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Dissertations / Theses on the topic 'CDC25Mm'
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BAOUZ, SORIA. "Caracterisation et regulation de cdc25mm, facteur d'echange gdp/gtp de souris des proteines ras." Paris 6, 1998. http://www.theses.fr/1998PA066404.
Full textAbstract:
La proteine h-ras p21 est un element essentiel au controle de la division et de la differenciation cellulaire. Elle existe sous deux conformations : l'une inactive liee au gdp, l'autre active liee au gtp. Deux types de regulateurs determinent la concentration de la forme biologiquement active : les gaps (gtpase activating proteins) qui accelerent l'hydrolyse du gtp et les gefs (guanine nucleotides exchange factors) qui stimulent l'echange gdp/gtp. La proteine cdc25mm de souris contenant 1262 acides amines est un gef de la p21 qui est exprime essentiellement dans les cellules neuronales. Son role est lie a des recepteurs membranaires couples a des proteines g heterotrimeriques. Nous nous sommes interesses aux proprietes biochimiques de son domaine catalytique (c-cdc25mm) de 285 acides amines. La purification a homogeneite de ce domaine et du complexe p21 _c-cdc25mm, nous a permis de caracteriser la reaction d'echange. Nous sommes parvenus a purifier la forme entiere de cdc25mm en tant que proteine recombinante exprimee chez e. Coli et nous avons montre, dans un systeme in vitro, que la region amino terminale de la proteine inhibe l'activite du domaine catalytique. Nous avons teste l'effet de la calmoduline et de la calpaine, deux proteines dependantes du calcium, sur l'activite de cdc25mm, suggerant ainsi une connection entre l'activation de la voie ras/cdc25mm et la voie calcique dans la cellule neuronale. L'influence de la gap sur l'activite de cdc25mm a ete etudiee ; ces deux regulateurs ne peuvent pas interagir de facon simultanee avec la forme active de ras. L'activation de cdc25mm in vivo est associee a sa phosphorylation. Afin d'etudier l'effet de ces modifications post-traductionnelles, nous avons identifie des serines/threonines phosphorylees in vitro par la pka, a l'aide de la methode de degradation d'edman ainsi que de la spectrometrie de masse. Ces residus se trouvent regroupes pour la plupart dans une region contenant des sequences pest clivees par la calpaine. Nous avons initie une etude par mutagenese dirigee de cdc25mm en substituant des residus phosphoryles pour evaluer les effets fonctionnels de la phosphorylation.
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METALLI, DAVID. "Development of Cdc25Mn derivatives as anticancer agents." Doctoral thesis, Università degli Studi di Milano-Bicocca, 2009. http://hdl.handle.net/10281/7476.
Full textAbstract:
Le proteine Ras sono proteine G monomeriche, a basso peso molecolare e dotate di una bassa attività GTPasica intrinseca che svolgono un ruolo chiave nelle vie di trasduzione del segnale coinvolte in processi di crescita e differenziamento cellulare. Ras può funzionare come un vero e proprio interruttore molecolare, trovandosi alternativamente in due stati: uno attivo (legato a GTP) ed uno inattivo (legato a GDP). I passaggi dallo stato attivo a quello inattivo e viceversa possono avvenire spontaneamente, ma la velocità delle due reazioni in questo caso sarebbe molto bassa. Per questo motivo l’attività di Ras è regolata da due classi di proteine. Le proteine GAP (GTPase Activating Protein) sono in grado di catalizzare una più efficiente idrolisi del nucleotide da GTP a GDP, portando all’inattivazione di Ras. I GEF (Guanine nucleotide Exchange Factors), invece, sono in grado di favorire la dissociazione del nucleotide idrolizzato ed il conseguente scambio GDP/GTP, contribuendo alla modulazione positiva del pathway. Varianti mutate dei geni ras sono state identificate con alta incidenza in molteplici forme di patologie tumorali. Per tale ragione le proteine Ras sono considerate target molecolari d’eccellenza nella terapia di disordini proliferativi.
Nel nostro laboratorio è stato dimostrato come una singola sostituzione amminoacidica all’interno del GEF Ras-specifico Cdc25Mm sia in grado di convertire lo stesso in una proteina dotata di proprietà dominanti negative, capace di inibire specificamente l’attività di Ras in vitro e di attenuarne il circuito di segnalazione in vivo, diminuendo il potenziale oncogenico di fibroblasti murini trasformati dall’oncogene k- ras. Inoltre, recentemente abbiamo dimostrato come anche singoli peptidi isolati dall’intero GEF (derivati dalle zone recanti le mutazioni puntiformi di cui sopra) mantengano, almeno parzialmente tali proprietà.
Scopo della presente tesi è lo sviluppo di peptidi derivati del GEF Cdc25Mm come agenti Ras inibitori e la loro validazione in linee cellulari di tumore alla vescica.
Considerato il meccanismo d'azione di tali peptidi, un requisito fondamentale per il loro funzionamento nei modelli cellulari d'interesse è la presenza di una correlazione tra il fenotipo trasformato di quest'ultimi e lo stato di attivazione di Ras. Dal momento che dati di letteratura suggeriscono un coinvolgimento del fattore di crescita IGF-I nelle patologie tumorali della vescica e dato il noto collegamento tra tale fattore di crescita ed il pathway di Ras, abbiamo inizialmente analizzato gli effetti della stimolazione da IGF-I su due linee cellulari derivate da carcinoma alla vescica (5636 e T24).
Sorprendentemente tale fattore di crescita non ha evidenziato grandi effetti sul potenziale proliferativo delle linee oggetto di studio, rivelandosi tuttavia estremamente efficace nello stimolare una aumentata motilità cellulare, come evidenziato da saggi di migrazione, invasione e wound-healing. A livello molecolare tali effetti sono accompagnati da un forte innalzamento dei livelli di Ras•GTP e dalla successiva attivazione delle vie di segnalazione a valle di Ras, come MAPK e AKT. La stimolazione da IGF-I è inoltre in grado di determinare la fosforilazione e l'attivazione di Paxillina (una proteina adattatrice nota per il suo importante ruolo nei fenomeni di migrazione cellulare) e la sua colocalizzazione con FAK (Focal Adhesion Kinase) a livello dei punti di adesione focale. Infine, tale attivazione di Paxillina, così come l'aumentata motilità cellulare indotta da IGF-I, risulta essere dipendente, in modo diretto o indiretto, dall'attività di MAPK e AKT. L'utilizzo di inibitori chimici di suddette vie o di siRNA specifici per le suddette chinasi in grado di regolarne negativamente l'espressione è in grado di attenuare infatti gli effetti indotti da IGF-I sia a livello biochimico sia a livello fenotipico.
Nel complesso, questi dati evidenziano come il pathway dell'IGF-I sia di fondamentale importanza nella regolazione della motilità in cellule tumorali di vescica, fenomeno strettamente collegato al potenziale metastatico. Questi stessi dati suggeriscono inoltre l'importanza per questi stessi fenomeni di due vie di trasduzione parallele (MAPK e AKT), la cui attivazione potrebbe tuttavia essere guidata da un unico segnale a monte, ovvero l'innalzamento dei livelli di Ras•GTP. Per questo motivo lo sviluppo di molecole Ras inibitorie altamente specifiche, in grado di attenuare il circuito di segnalazione a monte di entrambe le suddette vie, potrebbe risultare di enorme interesse per il trattamento della patologia in esame.
Per questo motivo abbiamo esplorato la possibilità di migliorare le proprietà farmacocinetiche e farmacodinamiche dei peptidi derivati da Cdc25Mm e dotati di proprietà Ras sequestranti. Allo scopo di ottenere una migliore veicolabilità in cellula, ad esempio, tali peptidi sono stati ingegnerizzati tramite l'aggiunta della sequenza responsabile delle proprietà auto-penetranti della proteina Tat. Tale sequenza (PTD, Protein-Transduction-Domain, aa 47-57 YGRKKRRQRRR) è costituita prevalentemente da aminoacidi carichi positivamente ed è in grado di veicolare l’internalizzazione di molteplici proteine, fungendo da carrier.
Abbiamo innanzitutto dimostrato, tramite saggi di transattivaizone fos-luciferasici, come l'aggiunta di tale dominio non alteri in maniera significativa le proprietà inibitorie dei peptidi di partenza e come tali peptidi siano in grado di essere effettivamente internalizzati da cellule di mammifero (fibroblasti murini NIH3T3) qualora somministrati nel mezzo di coltura.
Successivamente la ricerca è proseguita con l'ottenimento di varianti più piccole dei peptidi in oggetto, presumibilmente dotate di migliori proprietà farmacocinetiche e facilmente sintetizzabili a livello industriale. È stato quindi effettuato un design struttura-guidato, sulla base degli elementi di struttura primaria e secondaria maggiormente coinvolti nell’interazione Ras•GEF. Le varianti minimizzate sono state quindi selezionate sulla base delle proprietà Ras inibitorie misurate tramite saggi di transattivazione fos-luciferasici ed i candidati più promettenti ottenuti tramite sintesi chimica.
Dato il ruolo cruciale emerso a carico delle vie di trasduzione a valle di Ras nei fenomeni di migrazione ed invasioni stimolati dalla presenza di IGF-I in linee cellulari di vescica, tali peptidi sono stati testati in saggi di migrazione ed invasione nei modelli cellulari caratterizzati precedentemente. Tutti i peptidi Ras inibenti, anche se con intensità diversa, si sono rivelati estremamente attivi nel ridurre l'aumentata motilità indotta da IGF-I delle cellule in esame a concentrazioni sub-μM.
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Thomas, Yann. "Etude de la régulation de la protéolyse de CDC25B1." Montpellier 2, 2009. http://www.theses.fr/2009MON20127.
Full textAbstract:
Les phosphatases à double spécificité de la famille CDC25 jouent un rôle prépondérant à différents points du cycle cellulaire en activant les complexes CDK/Cyclines. Afin de restreindre l'activation de ces complexes, les CDC25s, au nombre de trois (A, B et C) dans les cellules de mammifères, sont finement régulées au cours du cycle cellulaire tant au niveau de leur activité, de leur localisation que de leur stabilité. La phosphatase CDC25B, en activant initialement le complexe CDK1/Cycline B au niveau des centrosomes, est considérée comme le starter de la mitose. Bien que dégradée par le protéasome, peu d'informations sur la régulation de sa dégradation étaient connues. Le but de ce travail a donc été de caractériser le(s) mécanisme(s) impliqué(s), ainsi que les déterminants moléculaires présents sur CDC25B, régulant sa stabilité au cours du cycle cellulaire. Une étude in cellulo de différents mutants ponctuels de la protéine nous a permis d'identifier le motif DDGFVD comme étant nécessaire à l'interaction de CDC25B avec la protéine F-Box TrCP. La perte de cette interaction entraîne une stabilisation de CDC25B à la transition métaphase-anaphase. Cette stabilisation anormale de CDC25B engendre un retard de sortie de mitose accompagné de défauts cellulaires caractéristiques d'une instabilité génétique accrue et d'une fragmentation du matériel péricentriolaire. Par ailleurs, par vidéomicroscopie nous avons observé que les cellules exprimant le mutant stabilisé de CDC25B présentent des caractéristiques morphologiques différentes des cellules exprimant la protéine sauvage, avec une vitesse de déplacement plus importante. Sachant que la surexpression de CDC25B est détectée dans de nombreux cancers généralement très agressifs, et que, comme nous l'avons montrée, une stabilisation de CDC25B en mitose induit une instabilité génétique, nous pouvons supposer que dans certains cancers cette surexpression pourrait résulter d'un défaut de dégradation de la phosphatase. Aussi, une meilleure compréhension des mécanismes de dégradation de CDC25B permettrait d'envisager le développement d'approches thérapeutiques ayant pour but d'agir sur sa stabilitéCDC25 proteins are highly conserved dual specificity phosphatases that play an essential role by activating the CDK/Cyclin complexes all along the cell cycle. To restrain CDK/Cyclin activities, these phosphatases must be tightly regulated in terms of activity, localization and stability. One of the three mammalian members, CDC25B, is considered as the starter of the mitosis through the activation of CDK1/Cyclin B complexes at the centrosomes, at the G2-M transition. This protein is known to be degraded by the proteasome but the exact mechanisms involved in this process are still unclear. To obtain a deeper insight into the regulation of CDC25B stability, we have investigated the molecular determinants and the exact mechanisms involved in CDC25B degradation in vitro as well as in cellulo. Analysis of various mutants of CDC25B led us to identify the DDGFVD motif as a motif required for the interaction of CDC25B with the F-box protein TrCP. The lack of interaction causes a stabilisation of the phosphatase in metaphase-anaphase transition. This stabilisation entails a delay in mitotic exit and several cellular defects related to genetic instability, and the fragmentation of pericentriolar matrix during mitosis. Videomicroscopy's observations indicate that cells expressing the stabilized mutant of the CDC25B exhibit an increased mobility compared to cells expressing wild type protein. Since CDC25B is frequently overexpressed in many cancers cells and that a stabilisation of the protein entails genetic instability, we propose that in some cancers this overexpression could be a consequence of a lack of CDC25B degradation. A better understanding of mechanisms regulating CDC25B degradation could lead to new therapeutical approaches focused on the control of CDC25B stability
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Scrivens, Paul James. "Regulation and chemotherapeutic targeting of human Cdc25A phosphatase." Thesis, McGill University, 2007. http://digitool.Library.McGill.CA:80/R/?func=dbin-jump-full&object_id=103293.
