Dissertations / Theses on the topic 'Analisi in vitro'

In questi ultimi anni, diversi studi si sono posti come obiettivo quello di analizzare la biomeccanica del rachide, focalizzandosi sulla valutazione del range of motion e della rigidezza dei singoli componenti, quali dischi e vertebre, tralasciando l’aspetto relativo alle deformazioni. Il mio lavoro di tesi si propone di verificare l’applicabilità di un metodo innovativo per la caratterizzazione meccanica, in termini di deformazione, di segmenti di rachide multi-vertebre, oggetto di studio presso il laboratorio dove ho svolto la tesi. Tramite l’utilizzo della Correlazione Digitale di Immagini (DIC), attraverso misure a tutto campo e non invasive, si è riusciti a discriminare gli spostamenti e le deformazioni sull’intera superficie del rachide preso in analisi, affiancando come supporto algoritmi che permettessero un controllo preliminare. Partendo da un rachide di maiale, applicandogli un pattern bianco su sfondo blu e diverse configurazioni di carico, sono giunto all’implementazione di un metodo di analisi in grado di valutare quantitativamente e qualitativamente lo stato delle deformazioni, per poi applicarlo a segmenti di rachide umano. In ultima analisi si è arrivati a riconoscere l’importanza di uno studio a tutto campo dei segmenti di rachide, date le diverse distribuzioni di deformazione tra i suoi componenti (vertebre e dischi).

In questo lavoro ci siamo concentrati sullo studio di un pane arricchito col 4% (p/p) di sansa sgrassata di oliva (DOP) prodotto nell’ambito del progetto europeo H2020 EcoProlive. La sansa di oliva sgrassata è un sottoprodotto derivante dalla produzione dell’olio di oliva ed è caratterizzata da un elevato contenuto di polifenoli, risulta interessante valutarne il potenziale prebiotico e l’impatto sul microbiota del colon umano. Per questo, i prodotti studiati sono stati sottoposti a digestione gastro duodenale e successivamente a fermentazione colonica distale nel modello intestinale in vitro MICODE (Multi-Unit In vitro Colon Model). Il campionamento è stato effettuato prima, durante e dopo 24 ore di fermentazione, al fine di eseguire analisi metabolomiche tramite SPME GCMS, sequenziamento genomico 16S attraverso MiSeq e quantificazione assoluta delle principali specie batteriche tramite qPCR. Dai risultati di questo studio è possibile affermare che il prototipo di pane Eco 4% possiede un potenziale prebiotico più debole rispetto ai frutto-oligosaccaridi dell’inulina, ma più forte del suo pane di controllo privo di polifenoli aggiunti. Durante il periodo di fermentazione Eco4% non ha influenzato l’eubiosi e non ha indotto la disbiosi. Inoltre sono stati registrati l’aumento dell’abbondanza di specie probiotiche o benefiche, come Lactobacillales e Bifidobacteriaceae e la diminuzione di specie opportunistiche o patogene. Grazie all’analisi del volatiloma è stata riscontrata la produzione di composti bioattivi come gli acidi grassi a corta e media catena. Composti dannosi come gli acidi grassi a catena ramificata ed indolo e scatolo, invece, sono stati ridotti. Questi risultati sono supportati da un approccio statistico multivariato in grado di combinare dati di genomica e di metabolomica microbica, in una vetrina multi-omica, a dimostrazione della visibile relazione causa-effetto generata da una certa fibra che possiede un potenziale prebiotico.

