potentiel protéolytique par un mécanisme dépendant des espèces réactives de l'oxygène. Dans le même temps, l’HCY ne modifie pas l'expression des collagènes de type I et III et de la fibronectine, ni l'expression de protéines contractiles (SM a-actine, calponine hl, SMMHC et smoothéline B). Que ce soit sur des CML pré-conditionnées ou non par du milieu de culture conditionné (MC) de cellules endothéliales de veine ombilicales (HUVEC), nous avons montré que le MC d’HUVEC stimulées par 100µM d'HCYne lève pas l'inhibition de la prolifération des CML induite par les HUVEC et ne modifie pas l'expression des collagènes de type I et III et de la fibronectine, ni l'expressìon de protéines contractiles. Nos résultats sont en faveur d’un effet modulateur direct de l'HCY orientant le phénotype des CML vers un phénotype synthétique. S’il est connu que l'HCY induit une dysfonction endothéliale, cette dysfonction ne semble pas avoir de conséquences sur le phénotype des CMLPhenotype switching of arterial smooth muscle cells (SMC) from a contractile phenotype through a synthetic phenotype in response to pathogenic stimuli is involved in the development of arteriosclerosis. It is well established that homocysteine (HCY) induces arteriosclerosis in elastic arteries. This pathologic arterial remodelling is characterized by the accumulation of SMC showing synthetic phenotype associated with an endothelial dysfunction. However, the effects of HCY on SMC phenotype are unclear. Since endothelial cells play a key role in the regulation of SMC phenotype, the goal of our study is to determine whether HCY modulates the SMC phenotype through a direct effect or through the induction of an endothelial dysfunction. We found that pathologic concentrations of HCY increase the proliferation of human arterial umbilical SMC in culture and increase their proteolytic potential through a reactive oxygen species dependant mechanism. We also found that HCY has not effect on the expression of type I and III collagen and fibronectin, as well as contractile proteins (SM a-actine, calponine hl, SMMHC et smootheline B). Using pre-conditionned or not pre-conditionned SMC by conditionned culture medium (MC) from human umbilical vein endothelial cells (HUVEC), we found that MC from HUVEC stimulated with 100µM of HCY prevent the inhibition of proliferation induced HUVEC and did not altered the expression of type I and III collagen and fibronectin, as well as contractile proteins. Our results suggest that HCY can directly modulate the SMC phenotype towards a synthetic phenotype. Although HCY as been previously shown to induce an endothelial dysfunction, this latter does not seem to be involve in the modulation of SMC phenotype associated with hyper homocysteinemia
13
Chamayou, Léo. "LiverPearls, une méthode de culture multicellulaire miniaturisée et à haut débit reproduisant l’environnement physiologique et la structure tridimensionnelle du foie humain." Thesis, Université Paris sciences et lettres, 2020. http://www.theses.fr/2020UPSLS005.
Full textAbstract:
L’intérêt pour de nouveaux modèles de foie, plus proches physiologiquement du foie in vivo, est élevé, en particulier en provenance de l’industrie pharmaceutique. En effet, les systèmes standards, tels que la culture en 2D ne sont pas très prédictifs pour certaines études et de meilleurs modèles sont nécessaires, à la fois dans le cadre des études ADME/Tox pour le développement de médicaments ou pour modéliser les nombreuses maladies hépatiques. Afin de reproduire le foie humain, un modèle doit imiter sa structure de façon plus proche que les systèmes en 2D et refléter sa composition cellulaire. Pour produire ce modèle, nous avons utilisé une technologie de micro-encapsulation basée sur la co-extrusion dans l’air d’un jet biphasique, composé d’une phase externe de solution d’alginate et d’une phase interne contenant les cellules. Ce jet est ensuite fragmenté puis l’alginate est réticulé produisant des micro-capsules cœur/coque. La coque poreuse d’alginate protège les cellules du stress mécanique tout en permettant le passage de l’oxygène et des nutriments.Les cellules s’auto-assemblent dans ces capsules en sphéroïdes hépatiques pouvant être cultivés pendant un mois en gardant une bonne fonctionnalité et pouvant être utilisés dans le cadre de criblage à haut-débit. Cette thèse a porté sur l’utilisation de cette technologie pour mettre au point un modèle 3D de foie humain contenant des hépatocytes primaires humains, des cellules de Kupffer, et des cellules endothéliales sinusoïdales. Dans un premier temps, les conditions de culture de ce modèle ont dû être optimisées, notamment le ratio entre les différents types cellulaires et le milieu de culture adapté à ceux-ci. Puis, une fois ces conditions établies, le modèle a été caractérisé, structurellement par microscopie,ainsi que fonctionnellement, par l’étude de l’expression génique de plusieurs protéines hépatiques importantes, telles que les cytochromes P450 ou des récepteurs nucléaires. Des études d’activité enzymatique, de sécrétion d’albumine et d’urée ont également été menées. Ces capsules nous permettent d’obtenir un modèle en 3D, plus proche de la structure du foie humain, et capable de reproduire les interactions complexes entre les différents types cellulairesInterest for new and more physiologically relevant liver models is high, particularly from pharmaceutical companies. Standard systems, like 2D culture, are indeed not enough predictive and better models are needed, either for drug candidates screening in ADME/Tox studies or for hepatic diseases modelling. To be closer to the human liver, a new model needs toreplicate liver structure and cellular composition better than the 2D. To this end, we used a micro-encapsulation technology, developed by the laboratory and based on the co-extrusion of a two-phases jet, composed of an alginate external phase and a cell-containing internal phase. This jet is then fragmented into micro-droplets and the alginate reticulated to form core-shell microcapsules. The porous alginate shell protects the cells from shear stress while letting oxygen and nutrients pass, and by preventing cell adhesion, enables the cells to self-assemble into hepatic spheroids which can bekept alive during one month, retain good functionality and can be used for high-throughput screening. This thesis focusedon using this technology to develop a next 3D liver model containing human primary hepatocytes, Kupffer cells and liver sinusoidal endothelial cells. Firstly, culture conditions for this model had to be optimized, particularly the ratio between these different cell types and the culture medium, which had to be suitable for these cell types. Then, once the culture conditions had been established, the model was characterized, structurally by immunofluorescence staining, and functionally by studying gene expression of important liver proteins, like cytochromes P450 or nuclear receptors. Enzymaticactivity, albumin and urea secretion were also studied. These capsules allow us to obtain a model able to replicate the complex interactions between these cell types and structurally closer to the human liver
14
Danoy, Mathieu. "Development of a physiologically-relevant in-vitro microfluidic model for monitoring of pancreatic cancer cells interactions with the liver." Thesis, Lille 1, 2017. http://www.theses.fr/2017LIL10093/document.
Full textAbstract:
Le procédé de la métastase cancéreuse et sa compréhension sont devenus un des sujets majeurs de recherche en Biologie. En utilisant des modèles in-vitro en culture statique et dynamiques, nous avons étudié la possibilité de reproduire l’environnement physiologique in-vivo avec ces modèles. Nous avons développé un modèle de coculture hiérarchique dans des plaques à fond en PDMS. Composé d’hépatocytes, de pericytes et de cellules endothéliales. Dans différentes conditions, l’influence de ces cellules sur l’adhésion de cellules cancéreuses ou promyéloblastiques a été analysée ainsi que leur effet sur l’état inflammatoire du système. Afin de reproduire le flux sanguin et les forces de cisaillement présents in-vivo, le modèle a été transféré dans un système microfluidique. Le système se compose de trois canaux séparés par des micro-piliers, pouvant être remplis indépendamment. Les pericytes insérés dans du gel, les hépatocytes, les cellules endothéliales et finalement les cellules cancéreuses ont été injectés de façon successive afin de reproduire l’environnement in-vivo. Les cellules ont été trouvées viables durant toute la culture et des marqueurs relatifs au foie et à l’inflammation exprimés. L’influence des hépatocytes et des pericytes a été analysé. Il a été observé que les cellules cancéreuses adhérées dans le canal du haut étaient attirées par les autres cellules dans les diffèrent canaux. Les modèles établis posent de solides bases pour d’autres systèmes plus complexes et d’intérêt pouvant servir de complément aux modèles in-vivo lors de la recherche de nouvelles substances médicamenteusesThe cancer metastatic process and its understanding have been a major topic of interest for researchers in the past. Using in-vitro models in both standard culture conditions and in microfluidic devices, we investigated the feasibility of such models in the representation of the physiological in-vivo situation. We developed a hierarchical coculture model in PDMS plates, composed of hepatocytes, pericytes and endothelial cells. In different culture conditions, the influence of the different cells composing the model on the adhesion of cancer cells and promyeloblastic cells was investigated as well as the influence on the inflammatory state of the culture. To reproduce the in-vivo blood flow and shear stress to which the endothelial cells and the adhering cells are subjected, the model was then transferred into a microfluidic biochip. The device was composed of three channels, separated by micropillars and which could be filled independently one from another. Pericytes embedded in a hydrogel, hepatocytes, endothelial cells and finally pancreatic cancer cells could be inserted successively to reproduce the in-vivo hierarchical situation. Cells were found to viable after the culture and markers related to the liver and inflammation to be expressed. The influence of the presence of hepatocytes and pericytes was investigated by varying the culture conditions. It was found that pancreatic cancer cells were attracted by the cells in other channels in coculture. The established models lay the bases for more complex and relevant systems that could complement their in-vivo counterparts in the drug discovery process
15
Cruvellier, Nelly. "Etude et modélisation du compartiment nitrifacteur de la boucle MELiSSA : coculture sur ammonium et triculture sur urée." Thesis, Université Clermont Auvergne (2017-2020), 2017. http://www.theses.fr/2017CLFAC007/document.
Full textAbstract:
Les procédés actuellement utilisés à bord de la Station Spatiale Internationale permettent un traitement physico-chimique des déchets avec un recyclage partiel des éléments en minimisant le réapprovisionnement en eau et oxygène. Voyager plus loin et sur de plus longues durées n’est possible que si un système de support de vie, permettant d’assurer une autonomie plus importante, est mis en place. Le projet MELiSSA est un système de support de vie biorégénératif ayant pour objectifs de recycler les déchets produits par l’homme, de régénérer l’oxygène et l’eau et d’assurer une production de nourriture. L’utilisation de microorganismes pour assurer ces différentes fonctions, n’est réalisable qu’en ayant la meilleure connaissance possible et surtout la maîtrise des processus et des souches impliqués. L’objectif de cette thèse est de développer un modèle prédictif pour le compartiment nitrificateur de la boucle MELiSSA. Dans un premier temps, les souches Nitrosomonas europaea ATCC® 19718 et Nitrobacter winogradskyi ATCC® 25391 ont été étudiées et ont permis de définir un modèle cinétique de ces deux bactéries en culture immergée. Dans un second temps, ce modèle a été combiné à un modèle N-bacs en série pour composer un modèle de nitrification dans une colonne à lit fixe à biomasse fixée : le modèle NitriSim. Ce modèle a été testé sur une expérience de long-terme menée dans une colonne à lit fixe dont le support est composé de billes Biostyr®. Le dernier chapitre de ce manuscrit décrit l’utilisation d’une souche dégradant l’urée, Cupriavidus pinatubonensis, dans le réacteur à lit fixe. Les différents résultats ont permis de définir un modèle de nitrification dans un réacteur à lit fixe et de présenter des perspectives possibles pour le traitement de l’urine au niveau du compartiment nitrifiant de MELiSSAPhysico-chemical processes are used on the International Space Station for partial recycling of wastes in order to minimize the resupplies of oxygen and water. Further and longer explorations can only be possible if a life support system is applied to enhance autonomy to the station. MELiSSA is a biological life support system project aiming for waste recycling, water and air regeneration and production of simple food. The only way to assure these functions is the use of microorganisms which is requiring a high knowledge and a perfect control of processes implicated. The thesis objectives consist in developing a predictive model for the MELiSSA nitrifying compartment. First, a kinetic study of Nitrosomonas europaea ATCC® 19718 and Nitrobacter winogradskyi ATCC® 25391 in submerged bioreactors allowed defining a kinetic model of nitrification. Secondly, this model was combined to an N-tanks in series one to compose a nitrification model in fixed-bed biorectors : NitriSim. It was applied on a long-term experiment in a fixed-bed bioreactors where the bed was composed of Biostyr® beads. The last part of this work was about the use of a urea-degradating bacteria, Cupriavidus pinatubonensis, in the fixed-bed bioreactor. All of these results leaded to the development of a nitrification in fixed-bed reactors model and opened up interesting prospects for the urine degradation in the nitrifying compartment of MELiSSA
16
Frohwein, Thomas Armin [Verfasser]. "Untersuchung des Sensibilisierungspotenzials von ungesättigten Verbindungen im Loose-fit Coculture-based Sensitization Assay (LCSA) / Thomas A. Frohwein." Berlin : Medizinische Fakultät Charité - Universitätsmedizin Berlin, 2014. http://d-nb.info/1052221548/34.