Full textAbstract:
The Cdc25 phosphatases are highly conserved from yeast through humans and play pivotal roles in regulating the activities of cyclin-dependent kinases (Cdks). Cdc25A is one of three human Cdc25 family members, and has previously been shown to be overexpressed in numerous cancers and to transform rodent fibroblasts. Cdc25A therefore represents a rational target for chemotherapeutic development. Further, a thorough understanding of its biology and regulation in normal and transformed cells may facilitate the development of strategies to specifically interfere with the proliferation of cancerous cells. In this work I describe experiments which demonstrate that bisperoxoVanadium compounds, and specifically bpV(Me2Phen), inhibit Cdc25A phosphatase in vitro and in vivo. Further, these compounds cause cell-cycle arrest, are cytotoxic to cancer cells, and slow the growth of tumours in mouse models. With respect to the fundamental biology of Cdc25A, I have identified a sequence element (NLS) responsible for nuclear localization of Cdc25A phosphatase. An analysis of this sequence demonstrated high conservation of flanking phosphoacceptor sites, notably Serine 292. S292 was predicted to be a consensus PKA or CamKII substrate. Using site-directed mutagenesis I have shown that S292 is the sole site of PKA phosphorylation in vitro. The functional importance of S292 phosphorylation was investigated via transfections of phospho-mimetic mutants of S292 (S292E) expressed as GFP-fusion proteins; these studies indicate that S292 phosphorylation may promote nuclear localization. Studies by other groups have indicated that S292 is a phosphorylation site for inhibitory kinases, namely Chk1 and Chk2 (4). I generated a phospho-specific antibody to this site and demonstrate by immunofluorescence and western blotting an unexpected pattern of S292 phosphorylation associated with nuclear bodies and the mitotic apparatus. I provide evidence to suggest that these sites represent local fine-tuning of Cdc25A, allowing Cdk activity to be controlled at the level of specific subcellular structures. These studies highlight the complexity of Cdc25 regulation and indicate a previously unappreciated degree of control of their activity such that these enzymes exist in multiple discrete pools within a given cell.
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Sayegh, Raphael Santa Rosa. "Flexibilidade conformacional do domínio catalítico da fosfatase Cdc25B." Universidade de São Paulo, 2016. http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-22082016-080806/.
Full textAbstract:
A fosfatase Cdc25B atua na progressão do ciclo celular através da ativação de complexos Cdk/Ciclina. Atualmente, nos modelos estruturais propostos do domínio catalítico da Cdc25B não estão incluídos os últimos 16 resíduos da região C-terminal. Este segmento tem importante papel no reconhecimento do substrato proteico e pode estar envolvido na complexação de pequenas moléculas com a Cdc25B. Assim, o principal objetivo desta tese foi avaliar a flexibilidade conformacional do domínio catalítico completo da Cdc25B em solução através de simulações computacionais e por medidas experimentais de ressonância magnética nuclear (RMN). A similaridade entre as estruturas cristalográficas e em solução foi confirmada pela previsão de ângulos diedrais φ/ψ da cadeia principal a partir dos deslocamentos químicos (CS) e pela concordância entre os acoplamentos dipolares residuais (RDC) medidos e calculados a partir da geometria cristalina. Medidas de parâmetros de relaxação de 15N e RDC evidenciaram a presença de desordem conformacional na região C-terminal, em acordo com a ausência de densidade eletrônica desse segmento no experimento de difração de raios-X. Através da comparação entre CS experimentais e previstos de simulações de dinâmica molecular (DM) longas (total de 6µs de duração) foram apontados artefatos de cristalização, possíveis erros nos campos de força usados nas simulações, falhas na composição do sistema simulado e estados conformacionais populados pela Cdc25B em solução distintos da geometria cristalográfica. De maneira geral, os CS previstos a partir das simulações para a flutuação estrutural dos resíduos da região C-terminal desordenada estão em acordo com os valores experimentais, sugerindo que os estados conformacionais deste segmento foram razoavelmente bem amostrados nas simulações. Em particular, verificou-se que o contato tipo cátion-π entre as cadeias laterais dos resíduos 550W do C-terminal desordenado e 482R do núcleo proteico, ausente na estrutura cristalográfica, pode ser importante em solução. A formação desse contato na simulação de DM também está de acordo com medidas experimentais de perturbação de deslocamentos químicos (CSP) entre construções completa e truncada do domínio catalítico da Cdc25B. Assim, através do uso conjunto de simulações computacionais e medidas experimentais foi possível obter uma representação mais completa e realista da flexibilidade conformacional do domínio catalítico da Cdc25B em solução, incluindo a determinação de possíveis contatos intramoleculares entre a região C-terminal desordenada e o núcleo proteico. Essas informações poderão ser usadas na construção de um ensemble conformacional da Cdc25B.Cdc25B phosphatase acts on the progression of cell cycle through the activation of Cdk/Cyclin complexes. Currently, the proposed structural models of Cdc25B catalytic domain lack the last 16 residues from the C-terminal region. This segment is important for protein substrate recognition and might be involved in small molecule binding to Cdc25B. Thus, the main goal of this thesis was to evaluate the conformational flexibility of the complete catalytic domain from Cdc25B through computer simulations and experimental nuclear magnetic resonance (NMR) measurements. Similarity between crystal and in solution structures was confirmed by the prediction of backbone φ/ψ dihedral angles from chemical shifts (CS) and by the agreement between observed and back-calculated residual dipolar couplings (RDC). 15N relaxation and RDC measurements pointed to the conformational disorder of the C-terminal region, in agreement with the X-ray diffraction experiment where this segment showed no electronic density. Comparison between experimental and predicted CS from long molecular dynamics (MD) simulations (6µs total running time) pointed to the presence of crystallographic artifacts, possible deficiencies in simulation force fields, inaccurate composition of the simulated system and conformational states visited by Cdc25B in solution that were not observed in the crystallographic geometry. Generally, CS predicted from simulations for the structural fluctuation of the disordered C-terminal region were in agreement with experimental values, suggesting that the simulations sampled the conformational states populated by this segment reasonably well. In particular, a cation-π contact not observed in the crystal structure between side chains of residue 550W from the disordered C-terminal tail and residue 482R from the protein core might be important in solution. This contact is also in agreement with experimental chemical shift perturbations (CSP) measured between complete and truncated constructs of Cdc25B catalytic domain. Therefore, the joint use of computer simulations and experimental measurements allowed the achievement of a more complete and realistic representation of the conformational flexibility of the Cdc25B catalytic domain in solution, including intramolecular contacts between the disordered C-terminal region and the protein core. This information might be used to obtain a conformational ensemble of Cdc25B.
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Theis-Febvre, Nathalie. "REGULATION DE L'ACTIVITE ET DE LA LOCALISATION DES PHOSPHATASES CDC25B." Phd thesis, Université Paul Sabatier - Toulouse III, 2003. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00010054.
Full textAbstract:
L'activation séquentielle des Kinases Dépendantes des Cyclines (CDK), associées à leur sous-unité régulatrice la cycline, contrôle la progression des cellules eucaryotes dans le cycle cellulaire. L'activité des complexes CDK/cycline est notamment régulée par une balance entre phosphorylation inhibitrice (Wee, Myt) et déphosphorylation activatrice par les phosphatases CDC25. Dans les cellules humaines, trois phosphatases à double spécificité CDC25A, B et C sont impliquées dans la régulation de ces complexes en différents points du cycle cellulaire. CDC25A agit à la transition G1/S alors que CDC25C contrôle l'entrée en mitose. Par contre, CDC25B agirait en phase S ainsi qu'à la transition G2/M. L'existence de trois variants de CDC25B (B1, B2 et B3) issus d'un épissage alternatif pourrait expliquer cette controverse. Afin d'étudier les rôles et les implications de chaque variant de CDC25B, nous avons d'abord étudié leur régulation par la protéine kinase CK2, kinase qui pourrait jouer un rôle dans le contrôle de la transition G2/M. Nos études in vitro ont démontré que CK2 phosphoryle les trois variants de CDC25B mais pas la protéine CDC25C. Une analyse par spectrométrie de masse de CDC25B indique qu'au moins deux résidus, les sérines 186 et 187, sont phosphorylés in vitro par CK2. De plus, CDC25B interagit avec CK2 in vitro et in vivo dans des cellules humaines et d'insectes. Enfin, la phosphorylation de CDC25B par CK2 augmente son activité phosphatase in vitro ainsi qu'in vivo. CK2 est donc un régulateur positif de l'activité catalytique des CDC25B. Au cours du cycle cellulaire ou en réponse aux points de contrôle, CDC25B est également régulée au niveau de sa localisation intracellulaire. En effet, la phosphatase réalise une navette entre le cytoplasme et le noyau, navette qui peut être régulée notamment par phosphorylation. Nous avons montré que la protéine kinase AKT/PKB phosphoryle in vitro CDC25B sur la sérine 353 et qu'elle provoque son accumulation dans le cytoplasme. L'activation d'AKT/PKB par le peroxyde d'hydrogène reproduit la relocalisation de CDC25B. Par contre, si la mutation de la sérine 353 abolit sa phosphorylation par AKT/PKB, elle n'induit qu'un retard dans la relocalisation cytoplasmique de CDC25B ce qui indique que d'autres mécanismes participent à ce phénomène. Ainsi nos différents travaux ont permis d'identifier deux nouveaux régulateurs de CDC25B, CK2 qui régule son activité catalytique et AKT/PKB qui participe au contrôle de sa localisation intracellulaire, et nous permettent de mieux comprendre la régulation de cette phosphatase même si de nombreux partenaires doivent encore être identifiés.
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Akhtar, Nazia. "Structural & biochemical characterisation of Cdc25C : a dual specificity phosphatase." Thesis, University of Birmingham, 2015. http://etheses.bham.ac.uk//id/eprint/5602/.
Full textAbstract:
The dual specificity Cdc25 phosphatases regulate mitosis and are expressed in eukaryotes. Cdc25 phosphatases have an active site motif, HCX5R, in common with other phosphatases. However, unlike the classical tyrosine phosphatases, they can dephosphorylate phospho-threonine in addition to phospho-tyrosine and have a much shallower active site. Increased expression of Cdc25 is correlated with poor prognosis in a range of cancers. In particular, increased expression of Cdc25C has been associated with prostate cancer making this protein an attractive target for drug discovery. However, drug discovery for these proteins has been hampered due to the shallow nature of the active site, difficulty in identifying specific inhibitors and toxicity. The thesis aim was to structurally and biochemically characterize Cdc25C using a range of techniques which include NMR, SAXS and X-ray crystallography in order to aid future drug design. The Characterisation of the Cdc25C full length revealed the regulatory domain to be intrinsically disordered and flexible. Construct and solution conditions were optimised to improve the solubility of the Cdc25C catalytic domain. Although, the \(^1\)H, \(^1\)\(^5\)N HSQC was well dispersed backbone assignments proved to be refractory. From a panel of inhibitors tested a few were shown to bind via WaterLOGSY and \(^1\)H-\(^1\)\(^5\)N HSQC.
8
Morris, May Catherine. "Régulation de la phosphatase double spécificité cdc25C humaine par phosphorylation." Montpellier 1, 1997. http://www.theses.fr/1997MON1T021.
Full text
9
Vidal-Fernandez, Anne. "Rôle et régulations de la phosphatase CDC25A dans les hémopathies malignes." Toulouse 3, 2008. http://thesesups.ups-tlse.fr/412/.
Full textAbstract:
La phosphatase CDC25A active les complexes CDK/Cycline permettant la progression à travers le cycle cellulaire eucaryote. Cette phosphatase agit lors de la phase G1 et en transition G1/S en activant les complexes CDK2/Cycline E et CDK2/Cycline A, et a aussi été décrite comme un régulateur de la mitose à travers la déphosphorylation du complexe CDK1/Cycline B. De manière importante, CDC25A est retrouvée sur-exprimée dans de nombreux cancers. Cependant, les mécanismes moléculaires conduisant à sa sur-expression ne sont pas encore clairement identifiés. Nous avons recherché l'implication de CDC25A dans la prolifération des cellules de leucémies aiguës myéloïdes (LAM) en réponse à l'adhésion sur une matrice extracellulaire de fibronectine. Nous avons constaté une augmentation de la prolifération de ces cellules, concomitante avec une entrée en phase S accélérée, ainsi qu'avec l'augmentation du niveau d'expression de CDC25A. A l'inverse, la prolifération de cellules hématopoïétiques normales CD34+ est inhibée par leur adhésion sur fibronectine, et le niveau d'expression de CDC25A y est fortement diminué, suggérant que la réponse en terme de prolifération dépendante de l'adhésion est modifiée lors du processus de leucémogénèse. .The CDC25A phosphatase activates cyclin-dependent kinase complexes, allowing timely ordered progression throughout the eukaryotic cell cycle. This phosphatase acts during the G1 phase and at the G1/S transition by activating the CDK2/cyclin E and CDK2/cyclin A complexes, and was also described as a mitotic regulator through dephosphorylation of the Cyclin B/CDK1 complex. Importantly, CDC25A is up-regulated in various cancers, and the molecular mechanisms leading to this up-regulation are far from being understood. First, we investigated the implication of CDC25A in adhesion-dependent proliferation of acute myeloid leukemia cells (AML). We observed an increased rate of proliferation of AML cells when adhered to fibronectin, concomitant with accelerated S phase entry and accumulation of CDC25A, in contrast to normal CD34+ cells, in which both CDC25A level and cell proliferation were decreased upon adhesion to fibronectine. Importantly, both CDC25A siRNA and a CDC25s pharmacological inhibitor impaired this adhesion-dependent proliferation. The PI3-Kinase/AKT pathway appears to be a major regulator of CDC25A stability in this system. These data suggest that the adhesion-dependent proliferation properties of hematopoïetic cells may be modified during leukemogenesis. We then investigated the status of CDC25A in other hematological malignancies such as Anaplastic Large Cell Lymphomas (ALCL) expressing the NPM-ALK oncogene, Chronic Myeloid Leukemia induced by the fusion protein BCR-ABL and AML expressing a mutated form of FLT3-receptor : FLT3-ITD. In these three models, CDC25A protein levels are abnormally increased by the presence of theses oncogenes and the PI3-Kinase pathway is also essential for this process. .
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Manzanedo, Lopez Ana. "Élaboration et caractérisation de peptides inhibiteurs de l'interaction cycline B-cdc25C." Montpellier 2, 2005. http://www.theses.fr/2005MON20196.
Full text
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Kieffer, Isabelle. "Etude de la dynamique spatiale et temporelle des phosphatases CDC25B humaine." Toulouse 3, 2007. http://www.theses.fr/2007TOU30044.
