Dissertations / Theses on the topic 'CMMC'

Thesis (Ph. D.)--Missouri University of Science and Technology, 2008.
Degree granted by Missouri University of Science and Technology, formerly known as the University of Missouri-Rolla. Vita. The entire thesis text is included in file. Title from title screen of thesis/dissertation PDF file (viewed April 29, 2008) Includes bibliographical references (p. 108-111).

p. 1 - 119
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Diante de diversos estudos que relacionam a qualidade do software à qualidade do processo que o gera e da crescente pressão do mercado de TIC (Tecnologia da Informação e Comunicação) pela criação de produtos qualidade com prazos e custos cada vez menores, as empresas produtoras de software passaram a investir na utilização de processos no desenvolvimento de softwares. Diversos padrões e modelos de qualidade foram criados e difundidos com foco na definição de processos, dentre eles os modelos de maturidade da capacidade CMM (Capability Maturity Model) e CMMI (Capability Maturity Model Integration), criados pelo SEI (Software Engineering Institute), que tiveram uma grande aceitação mundial. Em face desta realidade, a SUNAC/SDR (Superintendência de Negócio, Administração Tributária e Comércio Exterior/Salvador), regional do SERPRO (Serviço Federal de Processamento de Dados), conquistou em 2003 o nível dois do CMM e desde então trabalha no aperfeiçoamento do processo de desenvolvimento de software para atingir níveis superiores do modelo CMMI. A presente pesquisa explicita a percepção dos profissionais da SUNAC/SDR, que trabalharam nesta unidade no intervalo de ]2003 - 2008], sobre como a utilização dos modelos CMM / CMMI afeta a qualidade dos produtos gerados ao longo do ciclo de vida de desenvolvimento de software. Verificou-se que os profissionais perceberam a importância de utilizar um processo de desenvolvimento para a melhoria dos produtos gerados. Além disso, perceberam que houve melhoria nos produtos desenvolvidos por eles e também no produto final entregue ao cliente após a implantação do processo.
Salvador

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Recentemente a comunidade de software vem se deparando com um grupo de novas metodologias de desenvolvimento de software, classificadas como metodologias ágeis . Algumas das metodologias que fazem parte deste grupo são Extreme Programming (XP) e SCRUM, sendo XP a mais conhecida e utilizada. Estas metodologias possuem em comum um conjunto de valores para o desenvolvimento de software, priorizando: indivíduos e iterações sobre processos e ferramentas; software funcionando sobre documentação compreensiva; colaboração do cliente sobre negociação de contrato; resposta à mudança sobre seguir um plano. Em paralelo à disseminação das metodologias ágeis, os investimentos em qualidade de software vêm aumentando a cada ano. Pesquisas realizadas sobre o setor de software, indicam um crescimento na adoção de modelos de qualidade como ISO 9000 e Capability Maturity Model for Software (CMM). Modelos de qualidade e metodologias ágeis possuem fundamentos opostos, como é possível notar nos valores definidos por essas metodologias. Autores de metodologias ágeis freqüentemente criticam modelos como o CMM. Em contra partida, alguns trabalhos indicam que é possível utilizar as duas abordagens em um mesmo ambiente. Este trabalho apresenta o Guia XP-CMM2, que tem como objetivo apoiar as organizações no uso da metodologia ágil XP em um ambiente nível 2 do CMM. Com o uso do Guia XP-CMM2, as organizações deverão se beneficiar da agilidade proposta por XP e da maturidade adquirida com o nível 2 do modelo de qualidade de software mais respeitado do mundo, o CMM. Para a elaboração do Guia XP-CMM2, foi realizado inicialmente um diagnóstico da satisfação de XP ao nível 2 do CMM e, depois, para cada problema identificado, uma solução foi proposta. Finalmente o Guia XP-CMM2 foi aplicado em dois ambientes distintos visando avaliação dos resultados obtidos

Tesis para optar al grado de Magíster en Finanzas
Autor no autoriza el acceso a texto completo de su documento
El presente informe analiza empresas CMPC a nivel de grupo económico, buscando determinar su valor a través de sus fundamentales, el valor de mercado se obtendrá mediante técnicas de valorización por flujos libres descontados y por múltiplos En las valoración de CMPC existe un factor esencial a considerar que es la alta correlación del precio de la empresa con el precio de la celulosa a nivel internacional y también una alta correlación con el IPSA, ya que los resultados de la empresa están muy ligados a los ciclos económicos. Dada esta condición estructural del negocio en torno a la ciclicidad y volatilidad de su principal segmento de negocio ponderaremos nuestra valorización 50% por flujo y 50% por múltiplo y seremos conservadores en nuestras proyecciones. La primera sección de este informe entrega un perfil general de la empresa destacando su estrategia continua de crecimiento, diversificación, operando en toda la cadena productiva del papel, un desarrollo agresivo a nivel internacional que pueden posicionar a CMPC como una de las tres empresas productoras de celulosa más grandes del mundo. En esta primera sección se destaca igualmente la política financiera altamente conservadora de la empresa, que le ha permitido sostener sus ventajas competitivas y aprovechar oportunidades de inversión. En la sección dos se revisa en forma detallada la valoración de la empresa, tomando para tal efecto seis años histórico de información, estos cinco años están influenciados con la crisis económica de 2008, lo que agrega mayor conservadurismo a las proyecciones. Dichas proyecciones son a 7 años 2014 a 2020 que se considera un ciclo adecuado para tener una perspectiva del crecimiento de largo plazo de la compañía, los primeros años de este periodo los analistas proyectan una situación de sobre-oferta de celulosa, que presionará los precios a la baja, solo compensado con la creciente demanda de China y una probable recuperación europea. Es importante destacar igualmente que al principio del periodo de la proyección, se encuentra uno de los hitos más importantes de la historia de la compañía, como lo es la puesta en marcha de la planta de celulosa Guaiba en Brasil, inversión que requerirá una inversión de 2.100 millones de dólares que generara presión sobre el precio de la acción de CMPC, pero a su vez contempla enormes posibilidades de desarrollo y mayor eficiencia en el mediano plazo. Por su parte el segundo segmento más importante de la compañía el papel Tissue seguirá su desarrollo creciente en Latinoamérica posicionándose en dos mercado de vital importancia como lo son Brasil y México y posibilitando de esta manera crecer por sobre la expansión natural de las economías latinoamericanas Se finaliza el presente trabajo con una serie de anexos que pueden ser interesantes de incorporar, para comprender en su totalidad el estudio y contar con cifras detalladas de las bases de proyección y análisis

Tesis para optar al grado de Magíster en Finanzas
Autor no envía autorización para el acceso a texto completo de su tesis en el Portal de Tesis Electrónicas de la U. de Chile.
El presente trabajo tiene como finalidad determinar el precio objetivo para la acción de Empresas CMPC S.A. considerando la información financiera al 30 de junio de.2013, mediante el método de múltiplos. El trabajo contempla la descripción de la empresa y de la industria en la que participa, el análisis del financiamiento, de la estructura de capital, análisis operacional, la proyección del estado de resultados y flujo de caja libre de la empresa. Para la valoración por múltiplos de empresas comparables se efectuó un análisis del sector al cual pertenece la empresa, se definieron y analizaron sus empresas comparables, las cuales se eligieron de mercados extranjeros al no encontrar información financiera de calidad de empresas comparables nacionales. Producto de la valoración por múltiplos el rango de precios determinado fluctúa entre UF 0,0170 y UF 0,072 por acción.

Tesis para optar al grado de Magíster en Finanzas
Autor no autoriza el acceso a texto completo de su documento
El presente trabajo tiene como finalidad determinar el precio de la acción de EMPRESAS CMPC S.A. a través del método de flujos de caja descontado considerando información al 30.06.2014. Este trabajo contempla la descripción de la empresa y de la industria en la que participa la empresa, análisis del financiamiento y de la estructura de capital, análisis operacional, la proyección del estado de resultados y flujo de caja libre de la empresa. En la aplicación del método de flujos de caja descontados, se determinó a través del modelo de mercado el Beta de Empresas CMPC S.A., considerando el índice accionario de la Bolsa de Comercio de Santiago llamado Índice General de Precios de las Acciones (IGPA), para luego proceder a calcular la tasa de costo de capital de los activos de la empresa (WACC), con la cual se descontaron los flujos de caja libre proyectados. Producto de la valoración por flujos descontados se determinó un precio de la acción de $1.357, lo que significa un upside de 12,1% respecto del valor de la acción en la Bolsa de Santiago al cierre de junio del año 2014.

TESIS PARA OPTAR AL GRADO DE MAGÍSTER EN FINANZAS
En este documento se presenta la valoración de Empresas CMPC S.A. mediante el método de Flujos de Caja Descontados (FCD), entidad la cual presenta 3 segmentos de negocios entre los que se encuentra Celulosa (incluye forestal), Tissue y Papel, siendo el primero de estos segmentos el que compone un 45% de los ingresos, seguidos por Tissue quienes entregan 37%. La principal competencia de CMPC es Empresas COPEC la cual al igual que CMPC son entidades Chilenas. La compañía no espera realizar inversiones de montos muy altos en los años futuros, principalmente por que recién el segundo semestre del año 2015 culmino un proceso de fuertes inversiones al terminar la puesta en marcha de una planta en Brasil (Proyecto Guaiba II). Empresas CMPC S.A. se financia principalmente con recursos propios, ya que del total de Pasivos y Patrimonio que tiene la entidad 54,53% corresponde a Patrimonio del cual un 87% corresponde a Ganancias (pérdidas) acumuladas, respecto al resto de financiamiento este se compone principalmente de deuda que devenga interés, las cuales componen un 63% del total de los pasivos, encontrándose entre sus principales componentes los Bonos que son un 71% de la deuda que devenga intereses. Cabe señalar que de los Bonos mencionados CMPC posee series emitidas en el extranjero y cuenta con una clasificación crediticia de Grado de Inversión. La valorización realizada para CMPC según flujos de caja libre se estimó para 5 años proyectados a partir de datos históricos desde el 2012 a septiembre de 2016, todo expresado en UF. Los ingresos y gastos operacionales se estimaron para las distintas líneas de negocio, considerando que estas mantienen la capacidad instalada actual, considerado para el crecimiento el aumento de los ingresos y producción de los periodos anteriores y para los Costos y GAV en general una proporción sobre los ingresos, en base a los movimientos regulares de periodos anteriores, otros ingresos y gastos por función en general se estimó constante. El cálculo del WACC considero una estructura de capital objetivo, en base a la media de las estructura de capital que ha tenido la compañía en periodos anteriores, se calculó el Beta de la compañía considerando los precios de la acción de forma semanal de los últimos dos años, es decir de Octubre de 2014 a Septiembre de 2016, con el Beta apalancado se calculó el Beta desapalancado, el cual se volvió a apalancar con las condiciones proyectadas a futuro, de este manera se ha obtenido un costo patrimonial y un costo de capital promedio ponderado (WACC) entregando un valor de 8,10% para descontar los Flujos. La tasa libre de riesgo utilizada en los cálculos es 1,63% correspondiente a la tasa de Bonos del Banco Central en UF a 30 años al 29 de Septiembre de 2016, mientras que el premio por riesgo de mercado es 8,17% correspondiente al premio por riesgo para el mercado chileno provisto por Damodaran a Julio de 2016, junto a esto la tasa de la deuda de 4,79% corresponde a la última tasa de mercado para el bono de mayor importancia que tiene CMPC. El valor económico de la empresa se obtuvo calculando el valor presente de los Flujos de Caja Libre descontados a la tasa WACC, considerando también el valor terminal el cual se considera sin crecimiento para periodos fututos, a esto se sumaron los activos prescindibles y el exceso de capital de trabajo para llegar a un monto de valor económico de la empresa de 213.181.457 UF lo que restado la deuda financiera nos entrega un valor de patrimonio económico de 107.863.291 UF, representado un valor estimado de la acción de $ 1.131 (peso chileno), lo que está por debajo del valor de mercado al 30 de septiembre de 2016 el cual es $ 1.309 (peso chileno).

Polpa celulósica, para obtenção de carboximetilcelulose (CMC), foi obtida a partir do bagaço de cana-de-açúcar através de separação do material em fração fibrosa e medula, sua pré-hidrólise, posterior polpação soda/antraquinona e etanol/água. A polpa soda/antraquinona da fração fibra foi submetida ao processo de branqueamento para obter um material rico em celulose de alta pureza. A polpa branqueada da fração fibra foi utilizada na preparação da CMC na forma de sal de sódio e lítio. Para reações de enxertia foram utilizadas amostras de CMC preparadas no laboratório e comerciais usando isocianatos comerciais e sintetizados. Tanto a CMC como a CMC enxertada foram caracterizadas através de análises térmicas (DSC, TGA), espectroscopia no infravermelho (IV), ressonância magnética nuclear de carbono 13 (RMN 13C) e por microscopia eletrônica de varredura (MEV) e Espectroscopia Dispersiva de Raios-X (EDX). A análise detalhada dos espectros de IV e RMN 13C indica a formação de ligações uretanas em diferentes números de onda e deslocamentos químicos dependendo da CMC e isocianato utilizado. Também observa-se uma pequena mudança na linha de base da curva de DSC indicando uma possível transição vítrea da CMC que diminui após a enxertia da CMC com isocianato. Micrografias de MEV mostraram mudanças estruturais com as reações e a análise através de (EDX) um aumento no teor de carbono e diminuição no de oxigênio com as graftizações. Medidas de condutividade demonstraram que a NaCMC graftizada com isocianato de poli(óxido de propileno) apresenta condutividade de 10-5 S/cm a 100oC, comparável com outros eletrólitos sólidos poliméricos
The cellulosic pulp obtained from sugar cane bagasse was used to synthesize carboxymethylcellulose (CMC), the substrate for the grafting reactions with mono and di-isocyanathes. The sugar cane bagasse was separated into fiber and non-fiber fractions that then were submitted to the pre-hydrolyses and pulping reactions (sodium hydroxide/anthraquinone and ethanol/water). After that the sodium hydroxide/anthraquinone pulp of the fiber fraction was bleached to obtain a high purity cellulosic material. This cellulose was used to obtain the sodium and lithium salts of CMC (NaCMC and LiCMC respectively). Then these samples were used for grafting reactions with commercial octadecylisocyanate and hexamethylene-diisocyanate and synthesized monoisocyanate of poly(propylene oxide). All the samples were characterized through thermal analyses (DSC/TGA), infra-red spectroscopy (IR), solid state 13C nuclear magnetic resonance (13C-NMR), scanning electron microscopy (SEM) and X-ray diffraction (XRD). The thermal analysis indicate a possible glass transition of CMC at about 65oC that decreases for to about 29oC after the grafting reaction with isocyanate. The micrographs show structural changes occurred during the several reactions confirmed by thermal analysis. The detailed analysis of IR and NMR 13C spectra of grafted samples indicated the formation of urethane bonds. Conductivity measurements of NaCMC grafted with the poly(propylene oxide) isocyanate gave the value of 10-5 S/cm at 100oC that is comparable with other polymeric solid electrolytes.

Tesis para optar al grado de Magíster en Finanzas
Por medio del presente informe se realizará una estimación del valor de Empresas CMPC S.A. al 30 de septiembre del año 2013 mediante la utilización del método de Flujos de Caja Descontados. CMPC es una de las empresas líderes de Latinoamérica en la producción y comercialización de productos forestales, celulosa, papeles, productos tissue y productos de papel. Con el objetivo de efectuar la estimación del valor de Empresas CMPC, se utilizaron los datos de los Estados Financieros presentados desde diciembre del año 2009 hasta septiembre del año 2013. Se analizó e investigó respecto a la descripción de la empresa, la industria en la cual opera y al financiamiento que presenta. Por otra parte, se determinó la estructura de capital y el costo patrimonial de Empresas CMPC. Además, se consideró información relacionada a proyecciones de distintos analistas y políticas de inversión de la compañía para los próximos años, lo que permitió proyectar los Estados de Resultados desde diciembre 2013 a diciembre 2018. La metodología utilizada para valoración económica del precio de la acción consistió en aplicar Flujos de Caja Descontados para los periodos diciembre del año 2013 a diciembre del año 2018, a una tasa de costo de capital (WACC) estimada de 9.09%, proyectándose, además, un valor terminal de la empresa al año 2018, a través del método de “Valor de Perpetuidad sin Crecimiento”, que corresponde al valor de la compañía a partir del año siguiente de proyección (2019) sin considerar las oportunidades de crecimiento de la compañía1. Lo mencionado anteriormente permitió determinar un precio estimado para la acción a septiembre del año 2013 de Empresas CMPC de $652,26. Dicho precio es significativamente menor al valor al cierre de las transacciones de la Bolsa de Comercio de Santiago ($1.572,10). Cabe señalar que era esperable tal diferencia dado los supuestos establecidos para la realización de esta tesis. Producto de lo anterior, se realizó un análisis de sensibilidad con el objetivo de apreciar cómo se afecta la valoración económica del precio de la acción de Empresas CMPC, cuando el valor terminal es calculado con el método de “Valor de Perpetuidad con Crecimiento”.

Systemic mastocytosis refers to a heterogeneous group of clinical disorders characterized by excessive mast cell accumulation in one or multiple organs. Mastocytosis is now considered as a separate disease category in the 2016 WHO classification of myeloid neoplasm and acute leukemia. It is no longer considered as a subgroup of meyloproliferate neoplasms. The clinical presentation of mastocytosis is heterogeneous ranging from skin-limited disease (cutaneous mastocytosis) to a more aggressive form with extra cutaneous presentation (systemic mastocytosis) with or without skin involvement. We are presenting a case of systemic mastocytosis that aroused in a patient who carried diagnosis of CMML for almost 2 years. The worsening B symptoms along with worsening splenomegaly were the driving factor for further investigations including Bone Marrow biopsy which revealed the diagnosis. A 74 year old Caucasian male with past oncology history of Chronic myelomoncytic leukemia diagnosed after persistant monocytosis on complete blood count . Patient presented with gradual onset of low grade fever , weight loss and night sweating , CT abdomen showed hepatosplenomegaly. core biopsy of the liver showed portal and lobular infiltrate consistent with involvement by mastocytes and extra medullary hematopoiesis. The infiltrate was positive for CD117, CD33, CD68, myeloperoxidase and CD163. Patient had bone marrow biopsy which showed increased CD117 positive cells consistent with involvement by systemic mastocytosis. The core biopsy showed multifocal nodules of spindle cells with fibrosis which was morphologically consistent with abnormal mast cells. Immunohistochemistry for CD117 was strongly positive in the spindle cell nodules and scattered polygonal cell nodules. KIT D816V mutation was detected. Patient met criteria for diagnosis of systemic mastocytosis with presence of previous diagnosis of CMML and classified as Systemic mastocytosis with an associated hematologic neoplasm (SM-AHN). Due to patient multiple comorbiditeis , he was not a candidate for Allo HCT. In an attempt to control his disease , patient was started on dose reduced Dacogen, but his functional status continued to delined and eventually dacogen was discontinued and patient was placed on best supportive car Conclusion Systemic mastocytosis is a rare entity with heterogeneous clinical presentation, highly variable disease course and consequently survival rates.Though recent advances in understanding genetic and molecular basis of disease, bone marrow transplantation remains the only treatment with possible curative potential in patients with advanced form of mastocytosis though carrying substantial mortality risk .Further understanding of Kit mutation might be able to offer a highly effective medication with durable response in a fashion similar to the success story of gleevac with CML treatment .

TESIS PARA OPTAR AL GRADO DE MAGÍSTER EN FINANZAS
En este informe se realiza una valoración de Empresas CMPC S.A. al 30 de junio del año 2016, mediante el método de flujo de caja descontado (FCD). CMPC clasifica sus áreas de negocios en los segmentos forestal-celulosa, papeles y tissue, siendo el primero de estos el que concentra más del 45% de los ingresos de la compañía, esto a partir de la puesta en marcha en mayo del año 2015 de la segunda línea de producción de la planta Guaiba (Brasil) que permitió incrementar en un 46% la capacidad de producción de celulosa de la empresa. A partir de los datos históricos de CMPC para los años 2012-2016 obtenido de sus estados financieros, se realizó una proyección de 5 años a partir del 2016 previo estudio de la descripción, industria y financiamiento con el que la empresa opera. Posteriormente, se estimó una tasa de costo de capital (WACC) del 7,66% considerando la estructura de capital objetivo vigente a junio del año 2016 y un costo de la deuda correspondiente al último YTM (tasa de mercado) de un bono a largo plazo registrado a junio del año 2016. Como este bono corresponde a una colocación nacional (BCMPC-G), es que en la utilización de datos históricos para los estados financieros se emplea la UF de cada año, para posteriormente proyectar dichos estados financieros en aquella unidad. Los ingresos fueron estimados por segmento operativo, en base a proyecciones de mercado e información histórica y anuncios de la compañía. En tanto, los costos (operacionales y no operacionales) se estimaron como una proporción de los ingresos ordinarios, los que fueron analizados en forma semestral de acuerdo a la información obtenida de los periodos 2012 al 2016. De esta forma, para el cálculo del precio de la acción se determinó el valor de la empresa con un valor terminal sin crecimiento, sumando la caja y el exceso o déficit de CTON. Finalmente, se restó la deuda financiera obteniendo un precio de la acción para Empresas CMPC S.A. de $860,91.