Full text
17
Shim, Hojae. "BTEX degradation by a coculture of Pseudomonas putida and Pseudomonas fluorescens immobilized in a fibrous-bed bioreactor /." The Ohio State University, 1997. http://rave.ohiolink.edu/etdc/view?acc_num=osu1487945320759246.
Full text
18
Messelmani, Taha. "Development and characterisation of a biomimetic liver on chip featuring 3D hepatic coculture with an endothelial barrier." Electronic Thesis or Diss., Compiègne, 2023. http://www.theses.fr/2023COMP2736.
Full textAbstract:
Au cours des programmes de développement de médicaments, des modèles animaux sont utilisés pour évaluer le métabolisme et la toxicité des médicaments. Plusieurs cadres juridiques sont établis pour le remplacement, la réduction et l'amélioration de ces expériences. Le foie est un organe central pour la détoxification des molécules exogènes. Par conséquent, le développement de modèles reproduisant les fonctions du foie reste un objectif ambitieux. Ces dernières années, l'association entre l'ingénierie tissulaire et la technologie des organes sur puce a conduit au développement de modèles alternatifs imitant certaines fonctions hépatiques. L'objectif de ce travail est de développer une plateforme de foie sur puce biomimétique en couplant une biopuce d'hépatocytes et une barrière endothéliale. Dans la première partie, nous avons utilisé la technologie des organes sur puce et un hydroscaffold à base de matrice extracellulaire pour organiser les cellules en 3D. Les sphéroïdes formés ont été caractérisés sur le plan structurel et fonctionnel. Dans la deuxième partie, nous avons caractérisé la formation d'une barrière endothéliale. Nous avons établi les conditions de co-culture et analysé le potentiel du couplage de la barrière endothéliale avec la puce d'hépatocytes pour métaboliser l'APAP. Enfin, nous avons analysé la signature métabolomique de chaque condition, les interactions entre les cellules et identifié la signature métabolique des lésions causées par l'APAP. Dans la dernière partie, nous avons proposé des pistes d'amélioration en utilisant des hépatocytes primaires ou en intégrant la barrière endothéliale et les hépatocytes dans une biopuce bi-comportementaliséeDuring drugs development programs, animal models are commonly used for the assessment of the metabolism and toxicity of drug candidates. Several legal frameworks are being settled to promote the replacement, the reduction, and the refinement of these experiments. The liver is a central organ involved in the detoxification of exogenous molecules. Accordingly, the development of models mimicking the functions of the liver remain a challenging objective. Conventionally, liver cells are cultured in vitro in 2D Petri dishes but this conformation leads to a rapid loss of their functions. In recent years, the association between tissue engineering and organ-on-chip technology led to the development of more accurate alternative models that mimic the liver functions. The aim of this thesis is to develop a biomimetic liver-on-chip platform by coupling a hepatocyte biochip and an endothelial-like barrier. The goal is to mimic the passage of molecules through the liver sinusoid endothelial barrier and then their metabolism with the hepatocytes. In the first part, we used organ-on-chip technology and ECM-based hydroscaffold to organise the cells in 3D structures. The potential of our model was compared with static Petri dishes and the spheroids formed were characterised structurally and functionally. In the second part, we characterized the formation of an endothelial barrier and identified specific markers indicating the conservation of the phenotype of endothelial cells. We established the coculture conditions and analysed the potential of coupling the endothelial barrier with the hepatocyte-on-chip to metabolize the APAP as a candidate molecule. Finally, we analysed the metabolomic signature of each condition, crosstalk between the cells, and identified the metabolic signature of APAP injury and described the reactions happening at metabolic level. In the last part, we proposed tracks of improvement by using primary hepatocytes or by integrating the endothelial barrier and the hepatocytes in the same bi-compartmentalized biochip
19
Gravel, Nicole. "Induction de la compétence au développement chez les ovules de porc par la coculture avec les cellules folliculaires." Thesis, National Library of Canada = Bibliothèque nationale du Canada, 1999. http://www.collectionscanada.ca/obj/s4/f2/dsk2/ftp01/MQ44711.pdf.
Full text
20
Dorchies, Olivier. "Systemes de coculture nerf-muscle permettant la differenciation musculaire tardive chez les mammiferes : etude morphologique, biochimique et fonctionnelle." Université Louis Pasteur (Strasbourg) (1971-2008), 2000. http://www.theses.fr/2000STR13202.
Full textAbstract:
L'unite motrice um est la structure pluricellulaire responsable de la contraction du muscle squelettique. La formation puis la survie des um mettent en uvre des mecanismes complexes, notamment de nature trophique, electrique et mecanique. Des systemes, dits de cocultures nerf-muscle, permettent de reproduire in vitro des um completes et fonctionnelles, et d'etudier les phenomenes tardifs de la differenciation myogene. Dans un premier volet, nous avons etudie l'innervation et la differenciation des cellules musculaires de patients atteints d'une myopathie congenitale rare et severe, la myopathie myotubulaire liee a l'x xlmtm. Nos resultats suggerent que la myotubularine, phosphatase deficiente dans la maladie, n'est pas necessaire pour que le muscle de malade se differencie normalement in vitro, et que les motoneurones pourraient participer a l'installation de la maladie. Dans un second volet, nous avons developpe et caracterise plusieurs nouveaux systemes de coculture nerf-muscle destines a reproduire des um murines in vitro et a amener les cellules musculaires de souris a un haut niveau de differenciation. Nous avons en particulier observe que la moelle epiniere me de rat innerve plus efficacement le muscle, quel que soit son origine, que ne le fait la me de souris, et que la combinaison homologue muscle de souris-me de souris est particulierement inefficace. Dans un troisieme volet, nous avons approfondi la caracterisation du systeme qui associe des cellules musculaires de souris en lignees a de la me de rat. De cette combinaison resultent une differenciation spectaculaire des precurseurs du muscle murin en veritables fibres musculaires d'apparence adulte, striees et contractiles, la formation de synapses neuromusculaires, la mise en place d'um fonctionnelles qui survivent plusieurs mois in vitro. Notre objectif est de rendre accessible a l'experimentation, par l'intermediaire des cocultures nerf-muscle, des phenotypes musculaires et/ou nerveux qui ne peuvent pas s'exprimer dans des systemes cellulaires plus simples.
21
Kalman, Benoît. "Génération et optimisation de microtissus musculaires 3D in vitro." Thesis, Université Grenoble Alpes (ComUE), 2016. http://www.theses.fr/2016GREAI053.
Full textAbstract:
L’ingénierie du tissu musculaire squelettique vise à reconstituer in vitro un tissu fonctionnel aussi physiologique que possible dans le but de mieux comprendre la myogenèse, l’impact de mutations génétiques et tester des médicaments. Ces dernières années, différents modèles de tissus musculaires tridimensionnels ont été développés. Toutefois, l’utilisation prépondérante de cellules murines et la taille de ces modèles restreint leur pertinence pour les études de pathologies humaines et le criblage pharmacologique. Dans le cadre de ce travail de thèse, nous avons donc développé différents modèles de tissus musculaires humains micrométriques pour répondre à ces limitations. Dans un premier temps, nous avons conçu et optimisé par microfabrication une plateforme caractérisée par la présence de microcanaux. Nous avons ainsi généré des tissus musculaires multicouches alignés présentant une organisation proche du muscle natif à partir de myoblastes murins immortalisés C2C12 puis de myoblastes humains immortalisés. Nous avons ainsi montré l’influence de la topographie et de la concentration cellulaire sur l’alignement des myotubes et la maturation du tissu musculaire. Dans un second temps, nous avons développé une plateforme constituée de micropuits contenant chacun deux micropiliers permettant d’analyser la contractilité des tissus. Des microtissus musculaires 3D standardisés ont ainsi été générés avec cette plateforme à partir de myoblastes murins, et de myoblastes C2C12 électroporés avec un gène muté ou non de la desmine. Par la suite, des microtissus ont été générés à partir de myoblastes humains. L’importance du choix de la matrice dans la formation des microtissus et les bénéfices d’une coculture de myoblastes et fibroblastes dans la stabilité des tissus ont ainsi été mis en évidence. La géométrie de micropiliers a aussi été optimisée afin de générer et comparer des microtissus composés de myoblastes isolés de patients sains et malades (dystrophie musculaire de Duchenne). Une preuve de concept démontrant la possibilité d’utiliser cette technologie pour tester des thérapies chimiques et géniques a été établie. Nous avons en effet suivi en temps réel les effets de l’inhibiteur de la kinase Rho-associée Y-27632 sur la contractilité des microtissus, ainsi que la transduction d’un gène rapporteur fluorescent modèle par les cellules composant les microtissus. Les résultats de ce travail de thèse démontrent le potentiel de cette technologie pour l’étude des processus fondamentaux de la myogenèse, l’évaluation des effets fonctionnels de mutations patient-spécifique et le criblage de thérapies chimiques et géniquesSkeletal muscle tissue engineering aims to build functional and physiological tissues in vitro in order to better understand myogenesis, to investigate the impact of genetic mutations and to screen potential therapies. Over the past few years, bi- and tridimensional models of muscle tissue have been developed, but most of these models are based on the use of murine cells and require large amounts of cells, thus limiting their relevance to study pathologies of human muscles and drug screening assays. Here we aimed at developing different models of human muscle microtissues to address these issues. By using microfabrication techniques, we first engineered a microgrooved platform we used to generate aligned multilayered skeletal muscle tissues from murine C2C12 myoblasts and human immortalized myoblasts. We showed the impact of topography and cell density on the maturation and myotube alignment. We then fabricated a microdevice, consisting of microwells containing two micropillars allowing an easy access to the contractility of muscle tissues. We engineered microtissues from C2C12 and C2C12 myoblasts electroporated with a mutated gene of desmin, and showed some limitation of this technique of transduction. Finally, we generated microtissues from human myoblasts. We investigated the role of the extracellular matrix in the tissue formation and evidenced the benefits of coculturing myoblasts and fibroblasts on the stability of muscle microtissues. Furthermore, we optimized the geometry of the micropillars to engineer and compare microtissues composed of human myoblasts isolated from healthy and diseased (Duchenne muscular dystrophy) patients. A proof of concept of the potential of this technology for screening chemical and gene therapies was established. We were indeed able to analyze in real time the effects of the Rho-associated kinase-inhibitor Y-27632 on the tissue contractility, as well as the transduction of a model fluorescent reporter gene. Altogether, the results of this work demonstrate the potential of this technology to study fundamental muscle biology, examine functional effects of patient-specific mutations or screen chemical and gene therapies
22
Hamidi, Jamal. "Etude des stades précoces de développement embryonnaire : coculture in vitro dans l'oviducte et sur mono couches de cellules épithéliales tubaires." Lyon, INSA, 1990. http://www.theses.fr/1990ISAL0022.