Full textAbstract:
La phosphatase CDC25B est un des acteurs clé des mécanismes de contrôle du cycle cellulaire. Elle est surexprimée dans un grand nombre de tumeurs et son ciblage pourrait présenter un intérêt thérapeutique en cancérologie. De nombreux aspects de la régulation de CDC25B restent encore mal compris, en particulier le rôle que pourraient jouer ses isoformes (CDC25B1, B2 et B3) issues d'un épissage alternatif. Pour aborder cette question, nous avons mis au point des outils nous permettant de suivre in cellulo et en temps réel l'expression des différentes isoformes de CDC25B par une approche de vidéomicroscopie. Nous avons ainsi mis en évidence une dégradation différentielle des isoformes de CDC25B au cours de la mitose. Nous avons également visualisé l'existence d'une navette nucléo-cytoplasmique des différentes CDC25B à la transition G2/M. Enfin, nous avons obtenu des résultats préliminaires sur la régulation de CDC25B après domages à l'ADN induits par un agent génotoxiqueCDC25B is one of the three dual specificity phosphatases that control entry into mitosis through the dephosphorylation and subsequent activation of CDK1-CyclinB1 complexes. CDC25B has been reported to be overexpressed in a number of human tumours. In many cases, CDC25B upregulation is associated with more aggressive phenotypes thus making CDC25B an ideal target for cancer therapy. Regulation of CDC25B is still unclear. In particular, the specific functions of the three major splice variants of this phosphatase (CDC25B1, B2 and B3) remained to be clarified. In order to address this issue, we have constructed vectors that allows us to examine the expression and the localisation of the different isoforms in living cells by real time videomicroscopy. We have demonstrated that CDC25B isoforms have different mitotic stabilities. We have also observed a nucleo-cytoplasmic shuttling of the CDC25B phosphatases at the G2/M transition
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Albert, Hélène Marie. "Epissage alternatif des phosphatases CDC25 dans le cancer du sein : expression des différents variants dans des modèles cellulaires et tissulaires de cancer mammaire et régulation en conditions de stress génotoxique." Thesis, Metz, 2011. http://www.theses.fr/2011METZ025S/document.
Full textAbstract:
Les phosphatases CDC25 jouent un rôle important dans la progression du cycle cellulaire. En outre, une surexpression des CDC25 a été rapportée dans de nombreux cancers, notamment dans le cancer du sein, et est souvent corrélée à un pronostic défavorable. Les CDC25 sont constituées de trois isoformes : A, B et C codées par des gènes distincts, tous trois soumis à un mécanisme d’épissage alternatif. Quelques études ont suggéré que certains variants d’épissage de CDC25 pourraient être plus impliqués dans les cancers que d’autres, mais aucune étude de ce type n’a jusqu’à présent été menée dans le cancer du sein. Le premier aspect de cette étude, à visée clinique, consiste donc en l’évaluation de la proportion de différents variants d’épissage de CDC25 dans le cancer du sein, dans l’optique de développer un nouvel outil pronostique. Cette étude a été réalisée sur deux modèles. D’une part, différentes lignées cellulaires cancéreuses mammaires ont été caractérisées concernant l’expression des variants de CDC25 grâce à la mise au point d’une méthode de RT-PCR quantitative inédite. De manière intéressante, nous avons observé une surexpression des transcrits A2 et B2 et une augmentation du rapport C5/C1 dans les cellules résistantes aux traitements anticancéreux, laissant supposer un lien entre l’expression de ces variants et le phénotype de résistance. D’autre part, cette étude a été étendue à la détermination de l’expression des variants de CDC25 dans des tissus mammaires tumoraux par comparaison à celle des tissus péritumoraux appariés. Les résultats de PCR quantitative obtenus pour les 75 paires de tissus testées ont mis en évidence une surexpression de CDC25A dans 64% des tumeurs, principalement due au variant A1 (69%) ; de CDC25B dans 55% des tumeurs, en partie liée à l’expression des variants B1 et B2 (47% et 21% respectivement) ; et de CDC25C dans 75% des tumeurs, le variant C5 étant clairement plus impliqué que C1 (surexpression dans 86% et 43% des tumeurs respectivement). Nous avons finalement pu établir des corrélations entre l’expression des transcrits CDC25 et certaines caractéristiques anatomopathologiques des tumeurs, telles que le grade de la tumeur et un faible statut des récepteurs aux œstrogènes pour CDC25A et CDC25B et la taille de la tumeur pour CDC25C.Le second volet de ce projet consiste en une étude plus mécanistique portant sur la régulation de l’épissage des CDC25 en conditions de dommages à l’ADN. Le traitement de plusieurs lignées cellulaires de cancer du sein par différents agents génotoxiques (doxorubicine, camptothécine, étoposide, cisplatine et tert-butyl hydroperoxyde) induit une modification du profil d’épissage de CDC25C, consistant en une forte augmentation de la proportion du variant C5 par rapport à celle de C1 (au niveau de l’ARNm et des protéines). Cette régulation a lieu au cours de la réponse précoce aux dommages à l’ADN, avant la mise en place de l’apoptose et est associée à un arrêt du cycle cellulaire. Nous avons par ailleurs montré que cette modulation de l’épissage de CDC25C est dépendante des kinases ATM/ATR et indépendante de p53. Ces résultats ont permis de mettre en lumière un mécanisme additionnel de réponse cellulaire à un stress génotoxique dans les cellules de cancer du seinCDC25 phosphatases play an important role in cell cycle progression. Moreover, an overexpression of CDC25 was reported in numerous cancers, particularly in breast cancer, and is often correlated with a poor prognosis. CDC25 are represented by three isoforms: A, B and C encoded by distinct genes, all three submitted to an alternative splicing mechanism. Few studies suggested that some CDC25 splicing variants could be more involved in cancers than others, but no such study has so far been conducted in breast cancer.The first aspect of this study, referred to clinic, consists in the evaluation of different CDC25 splicing variants proportion in breast cancer, from the perspective of developing a new prognostic tool. This study was performed on two models. On the one hand, several mammary cancerous cell lines were characterized concerning CDC25 variants expression thanks to the development of a novel quantitative RT-PCR method. Interestingly, we observed an overexpression of A2 and B2 transcripts and an increase of C5/C1 ratio in multidrug resistant cell lines, suggesting a link between the expression of these variants and the resistance phenotype. On the other hand, this study was extended to the determination of CDC25 variants expression in mammary tumoral tissues in comparison to that of matched peritumoral tissues. Quantitative PCR results obtained for the 75 pairs of tissues tested showed an overexpression of CDC25A in 64% of tumors, mainly due to A1 variant (69%); of CDC25B in 55% of tumors, partially linked to B1 and B2 variants expression (47% and 21% respectively); and of CDC25C in 75% of tumors, the C5 variant being clearly more involved than C1 (overexpression in 86% and 43% respectively). We have finally established correlations between CDC25 transcripts expression and some tumor characteristics, as the tumor grade and a lack of estrogens receptors for CDC25A and CDC25B and the tumor size for CDC25C.The second part of this project consists in a mechanistic study regarding the regulation of CDC25 splicing in DNA damage conditions. The treatment of several breast cancer cell lines with different genotoxic agents (doxorubicin, camptothecin, etoposide, cisplatin and tert-butyl hydroperoxide) induces a modification of CDC25C splicing profile, consisting in a large increase in C5 variant proportion compared to that of C1 (both at mRNA and protein levels). This regulation occurs during the early response to DNA damage, before the onset of apoptosis and is associated with a cell cycle arrest. We have also shown that this modulation of CDC25C splicing is dependent of ATM/ATR kinases and independent of p53. Finally, these results allowed to highlight an additional regulation pathway in the cellular response to genotoxic stress in breast cancer cells
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Aressy, Bernadette. "Expression de la phosphatase CDC25B et points de contrôle du cycle cellulaire." Toulouse 3, 2009. http://thesesups.ups-tlse.fr/518/.
Full textAbstract:
Les points de contrôle du cycle cellulaire assurent la surveillance de la qualité du cycle de division d'une cellule, et veillent en particulier à la préservation de notre patrimoine génétique. Ainsi, lorsque notre ADN est endommagé, les cellules activent des voies de signalisation pour bloquer la progression du cycle cellulaire. A la transition entre les phases G2 et M, l'activation de cette voie de signalisation se traduit par l'inhibition des phosphatases CDC25 dont la conséquence directe est l'arrêt de la progression du cycle et l'activation des processus de réparation ou de mort cellulaire par apoptose. Considérée comme un oncogène, CDC25B est surexprimée dans de nombreux cancers et l'élévation anormale de son expression est associée à un phénotype tumoral agressif et à un pronostic péjoratif. Cependant, les causes et conséquences de la surexpression de CDC25B dans les cancers restent mal définies. Les travaux présentés nous ont permis de mettre en évidence que l'augmentation modérée du niveau d'expression de CDC25B est suffisante pour sensibiliser les cellules aux agents génotoxiques. Un haut niveau de CDC25B favorise l'entrée illégitime des cellules en mitose après traitement clastogène, s'accompagnant d'une instabilité génétique accrue qui pourrait favoriser le processus oncogénique. Le niveau d'expression protéique de CDC25B constitue donc un paramètre à prendre en compte lors de l'élaboration de protocoles thérapeutiques antitumoraux. L'analyse des causes de la surexpression de CDC25B dans les cancers nous a conduits à nous intéresser aux déubiquitinylases (DUB). Bien que n'ayant pas réussi à mettre en évidence de DUB impliquées dans la régulation de la stabilité de CDC25B en réponse à des dommages à l'ADN, nous avons identifié plusieurs DUB participant au contrôle de la transition G2/M. .Cell cycle checkpoints are responsible for monitoring the quality of a cell division cycle, and in particular to ensure the preservation of our genetic heritage. Thus, if our DNA is damaged, cells activate signaling pathways in order to block cell cycle progression. At the transition between the G2 and M phases, the activation of this signaling pathway leads to the inhibition of CDC25 phosphatases whose direct consequence is the ruling of the cycle progression and activation of either the repair process or the apoptotic death. Regarded as an oncogene, CDC25B is overexpressed in many cancers and abnormal increase of its expression is associated with aggressive tumor phenotype and poor prognosis. However, the causes and consequences of CDC25B overexpression in cancer remain unclear. Here, we report that in p53-/- colon carcinoma cells, a moderate increase in the CDC25B level is sufficient to sensitize cells to genotoxic agents and ionizing radiations. High levels of CDC25B impair the DNA damage checkpoint and increase in spontaneous mutagenesis, a phenomenon that might potentialize oncogenic process. Our work strongly suggests that the expression level of CDC25B might be a potential key parameter of the cellular response to cancer therapy. Study of the causes of CDC25B overexpression in cancers lead us to deubiquitinating enzymes (DUB). Although we did not manage to detect any DUB that modulate CDC25B stability in response to genotoxic stress, we identify DUB that influence G2/M transition. .
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Bonnet, Jérôme. "Etude de la fonction de la phosphatase Cdc25C a la transition G2/M." Montpellier 2, 2007. http://www.theses.fr/2007MON20129.
Full text
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Gonçalves, Rui Machado. "Functional analysis of String/CDC25 phosphatase in post-mitotic neurons." Master's thesis, Universidade de Aveiro, 2015. http://hdl.handle.net/10773/15581.
Full textAbstract:
Mestrado em Biologia Molecular e CelularCell cycle and differentiation are two highly coordinated processes during organ development. Recent studies have demonstrated that core cell cycle regulators also play cell cycle-independent functions in post-mitotic neurons, and are essential for the maintenance of neuronal homeostasis. CDC25 phosphatases are well-established CDK activators and their activity is mainly associated to proliferating tissues. The expression and activity of mammalian CDC25s has been reported in adult brains. However, their physiological relevance and the potential substrates in a non-proliferative context have never been addressed. string (stg) encodes the Drosophila CDC25 homolog. Previous studies from our group showed that stg is expressed in photoreceptors (PRs) and in lamina neurons, which are two differentiated cell types that compose the fly visual system. The aims of this work are to uncover the function of stg and to identify its potential neuronal substrates, using the Drosophila visual system as a model. To gain insight into the function of stg in a non-dividing context we used the GAL4/UAS system to promote downregulation of stg in PR-neurons, through the use of an RNAi transgene. The defects caused by stg loss-of-function were evaluated in the developing eye imaginal disc by immunofluorescence, and during adult stages by scanning electron microscopy. This genetic approach was combined with a specific proteomic method, two-dimensional difference gel electrophoresis (2D-DIGE), to identify the potential substrates in PR-cells. Our results showed that stg downregulation in PRs affects the well-patterned retina organization, inducing the loss of apical maintenance of PR-nuclei on the eye disc, and ommatidia disorganization. We also detected an abnormal accumulation of cytoskeletal proteins and a disruption of the axon structure. As a consequence, the projection of PR-axons into the lamina and medulla neuropils of the optic lobe was impaired. Upon stg downregulation, we also detected that PR-cells accumulate Cyclin B. Although the rough eye phenotype observed upon stg downregulation suggests neurodegeneration, we did not detect neuronal death during larval stages, suggesting that it likely occurs during pupal stages or during adulthood. By 2D-DIGE, we identified seven proteins which were differentially expressed upon stg downregulation, and are potential neuronal substrates of Stg. Altogether, our observations suggest that Stg phosphatase plays an essential role in the Drosophila visual system neurons, regulating several cell components and processes in order to ensure their homeostasis.
O ciclo celular e a diferenciação são dois processos altamente coordenados durante o desenvolvimento dos órgãos. Estudos recentes demonstraram que os reguladores do ciclo celular também desempenham funções independentes do ciclo celular em neurónios pós-mitóticos e são essenciais para a manutenção da homeostasia neuronal. As fosfatases CDC25 são conhecidas como ativadores de CDKs e a sua atividade está principalmente associada a tecidos em proliferação. A sua expressão e atividade têm sido descritas em cérebros adultos de mamíferos. Contudo, a sua relevância fisiológica e os seus potenciais substratos nunca foram abordados num contexto não proliferativo. O homólogo de CDC25 em Drosophila é codificado por string (stg). Estudos prévios do nosso grupo mostram que stg é expresso nos fotorreceptores e nos neurónios da lâmina, que são dois tipos celulares diferenciados que constituem o sistema visual da mosca. Os objetivos deste trabalho são identificar a função de stg e os seus potenciais substratos neuronais, utilizando o sistema visual de Drosophila como modelo. Para obter informação acerca da função de stg utilizámos o sistema GAL4/UAS para reduzir a expressão de stg nos fotorreceptores, através de um transgene RNAi. Os defeitos provocados pela perda de função de stg foram avaliados no disco imaginal do olho por imunofluorescência, e durante a fase adulta por microscopia eletrónica de varrimento. Esta abordagem genética foi acoplada a uma técnica de proteómica específica, eletroforese diferencial em gel bidimensional (2D-DIGE), para identificar os substratos de Stg nos fotorreceptores. Os nossos resultados mostraram que a redução da expressão de stg nos fotorreceptores afetou o padrão de organização da retina, induzindo a perda da manutenção apical do núcleo dos fotorreceptores no epitélio do disco do olho e a desorganização dos omatídios. Também detetámos uma distribuição anormal de proteínas do citoesqueleto e destabilização da estrutura axonal. Consequentemente, a projeção dos axónios para os neurópilos da lâmina e médula do lobo óptico foi perturbada. Após a redução de expressão de stg, observamos também que os fotorreceptores acumularam Ciclina B. Apesar do fenótipo olho rugoso observado após redução da expressão de stg sugerir neurodegeneração, não detetámos morte neuronal durante a fase larvar, sugerindo que provavelmente ocorre durante a fase de pupa ou do desenvolvimento do adulto. Através da análise por 2D-DIGE identificámos sete proteínas com expressão diferencial que constituem potenciais substratos de Stg nos fotorreceptores. Em conjunto, as nossas observações sugerem que a fosfatase Stg desempenha uma função essencial em neurónios do sistema visual de Drosophila, regulando vários componentes e processos celulares para manter a sua homeostasia.