TESIS PARA OPTAR AL GRADO DE MAGÍSTER EN FINANZAS
Cornejo Vargas, Miguel [Parte I mediante método de múltiplos], Pérez Angellotti, Roberto [Parte II mediante método de flujo de caja descontado]
Este informe presenta la valoración por Múltiplos de Empresas CMPC S.A., firma que se encuentra enfocada en los negocios: celulosa-forestal, papel y tissue. Este último, junto con la celulosa, conforma el 70% de los ingresos de la empresa. Entre las empresas competencia de CMPC, se encuentran Suzano papel e Celulose S.A, Fibria Celulose S.A, Empresas Copec S.A, Svenska Cellulosa AB (SCA), entre otras. La compañía actualmente se encuentra en un proceso de fuertes inversiones, financiadas mayormente con deuda financiera, bancaria (22%) y bonos (76%). Posee una serie de bonos emitidos en el extranjero, con una clasificación crediticia de investment grade. Se valoró CMPC según Valoración los Múltiplos; EV/EBIT, EV/EBITDA, EV/Sales, Precio/Ventas, Precio/Ganancias y Precio/Valor Libro con información obtenida de los reportes financieros y la terminal SEBRA de la Bolsa de Comercio de Santiago a septiembre de 2017. Para obtener estimaciones de precio a partir de las ratios de la industria (promedios de comparables de CMPC). Con esto, se obtuvo un rango de precio de UF 0,013 a UF 0,115 por P/U y EV/EBITDA, respectivamente.
Este informe presenta la valoración por Flujo de Caja Descontados de Empresas CMPC, firma que se encuentra enfocada en los negocios: celulosa-forestal, papel y tissue. Este último, junto con la celulosa, conforman el 70% de los ingresos de la empresa. Entre las empresas competencia de CMPC, se encuentran Suzano papel e Celulose S.A, Fibria Celulose S.A, Empresas Copec S.A, Svenska Cellulosa AB (SCA), entre otras. La compañía actualmente se encuentra en un proceso de fuertes inversiones, financiadas mayormente con deuda financiera, bancaria (22%) y bonos (76%). Posee una serie de bonos emitidos en el extranjero, con una clasificación crediticia de investment grade. Se valoró CMPC según los flujos de caja libre a 5 años proyectados a partir de los datos históricos desde el 2013 a septiembre 2017, expresados en UF. Los ingresos se estimaron utilizando el promedio de las tasas de crecimientos que se han registrado desde año 2013, a septiembre de año 2017 para cada segmento, siendo el resultado obtenido multiplicado por la significancia relativa del total de ingresos por segmentos observados a septiembre de año 2017. Mientras que los Costos y GAV se estimaron como una proporción sobre los ingresos ordinarios consolidados, respecto a datos anuales de los últimos 5 años. Otras partidas operacionales como la Depreciación, y Otros Ingresos (Egresos) y las partidas no operacionales fueron proyectadas asumiendo un supuesto que las considera como constante, y su cálculo se obtiene derivado de la división de los meses contenidos en la cuenta (9) del resultado obtenido para esta cuenta al 30 de septiembre del año 2017, para luego multiplicarlas por los meses contenidos en el años (12).

La tesis “APLICACIÓN DE CMMI DEV NIVEL 3 A LA FÁBRICA DE SOFTWARE DE LA EMPRESA CONTASIS S.A.C”, aplica el modelo de mejora continua CMMI (Capability Madurity Model Integration for Development) en los procesos de la Fábrica de Software, que conllevó dos etapas, la primera efectuó el diagnóstico inicial; denominada evaluación Nro 1, valoro la adecuación a los niveles de madurez 2 y 3 de la Fábrica de Software previa a la implementación CMMI, la metodología de evaluación fue SCAMPI (Standard CMMI Appraisal Method for Process Improvement), se obtuvo que el 66% de prácticas no estaban implementadas mientras que el 34% si eran implementadas. La segunda etapa, implementa y mejora las oportunidades detectadas, se tenían 28% de prácticas sin implementar, éstas se gestionaron tomando en cuenta el diagnóstico inicial; Evaluación Nro 1 y la pre-evaluación de certificación; Evaluación Nro 2. La tesista, en calidad de analista de procesos implementó las oportunidades de mejoras detectadas en las evaluaciones Nro 1 y Nro 2. Los resultados indicaron cambios positivos que influenciaron en los proyectos y operaciones de Fábrica de Software, obteniendo el 100% de procesos que se adecuaron a CMMI, debido a la mejora de estimación en los tiempos de análisis de requerimientos, gestión de cambios y corrección de errores, lo que se demuestra mediante regresiones lineales. También se demuestra y concluye que la aplicación de las buenas prácticas de CMMI y adecuación de los procesos implementados por la tesista ha permitido a la Fábrica de Software obtener la certificación CMMI DEV Nivel 3.

Pagrindinis darbo tikslas ištirti ir aprašyti CMMI antro brandos lygio procesų sričių susiejimą (angl. mapping) su judriųjų metodų praktikomis ir juo remiantis pasiūlyti rekomendacijas, leidžiančias pasiekti CMMI proceso sričių tikslus. Apžvelgus literatūros šaltinius nagrinėjančius CMMI ir judriųjų metodų susiejimo problematiką, identifikuoti egzistuojantys CMMI proceso sričių ir judriųjų metodų susiejimai. Nustatyti susiejimai nėra pilni, dažnai trūksta konkretumo ir detalumo. Todėl buvo suformuoti ir aprašyti CMMI komponentų ir judriųjų metodų veiklų bei artefaktų susiejimo principai, leidžiantys įvertinti, kaip plačiai ir kokiomis judriųjų metodų veiklomis yra padengiamos proceso srities praktikos. Jais remiantis nustatomi ir CMMI tipinių darbo produktų bei judriųjų metodų sukuriamų artefaktų atitikmenys. Tyrimui buvo pasirinkti du judrieji metodai (Scrum ir XP) ir CMMI antrojo brandos lygio proceso sritys. Remiantis aprašytąja metodika, autorius atliko CMMI proceso sričių praktikų susiejimą su pasirinktųjų judriųjų metodų praktikomis. Gauti rezultatai leido įvertinti kiekvienos proceso srities susiejimą ir pateikti rekomendacijas, kaip pasiekti nepilnai arba silpnai padengtų proceso sričių tikslus įtraukiant papildomas veiklas, naudojant papildomus įrankius arba kaip veiklos vykdymo įrodymus sukuriant pagalbinius dokumentus ir ataskaitas.
The main goal of this study was to perform a detail mapping of CMMI maturity level 2 practices with agile methods and to write recommendations for achieving process area goals. The review of literature revealed mapping problems between CMMI model components and agile methods. The existing mappings between CMMI and agile methods are incomplete and often do not give enough details. Therefore new mapping principles were described and written by author. They allow to perform mapping between CMMI components and agile methods’ practices and artifacts and to evaluate how largely and which process area practices are covered by agile activities. Two agile methods were selected for research (Scrum and XP). And process areas of the CMMI maturity level 2 were chosen for applying described principles. Detail CMMI practices and agile method activities mapping was done using described method, which revealed least satisfied process area practices. According to the mapping results, the recommendations how to achieve CMMI level 2 were written. They state which activities could be included or what tools could be used in order to achieve process improvement in accordance with CMMI.

This graduation work is about co-ordinal measuring machines (CMM) with optical reader system and optical CMM. In accordance with submission and in terms of survival well known contactless systems the direction is to make methodology objective classification of rating with granting summary of these systems. The first part contains optical principles for visual scanner in CMM and optical CMM. Ist is described there principle of contactless obtaining steric digital version of measured object with using laser and optical facilities. The second part contains brief makes survey of these contactless systems and their component which are used for co-ordinal measuring. The survey is devided into optical readers, which are put on CMM brake or on mobile measuring brake and on optical CMM, which localize position measuring/sensing head in the space or they read measured object from specific distance – fotogrammetric. Characteristic of offered systems and chart with technical data are mentioned with each maker. The third and fourth part is about submission methodology for objective choice suitable sort of reader, optical CMM in target of characteristic reader system quality. And from this methodology is given the choice of suitable exponent stationary measuring machine with contact and contactless way of reading and their comparison.

Submitted by João Arthur Martins (joao.arthur@ufpe.br) on 2015-03-11T19:07:33Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertação Luiz Sergio da Silva.pdf: 5299792 bytes, checksum: 45207ab17ac5aff4875ec315ce7e3153 (MD5)
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CAPES
Diversas iniciativas têm surgido na busca da melhoria de processos de software (MPS) nos últimos anos. Parte dessas iniciativas é orientada por normas, modelos e padrões de qualidade, tendo como objetivo estabelecer melhores práticas para orientar a definição de processos e apoiar a avaliação da maturidade e capacidade das organizações no desenvolvimento de seus produtos. Estas normas e modelos definem melhores práticas e descrevem um caminho para a evolução e melhoria de processos, partindo desde a sua concepção, até chegarem a processos controlados e maduros em uma organização de software. Apesar do surgimento de diversas iniciativas de melhoria de processos de software, quando o assunto se refere ao processo de contratação de soluções de tecnologia da informação (TI) pela Administração Pública Federal (APF), a sua aplicação no contexto das organizações públicas brasileiras encontra diversos obstáculos. Dentre estes obstáculos, destacam-se a complexidade dos processos decorrentes da legislação brasileira e a contínua fiscalização dos órgãos de controle do governo federal. Para superar esses obstáculos, o Tribunal de Contas da União (TCU), recomendou a elaboração da Instrução Normativa SLTI/MP 04/2010, contendo diretrizes para o processo de contratação de soluções de TI. Além disso, foram definidos processos, atividades, artefatos e papéis obrigatórios, compondo, assim, o modelo de contratação de soluções de TI (MCTI) da Administração Pública Federal (APF). Este trabalho tem como objetivo geral identificar a maturidade e a aderência do modelo MCTI em relação aos modelos CMMI-ACQ, CMMI-DEV e CMMI-SVC. Para alcançar esse objetivo, foi realizado um mapeamento entre os modelos, de acordo com metodologia de pesquisa do trabalho. Como resultados do trabalho, têm-se: (i) um método de mapeamento entre os modelos; (ii) a identificação da maturidade e aderência do modelo MCTI em relação aos modelos CMMI-ACQ, CMMI-DEV e CMMI-SVC; (iii) a análise crítica dos resultados; e (iv) a identificação de insights baseados nos resultados do mapeamento entre os modelos.

Increasing evidences support the oxidative modification of LDL as playing a potential role in atherosclerosis. In the present study, floranol (3,5,7,2-tetrahyroxy-6-methoxy-8-prenylflavanone), a flavonoid isolated from the roots of Dioclea grandiflora, successfully inhibited the oxidation of LDL in the presence of copper ions as measured by conjugated diene formation and thiobarbituric acid-reacting substances (TBARS). As the antioxidant mechanism may involve metal coordination, we have undertaken a detailed study of floranol interactions with Cu(II) and Fe(III) by combination of UVvisible (UVVis) and mass spectrometry and cyclic voltammetry measurements. The acidity constants of the ligand, as well as the stability constants of the metal complexes, were calculated. The pKa values of 6.58, 11.97 and 13.87 were determined and the following acidity order is proposed 7-OH > 5-OH > 2-OH. The best fit between experimental and calculated spectra was obtained assuming the formation of two Cu(II) complexes: [CuL] log = 19.34 ± 0.05 and [CuL2]2 log = 26.4 ± 0.10 and three Fe(III) complexes: [FeL3]3 log = 44.72 ± 0.09, [FeL2] log = 35.32 ± 0.08 and [FeL]+ log = 19.51 ± 0.04. In addition, copper and iron reduction is less favorable in the presence of floranol. These results indicate that floranol can efficiently bind Cu(II) and Fe(III) ions thus preventing their effect on LDL oxidation. Another antioxidant mechanism of flavonoids is its ability to scavenge free radicals. We evaluated the antioxidant effect of floranol on activated murine macrophages in apolipoprotein E (ApoE-/-) and inducible nitric synthase (iNOS-/-) knockout mice comparing to the wild-type strain C57Bl/6 by chemiluminescence. It was demonstrated the attenuating effect of different concentrations of floranol on zymosan elicited murine macrophage oxidative burst from three experimental strains of mice. Altogether the data obtained in this study showed that floranol act as an antioxidant on capacity to chelate iron and copper ions and through a direct interaction with free radicals.
Há crescentes evidências que mostram que a modificação da LDL tem um papel potencial na aterogênese. No presente estudo, o floranol (3,5,7,2-tetrahiroxi-6-methoxi-8-prenilflavanona), um flavonóide isolado das raízes de Dioclea grandiflora, inibiu, com sucesso, a oxidação da LDL na presença de íons cobre avaliada pela formação de dieno conjugado e pelas subtâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico. Como o mecanismo antioxidante pode envolver a coordenação com metais, tentamos compreender em detalhes as interações do floranol com Cu(II) e Fe(III) pela combinção de espectrofotometria UV-Visível (UV-Vis), espectrometria de massa, voltametria cíclica. As constantes de acidez do ligante, bem como, as constantes de estabilidade dos complexos metálicos foram calculadas. Os valores de pKa foram determinados 6.58, 11.97 e 13.87 e a ordem das constantes de acidez proposta foi 7-OH > 5-OH > 2-OH. O melhor ajuste entre os espectros experimentais e calculados foi obtido assumindo a formação de dois complexos de Cu(II): [CuL] log = 19.34 ± 0.05 e [CuL2]2 log = 26.4 ± 0.10 e três complexos de Fe(III): [FeL3]3 log = 44.72 ± 0.09, [FeL2] log = 35.32 ± 0.08 e [FeL]+ log = 19.51 ± 0.04. Além disso, a redução de cobre e ferro é menos favorável na presença de floranol. Esses resultados indicam que o floranol pode eficientemente ligar-se ao Cu(II) e ao Fe(III) prevenindo a oxidação da LDL por tais metais. Outro mecanismo antioxidante dos flavonóides é sua capacidade de seqüestrar radicais livres. Avaliamos, por quimioluminescência, o efeito antioxidante do floranol em macrófagos de camundongos ativados de camundongos deficientes para o gene da apoliproteína E (ApoE-/-), da óxido nítrico sintase indutível (iNOS-/-) e da linhagem selvagem C57Bl/6. Nós demonstramos o efeito atenuador do floranol no surto oxidativo de macrófagos das três linhagens experimentais estudadas, ativados com zymosan, que receberam diferentes concentrações de floranol. Em conjunto, os dados obtidos neste estudo mostram que o floranol atua com um antioxidante pela capacidade de quelar íons Cu(II) e Fe(III) e através da interação direta com radicais livres.

Schistosomiasis is a tropical parasitic disease caused by helminths of the genus Schistosoma. During S. mansoni infection, eggs deposited by female worm in mesenteric veins can be pushed by blood flow and get trapped mainly in livers sinusoid capilarries. In this environment, egg secretes antigens that induce granuloma development. IPSE/alpha-1 is one of the most abundant proteins in S. mansoni egg secretions. The aim of this work is the evaluation of the immunological and pathological response induced by recombinant IPSE/alpha-1 in C57BL/6 mice. Recombinant IPSE/alpha-1 was expressed in Escherichia coli as a His tag fusion protein. C57BL/6 mice were immunized with IPSE/alpha-1r or PBS as control. Production of specific antibodies were analysed in mice sera by ELISA. Immunization with IPSE/alpha-r induced the production of high levels of total IgG, IgG1 and IgG2a. The production of IgG1 was the most relevant. Splenocytes from immunized were incubated with the recombinant protein. The production of high levels of IFN-, TNF-, IL-5 and IL-13 was detected by ELISA. Immunized mice were infected with S. mansoni and seven weeks post-infection liver fragments were collected. The number of eggs and granulomas, granulomas total area and fibrosis area were analysed by morphometry. Additionally granulomas were categorized into three stages of maturation based on cellularity and fibrosis level and the prevalence of the stages were analyzed. Except for granulomas total area, no alteration in the other parameters was detected. IPSE/alpha-1 immunized mice developed 25% larger granulomas compared to control group. In addition the increase in the granuloma area was limited to the third stage of maturation. The eosinophil and macrophage infiltration into the hepatic tissue was determined by eosinophil peroxidase (EPO) and n-acetyl--glucosaminidase (NAG) assays, respectively. No alteration of EPO activity was detected. Conversely, NAG activity was higher in IPSE/alpha-1r immunized and infected mice. Levels of CCL2, CCL3, CCL5 and CCL11 were measured in supernatants of macerated tissue by ELISA. However no significant alterations in the production of these chemokines were detected. These results shows that immunization with IPSE/alpha-1r induces a Th1/Th2 type of immune response in C57BL/6 mice and an increase in hepatic granuloma in the third stage of maturation. This enlargement is partially due to a higher macrophage infiltration.
A esquistossomose é uma doença parasitária tropical causada por helmintos do gênero Schistosoma. Durante a infecção por S. mansoni, os ovos depositados pela fêmea são levados pelo fluxo sanguíneo e se prendem principalmente aos capilares sinusóides do fígado. Neste ambiente, secretam proteínas que induzem a formação do granuloma. IPSE/alpha-1 é uma das proteínas secretadas em maior abundância pelos ovos do S. mansoni. O objetivo do presente estudo é a caracterização da resposta imunológica e patológica induzida por IPSE/alpha-1 recombinante em camundongos C57BL/6. IPSE/alpha-1 recombinante foi expressa em Escherichia coli acrescida de uma cauda de 6 histidinas. Para caracterização da resposta imunológica, camundongos C57BL/6 foram imunizados com a proteína recombinante ou receberam PBS como controle. A produção de anticorpos específicos foi avaliada no soro dos animais por ELISA. A imunização com IPSE/alpha-1r induziu uma produção expressiva de IgG total, IgG1 e IgG2a, sendo que, a produção de IgG1 foi a mais relevante. Esplenócitos extraídos de animais imunizados foram cultivados e incubados com a proteína recombinante. Por ELISA, foi detectada a produção de níveis significativos de IFN-, TNF-, IL-5 e IL-13 nos sobrenadantes da cultura. Para caracterização da resposta patológica induzida por IPSE/alpha-1r, camundongos imunizados foram infectados com S. mansoni e, sete semanas após a infecção, fragmentos do tecido hepático foram coletados. O número de ovos e de granulomas e a área total e de fibrose do granuloma foram analisados por morfometria. Os granulomas também foram classificados em três estágios de maturação baseado na intensidade da fibrose e da celularidade e avaliados quanto à prevalência destes estágios. Exceto pela área total do granuloma, não houve alterações nos demais parâmetros. Animais imunizados com IPSE/alpha-1r desenvolveram granulomas 25% maiores em comparação ao grupo controle. Além disso, foi verificado que este aumento estava restrito ao terceiro estágio de maturação. A infiltração de macrófagos e eosinófilos no tecido hepático foi avaliada pelos ensaios da peroxidase eosinofílica (EPO) e da n-acetyl--glicosaminidase (NAG), respectivamente. Nenhuma alteração na atividade de EPO foi detectada. Entretanto, a atividade de NAG foi maior nos animais imunizados e infectados. Os níveis de CCL2, CCL3, CCL5 e CCL11 foram dosados nos sobrenadantes de macerados do tecido hepático por ELISA. Porém não foram detectadas alterações significativas na produção dessas quimiocinas. Estes resultados demonstram que a imunização com IPSE/alpha-1r induz uma resposta imunológica do tipo Th1/Th2 em camundongos C57BL/6 e um aumento do granuloma hepático no terceiro estágio de maturação. Este aumento resulta em parte de um maior infiltrado de macrófagos.