Nell’ultimo decennio la scoperta dei microRNA ha messo in luce un nuovo e fine meccanismo di regolazione post-trascrizionale, che interviene in molti processi quali lo sviluppo, il differenziamento la proliferazione e la morte cellulare. Inoltre, numerose evidenze hanno dimostrato il coinvolgimento dei microRNA in diverse patologie. Nella maggior parte degli studi effettuati, e' stata utilizzata la tecnologia microarray per identificare i microRNA coinvolti nei meccanismi patogenetici, ma anche per ottenere dei profili di espressione caratteristici di patologia con valore diagnostico o prognostico. Questi studi suggeriscono che l'analisi dei profili di espressione dei microRNA può essere considerata uno strumento utile per comprendere quale ruolo essi svolgono nella regolazione dei processi fisiopatologici. In questo lavoro abbiamo studiato il profilo di espressione di microRNA, mediante tecnologia microarray in due diversi modelli sperimentali: 1) un modello in vitro, utile per la comprensione dei meccanismi molecolari alla base della risposta immunitaria; 2) un modello in vivo, idoneo per lo studio della patogenesi di una patologia epatica molto diffusa nota come NAFLD ("Non-alcoholic fatty liver disease"). E' di recente scoperta la relazione tra infiammazione, immunità innata e microRNA, che sono descritti essere coinvolti nella regolazione della risposta cellulare all’infezione microbica. Noi abbiamo, così, analizzato lo specifico profilo di espressione di microRNA in cellule dendritiche umane, utilizzando un modello in vitro di stimolazione e attivazione mediante agonisti di differenti recettori Toll-like (TLRs): R848/Resiquimod, ligando del TLR7/8; LPS, ligando del TLR4; e poly(I:C), ligando del TLR3. Questa analisi ha permesso di identificare gruppi di microRNA espressi specificamente in risposta a determinati stimoli e puo' risultare utile per chiarire il possibile ruolo dei microRNA nei meccanismi attraverso i quali le cellule dendritiche discriminano i diversi patogeni. La steatosi epatica di origine non-alcolica, o NAFLD, è una patologia emergente caratterizzata da un ampio spettro di condizioni epatiche: dalla semplice steatosi, alla steatoepatite con fibrosi più o meno avanzata (NASH, non-alcoholic steatohepatitis). La patologia nelle sue forme più gravi può evolvere fino alla cirrosi e all’epatocarcinoma. La NAFLD ha una complessa eziopatogenesi ancora poco chiara. Per individuare i possibili meccanismi molecolari coinvolti nello sviluppo della NAFLD abbiamo utilizzato un modello animale, capace di riprodurre i vari aspetti della patologia umana. In prticolare, in questo studio abbiamo effettuato l’analisi dei profili di espressione dei microRNA nel tessuto epatico di ratti sottoposti a diversi regimi dietetici. I nostri risultati hanno dimostrato che il trattamento con i diversi regimi ipercalorici causa un aumento significativo del peso corporeo e del fegato, e di alcuni parametri metabolici rispetto agli animali controllo, come anche differenti danni epatici. L’analisi dei microRNA ha dimostrato la significativa deregolazione di 3 microRNA down-regolati (miR-122, miR-451 e miR-27a) e 3 up-regolati (miR-200a, miR-200b e miR-429) negli animali sottoposti alle diete ipercaloriche rispetto alla dieta standard. Fra i potenziali bersagli di tali microRNA emergono alcune molecole coinvolte nel controllo dell’apoptosi e dell'infiammazione, ma soprattutto proteine del segnale intracellulare, e del metabolismo lipidico e glucidico.
Over the last decade, the discovery of microRNAs revealed a new mechanism of post-transcriptional regulation. MicroRNAs are involved in many biological processes such as development, differentiation, proliferation and cell death. Moreover, several evidences showed the pathogenic role of microRNAs in various diseases. A lot of studies used microarray technology to identify miRNAs involved in the pathogenesis, but also to obtain the expression pattern characteristic of pathology with diagnostic or prognostic assessment. These studies suggest that profiling of microRNAs may be used to understand the role they play in regulating pathophysiological processes. In this work we employed microarray technology to investigate the expression profile of microRNAs in two different experimental models: 1) an in vitro model, useful for understanding the molecular mechanisms underlying the immune response, 2) a in vivo model, suitable for studying the pathogenesis of non-alcoholic fatty liver disease, also known as NAFLD. Recently, has been explored the relationship between inflammation, innate immunity and microRNAs, which are described to be involved in regulating cellular response to microbial infection. Thus, we identified the specific expression profile of microRNAs in human dendritic cells, using an in vitro model of stimulation and activation by agonists of different Toll-like Receptors (TLRs): R848/Resiquimod, ligand of TLR7/8; LPS, ligand of TLR4; and poly(I: C), ligand of TLR3. Analysis of expression profiles identified groups of miRNAs expressed specifically in response to treatments with LPS, R848, or their combination with respect to control dendritic cells. This analysis will help to clarify their possible role in mechanisms of dendritic cells to discriminate pathogens. The non-alcoholic fatty liver disease or NAFLD is an emerging disease characterized by a wide spectrum of liver conditions from simple steatosis, steatohepatitis with or without fibrosis (NASH, non-alcoholic steatohepatitis). The etiopathogenesis of NAFLD is complex and still unclear. To identify possible molecular mechanisms involved in the development of NAFLD, we used an animal model, able to reproduce various aspects of human pathology. In this study we performed the analysis of microRNAs expression profiles in liver tissue of rats subjected to different diets. Our results showed that treatment with different ipercaloric regimens caused a significant increase in body weight and liver, and some metabolic parameters, compared to control animals, as well as different liver damage. The analysis of microRNAs showed the significant downregulation of three microRNAs (miR-122, miR-451 and miR-27a) and the up-regulation of other three microRNAs (miR-200A, miR-429 and miR-200B) in animals treated with ipercaloric diets respect to those with a standard diet. Among the potential targets of these microRNAs we found some molecules involved in the regulation of apoptosis and inflammation, but also intracellular signaling proteins, and lipid and glucose metabolism.