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Davezac, Noélie. "La phosphatase CDC25B: bases moléculaires de sa localisation intracellulaire et recherche de nouveaux partenaires." Phd thesis, Université Paul Sabatier - Toulouse III, 2001. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00010040.
Full textAbstract:
La progression des cellules dans le cycle cellulaire est gouvernée par une famille de complexes à activité protéine kinase : les complexes CDK/cycline. L'activité de ces complexes est régulée notamment par la déphosphorylation activatrice de résidus tyrosine et thréonine par les phosphatases à double spécificité CDC25. Trois phosphatases CDC25 ont été identifiées dans les cellules de mammifères, et lors de notre travail, nous avons étudié la phosphatase CDC25B. Dans les cellules d'adénocarcinome humain (HeLa), nous avons montré que CDC25B présente une localisation nucléaire ou cytoplasmique stricte ou pan cellulaire, suggérant un trafic nucléo-cytoplasmique actif. Par des approches de mutagenèse dirigée et d'expression transitoire de la protéine sauvage ou mutante, nous avons identifié un signal de localisation nucléaire (NLS) et d'export nucléaire (NES) fonctionnels, et montré que la rétention cytoplasmique de CDC25B nécessite son interaction avec les protéines 14-3-3. Afin de caractériser les mécanismes régulant la fonction de CDC25B in vivo, nous avons entrepris la recherche de nouveaux partenaires de cette phosphatase. Partant d'observations biochimiques : la phosphorylation in vitro de CDC25B par la protéine kinase Eg3, nous avons établi que ces deux protéines interagissent in vivo, dans une lignée surexprimant de manière conditionnelle CDC25B. Une collection de protéines mutantes de CDC25B, nous a permis d'identifier (i) le site d'interaction avec la protéine kinase Eg3, (ii) un site de phosphorylation. Aucune modification de l'activité phosphatase de CDC25B, phosphorylée par Eg3 n'est observée in vitro. Cependant, nous avons montré in vivo, par une analyse en cytométrie de flux, que l'expression de CDC25B est capable d'annuler l'accumulation des cellules en phase G2 induite par la surexpression de Eg3. Ces derniers résultats suggèrent fortement une interaction fonctionnelle entre CDC25B et Eg3, dont les mécanismes in vivo restent à préciser. L'isolement de nouveaux partenaires protéiques de CDC25B a été entrepris par leur co-purification grâce à l'utilisation de lignées U2OS exprimant HA-CDC25B de manière conditionnelle, ou de protéines recombinantes MBP-CDC25B. Certains problèmes techniques ne nous ont pas encore permis d'isoler des partenaires, mais les derniers résultats sont prometteurs.
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Reutenauer, Bertoli Sarah. "Régulation et fonctions de CDC25A dans les leucémies aiguës myéloïdes avec mutation FLT3-ITD." Thesis, Toulouse 3, 2015. http://www.theses.fr/2015TOU30112.
Full textAbstract:
Nous avons étudié la régulation et les fonctions de Cell division cycle 25A (CDC25A), phosphatase impliquée dans l'activation des cyclin-dependent kinases durant le cycle cellulaire, dans les leucémies aiguës myéloïdes portant la mutation de la tyrosine kinase Fms-Like Tyrosine kinase 3 (FLT3) FLT3-ITD, de mauvais pronostic. Nous montrons que CDC25A est une cible précoce en aval de FLT3-ITD, contrairement aux autres protéines du cycle cellulaire, par un mécanisme impliquant STAT5. L'inhibition de CDC25A était à l'origine d'une inhibition de la prolifération et d'une réinduction de la différenciation des cellules primaires ou de lignées FLT3-ITD, in vitro et in vivo, en faisant une cible prometteuse dans les LAM avec la mutation FLT3-ITD. Enfin, nous avons évalué la valeur pronostique de l'expression de CDC25A au niveau ARN messager et protéique sur une série de patients traités au CHU de Toulouse par chimiothérapie intensiveWe studied the regulation and functions of Cell division cycle 25A (CDC25A), a phosphatase involved in the activation of the cyclin-dependent kinases during the cell cycle, in acute myeloid leukemia baring the mutation of the tyrosine kinase Fms-Like Tyrosine kinase 3 (FLT3) FLT3-ITD, which confers adverse prognosis. We show that CDC25A is an early target downstream of FLT3-ITD, contrarily to other cell cycle proteins, by a mechanism involving STAT5. CDC25A inhibition gives rise to inhibition of proliferation and reinduction of differentiation in FLT3-ITD primary cells and FLT3-ITD cell lines, in vitro and in vivo. CDC25A appears as a promising target in FLT3-ITD acute myeloid leukemia. We finally evaluated the prognostic value of CDC25A expression, at the mRNA and proteic level in a series of patients treated by intensive chemotherapy at Toulouse University Hospital
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Patenaude, Alexandre. "Analyse moléculaire du gène Cdc25 dans le phénomène de régénération épimorphique." Thesis, National Library of Canada = Bibliothèque nationale du Canada, 2000. http://www.collectionscanada.ca/obj/s4/f2/dsk1/tape2/PQDD_0018/MQ49117.pdf.
Full text
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Spadafora, N. D. "Effect of CDC25 and WEE1 on plant cell cycle and morphogenesis." Thesis, University of Worcester, 2010. http://eprints.worc.ac.uk/745/.
Full textAbstract:
The cell cycle comprises the four phases of, G1, S-phase, G2 and mitosis. Two critical transitions are G1/S and G2/M; the latter is regulated by WEE1 kinase and CDC25 phosphatases. The scope of this thesis was to investigate the regulation of the G2/M transition of the cell cycle by WEE1 and CDC25, and how these genes interface with plant growth regulators in Arabidopsis thaliana. In Arabidopsis roots, the frequency of lateral roots was found to be increased by ectopic expression of Schizosaccharomyces pombe (Sp)cdc25e and reduced by Arath;WEE1 expression. I examined the effect of Arath;WEE1 and Spcdc25 on induction of shoots and roots in Arabidopsis hypocotyls in vitro. Hypocotyl explants from two over-expressing WEE1 lines , three T-DNA insertion lines and two expressing cdc25 (Spcdc25e) lines together with wild type (WT) were cultured on two-way gradients of kinetin (Kin) and naphthyl acetic acid (NAA). Below a threshold concentration of NAA (100 ng ml-1), WEE1 repressed morphogenesis in vitro, whereas at all NAA/Kin combinations Spcdc25 promoted morphogenesis (particularly root formation) over and above that in WT. Loss of function wee1-1 cultures were very similar to WT. Quantitative data indicated a significant increase in the frequency of root formation in Spcdc25e cultures compared with WT particularly at low Kin concentrations, and WEE1oe’s repressive effect was overcome by NAA but not Kin. In conclusion, WEE1 has a repressive effect on morphogenesis in vitro that can be overcome by auxin whereas Spcd25 by-passes a cytokinin requirement for the induction of morphogenesis in vitro. The role of CDC25 and WEE1 in DNA damage responses was also analysed. Two over-expressing Arath;CDC25 lines and T-DNA mutants showed no difference to WT either in standard conditions or zeocin-supplemented treatments. However, root length was longer in Arath;CDC25oe lines treated with hydroxyurea (HU) and lateral root number was increased compared to WT. This suggests a differential response of Arath;CDC25oe in the DNA replication (HU-induced) and DNA damage (zeocin-induced) checkpoints (Chapter 5). Finally the roles of WEE1 and CDC25 in cell cycle regulation were examined using tobacco TBY-2 cell cultures expressing Arath;WEE1, Nicotiana tabacum (Nicta)WEE1 or Arath;CDC25. Whilst Nicta;WEE1 lengthened G2 of the cell cycle, Arath;WEE1 had an unusual effect of shortening G2 phase and Arath;CDC25 had no observable effect (Chapter 6).
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Viry, Elodie. "Evaluation biologique de l'inhibition des phosphatases CDC25 dans des lignées d'adenocarcinomes mammaires humains." Thesis, Metz, 2010. http://www.theses.fr/2010METZ013S/document.
Full textAbstract:
Les phosphatases CDC25 sont des enzymes clés qui interviennent dans la progression du cycle cellulaire en régulant l’activité des kinases dépendantes des cyclines (Cdk) par déphosphorylation. Ces phosphatases sont des cibles thérapeutiques intéressantes car leur surexpression, notamment dans le cancer du sein, a pu être corrélée au développement de résistance à certains agents anticancéreux ainsi qu’à un mauvais pronostic.Ce projet vise à évaluer le système des phosphatases CDC25 en tant que cibles intéressantes dans le traitement du cancer du sein.Lors de cette étude, nous nous sommes intéressés à deux composés organosoufrés naturellement présents dans l’ail et l’oignon, les diallyl- (DAS4) et dipropyl- (DPS4) tétrasulfures. Nous avons montré que ces composés étaient capables d’inhiber, de manière irréversible, les phosphatases CDC25A et C in vitro. Le potentiel anticancéreux des composés DAS4 et DPS4 a été confirmé sur des cellules d’adénocarcinome mammaire humain : MCF-7 et MDA-MB-231 (lignées sensibles) et Vcr-R (lignée résistante). Leur croissance est apparue significativement altérée par ces deux composés qui a pu être associée à un blocage du cycle cellulaire en phase G2/M. Par ailleurs, nos résultats ont également suggéré l’existence d’une activité pro-apoptotique des composés DAS4 et DPS4 qui est indépendante de la production d’espèces réactives oxygénées. L’étude de l’induction de l’apoptose dans le cas des cellules MCF-7 a révélé l’implication des protéines de la famille Bcl-2.Ces résultats suggèrent que l’inhibition des phosphatases CDC25A et C serait un des mécanismes qui contribuerait à l’activité anticancéreuse des composés organosoufrésThe CDC25 phosphatases are important regulators of eukaryotic cell cycle progression and play a crucial role in the activation of cyclin-dependent kinases (Cdk) by dephosphorylation. CDC25s are attractive targets in cancer therapy because their over-expression was reported in various types of human malignancies, including breast cancer, and this has been correlated with either poor prognosis or tumor aggressiveness.Our study aims to evaluate the CDC25s as interesting targets in breast cancer treatment. This study reports the inhibitory activity of two tetrasulfides : diallyl- (DAS4) and dipropyl- (DPS4) tetrasulfides naturally occurring in garlic and onion, towards the human cell division cycle (CDC) 25 phosphatases. Both compounds have emerged as interesting irreversible inhibitors of the CDC25 isoforms A and C in vitro.Then, we have investigated the anticancer properties of DAS4 et DPS4 on both sensitive (MCF-7 and MDA-MB-231) and resistant (Vcr-R) human breast carcinoma cell lines. Experiments performed on cultured cells have showed that growth of both sensitive and resistant cells was significantly decreased by these tetrasulfides and appeared to be associated with a G2/M cell cycle arrest. In addition, our results also suggested that DAS4 and DPS4 induce apoptotis in MCF-7 cells without affecting reactive oxygen species production. Analysis of mechanisms implicated in apoptosis induction in MCF-7 cells after treatment with DAS4 et DPS4 have suggested the involvement of the Bcl-2 family members. Taken together, these results suggest phosphatases CDC25A and C as possible targets of naturally occuring polysulfides contributing to their anticancer properties
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Adjerid, Nassiba. "The Dynamics of the Unreplicated DNA Checkpoint in Xenopus laevis Embryos and Extracts." Diss., Virginia Tech, 2008. http://hdl.handle.net/10919/26681.
Full textAbstract:
When unreplicated or damaged DNA is present, cell cycle checkpoint pathways cause cell cycle arrest by inhibiting cyclin-dependent kinases (Cdks). In Xenopus laevis, early embryonic development consists of twelve rapid cleavage cycles between DNA replication (S) and mitosis (M) without checkpoints or gap phases. However, checkpoints are engaged in Xenopus once the embryo reaches the midblastula transition (MBT). At this point, the embryo initiates transcription, acquires gap phases between S and M phases, and establishes a functional apoptotic program. During the cell cycle, there are two main checkpoints that regulate entrance into S and M phases. The focus of this study is the role of protein kinase Chk1 and the phosphatase Cdc25A in the DNA replication checkpoint. In the absence of active Chk1, Cdc25A activates cyclin dependent kinases (Cdks) allowing the cell to progress into S or M phase. Chk1 regulates cell cycle arrest in the presence of unreplicated DNA in somatic cells by phosphorylating Cdc25A and leading to its degradation. Chk1 is also transiently activated at the MBT in Xenopus laevis embryos, even when there is no block to DNA replication or damaged DNA. One goal of this work is to understand the developmental role and regulation of checkpoint signaling pathways due to its monitoring of DNA integrity within the cell.
Chk1 plays a critical but not fully understood role in cell cycle remodeling and early embryonic development. In order to understand the function and regulation of Chk1 in checkpoints, the features of the MBT that activate Chk1 must be identified. The activation of Chk1 by two time-dependent events in the cell cycle, the critical nuclear to cytoplasmic (N/C) ratio and the cyclin E/Cdk2 maternal timer are explored in this study. Embryos treated with aphidicolin, resulting in a halted replication fork and therefore a reduced DNA concentration, were tested for Chk1 activation and Cdc25A degradation. Chk1 and Cdc25A were observed to undergo activation and degradation, respectively, in embryos with a reduced DNA concentration. In addition, embryos were injected with Î 34Xic cyclin E/Cdk2 inhibitor, in order to disturb the maternal timer and tested for Chk1 activation and Cdc25A degradation. Both Chk1 and Cdc25A were unaffected by the disruption of the cyclin E/Cdk2 maternal time in the embryo. Therefore, the N/C ratio and the cyclin E/Cdk2 maternal timer do not affect Chk1 activation and therefore Cdc25A degradation.