O envelhecimento biológico é um processo complexo caracterizado por diferenças espécies-específicas bem como tecidos-específicos e por mecanismos de mudanças moleculares e fisiológicas relacionadas à idade. Evidências têm sido obtidas de que o envelhecimento biológico abrange diversos parâmetros intimamente relacionados, como: taxa metabólica, ingestão calórica, genética, estilo de vida e fatores ambientais (SHONEICH, 1999). Várias são as definições para tal processo, destacando-se dentre elas, a definição clássica de Comfort (1960) de que o envelhecimento é caracterizado por um aumento da susceptibilidade de morrer, ou uma perda de vigor, com aumento cronológico de idade ou com a passagem do ciclo da vida. Arking (1991) propôs que o envelhecimento é uma série de mudanças estruturais e funcionais cumulativas, universais, progressivas e deletérias que usualmente começam a se manifestar mais tarde na vida de um indivíduo. Dentre todas as definições, observa-se uma tendência geral em caracterizar tal processo como heterogêneo, complexo e multifatorial (McCLEARN, 1997). O envelhecimento é um processo biológico inevitável e caracterizado por declínio geral das funções fisiológicas, isto é contrabalançado por reparo e fatores de manutenção que contribuem para a longevidade do organismo. Assim, Beckman e Ames (1998) definiram o envelhecimento como um fenômeno multifatorial associado com a diminuição das funções fisiológicas e celulares, ao aumento na incidência de numerosas doenças degenerativas e à diminuição da capacidade para responder ao estresse. Segundo Medvedev (1990) existem mais de 300 teorias para explicar o envelhecimento, muitas das quais não se contradizem e até mesmo apóiam umas às outras, exatamente por tratarem o assunto de forma diferente e independente. A maioria das conceitualizações descritas como teorias gerontológicas são, na verdade, aplicações de teorias de vários domínios da ciência da vida para explicar o processo de envelhecimento. Neste contexto, dentro da genética molecular surgem as propostas das teorias das proteínas alteradas ou da catástrofe do erro elaborada por Orgel em 1963 que previa uma diminuição na fidelidade da transferência de informação que se aceleraria à medida que o envelhecimento progredisse, até que macromoléculas, em funcionamento apropriado, não fossem mais produzidas. A teoria da mutação somática (VIJG, 2000), predizia que o envelhecimento podia ser o resultado de exposições em longo prazo a níveis baixos e naturais de radiação e outros agentes ambientais capazes de danificar o DNA. Goyns em 2002 elaborou a teoria do encurtamento dos telômeros, que define que a maquinaria de replicação do DNA não é capaz de replicar completamente o fim de cromossomos lineares, de forma que, a cada rodada de síntese de DNA, o telômero (região terminal dos cromossomos) sofre um encurtamento. Tal encurtamento pode ser revertido pela ação da enzima telomerase, que, no entanto, encontra-se ausente ou presente em baixos níveis em várias células replicativas. O próprio estresse oxidativo, ao qual as células são expostas, também induz encurtamento nos telômeros. O conseqüente fenótipo de senescência replicativa poderia contribuir para perdas funcionais em diversas células durante o envelhecimento (Ex: cura de feridas menos eficiente devido à senescência replicativa de fibroblastos e ao enfraquecimento da resposta imune devido à perda de capacidade proliferativa em linfócitos). Já as teorias evolutivas enfocam o envelhecimento não no indivíduo e sim no contexto da evolução (KIRKWOOD, 2002). Weismann, em 1981, elaborou a teoria do gene para o envelhecimento que determina o envelhecimento como sendo uma forma geneticamente programada de limitar o tamanho das populações, desta forma, evitando lotação. Dentro da bioquímica, a teoria dos radicais livres, proposta por Harman, em 1956, atribui danos não específicos a macromoléculas (DNA, lipídeos, proteínas) por radicais livres durante o processo de envelhecimento. O rápido desenvolvimento na biologia dos radicais livres e tecnologia molecular têm permitido a aquisição de resultados que suportam o papel do estresse oxidativo como o principal contribuidor do processo do envelhecimento e da patogênese de um grande número de doenças. Sabe-se que os oxidantes são produzidos como subprodutos do metabolismo normal (exemplo, cadeia transportadora de elétrons, vários sistemas enzimáticos que utilizam oxigênio), por células fagocíticas e a partir da peroxidação lipídica. Eles induzem danos oxidativos a ácidos nucléicos, lipídeos, e proteínas e conduzem a danos celulares e algumas das características do envelhecimento (AMES, B. et al., 1992; YU, B. et al., 1996). Numerosos estudos têm sido conduzidos na última década para elucidar os mecanismos bioquímicos e moleculares do envelhecimento (SOHAL, R. et al., 1995; YU, B. et al., 1993). O consenso geral parece ser que o processo de envelhecimento é um processo multifatorial e as espécies reativas de oxigênio são um fator contribuidor (FUKAGAWA, N. et al., 1999). Entretanto, a extensão desta contribuição permanece incerta. Assim, torna-se de grande interesse a avaliação da produção de espécies reativas de oxigênio durante o processo de envelhecimento e as vias de sinalização a elas relacionadas. As espécies reativas de oxigênio (ROS) são produtos do metabolismo celular normal, visto que de 1 a 2% do oxigênio utilizado para a respiração mitocondrial é convertido em ROS (durante a cadeia respiratória, podem ocorrer reações colaterais envolvendo principalmente os complexos mitocondriais I e III e que culminam na redução monoeletrônica do oxigênio a íon superóxido) (TURRENS, J. et al., 1997; LIU, S. et al., 1997; KOWALTOWSKI, A. et al., 1999). Estas espécies são geradas tanto enzimaticamente por oxidoredutases quanto não enzimaticamente como produtos colaterais de reações que utilizam a transferência de elétrons. Assim, a mitocôndria, o citocromo P450 e suas redutases são responsáveis pela geração de ROS. Outra reserva abundante de ROS é a enzima de multicomponentes NADPH oxidase. Em células não estimuladas, a NADPH oxidase é formada por um componente associado à membrana, o citocromo b558 constituído de duas sub-unidades gp91phox e p22 phox e por três componentes citosólicos p47phox/p67phox/p40phox formando um complexo (FORMAN, H. et al., 2001). A glicoproteína gp91phox contém dois hemes e um sítio de ligação ao NADPH que interage com p22phox para formar o complexo do citocromo b558. A ativação dos polimorfonucleares conduz a translocação de GTPase Rac, p47phox e p67phox para a membrana plasmática, onde p67phox interage através de seu domínio de ativação com as sub-unidades ligadas a membrana. Esta interação é requerida para a ativação da oxidase e facilita a transferência de elétrons do NADPH para o oxigênio. Duas proteínas adicionais têm sido demonstradas interagir com o citocromo b558: rap1a e p40phox, estando envolvidas no recrutamento de p47phox e p67phox a membrana (BRANDES, R. et al., 2005). Assim, o acúmulo de biomoléculas danificadas pela ação dos radicais livres durante a extensão de vida de um indivíduo contribuiria ou resultaria no envelhecimento. Cada espécie reativa age de maneira diferente sobre os seus alvos apresentando diferentes graus de toxicidade e seletividade para com os substratos. Desta forma, a produção destas espécies oxidantes durante a senescência poderia ser um fator contribuidor para o desencadeamento de vários eventos relacionados ao envelhecimento, como o declínio progressivo da imunidade em indivíduos idosos, ocasionando o aumento da incidência de processos auto-imunes, neoplasias e da susceptibilidade a infecções (KNIGHT, J. et al., 1995). A causa exata deste declínio, e as sub-populações celulares diretamente envolvidas, ainda são desconhecidas (FULÖP, T. et al., 1994). Entretanto, alguns estudos têm relacionado alterações nos mecanismos de sinalização celular com o avanço da idade. Não existem relatos da identificação da etapa crítica, mas sim de uma série de deficiências que contribuem para o declínio da competência de linfócitos e granulócitos em serem adequadamente ativados (FULOP, T. et al., 1994). Neste contexto, sabe-se que leucócitos polimorfonucleares têm um papel crucial na defesa do organismo contra bactérias, fungos e protozoários, constituindo a principal célula efetora da imunidade inata. Em resposta a um patógeno invasor, os neutrófilos constituem o primeiro tipo celular a migrar para o tecido afetado, formando a primeira linha de defesa do organismo contra infecções (FAURSCHOU, M et al., 2003). Sabe-se ainda, que altas taxas de mortalidade e morbidade em idosos são principalmente causadas por infecções fúngicas e bacterianas, assim, a maior taxa de infecção em idosos pode ser causada por desordens nestas células relacionadas à idade. Sabe-se que 60-70% dos leucócitos sanguíneos são granulócitos, e destes aproximadamente 90% são neutrófilos, sendo assim, sua função não deve ser subestimada durante a resposta imune (SCHRÖDER, A. et al., 2003). Desta forma, os granulócitos tornam-se excelentes ferramentas para o estudo e a compreensão das vias de sinalização envolvidas na geração de espécies reativas de oxigênio podendo nos trazer subsídios para uma melhor compreensão dos mecanismos imunorregulatórios decorrentes durante o processo de envelhecimento fisiológico. Assim, a desregulação ou o não balanço entre as vias de sinalização deveria ser vista como prioridade, uma vez que a as alterações funcionais nestas vias deveriam ser induzidas em células senescentes de maneira via-específica e agonista-específica (FUKAGAWA, N. et al., 1999). A capacidade das células para comunicar com outras e responder estímulos em mecanismos biológicos permitem que a informação seja transmitida da superfície celular ao núcleo (Barthel, A., 2005). Estes mecanismos referem-se às vias de sinalização celular. Componentes destas vias incluem segundos mesangeiros, cinases, fosfolipases, e fosfatases, entre outros. Alguns segundos mensageiros, como AMPc e IP3 e várias cinases como PKA, PKB e P38MAPK são alvos de intenso estudo. O entendimento dos mecanismos de atuação destes componentes sobre as vias de sinalização de geração de ROS, através da ativação da NADPH oxidase em granulócitos de indivíduos em diferentes faixas etárias, poderá nos trazer subsídios para uma melhor compreensão dos mecanismos regulatórios envolvidos no processo de senescência fisiológico, uma vez que a geração de ROS por granulócitos pode refletir um estado de estresse oxidativo crônico que é característico do processo de envelhecimento. Sabe-se que o segundo mensageiro adenosina 3, 5-monofosfato ciclíco (AMPc) é considerado um modulador fisiológico da produção de superóxido por neutrófilos ativados (REIBMAN, J. et al., 1990). Tem sido amplamente documentado em estudos in vitro com suspensões de neutrófilos que a elevação de AMPc intracelular por agonistas fisiológicos da adenilato ciclase (prostaglandinas tipo E, histamina ou drogas beta adrenérgicas) inibem a geração de íon superóxido em resposta a estimulação com peptídeos quimiotáticos (fMLP) (SEDGWICK, J. et al., 1985; SELIGMANN, B. et al., 1983; NIELSON, C. et al., 1987). Em muitas células pró-inflamatórias e imunes, um aumento na concentração intracelular deste nucleotídeo geralmente conduz à inibição de resposta. Por esta razão, agentes que elevam os níveis intracelulares de AMPc apresentam um potencial como drogas anti-alérgicas e anti-inflamatórias, além de inibir a expressão de IL-12 e IFN-, mas não a expressão de IL-4, IL-10 e IL-5. AMPc é produzido a partir da estimulação de receptores específicos acoplados via proteína G a adenilato ciclase (SHAMES, B.D. et al., 2001). Existem dois receptores intracelulares para o AMPc, PKA e EPAC, os quais são responsáveis pelos diferentes efeitos de AMPc sobre as células. PKA é constituída de duas subunidades regulatórias e duas subunidades catalíticas que interagem para formar uma holoenzima inativa (TAYLOR, S. et al., 1990; MEI, F. et al., 2002). A ativação de PKA depende da ligação do AMPc a subunidade regulatória, a qual induz uma mudança conformacional nesta subunidade e conduz a uma dissociação da holoenzima em suas subunidades constituintes. A subunidade catalítica ativa pode afetar uma ampla variedade de eventos celulares por fosforilação de proteínas citoplasmáticas e nucleares, incluindo enzimas e fatores de transcrição (KOPPERUD, R., 2003). Dentre eles, destaca-se CREB que é um dos principais substratos nucleares para PKA. A fosforilação de um único resíduo de serina aumenta a atividade de CREB ligado ao elemento de resposta CRE, o qual é encontrado em genes nos quais a transcrição é induzida por AMPc (LEE, E. et al., 1998; HYUN et al, 1998; ZIDEK, Z., 1999). Um dos genes em que a transcrição é induzida por AMPc é o da citocina imunomoduladora IL-10. Interleucina 10 (IL-10) possui uma estrutura com quatro domínios globulares -helicoidais e liga-se ao receptor de citocinas do tipo II. Em humanos, IL-10 é produzida por macrófagos ativados, linfócitos T CD8+, Th0, linfócitos CD4+ Th1 e Th2 e por alguns tipos de células não linfóides (como queratinócitos) (MORIKAWA et al., 2002). IL-10 inibe a síntese de um número de citocinas como IFN-y, IL-2 e fator de necrose tumoral (TNF-). IL-10 humana também é quimioatrativa para linfócitos T CD8+ e um inibidor da migração de linfócitos T CD4+ induzido por IL-8. Em leucócitos polimorfonucleares, IL-10 inibe a produção de IL-1, IL-1, IL-8 e TNF- (DESCHNER et al., 2000). IL-10 participa da downregulation da secreção de IL-12, uma citocina crítica para a diferenciação de Th1. IL-10 tem outro potente efeito imunossupressor sobre a linhagem de monócitos-macrófagos: ela suprime a produção de óxido nítrico e outros metabólitos bactericidas envolvidos na destruição de patógenos e também na produção de vários mediadores inflamatórios (ex: IL-1, IL-6, IL-8, GM-CSF e TNF-) (KUBY et al., 2000). Ademais, IL-10 tem um papel na supressão do processo inflamatório e a diminuição desta citocina imunossupressora deve amplificar o local do processo inflamatório (DESCHNER et al., 2000) em diversas patologias. Além disso, sua produção pode estar envolvida em uma resposta biológica comum em linfócitos que sofrem apoptose (TOMIMORI et al., 2000). IL-10 também é capaz de suprimir a produção de interferom gama por células Th1 (TOMIMORI et al., 2000). O outro receptor recentemente descoberto de AMPc é o EPAC (proteína de troca diretamente ativada por AMPc). EPAC contém um domínio de ligação a AMPc que é homólogo a subunidade R de PKA e um domínio de fator de troca (GEF). EPAC liga a AMPc com alta afinidade e ativa Rap1. Tanto EPAC quanto PKA são amplamente expressos em muitos tecidos (MEI, F. et al., 2002), e um aumento nos níveis intracelulares de AMPc irá conduzir a ativação de ambas as enzimas, e possivelmente outros alvos potenciais de AMPc. Deste modo, o efeito celular de AMPc pode variar dependendo da abundância celular e a distribuição de EPAC e PKA. Assim, o controle dinâmico da expressão celular de EPAC e PKA associados a mudanças na dinâmica da concentração de AMPc constituem mecanismos regulatórios que determinam os efeitos de AMPc específicos em cada tipo celular. Um outro alvo downstream do AMPc é a proteína cinase B (Akt/PKB), uma enzima crucial na via de sinalização para a sobrevivência celular (HILL, M., 2002). Assim, AMPc pode ativar PKB através de uma via de sinalização mediada por EPAC de maneira dependente de PI3K (WHITEMAN, E., 2002; RICHARDS, J., 2001). PKB é uma cinase serina/treonina de 60-kDa, que contêm um domínio amino terminal de homologia a plequistrina (PH), um domínio catalítico central e domínio regulatório hidrofóbico C-terminal (FILIPPA, N. et al., 1999). O domínio PH é requerido para seu recrutamento na membrana plasmática através de sua ligação de alta afinidade a PIP3 produzido por PI3K ativado. PKB contêm dois sítios de fosforilação regulatórios, a fosforilação de Thr 308 parcialmente ativa a cinase, enquanto a fosforilação de ambos os sítios (Thr 308 e Ser 473) são requeridos para a ativação total (FILIPPA, N. et al., 1999; HILL, M., 2002). Uma vez ativada por fosforilação tem sido mostrada proteger as células da apoptose que é induzida por estímulo externo em diferentes tipos celulares, uma vez que é responsável pela fosforilação de BAD, membro da família Bcl. PKB fosforila BAD no resíduo de Ser 136 promovendo a associação de BAD com proteínas do citosol, deste modo inativando sua função pró-apoptótica (LAWLOR, M., 2001). Assim, além de sua função anti-apoptótica, parece que PKB está envolvido no desenvolvimento de alguns tipos de câncer, no controle do ciclo celular, bem como no controle da entrada de glicose estimulada por insulina nos músculos e adipócitos, podendo estar relacionado com a resistência à insulina e o diabetes (WHITEMAN, E. 2002; HILL, M., 2002). Uma outra cinase de relevância para o estudo do estresse oxidativo é a P38MAPK, assim chamada por causa de seu peso molecular de 38 kDa, sendo classificada como uma proteína cinase ativada por estresse. P38MAPK é uma serina/treonina cinase da família das MAPKs e sua importância em leucócitos polimorfonucleares foi recentemente demonstrada (YAMAMORI, T. et al., 2000). Geradores do estresse oxidativo, como toxinas e estímulos pró-inflamatórios, incluindo lipopolissacarideo (LPS) e N-formil-metionil-leucil-fenilalanina (fMLP) são responsáveis pela ativação de p38MAPK (POMERANCE, M., 2000). Algumas publicações têm sugerido que P38MAPK está envolvida na sinalização da produção de O2- (YAMAMORI, T. et al., 2000; LI, J. et al., 2004). A literatura relata que algumas características bioquímicas de tecidos velhos são causados por um aumento do estado pró-oxidante e isto afeta a função de proteínas chaves que regulam genes de resposta ao estresse como P38 MAPK e JNK. Assim, a atividade ou função dos componentes das vias de sinalização e fatores de transcrição específicos que regulam os genes de resposta ao estresse são alvos potenciais de ROS, a conseqüência resulta em um nível basal aumentado da atividade da via de sinalização de estresse, fatores de transcrição de resposta ao estresse, e genes de resposta ao estresse. Níveis aumentados de mediadores do estresse como citocinas circulantes ocorrem em animais e humanos senescentes, sendo fatores que contribuem para mudanças nestas vias de sinalização, indicando um desenvolvimento de estado de estresse crônico (CARUSO, et al., 2004). Um outro segundo mensageiro intensamente estudado é o inositol 1,4,5 trifosfato (IP3) e diacilglicerol (DG) produzidos primariamente pelo metabolismo da fosfolipase C (PLC) a partir de fosfatidil inositol 4,5 bisfosfato (PIP2) em resposta à estimulação de receptores ligados a proteínas G ou receptores tirosina cinases (CATZ, S., 1998). IP3 rapidamente libera cálcio dos estoques intracelulares de Ca2+ dentro do retículo endoplasmático e outras membranas celulares por ligação ao receptor de IP3, o qual amplifica o sinal celular, muito dos quais são gerados na membrana plasmática (PENDARIES, C. et al., 2003; MICHELL, R. et al., 2002). O receptor de IP3 é fosforilado por múltiplas cinases. A fosforilação do receptor de IP3 pela proteína cinase dependente de AMPc (PKA) regula a atividade do canal. Em células intactas e permeabilizadas, ativadores de PKA como forscolina ou dibutiril AMPc estimulam a liberação de cálcio e a fosforilação do receptor mediada por PKA (SOULSBY, M. et al., 2005). Da mesma forma, a proteína cinase dependente de GMPc (PKG) fosforila o receptor de IP3 no mesmo sítio que PKA, gerando oscilações de cálcio similares como o obtido pela fosforilação de PKA (HAUG, L. et al., 1999). Já o diacilglicerol (DG) liga diretamente a PKC e a ativa, a qual fosforila uma série de proteínas, algumas das quais podem estar envolvidas na ativação da NADPH oxidases. A ativação de fosfolipase D (PLD) resulta na formação de ácido fosfatidico (PA) a partir de fosfatidilcolina. PA tem um importante papel na sinalização celular por atuar como ionóforo endógeno facilitando a mobilização de cálcio ionizável para o citosol e como o principal ativador da NADPH oxidase (GOMES-CAMBRONERO, et al., 1998). Assim diante do exposto acima verifica-se que o processo de envelhecimento, por si só, apresenta alterações que podem ser detectadas por estudos metabólicos, e a compreensão dos mecanismos moleculares envolvidos no envelhecimento poderia nos ajudar a desenvolver estratégias efetivas no controle de doenças relacionadas à idade, aumentando a qualidade de vida do idoso. Na população humana é difícil distinguir entre a expressão fenotípica do envelhecimento devido ao processo de envelhecimento por si só e as doenças sabidamente conhecidas ocorrer com maior prevalência em populações idosas, como doenças cardiovasculares, artrite, osteoporose e diabetes (BOREN, E. et al., 2004). Sabe-se que a senescência pode estar relacionada com alterações nos mecanismos de regulação da insulina, uma vez que se sabe da existência de uma intolerância à glicose em humanos relacionado ao processo de envelhecimento (SCHEEN, A., 2005). Durante o envelhecimento, a regulação do metabolismo da glicose apresenta-se diminuído como resultado de complexas alterações associadas à idade (FULÖP, T., 2003). Nas últimas décadas alguns mecanismos têm sido propostos com o objetivo de relacionar alterações nos mecanismos de sinalização da insulina e no processo de envelhecimento. Sabe-se que a própria hiperglicemia pode alterar várias vias de sinalização celular através da ativação da proteína cinase ativada por AMPc (XU, Y. et al., 2005), aumento da síntese de diacilglicerol (HINK, U. et al., 2003) bem como a capacidade prejudicada da insulina em ativar Akt/PKB (BLOCK-DAMTI e BASHAN, 2005). Da mesma forma, o aumento na geração das espécies reativas de oxigênio interfere com a sinalização das vias JNK e P38, as quais estão envolvidas na cascata de sinalização de PI3K (FINKEL, T., 2003). Sabe-se também que condições hiperglicemiantes são responsáveis por danos celulares através de modificações não enzimáticas de macromoléculas, um evento ocorrido durante o envelhecimento fisiológico e na maioria das doenças relacionadas à idade, como o diabetes. Os produtos finais de glicação avançado (AGEs), bem como os radicais livres podem diretamente influenciar ou interferir com o funcionamento do receptor de insulina e a sinalização celular por diminuir a fosforilação da tirosina do substrato do receptor de insulina (IRS). Isto resulta na diminuição da atividade de PKB, o que por sua vez altera o metabolismo de glicose e glicogênio (FULÖP, 2003; SUJI e SIVAKAMI, 2004). Assim como ocorre no envelhecimento, sabe-se que o diabetes mellitus também é um processo multifatorial de intensos estudos. Várias são as abordagens e uma grande massa de resultados está disponível na literatura a respeito dos fatores genéticos, celulares e metabólicos. Contudo, poucos são os artigos que enfocam as alterações nas vias de sinalização no diabético idoso. Assim, torna-se de grande interesse aprofundar o conhecimento no sentido de entender estas prováveis alterações nas vias de sinalização celular, uma vez que os resultados que serão obtidos facilitarão o entendimento destes dois complexos fenômenos e subsidiar novos estudos nestas áreas. O termo diabetes mellitus descreve uma desordem metabólica de múltiplas etiologias caracterizadas por hiperglicemia crônica com distúrbios no metabolismo de carboidratos, lipides e proteínas, como resultado do defeito na secreção de insulina ou em sua ação ou ambos. (OMS, 1999; CONGET, I., 2002). Há mais de 100 milhões de pessoas em todo mundo com diabetes (5 a 8% da população mundial), e este número tende a aumentar significativamente num futuro próximo (GIUSEPPE, G. et al., 2003; POLADIA, D. et al., 2004). A classificação do diabetes recomendada atualmente inclui tanto estágios do diabetes mellitus baseado no critério descritivo clínico bem como a classificação etiológica complementar e outras categorias de hiperglicemia, como sugerido por Kuzuya e Matsuda (OMS, 1999). A etiologia do tipo 1 inclui os casos que são atribuídos a um processo auto-imune, bem como aqueles que envolvem a destruição das células beta pancreáticas com propensão a cetoacidose mas que nem a etiologia e nem a patogênese são conhecidos (idiopática) (ROEP, B., 2003). Não inclui aquelas formas onde as causas da destruição das células betas são conhecidas (ex: fibrose cística e defeitos mitocondriais). O tipo 2 inclui a maioria das formas do diabetes, os quais resultam em um defeito na secreção de insulina, quase sempre com uma resistência desta (SHAW, J. et al., 2000). A terceira categoria, outros tipos específicos de diabetes, inclui aqueles causado por um defeito sabidamente identificado e específico, como defeitos genéticos e doenças do pâncreas exócrino. (Conget, I., 2002).