Full textAbstract:
Chez de nombreuses espèces de mammifères, les embryons résultant d'une fécondation in vitro ou manipulés aux stades précoces de développement, se bloquent ou voient leur viabilité sévèrement altérée. Deux hypothèses sont relatées dans la littérature concernant l'origine du blocage embryonnaire : l'une privilégiant les facteurs cytoplasmiques maternels, l'autre faisant intervenir de manière équivalente le cytoplasme et le noyau. Nos résultats, obtenus avec les expériences de rétro-croisements, plaident plutôt en faveur d'une hypothèse cytoplasmique. Dans l'étude des relations oviducte-embryon, les résultats sont souvent contradictoires, notamment pour l'hormona-dépendance. La coculture d'embryons dans l'oviducte impubère in vitro sans traitement hormonal et sans sérum, nous a permis d'affirmer la non hormona-dépendance des facteurs embryo-trophiques et l'aptitude de l'oviducte impubère à assurer le développement embryonnaire précoce. D'autre part, nous avons montré que les sécrétions tubaires in vivo comme in vitro, ne sont pas embryo-dépendants : la présence d'embryons n'induit pas d'augmentation d'AMP cyclique ni d'influx d'acides aminés libres dans l'oviducte. La coculture d'embryons sur des monocouches de cellules épithéliales tubaires, comme dans le cas de coculture dans l'oviducte in vitro, a permis des taux importants de déblocage embryonnaire avec maintien de la chronologie, de la morphologie et de la viabilité embryonnaire. Ces performances ne semblent ni spéci-spécifiques ni strictement tissu-spécifiques[Embryos of many species of mammals do not lead to normal cleavage and development, with lost of viability, when they are manipulated in vitro out of their natural site. Two hypothesis are described in literature about the origin of this "Cell-block" : One is related to maternal cytoplasmic factors, the second one equally involves cytoplasm and nucleus. Our results, obtained with back-cross experiments, are in agreement with cytoplasmic hypothesis. In the study of oviduct-embryo relationships and of "embryo-trophic factors" implication, results are always contradictory, especially for hormone dependence (WHITTINGHAM, 1968 ; MINAMI et al. , 1988). Using the technique of coculture in prepubertal oviduct, without any serum addition or hormonal treatment, we can now assert the non hormone dependence of embryotrophic factors and the aptitude of prepubertal oviduct to sustain the early embryo development (HAMIDI et al. , 1988 ; MENEZO et al. , 1989). Moreover, we have demonstrated that the tubular secretions are not embryo dependent: embryo don't induce increased cAMP level nor amino acids influx in the oviduct. Furthermore, using a substitute of serum, Ultroser G, we obtained for the first time a confluent monolayers of epithelial cells derived from mouse oviduct. Embryo coculture on those monolayers allowed an important level of embryo development with maintenance of chronology, morphology and viability. This performance does not seem specie-specific nor strictly tissue-specific. About the metabolism of glucoside, the modification of culture medium by epithelial cells (monolayers), is in agreement with the observation of CHA TOT et al. (1989) ; however, this result is not confirmed by the use of other cell supports. ]
23
Behr, Steven [Verfasser], and Regine [Akademischer Betreuer] Willumeit-Römer. "Impact of magnesium based degradable alloys on a coculture model of osteoblast and osteoclast / Steven Behr ; Betreuer: Regine Willumeit-Römer." Hamburg : Staats- und Universitätsbibliothek Hamburg, 2020. http://d-nb.info/1211727270/34.
Full text
24
Fifani, Barbara. "Développement de stratégies de coculture favorisant l’amensalisme ou la coopération entre les agents de biocontrôle Bacillus velezensis et Trichoderma harzianum." Electronic Thesis or Diss., Université de Lille (2018-2021), 2021. http://www.theses.fr/2021LILUR054.
Full textAbstract:
La compréhension de l’interaction entre les microorganismes est primordiale pour le développement de nouveaux produits de biocontrôle. Le champignon Trichoderma harzianum et la bactérie Bacillus velezensis sont exploités pour leur potentiel dans la lutte contre les phytopathogènes. Deux stratégies de coculture de ces deux microorganismes sont mises au point afin de déterminer les conditions menant à une interaction qui augmente l’activité de biocontrôle de ce couple, définie en termes de production de lipopeptides par la bactérie. Le milieu de culture varie essentiellement entre ces deux stratégies. Les deux milieux varient en fonction de la disponibilité de nutriments pour les microorganismes. Dans un milieu riche, où Bacillus et Trichoderma disposent de tous les éléments nécessaires à leur croissance, la bactérie se développe au dépriment du champignon grâce à son rythme de croissance plus rapide et à la production des lipopeptides antifongiques. L’inoculation séquentielle de Trichoderma suivi par Bacillus permet de résoudre ces problèmes empêchant la coexistence des deux microorganismes. Toutefois, dans toutes ces approches, la présence de Trichoderma n’a pas influencé la production de lipopeptides par B. velezensis GA1 et conséquemment son activité en biocontrôle. L’effet sur la production de ces NRPs est plus remarqué dans un milieu minimum conçu pour imposer une dépendance nutritionnelle entre Bacillus et Trichoderma. Le requis de la bactérie d’une source d’azote produite par T. harzianum, principalement sous forme de peptides et d’acides aminés, leur permet de coexister en coculture. La présence physique du champignon inhibe la production de lipopeptides mais la présence de son surnageant la promeut. Le dialogue moléculaire entre le couple Trichoderma – Bacillus requiert d’être décrypté davantage afin de l’exploiter dans des applications agricolesUnderstanding the interaction between microorganisms is essential for the development of new biocontrol products. The fungus Trichoderma harzianum and the bacteria Bacillus velezensis are exploited for their antagonist activity against phytopathogens. Two coculture strategies of these two microorganisms were developed in order to determine the conditions leading to an interaction which increases the biocontrol activity of this couple, defined in terms of the production of lipopeptides by the bacteria. The culture medium essentially varies between these two strategies. The two media differ depending on the availability of nutrients for the microorganisms. In the medium where Bacillus and Trichoderma have all the necessary elements for their growth, the bacteria thrives at the expense of the fungus thanks to its faster growth rate and the production of antifungal lipopeptides. Sequential inoculation of Trichoderma followed by Bacillus solved these problems preventing the coexistence of the two microorganisms. However, in all of these approaches, the presence of Trichoderma did not influence the production of lipopeptides by B. velezensis and consequently its activity in biocontrol. The effect on the production of these NRPs is most noticeable in a minimal medium designed to impose a nutritional dependence between Bacillus and Trichoderma. The bacteria's requirement for a nitrogen source provided by T. harzianum, mainly in the form of peptides and amino acids, allows them to coexist in coculture. The physical presence of the fungus inhibits the production of lipopeptides, but the presence of its supernatant promotes it. The molecular dialogue between the Trichoderma - Bacillus couple needs to be further deciphered in order to exploit it in agricultural applications
25
Baudequin, Timothée. "Caractérisation biologique et mécanique d'un subsitut osseux biohybride et développement de scaffolds par électrospinning : vers un pansement vivant pour la reconstruction maxillo-faciale." Thesis, Compiègne, 2015. http://www.theses.fr/2015COMP2219/document.
Full textAbstract:
Un substitut osseux hybride, composé d’un biomatériau support (scaffold) et de cellules vivantes, a été étudié, développé par la méthode d’ingénierie tissulaire et caractérisé. Il devait répondre aux attentes spécifiques de la chirurgie maxillofaciale : un protocole standard pouvant s’adapter aux géométries complexes des défauts osseux de chaque patient, une forme souple et manipulable, une pré-vascularisation et une cohésion mécanique suffisante. Une forme de feuillet fin et plat a ainsi été définie et développée au sein d’une chambre de culture parallélépipédique spécifique, en utilisant une monocouche de granules de phosphate de calcium comme support. Après une caractérisation biologique et mécanique complète à partir d’une lignée cellulaire, le procédé a été validé puis transposé à une coculture de cellules primaires humaines (cellules souches et endothéliales). La bonne différenciation et la pré-vascularisation ont été constatées mais le maintien mécanique pouvait être considéré comme insuffisant pour assurer une manipulation en cours d’opération chirurgicale. La dernière partie de ce travail de thèse a donc consisté dans la mise en place d’un montage de production de fibres électrospinnées et leur utilisation comme nouveau support de culture. La formation de ces matériaux a été rendue opérationnelle de façon optimale pour différents polymères. Leur potentiel en tant que scaffold favorisant la différenciation en os ou en tendon a été vérifié et comparé à d’autres matériaux fibreux obtenus dans le cadre de collaborations nationales et internationales. La faisabilité de l’application de sollicitations mécaniques aux substituts en cours de culture a également été étudiéeAn hybrid bone substitute, based on a specific biomaterial (scaffold) and living cells, was studied, developed with a tissue engineered method and characterized. It should meet the expectations of the maxillofacial surgery : a standard process which could fit with the complex geometries of each patient’s bone mass loss, a flexible shape with an easy handling, a prevascularization and a sufficient mechanical cohesion. A sheet-like shape was thus designed and developed in a specific flat cell culture chamber, with a monolayer of calcium phosphate granules as a scaffold. After both biological and mechanical full characterizations with a cell line, the process was adapted to a coculture of human primary cells (stem and endothelial cells). Relevant differentiation and prevascularization were highlighted but the mechanical cohesion could be noticed as too low to ensure an easy handling during the surgery. The last part of this thesis project was thus the set-up of a device for electrospun polymer fibers in order to use them as a new scaffold. The production of these materials was efficiently performed for several polymers. The differentiation potential for bone and tendon lineages was studied and compared to other scaffolds from national and international collaborations. The application of mechanical solicitations to the substitutes during cellculture was also studied
26
Martínez, González José Luis. "Utilisation de la coculture de Lactobacillus rhamnosus RW9595M et Lactobacillus rhamnosus R, pour moduler le poids moléculaire de leurs exopolysaccharides produits." Master's thesis, Université Laval, 2008. http://hdl.handle.net/20.500.11794/21139.