Another means of characterizing the unreplicated DNA checkpoint is through the use of mathematical modeling of the checkpoint-signaling cascade of the cell cycle. Mathematical modeling is the translating of biological pathways into mathematical equations that can simulate interactions without performing laboratory experiments. The Novák-Tyson checkpoint model made important predictions of hysteresis and bistability in the frog egg checkpoint model, predictions that were later confirmed experimentally. The model was updated with additional interactions, such as those including Myt1, a second inhibitor kinase, and lamin proteins, which become phosphorylated at the onset of nuclear envelope breakdown (NEB) at entry into mitosis. Also, experimental data was fit into the model while maintaining hysteresis and bistability. Therefore, the unreplicated DNA checkpoint model was updated with new interactions and experimental data while still preserving previously identified dynamic characteristics of the system.
As described, Cdc25A regulation is dynamic in the embryo. The checkpoint original model represents the activity of Cdc25 phosphatase on the mitosis promoting factor (MPF) that leads the cell into mitosis. In the checkpoint model, Cdc25C is the phosphatase activating MPF. However, the model does not include Cdc25A, which is an integral part of the checkpoint-signaling pathway due to its role in activating the cyclin/Cdk complex allowing entry into S and possibly M phase. Experimental studies were performed in which Cdc25A levels were reduced in embryos and extracts using Cdc25A morpholinos. Embryos and extracts showed delayed cell cycle and mitotic entry, demonstrating the importance of Cdc25A plays in the cell cycle. Based upon experimental data, the mathematical model of the DNA replication checkpoint was expanded to include Cdc25A. The expanded model should more accurately demonstrate how checkpoints affect the core cell cycle machinery. Cdc25A was incorporated into the model by gathering experimental data and designing a signaling cascade, which was translated into differential equations. The updated model was then used to simulate the effect of synthesis and degradation rates of Cdc25A on the entry into mitosis dynamics. Therefore, using mathematical modeling and experimental design, we can further understand the role that Cdc25A plays in cell cycle progression during development.
Understanding the regulation of Chk1 activity at the MBT and the role of Cdc25A in checkpoint signaling will help us further characterize the dynamics of early embryonic development. The use of mathematical modeling and experimental tools both contribute to further our understanding of controls of the checkpoint signaling pathway and therefore leading us one step closer to truly being able to model a pathway and make predictions as to the behavior of the cell during early embryonic development.Ph. D.
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Sarkis, Manal. "Les phosphates CDC25 constituent-elles des cibles importantes en cancérologie : Des inhibiteurs de l'activité enzymatique vers les inhibiteurs de l'interaction entre CDC25 et leurs substrats CDK-Cycline." Thesis, Paris 5, 2012. http://www.theses.fr/2012PA05P635.
Full textAbstract:
Les phosphatases CDC25 sont des éléments-clé de la régulation du cycle cellulaire chez les eucaryotes; elles activent par une double déphosphorylation les complexes CDK/cyclines permettant ainsi la progression dans les différentes phases du cycle. Leur sur-expression, observée dans des cancers très fréquents, est corrélée à une forte agressivité des tumeurs et un mauvais pronostic ce qui en fait des cibles d’intérêt en cancérologie. Deux nouvelles séries d’inhibiteurs ont été développées à partir d’une thiazolopyrimidinone (TZP), capable d’inhiber l’activité des CDC25, et préalablement identifiée par l’équipe. La première série a été obtenue par dimérisation de deux noyaux thiazolones conduisant à des inhibiteurs avec des CI50 de l’ordre du micromolaire sur CDC25B plus actifs que les mono-thiazolones, ces composés étant sélectifs vs PTP1B et VHR. De plus, ces dimères semblent interagir avec le site actif et la poche de liaison des inhibiteurs. Une deuxième série d’analogues de thiazolidin-4-one a été obtenue par simplification de la structure TZP. Une réaction à quatre composants, utilisant l’énergie micro-onde, a été développée pour préparer rapidement des inhibiteurs de CDC25B avec des CI50 de l’ordre du micromolaire. Enfin, une approche originale pour inhiber CDC25 en ciblant l’interaction CDC25/CDK-Cycline a débutée. Un crible in silico/in vitro sera réalisé afin d’identifier de petites molécules inhibitrices de cette interaction. Des études préliminaires pour la mise en place d’outils permettant l’évaluation de l’affinité de ces molécules pour le site de reconnaissance de CDK2 ont été engagéesCDC25 phosphatases are key regulators of the cell cycle and its checkpoints. Hence, they are required to dephosphorylate and thus activate the Cdk/Cyclin complexes triggering progression through the different phases. Over-expression of CDC25 has been demonstrated in a large number of human tumors and is often associated with aggressiveness and poor clinical prognosis. CDC25 phosphatases may therefore represent attractive targets for anti-cancer therapy. Starting from a thiazolopyrimidinone (TZP) structure, previously reported as CDC25 inhibitor in our laboratory, two series of new compounds have been developed. Dimerisation of the thiazolone scaffold led to bis-thiazolone derivatives with inhibitory activities in the micromolar range greater than that observed for the mono-thiazolones. Moreover, most of these compounds were selective CDC25 inhibitors. A second scaffold was designed by opening of the pyrimidine ring of the TZP, leading to thiazolidine-4-one derivatives that inhibit CDC25B activities with values of IC50 in the micromolar range. A four-component reaction, using micro-wave irradiation, was developed to rapidly prepare these compounds. Finally, an approach aiming at inhibiting the interactions between phosphatase CDC25 and its substrate CDK2 was engaged. Several virtual chemical libraries will be screened in silico, and the small molecules candidates selected will be assessed for their binding affinity using an in vitro assay, that we sought to develop
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Dridi, Delel. "Synthèse de dérivés coumariniques d’intérêts biologiques et antioxydants." Thesis, Université de Lorraine, 2015. http://www.theses.fr/2015LORR0335/document.
Full textAbstract:
Dans le cadre des travaux développés sur les coumarines et autres flavonoïdes au laboratoire (aurones inhibitrices de NFkB, polycycles chromaniques inhibiteurs de CDC25), le travail de la thèse a consisté à poursuivre dans ce domaine en construisant de nouvelles chalcones à partir de dérivés acétylés de coumarines par condensation avec des aldéhydes cinnamiques préparées suivant différentes méthodes. Les chalcones ainsi préparées ont été étudiées pour les effets antioxydants en utilisant la spectrophotométrie ainsi que pour l’inhibition des phosphatases CDC25As part of the work developed on coumarin and other flavonoids in our laboratory (aurones as potential NFK-B inhibitors, chromanic polycycles as CDC25 phosphatases inhibitors), the aim of this thesis was to pursue the research in this area by synthesizing new chalcones from acetylated coumarines derivatives by condensation with cynnamic aldehydes prepared by different methods. The prepared chalcones were studied for their antioxidant activity using spectrophotometry and for their inhibition of CDC25 phosphatases
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Davezac, Noélie. "La Phosphatase CDC25B : bases moléculaires de sa localisation intra-cellulaire et recherche de nouveaux partenaires." Toulouse 3, 2001. http://www.theses.fr/2001TOU30162.
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Sueur, Gabrielle. "La phosphatase CDC25A et le micro-ARN-16 au coeur de la biologie des leucémies aiguës myéloïdes portant une mutation FLT3-ITD." Thesis, Toulouse 3, 2019. http://www.theses.fr/2019TOU30156.
Full textAbstract:
Les patients présentant une Duplication Interne en Tandem dans le récepteur FLT3 (FLT3-ITD) représentent 25% des cas de Leucémie Aiguë Myéloïde (LAM), et ont un mauvais pronostic de survie par rapport aux patients exprimant le récepteur sauvage. Notre équipe a précédemment identifié la phosphatase CDC25A comme une cible précoce du récepteur muté et un acteur essentiel de la biologie de ces LAM. Les inhibiteurs pharmacologiques de CDC25A disponibles n'étant pas utilisables en clinique, nous avons donc décidé d'étudier plus en détail la voie de signalisation FLT3-ITD/CDC25A afin de trouver une autre approche pour la cibler. Dans ce travail, nous montrons tout d'abord que dans les cellules de LAM FLT3-ITD, STAT5 constitue un régulateur transcriptionnel direct de CDC25A. Nous avons ensuite identifié le micro-ARN-16 (miR-16) comme un régulateur négatif de CDC25A dont l'expression est réprimée par STAT5 en aval de FLT3-ITD. Nous nous sommes ensuite intéressés au rôle fonctionnel du miR-16, et avons montré que les cellules leucémiques FLT3-ITD sont très dépendantes de la répression de l'expression du miR-16 pour leur prolifération et le blocage de leur différenciation, deux caractéristiques essentielles des LAM. Nous avons également montré une sensibilité très marquée des lignées leucémiques et des cellules primaires FLT3-ITD par rapport aux cellules FLT3-WT à l'inhibition de Bcl2, une cible du miR-16Patients presenting an Internal Tandem Duplication in the FLT3 receptor (FLT3-ITD) represent up to 25% of Acute Myeloid Leukemia (AML) cases, and suffer from an overall poorer outcome than their peers expressing the wild type receptor. Our team has demonstrated that expression of the cell cycle regulator CDC25A is tightly controlled by FLT3-ITD in this model, and that CDC25A is a key player in the biology of these AML. However, targeting CDC25A has proven complicated and currently available pharmacological inhibitors show high toxicity. Therefore we are studying the regulation mechanisms of CDC25A downstream of FLT3-ITD, to hopefully identify another strategy to target this pathway. In this work we first show that in FLT3-ITD AML, STAT5 is a direct transcriptional regulator of CDC25A. Furthermore, we identify the micro-RNA-16 (miR-16) as a negative regulator of CDC25A whose expression is repressed by STAT5 downstream of FLT3-ITD. Interestingly, FLT3-ITD leukemic cells are very dependent on the repression of miR-16 expression for their proliferation and differentiation block, two hallmarks of AML. We also highlight a very high sensitivity to the inhibition of Bcl2, another known miR-16 target, in FLT3-ITD cell lines and AML primary samples, compared to the FLT3-WT ones
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Lundgren, Andreas. "The ABC of the cell cycle: roles of the mammalian Cdc25 isoforms /." Stockholm, 2006. http://diss.kib.ki.se/2006/91-7140-639-5/.
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Lemaire, Matthieu. "Contrôle du cycle cellulaire : les phosphatases CDC25 et la protéine SvCds1/SvCHK2." Toulouse 3, 2006. http://www.theses.fr/2006TOU30167.
Full textAbstract:
Les phosphatases CDC25 sont des acteurs majeurs de l'activation des complexes CDK-Cycline dans les cellules eucaryotes, et constituent une cible essentielle des points de contrôle du cycle cellulaire. (i) Nous avons examiné le rôle des CDC25 humaines au cours du cycle cellulaire et lors de l'activation des points de contrôle, en remplaçant le gène cdc25 unique de la levure S. Pombe par les séquences d'ADN codant différentes phosphatases CDC25 humaines. (ii) Ensuite nous avons caractérisé la phosphorylation in vitro de CDC25B par les kinases p38 et MK-2, deux acteurs de la réponse cellulaire aux radiations ultraviolettes. (iii) CDC25 est phosphorylée et inhibée par la kinase Cds1/CHK2 lors de l'activation des points de contrôle, et nous avons montré l'existence d'un variant d'épissage de cette kinase, conservé de la levure à l'homme. (iv) Enfin nous présentons des travaux suggérant la participation de Cdc25 à des complexes de haut poids moléculaire dans la levure S. PombeCDC25 phosphatases are key players in the activation of CDK-Cyclin complexes in eukaryotic cells, and as such, are major targets of the cell cycle checkpoint pathways. (i) We have examined and compared the role of human CDC25 phosphatases during the cell cycle and in response to checkpoint activation, by generating fission yeast strains expressing the human CDC25 isoforms in place of endogenous Cdc25. (ii) We have studied the in vitro phosphorylation of CDC25B by MK-2 and p38, two kinases implicated in the UV-induced DNA damage response. (iii) CDC25 is phosphorylated and inhibited by the Cds1/CHK2 kinase during checkpoint activation, and we have discovered the existence of an evolutionarily conserved splice variant of this kinase. (iv) We also present some data suggesting that Cdc25 is associated with high density complexes in the fission yeast S. Pombe
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Roussat, Mélanie. "Fonction d'un régulateur du cycle cellulaire, la phosphatase CDC25B, au cours de la neurogenèse chez les Mammifères." Thesis, Toulouse 3, 2020. http://www.theses.fr/2020TOU30030.