Le abitudini alimentari degli ultimi decenni hanno risentito del cambiamento dello stile di vita della popolazione, registrando un aumento del consumo di alimenti ready-to-eat (piatti pronti, snack, salumi e formaggi), ricchi di grassi saturi e trans, sale e zuccheri. Vista la stretta correlazione tra alimentazione e salute, l’Organizzazione Mondiale della Sanità ha consigliato di seguire una dieta che sia il più possibile varia e ricca di cibi freschi e nutrienti, limitando l’utilizzo di sale, zucchero, grassi saturi e trans ed evitando il consumo di alcol. La regione Emilia-Romagna vanta la produzione di alimenti della tradizione di origine animale, quali formaggi e salumi. Per ovviare alla diffusione di malattie non trasmissibili tra la popolazione, causate dall’introduzione di alimenti ad alto contenuto di sale, la regione si impegna per incentivare le aziende produttive a ri-elaborare i prodotti della tradizione culinaria emiliano-romagnola affinché siano più conformi alle linee guida nazionali e internazionali. Questo lavoro di tesi prende parte al progetto “MiMe4Health” che nasce con l’obiettivo di ampliare l’offerta di prodotti lattiero-caseari e della salumeria, mettendo in atto nuove produzioni che abbiano un profilo salutistico e nutrizionale migliore, in quanto a basso contenuto di sale e privi di nitrati e nitriti aggiunti. Sono stati presi in considerazione prodotti a base di carne, in particolare salami della tradizione e analoghi nutrizionalmente migliorati grazie al ridotto contenuto di sale e senza nitrati aggiunti. È stata valutata e confrontata la digeribilità, quindi la bioaccessibilità e la biodisponibilità, dei nutrienti delle due categorie di prodotto durante la digestione in vitro, sfruttando la Spettroscopia 1H-NMR. La ricerca svolta nell’ambito del lavoro di tesi ha dimostrato che la digeribilità dei salumi innovativi rispetto a quelli tradizionali è mantenuta con cinetiche e quantità essenzialmente equivalenti.

La steatosi epatica non alcolica (Non-alcoholic fatty liver disease NAFLD) interessa circa il 20-30% della popolazione generale e rappresenta la malattia epatica cronica più comune nei paesi industrializzati. La NAFLD presenta un potenziale evolutivo, attraverso la fase infiammatoria denominata NASH (Non-alcoholic Steato-Hepatitis), verso la fibrosi, la cirrosi ed in alcuni casi l'epatocarcinoma. L'identificazione dei pazienti a rischio evolutivo da NAFLD a NASH è una delle più importanti sfide in epatologia. La complessità molecolare delle due condizioni patologiche in vivo rende necessario lo sviluppo di modelli in vitro per lo studio delle vie di segnalazione e dei meccanismi molecolari compromessi o alterati nella NAFLD e nella NASH. In letteratura non sono ancora presenti dati High-throughput sull'espressione dei microRNA in modelli in vitro di NAFLD e di NASH. A tale scopo abbiamo analizzato l'espressione di 754 microRNA nelle HepG2 a seguito di trattamento con stimoli non lipotossici (Oleato:Palmitato, OA:PA) (modello di NAFLD) e a seguito di trattamento lipotossico (Palmitato, PA) (modello di NASH). Queste analisi sono state effettuate sia a livello intracellulare sia a livello extracellulare per i microRNA secreti nel mezzo di coltura. In questo modo abbiamo osservato che il trattamento con OA:PA determinava rispettivamente una variazione del 2.8% e del 10% dei microRNA totali rilevati nelle cellule e nel mezzo di coltura, mentre il trattamento con palmitato causava una deregolazione rispettivamente del 10% e del 19% dei microRNA intracellulari ed extracellulari. Mediante Single TaqMan Assay abbiamo validato la deregolazione dei seguenti microRNA: miR-126, miR-150, miR-223, miR-483-3p, miR-1226*, miR-1290. Utilizzando un nuovo approccio computazionale per l'analisi della perturbazione delle pathway, abbiamo riscontrato che i target dei microRNA intracellulari ed extracellulari erano coinvolti in processi cellulari e molecolari associati all'insorgenza ed alla progressione da NAFLD a NASH, come ad esempio il metabolismo degli acidi grassi, la regolazione di fattori di trascrizione lipogenici (ad esempio PPAR, SREbP), il metabolismo del glucosio, il metabolismo del recettore delle LDL, la risposta all'insulina, l'apoptosi e l'infiammazione. Il trattamento con PA, rispetto al trattamento con OA:PA, presentava un maggior arricchimento statisticamente significativo di funzioni associate alla NASH sia per i microRNA intracellulari che per i microRNA extracellulari DE. È stata analizzata l'espressione genica, mediante Real-Time PCR, di alcuni dei target dei microRNA differenzialmente espressi identificati. Questi dati potrebbero essere utili per identificare il ruolo dei microRNA nel metabolismo lipidico epatico e nella patogenesi e progressione dello spettro NAFLD; inoltre, se validati in vivo, potrebbero portare all'identificazione di nuovi microRNA epato-specifici come biomarcatori di diagnosi differenziale.

La colonna vertebrale è la principale sede di metastasi, le quali possono alterare la normale distribuzione dei tessuti ossei e ridurre la capacità della vertebra di sostenere carichi. L’instabilità spinale causata dalle metastasi, tuttavia, è di difficile determinazione. La caratterizzazione meccanica delle vertebre metastatiche permetterebbe di identificare e, di conseguenza trattare, quelle ad alto rischio di frattura. In questo studio, ho valutato il comportamento meccanico a rottura di vertebre umane affette da metastasi misurando in vitro il campo di deformazione. Undici provini, costituiti da due vertebre centrali, una metastatica e una sana, sono stati preparati e scansionati applicando carichi graduali di compressione in una micro-tomografia computerizzata (μCT). Le deformazioni principali sono state misurate attraverso un algoritmo globale di Digital Volume Correlation (DVC) e successivamente sono state analizzate. Lo studio ha rivelato che le vertebre con metastasi litiche raggiungono deformazioni maggiori delle vertebre sane. Invece, le metastasi miste non assicurano un comportamento univoco in quanto combinano gli effetti antagonisti delle lesioni litiche e blastiche. Dunque la valutazione è stata estesa a possibili correlazioni tra il campo di deformazione e la microstruttura della vertebra. L'analisi ha identificato le regioni in cui parte la frattura (a più alta deformazione), senza identificare, in termini microstrutturali, una zona preferenziale di rottura a priori. Infatti, alcune zone con un pattern trabecolare denso, presunte più rigide, hanno mostrato deformazioni maggiori di quelle dei tessuti sani, sottolineando l’importanza della valutazione della qualità del tessuto osseo. Questi risultati, generalizzati su un campione più ampio, potrebbero essere utilizzati per implementare nuovi criteri negli attuali sistemi di valutazione dell'instabilità spinale.