Full textAbstract:
Un procédé de fermentation basé sur une coculture des souches probiotiques Lactobacillus rhamnosus R et Lactobacillus rhamnosus RW9595M a été utilisé pour coproduire des exopolysaccharides (EPS) de poids moléculaires modulés. Dans cette étude, les deux souches ont été cultivées séparément et en coculture. Les souches ont été cultivées durant 72 h, à 37 °C, sous contrôle de pH à 6.0, et avec une agitation de 100 r.p.m. Deux milieux de culture ont été testés, le milieu minimum basai supplémenté (BMM-S) avec 1.1% (v/v) de tryptone et le perméat de lactosérum supplémenté (PLS) avec 1.1% (v/v) de tryptone, 0.5 mg /L de MgS04, 0.05 mg /L de MnS04 et 0.1% de Tween 80. La croissance cellulaire des souches et le poids moléculaire ont été mesurés au cours de la fermentation par dénombrement sur gélose et par HPLC-SEC, respectivement. Lorsque les souches ont été cocultivées dans le BMM-S en proportion de 1 :1, 991 ±30 mg/L d'EPS avec des poids moléculaires de 1.0 ± 0.21 x 106, 1.6 ± 0.16 x 106 Da, et 1.9 ± 0.18 x 105 Da, ont été obtenus. Dans le milieu PLS, les souches ont été cocultivées en proportion de 9:1 (R/RW9595M), 657 ± 90 mg/L d'EPS avec des poids moléculaires de 5.59 ± 0.82 x 104Da, ont été obtenus. La croissance cellulaire individuelle a été mesurée par qPCR-TaqMan pour les essais dans le milieu PLS. La concentration cellulaire maximale pour chaque souche était de 2.05 x 109 UFC/mL pour Lb. rhamnosus R, et de 3.67 x 108 UFC/mL pour Lb. rhamnosus RW9595M. Ce procédé est simple et économique pour la culture des probiotiques à haute valeur ajoutée en fabrications alimentaires.
27
Ulmann, Lauriane. "Etude des interactions fonctionnelles entre neurones sensoriels des ganglions rachidiens et kératinocytes de l'épiderme : mise au point d'un modèle de coculture." Université Louis Pasteur (Strasbourg) (1971-2008), 2004. http://www.theses.fr/2004STR13213.
Full textAbstract:
Nous avons mis au point un modèle de coculture de kératinocytes et de neurones de ganglion rachidien de rat nouveau-né et entre leurs homologues de lignées cellulaires. Chaque type cellulaire cultivé seul a été caractérisé par immunocytochimie, microscopie électronique et imagerie du calcium. La coculture nécessite l'utilisation du milieu spécifique aux kératinocytes, contenant une faible concentration en calcium (MCDB 20). Dans ce milieu, les neurones cultivés seuls ne présentent pas de croissance axonale, alors qu'une poussée neuritique est observée dans ce milieu lorsque la concentration de calcium est augmentée à 2 mM. L'addition de kératinocytes (cocultures) permet une élongation axonale dans le milieu MCDB 20 et la poussée neuritique est comparable à celle observée en condition 2 mM de calcium. Cette observation suggère que les cellules cibles périphériques libèrent des molécules trophiques agissant sur la croissance axonale des neurones. Après avoir déterminé le phénotype des neurones en coculture, nous avons recherché les molécules impliquées dans l'effet trophique des kératinocytes. En présence de NGF, de BDNF, ou de DHEA, les neurones cultivés dans le milieu MCDB 20 émettent des prolongements de taille identique à celle mesurée avec les kératinocytes. La présence de récepteurs Trk et de BDNF dans les neurones, la diminution de la longueur axonale des neurones en coculture en présence soit de bloquants des récepteurs Trk ou du PBR, ou en présence d'inhibiteurs des enzymes de synthèse de DHEA, montre que les neurotrophines et la DHEA sont impliqués dans l'effet trophique des kératinocytes. Cependant, les contacts physiques observés en microscopie électronique ne présentent pas de différenciation morphologique particulière. Ce système de coculture permet d'étudier les effets des cellules cibles sur le développement neuronal, la nature des facteurs impliqués et la transmission du message sensoriel depuis la périphérieA coculture model between sensory neurons of dorsal root ganglion and keratinocytes of epidermis of newborn rats and corresponding cell lines has been developed. Each cell type has been characterized by immunocytochemistry, electron microscopy and calcium imagery. The coculture needs a specific medium for keratinocytes, with a low calcium concentration (MCDB 20). In this medium, axons of neurons cultivated without keratinocytes don't appear, but the axonal growth is observed when the calcium concentration is increased to 2 mM. The presence of keratinocytes (cocultures) allows an important neuritic extension similar to this observed in the 2 mM calcium medium. This observation suggests that the target cells release some trophic factors which induce the axonal growth. After determining the neuronal phenotype in coculture, we have looked for the molecules implied in the trophic effect. The addition of NGF, BDNF or DHEA induces an important axonal extension. The presence of Trk receptors and BDNF in neurons, the decrease of the axons gowth in coculture with the Trk or PBR blokers, or with the addition of the DHEA synthesis enzyme shows that neurotrophins and DHEA are imply in the trophic effect of keratinocytes. On the other hand, the physical contacts observed with electron microscopy don't show any specific morphological differentiation. This coculture system allows the study of the effects of target cells on the neuronal development, the nature of trophics factors and the transmission of the sensory signal since the periphery
28
Lind, Marianne. "Etude des mécanismes de l'activation des cellules dendritiques par les lymphocytes T CD4+ chez l'homme." Paris 7, 2007. http://www.theses.fr/2007PA077120.
Full textAbstract:
Les cellules dendritiques (DC) sont les sentinelles du système immunitaire. Elles permettent la mise en place rapide d'une réponse adaptative appropriée au type de danger à éliminer. Pour cela, elles doivent recevoir divers signaux d'activation. Cette maturation des DC est induite par des produits d'origine microbienne, ainsi que par des interactions avec d'autres cellules du système immunitaire, telles que les lymphocytes T (LT) CD4+. Nous avons souhaité approfondir l'étude des signaux dépendants de ces LT qui participent à l'activation des DC. Nous avons montré, dans un modèle humain, que l'activation des DC par les LT CD4+ est dépendante de l'antigène et de contacts cellulaires via les molécules CD40L et CD40. De plus, la sécrétion d'IL-12p70 et d'IFN-γ est cruciale pour l'activation des DC. Nous avons ensuite observé qu'en présence de LT CD4+ et d'antigène, les DC initialement arrondies prennent une forme très allongée et deviennent mobiles. Nous avons montré que des chimiokines sécrétées lors d'interactions DC-T antigène-spécifiques induisent un remaniement du cytosquelette des DC qui pourrait expliquer leur acquisition de capacités migratoires. Enfin, nous avons examiné quels étaient les facteurs solubles sécrétés au cours de la présentation antigénique. Nous avons mis en évidence la production de grandes quantités d'IFN-γ et de nombreuses chimiokines, et nous avons montré que ces dernières, en plus de jouer un rôle crucial dans la mobilité des DC, contribuent à leur production d'IL-12. Nos études apportent donc une meilleure compréhension des moyens par lesquels les LT, notamment via les chimiokines, influencent les points clés de la maturation des DCDendritic cells (DCs) are the sentinels of the immune System. They allow the fast induction of appropriate adaptive responses. To do so, immature DCs need to be activated. The maturation of DCs is induced by microbial products and also by interactions of DCs with other cells of the immune System, such as CD4+ T cells. The mechanisms by which CD4+ T cells activate DCs are poorly understood. We thus decided to study CD4+ T cell-dependent signals that contribute to DC activation. We have shown, in a human model, that T cell-dependent DC activation is antigen-specific and depends on cell contacts through the transmembrane molecules CD40L and CD40. Moreover, the secretion of IL-12 and IFN-γ is crucial for the activation of DCs. We then observed that in the presence of CD4+ T cells and antigen, DCs undergo striking morphological changes and become motile. We have shown that chemokines produced during antigen-specific interactions between DCs and T cells induce cytoskeleton remodelling in DCs, which might allow their acquisition of migratory capacities. Finally, we tried to better characterize the soluble factors produced during antigen presentation. We observed that big amounts of IFN-γ and many other cytokines were produced, including chemokines. Interestingly, we showed that chemokines play a role in the production of IL-12 by DCs, in addition to their role in DC mobility. Our study shed some light on the mechanisms by which T cells, particularly via chemokines, influence key steps of DC maturation
29
Martinez, Gonzalez Jose Luis. "Utilisation de la coculture de Lactobacillus rhamnosus RW-9595M et Lactobacillus rhamnosus R, pour moduler le poids moléculaire de leurs exopolysaccharides produits." Thesis, Université Laval, 2008. http://www.theses.ulaval.ca/2008/25669/25669.pdf.
Full text
30
Thevenard, Benoît. "Implication des systèmes à deux composants dans les réponses de Streptococcus thermophilus à des changements environnementaux, dont la coculture avec Lactobacillus bulgaricus." Phd thesis, AgroParisTech, 2011. http://pastel.archives-ouvertes.fr/pastel-00734426.
Full textAbstract:
S. thermophilus est une bactérie lactique largement utilisé dans l'industrie laitière et, comme toute bactérie, doit s'adapter à des environnements variés tels que le lait, le yaourt et même le tractus digestif, après que le produit ait été ingéré. Les systèmes à deux composants (TCS) constituent un des mécanismes essentiels qu'utilisent les bactéries pour percevoir et s'adapter à des changements environnementaux. D'un point de vue structural, les TCS sont constitués de deux composants: un " senseur " ou protéine histidine kinase (HK) qui s'auto-phosphoryle en réponse à un stimulus puis transfère son groupement phosphate au " response regulator " (RR), le deuxième composant. Celui-ci se comporte alors le plus souvent comme un régulateur transcriptionnel permettant une réponse physiologique adaptée. Afin de mieux comprendre ces phénomènes de régulation impliqués dans la réponse aux changements environnementaux, nous avons étudié la contribution de chacun des 8 TCS de Streptococcus thermophilus LMD-9 à son adaptation dans le lait. Ainsi, des études transcriptionnelles effectuées sur des cultures en lait montrent que tous les RR sont exprimés, à des niveaux et profils d'expression différents. Nous avons noté en coculture avec Lactobacillus bulgaricus, le partenaire de Streptococcus thermophilus dans le yaourt, une induction de l'expression de 4 RR qui atteint, pour rr02 et rr09, un facteur 6. Nous avons construit par ailleurs des mutants négatifs pour 7 des 8 RR de S. thermophilus et montré l'essentialité de RR05, un orthologue de YycF chez B. subtilis ou de or de WalR chez S. aureus. Pour les 7 autres mutants RR, l'absence d'un seul gène rr n'impacte pas suffisamment la croissance du streptocoque en lait. Enfin, la détermination du régulon du TCS06 par des études post-génomiques a permis de montrer que ce système est impliqué dans la résistance à la bacitracine en modulant entre autres la voie de biosynthèse du polysaccharide à rhamnose (RGP).
31
Moritz, Joseph M. (Joseph Michael). "Increased differentiation properties in two- and three-dimensional coculture of hepatocytes and liver epithelial cells by a novel quantitative functional liver assay." Thesis, Massachusetts Institute of Technology, 2007. http://hdl.handle.net/1721.1/39352.
Full textAbstract:
Thesis (Ph. D.)--Massachusetts Institute of Technology, Dept. of Chemical Engineering, 2007.Includes bibliographical references (leaves 100-121).