Recent studies carried out by our group have demonstrated that the species T. cruzi can be divided into three distinct haplogroups, named A, B and C. This division was based upon extensive analyses carried out in several T.cruzi strains of microssatellites and polymorphisms found among various genes, including the MSH2 gene, which encodes a key component of the mismatch repair pathway (MMR). Treatment of parasite cultures with genotoxic agents also suggested that strains belonging to haplogroups B and C present a less efficient MMR when compared to the haplogroup A strains. These results led us to propose that the lower MMR efficiency found in haplogroups B and C could imply in a greater genetic variability in these strains, as indicated by the studies of multigene families present in the T. cruzi genome. It should be noted that strains belonging to haplogroup C are more frequently associated with chronic cases of Chagas disease in Brazil. Thus, it is possible that this higher genetic variability has contributed to a greater adaptation of these strains to the domestic cycle of Chagas disease. Since each haplogroup is characterized by a distinct MSH2 isoform, we decided to further characterize the T. cruzi MSH2 and investigate its role in generating the differences in MMR found between the haplogroups. The MSH2 gene was amplified from the genome of two T. cruzi strains, Colombiana (haplogroup A) and CL Brener (a hybrid strain that contains MSH2 alleles belonging to haplogroups B and C) and their whole coding region was sequenced. We have found 29 aminoacid substitutions between the MSH2 from these strains, some of them in regions described as important for the proteins structural or functional maintenance. In silico analysis indicated that the differences found between the MSH2 of Colombiana and CL Brener do not lead to alterations in protein structure. ATPase assays performed with recombinant proteins purified from E. coli indicated that Colombianas MSH2 presents a higher activity in vitro compared to CL Breners MSH2, suggesting that the SNPs in these strains MSH2 could account for the differences in the response to treatment with genotoxic agents. To compare the activity of CL Brener and Colombianas MSH2 in vivo, a second approach involving the expression of these proteins in Trypanosoma brucei MSH2 knockout cells was attempted. However, this apporach was not successful because microsatellite instability and MNNG resistance assays indicated that the complementation of the MMR pathway in T. brucei through the expression of T. cruzi MSH2 is not possible. On the other hand, this model allowed us to evaluate the role of MSH2 in the response to oxidative stress in these parasites. Similar to T. cruzi MSH2 -/+ single knockout cells, MSH2 -/- T. brucei cells are more sensitive to treatment with hydrogen peroxide than wild type cells. MLH1, the MSH2 counterpart in MMR, is not involved in this process, as shown by the analyses with T. brucei MLH1-/- knockout cells. Since MSH2 from T. cruzi was unable to complement microsatellite instability and MNNG resistance in T. brucei MSH2 -/- cells, and MLH1 is not involved in the response to hydrogen peroxide treatment, we propose that, in trypanosomatids, MSH2 has an additional role in the response to oxidative stress, which is independent from MMR.
Estudos recentes realizados pelo nosso grupo demonstraram que a espécie Trypanosoma cruzi pode ser dividida em três haplogrupos distintos, denominados A, B e C. Essa classificação está baseada em uma extensa análise de microssatélites e polimorfismos de vários genes em diversas cepas desse parasita, incluindo o gene MSH2, que codifica um componente essencial da via de reparo de erros de pareamento (MMR). Tratamento com agentes genotóxicos sugeriu que cepas dos haplogrupos B e C apresentam menor eficiência de MMR se comparado com cepas do haplogrupo A. Esses resultados nos levaram a propor que essa menor eficiência de MMR poderia estar correlacionada à maior variabilidade genética encontrada nessas cepas, como demonstrado em estudos recentes sobre famílias de genes multi-cópias. Cabe notar que as cepas pertencentes ao haplogrupo C estão normalmente associadas aos casos crônicos da doença de Chagas no Brasil. Portanto, é possível que essa maior variabilidade genética tenha contribuído para uma maior capacidade de adaptação dessas cepas ao ciclo doméstico da doença de Chagas. Como cada um dos haplogrupos é caracterizado por uma isoforma distinta de MSH2, decidimos aprofundar a caracterização dessa proteína e investigar se ela poderia ser responsável pelas possíveis diferenças de MMR entre haplogrupos. O MSH2 foi amplificado a partir de DNA genômico das cepas de T. cruzi Colombiana (haplogrupo A) e CL Brener (uma cepa híbrida apresentando os alelos de MSH2 dos haplogrupos B e C) e sua região codificadora foi seqüenciada. Foram encontradas 29 substituições de aminoácidos entre o MSH2 dessas cepas, algumas delas em regiões descritas como importantes para a manutenção da estrutura ou função dessa proteína. Análises in silico indicaram que as diferenças entre o MSH2 de Colombiana e CL Brener não levam a alterações estruturais. Visando verificar sua atividade in vitro, o MSH2 dessas cepas foi expresso em E. coli e as proteínas recombinantes utilizadas em um ensaio funcional de hidrólise de ATP. A proteína MSH2 de Colombiana apresentou maior atividade ATPásica in vitro quando comparada à de CL Brener, sugerindo que os SNPs encontrados podem ser responsáveis pelas diferenças observadas nas respostas a tratamentos com agentes genotóxicos. Visando comparar a atividade do MSH2 de CL Brener e Colombiana in vivo optamos pela expressão heteróloga dessas isoformas de MSH2 de T. cruzi em linhagens de Trypanosoma brucei MSH2 -/-. Entretanto, as análises de instabilidade de microssatélite e tratamento com MNNG indicaram que a complementação da via de MMR em T. brucei através da expressão de MSH2 de T. cruzi não é possível. Por outro lado, esse modelo nos permitiu avaliar a participação do MSH2 na resposta ao estresse oxidativo nesse parasita. Semelhante ao observado com linhagens de T. cruzi MSH2+/-, linhagens de T. brucei MSH2 -/- são mais susceptíveis ao tratamento com peróxido de hidrogênio (H2O2) do que células selvagens. Ensaios com células de T. brucei MLH1-/- demonstraram que MLH1, uma proteína que atua juntamente com o MSH2 no MMR, não está envolvida nesse processo. O fato do MSH2 de T. cruzi não ter sido capaz de complementar a via de MMR em T. brucei MSH2 -/-, associado à não participação do MLH1 na resposta a tratamento com H2O2, nos levou a propor que, em tripanossomatídeos, MSH2 teria um papel adicional na resposta a estresse oxidativo, sendo essa uma função independente do MMR.

Caracterizaçao da resposta imune de pacientes comtuberculose atraves da produçao de citocinas e quimiocinas após estimulo coma proteção de fusao ESAT-6/CFP-10 do Mycobacteriumtuberculosis. A tuberculose permanece como umdos principais problemas de saúde publica mundial, que nema poliquimioterapia nema vacina, BCG, correntemente utilizadas, têm sido capazes de resolver. Novos antígenos específicos do M. tuberculosis estilo sendo amplamente estudados visando o desenvolvimento de novos métodos de diagnósstico e prevenção da doença. No presente trabalho foi estudado o perfil de quimiocinas no soro de pacientes comtuberculose e em controles vacinados como BCG, e a produção de citocinas e quimiocinas por células de sangue periferico de pacientes com tuberculose e controles após estímulo comos antígenos PPD, ESAT-6/CFP-10 e Ag85B do M. tuberculosis. Foi observado uma correlação positiva entre a produção de IFN-? e produção de MIG por células mononucleares do sangue perif»rico estimuladas comPPD e ESAT- 6/CFP-10, sendo encontrados valores maiores de IFN-? e MIG empacientes com tuberculose emcomparação a indivíduos controles vacinados comBCG A proteína de fusÑo ESAT-6/CFP-10 apresentou melhor especificidade que o PPD, para a produção de IFN-? e MIG. Pacientes comtuberculose ativa mostraram menor produção no de IFN-?, TNF-a, IL-2, IL-4 e IL-10, estimulada por ESAT-6/CFP-10, após o tratamento (P<0,05). O nÃvel s»rico de MIG, IP-10 e IL-8, quimiocinas pré-inflamatórias, também foi menor nos pacientes após o tratamento (P<0,05), enquanto que RANTES e MCP-1 mostraram similares em pacientes e controles vacinados. Os pacientes comtuberculose apresentaram, antes e depois do tratamento, resultados de leucometria global, leucometria específica, hematimetria, hemoglobina, plaquetas, TGO, TGP, amilase, gama- GTe fosfatase alcalina dentro dos valores normais de referência, o que correlaciona comum quadro clânico moderado da doença e coma preservação da resposta imunológica dos pacientes. Esse » o primeiro trabalho mostrando a produção de MIG em células sanguíneas mononucleares de pacientes comtuberculose estimuladas comantígenos do M. tuberculosis. Esses resultados apontam MIG como umnovo marcador biológico que pode ser utilizado na avaliação de respostas subseqentes á produção de IFN-? na tuberculose. A avaliação de quimiocinas e citocinas no soro e sua produção por células de sangue periférico estimuladas comantígenos especificos do M. tuberculosis podemauxiliar.

The Macrotyloma axillare seed lectin (LMA) is an N-acetyl-galactosamine (GalNac) specific lectin very important in biothecnology because the specific hemmaglutination by A1 human erythrocytes. In this work, the LMA from dormant and germinated was purified by precipitation techniques and ion exchange chromatography as a new purification technique. Such methodology yielded three LMA fractions (0.2, 0.3 and 0.4 M) with hemagglutinating activity on erythrocytes A1, being the LMA 0.2 the major fraction considering the mass yielding. The SDS-PAGE 12.5% and mass spectrometry analyses revealed a molecular mass about 28 1 kDa. The LMA hemmaglutinating activity is Ca(II) and Mn(II) dependent and the pH-dependent assays showed best hemagglutinating activity at pH 6.0-8.0; being decreased at acidic/alkaline conditions. The native molecular mass determination showed that the LMA is a tetramer at pH 6.0-8.0 range and a dimer at pH 4.0. The thermodynamic data obtained by ITC using GalNac and NO2-Phenyl-GalNac derivatives have shown that all the LMA fractions tested (from dormant and germinated seeds) are similar and the binding is enthalpically driven. The 2-NO2-Phenyl--D-GalNac ligand is the best ligand and good affinities can be obtained by titrations performed at low temperature (15°C) and high salt concentration (NaCl 1M). The LMA data from germinated seeds have shown that the LMA is a protein resistant to the germination process (120 hours) as it could be seen by mass spectrometry analyses and by ITC titrations. The LMA denaturation studies, provided by DSC, revealed high thermal stability (Tm) at pH 6.2 with melting temperature about 100°C. The LMA denaturation process is irreversible (two state model) and thermodynamically driven at the DSC conditions tested. The LMA germinated data and the high thermal stability for LMA corroborate that lectins are crucial proteins for metabolism, physiology and development events of the Macrotyloma axillare legume.
A lectina da Macrotyloma axillare (LMA) é uma lectina N-acetilgalactosamina específica muito importante em biotecnologia uma vez que pode ser utilizada para biotipagem de hemácias humanas do Subgrupo A1. Neste trabalho, a LMA proveniente de sementes dormentes e germinadas foi purificada por uma nova técnica, utilizando métodos de precipitação e cromatografia de troca iônica. Por tal metodologia isolaram-se três frações ativas da LMA (0,2; 0,3 e 0,4M) com atividade hemaglutinante sobre hemácias A1 e com rendimento em massa predominante da LMA 0,2M. Análises por SDS-PAGE 12,5% e por espectrometria de massas do tipo ESI e MALDI-TOF revelaram que as frações de LMA são semelhantes e apresentam massas moleculares de 28 1 kDa. Estudos de estabilidade em diferentes condições de pH mostraram que a LMA apresenta atividade hemaglutinante máxima entre pH 6,0-8,0 e na presença de íons divalentes como o Ca(II) e Mn(II); com decréscimo de atividade em condições ácidas/alcalinas. As determinações de massa molecular nativa da LMA por cromatografia de exclusão por tamanho demonstraram que a LMA se comporta como tetrâmero entre pH 6,0-8,0 e dímero em pH 4,0. Estudos termodinâmicos das diversas frações de LMA (sementes dormentes e germinadas) por ITC, utilizando NacGal e NO2-Fenil-NacGal derivados, revelaram que tais frações de LMA possuem afinidades similares para os diversos carboidratos testados, com ligações entalpicamente dirigidas. O carboidrato 2-NO2-Fenil--D-NacGal foi o melhor ligante para a LMA em titulações realizadas por ITC em baixas temperaturas (15°C), pH próximo à neutralidade e em altas concentrações de NaCl (1M). Os dados obtidos para a LMA de sementes germinadas demonstram que essa proteína é resistente durante o processo de germinação por 120 horas, como verificado pelas análises de espectrometrias de massas e pelas titulações calorimétricas. Estudos de desnaturação realizados por DSC revelaram que a LMA possui elevada estabilidade termodinâmica em pH 6,2 com Tm 100°C. O processo de desnaturação da LMA é irreversível (modelo dois estados) e termodinamicamente dirigido nas condições experimentais testadas no DSC. Os dados obtidos para a LMA de sementes dormentes e germinadas e a elevada resistência térmica da LMA corroboram que tais proteínas podem ser importantes na fisiologia, desenvolvimento e metabolismo das sementes da leguminosa Macrotyloma axillare.

Bradykinin Potentiating Peptides (BPPs) can be found in different animal sources and, from the structural point of view, share a common signature with a Pyroglutamic acid residue in the N-terminus and a doublet Pro-Pro residues at the C-terminal portion. TsHpt-I, is a peptide isolated from the yellow scorpion Tityus serrulatus venom that, although sharing the Pro-Pro motif, do not exhibit the angiotensin converting enzyme (ACE) inhibition, as described to other known BPPs, although it is able both to potentiate bradykinin and to induce a fast and transient in vivo hypotension in normotensive rats. To better evaluate the observed hypotensive effect of TsHpt-I, CHO cells transfected with the bradykinin receptors were used to observe, by confocal microscopy, a fluorescence induced by nitric oxide production in stimulated cells by BK and TsHpt-I. Western Blot analyses in CHO B2 cells showed the phosphorilation of Ser 1177 residue, the excitatory site of eNOS, in presence of the BK and TsHpt-I, corroborating the confocal results. In a similar assay used for CHOB2 cells, the nitric oxide was measured in cardiomyocytes that express constitutively the BK receptors. In these cells, TsHpt-I, likewise BK, was able to induce the release of nitric oxide. This effect was abolished by HOE 140, an antagonist of the B2R. Synthetic minimized analogue from C-terminal portion of TsHpt-I, with only three aminoacids residues (KPP), was also able to keep the activity observed for the whole peptide. When KPP was acetylated at the lysine side-chain, the nitric oxide production was abolished, suggesting that the positive charge is essential for the bradykinin receptors agonism. The use of KPP in cardiomyocytes in presence of HOE 140, has abolished the fluorescence, as for TsHpt-I. In cardiomyocytes from double knockout mice for B1/B2, BK, TsHpt-I and KPP were not able to induce nitric oxide release. In this assay only the positive control group (Ang(1-7)) showed fluorescence. These results suggest the direct activation of BKR as a primary mode of action for TsHpt-I and the analog peptide bearing only three aminoacids (KPP). Also it was evidenced that the positive charge of the lysine is crucial for this activity.
Peptídeos potenciadores de bradicinina (PPB) podem ser encontrados em diferentes fontes animais, e, do ponto de vista estrutural, estes peptídeos apresentam uma assinatura contendo um resíduo de ácido piroglutâmico no N-terminal e dois resíduos de prolina na porção C-terminal. O peptídeo TsHpt-I foi previamente isolado da peçonha do escorpião amarelo Tityus serrulatus e descrito como um PPB. Embora apresente o motivo estrutural Pro-Pro, este peptídeo não inibe a enzima conversora de angiotensina (ECA), como descrito para outros PPBs conhecidos, além de ser capaz tanto de potenciar a bradicinina quanto induzir uma rápida e transiente hipotensão in vivo em ratos normotensos. Para avaliar a possível participação de receptores de bradicinina na hipotensão mediada pelo TsHpt-I, células CHO transfectadas com os receptores de bradicinina e marcadas com DAF foram observadas por microscopia confocal perante o estímulo com TsHpt-I. Foi possível observar um aumento na fluorescência induzida pela produção de óxido nítrico em células estimuladas com BK (controle) e TsHpt-I. Análises de western blotting em células CHO-B2 mostraram a fosforilação da Ser1177, o resíduo excitatório da eNOS, na presença de BK e TsHpt-I, corroborando os resultados obtidos pela microscopia confocal. Em ensaio semelhante ao utilizado em células CHO-B2, a liberação de óxido nítrico foi avaliada em cardiomiócitos, que expressam constitutivamente os receptores de cininas. Nestas células, o peptídeo TsHpt-I, assim como a bradicinina, também induziram a liberação de NO, sendo este efeito abolido por HOE 140, um antagonista de B2R. Um análogo sintético estruturalmente minimizado, de apenas três aminoácidos (KPP), foi capaz de manter a atividade observada para o peptídeo integro. A acetilação da cadeia lateral da lisina (acKPP), aboliu a liberação de oxido nítrico, sugerindo que a carga positiva deste aminoácido seja essencial para o efeito agonista dos peptídeos no receptor. Ao estimular os cardiomiocitos com o análogo KPP na presença de HOE 140, a fluorescência também foi abolida, assim como observado para TsHpt-I. Em cardiomiocitos de animais duplo knockout para B1/B2, não houve liberação de NO nas presenças de BK, TsHpt-I e KPP. Neste experimento, somente o grupo controle positivo (Ang(1-7)) aumentou a fluorescência. Os resultados sugerem a ativação direta de B2R como o modo de ação primário de TsHpt-I, sendo que o peptídeo análogo, de apenas três aminoácidos, é capaz de manter este efeito. Foi ainda observado que a carga positiva da cadeia lateral da lisina é essencial para esta atividade.

The evaluation of refractory mortars is commonly performed in the refractories industry under a macroscopic approach where the mortars workability is observed by means of the plasticity and its resistance after drying and further burning through strength bonding. The adherence of a mortar on the base from the substrate of a refractory brick occurs by mechanical or chemical mechanism. This adhesion is measured by the test of bonding strength and tends to show after drying, results slightly lower than after burning due to the formation of ceramic phases after burning. In order to demonstrate the changes in the rheological behavior and the mechanical properties with the storage time for the two different kinds of wet mortars based on sodium silicate binder, workability tests were conducted at predetermined intervals along twelve months, furthermore tests of bonding strength and microstructural analysis of interfaces mortar/refractory brick for each type of mortar were also performed. The selection and variation of the raw materials and constituent additives were made according to the authors own experimental and practical criteria, due to scarcity of articles or papers published about the subject. The basis of this experimental study was built up from two types of wet mortar linked to the same sodium silicate: one of them as mortar basis of fireclay chamote, clay and sodium silicate and the other aluminous mortar basis of fused alumina, clay and sodium silicate. The variations for preparing the mortars for this study were the amount of water defined by the workability desirable, the adding of additives modifiers of the interface solid / water, such as NaOH co-ion modifier superficial charges and CMC carboxymethylcellulose - a macromolecule that modifies the viscosity of system. The rheology of fireclay mortars studied was more affected than high alumina mortars due to the difference in porosity of its raw materials constituents. In general, it was observed that the loss of plasticity of the fireclay mortars was reduced when additives, modifiers of the interface solid/water, have been introduced in these experiments. In the first 15 days of storage wet mortars showed a big change in its rheology, from fluid to gelatinous state. The greatest evidence of change was observed for mortars rheological behavior for the fireclay classes without additives and the lowest one was for the high alumina classes with additives. The microstructural analyses of the interface refractory mortar/brick were conducted using scanning electron microscopy with EDS microanalysis (SEM-EDS) that led to the identification of sodium ion from the mortar penetrating into the micropores of the refractory brick. It is possible to conclude that the assumptions about the rheological changes truly are predominantly related to adsorption capillary mechanisms and when conditions are created for making this capillarity adsorption difficult, the mortars rheological characteristic is less affected during the storage. It was not confirmed that the loss of strength that occurred when modifiers, additives for the solid interface/water, were added in mortars during its mixing. In general, for both classes of mortars studied it was observed that the best strength bonding results have occurred after heat treatment at 1400°C during 5h.
A avaliação das argamassas refratárias é comumente realizada, no meio refratarista, sob um enfoque macroscópico onde se observa a trabalhabilidade através da variação da plasticidade das argamassas e sua resistência, após secagem e após queima, por meio da variação da força ligante. A aderência de uma argamassa à base do substrato de um tijolo refratário se dá por processo mecânico e químico. Esta aderência, medida pelo ensaio de força ligante, tende a apresentar, após secagem, resultados ligeiramente menores que após a queima, devido à formação de fases cerâmicas após a queima. A fim de demonstrar as variações do comportamento reológico e das propriedades mecânicas com o tempo de estocagem para duas diferentes classes de argamassas úmidas à base de silicato de sódio, foram realizados ensaios de penetração, em intervalos pré-determinados, ao longo de 12 meses, além de ensaios de força ligante e análise microestrutural das interfaces argamassa/tijolo refratário, para cada classe de argamassa. A seleção e variação de matérias-primas e aditivos constituintes foram realizadas conforme critérios experimentais práticos do próprio autor, devido à escassez de trabalhos publicados sobre o assunto. A base experimental deste trabalho foi construída a partir de dois tipos de argamassas úmidas ligadas a silicato de sódio: uma silicoaluminosa, argamassa à base de chamote silicoaluminoso, argila e bissilicato de sódio, e outra aluminosa à base de alumina eletrofundida, argila e bissilicato de sódio. As variações no preparo das argamassas para o estudo foram a quantidade de água definida pela penetração desejada, a adição de aditivos modificadores de interface sólido/água, como o NaOH, coíon modificador de cargas superficiais, e CMC carboximetilcelulose macromolécula modificadora da viscosidade do sistema em estudo. A reologia das argamassas silicoaluminosas estudadas foi mais afetada que a das argamassas aluminosas devido à diferença na porosidade de seus constituintes. Foi observado, de uma maneira geral, que a perda de plasticidade das argamassas foi reduzida quando se introduziram aditivos modificadores de interface sólido/água nos experimentos. Nos primeiros 15 dias de estocagem, algumas argamassas úmidas apresentaram uma mudança elevada em sua reologia, passando do estado fluido ao estado gelatinoso. A maior evidência de alteração reológica foi observada para argamassa de classe silicoaluminosa sem adição de aditivos e a menor para a classe aluminosa aditivada. As análises microestruturais da interface argamassa/tijolo foram realizadas utilizando-se microscopia eletrônica de varredura com microanálise EDS (MEV-EDS) que permitiram a identificação do íon sódio das argamassas penetrando nos microporos e poros do tijolo refratário. Conclui-se, através deste estudo, que as suposições sobre as modificações reológicas realmente estão predominantemente relacionadas aos aspectos de absorção capilar, notadamente a distribuição de poros muito pequenos. Quando se criam condições para dificultar a absorção, esta característica reológica da argamassa é menos afetada ao longo do tempo. Não se pode afirmar que ocorreu perda de resistência mecânica quando se adicionaram aditivos modificadores de interface sólido/água às argamassas. Observou-se que, de maneira geral, os melhores resultados dos testes de força ligante ocorreram após tratamento térmico a 1400ºC por 5 horas, para ambas as classes de argamassas estudadas.