Full textAbstract:
Construire un système nerveux central fonctionnel nécessite une régulation stricte entre la prolifération des cellules souches/progéniteurs neuraux, et leur différenciation en neurones. Une prolifération anormale peut mener à l'apparition de tumeur, alors qu'une différenciation précoce peut épuiser le stock de progéniteurs et conduire à des malformations cérébrales comme la microcéphalie. De plus en plus de données suggèrent que la cinétique du cycle cellulaire des progéniteurs peut influencer le choix de proliférer ou se différencier. Dans le tube neural d'embryon de poulet, notre équipe a montré que l'expression de la phosphatase CDC25B, régulateur positif de la transition G2/M, raccourcit la longueur de la phase G2 et promeut la production neuronale. De plus, une partie de cette fonction neurogénique de CDC25B est indépendante de sa fonction sur le cycle cellulaire. Afin d'améliorer notre compréhension de sa fonction dans le contrôle du destin cellulaire et de déterminer la part de ses fonctions cycle cellulaire dépendante et indépendante, nous avons créé un modèle murin conditionnellement invalidé pour CDC25B. Au cours de ma thèse, j'ai mis à profit ce modèle génétique pour explorer la fonction de CDC25B dans la neurogenèse chez les Mammifères. Mon projet a consisté à (1) déterminer si la fonction neurogénique de CDC25B dans le modèle oiseau est conservée dans le développement de la moelle épinière mammifère, (2) explorer la fonction de CDC25B dans le développement du cortex cérébral. (1) J'ai pu montrer que la perte de fonction de CDC25B rallonge la phase G2 sans affecter le taux de prolifération des progéniteurs spinaux, et diminue la production des neurones dorsaux. CDC25B promeut donc la différenciation neuronale dans la moelle épinière en développement des Mammifères. (2) Le cortex cérébral est le tissu du système nerveux central le plus récent d'un point de vue évolutif. Sa mise en place est plus complexe et met en jeu une plus grande diversité cellulaire que dans la moelle épinière. Au cours de son développement, les progéniteurs apicaux (aRGs) effectuent des divisions prolifératives puis changent de mode de division pour produire des neurones et des progéniteurs basaux (bIPs et bRGs). Dans ce tissu, j'ai montré que la perte de fonction de CDC25B entraine un rallongement de la durée de la phase G2 et un raccourcissement de la durée de la phase G1 du cycle des aRGs, sans affecter le taux de prolifération et la durée totale du cycle cellulaire. En parallèle, j'ai identifié une diminution de la production des bIPs et une augmentation des bRGs. A l'inverse, le gain de fonction de CDC25B augmente le nombre de bIPs. [...]Building a functional central nervous system requires tight regulation between proliferation of neural stem/progenitor cells, and their differentiation into neurons. Abnormal proliferation can lead to tumor development, whereas early differentiation can deplete the progenitor pool and lead to brain malformations such as microcephaly. Increasing data suggest that the cell cycle kinetic of progenitors can influence their choice between proliferation or differentiation. In the chick embryo neural tube, our group showed that the expression of the CDC25B phosphatase, a positive regulator of the G2/M transition, shortens the G2 phase length and promotes neuronal production. In addition, a part of this neurogenic function of CDC25B is independent of its cell cycle function. In order to improve our understanding of its function in controlling cell fate and determining the part of its dependent and independent cell cycle functions, we generated conditionally CDC25B knock-out murine line. During my PhD project, I took advantage of this genetic model to explore the function of CDC25B during mammalian neurogenesis. My project aimed to (1) determine whether the neurogenic function of CDC25B in the bird model is conserved during mammalian spinal cord development, (2) explore the function of CDC25B during cerebral cortex development. (1) I showed that CDC25B loss-of-function lengthens the G2 phase without affecting the proliferation rate of spinal progenitors, and decreases the production of dorsal neurons. CDC25B therefore promotes neuronal differentiation in the developing mammalian spinal cord. (2) The cerebral cortex is the most recent central nervous system tissue from an evolutionary point of view. Its development is more complex and involves a more various cellular diversity than in the spinal cord. During its development, apical progenitors (aRGs) perform proliferative divisions and then switch their mode of division to produce neurons and basal progenitors (bIPs and bRGs). In this tissue, I showed that CDC25B loss-of-function results in a lengthening of the G2 phase and a shortening of the G1 phase of aRGs, without affecting the proliferation rate and the total cell cycle duration. In parallel, I quantified a decrease in bIPs production and an increase in bRGs number. Conversely, CDC25B gain-of-function increases the number of bIPs. CDC25B therefore regulates the ratio of basal progenitors produced from aRGs.[...]
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Bonnet, Frédéric. "Choix du destin cellulaire et cinétique du cycle cellulaire : rôle de CDC25B durant la neurogenèse embryonnaire." Thesis, Toulouse 3, 2016. http://www.theses.fr/2016TOU30107/document.
Full textAbstract:
Générer de la diversité cellulaire est essentiel en biologie du développement et pour préserver l'homéostasie des tissus chez l'adulte. Cela résulte du choix des cellules souches et progéniteurs à s'engager dans un destin particulier en réponse à des signaux extrinsèques et à des propriétés intrinsèques. L'objectif de ma thèse était d'élucider le rôle du cycle cellulaire dans le processus de neurogenèse (production de neurones) en utilisant comme paradigme le tube neural d'embryon de poulet. D'une part, j'ai développé une nouvelle stratégie d'imagerie permettant de mesurer la longueur des quatre phases du cycle cellulaire en temps réel dans les progéniteurs neuraux. D'autre part, j'ai réalisé des expériences de gain et perte de fonction d'un régulateur de l'entrée en mitose, la phosphatase CDC25B, dans les progéniteurs neuraux et montré que ce régulateur du cycle favorise les divisions neurogéniques au dépend des divisions prolifératives contrôlant ainsi la production neuronaleGenerating cell diversity is essential in developmental biology and to preserve tissue homeostasis in adulthood. This results from the choice of stem cells and progenitor cells to commit into a particular fate in response to extrinsic cues and to intrinsic properties. The aim of my PhD was to elucidate the role of the cell cycle in the neurogenesis process (i.e. in neuron generation) using the embryonic chick neural tube as a paradigm. On the one hand, I have developed a new real time imaging strategy to measure the length of the four cell cycle phases in neural progenitors. On the other hand, I performed gain and loss of function experiments of a regulator that control mitosis input, the CDC25B phosphatase, in neural progenitors and showed that this cell cycle regulator promotes neurogenic divisions at the expense of proliferative divisions, thus controlling neuronal production
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Brun, Marie-Priscille. "Conception rationnelle et synthèse d'inhibiteurs des phosphatases CDC25 à activité anti-tumorale potentielle." Paris 5, 2005. http://www.theses.fr/2005PA05P620.
Full textAbstract:
Les phosphatases CDC25 déphosphorylent les complexes CDK/cycline ce qui active une cascade d'événements induisant la progression dans les phases du cycle cellulaire. Les isoformes A et B étant sur-exprimées dans de nombreux cancers, la recherche d'inhibiteurs de ces enzymes offre des perspectives pharmacologiques anti-tumorales intéressantes. Notre conception d'inhibiteurs des CDC25s s'est articulée autour de deux approches. La première a consisté à chercher un inhibiteur mime du substrat naturel. Les peptides sélectionnés in vitro possèdent une cytotoxicité modeste sur cellules HeLa. Notre deuxième approche, basée sur les données structurales, nous a permis de synthétiser des dérivés de naphthoquinone. Ces molécules ont montré des effets inhibiteurs in vitro sur la CDC25B3 et sur la croissance de cellules HeLa. Nous avons également cherché à optimiser le test in vitro de mesure de l'activité enzymatique des CDC25s. Le substrat synthétique classiquement utilisé dans ces études n'étant pas spécifique des CDC25s, nous avons développé un substrat peptidique fluorescent plus proche des CDKs. Dans ce but, de nouveaux acides aminés fluorescents ont été préparés : la voie de synthèse énantiosélective que nous avons développée, rapide et efficace à partir de réactifs peu coûteux, est la plus courte décrite à ce jour. Un dérivé phosphorylé a été synthétisé et incorporé dans des séquences peptidiques issues des CDKsCDC25 phosphatases are essential key regulators of eukaryotic cell cycle progression. The CDC25A and B isoforms are over-expressed in different tumours and related cancer cell lines. CDC25s are now considered to be interesting targets in the search for novel anticancer agents. Two approaches were developed for the design of inhibitors. The first one consists in synthesizing substrate-based inhibitors. In vitro selected peptides display moderate antiproliferative activity on HeLa cells. The second approach based on structural data has led us to prepare novel naphthoquinone derivatives that inhibit CDC25B3 activity and display cellular cytotoxicity. We have also worked on the optimisation of the in vitro test classically used to evaluate CDC25 inhibitors and based on a non-specific substrate. Therefore we decided to design a peptidic fluorescent substrate that would be closer to CDKs, the natural substrates of CDC25s thus being more specific. We first developed an extremely direct and versatile synthesis of fluorescent amino acids, starting from inexpensive chiral materials. A phosphorylated precursor has been synthesized and incorporated into peptidic sequences
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Kolb, Stéphanie. "Conception, synthèse et évaluation biologique d'inhibiteurs des phosphatases CDC25 à visée anti-tumorale." Paris 5, 2009. http://www.theses.fr/2009PA05S006.
Full textAbstract:
Les phosphatases CDC25 sont des éléments-clé de la régulation du cycle cellulaire, activant les complexes CDK-cyclines. Ces enzymes sont sur-exprimées dans de nombreux cancers ce qui en fait des cibles intéressantes pour le développement de nouveaux agents anti-tumoraux. Le programme de conception d'inhibiteurs des CDC25 s'est développé sur un crible 777 silico/in vitro identifiant deux séries chimiques. La première, comportant un motif [l]pyrindine, est cytotoxique sur lignées tumorales, mais inactive sur lignée saine. La seconde, autour d'un noyau thiazolopyrimidine, inhibe l'activité de CDC25 et s'avère cytotoxique sur lignées tumorales. L'inhibiteur le plus puissant cible CDC25 sur un test plus spécifique. Un crible à moyen débit a été réalisé sur une librairie de nouveaux composés possédant le noyau thiazolopyrimidine et préparée par chimie clic. Une collection de dimères avec un motif thiazolidinone a été synthétisée et inhibe l'activité des phosphatases CDC25 et PTP1BThe development of CDC25 phosphatase inhibitors is an interesting approach towards new anti-tumour agents. CDC25 play key roles in cell cycle regulation and are over-expressed in numerous cancers. In order to identify promising inhibitors, we conducted in silico/in vitro screening which led to the discovery of potent molecules. [Ijpyrindine derivatives provided antiproliferative activities against cancerous cell lines but none towards a normal cell type. Structural modifications on the thiazolopyrimidine core, led to compounds which inhibit CDC25 activity and display cytotoxic activities against tumor cells. The most efficient inhibitor targets CDC25B in cells. To improve the activity of this series, novel derivatives were rapidly identified, following parallel "click" synthesis in solution and in situ screening for CDC25 inhibition. Finally, a series of dimers was designed from the thiazolopyrimidine core and evaluated for their inhibitory activity against a panel of phosphatases
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Collins, James Charles. "Inhibitors of Cdc25 phosphatases : potential anti-cancer drugs and tools for chemical genetics." Thesis, Imperial College London, 2011. http://hdl.handle.net/10044/1/11189.
Full textAbstract:
Cdc25 phosphatases play a crucial role in the regulation of the cell cycle, and overexpression of the three known isoforms has been directly correlated with poor cancer prognosis. Inhibition of this enzyme could prove to be an effective therapeutic strategy, but the most potent reported inhibitors lack specificity and an appropriate mechanism of action. Furthermore, more basic research is needed into the structure and precise cellular function of the different cdc25 isoforms. Following a literature survey, panels of novel inhibitors modelled on the natural product dysidiolide and reported quinonoid compounds were synthesised. Initial phosphatase assay results with cdc25A discouraged any further synthesis of related inhibitors. The untagged catalytic domain of each isoform was prepared, expressed and purified to carry out NMR structural studies. However, preliminary spectra showed a high degree of conformational flexibility that made further analysis prohibitively difficult. Extensive screening of crystallisation conditions also did not prove successful. As an alternative strategy, a ligand-based virtual screening approach using an optimised selection of reported inhibitors resulted in discovery of diarylthiazoles as novel, potent and drug-like inhibitors of cdc25 and the related phosphatase VHR. Some of these compounds also demonstrated potent anti-proliferative activity against a panel of cell lines. Parallel synthesis of a wide range of diarylthiazole analogues using a regioselective, sequential Pd-coupling approach proved moderately successful, identifying promising novel inhibitors for further development, although without significantly increasing the binding affinity. Screening of a wide range of commercially-available compounds chosen by a substructure analysis identified further promising inhibitors, which compare favourably with the best literature compounds. Attempts to develop novel methodology for the rapid and divergent synthesis of aminothiazoles ultimately proved unsuccessful with respect to various approaches to the difficult C-N bond formation, but simple conditions were found for the synthesis and Suzuki coupling of a highly electron-rich aminothiazole C4-triflate.
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Gautier, Émilie-Fleur. "Régulation et implication de la phosphatase CDC25A en aval de l'oncogène JAK2(V617F) dans les néoplasies myéloprolifératives." Toulouse 3, 2011. http://thesesups.ups-tlse.fr/1625/.
Full textAbstract:
Les néoplasies myéloprolifératives (NMP) sont des pathologies malignes caractérisées par une expansion clonale excessive de cellules de la lignée myéloïde. La mutation JAK2V617F, qui entraîne une activation constitutive de la tyrosine kinase JAK2, est impliquée dans trois NMP, la maladie de Vaquez, la thrombocytémie essentielle et la myélofibrose primitive. Nous nous sommes ici intéressés à l'implication et à la régulation de la phosphatase CDC25A en aval de la mutation, une phosphatase impliquée dans la transition G1/S du cycle cellulaire. La première partie de nos travaux ont permis de mettre en évidence une surexpression de CDC25A en aval de JAK2V617F et notamment dans des précurseurs myéloïdes de patients atteints de NMP. Notre étude suggère que cette surexpression est la conséquence d'une dérégulation traductionnelle de CDC25A impliquant le facteur d'initiation de la traduction cap-dépendante eIF-2a et le facteur de transcription STAT5. De plus, l'inhibition de CDC25A diminue les capacités clonogènes de progéniteurs possédant JAK2V617F alors qu'elle a un effet moindre sur celle des progéniteurs de donneurs sains. La deuxième partie de nos travaux a mis en évidence une expression précoce de CDC25A au cours de différenciations érythroïdes et granulo-monocytaires de progéniteurs sains réalisées ex vivo, et son absence au cours des différenciations terminales. L'ensemble de nos résultats suggère l'implication d'une dérégulation traductionnelle de CDC25A dans l'expansion hématopoïétique observée chez les patients possédant la mutation JAK2V617F et ouvre la perspective d'une fenêtre thérapeutique quant à son inhibitionMyeloproliferative neoplasms (MPN) are hematological malignancies characterized by an excessive clonal amplification of myeloïd lineage. The JAK2V617F oncogene, which induces a constitutive activation of the tyrosine kinase JAK2, is involved in three MPN: polycythemia vera, essential thrombocythemia and primitive myelofibrosis. We kept interest on the G1/S transition CDC25A phosphatase for several reasons: (i) JAK2V617F favors this cell cycle transition; (ii) CDC25A is overexpressed in several cancers and downstream other tyrosine kinase oncogenes; (iii) the presence of CDC25A currently tested in clinical trials for other malignant pathologies. In our study, we demonstrate that the CDC25A phosphatase is constitutively over-expressed downstream of JAK2V617F mutant in cell lines, JAK2V617F-positive myeloid precursors of MPN patients and in bone marrow and spleen of JAK2V617F-positive knock-in mice. This over-expression appears to be the consequence of a translational deregulation of CDC25A involving the cap-dependant translation initiation factor eIF-2alpha and the STAT5 transcription factor. Furthermore, our results show that CDC25A inhibition reduces the clonogenic and proliferative potential of JAK2V617F-expressing erythroid progenitors, while moderately affecting normal counterpart. In the second part of our study, we show that CDC25A is early expressed in ex vivo erythroid and granulo-monocytic differentiations and absent in terminal differentiations. These results suggest that CDC25A deregulation may be involved in hematopoietic cells expansion in JAK2V617F patients, making this protein an attracting potential therapeutic target
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Myer, David. "Role of the Mammalian Polo-Like Kinase 3(Plk3) in Cell Cycle Regulation and DNA Damage Checkpoints." University of Cincinnati / OhioLINK, 2006. http://rave.ohiolink.edu/etdc/view?acc_num=ucin1141395911.
