Academic literature on the topic 'Bilitranslocasi'

Background. Bilitranslocase (TC 2.A.65.1.1) is a bilirubin-specific membrane transporter, found on absorptive (stomach and intestine) and excretory (kidney and liver) epithelia and in vascular endothelium. Polyclonal antibodies have been raised in rabbits in the past, using a synthetic peptide corresponding to AA65-77 of rat liver bilitranslocase, as an antigen. Affinity-purified antibodies from immune sera have been found to inhibit various membrane transport functions, including the bilirubin uptake into human hepatocytes and the uptake of some flavonoids into human vascular endothelial cells. It was described by means of immunohistochemistry using polyclonal antibodies that bilitranslocase expression is severely down-regulated in clear cell renal carcinoma. The aim of our work was development and characterization of high-affinity, specific mAbs against bilitranslocase, which can be used as a potential diagnostic tool in renal cell carcinoma as well as in a wide variety of biological assays on different human tissues. Materials and methods. Mice were immunized with a multi-antigen peptide corresponding to segment 65-75 of predicted primary structure of the bilitranslocase protein. By a sequence of cloning, immune- and functional tests, we aimed at obtaining a specific monoclonal antibody which recognizes a 37 kDa membrane protein, and influences the transport activity of bilitranslocase. Results. On the basis of previous results, specific IgM monoclonal antibodies were produced in BALB/c mice, in order to further improve and extend the immunological approach to the study of bilitranslocase in renal cancer cells as well as to develop its potential diagnostics use. Conclusions. In this article we show an immunological approach, based on newly developed monoclonal antibodies, to a detailed biochemical and functional characterization of a protein whose gene and protein structure is still unknown. We were able to demonstrate our novel mAb as a tumor marker candidate of renal cell carcinoma, which may prove useful in the diagnostic procedures.

1. The plasma disappearance rate and the increment in plasma unconjugated bilirubin after intravenous administration of 5.9 μmol of rifamycin SV (RSV)/kg body wt. were investigated in 51 subjects with Gilbert's syndrome and 35 control subjects of both sexes. 2. Both the plasma disappearance rate and the unconjugated hyperbilirubinaemia after RSV administration were higher (P<0.001) in Gilbert's syndrome. Females, both normal and with the syndrome, showed a significantly shorter t1/2 and a lower hyperbilirubinaemic response as compared with males. A linear correlation (P<0.001) was present between RSV plasma half-life and the hyperbilirubinaemic response. 3. In vitro, RSV was shown to inhibit sulphobromophthalein (BSP) uptake in rat liver plasma-membrane vesicles with a Ki of 20 μmol/l. Evidence that this effect was due to competition for bilitranslocase was sought on preparations of the purified protein. Under these experimental conditions, RSV inhibited BSP binding with a Ki of 17 μmol/l. 4. Since RSV competes with BSP for binding to bilitranslocase in vitro, the data are interpreted as suggesting that reduced bilitranslocase function might underlie the delayed RSV plasma clearance and the exacerbated unconjugated hyperbilirubinaemia present in Gilbert's syndrome.

To investigate the molecular requirements and mechanisms for the hepatic uptake of phthaleins, the transport of tetrabromosulfonephthalein (TBS) was investigated in basolateral rat liver plasma membrane vesicles. TBS uptake was electrogenic as greatly accelerated by the creation of a positive-inside membrane potential by the addition of valinomycin in the presence of an inwardly directed potassium gradient. No effect was observed when the ionophore was added in the presence of a sodium gradient. The transport occurred into an osmotic-sensitive space and was saturable with an apparent Michaelis constant of 5.32 +/- 0.56 microM and a maximal velocity of 9.23 +/- 0.25 nmol.s-1.mg protein-1 (mean +/- SD, n = 3 experiments). TBS uptake was directly related to the extra-vesicular pH, indicating the deprotonated quinoid negative-charged form of the dye as the transported species. In contrast, TBS uptake was inversely related to the intravesicular pH, suggesting that protonation inside the vesicles may act as an efficient trap in transport process. Addition of polyclonal monospecific anti-bilitranslocase antibody to liver vesicles specifically inhibited TBS uptake rate (3.27 +/- 0.17 vs. 5.82 +/- 0.61 nmol.s-1.mg protein-1, n = 3, P less than 0.001). These data indicate that TBS is electrogenically transported across the liver cell plasma membrane by bilitranslocase. They also indicate that the presence of a negative charged group on the benzenic ring of the ligand is important in accounting for the transport.