Introduction: Several aging-related immunological alterations are already described in medical literature, mostly in the T cell compartment. Senescence is reportedly associated with susceptibility to infection and progressive decline in immune function. We have shown previously, in two endemic areas in Minas Gerais, Brazil, that the frequency of individuals over 60 with chronic schistosomiasis is no longer negligible. There has been no systematic study of the immune response of individuals over 60 living in S. mansoni endemic areas. Since aging is associated with a decline in T cell function, it is not surprising that individuals over 60 would be more susceptible to infection. However, not all aged individuals in endemic areas have high intensity of infection, several old individuals who always lived in these endemic areas stay protected from infection. Non-infected, negative individuals may develop compensatory mechanisms to cope with immune dysfunction and to generate protective responses against the constant threat of infection in these areas. An important question for studies of aging and disease control in developing countries is which differences in the immunological profile of these negatively tested (non-infected) individuals can account for their resistance to either infection or re-infection. Subjects and Methods: We studied from 73 individuals (38 health controls and 35 with chronic schistosomiasis) divided into tree age groups (7-18, 19-59 and 60-94 years), were analyzed. Levels of citokines (IL-6 and TNF-) and dehifroepiandrosterone (DHEA) in the plasma were measured. Were analyzed PBMC from two of these 3 groups of individuals (adult and elderly) by flow cytometry for the expression of TLR-1, 2, 3 e 4 in NK cells, NKCD56low, NKCD56high cells, dendritic cells, monocytes and lymphocytes B. Moreover, we have accessed the frequency of regulatory T cells by the expression of latency-associated peptide (LAP) (PE-labeled anti-LAP) in CD4+ T cells (FITC-labeled anti-CD4) and expression of CD25 and FoxP3 in CD4+ T cells. Results: There was no difference in the levels of cytokines among groups. Levels of DHEA were decreased in infected elderly group when compared with infected adult group and infected young group. This can be effects of the synergism among immunesenescence and schistosome chronic infection. We showed, in the present study, that healthy aged individuals (non-infected) develop innate immune mechanisms of protection that replace the age associated decline in T cell function. Non-infected aged individuals from endemic areas of schistosome infection present increase in the frequency of NKCD56low subset of NK cells expressing TLR 1, 2, 3 and 4 as determined by flow cytometry analysis. In addition, the proportion of dendritic cells expressing TLR1 is elevated as well as the frequency of monocytes expressing TLR1 and 4. Moreover, we have observed that infected elderly individuals showed an increase in the frequency CD4+CD25+Foxp3+ and CD4+LAP+ T cells. Conclusions: We showed that two mechanisms contribute to distinguish between infected and non-infected aged individuals. First, healthy aged individuals (non-infected) develop innate immune responses to replace the decline in T cell function that is observed with aging. Second, chronically activated regulatory T cells, that may impair protective immune responses, are more vigorous in infected aged individuals. These results suggest that TLR expression by cells of the innate immune system may be related to the negative status of infection in some aged individuals that are constantly exposed to S. mansoni. Developing mechanisms of protection from infection may represent a biomarker for healthy aging in this population.
Introdução: Envelhecimento humano está associado com alterações drástica no sistema imune, a maioria relacionada às células T, que resultam no declíneo progressivo de suas funções. Desde que envelhecimento está associado a deficiências na atividade das células T, não é surpresa o fato de indivíduos idosos estarem mais susceptíveis a infecções. Não existem estudos sistemáticos sobre a resposta imune de indivíduos idosos residentes em áreas endêmicas para S. mansoni. Em um estudo prévio em duas áreas endêmicas de Minas Gerais, Brasil, nosso grupo observou um número considerável de indivíduos com idade acima de 60 anos vivendo nessas áreas, que não pode mais ser ignorado. No entanto, nem todos esses idosos tem alta intensidade de infecção e vários deles que sempre viveram nessas áreas endêmicas permanecem protegidos da infecção e apresentam exame de fezes negativo para ovos de S. mansnoni. Uma questão importante para estudos sobre envelhecimento e controle de doenças em países em desenvolvimento é quais diferenças existem no perfil imunológico dos indivíduos que não se infectam, capazes de conferir proteção contra a infecção ou re-infecção. Indivíduos idosos não infectados devem desenvolver mecanismos para compensar a disfunção imune e gerar resposta protetora contra constante ameaça de infecção nessas áreas. Indivíduos e Métodos: No presente estudo foram incluídos 73 indivíduos (38 não infectados e 35 infectados com S. mansoni), divididos em três grupos etários (7-18, 19-59 e 60-94 anos). Avaliamos por ELISA os níveis das citocinas IL-6 e TNF- e do hormônio do envelhecimento DHEA; e por citometria de fluxo a expressão de receptores envolvidos na imunidade inata TLR-1, 2, 3 e 4 em células NK, células dendríticas, monócitos e linfócitos B. Mecanismos reguladores em células T foram avaliados pela expressão de Foxp3 em linfócitos TCD4+CD25+ em cultura (microgranuloma in vitro) e a expressão de LAP em linfócitos CD4+ no sangue periférico. Resultados: Nós mostramos que indivíduos idosos não infectados residentes em área endêmica para S. mansoni apresentam maior freqüência de NKCD56low expressando TLR-1, 2, 3 e 4; maior freqüência de células dendríticas expressando TLR-1 e maior freqüência de monócitos que expressam TLR-1 e 4. Além disso, também podemos observar que indivíduos idosos infectados possuem maior freqüência de células CD4+CD25+Foxp3+ e CD4+LAP+. As dosagens de citocinas não foram diferentes entre os grupos e a dosagem de DHEA foi menor nos indivíduos idosos infectados quando comparados com adultos infectados, indicando que variações nos níveis desse hormônio em nossos indivíduos pode estar mais associado ao sinergismo dos efeitos do envelhecimento e da infecção crônica por S. mansoni. Conclusões: Nós mostramos no presente estudo que dois mecanismos imunológicos contribuem para distinguir indivíduos idosos infectados de idosos saudáveis (não infectados). Primeiro, indivíduos idosos saudáveis desenvolvem mecanismos de imunidade inata que operam na deficiência das células T durante o envelhecimento, conferindo proteção. Segundo, células T reguladoras cronicamente ativadas, capazes de prejudicar a imunidade protetora, estão presentes com maior freqüência em indivíduos idosos infectados. A partir desses resultados, podemos sugerir que a expressão de TLR em células da imunidade inata pode ser relacionada com a condição de negativo para infecção por S. mansoni em alguns indivíduos idosos expostos constantemente à infecção. O desenvolvimento de mecanismos de proteção contra infecção pode representar um biomarcador de envelhecimento saudável nesta população.

The main occupational hazards found in workplaces include dust exposure, facilitating the increase of respiratory diseases, of which silicosis is the most important. Due to the importance and gravity of the occupational exposure to dust and to the high number of workers exposed, the aim of this paper was to study the characteristics of this exposure in the ornamental stone works. This study was based on the application of new conventions adopted internationally by the American Conference of Governmental Industrial Hygienists (ACGIH), International Organization for Standardization (ISO) and Comité Europeén de Normalisation (CEN) for the classification of types of dust by particle size range. The occupational exposure characterization took into consideration the relations between and among dust concentrations in workplaces, the types of rocks worked on, wet and dry operations, the machinery and tools used and the size distribution of particles suspended in the air, with the use of state-of-the-art sampling and measuring instruments. The samples were analyzed using the techniques of gravimetry, X-ray diffraction, optical microscopy, scanning electronic microscopy and particle analysis by the time-of-flight technique. The workplaces of the stone works were characterized by high concentrations of dust in all the sampled fractions (inhalable, thoracic and respirable), produced by the tools used in the dry abrasive polishing sector. The silica concentrations were up to 16 times higher than the maximum value recommend by ACGIH in 2004. The preponderant average aerodynamic diameter presented by the particles sampled at the stone works was between 2.2 and 3.9 m, corresponding to the range of highest alveolar deposition, and therefore, to the greatest risk of acquiring silicosis and lung cancer. The evaluation of a stone works that adopted the wet abrasive polishing process with pneumatic sanders showed that the probability of environmental concentrations exceeding the occupational reference values for the inhalable and respirable fractions could be reduced by up to 99%. Likewise, wetting at the dust generation source showed a 93% reduction in the quantity of particles suspended in the air, in comparison to the stone works that operated with dry abrasive polishing.
Entre os principais riscos encontrados nos ambientes de trabalho está a exposição a poeiras, favorecendo o aumento de doenças do sistema respiratório, sendo que a silicose é a mais importante delas. Devido à importância e à gravidade de exposição ocupacional a poeiras e ao número elevado de trabalhadores expostos, este trabalho se propôs a estudar as características dessa exposição no beneficiamento de rochas ornamentais em marmorarias. Este estudo teve como base a aplicação das novas convenções adotadas internacionalmente pela American Conference of Governmental Industrial Hygienists (ACGIH), International Organization for Standardization (ISO) e Comité Europeén de Normalisation (CEN) para a classificação de poeiras por faixa de tamanhos de partícula. A caracterização da exposição ocupacional levou em consideração as relações entre as concentrações de poeira nos ambientes de trabalho, os tipos de rochas trabalhadas, as operações a úmido e a seco, as máquinas e ferramentas utilizadas e a distribuição dos tamanhos das partículas suspensas no ar, tendo sido utilizados instrumentos de amostragem e medição de última geração. As amostras foram analisadas utilizando as técnicas de gravimetria, difratometria de raios-X, microscopia ótica, microscopia eletrônica de varredura e análise de partículas pela técnica de tempo de vôo. Os ambientes de trabalho das marmorarias se caracterizaram por altas concentrações de poeira em todas as frações amostradas (inalável, torácica e respirável), originadas pelas ferramentas utilizadas no setor de acabamento a seco. As concentrações de sílica chegaram a ser 16 vezes superiores ao valor limite recomendado pela ACGIH em 2004. O diâmetro aerodinâmico médio predominante apresentado pelas partículas coletadas nas marmorarias estava no intervalo de 2,2 a 3,9 m, correspondendo à faixa de maior deposição alveolar e, portanto, de maior risco de se adquirir silicose e câncer de pulmão. A avaliação de uma marmoraria que adotou o processo de acabamento a úmido com lixadeiras pneumáticas mostrou que a probabilidade das concentrações ambientais ultrapassarem os valores de referência ocupacionais para as frações inalável e respirável pôde ser reduzida em até 99%. Da mesma maneira, a umidificação na fonte de geração da poeira mostrou redução de 93% na quantidade de partículas suspensas no ar, em comparação com as marmorarias que operavam com acabamento a seco.

Sm14 and paramyosin are S. mansoni antigens able to induce partial protection in the murine model, and are recognized by individuals resistant to S. mansoni. Recently our group has identified Sm14 and paramyosin epitopes preferentially recognized by PBMC of S. mansoni resistant individuals [Sm14 (32-48), Sm14 (53-69), Para (6-22), Para (210-226), Para (355-371)]. In order to investigate the protective potential of these synthetic epitopes peptide-based vaccines formulations were prepared using a mixture of Sm14 and paramyosin peptides or Sm14 or paramyosin separately. Immunization of mice with peptide total mixture or Sm14 peptides were able to induce a Th1 type of immune response, that was associated respectively with a significant reduction on worm burden [(29%; 28%) and (26%; 36.7%)]; reduction in the number of viable eggs/female worms (46% and 67%); reduction in the number of granuloma (52% an 61%) and granuloma area (43% and 54%). On the other hand, paramyosin peptide immunization did not engender protective immunity or pathology reduction and it was associated with a Th2 type of immune response. Since eggs in host tissues are the major cause of pathology, and schistosomes do not replicate within their mammalian hosts, an anti-fecundity vaccine, could decrease human pathology and disease transmission. Here we observed that immunization with Sm14 T cell epitopes previous recognized by resistant individuals seems to be able to induce reduction in fecundity and pathology, and therefore are potential candidates to compose a subunit vaccine against schistosomiasis.
A Sm14 e paramiosina são antígenos vacinais do S. mansoni capazes de induzir proteção em modelo murino e são reconhecidos por indivíduos resistentes à infecção pelo S. mansoni. Recentemente nosso grupo identificou epitopos da Sm14 e paramiosina preferencialmente reconhecidos por PBMCs de indivíduos resistentes a infecção e reinfecção por S. mansoni [Sm14 (32-48), Sm14 (53-69), Para (6-22), Para (210-226), Para (355-371)]. A fim de investigar o potencial protetor destes epitopos sintéticos, formulações vacinas baseadas em peptídeos foram preparadas usando uma mistura de peptídeos da Sm14 e paramiosina ou Sm14 ou paramiosina separadamente. Imunização de camundongos com mistura total de peptídeos ou peptídeos da Sm14 foi capaz de induzir uma resposta imune do tipo Th1 que foi associada respectivamente a uma redução na carga de vermes de {(29%, 28%) e (26%, 36.7%)}; redução do número de ovos viáveis/fêmea de 46% e 67%; redução no número de granulomas de 52% e 61% e na área dos granulomas de 43% e 54%. Por outro lado, imunização com peptídeos da paramiosina não induziu imunidade protetora ou redução da patologia e foi associada a uma resposta imune do tipo Th2. Uma vez que os ovos nos tecidos são a principal causa da patologia e os vermes adultos não se replicam dentro do hospedeiro mamífero, uma vacina anti-fecundidade poderia reduzir a patologia humana e transmissão da doença. Aqui nós observamos que imunização com epitopos de células T da Sm14 previamente reconhecidos por indivíduos resistentes parece ser capaz de induzir redução na fecundidade e redução da patologia e, portanto são candidatos em potencial a compor uma vacina de subunidades contra esquistossomose.

Oral administration of protein antigens, such as ovalbumin, may result in induction of either tolerance or immunization. Induction of immune responses is of great interest for development of oral vaccines. On the other hand, oral tolerance may represent a therapeutic solution to allergic and auto-immune diseases. Induction of oral tolerance depends on many factors such as structure and dose of the administered antigen, as well as age and genetic background of the animal. To avoid oral tolerance, there are new strategies to protect the antigens from degradation within the gastrointestinal tract and to allow them to reach the mucosa associated lymphoid tissue and spleen. One such strategy is the usage of liposomes. Herein, we studied the immunological effects of oral administration of liposome-encapsulated ovalbumin in B6D2F1, C57BL/6, BALB/c and Swiss mice. Multilamellar vesicles (MLV), large unilamellar vesicles (LUV) and small unilamellar vesicles (SUV) were prepared. Liposomes were made of soybean phosphatidylcholine (PC), cholesterol (CH) and phosphatidylglycerol (PG) or distearoylphosphatidylcholine (DSPC), CH and PG or PC, CH and phosphatidylserine (PS) or DSPC, CH and PS. Our data demonstrated that immune response obtained depend on the liposome type and on the strain of mice used. We also observed that antigen gastrointestinal traffic and absorption changed according to the form of administration of ovalbumin (free or encapsulated). The biodistribution differences found between free and encapsulated OVA may represent alternative mechanisms for induction or not of oral tolerance. The mechanism responsible for this differential effect of liposomes depended on the site of antigen release and absorption. Therefore, SUV-DSPC/CH/PG liposomes might be suitable for systemic immunization while LUV liposomes might be used as adjuvants for local immunization.
A administração oral de antígenos protéicos, como a ovalbumina, pode levar a eventos imunológicos distintos: indução de tolerância ou imunização. A indução de respostas imunes locais e/ou sistêmicas é de grande importância para o desenvolvimento de vacinas orais. Já a tolerância oral pode vir a representar uma solução terapêutica para doenças alérgicas e auto-imunes. O mecanismo responsável pela indução da tolerância oral é dependente de diversos fatores tais como: dose e freqüência do antígeno administrado; natureza e forma de administração do antígeno, idade e aspectos genéticos do hospedeiro. Para o desenvolvimento de imunidade pela via oral se faz necessário evitar o estabelecimento da tolerância oral. Nesse sentido, novas estratégias têm sido desenvolvidas para se proteger o antígeno da degradação durante o trânsito gastrintestinal e possibilitar que ele atinja o tecido linfóide associado à mucosa intestinal e baço. Uma das estratégias utilizadas é o uso de lipossomas. Assim, o objetivo deste trabalho foi verificar as conseqüências imunológicas da administração oral de um antígeno, ovalbumina, encapsulado em lipossomas, em camundongos B6D2F1, C57BL/6, BALB/c e Swiss. Foram preparados lipossomas multilamelares (MLV), unilamelares de grande tamanho (LUV) e unilamelares de pequeno tamanho (SUV), compostos de fosfatidilcolina de soja (PC), colesterol (CH) e fosfatidilglicerol (PG); diestearoilfosfatidilcolina (DSPC), CH e PG; PC, CH e fosfatidilserina (PS) ou DSPC, CH e PS. Foi observado que a resposta imune obtida após administração oral da OVA encapsulada foi influenciada tanto pela linhagem de camundongo quanto pelo tipo de lipossoma utilizado. Além das diferenças observadas nas respostas imunes geradas, foi constatado que o trânsito gastrintestinal e absorção do antígeno pelo organismo também foi alterado de acordo com a forma de administração da ovalbumina. As diferenças encontradas na biodistribuição da OVA livre ou encapsulada podem representar mecanismos que determinam a indução ou não de tolerância oral. O mecanismo responsável pelas diferenças observadas parece estar relacionado com o local de liberação do antígeno pelos lipossomas e sua absorção. Portanto, lipossomas SUV-DSPC/CH/PG podem ser mais adequados para se obter uma imunização sistêmica, enquanto lipossomas LUV podem ser utilizados como adjuvantes na imunização local.

Trypanosoma cruzi expresses several proteins containing highly antigenic amino acid repeats. Here we characterized TcRpL7a and TcRBP28, which carry similar repeat motifs and share homology to the eukaryotic L7a ribosomal protein and to a T. brucei RNA binding protein, respectively. Analyses of the full length and truncated recombinant TcRpL7a showed that the humoral response of patients with Chagas disease is directed towards its repetitive domain. Sequence analyses of copies of TcRpL7a genes present in the genome of six T. cruzi strains indicate that the number of repeats is higher in T. cruzi II than in T. cruzi I strains. A serum panel of 59 patients showed that 73% reacted with TcRpL7a, 71% reacted with TcRBP28 and 80% reacted with 1:1 mixture of both antigens. Synthetic peptide harboring the TcRpL7a repeat motif reacted with 46% of chagasic sera. Antibodies raised against both antigens identified equivalent amounts of the native proteins in all three stages of the parasite life cycle. Analyses of subcellular fractions indicated that TcRBP28 is present in the cytoplasm whereas TcRpL7a co-fractionates with polysomes. Confirming their predicted cellular localization, GFP fusions showed that, whereas GFP::TcRBP28 localizes in the cytoplasm, GFP::TcRpL7a accumulates in the nucleus, where ribosome biogenesis occurs. Mice immunized with TcRpL7a::his presented high levels of IgG1 and IgG2a antibodies and INF-g secreting cells as well. Ongoing experiments are being done to evaluate the capacity of TcRpL7a to generate protection in mice against parasite infection.
O Trypanosoma cruzi expressa diversos antígenos contendo seqüências com aminoácidos repetitivos. Neste trabalho foram caracterizados os antígenos TcRpL7a e TcRBP28 que contém repetições de aminoácidos semelhantes e apresentam similaridade com a proteína ribossômica L7a de eucariotos e com proteínas de ligação a RNA de T. brucei respectivamente. Ensaios de Western blot usando a proteína TcRpL7a completa e truncada indicaram que a resposta humoral dos pacientes é exclusiva contra a região repetitiva. Uma análise das seqüências de TcRpL7a de seis cepas diferentes do parasito indicaram que o número de módulos repetitivos é maior em cepas pertencentes à linhagem II de T. cruzi. 73% de um painel de 59 pacientes chagásicos apresentaram reatividade contra TcRpL7a, 71% contra TcRBP28 e 80% contra uma mistura dos dois antígenos. Um peptídeo sintético correspondente a uma parte da região repetitiva de TcRpL7a apresentou 46% de reatividade com os soros. Anticorpos gerados em camundongos identificaram as proteínas nativas presentes em níveis similares em todas as formas do ciclo de vida do parasito. Análises de frações subcelulares indicaram que TcRBP28 está presente no citoplasma e que TcRpL7a co-precipita com a fração de polissomos. A fusão com GFP confirmou a localização citoplasmática de TcRBP28 e mostrou um acúmulo da proteína GFP::TcRpL7a no núcleo da célula onde ocorre a biogênese do ribossomo. Camundongos imunizados com TcRpL7a::his desenvolveram anticorpos anti-IgG1/2a e apresentaram maior número de células secretoras de IFN-g. A capacidade de TcRpL7a de conferir proteção está sendo avaliada no presente momento.