La riduzione della frattura distale del radio mediante placche e viti è un’operazione chirurgica che consiste nell’andare a ricostruire la corretta anatomia della sezione distale del radio attraverso l’utilizzo di una placca e tante viti, corticali e a stabilità angolare, necessarie a tenere fermi i diversi frammenti. Tale metodologia è quella maggiormente utilizzata al giorno d’oggi ma presenta diversi fattori che possono contribuire allo sviluppo di patologie provocate da un suo non corretto inserimento o contribuire al suo fallimento. Conseguenza diretta di questo è la ricerca di metodologie alternative di riduzione della frattura distale del radio al fine di scongiurare numerose problematiche legate alla metodologia standard. Il presente lavoro nasce dalla necessità di mettere a punto un metodo per la caratterizzazione biomedicale in vitro di ricostruzioni di fratture distali del radio ovvero definire una procedura standard necessaria a confrontare la tecnica di ricostruzione comunemente utilizzata con tecniche innovative e, attraverso una analisi prima visiva e poi analitica, andare a trarre conclusioni su quale delle tecniche sotto indagine è la migliore.

Il monitoraggio delle vibrazioni e del rumore per la diagnosi delle condizioni di funzionamento dei macchinari ha acquisito un’enorme importanza dovuta alla sempre maggiore accessibilità, in termini di costo e di facilità di utilizzo, delle strumentazioni per l’acquisizione del comportamento vibratorio. L’investimento viene ampiamente giustificato dai vantaggi sia in termini di efficacia nell’individuazione preventiva di difetti e cause di guasto, che di caratterizzazione oggettiva della qualità di funzionamento della macchina. Il presente lavoro relaziona dell’analisi vibro-acustica applicata ad un riduttore epicicloidale prodotto da STM spa attraverso gli strumenti per l’analisi recentemente introdotti nella sala prove dell’azienda, poichè esso presenta, allo stato attuale di produzione e commercializzazione, una rumorosità troppo elevata di cui non si conoscono le cause. Le modifiche introdotte sono state scelte sulla base dell’esperienza tecnica dell’azienda, con l’intento di ridurre il livello di emissione acustica del riduttore. Gli effetti di tali modifiche sono stati valutati in riferimento ai livelli di emissione acustica e di severità di vibrazione, due valutazioni di tipo globale poi affiancate e confrontate con l’analisi spettrale, allo scopo di giustificare e comprendere meglio i risultati ottenuti.

Orientadores : Antonio Wilson Sallum, Enilson Antonio Sallum
Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba
Made available in DSpace on 2018-07-28T23:28:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Martins_EleonoradeOliveiraBandolin_D.pdf: 5329012 bytes, checksum: 0abd0bd9fc5363f22c6576baea267c8f (MD5) Previous issue date: 2001
Resumo: O objetivo deste trabalho foi avaliar, in vitro, o grau de rugosidade radicular produzido pelos vários tipos de instrumentos utilizados durante o processo de instrumentação. Foram selecionados 110 dentes humanos extraídos. Estes dentes foram lavados em água corrente e acondicionados em recipientes com formol para serem manipulados todos ao mesmo tempo, por um único operador. Os dentes foram divididos aleatoriamente, em 11 grupos instrumentados com curetas Gracey; lima periodonta1; aparelho ultra-sônico; aparelho sônico; broca diamantada extra-fina, em caneta de alta e baixa-rotação; broca carbide multilaminada de 12 e 30 lâminas, em caneta de alta e baixa rotação; e grupo controle, sem instrumentação. Foram realizadas três leituras paralelas e três perpendiculares ao sentido de instrumentação, em cada amostra antes e depois da instrumentação, utilizando um aparelho rugosímetro. Os dados foram analisados estatisticamente pelos teste '1;" pareado e ANOV A. Os resultados mostraram que o uso de todos os instrumentos produziram aumento de rugosidade na superfície radicular. As pontas diamantada extra-finas utilizadas em alta-rotação produziram o menor aumento de rugosidade em relação ao grupo controle, seguido em ordem crescente de rugosidade pelos seguintes instrumentos: lima periodontal manual, cureta Gracey manual, broca de 30 lâminas em alta-rotação, ponta diamantada em baixa-rotação, broca de 12 lâminas em alta rotação, broca de 30 lâminas em baixa-rotação, broca de 12 lâminas em baixa-rotação, aparelho sônico e aparelho ultra-sônico. Foram também realizadas fotomicrografias das superfícies radiculares, após a instrumentação, em microscopia eletrônica de varredura, com aumento de 150 e 350 vezes, com fins ilustrativos
Abstract: The aim of this study was to evaluate the "in vitro" roughness degree generated by several instruments used for root planning. 110 extracted human teeth were selected. The teeth were washed and stored in formaline, to be manipulated all at the same time by only one person. Then, they were randomly divided into 11 groups and scaled with gracey hand curette, hand periodontal file, ultrasonic scaler, sonic sca1er, fine-grit-diamond bur with high and low-speed headpiece, 12 and 30-1amina bur with high and low-speed hand piece, and control group without instrumentation. Three parallel readings and 3 perpendicular readings were made on the instrumentation direction in the samples before and after instrumentation, with the use of a porfilometer. It was made a statistical data analysis through the doble "t" and ANOV A tests. The results showed that the fine-grit-diamond bur with high-speed hand piece had the lowest values of roughness increase in relation to the control group, followed by the groups: hand periodontal file; hand curette ; 30-lamina bur with high-speed hand piece; fine-grit-diamond bur with low-speed hand piece; 12-lamina bur with high-speed hand piece; 30-lamina bur with low-speed headpiece; 12-lamina bur with low-speed hand piece; sonic scaler and ultrasonic sca1er. Photomicrographs in scanning electron microscopy were taken for illustration, with 150 and 350 times of magnitude
Doutorado
Periodontia
Doutor em Clínica Odontológica