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Rodrigues, Diana Raquel Monteiro. "Caracterização da fosfatase String/Cdc25 como um regulador da neurotoxicidade de Tau em Drosophila." Master's thesis, Universidade de Aveiro, 2015. http://hdl.handle.net/10773/15621.
Full textAbstract:
Mestrado em Biologia Molecular e CelularAs tauopatias, grupo onde se inclui a doença de Alzheimer (AD), são caracterizadas pela deposição intracelular de emaranhados neurofibrilares (NFTs), compostos principalmente por formas hiperfosforiladas da proteína Tau, uma proteína que se associa aos microtúbulos. Os mecanismos moleculares subjacentes à neurotoxicidade induzida por Tau não são ainda claros. Drosophila melanogaster tem sido usada para modelar diversas doenças neurodegenerativas humanas, incluindo as tauopatias. Neste trabalho foi usado o sistema visual de Drosophila como modelo para identificar os passos que podem levar à acumulação de Tau em Tauopatias. Durante o desenvolvimento do olho de Drosophila, a expressão ectópica de hTau induz um olho rugoso, em consequência da neurotoxicidade, e que pode ser utilizado para identificar modificadores do fenótipo. A fosfatase codificada por string /cdc25 (stg), um regulador universal da transição G2/M, foi previamente identificada como um supressor da neurotoxicidade associada à expressão da proteina Tau. No entanto, os mecanismos moleculares que estão na base desta interação genética nunca foram estudados, desconhecendo-se também se a atividade fosfatase de Stg/Cdc25 é essencial para modular os níveis de fosforilação de Tau. O objetivo deste projeto consistiu em elucidar os mecanismos que se encontram na base da interação Stg-Tau. Para alcançar este objectivo, usou-se uma abordagem genética e bioquímica. Os resultados obtidos sugerem que Stg é um possível modulador da neurotoxicidade de Tau.
Tauopathies, including Alzheimer disease (AD), are characterised by the intracellular deposition of neurofibrillary tangles (NFTs), which are mainly composed by hyperphosphorylated forms of the microtubule-associated protein Tau. The molecular mechanisms of Tau-induced neurotoxicity are still unclear. Drosophila melanogaster has been used to model several human neurodegenerative diseases, including tauopathies. In this work, the Drosophila visual system has been used to elucidate the steps that may lead to accumulation of Tau in Tauopathies. The ectopic expression of hTau during Drosophila eye development induces a rough eye that can be used as readout of Tau neurotoxicity. The phosphatase encoded by string/cdc25 (stg), the universal G2/M regulator, was previously identified as a strong suppressor of Tau-associated neurotoxicity. Yet, the molecular mechanisms that underlie this genetic interaction have never been addressed. Whether the phosphatase activity of Stg/Cdc25 is essential to modulate Tau phosphorylation levels also remains unknown. The aim of this project was to elucidate the mechanisms that underlie Stg-Tau interaction, using a genetic and biochemical approach. The results suggest that Stg is a potencial modulator of Tau neurotoxicity.
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Pal, Gayatri. "Characterization of the function and regulation of MiH1, the budding yeast homolog of cdc25 /." Diss., Digital Dissertations Database. Restricted to UC campuses, 2008. http://uclibs.org/PID/11984.
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Peco, Emilie. "Contrôle du cycle cellulaire et neurogenèse dans la moelle épinière embryonnaire des vertébrés : rôle de la phosphatase CDC25B." Toulouse 3, 2008. http://thesesups.ups-tlse.fr/485/.
Full textAbstract:
L'asthme allergique est une maladie inflammatoire chronique des voies respiratoires en forte augmentation. Deux sous populations de lymphocytes T CD4+ , les lymphocytes Th1 et Th2, diffèrent par leur fonction. Les lymphocytes Th 1 sécrètent de l'interféron gamma et les lymphocytes Th2 produisent de l'IL-4, 5 et 13. Les lymphocytes Th2 ont un rôle central dans la réaction inflammatoire caractéristique de l'asthme. Les voies de signalisation et surtout la régulation du calcium sont différentes entre les lymphocytes Th1 et Th2. Nos résultats montrent que les lymphocytes Th2 expriment spécifiquement des canaux calciques récepteurs aux dihydropyridines et que ces canaux sont absents des lymphocytes Th1. Ces canaux sont activés après stimulation du TCR et sont important pour la signalisation calcique et la production de cytokines Th2 (IL 4,IL 5 et IL-13). J'ai participé à montrer que la protéine kinase G est impliquée dans l'entrée de calcium dépendante des récepteurs aux dihydropyridines. Des études in vitro et in vivo montrent que l'inactivation de ces canaux inhibent la fonction des lymphocytes Th 2 avec un effet bénéfique dans l'asthme allergique expérimentale. Ces résultats montrent que des canaux calciques récepteur aux dihydropyridines exprimés spécifiquement par les lymphocytes Th 2 sont essentiels pour leur fonction. Cette voie pourrait être une nouvelle cible thérapeutique dans le traitement de l'asthme allergiqueAllergic asthma is a chronic inflamatory disease of the lungs which prevalence and severity are both increasing. CD4+ T cell subsets include Th1 cells that produce interferon-g (IFNg) and Th2 cells that produce interleukin 4,5 and 13. Th2 cells are considered as orchestrating the inflammatory reaction characteristic of asthma. Signaling pathways and especially calcium regulation differ between Th1 and Th2 cells which could offer an opportunity for the development of new therapies targeting calcium signaling in Th2 cells. We showed that voltage-operated calcium (Cav1) channels, that are characterised as dihydropyridine receptors (DHPR) in excitable cells, are specifically expressed in Th2 cells and not in Th1 cells. These channels are involved in TCR-dependent calcium response and in Th2-cytokine production (IL-4, IL-5, IL-10 and IL-13). I contributed to show that protein kinase G is implicated in calcium entry dependent on dihydropyridine receptors. In vitro and in vivo studies show that the inactivation of these channels inhibits Th2 cells functions with a beneficial effect in allergic asthma. These results show that dihydropyridine receptors calcium channels specifically expressed by Th2 cells are essential for their function. Targeting these channels is a rationale for the development of new therapies in the treatment of allergic asthma
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Sibille, Estelle. "Criblage d'inhibiteurs réversibles et irréversibles des phosphatases CDC25s par spectrométrie de masse : Application à des extraits d'origine végétale." Thesis, Université de Lorraine, 2013. http://www.theses.fr/2013LORR0260/document.
Full textAbstract:
Les protéines CDC25 (Cell Cycle Division 25) sont des régulateurs clés de la progression du cycle cellulaire et leur surexpression a été reportée dans de nombreux types de cancers. Leur inhibition apparait donc intéressante dans le cadre de traitements anticancéreux. L'objet de ces recherches a été de développer un test de criblage permettant de détecter les inhibiteurs réversibles et irréversibles des CDC25s, puis d'appliquer ce test à des extraits végétaux. La première partie implique la spectrométrie de masse par désorption/ionisation laser assistée par matrice couplée à un détecteur à temps de vol (MALDI-TOFMS) afin de détecter les molécules se liant aux CDC25s avec une liaison faible (inhibiteurs réversibles). La deuxième partie de ce test beaucoup plus innovante consiste à mettre en évidence les ligands se liant avec une liaison plus forte (inhibiteurs irréversibles) aux CDC25s. Pour cela, une étape de digestion trypsique des protéines est réalisée, puis l'étude de l'empreinte peptidique massique est procédée sur le digest afin de déceler les inhibiteurs irréversibles. En parallèle, nous nous sommes intéressés à l'application de ce test à des extraits végétaux dans le but d'identifier de nouveaux inhibiteurs des CDC25s. L'activité inhibitrice de CDC25s de ces extraits est également évaluée in vitro grâce à des tests biologiques visant à compléter les premiers résultats obtenus lors du criblage par spectrométrie de masse. De ces travaux il résulte qu'une molécule encore non connue pour son activité sur CDC25s a montré un potentiel effet inhibiteur de ces protéines et cytotoxique sur lignées cellulaires humainesThe CDC25s phosphatases are key regulators of the physiological cell cycle progression. Their overexpression has been reported in a significant number of cancers and their inhibition appears to be an interesting strategy for treatments. We propose here a rapid screening test allowing the detection of reversible and irreversible CDC25 inhibitors. The test is based on the incubation of the candidate molecules with the human CDC25 proteins followed by an ultrafiltration step. The retentate is then directly analyzed by MALDI-TOFMS to detect reversible inhibitors or submitted to PMF analysis to reveal irreversible inhibitors. In parallel we applied this test to vegetable extracts in order to identify novel CDC25 inhibitors. The CDC25s inhibitory activity of these extracts is also evaluated in vitro thanks to biological tests. It results from this work that one molecule never known for its activity on the CDC25s shows a potential inhibitory effect and is cytotoxic on human cellular lineage
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Detwiler, Ariana Claire. "Evidence for the Role of YWHA in Mouse Oocyte Maturation." Kent State University / OhioLINK, 2015. http://rave.ohiolink.edu/etdc/view?acc_num=kent1438019442.
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Gilker, Eva Adeline Gilker. "INTERACTIONS AND LOCALIZATION OF PROTEIN PHOSPHATASES, YWHA PROTEINS AND CELL CYCLE CONTROL PROTEINS IN MEIOSIS." Kent State University / OhioLINK, 2018. http://rave.ohiolink.edu/etdc/view?acc_num=kent1532699317257539.
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Escudé, Timothé. "Rôle du cycle cellulaire dans le contrôle de la neurogenèse embryonnaire et chez l'adulte : fonction de la phosphatase CDC25B." Toulouse 3, 2012. http://thesesups.ups-tlse.fr/1646/.
Full textAbstract:
Au cours de la neurogenèse embryonnaire, les neurones sont générés à partir des progéniteurs neuraux du tube neural. Ces progéniteurs prolifèrent, acquièrent un destin de soustype neuronal et se différencient en neurones sous l'action de voies de signalisation, notamment celle de Sonic Hedgehog/Gli (Shh/Gli). Notre équipe a identifié la phosphatase CDC25B, régulateur de la cinétique du cycle cellulaire, comme positivement contrôlée par la voie Shh/Gli au niveau transcriptionnel. La première partie de mes travaux a visé à : (1) définir la relevance fonctionnelle de l'induction de CDC25B par Shh et (2) déterminer si CDC25B est une cible directe de cette voie de signalisation. (1) Dans le tube neural de poulet, la perte de fonction de CDC25B induite par interférence à l'ARN s'accompagne d'un défaut de production neuronale : les progéniteurs neuraux restent de façon inappropriée indifférenciés dans le cycle cellulaire inhibant leur différenciation neuronale. J'ai analysé la cinétique du cycle cellulaire de ces progéniteurs neuraux et déterminé que la perte de fonction de CDC25B affecte spécifiquement la durée de la phase G2. Nous proposons que CDC25B ait deux fonctions au cours de la neurogenèse embryonnaire: il modifie la cinétique du cycle cellulaire des progéniteurs neuraux et contrôle la production neuronale. (2) Concernant la régulation de l'expression de CDC25B, j'ai réalisé une analyse de promotologie et caractérisé un motif cisrégulateur nécessaire et suffisant pour répondre à un gain de fonction de la voie Shh/Gli. Ce motif est localisé dans l'intron 1 du gène CDC25B de souris et contient trois sites potentiels de fixation aux protéines Gli qui agissent en synergie pour assurer la réponse à Gli. Ce motif contient un site de fixation aux protéines LefTCF, effecteurs de la voie Wnt et j'ai montré que CDC25B répondait négativement à une modulation de l'activité de cette voie. Mes données indiquent enfin que mIntron1 se comporte comme un modulateur positif de l'expression cycle-cellulaire dépendante de CDC25B. Ces données renforcent l'idée que CDC25B est une cible directe de la voie Shh/Gli et potentiellement de la voie Wnt. La neurogenèse n'est pas restreinte à l'embryon et a lieu dans l'hippocampe de souris adulte, région du cerveau où CDC25B s'exprime. La genèse de ces neurones est liée aux processus d'apprentissage et de mémoire. La deuxième partie de mon projet a concerné l'étude de la fonction de CDC25B au cours de la neurogenèse adulte. Nous avons obtenu un mutant murin conditionnel de CDC25B. Après validation de la perte de fonction, j'ai réalisé une analyse comportementale sur ces souris qui révèle que la perte de fonction de CDC25B (1) n'affecte pas leurs capacités motrices ou sensorielles mais (2) altère les performances mnésiques des souris soumises à un test hippocampo-dépendant de localisation d'objetsDuring embryonic neurogenesis, neurons are generated from neural progenitors located in the neural tube. These progenitors proliferate, are fated to differentiate into a specific subtype of neurons and initiate their differentiation under the control of signalling pathways such as Sonic Hedgehog/Gli (Shh/Gli). Our team has shown that a regulator of the cell cycle kinetics, the CDC25B phosphatase, is transcriptionally upregulated by the Shh pathway. The first part of my PhD project consisted in (1) defining the functional relevance of the Shh-dependant upregulation of CDC25B and (2) determining if CDC25B is a direct target of this pathway. (1) Downregulating CDC25B in the chicken neural tube using RNA interference causes a reduction in neuron production that is due to the maintenance of proliferating neural progenitors in an undifferentiated state. I analysed the kinetics of the cell cycle of these neural progenitors and determined that CDC25B loss-of-function specifically affects the G2 phase duration. We propose that CDC25B has two functions: to modify the cell cycle kinetics and to control neuronal production. (2) Concerning the regulation of CDC25B expression, I identified and characterized a cis-regulatory element necessary and sufficient to respond to a gain of function of the Shh/Gli pathway. This element is localized in the first intron of the murine CDC25B gene and contains three potential binding sites for the Gli proteins, transcriptional effectors of the Shh pathway that act in cooperation to respond to Gli. This element also contains a binding site for LefTCF, effectors of the Wnt pathway, and I showed that CDC25B negatively responds to a modulation of the Wnt pathway activity. My data indicate that mIntron1 acts as a positive modulator of the cell cycle-dependant expression of CDC25B. These data reinforce our hypothesis that CDC25B is a direct target of Shh/Gli pathway. Neurogenesis is not restricted to embryonic life and takes place in the hippocampus of adult mouse, where CDC25B is expressed. The neurogenesis in this region is related to learning and memory processes. The second part of my PhD project concerned the function of CDC25B during adult neurogenesis. We obtained a conditional mutant mouse for CDC25B and by means of behavioural studies, I showed that CDC25B loss-of-function (1) doesn't affect sensory skills and motility but (2) alters the mnesic performances of mice submitted to a hippocampo-dependant task of object location
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Petitjean, Anne. "Etude de la fonction du gène CDC25 de saccharomyces cerevisiae dans le métabolisme de l'AMP cyclique." Doctoral thesis, Universite Libre de Bruxelles, 1989. http://hdl.handle.net/2013/ULB-DIPOT:oai:dipot.ulb.ac.be:2013/213265.