The toxin Tx3-1 purified from the spider venom Phoneutria nigriventer is a blocker of potassium channels with great pharmacological potential. However the purification of the toxin from Phoneutria nigriventer crude venom is a long and expensive process. The objective of this work was standardize techniques of molecular biology that would allow the expression and purification in large scale of functional recombinant Tx3-1. We cloned and expressed the toxin Tx3-1 tagged to the C-terminus of the maltose binding protein (MBP) in the cytoplasm of E. coli BL21. The hybrid protein purification was performed by affinity chromatography (amylase column). After purification, MBP-TX3-1 was cleaved by Factor Xa and recombinant Tx3-1 was purified by gel filtration using Superdex 75 column in FPLC system. Both, fusion protein MBP/Tx3-1 and recombinant Tx3-1 reacted with anti-Phoneutria nigriventer venom antibodies. The biological activity of recombinant toxin Tx3-1 was tested in biological assays and compared to native toxin biological activity. In experiments using rats cardiomyocytes, recombinant Tx3-1 toxin was able to increase the calcium transient in 20%, similarly to native toxin. Treatment of isolated rat hearts and atriums with recombinant Tx3-1, and native toxin, led to decrease in arrhythmia. These data suggest that the recombinant and native Tx3-1 probably present the same three-dimensional structure and function. These results open up the possibility of using the recombinant Tx3-1 to determine the molecular structure and action mechanisms of Tx3-1. Moreover, the recombinant protein enables the possibility of using the toxin Tx3-1 as a therapeutic drug for prevention and treatment of hearts diseases.
A toxina Tx3-1 purificada do veneno da aranha Phoneutria nigriventer, é um bloqueador de canais de potássio, com grande potencial farmacológico. Porém a purificação dessa toxina a partir do veneno total da aranha Phoneutria nigriventer é um processo longo e dispendioso. O objetivo desse trabalho foi padronizar técnicas de biologia molecular que permitissem a expressão e purificação de grandes quantidades da toxina Tx3-1 recombinante com características funcionais semelhantes à da proteína nativa. Nós clonamos e expressamos a toxina Tx3-1 como um híbrido ligado a proteína ligadora de maltose (MBP) no citoplasma de E.coli BL21. Após purificação desta proteína híbrida por cromatografia de afinidade (coluna de amilose), a MBP-TX3-1 foi clivada por Fator Xa e a Tx3-1 recombinante foi purificada por gel filtração em coluna Superdex 75 em Sistema FPLC. Tanto a proteína de fusão MBP/Tx3-1 quanto a Tx3-1 recombinante reagiu com anticorpos antiveneno total da aranha Phoneutria nigriventer, indicando que a toxina foi clonada em fase de leitura correta. A atividade biológica da toxina Tx3-1 recombinante foi testada em ensaios biológicos e comparada com a atividade da toxina nativa. Semelhantemente à toxina nativa, em ensaios utilizando cardiomócitos de rato a toxina Tx3-1 recombinante foi capaz de aumentar a amplitude do cálcio transiente em 20%, quando comparada ao controle. Em ensaios com coração e átrios isolados de rato, a Tx3-1 recombinante apresentou efeito semelhante ao da Toxina Tx3-1 nativa, na redução do tempo de arritmia. Esses dados sugerem que a toxina Tx3-1 recombinante e a nativa apresentam a mesma estrutura tridimensional e abrem a possibilidade de utilizarmos a Tx3-1 recombinante para determinação da estrutura molecular da toxina e também para obter detalhes sobre o mecanismo molecular da ação da toxina. Além disso, a Tx3-1 recombinante viabiliza a possibilidade de utilização da toxina Tx3-1 como agente terapêutico para prevenção e tratamento de distúrbios cardíacos.

The majority of contacts with foreign antigenic materials occurs on the gut mucosa, and is represented by food proteins and the microbiota. Approximately 30 kg of food proteins reach the human intestine per year and 130±190 g of these proteins are absorbed daily in the gut (Mestecky, 1987). Recently, we described a mouse model where we replaced intact dietary proteins with equivalent amounts of amino acids (Aa) from weaning and investigated its effects on the development of the immune system. We observed that adult animals reared on a balanced protein-free diet (Aa-mice) have a poorly developed gut-associated lymphoid tissue resembling suckling mice. In vitro cytokine production by cells from several lymphoid organs shows a predominant Th2 profile with a high concentration of IL-10 and IL-4, and a low concentration of IFN-g (Menezes e cols., 2003). In this study, we observed that introduction of a protein-containing diet to mice treated with Aa diet from weaning up to 8 weeks of age recover ed their immunoglobulin levels in three days. This recovery is dependent on the amount of protein present in the diet. At least 10% of casein are necessary to promote normal standards of GALT development and immunoglobulin production. To study the role of dietary proteins in development of infectious disease, we infected mice that were treated with Aa diet with Leishmania major. Mice that were fed Aa diet since weaning were inoculated with 1 million parasites and lesion development was followed for 4 weeks. Aa mice show an increase in footpad lesion and parasite load as well as a reduction in IFN-g production by in vitro stimulated popliteal lymph node cells when compared to control mice. In addition, Aa diet-fed mice have a decreased expression of CD40 in macrophages and CD80 in dendritic cells when compared to control mice. Interestingly, antigen presenting cells from Aa-mice and from 3 week-old pre-weaning mice have a similar level of expression of co-stimulatory molecules such as CD40, CD80 and CD86. Our data indicates that stimulation by dietary proteins has a physiological role in maturation of immune system probably by activating antigen presenting cells and, as a consequence, T lymphocytes. The immature state of Aa-fed C57BL/6 mice seems to interfere in their ability to clear infection with Leishmania major.
A maioria dos contatos com materiais antigênicos ocorre na mucosa intestinal, e são representados pela microbiota e pelas proteínas da dieta. Recentemente, foi descrito em nosso laboratório um modelo de camundongos alimentados, desde o desmame até a idade adulta, com uma dieta onde as proteínas intactas da dieta são substituídas por quantidades equivalentes de aminoácidos (Aa). Os animais que consumiram a dieta de Aa apresentaram um baixo desenvolvimento dos tecidos linfóides associados à mucosa e a diminuição na produção de IgA secretória. Sistemicamente, foi observada a redução dos níveis séricos de IgG e IgA. A produção de citocinas por células de diferentes órgãos linfóides desses animais mostrou ainda uma predominância do perfil Th2, com altas concentrações de IL-10 e IL-4 e baixa concentração de IFN-g (Menezes e cols., 2003). Esses dados, em conjunto, sugerem que animais alimentados com a dieta sem proteínas inteiras apresentam um perfil imunológico semelhante ao de neonatos e sugerem que as proteínas da dieta têm um papel crítico na maturação do sistema imune a partir do desmame. Neste trabalho, nós mostramos que animais tratados com a dieta de Aa desde o nascimento até a idade adulta recuperaram sua capacidade de produção de imunoglobulinas três dias após a introdução da dieta controle (contendo caseína). Mostramos também que essa recuperação é dependente da quantidade de proteína intacta presente na dieta, sendo necessário, pelo menos, 10% de proteína íntegra para a produção de níveis de imunoglobulinas comparáveis ao grupo controle. Para analisar o papel das proteínas da dieta no desenvolvimento de doença infecciosa, estudamos os efeitos da administração da dieta Aa em camundongos C57BL/6 infectados com Leishmania major. Camundongos tratados, desde o desmame até 8 semanas de idade, com a dieta Aa foram inoculados com 1 milhão de parasitos na pata esquerda e o desenvolvimento da lesão foi acompanhado até a 12ª semana de idade. Camundongos tratados com dieta Aa apresentaram um aumento da lesão e do parasitismo local juntamente com uma redução na produção de IFN-g por células de baço e linfonodo poplíteo estimuladas in vitro com antígenos do parasito. Esses mesmos animais apresentaram, nos linfonodos, uma expressão reduzida de CD40 em macrófagos e de CD80 em células dendríticas. Nós observamos ainda que o perfil de expressão de moléculas co-estimuladoras de animais adultos mantidos na dieta Aa é similar ao perfil apresentado por células de animais com 3 semanas de idade (pré-desmame). Esses dados indicam que a estimulação pelas proteínas da dieta tem um papel importante na maturação do sistema imune, provavelmente pela ativação de células apresentadoras de antígeno e, conseqüentemente, linfócitos T.

An adequate immune response is essential for optimal host resistance against invading microorganisms. Here we show that a combination of different Toll Like Receptors (TLRs) are required for adequate recognition of pathogen and optimal immune response with high production of IFN- and nitric oxide (NO). NO is considered the major IFN--induced killing agent against L major and T. cruzi and its production depends on adequate immune response activation through a combination of different Toll Like Receptors. Recently, new data challenged such assertion. Cummings et al (2004) showed that while IFN- deficient (KO) mice are extremely susceptible to T. cruzi, NOS2 deficient KO mice can be resistant. Similar results can be also observed in leishmaniasis, we found that IFN- KO animals died 11 weeks after infection with L. major, while NOS2 KO mice survived up to 30 weeks. In addition, pathology and visceralization of parasites were dramatic in IFN- KO mice, with high levels of tissue parasitism in liver and spleen, sites barely affected in NOS2 KO. Such results clearly demonstrate that, similarly to infection with T. cruzi, additional IFN--induced mechanisms are important to control L. major. ROS was investigated as a possible mechanism associated to NO in inducing host resistance to L. major or T. cruzi, but in none of these parasites, ROS was found to play major role in containment of parasite replication. However, our results suggest that ROS may have a role in restricting systemic effects of high levels of NO induced by T. cruzi infection since phox KO animals displayed 100% of mortality till day 21 post- infection. Such mortality was found to be associated to a good control of parasite in tissues and blood, and augmented levels of NO in serum. The mechanisms involved in enhanced susceptibility of phox KO mice to T. cruzi infection are still under investigation. Our further investigation demonstrates that recently described IFN- induced p47GTPases might be the connecting key between IFN--dependent and NO- independent effector mechanisms. Infected wild-type (WT) and NOS2 KO mice were found to express higher levels of LRG-47, IRG and IGTP in the footpad, lymph node, spleen and liver than IFN- KO animals. Coherently, unpublished data by Belkaid et al. show that both LRG-47 KO and IGTP KO mice are highly susceptible to L. major. We also found LRG-47 was up regulated in the spleen during T. cruzi infection. To better investigate the role of p47GTPase LRG-47 in response this pathogen, we infected WT and LRG-47 KO animals with 100 blood trypomastigotes and evaluated parasitemia, survival and immune-pathologic responses. LRG-47 KO mice displayed almost similar parasitemia to WT control till 12 days of infection. Thereafter, control of parasites in the blood and tissues was lost in LRG-47 KO mice. This enhanced parasitism was associated with 100% of mortality at day 19 of infection. LRG-47 KO mice exhibited unimpaired inflammatory responses throughout the infection. In vitro studies revealed that LRG-47-deficient macrophages present impaired killing of T. cruzi even when stimulated with IFN- and that such deficiency was not associated with reduced TNF or NOS2 expression. Inhibition of NOS2 in LRG-47 KO macrophages and gene silencing LRG-47 expression in NOS2 deficient macrophages revealed that both mechanisms are independent of each other. We suggest that both mechanisms cooperate for optimal IFN--induced control of parasite replication.
O desenvolvimento adequado da resposta imune é essencial para a resistência do hospedeiro contra microorganismos invasores. Neste trabalho, demonstramos que a combinação de diferentes TLRs é necessária para um reconhecimento adequado do patógeno e uma resposta imune em níveis ótimos com alta produção de IFN- e óxido nítrico (NO). NO é considerado o mais importante anti-microbiano induzido por IFN- na resistência a L. major e T. cruzi. Entretanto, recentemente Cummings et al (2004) demonstraram que enquanto camundongos deficientes para IFN- (ifn- KO) são extremamente susceptíveis ao T. cruzi, camundongos deficientes para NOS2 (nos2 KO) são resistentes. Resultados semelhantes podem também ser observados na leishmaniose, nossos dados demonstram que animais ifn- KO morrem com 11 semanas após a infecção com L. major, enquanto animais nos2 KO sobrevivem por até 30 semanas de acompanhamento. Além disso, a patologia e a visceralização do parasita para o fígado e baço foram muito mais graves nos camundongos ifn- KO quando comparados aos camundongos nos2 KO. Tais resultados claramente demonstram que, semelhante à infecção por T. cruzi, mecanismos adicionais induzidos por IFN- são importantes para o controle da L. major. Assim, o papel de ROS foi estudado como um possível mecanismo complementar na imunidade a L. major e T. cruzi. Em nenhum desses modelos a ação de ROS na contenção da replicação parasitária foi considerada relevante. Todavia, nossos resultados sugerem que ROS podem ter um papel na restrição dos efeitos sistêmicos do NO induzido na infecção por T. cruzi. Nós demonstramos que animais deficientes para NADPH oxidase (phox KO) atingiam 100% de mortalidade até o dia 21 após a infecção apresentando um controle adequado no parasitismo nos tecidos e no sangue, níveis aumentados de NO no soro e instabilidade pressórica, embora os mecanismos envolvidos com a susceptibilidade dos animais phox KO ante a infecção com T. cruzi ainda estejam em estudo. Estudos adicionais demonstraram que as recentemente descritas p47GTPases, uma famílias de proteínas induzidas por IFNs, podem ser o elo entre a imunidade dependente de IFN- e independente de NO a tais parasitas. Animais selvagens (WT) e nos2 KO infectados com L. major expressam níveis bem mais altos de LRG-47, IRG-47 e IGTP na pata, linfonodo, baço e fígado que aqueles apresentados por camundongos ifn- KO. Encontramos também que LRG-47 tem sua expressão aumentada durante a infecção por T. cruzi. Para melhor investigar o papel da LRG-47 a tal patógeno, infectamos camundongos WT e LRG-47 KO com 1000 formas tripomastigotas e avaliamos a parasitemia, sobrevivência e resposta imuno- patológica. Os animais LRG-47 KO apresentaram uma parasitemia muito próxima ao selvagem até o dia 12 de infecção com a perda do controle do parasita no sangue após essa data. O aumento do parasitismo sanguíneo esteve associado a mortalidade de 100% até o dia 19 após a infecção. Apesar disso, os animais LRG-47 KO exibiram resposta pró-inflamatória preservada ao longo da infecção. Estudos in vitro revelaram que macrófagos deficientes em LRG-47 apresentavam uma capacidade reduzida de matar o T. cruzi até mesmo quando estimulados com IFN-. Tal deficiência, entretanto, não esteve associada a uma expressão prejudicada de TNF ou NOS2. A inibição de NOS2 em macrófagos LRG-47 KO e o silenciamento genético de LRG-47 em macrófagos NOS2 KO revelaram que ambos mecanimos são independentes. Assim, sugerimos que cooperam para uma ótima resposta induzida por IFN- no controle da replicação do parasita.

Voltage-gated sodium channels are the molecular targets of several groups of toxins that bind to specific receptor sites and modify their function. The well-know a-scorpion toxins bind in a voltage-dependent way to site 3, which is partially formed by the extracellular loop connecting S3 and S4 segments of domain IV, slowing down fast inactivation. While the movement of S4-DIV seems to be required for inactivation, its importance for the activation is still a matter of dispute. Several evidences suggest that S4- DIV has an important role in the voltage-dependent association of the site 3 toxins, however a molecular mechanism is still unknown. We studied the effects of Ts3, an a-toxin purified from the Brazilian scorpion Tityus serrulatus , on native sodium channels of GH3 cells and rat skeletal muscle sodium channels expressed in Xenopus laevis oocytes. We have observed an increase of the slow component of fast inactivation in the presence of Ts3 in both systems. That effect was reverted when strong depolarizing pulses were applied. We have observed that the activation energy to remove the toxin is 27 kJ/mol, part of which derives from the movement of an equivalent electrical charge of 0,54 e . The recovery from 0 fast inactivation was significantly faster in Ts3-bound channels and there was no significant voltage dependence. Gating currents recorded from Xenopus oocytes became significantly faster in the presence of Ts3 and the total charge was reduced by 30 % in these conditions, suggesting that S4-DIV was immobilized. However, site-specific fluorescence measurements of domain IV suggested that this immobilization was not complete. We also observed an allosteric effect of Ts3 at the movement of S4-DI. We propose a kinetic model in which the bound Ts3 partially blocks the movement of S4-DIV. Whereas the remaining movement seems to be enough for the normal activation, a normal fast inactivation requires the full movement to take place.
Os canais de sódio sensíveis à voltagem são alvo de diversos tipos de toxinas, que se ligam em sítios específicos e modulam a sua função. a-toxinas de escorpião se ligam de modo dependente de potencial no sítio 3 desses canais, parcialmente formado pela alça extracelular que conecta os segmentos S3 e S4 do domínio IV, inibindo o processo de inativação rápida. Enquanto o movimento do segmento S4 do domínio IV (S4-DIV) parece ser crucial para o processo de inativação, seu papel na ativação ainda é tema de disputas. Várias evidências sugerem que esse segmento determina a dependência de potencial da ligação de toxinas do sítio 3, mas um modelo molecular quantitativo ainda não foi proposto para explicar esse efeito. Nós analisamos os efeitos da Ts3, uma a-toxina extraída do escorpião brasileiro Tityus serrulatus , em canais de sódio de células GH3 e em canais de músculo esquelético de rato expressos em ovócitos de Xenopus laevis . Observamos um aumento no componente lento do decaimento das correntes de sódio após o tratamento com a toxina, aumento este que era revertido apenas após a aplicação de potenciais muito despolarizantes. Nós calculamos que a energia de ativação para a remoção da toxina foi de 27 kJ/mol, e que o componente elétrico dessa energia foi obtido do movimento equivalente a 0,54 e . Observamos que na presença da toxina os canais se recuperavam mais rápido da 0 inativação, e que essa recuperação perdia a dependência de potencial. Após o tratamento com a Ts3 as correntes de gating registradas em ovócitos de Xenopus se tornaram mais rápidas, e uma redução de 30% da carga máxima carreada por essas correntes foi observada nessas condições. Observamos que apenas um componente do sinal de fluorescência relacionado ao movimento do S4-DIV era inibido pela toxina, e que a ligação da mesma afeta alostéricamente o movimento do segmento S4 do domínio I. Com base nesses resultados propomos um modelo cinético no qual a ligação da toxina bloqueia parcialmente o movimento do segmento S4-DIV, sendo que o movimento remanescente é suficiente para permitir a ativação, embora insuficiente para permitir uma inativação normal. As implicações do modelo são: 1) não é necessário um movimento completo do S4-DIV para a ativação dos canais de sódio; 2) a ligação da Ts3 permite um pequeno movimento desse segmento, suficiente para permitir a ativação e 3) uma inativação normal só ocorre quando o segmento se move completamente

Latex from Caricaceae contains proteolytic enzymes localized in the fruit, which are widely used industrially as well as in pharmaceutical preparations. Ethnopharmacologically, Carica candamarcensis, a member of Caricaceae family common to many areas of South America, is used to treat digestive disorders. Cysteine proteinases from Caricaceae latex are believed to be part of a plant defense mechanism. Upon injury, these enzymes promote the formation of a protein clot around the wounded area, as it occurs with mammalian systems. Some of these proteins display proliferative properties when probed with mammalian cells suggesting a role in reconstruction of wounded tissue. There are evidences that some of these enzymes are able to protect and enhance healing of chemically induced gastric ulcers in rats. In addition, it was demonstrated that these proteinases enhance the healing rate of induced dermal abrasions. In this study, we first aimed the isolation and characterization of proteinases displaying mitogenic activity. Subsequently, our goals were to determine the structure of the mitogenic protein and analyze a possible mechanism of action of this molecule. After three chromatography steps we isolated two mitogenic cysteine proteinases (CMS2MS2 and CMS2MS3) displaying a relative mass of 23 kDa. CMS2MS2 at approximately 1 nM stimulates proliferation above 50% of the control levels on insulinoma, fibroblastic, and osteoblastic cells. The mitogenic activity of CMS2MS2 in fibroblast was not affected by its inhibition with E-64, a specific inhibitor of cysteine protease. Furthermore, a specific MEK inhibitor (PD98059), that blocks the MAP-kinases pathway, abolishes the mitogenic activity of CMS2MS2. This inhibitory effect was also observed when CMS2MS2 was inhibited with E-64. In addition, the mitogenic effect was slightly suppressed (10%) when fibroblasts were pre-incubated with AG1478, a specific inhibitor of the EGF-receptor kinase. This phenomenon was correlated with growth factors released from cells acting in an autocrine way. CMS2MS2 contains 214 residues including the catalytic triad composed by Cys25, His159, Asn175. A phylogenetic tree analysis demonstrated that CMS2MS2 ranks closer to chymopapain than to papain, both isolated from Carica papaya latex. The overall predicted three-dimensional structure is similar to proteases from the papain family. These results suggest that minor structural differences within CMS2MS2 must account for its proliferative action that is independent of its proteolytic activity; but it is mediated by activation of MAP-kinases. This mitogenic property attributed to a purified cysteine proteinase may explain some of the therapeutical actions attributed to these enzymes.
O látex de Caricaceae é uma fonte tradicional de enzimas proteolíticas as quais são amplamente utilizadas na indústria e como preparações farmacológicas. Relatos etnofarmacológicos indicam que Carica candamarcensis, membro da família Caricaceae e comum a algumas áreas na América do Sul, é usada no tratamento de disfunções gástricas. É creditado às cisteíno proteases de Caricaceae funções defensivas na planta. Após injúria no epicarpo do fruto, essas enzimas iniciam um processo de coagulação semelhante ao que ocorre em mamíferos. Uma fração contendo proteases de C. candamarcensis estimulou a proliferação de células de mamíferos, sugerindo um papel na regeneração do tecido lesado. Também existem evidências que algumas enzimas auxiliam na cicatrização de úlceras gástricas e abrasões cutâneas realizadas em modelos murinos. Neste trabalho, nosso primeiro objetivo foi isolar e caracterizar proteases com atividade mitogênica presentes no látex de C. candamarcensis. Em seguida, visamos determinar a estrutura primária e terciária de uma dessas enzimas assim como analisar possíveis mecanismos de ação dessa substância. Após três processos cromatográficos foram isoladas duas cisteíno proteases (CMS2MS2 e CMS2MS3) com aproximadamente 23 kDa. CMS2MS2 estimulou a proliferação celular acima de 50% quando comparado ao controle em fibroblastos, osteoblastos e insulinoma. O efeito mitogênico foi observado com aproximadamente 1 nM de enzima e foi independente da atividade proteolítica quando avaliado em fibroblasto. Além disso, o inibidor específico de MEK (PD98059), que bloqueia a via das MAP-quinases, aboliu a atividade mitogênica de CMS2MS2. O efeito inibitório desse composto também foi observado quando CMS2MS2 esteve inibido por E-64. Entretanto, a proliferação celular foi apenas moderadamente diminuída (10%) quando fibroblastos foram pré-incubados com o inibidor do receptor de EGF (AG1478). Esse dado foi correlacionado com a liberação de fatores de crescimento das células com posterior atuação autócrina destas substâncias. CMS2MS2 possui 214 resíduos de aminoácidos incluindo os que formam a tríade catalítica (Cys25, His159 e Asn175). Análises filogenéticas revelaram que CMS2MS2 está mais próxima evolutivamente da quimopapaína do que da papaína, ambas isoladas do látex de Carica papaya. A estrutura tridimensional predita mostrou que essa enzima mitogênica possui características típicas das proteases da família da papaína. Estes dados sugerem que mínimas diferenças estruturais podem determinar seu efeito proliferativo, o qual é independente da atividade proteolítica; mas é dependente da ativação da via das MAP-quinases. A propriedade de agir como mitógeno atribuída às cisteína proteases isoladas de Caricaceae pode explicar algumas das aplicações farmacológicas destas proteases.