Orientador : Rolf Dieter Illg
Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia
Made available in DSpace on 2018-07-15T23:40:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Faria_RicardoTadeude_M.pdf: 2054667 bytes, checksum: 9dfc11dd2295abce2168b07a7b601658 (MD5) Previous issue date: 1992
Resumo: Com o objetivo de estudar o controle genético da regeneração de plantas "in vitro" em tomate. gen6tipos com alta e baixa capacidade deregeneração de plantas foram, identificados para um determinado meio de cultura. Para a indução de calos, o meio de cultura contendo os sais de Murashige & Skoog (MS) foi suplementado com 1 mg/l de AIA e 2,25 mg/l de BAPi para a regeneração de plantas adicionou-se 0,5 mg/l de AIA e 5mg/l de BAP. Como explante utilizaram-se segmentos de hípoc6tilo de plantas germinadas "in vitro", inoculados por 15 dias no meio de indução de calos e subcultivados a cada 30 dias em meio de regeneração por um per1odo de 2 meses. Após esse perlodo os calos foram. transferidos, por mais 30 dias, para meio MS sem fitorreguladores, para alongamento dasgema e crescimento dos "plantlets". o gen6tipo WV-700 (LvcopersiconDimDinellifolium) que apresentou uma alta capacidade de regeneraçãode plantas (927.),utilizado como doador de p6lem, foi cruzado com os gen6tipos de L. esculentum recalcitrantes' para esta caracter1stica: VFN-S(57.), Petomech(77.), Santa Rita(07.), além de dois gen6tipos da variedade cerasiforme: CNPH-OSO(S7.) e Red CherI'Y{S%). Os cultivares VFN-S e Santa Rita destinam-se ao consumo "in natura" e Petomech à indústria. A análise estatística dos dados, obtidos pela freqência de calosque regeneram (R), envolveu resultados das gerações F, F , cruzamentos 12 reciprocos, além de retrocruzamentos com os 5 genótipos que não regeneram plantas(NR). Os hlbridos F apresentaram alta capacidade de regeneração de plantas (75-907.). Com efeito de dominancia, não tendo sido observado diferenças nos cruzamentos recíprocos. A segregação na geração F foi pr6xima de 9:7 (R:NR) e nos retrocruzamentos próximo de1:3(R:NR), ambas não significativas ao nível de 5'%. no teste X2. Sugerindo, portanto, o envolvimento de dois genes dominantes com interação na expressão da regeneração. Esses resultados indicam que a transferência da capacidade de regeneração de genótipos selvagensPara variedades comerciais do tomateiro, deve ser relativamente fácil. já que essa característica é dominante e controlada qualitativamente
Abstract: With the objective of studying the genetic control of in vitro plant regeneration ability in tomato, high and low expressing genotypes for that trait were initially identified, using a previously defined culture medium. For callus induction, the utilized medium was that of Murashige &, Skoog (MS), supplemented with IAA (1 mg/l) and BAP (0,5 mg/I) and BAP (2,25 mg/l)for plant regeneration IAA(0,5 mg/l)and BAP(0,5 mg/l) was added to the same MS medium.Hypocotyl segments were inoculated for 15 days in callus lnduction medium and thereafter, subcultured every 30 days in regeneration medium, for two months.. Subsequent1ycalli were transfered to MS medium without growth regulators for one month more, to promot_ bud elongation and plantlet growth. LYCODersicon pimpinellifolium, genotype WV-700, with high plant regeneration ability (92%.) used as polen danar, was crossed to 5 different recalcitrant b esculentum genatypes for that charactet, namely: VFN-S' (5%),Petomech (7%.),Santa Rita (0%.), beyand two cerasif orme genotypesof L esculentum, namely CNPH-oSO (8%.) and Red Cherry (5%.). VFN-8 and Santa Rita cultlvars are used in salads or for consuption 'in natura', whereas Petomech is destinated for industry; cerasiforme genotypes have no economic importance. Statistical analysis were based upon frequency data of calli that regenerated plants (R) in F1, F2, reciprocal crosses and backcrosses, with all five genotypes that did not regenerate plants (NR). F1 hibrids showed high plant regeneration ability (75-90%.) with and effect of dominance; no differences were observed in recipocral crosses. Segregation ratio in F2 generation was near to 9:7(R:NR) and in backcrosses the ratio expressed was near to 1 : 3 (R:NR), both not signíficant at the 5%. level, in x2- Tests, suggesting an interaction of two dominant genes in the expression of the trait studied. These results indicate that the transfer of plant regeneration ability from wild tomato genotypes to commercial ones, must be relatively easy once a qualitatively inherited dominant trait involved.
Mestrado
Genetica
Mestre em Ciências Biológicas