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GEYMONAT, MARCO. "Cdc25p, le facteur d'echange pour les proteines ras chez la levure saccharomyces cerevisiae : localisation, dimerisation et interaction avec des chaperons." Paris 11, 1997. http://www.theses.fr/1997PA112202.
Full textAbstract:
Chez la levure saccharomyces cerevisiae le gene cdc25 code le facteur d'echange pour les proteines ras. Cdc25p est une proteine d'environ 180 kda, elle possede un domaine sh3 et une boite de destruction a cycline, a l'extremite n-terminale. Le domaine catalytique se trouve du cote c-terminal. Cdc25p est fortement associee a la fraction membranaire bien que la sequence primaire ne revele aucun domaine transmembranaire evident. Cdc25p est l'element connu, le plus en amont de la voie ras qui, chez la levure, conduit a l'activation de la proteine kinase dependante de l'amp cyclique (pka). La voie ras-pka est activee, dans des cellules carencees en glucose, par une source de carbone fermentescible. Cdc25 et ras sont des elements essentiels pour cette activation, neanmoins les mecanismes moleculaires qui conduisent a l'activation de cdc25p restent a comprendre. Nous avons etudie la localisation a la membrane de cdc25p et nous avons montre qu'un domaine localise au c-terminal de la proteine (du residu 1441 au 1552) est necessaire et suffisant pour cette localisation. Des etudes d'immunohistochimie ont montre une distribution de cdc25p en petits amas a la peripherie de la cellule. Les proteines ras et ira2 ne sont pas impliquees dans la localisation de cdc25p. Nous avons montre que cdc25p est un dimere et que la dimerisation ne necessite aucune autre proteine de levure. De plus, cdc25p peut former des heterodimeres avec un autre facteur d'echange pour ras : sdc25p. Nous avons recherche des partenaires de cdc25p a la membrane et nous avons montre que le produit du gene ssa1, un membre de la famille des hsp70, interagit specifiquement avec la region c-terminale de cdc25p. De plus, l'interaction avec l'hsp82 a ete aussi mise en evidence. Nous avons mesure l'accumulation de glycogene et trehalose le long de la croissance et analyse la transcription de genes regules negativement par l'ampc dans une souche deletee pour les genes ssa1 et ssa2. Les resultats obtenus montrent que, dans ce contexte genetique, la voie ras-pka est affectee. Cela suggere que les chaperons de la famille des hsp70 sont impliquees dans le controle de la voie ras-pka, probablement au niveau de cdc25p, le facteur d'echange pour ras.
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Mailhat, Charlotte. "Etudes des modifications post-traductionnelles de la phosphatase Cdc25C lors de la régulation de la transition G2/M du cycle cellulaire." Toulouse 3, 2007. http://www.theses.fr/2007TOU30310.
Full textAbstract:
La phosphatase Cdc25C est un acteur critique de la progression du cycle cellulaire par son rôle jouée dans le contrôle de l'activation du complexe CDK1-Cycline B lors de l'entrée en mitose et de la mise en place des mécanismes de surveillance. Son activité est régulée par de nombreuses kinases impliquées dans les cascades de signalisation cellulaire résultant dans la phosphorylation de nombreux résidus. Au cours de cette étude, nous avons purifié Cdc25C à partir de cellules humaines et réalisé une approche protéomique globale dans le but d'identifier de nouvelles modifications régulatrices. Nous présentons dans ce manuscrit la mise au point des conditions de purification de la phosphatase et les différentes modifications post-traductionnelles que nous avons identifiées par spectrométrie de masse, en particulier deux phosphorylations sur les résidus S168 et S263 et une méthylation sur le résidu R35. Pour terminer nous avons réalisé une analyse fonctionnelle des phosphorylations sur les S168 et S263. Nous avons montré par imagerie cellulaire que la mutation de la S263 en alanine conduisait à l'accumulation nucléaire de Cdc25C. Nous proposons ainsi que la phosphorylation de la S263 soit impliquée dans un mécanisme de régulation qui module l'import nucléaire de Cdc25CCDC25C phosphatase is a key actor in cell cycle progression that controls the activation of CDK1-cyclin B at mitosis and during the G2/M DNA damage. Its activity is known to be highly regulated by a number of signalling pathway-activated kinases resulting in its phosphorylation on multiple residues. In this study, we have purified CDC25C from cells and have used a proteomic approach to identify new regulatory phosphorylations. Here, we report the identification by mass spectrometry of two phosphorylations on serine 168 and 263, and one méthylation on arginine 35. To conclude we have realized a functional analysis of S168 and S263 phosphorylations. We demonstrate by cell imaging that mutation of S263 to alanine leads to a nuclear accumulation of CDC25C. We propose that phosphorylation at S263 is part of the regulatory mechanism that modulates nuclear import of CDC25C, thus preventing cytoplasm to nucleus shuttling
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KAPLON, TOMASZ. "Etude de la degradation du produit du gene cdc25 le facteur d'echange gdp/gtp chez saccharomyces cerevisiae." Paris 11, 1995. http://www.theses.fr/1995PA112179.
Full textAbstract:
Le gene cdc25 code pour un facteur d'echange gdp/gtp des proteines rasp de levure. Cdc25p a un role essentiel dans l'activation de la cascade ras/adenylate cyclase et c'est un element connu le plus en amont dans cette voie de signalisation cellulaire chez s. Cerevisiae. Chez la levure, le controle d'activation de cette voie de signalisation n'est pas encore elucide. Parmi les possibilites de regulation, nous nous sommes interesses au controle de la quantite intracellulaire de cdc25p dans la mesure ou cette derniere apparait limitante. Nous avons mis en evidence que la proteine cdc25 est une proteine instable possedant un temps de demi-vie court (environ 15 minutes). Le polypeptide cdc25p76kda (la partie-carboxy terminale de cdc25p) est stable. La sequence peptidique de cdc25p contient un motif en commun avec les cyclines, appele cyclin destruction box (cdb), implique dans la degradation de ces proteines. Nous avons etudie le role de la cdb dans l'instabilite de la proteine cdc25p. Nous avons mis en evidence le role de cette sequence pour la degradation de cdc25p. A l'aide de la proteine de fusion cdc25p-beta-gal et des mutants cdc nous avons etudie la stabilite du produit du gene cdc25 a differentes etapes du cycle cellulaire. Le temps de demi-vie de la proteine de fusion mesuree pour des cultures synchronisees a ete estimee a 60-70 minutes. En revanche, en utilisant un mutant cdc25#t#s, la stabilisation de la proteine de fusion a ete observee. Ces resultats indiquent que la degradation de la proteine de fusion est effectivement dependante de l'etat de la cellule par rapport au cycle cellulaire et suggerent egalement que la voie de l'ampc pourrait etre impliquee dans le controle de cette degradation
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Wang, Lili. "Etude de la régulation de la voie de signalisation AMPc-PKA chez Saccharomyces cerevisiae : effet des stress sur le facteur d'échange Cdc25p." Paris 11, 2001. http://www.theses.fr/2001PA112370.
Full textAbstract:
Cdc25p, un facteur d'échange pour Ras, est un des éléments de la voie AMPc-PKA chez Saccharomyces cerevisiae. Nous avons montré que cette protéine interagit avec les chaperons Hsp70 et Hsp90 in vitro et in vivo. De plus, nos résultats suggèrent que la protéine Cdc25p et la voie AMPc-PKA sont soumises au contrôle des ces chaperons. Les facteurs de transcription, Msn2p et Msn4p, sont activés par les divers stress. L'étude de la localisation nucléaire et de l'état de la phosphorylation de Msn2p, a montré que la voie AMPc-PKA est impliquée dans la signalisation du stress osmotique. La voie AMPc-PKA fonctionne alors, de façon redondante avec la voie HOG pour contrôler la réponse de Msn2p. De plus, ces deux voies agissent différemment sur la résistance au stress osmotique. En réponse au choc thermique, la quantité de Cdc25p diminue, par contre, sa transcription, sa localisation et son état de la phosphorylation ne présentent pas de modification significative. La diminution de la quantité de Cdc25p a été observée également dans le stress oxydant et le stress à l'éthanol. Chez la souche sauvage, le niveau intracellulaire d'AMPc est faible en absence des stress et augmente lorsque la souche est soumise aux stress. Par contre, en absence des stress, la concentration d'AMPe est beaucoup plus élevée chez les mutants tpk^w qui ont perdu le rétrocontrôle de la PKA sur le niveau de l'AMPc, elle diminue dans ces souches en réponse aux différents stress. On en conclut donc que la voie AMPc-PKA est impliquée dans la signalisation du stress. Celle-ci pourrait être contrôlée par une réduction de la quantité de Cdc25p provoquée par la dissociation du complexe de Cdc25p et des chaperons Hsp70 et Hsp90Cdc25p, an exchange factor for Ras, is one of the upstream elements of the cAMP-PKA pathway in Saccharomyces cerevisiae. We showed that this protein interacted with the chaperones Hsp70 and Hsp90 in vitro and in vivo. Moreover, the results suggested that the protein Cdc25p and the cAMP-PKA pathway were under the control of these chaperones. The transcriptional factors, Msn2p et Msn4p, are activated by diverses stress. Using parameters, such as nuclear localization and the state of phosphorylation of Msn2p, we demonstrated that the cAMP-PKA pathway was involved in the signalization of osmotic stress. Under this condition, the cAMP-PKA pathway played a redundant role with the HOG pathway on the control of the response of Msn2p. Furthermore, these two pathways had different contributions on the resistance to osmotic stress. In response to heat shock, the quantity of Cdc25p decreased, whilst on the contrary, its transcription, localization and state of phosphorylation did not show any significant modification. Such a decrease in quantity of Cdc25p was also observed under oxidative and high ethanol concentration stress. In the wildtype strain, the intracellular level of cAMP was quite low under normal conditions and increased a little in response to stress. In contrast, in the tpk^w strain, the level was much higher in the cells without stress and exhibited a decrease in response to stress. In conclusion, the cAMP-PKA pathway is involved in the signalization of stress. A decrease in the level of Cdc25p, provoked by dissociation with the chaperones Hsp70 and Hsp90, might be important for this involvement
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Melchheier, Ira. "Modulation der interzellulären Kommunikation in Säugerzellen durch Hemmung von Cdc25: zur Bedeutung mitogen-aktivierten Proteinkinasen und reaktiven Sauerstoffspezies." [S.l. : s.n.], 2004. http://deposit.ddb.de/cgi-bin/dokserv?idn=97153828X.
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Camonis, Jacques. "Cdc25, modulateur de l'activite des proteines ras et regulateur du cycle de division cellulaire de la levure saccharomyces cerevisiae." Paris 11, 1990. http://www.theses.fr/1990PA112120.
Full textAbstract:
Au cours du cycle de division cellulaire de saccharomyces cerevisiae, l'etape start en phase g1 est une etape decisionnelle pour la poursuite du cycle vers la transion g1/s. L'adenylate cyclasxe, codee par le gene cdc35, est un des regulateurs positifs de start pour la poursuite du cycle. Les produits des genes ras controlent l'activite de l'adenylate cyclase dont un autre regulateur positif est le produit du gene cdc25. Nous avons clone le gene cdc25 qui presente un cadre ouvert de lecture de 1589 acides amines. Nous avons obtenu des anticorps diriges contre le produit cdc25. Dans la levure, le produit de cdc25 est peu abondant, presente une masse moleculaire de 180000 et est associe aux membranes. Deux suppresseurs de la mutation cdc25-5 ont ete etudies. Su25-1, suppresseur recessif, definit un element de controle negatif de la cascade de production de l'ampc. Le second est l'allele ras#i#l#e#1#5#2. Son produit a ete purifie; il presente une affinite diminuee pour le gtp et surtout pour le gdp. Compare a ras2 sauvage et ras2#v#a#l#1#9, il est le seul a echanger son gdp pour du gtp et activer l'adenylate cyclase in vitro. Pour effectuer l'echange gdp>gtp, ras#i#l#e#1#5#2 pourrait court-circuiter le besoin en facteur d'echange que serait le produit de cdc25. La partie 3 du gene scd25, qui supprime la mutation cdc25-5, code pour une proteine qui presente 47% d'homologie avec la partie correspondante du produit de cdc25. Elle a ete exprimee dans e. Coli. Des extraits proteiques de ces bacteries accelerent la vitesse d'echange gdp>gtp de la proteine ras2. Tous ces resultats suggerent que le produit de cdc25 est le facteur d'echange des proteines ras dans la levure. Les parties c-terminales des produits de cdc25 et de scd25 pourraient etre les prototypes de facteurs d'echange agissant sur differentes petites proteines g de diverses especes
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Magnin, Florence Magnin Florence. "How adeno-associated virus Rep78 relocalises Cdc25B to arrest the cell cycle : the multiple interactions of Rep78 with cellular regulatory, replication and rcombination proteins /." [S.l.] : [s.n.], 2009. http://library.epfl.ch/theses/?nr=4486.
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Luo, Hao [Verfasser]. "Development of synthetic strategies towards libraries of heterocyclic and bicyclic inhibitors of Cdc25A & development of solid phase synthesis of cyclic peptides / Hao Luo." Hannover : Technische Informationsbibliothek und Universitätsbibliothek Hannover (TIB), 2015. http://d-nb.info/1074260678/34.
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