Cells are constantly exposed to endogenous or exogenous agents that cause injuries in DNA. These lesions can generate mutations or even lead to cellular death. A variety of repair mechanisms acts to maintain DNA integrity, but many lesions escape these processes leading to a replication fork blockage. To overcome this blockage, cells use a specialized group of DNA polymerases to bypass DNA lesions, restarting the replication forks and enhancing cell survival. This process is called translesion synthesis and is carried out by Y-family polymerases. Pol is member of this group and is able to bypass many type of lesions, as thymine-thymine dimer, AP sites and 8-oxoG. We report the cloning and characterization of the Pol gene (TcPol) from Trypanosoma cruzi, the causative agent of Chagas disease. This gene encodes protein containing motifs that are conserved between Y-family polymerases. In vitro assays showed that the recombinant protein is capable of synthesizing DNA in damage or undamaged primer-templates. Intriguingly, overexpression of TcPol does not increase resistance to UV light, cisplatin or zeocin, despite its ability to enhance UV resistance in a RAD30 mutant of Saccharomyces cerevisiae. T. cruzi overexpressing TcPol is also unable to restore growth after gamma irradiation, but T. cruzi cells overexpressing Pol are more resistant to treatment with hydrogen peroxide (H2O2). The results presented here suggest that TcPol plays an important role in the bypass of oxidative remanescent in DNA during S phase, stopping replication blockage.
As células são constantemente expostas a diversos agentes de origem endógena ou exógena que causam lesões no DNA. Como estas lesões podem gerar mutações ou causar a morte celular, as células desenvolveram complexos sistemas de reparo para minimizar os danos, mantendo assim, a integridade do genoma. Entretanto, muitas lesões podem escapar das proteínas envolvidas no reparo e bloquear a maquinaria de replicação. Uma das maneiras encontradas pelas células para contornar esta situação foi desenvolver um mecanismo para realizar a síntese de DNA passando por estas lesões. Esse processo, denominado de síntese translesão, é realizado por um conjunto de DNA polimerases adaptadas a esta função, as polimerases da família Y. Ao contrário da maioria das polimerases, a Pol é capaz de replicar eficientemente a fita de DNA frente a uma variedade de lesões, como dímeros de timina, sítios AP e 8-oxoG, de uma forma livre de erros. Neste trabalho, nós clonamos e caracterizamos o gene da Pol de Trypanosoma cruzi, o agente causador da doença de Chagas. O gene TcPol codifica uma proteína que contém motivos que são conservados entre as polimerases da família Y. Ensaios in vitro demonstraram que a proteína recombinante é capaz de polimerizar diferentes moldes de DNA contendo ou não lesões. Apesar de complementar o fenótipo de sensibilidade à luz UV de leveduras que tiveram o gene RAD30 mutado, a superexpressão da TcPol em T. cruzi não aumentou a sobrevivência dos parasitos após tratamento com luz UV, cisplatina ou zeocina. A superexpressão também não foi capaz de promover a retomada do crescimento dos parasitos após a irradiação gama, mas aumentou a resistência destes após o tratamento com H2O2. Estes resultados sugerem que a TcPol pode ter um papel importante na síntese translesão de lesões oxidativas remanescente na fita de DNA durante a fase S, impedindo assim, o bloqueio da replicação.

Oral tolerance is characterized by a reduction in specific immunological activities to a protein previously given by oral route. Parenteral exposure to antigens to which oral tolerance had been previously induced affects (inhibits) immunological activities connected to unrelated antigens, a phenomenon we have called indirect effects of oral tolerance. Herein, we investigated the possibility of adoptively transferring oral tolerance and its indirect effects to immunocompetent syngeneic recipients by the transfusion of spleen cells and serum from tolerant donors. We also investigated if the indirect effects of oral tolerance interfere in the rejection of allografts. The adoptive transfer of oral tolerance and its indirect effects is more easily demonstrated when we evaluated DTH reaction in C57BL/6 and BALB/c recipient mice. BALB/c mice are more susceptible to the adoptive transfer of these phenomena when we evaluate specific antibody production. In recipients with an intact immune system, there is a barrier (syngeneic barrier) that impairs the functional implantation of transferred cells, interfering with their specific immunological activities. However, the transfer of different immune system components is able to bypass this barrier, demonstrating the importance of interactions between molecular and cellular components to the establishment of the phenomena studied herein. The indirect effects of oral tolerance seem to delay the rejection of skin allografts, demonstrating its systemic character. Phenomena such as the syngeneic barrier and the indirect effects of oral tolerance will better understood in models that describe the interdependence among the components of the immune system.
A tolerância oral é caracterizada por uma redução da reatividade imunológica específica a uma proteína previamente administrada por via oral. A exposição parenteral a antígenos para os quais a tolerância oral foi previamente induzida afeta (inibe) atividades imunológicas ligadas a antígenos não relacionados, fenômeno que denominamos efeitos indiretos da tolerância oral. Investigamos a possibilidade de transferir a tolerância oral e seus efeitos indiretos para receptores singênicos imunocompetentes por transfusão de células do baço e soro de doadores tolerantes. Investigamos também se os efeitos indiretos da tolerância oral interferem no processo de rejeição de enxertos alogênicos. A transferência adotiva da tolerância oral e de seus efeitos indiretos é mais facilmente observada quando avaliamos a reação de DTH em receptores C57BL/6 e BALB/c. Camundongos BALB/c são mais susceptíveis à transferência adotiva destes fenômenos quando analisamos a produção de anticorpos específicos. Em receptores com o sistema imune intacto, existe uma barreira (barreira singênica) que dificulta a implantação funcional das células transferidas, interferindo em suas atividades imunológicas específicas. Entretanto, a transferência de diferentes componentes do sistema imune é capaz de suplantar essa barreira, demonstrando a importância de interações entre componentes celulares e moleculares para o estabelecimento dos fenômenos aqui estudados. Os efeitos indiretos da tolerância oral parecem retardar a rejeição de enxertos de pele alogênicos, demonstrando seu caráter sistêmico. Fenômenos como a barreira singênica e os efeitos indiretos da tolerância oral são melhor entendidos em modelos que descrevam a interdependência dos componentes do sistema imune.

A mucosa intestinal é a maior área de contato entre o organismo e o meio. Além disso, é o local onde se concentra o maior número de linfócitos, a maioria deles são células ativadas. A conseqüência mais comum da exposição constante do sistema imune a antígenos presentes na mucosa do intestinal (microbiota e antígenos da dieta) é a tolerância oral. A Tolerância Oral é definida como a diminuição da resposta antígeno-específica após imunização com o antígeno previamente administrado por via oral. Ao mesmo tempo, células B da mucosa quando estimuladas, produzem predominantemente IgA, que é secretada no muco sob a forma de IgA secretória (IgAS). A produção de IgAS antígeno-específica tem sido descrita como uma outra conseqüência comum do contato com antígenos por via oral, mas a relação entre esses dois fenômenos ainda é obscura. Neste estudo, analisarmos o efeito da tolerância oral na produção de IgAS em modelo murino de alergia alimentar à ovalbumina (Ova). Camundongos BALB/c foram tratados com salina (controle) ou Ova por gavagem ou ingestão voluntária. Após sete dias, os animais foram imunizados i.p com Ova e Al(OH)3 e desafiados i.p. com Ova após quatorze dias. Para indução de alergia alimentar, os camundongos foram oralmente desafiados com uma solução de clara de ovo contendo aproximadamente 10 mg/ml de Ova durante sete dias consecutivos. Em cada etapa de indução de tolerância oral e subseqüente indução de alergia alimentar, analisamos os níveis de citocinas e anticorpos produzidos (soro e intestino), aversão à Ova e perda de peso corpóreo. Além disso, após a indução de alergia alimentar, analisamos a secreção de muco intestinal, número de mastócitos e eosinófilos na mucosa. Nossos resultados indicaram que, após a indução de alergia alimentar a tolerância oral foi associada com a inibição da produção de IgAS total e anti-Ova, IgA sérica total e anti-Ova, Igs totais e IgG1 anti-Ova. Por outro lado, a tolerância oral inibiu a alergia alimentar, devido aos baixos níveis de IgE total e anti-Ova produzidos, inibição da perda de peso corpóreo e inibição da aversão ao consumo de Ova observados nos animais tolerantes. Os níveis de citocinas pró-inflamatórias, como IL-4 e IL-5 também foram inibidos. Curiosamente, as citocinas regulatórias, como IL-10 e TGF- também foram suprimidas pela indução da tolerância oral. Todas essas citocinas tem um potente efeito na produção de IgA e a inibição delas acompanha a supressão da secreção de IgA pela tolerância oral. De acordo com nossos resultados, nós concluímos que a mucosa intestinal é um sistema totalmente regulado. Geralmente, processos inflamatórios são inibidos no intestino devido à indução da tolerância oral. Entretanto, a mucosa intestinal para manter sua integridade e homeostase, mesmo na presença de inflamação no intestino, como reações alimentares alérgicas, recruta rapidamente vários mecanismos, como produção de IgAS e células que produzem citocinas antiinflamatórias, como IL-10 e TGF-.

Neste estudo, matrizes tridimensionais porosas foram desenvolvidas para manter e acentuar o processo de diferenciação de células tronco mesenquimais em osteoblastos, in vitro. Nós também investigamos o efeito da introdução da subunidade catalitica da telomerase (hTERT) em células tronco mesenquimais humanas, durante o processo osteogênico. Células tronco mesenquimais de rato e humanas foram isoladas da medula óssea e caracterizadas por FACS ou PCR. Para promover a diferenciação, MSC foram cultivadas em meio DMEM modificado contendo 10% de soro fetal bovino, ácido -8 -8 M), -glicerofosfato (10mM) e dexametasona (10 ascórbico (0.2mM), vitamina D3(10 M). As células foram plaqueadas em matrizes feitas de polímeros naturais (quitosana, gelatina, condroitina, alginato e celulose) contendo ou não fosfato de cálcio. As matrizes foram ligadas com EDAC ou genipina. As propriedades fisico químicas das matrizes 3D foram avaliadas através de SEM, degradação hidrolitica, testes de compressão e ensaios reológicos. A viabilidade celular e a atividade da fosfatase alcalina foram mediadas com 7, 14 e 21 dias através do ensaio de MTT e ALP, respectivamente. A diferenciação celular foi avaliada por PCR. Células expressando telomerase foram analizadas por PCR semi quantitativo. Os resultados deste estudo mostraram que a proliferação cellular de MSC foi melhorada nas matrizes 3D como mostrado pelos ensaios de MTT e ALP. Após o isolamento, marcadores de células tronco mesenquimais humanas, CD29 e CD 44, foram detectados em hMSC por FACS. O CD 29 foi detectado em rMSC por PCR. A diferenciação foi confirmada pela expressão de osteopontina e osteocalcina, no dia 21. Medidas reológicas mostraram que o genipina promove uma polimerização mais rápida e uma melhor performance mecânica do que as matrizes ligadas com EDAC. SEM mostrou um alta porosidade e interconexão de poros em todos as matrizes. O módulo elástico achado nos testes de compressão das matrizes ligadas com EDAC foram 50 vezes maior do que nas matrizes não ligadas e 18 vezes menor do que nas matrizes ligadas com genipina. Células telomerizadas expressam 3 vezes mais telomerase do que MSC e 50% mais osteopontina e osteocalcina do que osteoblastos normais. Células expressando telomerase não foram capazes de formar tumores em camundongos NUDE após 60 dias. Nossos resultados mostram que estruturas 3D feitas de polímeros naturais aumentaram a proliferação celular e provaram ser um bom ambiente para a diferenciação osteogênica. Além disso, a expressão da telomerase acentuou o processo osteogênico.

Experimental murine infections with Leishmania spp. that cause cutaneous leishmaniasis has led to an understanding of many immunological events that are required for a successful host response towards these protozoan parasites. Many studies have demonstrated that the host response is determined by the species or strains of Leishmania and also that this response may vary in the same mouse strain. Since C57BL/6 mice infected with L. major develop a Th1 response that leads to spontaneous resolution of lesions and knowing that the susceptibility of these mice to L. amazonensis results from an inability to mount these responses, we tested the hypothesis that the previous induction of a response elicited by L. major would modify the outcome of infection with L. amazonensis. To address this issue, C57BL/6, IL-10-/- and 2M-/- mice, which had been previously inoculated into the left hind footpad with 1 x 104 metacyclic promastigotes of L. major, were infected with 104 metacyclic promastigotes of L. amazonensis in the contralateral footpad and the course of infection was followed for 10 weeks. We have demonstrated that C57BL/6 mice previously -infected with L. major restrain pathogenic responses induced by L. amazonensis infection. This process is related in part with a partial resistance, which is independent of IL-10, as evidenced by moderate reduction in parasite number within L. amazonensis lesions from pre-infected wild-type and IL-10-/-mice. We found a higher production of IFN- by spleen cells from pre-infected mice at weeks 6 and 10 after L. amazonensis-infection, but IFN--production by draining lymph node cells was not different between pre-infected mice and their control counterpart. In contrast, pre-infected mice showed high TNF- and iNOS mRNA expression at the site of infection. In addition, mice depleted of T CD8+ cells controlled immunopathology, on the contrary, mice genetically deficient in CD8+ T cells (2M-/-) did not. To understand how pre-infected mice controlled progression L. amazonensis lesions without marked reduction of number parasites, we examined chemokines production at the site of infection and frequency and phenotypes of T cells in the draining lymph nodes at various time points using flow cytometry. Our findings show reduced recruitment of monocytes and lymphocytes in L. amazonensis lesions, differential production of CCL3/MIP-1 and CCL5/RANTES and a increased frequency of CD8+ Tsup and CD4+ Treg cells at the draining lymph nodes, which is consistent with our hypothesis that the restrained lesion progression in pre-infected mice is markedly associated with a altered cell recruitment to the site of infection and early induction of T cells bearing the regulatory phenotype.
A infecção de camundongos com Leishmania spp. que causam leishmaniose cutânea tem provido conhecimentos dos vários eventos imunológicos envolvidos nos mecanismos de resistência do hospedeiro usados para restringir o crescimento do parasito. Muitos estudos têm demonstrado que a resposta do hospedeiro é determinada tanto pela espécie de parasito quanto pela genética do hospedeiro. Uma vez que camundongos C57BL/6 infectados com L. major desenvolvem uma resposta Th1 que leva à resolução espontânea das lesões e tendo conhecimento de que a susceptibilidade destes camundongos à infecção por L. amazonensis é conseqüência da inabilidade de montar uma resposta Th1 eficiente, foi testada a hipótese de que a indução prévia de uma resposta induzida por L. major poderia modificar a infecção com L. amazonensis. Para testar esta hipótese, camundongos C57BL/6, IL-10-/- e 2M-/-, os quais tinham sido previamente infectados com 104 promastigotes de L. major na pata direita, foram infectados com 104 promastigotes de L. amazonensis na pata contralateral e o curso da infecção seguido durante 10 semanas. Foi demonstrado que camundongos C57BL/6 previamente infectados com L. major controlaram a resposta patogênica causada pela infecção com L. amazonensis. Este processo estava relacionado em parte com uma resistência parcial a qual foi independente de IL-10 como evidenciado pela redução moderada do número de parasitos nas lesões de camundongos selvagens e IL-10-/- pré-infectados. Adicionalmente, foi encontrada uma alta produção de IFN- por esplenócitos de camundongos pré-infectados, mas a produção de IFN- pelas células do linfonodo drenante não foi diferente daquela em camundongos infectados apenas com L. amazonensis. Em contraste, camundongos pré-infectados mostraram uma alta expressão de mRNA de iNOS e TNF- no local da infecção. Camundongos depletados de células T CD8+ no início da infecção com L. amazonensis, mas não os geneticamente deficientes para células T CD8+ (2M-/-) controlaram a imunopatologia. Para entender como os camundongos pré-infectados controlam a progressão da lesão por L. amazonensis sem marcada redução do número de parasitos, foram examinados a produção de quimiocinas no local da infecção, a freqüência e o fenótipo de células T em linfonodos drenantes por citometria de fluxo. O recrutamento reduzido de monócitos e linfócitos nas lesões causadas por L. amazonensis, a produção diferencial de CCL3/MIP-1 e CCL5/RANTES e a freqüência aumentada de células Tsup CD8+ e Treg CD4+ nos linfonodos que drenam o local da infecção é consistente com a hipótese de que o controle da progressão da lesão por L. amazonensis em camundongos pré-infectados é associado com recrutamento alterado do infiltrado celular no local e indução precoce de células T com fenótipo regulador.

Leishmaniasis is an infectious disease with an overall prevalence of 12 million cases and 350 million people at risk of infection. Leishmania parasites are transmitted through the bite of an infected sand fly to vertebrate hosts, leading to a spectrum of clinical manifestations, including visceral leishmaniasis. Leishmania (Leishmania) infantum and L. (L.) chagasi, which are now considered synonymous species, and L. (L.) donovani are the major etiologic agents of visceral leishmaniasis (VL), a fatal infection if diagnosis and treatment are not promptly established. Dogs are highly susceptible to infection and considered the major reservoir for L. (L.) infantum and L. (L.) chagasi, in different geographical regions of the globe. Research has recently revealed much new information, but advances in treatment and control have been disappointing. Treatment of infected dogs is of limited effectiveness and not recommended in endemic regions, since dogs that respond to treatment may still be a source of parasites. In this study, we investigated in dogs the immunogenicity and protective immunity against L. (L.) chagasi infection induced by vaccination with a formulation containing the recombinant A2 protein, an amastigote specific antigen, and saponin. Vaccinated animals produced significantly increased levels of total IgG and IgG2, but not IgG1 anti-A2 antibodies, and remained negative in conventional leishmaniasis serodiagnostic methods. Significantly increased IFN- and low IL-10 levels were detected in vaccinated animals before and after challenge, as compared to control animals. In the group of infected dogs, only 28.5% of dogs remained asymptomatic, with clinical symptoms were found in other weight loss, intense, and profuse bloody diarrhea, cachexia, hepatosplenomegaly, onychogryphosis, lesions of skin and eye purulent secretion. These symptoms appear early in the dogs in the control group. Finally, vaccination with rA2 did not convert serological tests using promatigote antigens, allowing for discrimination between vaccinated and infected animals, an important requirement for a public campaign control of CVL.
Leishmaniose é uma doença parasitária com prevalência de 12 milhões de casos e 350 milhões de pessoas em risco de infecção. Os protozoários do gênero Leishmania são transmitidos através da picada do hospedeiros vertebrado, levando a um espectro de manifestações clínicas, incluindo a leishmaniose visceral. Leishmania (Leishmania) infantum, L. (L.) chagasi e L. (L.) donovani são os principais agentes etiológicos da leishmaniose visceral (LV), que pode ser fatal caso diagnóstico e tratamento não sejam prontamente estabelecidos. Os cães são importantes reservatórios no ciclo de transmissão doméstico da leishmaniose visceral (LV) e considerados a principal fonte de infecção para os vetores, devido, entre outros fatores, à elevada prevalência da infecção canina, quando comparada à infecção humana. Portanto, uma vacina capaz de proteger o cão e, conseqüentemente, diminuir as taxas de transmissão para o homem, seria de grande importância. Neste trabalho, foram avaliadas as respostas imune celular, humoral, parasitológica e clínica de cães imunizados com o antígeno recombinante A2, associado ao adjuvante saponina, compondo a vacina Leishtec®. Animais imunizados com Leishtec® apresentaram níveis de anticorpos IgG2 anti-rA2 significativamente maiores em relação aos níveis de IgG1 anti-rA2, indicando a indução de resposta TH1. Além disso, houve aumento significativo da produção de IFN- após as imunizações, que se manteve elevado sete meses após o desafio, sob estímulo de rA2 e LcPA no grupo de cães vacinados. Após o desafio, houve aumento significativo de IL-10 no grupo infectado, estimulados com LcPA, quando comparado ao grupo vacinado e infectado. No grupo de cães Infectados, apenas 28.5% dos cães permaneceram assintomáticos, sendo que os sintomas clínicos encontrados nos demais foram perda de peso intensa, diarréia profusa e sanguinolenta, caquexia, hepatoesplenomegalia, onicogrifose, lesões de pele e secreção ocular purulenta. Estes sintomas apareceram mais precocemente nos cães do grupo controle. A imunização com antígeno rA2 permitiu a diferenciação sorológica entre animais vacinados e animais infectados, um requisito importante para uma vacina para leishmaniose visceral canina (CVL).