Orientador: Sergio Roberto Peres Line
Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba
Made available in DSpace on 2018-08-12T22:28:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Saito_CristianePereiraBorges_D.pdf: 2404829 bytes, checksum: ef69d02f749dac4b0974b53ad416de6d (MD5) Previous issue date: 2009
Resumo: O gene PAX9 é um regulador chave durante o processo de desenvolvimento dentário e, particularmente em humanos, mutações neste gene estão associadas a fenótipos peculiares como agenesias dentárias. O objetivo deste estudo foi descobrir novas coordenadas acerca da atividade transcricional do promotor desse gene e de um possível padrão de metilação. Quanto ao estudo da metilação, foram avaliadas amostras de DNA genômico extraído da papila dentária de embriões humanos através de enzimas de restrição sensíveis à metilação e através da amplificação por Reação da Polimerase em Cadeia-PCR com oligos específicos. A extração de DNA de amostras incluídas em parafina foi padronizada no laboratório de Morfologia da Faculdade de Odontologia de Piracicaba, FOP-UNICAMP. Amostras de DNA extraídas de saliva humana foram usadas como controle. Para os ensaios de transcrição, foram amplificados através de ensaios com a transcriptase reversa, transcritos do gene Pax9 de Células Embrionárias de Rato, bem como de Células Odontoblastóides de Camundongo- MDPC-23 (Mouse Odontoblast Cell-like-23). Esses transcritos foram quantificados através de PCR semi-quantitativa. A região promotora do gene PAX9 humano íntegra (-947 - +251) e deletada (-485 - +22), recombinada com o vetor de expressão pGL3Basic, contendo o gene repórter luciferase após a região promotora, foi transfectada em cultura de Células Embrionárias de Rato. Todas as placas de cultura foram submetidas à ação de duas drogas: Ácido Retinóico (AR) e Dexametasona (Dex). Após a lise das células, os níveis relativos de expressão da proteína luciferase foram analisados, utilizando o kit Dual-Glo Luciferase (Promega), em um luminômetro. Os resultados mostram que: (1) O gene PAX9 encontra-se metilado in vitro; (2) O AR inibiu a síntese de RNA mensageiro transcrito pelas Células Embrionárias Rato. O promotor do gene humano PAX9 clivado nos sítios -485 e +22 e que não continha 507pb não foi afetado pelos receptores do AR. O Promotor PAX9 íntegro foi ativado na presença do AR na maior concentração da droga ; (3) A Dex estimulou a transcrição do gene Pax9 no grupo de células MDPC-23 e influenciou positivamente ambas as versões do promotor do gene PAX9 com as concentrações: 0.1µM e 1nM. Esses resultados demonstraram que os receptores dos hormônios esteróides AR e Dex podem se ligar diretamente a sequências do gene Pax9 em ratos e camundongos e que a região contendo 507pb retirada do promotor do gene PAX9 humano pode conter sítios de ligação para receptores do AR. Além disso, o sítio de metilação encontrado na região promotora do gene PAX9 humano resultou em novas perspectivas acerca do seu padrão de funcionamento em células normais.
Abstract: PAX9 is a key regulator during tooth development and plays an essential role in the patterning of murine and human dentition. In humans, mutations in PAX9 are associated with unique phenotypes of familial tooth agenesis that mainly involve posterior teeth. The objectives of this study were to gain new insights into the transcriptional activity and DNA methylation within the promoter region of human PAX9 gene in vitro. The methylation pattern was examined by studying PAX9 gene promoter in Dental Papilla of human Embryos through methylation-sensitive restriction enzyme and PCR amplified with specific oligos. DNA extractions from paraffin-embedded tissue sections were well established in Morphology Laboratory, Piracicaba Dental School. DNA samples from Buccal Epithelial Cells were used as control. In the present study, we have PCR amplified cDNAs encoding Rat Pax9 and Mouse Pax9 from Primary embryonic cell culture obtained from 13 day-old Wistar Rat and Mouse odontoblast cell-like culture-23 (MDPC-23) respectively and quantified by Semi-quantitative PCR technique. Furthermore, we examined the transcriptional activity of human Pax9 gene promoter: (-947 - +251) full Pax9 promoter and the promoter lacking 507bp (-485 - +22) through recombination into pGL3Basic expression vector and transfection in primary rat embryonic cells. Cell cultures were all submitted to selective regulation of both drugs: Retinoic Acid (RA) and Dexamethasone (Dex). Relative luciferase expression units were obtained by dual luciferase assay kit (Promega). Our results showed that: (1) human PAX9 promoter region is methylated in vitro; (2) RA inhibited Pax9 mRNA synthesis in Primary Rat embryonic cells while PAX9 promoter lacking 507bp (-485 - +22) was not activated by RA receptors. Human PAX9 full promoter activation was improved by RA treatment at the greater concentration; (3) Dex stimulated Pax9 mRNA activity in MDPC-23 and influenced positively both PAX9 promoter versions with 0.1µM and 1nM concentrations. The present experiments suggest that a 507bp region in PAX9 promoter may contain binding sites for RA receptors and that Dex and RA steroid hormone receptors may be directly bind to the sequences of murine Pax9 gene. The methylation pattern finding give rise to new perspectives on PAX9 patterning in normal cells phisiology.
Doutorado
Histologia e Embriologia
Doutor em Biologia Buco-Dental