2006/2007
I flavonoidi sono metaboliti secondari presenti in numerose piante commestibili che rappresentano una parte integrante dell’alimentazione umana. Numerosi studi epidemiologici hanno dimostrato che una dieta ricca di flavonoidi può avere un ruolo rilevante nella prevenzione di diverse patologie, come alcune neoplasie e le malattie cardiovascolari. L’endotelio vascolare svolge un ruolo fondamentale nel mantenimento dell’omeostasi vascolare e alterazioni a questo livello, in particolare se croniche, possono causare l’avvio di lesioni arteriosclerotiche. I flavonoidi esplicano le loro azioni a livello dell’endotelio vascolare attraverso meccanismi diversi, che vanno dalle loro attività anti-infiammatorie, alla loro capacità di modulare la sintesi e l’espressione di proteine e di secondi messaggeri coinvolti in numerose reazioni cellulari. Le proprietà biologiche di questi composti naturali sono state oggetto di numerosi studi, ma ancora oggi il meccanismo che spiega l’entrata di queste sostanze all’interno delle cellule, ed in particolare, nelle cellule endoteliali, rimane poco conosciuto. La maggior parte dei flavonoidi è presente negli alimenti in forma glicosilata, altamente idrofilica, pertanto non in grado di attraversare le membrane biologiche se non attraverso specifici trasportatori di membrana. In particolare, tra le proteine di membrana coinvolte nel trasporto di questi composti, sembra ricoprire un ruolo importante la bilitranslocasi (TC 2.A.65.1.1), un trasportatore di anioni organici situato al polo sinusoidale della cellula epatica e presente anche nella mucosa gastrica, che ha dimostrato di mediare il trasporto della quercetina, un flavonolo, e di alcuni antociani, una classe di flavonoidi contenuta soprattutto nel vino e nella frutta rossa. Anche alcuni componenti della superfamiglia delle proteine ABC (ATP-Binding Cassette), come le proteine P-glicoproteina (ABCB1), MRP1 (Multi-Drug Resistance related Protein 1) (ABCC1), MRP2 (Multi-Drug Resistance related Protein 2) (ABCC2) e BCRP (Breast Cancer Resistance related Protein) (ABCG2), hanno dimostrato di interagire con numerosi flavonoidi. Queste proteine agiscono da pompe di membrana e, attraverso un meccanismo energia –dipendente, legato all’idrolisi dell’ATP, permettono l’estrusione dei loro substrati dall’interno verso l’esterno delle cellule. I trasportatori in entrata ed in uscita possono, quindi, avere un ruolo importante nel regolare le concentrazioni intracellulari dei flavonoidi, necessarie per le loro azioni biologiche. Lo scopo di questa ricerca è stato analizzare tre modelli di cellule endoteliali nei quali sono stati studiati l’espressione della bilitranslocasi e delle proteine ABC ed il loro possibile ruolo nel trasporto di flavonoidi. Sono state utilizzate cellule endoteliali primarie di aorta umana e la linea cellulare endoteliale umana Ea.hy 926, che deriva dalla fusione di cellule endoteliali HUVEC (Human Umbilical Vein Endothelial Cells) con la linea cellulare di carcinoma polmonare A549. I dati di queste cellule sono stati confrontati con quelli ottenuti in cellule endoteliali primarie di aorta di ratto, espiantate mediante un metodo messo a punto nei nostri laboratori. Sono state condotte analisi di immunocitochimica, di Western blot e di valutazione dell’espressione dell’RNA messaggero mediante tecnica RT-PCR, per studiare l’espressione delle proteine di membrana nei tre diversi modelli cellulari. Infine, è stato messo a punto un saggio di uptake della quercetina per studiare il trasporto dei flavonoidi nei queste cellule. I risultati ottenuti mediante le tecniche immunochimiche hanno evidenziato l’espressione della bilitranslocasi in tutti e tre i tipi di cellule endoteliali. Tra i trasportatori ABC, le proteine MRP1, MRP2 e BCRP sono state tutte identificate in queste cellule, mentre la P-glicoproteina è risultata meno espressa in tutti e tre i modelli cellulari. Il saggio di trasporto messo a punto in queste cellule ha permesso di dimostrare che la quercetina entra nell’endotelio vascolare mediante la bilitranslocasi, come trasportatore in entrata, e viene estrusa dalle proteine ABC nelle cellule endoteliali. Il saggio, inoltre, ha permesso di studiare il trasporto anche di altri polifenoli, contenuti nella dieta, come la malvidina 3-glucoside, un antociano presente soprattutto nel vino rosso, e dell’acido caftarico, che si trova principalmente nel vino bianco. I risultati ottenuti hanno messo in luce un ruolo della bilitransloacasi nel trasporto anche di questi composti.
1979