Breast cancer is the sixth leading cause of cancer death in the world, and the most frequent type in women. Each year, over 22% of the new cases of cancer in women are breast cancer. Advances in breast cancer detection and treatment have contributed to improve the rate of survival, although mortality rates remain significantly high. Despite all these advances, more efficient diagnostic methods and effective treatments are necessary. The establishment of breast cancer cell lines is an important tool to understand biological processes involved in this disease, as well as the development of potential model of treatment. In the present work, two cell lines, MACL-1 and MGSO-3, from human primary breast cancer were characterized and the effect of paclitaxel on the radiation response of breast cancer cell line was investigated. Characterization of the cell lines included morphological examination that demonstrated a typical epithelial morphology and PCR analyses which showed that both cell lines were telomerase positive. Real time PCR showed that the levels of MUC1 expression in both cell lines were greater than in MDA-MB-231 cell line. Moreover, MACL-1 and MGSO-3 were capable of growing in soft agar culture, which suggests their metastatic potential, and both demonstrated a positive tumorogenic potential in nude mice. These experimental models open new perspectives on the investigation of breast cancer biology and treatment. Our data also showed that pretreatment with paclitaxel enhanced radiation-mediated cell death, promoting caspase-3 activity and apoptosis in breast cancer cell lines. Although, only MACL-1 showed significant difference in clonogenic assays between radiosensivity parameters calculated from irradiated cells, with or without paclitaxel. In conclusion, the results obtained showed that paclitaxel did not induce systematically a radiosensitization and that a synergistic effect was observed in MACL-1 cell line.
O câncer de mama é o sexto tipo de câncer que mais mata no mundo, sendo o mais freqüente entre as mulheres. A cada ano, cerca de 22% dos novos casos de câncer em mulheres são de mama. Avanços na detecção e tratamento do câncer de mama têm contribuído para melhorar a taxa de sobrevivência, embora a taxa de mortalidade continue alta. Com isso, o desenvolvimento de métodos de diagnósticos mais eficientes e tratamentos mais efetivos continuam sendo necessários. O estabelecimento e caracterização de linhagens de câncer de mama são uma importante ferramenta para o entendimento dos processos biológicos envolvidos nessa doença, assim como para o desenvolvimento de um potencial modelo de tratamento. No presente trabalho, duas linhagens de sítio primário de câncer de mama humano, MACL-1 e MGSO-3, foram caracterizadas e foi também investigado o efeito do paclitaxel na resposta à radiação em linhagens de câncer de mama. A caracterização das linhagens celulares incluiu análise morfológica, que demonstrou uma típica morfologia epitelial e a análise por PCR demonstrou que ambas as linhagens são telomerase positivas. A análise por PCR em tempo real demonstrou que o nível de expressão de MUC1 em ambas as linhagens é maior que aquela da linhagem MDA-MB-231. Além disso, MACL-1 e MGSO-3 apresentaram crescimento independente de ancoragem, que sugere seu potencial metastático, e ambas as linhagens demonstraram ser tumorigênicas em camundongos nude. Estes modelos experimentais abrem novas perpectivas para o estudo da biologia e tratamento do câncer de mama. Nossos dados também demonstraram que o pré-tratamento com paclitaxel aumentou a morte celular, promovendo ativação de caspase-3 e aumentando a apoptose induzida por radiação em linhagens de câncer de mama. Porém, somente MACL-1 demonstrou diferença no ensaio de clonogenicidade entre os parâmetros de radiosensibilização calculados para as células irradiadas, com ou sem paclitaxel. Em conclusão, os resultados obtidos demonstraram que o paclitaxel não induziu uma radiosensibilização sistemática e que um efeito de sinergismo foi observado na linhagem MACL-1. XX

The spleen is a secondary lymphoid organ, associated with blood circulation. This organ harbors different kinds of cells, like T and B lymphocytes, macrophages and dendritic cells, for this reason is very important in cytokines and antibodies production and immune response development. Splenectomy is a common practice, and in C57BL/6 mice we observed reduction of IFN-gamma concentration in the blood plasma. So, one of the aims of this work was to check the importance of spleen in the immune response against L. major. Is already known that, C57BL/6 mice are resistant and BALB/c mice are susceptible against this infection, and the resistance is IFN-gamma dependent. Although, splenectomy did not change the course of infection caused by L. major. We did not observe differences in resistance, nether in susceptibility. The lesion size, parasite load, tissue inflammation, IL-4, IFN-gamma and IL-10 production by lymph node cells and antibody secretion were not different between mice with or without spleen. So, splenectomy was not able to change the immune response development during L. major infection. Still studying the role of spleen in infectious disease, the second aim, was to investigate the consequences of splenectomy during T. cruzi infection. For this propose we used the model of infection of C57BL/6 mice with Y strain of T. cruzi. Our data showed that absence of spleen changed the dynamics of disease. We observed that mice without spleen had different parasitemia and more mortality index. These results were followed by reduction in IFN-gamma and TNF-alfa in blood and increase in IL-4 levels, nine days after infection. Together with these results, we observed reduction of all cytokines availed in liver and more parasites and inflammatory infiltrate in this organ, compared with control group. Mice without spleen also showed more parasites in the heart nine days after infection. There was also reduction in the immunoglobulin synthesis and strong reduction in red blood cells and hemoglobin concentration in splenectomized mice compared with control mice. We also observed reduction in the number of bone marrow cells. This data was correlated with alteration in reticulocytes number in blood, what shows decrease in bone marrow activity. Those results, suggest that splenectomy does not cause strong changes in immune response developed against infections, where the proliferation and first responses against the parasite happen in the inoculums site. But, seems to increase the susceptibility to protozoa disease, induced by different way and have quickly parasite dissemination, like infection caused by T. cruzi.
O baço é um órgão linfóide secundário, porém, é também conectado com a circulação sangüínea. Esse órgão abriga uma variedade de células, como linfócitos T e B, macrófagos e células dendríticas. É também importante na produção de citocinas e anticorpos essenciais para o desenvolvimento de respostas imunológicas. A esplenectomia é uma prática cirúrgica, e que em camundongos C57BL/6 foi capaz de induzir a redução dos níveis plasmáticos de IFN-gama. Com isso, o primeiro objetivo do trabalho foi avaliar a importância do baço no desenvolvimento da resposta imune na infecção pela L. major. Sabe-se que camundongos C57BL/6 são resistentes e que camundongos BALB/c são susceptíveis à infecção por esse protozoário, e que a resistência é dependente da produção de IFN-gama. No entanto, a esplenectomia não foi capaz de causar alterações no processo infeccioso provocado pela L. major, tanto para o modelo de resistência, quanto o de susceptibilidade. Não foi possível identificar diferenças no parasitismo tecidual, na produção de IL-4, IFN-gama e IL-10. A produção de anticorpos, não foi alterada nem tampouco a formação do infiltrado inflamatório no local de inóculo do parasito, ou seja, a esplenectomia não causou modificações na resposta celular e humoral durante o curso de infecção avaliado. Ainda dentro da perspectiva da influência da esplenectomia em doenças infecciosas, o segundo objetivo do presente trabalho foi investigar as alterações provocadas pela ausência do baço da infecção provocada pela cepa Y do T. cruzi em camundongos C57BL/6. Diante dos dados obtidos foi visto que a esplenectomia causa modificações na dinâmica da parasitemia provocada pelo parasito, e aumenta a taxa de mortalidade dos animais. Esses resultados estão associados à diminuição na concentração de IFN-gama e TNF-alfa no plasma e aumento de IL-4, nove dias após a infecção. Além disso, ocorre diminuição de citocinas inflamatórias e antiinflamatórias presentes no fígado dos animais sem baço, muito provavelmente devido ao maior número de parasito e maior infiltrado inflamatório presente nesse órgão, quando comparado ao grupo controle. O músculo cardíaco dos animais sem baço, também apresentou maior número de parasitos, nove dias após a infecção. Foi observada, diminuição na síntese de imunoglobulinas, bem como diminuição acentuada no número de hemácias presentes na circulação sangüínea e na concentração de hemoglobina no grupo esplenectomizado, quando comparado ao controle. Além disso, contatou-se menor número de células na medula óssea dos animais infectados e sem baço, comparado com animais com baço e também infectados, esse fato foi associado às modificações na dinâmica de liberação de reticulócitos. Dessa forma, sugere-se que a esplenectomia não causa alterações significativas em infecções causadas por protozoários, onde as primeiras respostas e a proliferação do parasito ocorrem principalmente, no local de inóculo. Mas, aumenta a susceptibilidade às infecções, também causadas por protozoário, porém com outra via de inóculo e disseminação sistêmica mais rápida do parasito.

Fluoride is a chemical element which can be found in small quantities in natural waters (0,1 to 2,0 mg/L) and its occurrence is mainly due to weathering of some minerals such as fluorite (CaF2). The increasing pollution of surface waters has hindered its use for drinking, leading to the interest and needings to use groundwater. The fluoride concentration in drinking water up to 2,0mg/L causes problems such as bone and dental fluorosis in the population. This work reports an alternative method for the removal of the excess of fluoride in water using bone charcoal supplied by Bonechar®. The bonechar was characterized by XRD, FTIR, SEM/EDS, ASE methodology for BET, TG/DTG and determination of CHN. The results indicated that hydroxyapatite [Ca10(PO4)6(OH)2] is the main crystalline phase on bonechar. Minor amounts of calcite (CaCO3) was detected. The specific surface area determined was 119 m2/g as well as it was observed high porosity (macropores). The fluoride removal capacity of charcoal has been evaluated in t batch adsorption tests. The concentration of fluoride was determined by specific ion electrode. The isotherms were constructed using granular bone charcoal "in natura", granular coal washed with HCL 0,1mol/L and coal "fresh" ground at room temperature. The classical models of Langmuir and Freundluich were both suitable to represent the results. Adsorption capacities of 2,96mg/g for granular coal "in nature" and 3,44mg/g for granular coal washed were obtained. The Lagergren kinetic equation of 2nd order represented well the results, thus indicating the important chemical contribution of adsorption mechanism. This result was corroborated by the observation of the surface of the loaded coal bearing high amounts of fluoride and calcium, which indicated the presence of calcium fluoride on the surface of the adsorbent. The results is important to design the system for water defluoridation in domestic and industrial scales.
O flúor é um elemento que pode ser encontrado em pequenas quantidades nas águas naturais (0,1-2,0mg/L) e sua ocorrência se deve, principalmente, ao intemperismo de alguns minerais, por exemplo a fluorita (CaF2). A crescente poluição dos mananciais superficiais tem inviabilizado o seu uso, levando a necessidade de utilização de águas subterrâneas. A água com concentrações de íons fluoreto acima de 1,5mg/L ocasionam problemas tais como fluorose dentária e acima de 6mg/L causa fluorose óssea. Neste trabalho avaliou-se o carvão de osso bovino Bonechar® como alternativa para a remoção do excesso de fluoreto presente em água para abastecimento público. O carvão foi caracterizado através de DRX, FRX, FTIR, MeV/EDS, ASE por metodologia BET, TG/DTG e CHN. Os resultados indicaram que a fase majoritária do carvão é a hidroxiapatita [Ca10(PO4)6(OH)2] e em menor proporção a calcita (CaCO3). A área superficial específica determinada foi de 119m2/g associada a uma alta porosidade, com poros de diâmetro até 18406Å, na faixa de macroporos. A capacidade de remoção de fluoreto pelo carvão foi avaliada em ensaios de adsorção em erlenmeyers em mesa agitadora de frascos. A concentração de fluoreto na água foi determinada por eletrodo de íon específico. As isotermas foram obtidas para carvão de osso granular in natura, carvão granular lavado com HCL 0,1mol/L e carvão fino, em temperatura ambiente. Os modelos clássicos de Langmuir e Freundluich foram ambos adequados para representar a remoção. Os resultados indicaram uma capacidade de adsorção de 2,96mg/g para o carvão granular in natura e 3,44mg/g para o carvão granular lavado. O modelo cinético de 2º ordem de Lagergren representou bem os resultados, indicando a natureza química do mecanismo de adsorção. Esse resultado foi corroborado pela observação da superfície do carvão carregado portando elevados teores de flúor e cálcio, os quais indicaram a presença de fluoreto de cálcio na superfície do adsorvente. Os resultados alcançados serão importantes para dimensionar os equipamentos para defluoretação de água em escala doméstica e industrial.

Centipedes are venomous arthropods responsible for a significant but non-lethal number of human envenomations. Despite this, information about the composition and function of their venom contents is scarce. In this study we have used a bottom-up proteomic approach combining 2D-LC, ESI-Q-TOF/MS, N-terminal sequencing and similarity searching to better understand the complexities of the venoms from two Brazilian centipede species: Scolopendra viridicornis nigra and Scolopendra angulata. Comparisons between the LC profiles and the mass compositions of the venoms of the two species are provided. Also, the N-termini of representatives of 10 protein/peptide families were successfully sequenced where nine of them showed no significant similarity to other protein sequences deposited in the Swiss-Prot database. A screening for insetotoxic activity in fractions from S. viridicornis venom has also been performed. Six of the 12 tested fractions were responsible for clear toxic effects in house flies. This work demonstrates that centipede venoms might be a neglected but important source of new bioactive compounds.
Os escolopendromorfos são artrópodes venenosos, responsáveis por um significante número de acidentes com humanos, ainda que não letais. Apesar disso, informações sobre a composição e atividades biológicas dos venenos desses animais são bastante escassas. No presente estudo, foi empregada uma abordagem proteômica bottom-up combinando 2D-LC, ESI-Q-TOF/MS, seqüenciamento N-terminal e procuras por similaridades, para melhor entender as complexidades dos venenos de duas espécies de escolopendromorfos brasileiros: Scolopendra viridicornis nigra e Scolopendra angulata. Comparações entre os perfis de LC e composição de massas moleculares são apresentadas. Ainda, as seqüências N-terminais de dez famílias de peptídeos ou proteínas foram determinadas com sucesso. Entretanto, nove das dez famílias de peptídeos, cujas seqüências N-terminais foram determinadas, não apresentaram quaisquer similaridades com outras seqüências depositadas no banco de dados do Swiss-Prot. Uma prospecção de atividades inseticidas em frações do veneno de S. viridicornis nigra também foi realizada. Seis das 12 frações testadas foram responsáveis por claros efeitos tóxicos sobre moscas domésticas. Este trabalho demonstra que os venenos de escolopendromorfos são uma fonte latente para a descoberta de novas moléculas com potencial aplicação biotecnológica.

Chagas Disease, caused by the protozoan Trypanosoma cruzi, afflicts millions world-wide, especially in Latin America. T. cruzi has many strains, which can be divided in two main groups: I and II. Group I is related to the sylvan cycle and group II to the domestic cycle of the parasite (which involves humans). Group I strains present higher resistance to oxidative damage caused by substances like hydrogen peroxide than those from group II. Naphthalic imides are small molecules also capable of generating reactive oxygen species (ROS) but only when stimulated by a specific wavelength radiation (340 nm). Thus, it was our objective to test the effect of two naphthalic imides in a few T. cruzi group I and II representative strains, in order to evaluate the use of such substances as alternative tools to the study of oxidative lesions in that protozoan. We observed that the tested imides were capable of reducing the survival of the oxidative damage sensitive strains (group II) more than the resistant ones (group I), in agreement with previous data for hydrogen peroxide. We also observed that even under conditions where the adequate radiation for activation of the imides wasnt present they would still reduce the survival of the tested strains. Knowing T. cruzi has bioluminescence, we measured that emission and verified it to occur above 300 nm, thus being able to activate the imides at high concentrations. In low concentrations the naphthalic imides can only be activated by lamps of an adequate power (300 to 400 W). We also used a vector peptide sequence consisting of seven arginine residues that, according to the literature, are capable of carrying covalently bonded molecules inside many types of cells. Unfortunately the results were inconclusive. As the product of the MSH2 gene is related to the repair of damaged DNA in many organisms, including T. cruzi, we tested the imides against a knock-out strain for that gene. Its survival was lower when compared to the wild type, indicating lesion in the parasites DNA. As ROS can modify the guanine nucleotide in 8-oxo-7,8-dihydroguanine (8oxoG), we tested the imides in a mutant strain overexpressing the DNA polimerase kappa, which is known to synthesize beyond such modifications. Its survival was higher when compared to the wild type, indicating the imides were modifying guanine into 8oxoG. Concluding, we believe that at low concentrations (40 M) the imides can be used as tools to study oxidative DNA lesions in Trypanosoma cruzi.
A Doença de Chagas, uma doença de que aflige milhões de pessoas no mundo, em especial na América Latina, é causada pelo protozoário Trypanosoma cruzi. T. cruzi possui diversas cepas, as quais podem ser divididas em dois grupos principais: I e II. O grupo I está relacionado ao ciclo silvestre e o grupo II ao ciclo doméstico do parasita (envolvendo o homem). Cepas do grupo I apresentam maior resistência a dano oxidativo por substâncias como o peróxido de hidrogênio do que aquelas do grupo II. As imidas naftálicas são pequenas moléculas também capazes de gerar espécies reativas de oxigênio (ROS) porém somente quando estimuladas por uma radiação de comprimento de onda específico (340 nm). Assim, foi nosso objetivo testar o efeito de duas imidas naftálicas em algumas cepas de T. cruzi, representativas dos seus grupos I e II, de modo a avaliar o uso dessas substâncias como ferramentas alternativas para o estudo de lesões oxidativas nesse protozoário. Verificamos que as imidas testadas foram capazes de reduzir mais a sobrevivência das cepas sensíveis a dano oxidativo (grupo II) do que a das cepas resistentes (grupo I), de acordo com dados anteriores para o peróxido de hidrogênio. Verificamos ainda que mesmo em condições onde não houvesse radiação adequada à ativação das imidas elas causavam uma redução da sobrevivência das cepas testadas. Sabendo que T. cruzi possui bioluminescência, medimos essa emissão e constatamos que ela ocorre acima de 300 nm, podendo assim ser responsável pela ativação das imidas em altas concentrações. Em baixas concentrações elas só podem ser ativadas por lâmpadas de potência adequada (de 300 a 400 W). Utilizamos também uma seqüência peptídica vetora de sete resíduos de arginina sabidamente capaz de carrear moléculas a elas ligadas covalentemente para dentro de diversos tipos celulares. Infelizmente, os resultados foram inconclusivos. Como o produto do gene MSH2 está relacionado ao reparo de dano oxidativo no DNA em vários organismos, incluindo T. cruzi, testamos uma cepa nocauteada para aquele gene frente às imidas. Sua sobrevivência foi menor em relação à cepa selvagem, indicando a lesão do DNA do parasita. Como ROS podem modificar o nucleotídeo guanina em 8-oxo-7,8-dihidroguanina (8oxoG), testamos as imidas em uma cepa mutante superexpressando a DNA polimerase kappa, sabidamente capaz de passar por cima de tais modificações. Sua sobrevivência foi maior do que a cepa selvagem, indicando que as imidas estavam modificando guanina em 8oxoG. Concluindo, acreditamos que em baixas concentrações (40 M) as imidas podem ser usadas como ferramentas no estudo de dano oxidativo no DNA de Trypanosoma cruzi.

The demand for ornamental rocks has grown in last years, both to domestic consumption as for export. To supply this demand, the production increased, there was also a technological development, however, is necessary in this sector, studies and investiments and improvements in the techniques used. Therefore, in general, the mining and mineral processing are still practiced without systematic planning and control, resulting in poor utilization of equipments, wastes, high production costs, security problems in the operation and severe environmental impacts. The advent of diamond tools, used in mining and mineral processing of ornamental rocks, has contributed, largely, to the grouth of the sector, however, there is necessity of studies to used these tools to maximize the recovery of the rocks, increase the profit and decrease the negative aspects previously discussed. The cutting of rocks with diamond disk, considering an integrated view between the properties of rocks, the variables involved in cutting and machine performance, can contribute to improvement of processing techniques. This work has as main objective to optimize the techniques used in cutting of ornamental rocks using diamond disk, using some values for variables involved in cutting, to improve the product, lower power consumption and extend the life of the disk. Thre types of rock: granite, quartzite and slate, were cut, at different peripheral speeds ((26,18; 35,34 e 44,77m/s), with different feed rates and depths of cut (0,5; 1,0; 1,5 e 2,0cm). With these variables and with others that were measured, it was possible to calculate the specific energy consumption in each test. These variables were related to each other, with the specific energy and with the rock properties (petrographic, physical and mechanical). This correlation allowed to analize what are the important properties for the cutting and compare the cutting conditions for the three rock types.
A demanda por rochas ornamentais tem crescido muito nos últimos anos, tanto para consumo interno, quanto para exportação. Para suprir essa demanda, a produção aumentou, houve também um desenvolvimento tecnológico, porém, é necessário estudos e investimentos nesse setor e aprimoramento das técnicas utilizadas. Pois, em geral, os processos de lavra e beneficiamento ainda são praticados sem planejamento sistemático e controle, resultando em má utilização dos equipamentos, desperdícios, altos custos de produção, problemas de segurança na operação e graves impactos ambientais. O advento das ferramentas diamantadas, utilizadas na lavra e beneficiamento de rochas ornamentais, tem contribuído, em grande parte, para o crescimento do setor, porém, há necessidade de estudos para utilizar essas ferramentas de forma a maximizar a recuperação das rochas, aumentar o lucro e diminuir os aspectos negativos envolvidos abordados anteriormente. O corte de rochas com disco diamantado, considerando uma visão integrada entre as propriedades das rochas, as variáveis envolvidas no corte e o desempenho da máquina, pode contribuir para o aprimoramento das técnicas de beneficiamento. Esse trabalho teve como principal objetivo otimizar as técnicas utilizadas no corte de rochas ornamentais com disco diamantado, utilizando-se alguns valores para as variáveis envolvidas no corte, visando a melhoria da qualidade do produto, menor consumo de energia e prolongamento da vida útil do disco. Três tipos de rocha: quartzito, granito e ardósia, foram cortados, a diferentes velocidades periféricas (26,18; 35,34 e 44,77m/s), com diferentes taxas de alimentação e profundidades de corte (0,5; 1,0; 1,5 e 2,0cm). Com essas variáveis e com outras que foram medidas, foi possível calcular a energia específica consumida em cada teste. Essas variáveis foram relacionadas entre si, com a energia específica e com as propriedades das rochas (petrográficas, físicas e mecânicas). Essa correlação possibilitou analisar quais as propriedades importantes para o corte e comparar as condições de corte para os três tipos de rocha.