Hepatic stem cells in adult rats are activated by chemical injury to the liver, causing hepatic progenitor cells to proliferate, integrate into the hepatic plates, and differentiate into hepatocytes. In an attempt to model this process in vitro, we established and quantitatively assayed the differentiation properties of a strain of rat liver epithelial cells (LEC), lig8, grown in coculture with mature liver cells in a three dimensional, perfused microreactor optimized for hepatocyte culture. Lig8 was derived by suppression of the asymmetric growth kinetics that may be indicative of stem cells, and Lig8 progeny can be induced to exhibit several hepatocyte-specific differentiation properties in vitro; however, Lig8 full hepatocyte functional differentiation in culture has not yet been achieved. We hypothesized that more extensive differentiation properties may be observed in vitro if the Lig8 cells are cultured in an engineered analog of the 3D tissue environment that influences progenitor cell differentiation in vivo. We also assayed the differentiation properties of the hepatocytes in coculture. Previous studies have shown an increase in the differentiation of hepatocytes in 2D hepatocyte-LEC cocultures; we wished to determine if the benefit of coculture also occurs in the 3D microreactor.
(cont.) We therefore compared the differentiation properties of both cell types in 3D microreactor cocultures to three more traditional culture formats: 2D rigid collagen monolayer, 2D collagen gel sandwich, and 3D spheroids. To assess the functional differentiation state of both cell types in these cocultures, we implemented a cell-localizable quantitative assay for endocytotic uptake of fluorescent ligands of the hepatocyte asialoglycoprotein receptor (ASGPR). T'o additionally assay overall differentiation of the cultures, we examined the level of expression compared to in vivo of three hepatocyte-specific transcripts: ASGPR, and two highly abundant drug-metabolic enzymes CYP3A1 and CYP2E1. Of all the culture modes tested, three-dimensional microreactor coculture was shown to be the most highly differentiated by the fluorescent ligand uptake assay for ASGPR and CYP3A1, with near in vivo expression of CYP3A1. However, coculture only improved the expression of the transcripts for ASGPR and CYP2E1 in 2D rigid collagen monolayer cocultures. lig8 exhibited no uptake of the ASGPR-ligand in monoculture, but in all cocultures tested, rare cells were found positive, with a higher percentage of lig8 taking up the ligand in 31) than in 2D (although cell fusion was not ruled out).
(cont.) We conclude that this three-dimensional coculture system may be more physiological in vitro model for the study of LEC-mature cell interactions and liver response to carcinogens.
by Joseph M. Moritz.
Ph.D.
32
Ziegler, Elke [Verfasser], Carsten [Akademischer Betreuer] Gründker, and Matthias [Akademischer Betreuer] Dobbelstein. "Characterization of human breast cancer cells affected by coculture conditions and kisspeptin-10 / Elke Ziegler. Gutachter: Carsten Gründker ; Matthias Dobbelstein. Betreuer: Carsten Gründker." Göttingen : Niedersächsische Staats- und Universitätsbibliothek Göttingen, 2013. http://d-nb.info/1044414847/34.
Full text
33
Hakelius, Malin. "Interactions between Malignant Keratinocytes and Fibroblasts : Studies in Head and Neck Squamous Cell Carcinoma." Doctoral thesis, Uppsala universitet, Plastikkirurgi, 2014. http://urn.kb.se/resolve?urn=urn:nbn:se:uu:diva-221109.
Full textAbstract:
Carcinoma growth requires a supportive tumor stroma. The concept of reciprocal interactions between tumor and stromal cells has become widely acknowledged and the connective tissue activation seen in the malignant process has been likened to that of a healing wound. Little is, however, known about the specific characteristics of these interactions, distinguishing them from the interplay occurring between epithelial and stromal cells in wound healing. In order to study differences in the humoral effects of malignant and benign epithelial cells on fibroblasts, we used an in vitro coculture model with human oral squamous cell carcinoma cells (SCC) or normal oral keratinocytes (NOK) on one side of a semi-permeable membrane and fibroblasts seeded in gels on the other. Pro-collagens α1(I) and α1(III) were more downregulated in NOK cocultures compared to SCC cocultures. IL-1α was identified as a major keratinocyte-derived soluble factor behind the effects observed. We concluded that SCC are less antifibrotic compared to NOK. There was also a differential expression among enzymes involved in ECM turnover. The urokinase-type plasminogen activator (uPA) and plasminogen activator inhibitor-1 (PAI-1) were both upregulated by NOK, but not by SCC. Here, rIL-1ra caused further upregulation of PAI-1. Global gene expression in fibroblasts was assessed using Affymetrix™ arrays. In total, 82 transcripts were considered differentially expressed; 52 were up- and 30 were downregulated in SCC compared to NOK cocultures. Among the differentially expressed genes there was an enrichment of genes related to collagens and to a nonspecific, innate-type response. The innate response marker pentraxin (PTX3) was upregulated by keratinocyte-derrived IL-1α in both NOK and SCC cocultures. We observed a considerably higher IL-1α / IL-1ra quotient in SCC cocultures, however, while PTX3 mRNA upregulation was higher in SCC cocultures, there was no difference in the level of PTX3 secreted protein. Taken together, we concluded that NOK and SCC regulate genes important for ECM composition and for the innate immune-response differentially. IL-1α was identified as one important mediator of the observed effects. In general, SCC appeared to be more profibrotic in their effects on fibroblasts.
34
MEIGNEN, BRUNO. "Etude comparee des caracteristiques microbiologiques et biochimiques en milieu cerealier de l'association saccharomyces cerevisae - lactobacillus brevis en monoculture et en coculture ; interet organoleptique en panification." Nantes, 1998. http://www.theses.fr/1998NANT2004.
Full textAbstract:
L'objectif de cette these etait d'observer les differences existant entre les deux monocultures et la coculture d'une levure saccharomyces cerevisiae et d'une bacterie lactique lactobacillus brevis, dans des levains de panification. La premiere partie de ce travail a permis de constater des differences importantes entre les deux procedes de fermentation. La culture mixte (coculture) permet d'obtenir des levains plus riches en acide lactique, acide acetique, glycerol, acides amines et composes volatils. Cependant, cet effet est fortement reduit apres panification et aucune difference significative n'est mesuree sur les pains issus des deux procedes lors des tests d'analyse sensorielle. Une etude par analyse olfactive des composes volatils odorants des pains a montre qu'ils etaient identiques pour les deux procedes, mais que leur teneur etait un peu superieure dans le procede mixte. La seconde partie de ce travail, portant sur l'etude approfondie des levains, a permis d'observer une plus forte production d'acide acetique par la bacterie en presence de levure. Ceci est du a l'utilisation du fructose issu de l'hydrolyse du saccharose de la farine par l'invertase de la levure. Le developpement de la levure est gene par la production d'acides par la bacterie. Ceux-ci provoquent un stress chez la levure induisant une surproduction de glycerol. L'acidification apportee par la bacterie permet une activation des proteases de la farine et une liberation plus importante d'acides amines qui sont utilises par la levure pour former des alcools superieurs en plus grande quantite. La troisieme partie du travail a porte sur le developpement et l'optimisation d'un procede de culture combinant sequentiellement monoculture puis coculture. Ce procede a permis d'obtenir dans les levains des quantites d'acides organiques equivalentes a celle du levain mixte, et des quantites de composes volatils odorants superieures. L'analyse sensorielle revele que les pains obtenus avec ce procede sont plus types gout levain qu'avec les procedes precedemment cites.
35
Wagner, Stéphanie. "Développement et caractérisation d'un nouveau système de coculture nerf-muscle permettant la différenciation tardive du muscle de Souris : étude morphologique, biochimique, fonctionnelle, enzymologique et électrophysiologique." Université Louis Pasteur (Strasbourg) (1971-2008), 2001. http://www.theses.fr/2001STR13138.
Full text
36
Abd, Hadi. "Interaction between waterborne pathogenic bacteria and Acanthamoeba castellanii /." Stockholm, 2006. http://diss.kib.ki.se/2006/91-7140-569-0/.
Full text
37
Alvarenga, Veronica Ortiz 1983. "Modelagem preditiva do crescimento/morte de Saccharomyces cerevisiae em co-cultura com Lactobacillus fermentum em mosto de caldo de cana-de-açucar." [s.n.], 2008. http://repositorio.unicamp.br/jspui/handle/REPOSIP/255403.
Full textAbstract:
Orientador: Pilar Rodriguez de MassaguerDissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos
Made available in DSpace on 2018-08-11T05:21:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Alvarenga_VeronicaOrtiz_M.pdf: 2142918 bytes, checksum: 08f3a593a106f67edd1807d169d7e116 (MD5) Previous issue date: 2008
Resumo: No Brasil e em outros países, a fermentação alcoólica é realizada sem esterilização do caldo de cana-de-açúcar que constitui um ótimo substrato para o crescimento microbiano tornando-se, assim, inevitável à presença de contaminantes. Estes apresentam-se como os principais responsáveis pela redução no rendimento e produtividade da fermentação. Esta pesquisa teve por objetivo predizer os parâmetros de crescimento (taxa de crescimento (m), tempo de adaptação (l) e população máxima (Rg)) da Saccharomyces cerevisiae e Lactobacillus fermentum, quando cultivados individualmente ou em co-cultura através da aplicação dos modelos primários de crescimento de Baranyi & Roberts (1994) e Gompertz modificado (Zwietering et al, 1991). Em função de variações de temperatura (28 ¿ 32ºC) e concentração de inóculo de L. fermentum (101 ¿108 UFC/mL), mantendo-se fixo o nível de inóculo de S. cerevisiae em 106 UFC/mL. Para a modelagem primária foi ajustado, também, o modelo quase-químico. Para a construção deste modelo, foi utilizado o software Matlab versão 7.5. A inoculação das culturas foi realizada em mosto de cana-de-açúcar clarificado industrialmente, e ajustado a 21.5ºBrix. O material foi tratado termicamente a 121ºC por 40 minutos e mantido congelado a ¿20ºC até a realização dos ensaios. Foram adicionados 200 mL de mosto, em elernmeyeres de 500mL esterilizados. Para o ajuste do inóculo da levedura foi realizada a contagem da suspensão em Câmara de Neubauer e para o lactobacilo o ajuste foi realizado com o auxílio do Densimat¿ (BioMérieux, S.A., France). Os ensaios de fermentação foram conduzidos em incubadora com agitação contínua de 120 rpm (New Brunswick Scientific, Model G-27, U.S.A.) e temperatura controlada. Para cada ensaio realizado com a cultura mista, foram conduzidos outros dois ensaios da mesma forma e com o mesmo substrato para as culturas puras de S.cerevisiae e L. fermentum. Os dados obtidos foram ajustados com o software DmFit para os modelos de Baranyi e Roberts (1994) e Gompertz modificado (Zwietering et al 1991). Não houve diferença significativa (p<0,10) para l, m e Rg da levedura e para l e m. No entanto, para Rg do lactobacilo houve diferença significativa entre a cultura pura e mista. Quando a levedura atinge a fase estacionária o lactobacilo teve sua taxa de crescimento incrementada de sua população máxima aumentou relevantemente no final da fase estacionária da levedura. O modelo de Baranyi e Roberts descreveu melhor a fase de adaptação dos microrganismos. Já o modelo quase-químico apesar de descrever crescimento/declínio não modela adequadamente o plateau da fase estacionária, quando ele acontece. O modelo secundário da população máxima do lactobacilo em função da temperatura de fermentação e nível de inóculo demonstrou que o nível de inóculo e sua interação com a temperatura foram significativos ao nível de 10% de significância. O índice de viabilidade da levedura pura foi afetada por mudanças na temperatura. Porém, para a cultura mista, com o tempo de fermentação fixo (21 horas) o nível de contaminaçao pelo lactobacilo foi altamente significante. O melhor indice de viabilidade foi observado para L=103UFC/mL e temperatura de fermentação a 25oC. Nas condições estudadas foi observado um máximo na produção de etanol quando a temperatura de fermentação foi 28oC e o nível de inóculo de lactobacilo de 105UFC/mL. O efeito quadrático da temperatura de fermentação foi mais significativo (p<0,10) que o nível de contaminação do lactobacilo na produção máxima de etanol. Os modelos determinados neste estudo poderão servir para posterior otimização de processos fermentativos na indústria sucroalcooleira