Orientadores: Pedro L. Rosalen, Francisco Carlos Groppo, Silvia Storpirtis
Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba
Made available in DSpace on 2018-08-03T20:19:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ruenis_AnaPaulaDelBortolo_D.pdf: 1381414 bytes, checksum: e3776b9035f370c07d450faba3768b2a (MD5) Previous issue date: 2004
Doutorado

Orientador: Simonides Consani
Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba
Made available in DSpace on 2018-08-07T04:24:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tavares_StenyoWanderley_D.pdf: 4135316 bytes, checksum: 2a1db19579aa0bcb7036ac454b9d537d (MD5) Previous issue date: 2006
Resumo: O objetivo desta pesquisa foi comparar in vitro diferentes métodos de remoção da resina residual do esmalte dentário, após o descolamento de bráquetes. Cinquenta terceiros molares foram separados em 5 grupos (n=10). Foram fixados bráquetes metálicos com o compósito ortodôntico Transbond XT, após condicionamento do esmalte com ácido fosfórico a 37%. Os corpos-de-prova foram armazenados água à temperatura ambiente, por 24 horas. Após a remoção dos bráquetes com pistola removedora (Orthosource), a resina remanescente foi removida por diferentes tipos de tratamento: grupo I ¿ Jato de óxido de alumínio, grupo II ¿ ponta de carboneto de tungstênio (30 lâminas) em alta rotação; grupo III ¿ ponta de óxido de alumínio (Shofu) em alta rotação, grupo IV ¿ sistema Profin, grupo V ¿ alicate removedor de resina. Depois da remoção da resina foi realizado polimento com pasta de pedra pomes e água em todas as amostras. A avaliação foi realizada antes da colagem, depois da remoção e após o polimento, por meio da análise rugosimétrica de superfície e observação em microscopia eletrônica de varredurra. Os valores de rugosidade foram submetidos à análise de variância a ao teste de Tukey (5%). Os resultados demonstraram que em todas as fases, o alicate removedor de resina foi método que mostrou os melhores resultados. Depois da remoção da resina residual, os métodos com broca de carboneto de tungstênio (30 lâminas) e com ponta de óxido de alumínio mostraram os maiores valores de rugosidade com diferença estatística significante em relação aos demais. O polimento foi importante para o restabelecimento da lisura superficial do esmalte, em todos os métodos de remoção da resina residual
Abstract: The purpose of this study was to compare different in vivo methods of dental enamel residual resin removal after brackets debonding. Fifty third molars were separated in 5 groups of 10 teeth. Metal brackets were fixed with Transbond XT orthodontic composite, after enamel conditioning with 37% phosphoric acid. Specimens were stored in water at room temperature for 24 hours. After brackets debonding with a removal plier (Orthosource), residual resin was removed through different treatment methods: Group I- aluminium oxide blaster, group II ¿ high speed tungsten carbide bur (30 laminae), group V ¿ resin removal plier. After resin elimination it was accomplished pumice and water polishing in all specimens. Evaluation was consummated before bonding, after removal, and also after polishing, trrought roughness surface analysis and scanning electron microscopy observation. Roughness values were submitted to variance analysis and Tukey test (5%). Results showed that the removal method which did not present significant statistical difference in roughness surface enamel values in all treatment methods was resin removal plier. Polishing was important for enamel superficial smoothness recovery in all methods for removal residual resin
Doutorado
Ortodontia
Doutor em Radiologia Odontológica

Made available in DSpace on 2014-10-09T12:49:25Z (GMT). No. of bitstreams: 0
Made available in DSpace on 2014-10-09T14:01:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 10196.pdf: 3238659 bytes, checksum: f29ba4edf822c7281b6254e30d189680 (MD5)
Dissertacao (Mestrado Profissionalizante em Lasers em Odontologia)
IPEN/D-MPLO
Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares, IPEN/CNEN-SP; Faculdade de Odontologia, Universidade de Sao Paulo

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Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)
Dissertacao (Mestrado)
IPEN/D
Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP
FAPESP:08/55680-8