Abstract: In Brazil and other countries around the World, the sugar cane must fermentation for alcohol production is carried out without sterilization of the sugar cane juice, being an excellent medium for the multiplication of undesirable contaminants. Among the contaminants of sugar cane must, Lactobacillus fermentum can be considered one of the most relevant being able to cause the flocculation of yeasts and to reduce ethanol yield and productivity of the fermentation. This research aimed to predict the growth parameters lag time (l), specific growth rate (m) and maximum population (Rg) of Saccharomyces cerevisiae and Lactobacillus fermentum in individual and cocultures. Predictive modeling of microorganisms growth in co-culture and pure culture was done through the application of primary growth models of Baranyi and modified Gompertz, varying temperature (24 ¿ 32ºC) and inoculum concentration of L. fermentum (101 ¿ 108 CFU/mL) with a fixed inoculums level of S. cerevisiae (106 CFU/mL). For the primary modeling it was also, adjusted the quase-chemical model for the construction of this model Matlab software version 7.5 was used. The inoculation of the cultures was carried out in sugar cane must industrially clarified and adjusted to 21.5ºBrix, heat treated must (121ºC per 40 minutes) were inoculated with the yeast and lactobacilli, the adjustment of the inoculum was done respectively by counting the suspension in Neubauer chamber and Densimat (BioMérieux, S.a., France). For each assay carried out with the mixed culture, two others tests with pure culture were done for comparison of growth parameters. The fermentation assays were conducted in an incubator with continuous agitation (120rpm) (New Brunswick Scientific, Model G 27, U.S.A.) and controlled temperature. From the data obtained, the growth parameters were determined through the adjustment of the data with DMFIT software for Baranyi and Roberts and Modified Gompertz. No siginificant diference (p<0.10) was found for l,m and Rg for the yeast in pure culture neither for l and m for Lactobacillus fermentum, but for lactobacilli Rg was significantly different for pure a coculture. When the yeast reached the stationary phase the lactobacilli growth rate was increased and its stationary phase it was observed after ward. Baranyi and Roberts¿s model best described lag phase was expected. The quasichemical model even though it describes growth/decline it does not model the stationary plateau. The secondary model for the maximum population of the lactobacilli as function of fermentation temperature and inocullum level showed that this last variable was significant and its interaction with temperature (p< 0.10). For the pure culture temperature was significant on the viability index. But for mixed culture for a fixed fermentation time (21h) the lactobacilli level of contamination was highly significant. Best IV was observed for L=103UFC/mL and T=25oC. When the maximum ethanol production was modeled for T, L independent variables. The temperature was significant a maximum was observed at T=28oC, L=105UFC/mL. These two models are practical application for the alcoholic fermentation industry
Mestrado
Mestre em Ciência de Alimentos
38
Poisbeau, Pierrick. "Etude electrophysiologique des controles excitateurs et inhibiteurs au niveau des cellules du lobe intermediaire de l'hypophyse en culture primaire ou en coculture avec des neurones hypothalamiques." Université Louis Pasteur (Strasbourg) (1971-2008), 1996. http://www.theses.fr/1996STR13034.
Full textAbstract:
Ce travail de these presente les caracteristiques d'un modele de synaptogenese neuroendocrinien entre des neurones hypothalamiques et des cellules du lobe intermediaire (li) de l'hypophyse de rat. Lorsque ces deux types cellulaires sont places en co-culture, on observe la mise en place de synapses gabaergiques. Cette mise en place est abordee par des techniques d'immunocytochimie, de microscopie electronique et d'electrophysiologie. Le gaba libere par les terminaisons des neurones hypothalamiques active les recepteurs gaba-a associes a une permeabilite aux ions chlorures. Les courants synaptiques gaba-a sont modulables par les barbituriques, les benzodiazepines et les neurosteroides. Parallelement a l'etude de cette synapse, la mise en evidence et la caracterisation d'un recepteur non-nmda du glutamate sur les cellules du li a ete realisee
39
Hittinger, Marius [Verfasser], and Claus-Michael [Akademischer Betreuer] Lehr. "Autologous coculture of primary human alveolar epithelial cells and macrophages for evaluating the safety and efficacy of novel inhalation pharmaceuticals / Marius Hittinger ; Betreuer: Claus-Michael Lehr." Saarbrücken : Saarländische Universitäts- und Landesbibliothek, 2017. http://d-nb.info/1127040006/34.
Full text
40
Li, Na. "Expansion des cellules souches hématopoïétiques dans les systèmes de cocultures des cellules endothéliales et des cellules stromales." Nancy 1, 2005. http://www.theses.fr/2005NAN11320.
Full textAbstract:
L'expansion ex vivo des cellules souches hématopoïétiques (CSH) permet d'élargir les indications de greffe en augmentant le pool de CSH et conduit au développement de conditions de culture adaptées au transfert de gène. Une meilleure définition d'une part des conditions de cultures contribuant à l'expansion des CSH, d'autre part des mécanismes susceptibles d'induire cette prolifération, constitue les conditions nécessaires à l'amélioration de notre compréhension de la régulation de l'hématopoïèse. Dans ce travail, nous avons choisi différentes cellules stromales et endothéliales : cellules souches mésenchymateuse (CSM), human umbilical vascular endothelial cell (HUVEC), et une lignée stromale de souris ostéopétrotique (OP9) pour étudier leur capacité à maintenir et amplifier des cellules CD34+ humaines issues des cellules souches sanguines (CSS). Nous avons montré que les cocultures avec les CSM, les HUVEC et les OP9 permettent une amplification des CSS plus durable et plus importante que les cultures de cytokines. Les CSM diminuent également l'alloréactivité des CSH amplifiées, ce qui favorise la prise du greffon. Nous avons aussi mis en évidence que l'IL-6 secrété par les CSM et les HUVEC contribue partiellement à ces effets positifs pour l'expansion des CSS. D'autre part, les OP9 favorisent l'expansion des CSS grâce à leur déficit de la production de macrophages. Ces modèles de coculture semblent intéressants pour mieux comprendre les mécanismes régulateurs de l'hématopoïèse et également les facteurs inhibiteurs, par exemple dans la physiopathologie des syndromes myélodysplasiques.
41
Kletting, Stephanie [Verfasser], and Claus-Michael [Akademischer Betreuer] Lehr. "A new cell line-based coculture model of the human air-blood barrier to evaluate the interaction with aerosolized drug carriers / Stephanie Kletting ; Betreuer: Claus-Michael Lehr." Saarbrücken : Saarländische Universitäts- und Landesbibliothek, 2016. http://d-nb.info/1114735035/34.
Full text
42
Arnold, Vincent. "Etude des interactions entre les cellules tueuses naturelles et les cellules dendritiques dans le cadre de l'infection par le VIH-1." Paris 7, 2010. http://www.theses.fr/2010PA077125.
Full textAbstract:
Nous nous sommes intéressés au dialogue NK-DC dans le contexte d'infection VIH-1 et dans le cadre d'une vaccination anti-VIH-1. A l'aide d'un système de co-culture autologue NK-DC infectées in vitro par le VIH-1, notre objectif était de déterminer l'impact de l'infection des DC par le VIH-1 sur les fonctions effectrices des cellules NK, et le contrôle éventuel exercé par les cellules NK de l'infection des DC par le VIH-1. Nous avons observé suite à l'infection VIH-1 des DC des changements dans l'expression du récepteur NK CD85J. Nous avons également observé une forte capacité à contrôler la réplication du VIH-1 dans les DC exercée par les NK CD85J+. Nos résultats suggèrent que l'activité anti-VIH-1 de cette population NK semble être indépendante de son activité cytotoxique et de la sécrétion de facteurs solubles, mais est spécifiquement dépendante de l'interaction entre CD85J et de(s) ligand(s) distinct(s) des molécules HLA de classe I. Par la suite, nous avons pu démontrer que le récepteur CD85J interagit avec les protéines S100A8/A9. En réponse à l'infection VIH-1 des DC, nous avons observé des modulations de l'expression de ces deux protéines à la surface des DC, ce qui pourraient en conséquence influencer l'activité anti-VIH-1 des cellules NK CD85J+ et ouvre de nouvelles pistes d'investigation pour mieux comprendre l'immunopathogénèse de l'infection VIH-1 dans les phases précoces. Nous avons également étudier l'activation des cellules NK en réponse à des DC chargées en antigène vaccinaux par l'infection MVA recombinant VIH-1. L'infection des DC parle MVA induit une forte mortalité cellulaire des DC nous amenant à mettre en place un système de co-culture NK/DC permettant la phagocytose des DC apoptotiques. Cette stimulation des cellules NK en réponse à notre candidat vaccin (MVA recombinant VIH-1) dans ce sytème consiste en l'activation de NK spécifique capable de contrôler in vitro l'infection VIH-1 dans les DC. Ces résultats démontrent la nécessité d'évaluer la réponse des cellules NK dans le développement de stratégies vaccinales antiviralesThe crosstalk between DC and NK is a critical issue of NK activation resulting in both effector functions and survival or proliferation of NK cells, as well as the expansion of resting NK cells. In turn, once activated, NK cells may induce DC maturation (mDC) or DC killing. There is an increasing body of in vivo evidence indicating that NK-DC interactions during the early phase of innate immunity can impact the quality and magnitude of the subsequent adaptive immune response. NK and DC are thought to play critical roles in the first phases of HIV infection. In this study, we examined changes in the NK cell repertoire and functions occurring in response to early interaction with HIVinfected DC, using an autologous in vitro NK/DC coculture System. We show that NK cell interaction with HIV-1-infected autologous monocyte-derived DC (MDDC) modulates NK receptor expression. In particular, expression of the CD85J receptor on NK cells was strongly down-regulated upon coculture with HIV-1-infected MDDC. We demonstrate that CD85J+ NK cells exert potent control of HIV-1 replication in single-round and productively HIV-1-infected MDDC, whereas CD85J- NK cells induce a modest and transient decrease of HIV-1 replication. HIV-1 suppression in MDCC by CD85J+ NK cells required cell-to-cell contact and did not appear mediated by cytotoxicity or by soluble factors. CD85J+ NK cell inhibition of HIV-1 replication in MDDC is mainly mediated by CD85J interaction with an unknown ligand (distinct from HLA class I molecules) preferentially expressed on HIV-1-infected MDDC. We were able to show that the CD85J receptor interacts with two calcium-binding proteins, S100A8/A9. We demonstrated that HIV infection of MDDC induce modulations of the overall S100A8/A9 distribution on the surface of MDDC, and potentially influence through CD85J ligation mechanism the anti-HIV activity of human NK cells. There is a relative paucity of information regarding NK cell function in adaptive immunity from clinical vaccine trials, as few vaccine studies have attempted to evaluate the non-specific, yet potentially clinically relevant, NK response to immunization and to identify markers of this innate response which, indeed, might be useful as correlates of protective immunity. We have shown that the HIV-1 recombinant MVA vaccine strain being tested is indeed capable of inducing DC presentation of the HIV antigens, as well as specifying a particular NK response rendering the cells more potent against HIV infection in vitro
43
Thévenoux, Anne. "Altération du métabolisme énergétique des astrocytes induite par des lymphocytes T activés par le rétrovirus HTLV-1 et répercussions sur le devenir oligodendrocytaire dans un modèle de coculture." Lyon 1, 2004. http://www.theses.fr/2004LYO10238.
Full textAbstract:
Dans le cas des 2 maladies neuroinflammatoires démyélinisantes (TSP /HAM, une paraparésie induite par le virus HTLV-1 ou de la sclérose en plaques, SEP), on observe une destruction de la myéline et une perte axonale associées à l'infiltration du système nerveux central par des lymphocytes T activés et une astrogliose réactionnelle dans les régions cérébrales lésées. Notre hypothèse de travail est la suivante : les lymphocytes T infiltrés activent les astrocytes dont les perturbations fonctionnelles conduisent à la démyélinisation, en vertu de la dépendance fonctionnelle des oligodendrocytes sur les astrocytes. L'objectif du travail développé dans cette thèse a été d'étudier la fonction énergétique des astrocytes et les répercussions des perturbations astrocytaires sur la survie et le fonctionnement oligodendrocytaires. Dans un premier temps, nous avons étudié les effets de coculture transitoire (20 heures) des astrocytes avec les lymphocytes T activés par infection par HTLV-1. Les astrocytes activés par contact avec les lymphocytes T infectés par HTLV-1 voient leur métabolisme énergétique significativement altéré (augmentation de la sécrétion de lactate, de la consommation de glucose et diminution de la concentration d'ATP intracellulaire) La protéine virale Tax est au moins en partie responsable des effets observés. Les jonctions gap interastrocytaires ne semblent pas être significativement impliquées dans les effets de lymphocytes. Dans un deuxième temps, pour étudier les conséquences fonctionnelles des perturbations énergétiques astrocytaires, nous avons mis en place un paradigme de coculture transitoire oligodendrocytes/lymphocytes T activés. Nos résultats montrent que le lactate sécrété, en abondance par les astrocytes activés, permet de protéger spécifiquement les oligodendrocytes immatures exprimant GalCer versus les précurseurs oligodendrocytaire exprimant NG2. Cet effet passe par la capture specifique du lactate par les oligodendrocytes via les transporteurs membranaires des acides monocarboxyliques, probablement en améliorant l'équilibre énergétique dans ces cellules
44
Varella, Larissa. "Estudo químico e estratégias para modular o metabolismo secundário de actinobactérias endofíticas." Universidade de São Paulo, 2015. http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60138/tde-12052015-105200/.
Full textAbstract:
Os micro-organismos são profícuas fontes de produtos naturais bioativos. Diversos fármacos de importância clínica são de origem microbiana, sendo que a maioria dos antibióticos usados clinicamente é produzida por actinobactérias, principalmente do gênero Streptomyces. A resistência a múltiplas drogas por microorganismos patogênicos e também pelas células tumorais leva à necessidade por novos fármacos antibacterianos e antitumorais. Actinobactérias endofíticas têm demonstrado grande potencial para a busca de produtos naturais bioativos. O presente trabalho relata o estudo químico de duas linhagens de actinobactérias endofíticas, Streptomyces sp. RTd 22 e Streptomyces sp RTd 31, isoladas das raízes de Tithonia diversifolia. As frações ativas nos ensaios biológicos foram fracionadas para a identificação dos compostos bioativos, sendo eles os antibióticos macrolídeos concanamicinas A (S31-1) e B (S31-2), anidro-agliconas das concanamicinas A (S31-3) e B (S31-4), todos produzidos por Streptomyces sp RTd31, e o ionóforo poliéter grisorixina (S22-2), produzido por Streptomyces sp. RTd22. Foi realizado o monitoramento da produção desses compostos bioativos por UPLC-MS através do modo SIM. As concanamicinas A e B tiveram um máximo de produção com 96h, já a grisorixina obteve um máximo com 192h. Outros compostos identificados por desreplicação dos extratos butanólicos de ambas as actinobactérias foram os sideróforos norcardamina (S31-7) e desoxi-nocardamina (S31-8), já o sideróforo desferrioxamina B (S31-9) foi identificado apenas nos extratos butanólicos de Streptomyces sp RTd31. Experimentos de variação do meio de cultivo e co-cultura com bactérias patogênicas foram empregados a fim de estimular a biossíntese de novos compostos, porém nenhum novo metabólito foi identificado. O sequenciamento genético da actinobactéria Streptomyces sp. RTd22 permitiu verificar a presença de vários clusters biossintéticos nesse micro-organismo através da análise feita pelo antiSMASH. Foi possível identificar o cluster da himastatina (S22-4) e da coeliquelina (S22-5), sendo que ambos os compostos não foram biossintetizados nas condições de cultivo utilizadas. O cluster biossintético da grisorixina foi determinado e o experimento de recombinação homóloga para a deleção do gene análogo a flavina mono-oxigenase da nigericina nigC foi realizado. Dois mutantes foram obtidos e um deles foi cultivado para a análise do perfil metabólico por espectrometria de massas. Não houve a produção da grisorixina nem do seu possível precursor pelo mutante, mas outros metabólitos foram produzidosMicroorganisms are prolific sources of bioactive natural products. Several clinically important drugs have microbial origin, and most of the therapeutically used antibiotics are produced by actinobacteria, mainly from the genus Streptomyces. The multidrug resistance observed in pathogenic microorganisms and tumor cells lead to the need for new antibacterial and antitumor drugs . Endophytic actinobacteria have shown great potential in the search for bioactive natural products. This work describes the chemical study of two endophytic actinobacteria strains: Streptomyces sp. RTd 22 and Streptomyces sp RTD 31, isolated from Tithonia diversifolia roots. Active fractions in biological assays were further fractionated for identifying the bioactive compounds, which are: the macrolide antibiotics concanamycins (S31-1) and B (S31-2), anhydrous aglycones of concanamycins A (S31-3) and B (S31-4), all four produced by Streptomyces sp. RTd31, and the ionophore polyether grisorixin (S22-2), produced by Streptomyces sp. RTd22. The production of these bioactive compounds was monitored by UPLC-MS via the SIM mode. Concanamycins A and B had maximum production at 96 h, and grisorixin at 192 h. Other compounds identified by the dereplication of buthanolic extracts of both actinobacteria were the siderophore norcardamine (S31-7) and deoxy-nocardamine (S31-8), the siderophores desferrioxamine B (S31-9) was identified only in buthanolic extracts of Streptomyces sp RTd31. Experiments varying media and co-culture were tested to stimulate the biosynthesis of novel compounds, but nothing new was identified. By genome sequencing of Streptomyces sp RTd22 and antiSMASH analysis it was possible to verify the presence of several biosynthetic clusters in the genome of this strain. It was possible to identify the biosynthetic clusters of himastatin (S22-4) and its analogous compound coelichelin (S22-5); however, these compounds were not biosynthesized in the culture conditions used. The grisorixin biosynthetic cluster was determined, and homologous recombination was performed for deleting the analogue gene of nigericin flavin monooxygenase nigCI. Two mutants were obtained, and one of them was cultured for analyzing its metabolic profile by mass spectrometry. There was no production of grisorixin or its possible precursor by the mutant, but others compounds were produced.
45
Trescher, Karoline. "Cokulturtestsystem für die Untersuchung des Einflusses physikochemischer Eigenschaften von Copolymeren auf das Verhalten von Keratinozyten und Fibroblasten." Phd thesis, Universität Potsdam, 2012. http://opus.kobv.de/ubp/volltexte/2012/6291/.
Full textAbstract:
Chemische und physikalische Eigenschaften von Polymeren können verschiedene Zelltypen unterschiedlich, z. B. hinsichtlich Adhärenz oder Funktionalität, beeinflussen.
Die Elastizität eines Polymers beeinflusst vor allem, welche Zugkräfte eine Zelle gegenüber ihrem Substrat entwickeln kann. Das Zellverhalten wird dann über intrazelluläre Rückkopplungsmechanismen reguliert. Die Oberflächenladung und/oder Hydrophilie eines Polymers beeinflusst zunächst die Adsorption von Ionen, Proteinen und anderen Molekülen. Vor allem über die Zusammensetzung, Dichte und Konformation der adsorbierten Komponenten werden anschließend die Wechselwirkungen mit den Zellen vermittelt. Des Weiteren können verschiedene Zelltypen unterschiedliche membranassoziierte Proteine, Zucker und Lipide aufweisen, so dass Polymereigenschaften zellspezifische Effekte bewirken können.
Für biotechnologische Anwendungen und für den Einsatz in der regenerativen Medizin gewinnen Polymere, die spezifische Zellreaktionen regulieren können, immer weiter an Bedeutung. Die Isolierung und Kultur von primären Keratinozyten ist noch immer anspruchsvoll und die adäquate Heilung von Hautwunden stellt eine fortwährende medizinische Herausforderung dar. Ein Polymer, das eine bevorzugte Adhärenz von Keratinozyten bei gleichzeitig verminderter Anheftung dermaler Fibroblasten ermöglicht, würde erhebliche Vorteile für den Einsatz in der Keratinozyten-Zellkultur und als Wundauflage bieten.
Um den potentiell spezifischen Einfluss bestimmter Polymereigenschaften auf primäre humane Keratinozyten und dermale Fibroblasten zu untersuchen, wurde in der vorliegenden Arbeit ein Zellkultursystem für die Mono- und Cokultur beider Zelltypen entwickelt. Das Testsystem wurde als Screening konzipiert, um den Einfluss unterschiedlicher Polymereigenschaften in mehreren Abstufungen auf die Zellen zu untersuchen. Folgende Parameter wurden untersucht: 1. Vitalität und Dichte adhärenter und nicht-adhärierter Zellen, 2. Schädigung der Zellmembran, 3. selektive Adhärenz von Keratinozyten in Cokultur durch die spezifische immunzytochemische Färbung von Keratin14 und Vimentin. Für die Polymere mit variabler Elastizität wurden zusätzlich die Ablagerung extrazellulärer Matrixkomponenten und die Sekretion löslicher Faktoren durch die Zellen untersucht.
Als Modellpolymere für die Variation der Elastizität wurden vernetzte Poly(n-butylacrylate) (cPnBA) verwendet, da deren Elastizität durch den Anteil des Vernetzers eingestellt werden kann. Auf dem weniger elastischen cPnBA zeigte sich in der Cokultur ein doppelt so hohes Verhältnis von Keratinozyten zu Fibroblasten wie auf dem elastischeren cPnBA, so dass ein leichter zellselektiver Effekt angenommen werden kann. Acrylnitril-basierte Copolymere wurden als Modellpolymere für die Variation der Oberflächenladung und Hydrophilie verwendet, da die Eigenschaften durch Art und molaren Anteil des Comonomers eingestellt werden können. Durch Variation des molaren Anteils der Comonomere mit positiver bzw. negativer Ladung, Methacrylsäure-2-aminoethylester-hydrochhlorid (AEMA) und N-3-Aminopropyl-methacrylamid-hydro-chlorid (APMA) bzw. Natriumsalz der 2-Methyl-2-propen-1-sulfonsäure (NaMAS), wurde der Anteil der positiven bzw. negativen Ladung im Copolymer variiert. Durch die Erhöhung des molaren Anteils des hydrophilen Comonomers N-Vinylpyrrolidon (NVP) wurde die Hydrophilie des Copolymers gesteigert. Die Erhöhung des molaren Anteils an positiv geladenem Comonomer AEMA im Copolymer führte tendenziell zu einer höheren Keratinozytendichte, wobei die Fibroblastendichte unverändert blieb. Durch die Erhöhung des molaren Anteils des positiv geladenen Comonomers APMA ergaben sich keine deutlichen Unterschiede in Dichte, Vitalität oder Selektivität der Zellen. Durch die stufenweise Erhöhung des molaren Anteils des negativ geladenen Comonomers NaMAS konnte, wie im Falle von AEMA, eine Tendenz zur verbesserten Keratinozytenadhärenz beobachtet werden. Die Steigerung der Hydrophilie der Copolymere führte sowohl für Keratinozyten als auch für Fibroblasten zu einer reduzierten Adhärenz und Vitalität.
In der vorliegenden Doktorarbeit wurde ein Testverfahren etabliert, das die Untersuchung von primären humanen Keratinozyten und primären humanen Fibroblasten in Monokultur und Cokultur auf verschiedenen Polymeren ermöglicht. Die bisherigen Ergebnisse zeigen, dass sich durch die gezielte Modifizierung verschiedener Polymereigenschaften die Adhärenz und Vitalität beider Zelltypen beeinflussen lässt. Die Reduktion der Elastizität sowie die Erhöhung des molaren Anteils geladener Comonomere führten zu einer Zunahme der Keratinozytenadhärenz. Da die Fibroblasten unbeeinflusst blieben, zeigte sich für einige der untersuchten Polymere eine leichte Zellselektivität. Diese könnte durch die weitere Erhöhung der Steifigkeit oder des Anteils geladener Comonomere möglicherweise weiter gesteigert werden.Chemical and physical properties of polymers can influence various cell types, e.g. concerning adherence and functionality. For instance, the elasticity of a polymer can influence, which pulling force a cell can generate towards a substrate. According to the cell type, its behavior can be controlled by intracellular feedback mechanisms. The surface charge and/or hydrophilicity of a polymer initially influence the adsorption of ions, proteins and other molecules. In particular, the composition, density, and conformation of the adsorbed components mediate the cell-material interactions. Since different cell types present varying cell membrane associated proteins, sugars and lipids, it is assumed that polymer properties can induce cell specific effects. Polymers, which can regulate specific cell reactions, become more and more important for biotechnological uses and applications in the regenerative medicine. The isolation and culture of primary keratinocytes is still challenging and an adequate wound healing remains a clinical task. A polymer, which enables a preferential adherence of keratinocytes and induces a reduced adherence of dermal fibroblasts, would provide enormous advantages for keratinocyte culture systems as well as for wound dressings. To investigate the specific influence of certain polymer properties on primary human keratinocytes and fibroblasts, a cell culture system for mono- and coculture of both cell types was established. The test system was designed as a screening to investigate the influence of polymers with gradations of different properties on the cells. Thereby, the viability and density of adherent and not adhered cells, as well as the impairment of the cell membranes were analyzed in mono- and cocultures, and the selective adherence of keratinocytes in the coculture was evaluated using a specific immunocytochemical staining for keratin14 and vimentin. Furthermore, the deposition of extracellular matrix components and the secretion of soluble factors were analyzed for the elastic polymers. Since the elasticity of crosslinked poly(n-butylacrylate) (cPnBA) networks can be adjusted by the amount of the crosslinker, they were used as model polymers to investigate the influence of varying elasticity to the cells. On the less elastic cPnBA, the ratio of keratinocytes to fibroblasts was increased compared to the more elastic one. From these results, a slight cell selective effect can be assumed. Acrylonitrile-based copolymers were used as model polymers for the variation of surface charge and hydrophilicity, since their properties can be modified by the type and molar ratio of comonomers. By the variation of the molar ratio of positively charged comonomers (Methacrylic acid-2-aminoethylester hydrochloride (AEMA) and N-3-aminopropyl methacrylamide hydrochloride (APMA)), or a negatively charged comonomer (2-methyl-2-propene-1-sulfonic acid sodium salt (NaMAS)), the amount of positive or negative charges was modified. The hydrophilicity was increased by the molar ratio of the hydrophilic comonomer N-vinylpyrrolidone (NVP). With an increased molar ratio of the positively charged comonomer AEMA, a tendency towards a higher density of adherent keratinocytes could be shown, whereby, the density of adherent fibroblasts remained unaffected. With increasing molar ratios of the positively charged comonomer APMA, no differences between cell densities, viability or selectivity were detectable. Comparable to AEMA, a tendency towards improved keratinocyte adhesion could be shown with an increasing molar ratio of the negatively charged comonomer NaMAS. The increase of the hydrophilicity of the copolymers led to a reduced adherence and viability of the keratinocytes, as well as of the fibroblasts. In conclusion, a test system was established, which enables the evaluation of primary human keratinocytes and fibroblasts in contact with different polymers in monoculture, as well as in coculture. Furthermore, the present thesis shows that directed modifications of polymer properties influenced the adherence and viability of both cell types. The decrease of elasticity and the increase of the molar ratio of charged comonomers led to an increased keratinocyte adherence. Since the fibroblasts remained unaffected, slight cell selectivity was shown. By further increasing the stiffness or the amount of charged comonomers, further enhancement of this effect might be possible.
46
Denépoux, Stéphane. "Induction de mutations somatiques des gènes d'immunoglobuline dans les lymphocytes B humain in vitro." Lyon 1, 1998. http://www.theses.fr/1998LYO1T045.
Full text
47
Chebbo, Mohamad. "Rôle des plaquettes dans l’asthme sévère." Thesis, Aix-Marseille, 2022. http://www.theses.fr/2022AIXM0229.
Full textAbstract:
Les plaquettes sont des cellules anucléées qui jouent un rôle dans l'hémostase, la thrombose et l’immunité. Elles sont également impliquées dans la pathogenèse de certaines maladies inflammatoires telles que l'asthme. Le but de ce travail est de mieux comprendre le rôle des plaquettes dans l’asthme sévère en étudiant : 1) le transcriptome des plaquettes circulantes de patients asthmatiques sévères et en évaluant l’expression plaquettaire, chez ces patients, d’HLA-F, une molécule mobilisée à la surface de différents types cellulaires après leur activation 2) la présence des plaquettes dans les bronches, et en modélisant l’interaction entre les plaquettes et les cellules épithéliales bronchiques par une coculture in vitro. Dans la première partie, j’ai tout d’abord mis au point une technique de purification des plaquettes montrant la nécessité d’éliminer les leucocytes et les érythrocytes résiduels qui altèrent considérablement les résultats du transcriptome plaquettaire. Ensuite, j’ai comparé le transcriptome des plaquettes des patients asthmatiques sévères avec celui des plaquettes de sujets contrôles. J’ai ainsi pu montrer que le transcriptome plaquettaire des patients asthmatiques sévères est différent de celui des témoins. Parallèlement, j’ai montré qu’HLA-F était plus fortement exprimé à la surface des plaquettes des patients asthmatiques sévères à l’état de base et qu’HLA-F pouvait être mobilisé à leur surface suite à une activation. Dans la deuxième partie, j’ai pu montrer que les plaquettes sont présentes dans la sous-muqueuse bronchique et que les plaquettes activées induisent la sécrétion du facteur de croissance PDGF-BB par les cellules épithéliales bronchiquesPlatelets are anucleate cells that play a role in hemostasis, thrombosis and immunity. They are also involved in the pathogenesis of some inflammatory disorders such as asthma. The aim of this work is to better understand the role of platelets in severe asthma by studying: 1) the transcriptome of circulating platelets from severe asthma patients and by evaluating the platelet expression, in these patients, of HLA-F, a molecule mobilized to the surface of different cell types after their activation. 2) the presence of platelets in the bronchi, and by modeling the interaction between platelets and bronchial epithelial cells in an in vitro coculture system. In the first part, I developed a platelet purification technique showing the need to remove residual leukocytes and erythrocytes that significantly alter the platelet transcriptome results. Then, I compared the platelet transcriptome from severe asthmatic patients with that of platelets from control subjects. I was able to show that the platelet transcriptome of severe asthmatic patients is different from that of controls. Simultaneously, I showed that HLA-F was more strongly expressed on the surface of platelets from severe asthma patients at steady state and that HLA-F could be mobilized to their surface following activation. In the second part, I was able to show the presence of platelets in the bronchial submucosa. In addition, the co-culture between bronchial epithelial cells and platelets allowed to demonstrate a secretion of the growth factor PDGF-BB by bronchial epithelial cells, specifically induced by activated platelets
48
Ahuja, Varun [Verfasser]. "Investigation of the sensitisation potential of various textile dyes using a biphasic mice local lymph node assay (LLNA) and an in vitro loose-fit coculture-based sensitisation assay (LCSA) / Varun Ahuja." Berlin : Freie Universität Berlin, 2010. http://d-nb.info/1024541894/34.
Full text
49
Soma, Claire Emilienne. "Exploration dans le cadre de la reversion de la resistance multiple, d'un nouveau modele de coculture macrophages/cellules tumorales adapte a l'etude de la cytotoxicite des vecteurs colloidaux (doctorat : pharmacotechnie et biopharmacie)." Paris 11, 1999. http://www.theses.fr/1999PA114817.
Full text
50
Koskela, von Sydow Anita. "Regulation of fibroblast activity by keratinocytes, TGF-β and IL-1α : studies in two- and three dimensional in vitro models." Doctoral thesis, Örebro universitet, Institutionen för medicinska vetenskaper, 2016. http://urn.kb.se/resolve?urn=urn:nbn:se:oru:diva-48225.
Full textAbstract:
Dysregulated wound healing is commonly associated with excessive fibrosis. Connective tissue growth factor (CTGF/CCN2) is characteristically overexpressed in fibrotic diseases and stimulated by transforming growth factor-β (TGF-β) in dermal fibroblasts. Reepithelialisation and epidermal wound coverage counteract excessive scar formation. We have previously shown that interleukin-1α (IL-1α) derived from keratinocytes conteracts TGF-β-stimulated CTGF-expression. The aim of this thesis was to further explore the effects of keratinocytes and IL-1α on gene and protein expression, as well as pathways, in TGF-β stimulated fibroblasts. Fibroblasts were studied in vitro by conventional two dimensional cell culture models and in a three dimensional keratinocyte-fibroblast organotypic skin culture model. The results showed that IL-1 suppresses basal and TGF-β-induced CTGF mRNA and protein, involving a possible TAK1 mechanism. Keratinocytes regulate the expression of fibroblast genes important for the turnover of the extracellular matrix. Most of the genes analysed (11/13) were regulated by TGF-β and counter regulated by keratinocytes. The overall results support a view that keratinocytes regulate fibroblasts to act catabolically (anti-fibrotic) on the extracellular matrix. Transcriptional microarray and gene set enrichment analysis showed that antagonizing effects of IL-1α on TGF-β were much more prominent than the synergistic effects. The most confident of these pathways was the interferon signaling, which were inhibited by TGF-β and activated by IL-1α. A proteomics study confirmed that IL-1α preferentially conteracts TGF-β effects. Six new fibroblast proteins involved in synthesis/ regulation were identified, being regulated by TGF-β and antagonized by IL-1α. Pathway analysis confirmed counter-regulation of interferon signaling by the two cytokines. These findings have implications for understanding the role of fibroblasts for inflammatory responses and development of fibrosis in the skin.