Made available in DSpace on 2017-07-24T19:22:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Carolina Oberg.pdf: 2478621 bytes, checksum: 7460808dc48b1e1e38c8192579f39e4d (MD5) Previous issue date: 2006-02-23
The hypersensitivity dentine is clinically described as a painful response to thermic, chemical, mechanical, evaporative and osmotic stimuli on the dentinal tubules exposed to the buccal environment. The objective of the treatment to the dentine hypersensitivity is the pain remission by the obliteration of the dentinal tubules. The aim of this study was to assess different desensitizing substances concerning the obliteration potential of the dentinal tubules. 119 specimens obtained from bovine teeth were distributed in 8 groups: group 1- 10% strontium chloride gel (SCG- 10%), group 2- 2% sodium fluoride gel (SFG- 2%), group 3- 2% stannous fluoride gel (SnFG- 2%), group 4- 5% potassium nitrate gel (PNG- 5%), group 5- 10% potassium nitrate gel 10% (PNG- 10%), group 6- 3% potassium oxalate gel (POG- 3%), group 7- hydroxyethilcellulose gel (HEC), group 8- no treatment (NT). For the exposition of the dentinal tubules, it was used a 5mm deep carbide burr no. 245 and after that, it was applied 24% EDTA gel for 3 minutes. The samples were prepared for analysis with Scanning Electron Microscope (SEM), energy dispersive X ray (EDX) and microinfiltration with silver nitrate. The results with SEM showed that the groups treated by SCG- 10%, SFG- 2% and SnFG- 2% had open tubules. PNG- 5% and 10% showed partial tubules obliteration and deposits on the peritubular surface. The POG- 3% presented most of the tubules obliterated. In the analysis with EDX, it was possible to find all the main chemical elements of the formulations utilized, however, we observed just traces of the strontium, fluoride, sodium and potassium elements. The microinfiltration results presented significant differences (p<0.05) among agents, being the PNG- 10% (12.76±7.52μm), which presented the lowest value and the SCG- 10%, the biggest. It was concluded in this study that the 10% potassium nitrate showed a good potential obliteration of the dentinal tubules considering the methodology used. Key words: Hypersensitivity, Dentin, Desensitizing Substances
A hipersensibilidade dentinária é descrita clinicamente como uma resposta dolorosa a diferentes estímulos sobre a dentina exposta ao meio bucal. O objetivo do tratamento é a remissão da dor por meio da obliteração dos túbulos dentinários. A proposição desse estudo foi avaliar diferentes substâncias dessensibilizantes, quanto ao potencial de obliteração de túbulos dentinários. Foram utilizados 119 corpos de provas obtidos de dentes bovinos, distribuídos em 8 grupos: grupo 1- gel de cloreto de estrôncio a 10% (GCE- 10%), grupo 2- gel de fluoreto de sódio a 2% (GFS- 2%), grupo 3- gel de fluoreto estanoso a 2% (GFE- 2%), grupo 4- gel de nitrato de potássio a 5% (GNP- 5%), grupo 5- gel de nitrato de potássio a 10% (GNP- 10%), grupo 6- gel de oxalato de potássio a 3% (GOP- 3%), grupo 7- gel de hidroxietilcelulose (HEC), grupo 8- sem tratamento (ST). Para a exposição dos túbulos dentinários, foi utilizada fresa carbide, com aprofundamento de 5mm e em seguida aplicado EDTA a 24% por 3 minutos. As amostras foram preparadas para análise com microscópio eletrônico de varredura (MEV), energia dispersiva de raio X (EDX) e para o teste de microinfitração com nitrato de prata. Os resultados com o MEV mostraram que os grupos tratados com GCE-10%, GFS- 2%, GFE- 2% apresentaram túbulos abertos. GNP- 5% e 10% promoveram obliteração parcial dos túbulos dentinários e mostraram depósitos na dentina peritubular. O GOP- 3%, mostrou a maioria dos túbulos obliterados. Na análise por EDX, foi possível encontrar os principais elementos químicos das formulações utilizadas, no entanto, observou-se apenas traços dos elementos estrôncio, flúor, sódio e potássio. Os resultados da microinfiltração mostraram diferenças significativas (p<0,05) entre as substâncias, sendo que o GNP- 10% (12,76±7,52μm) apresentou o menor valor e o GCE- 10% (25,82±5,91μm) o maior. Concluiu-se nesse estudo, que o nitrato de potássio a 10% apresentou os melhores resultados na obliteração dos túbulos dentinários de acordo com os testes realizados.

Orientadores : Giselle Maria Marchi Baron, Monica Campos Serra
Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba
Made available in DSpace on 2018-07-28T00:52:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Rodrigues_JoseAugusto_M.pdf: 13528347 bytes, checksum: 5bfcd4540b1b6b7df57a99e3966846d8 (MD5) Previous issue date: 2001
Resumo: A prevenção ou paralisação de lesões cariosas adjacentes às restaurações pode ser aIcançada pela correta remoção de placa e utilização de fluoretos tópicos. Para pacientes de alto risco, é ainda recomendado o uso de materiais restauradores cariostáticos, embora ainda não se conheça o verdadeiro efeito da sua associação aos fluoretos. O objetivo deste trabalho foi avaliar, in vitro, o efeito cariostático de 6 materiais restauradores contendo ou não flúor associados à aplicação de dentifrícios em esmalte dental humano. Cavidades classe V foram preparadas no esmalte de 240 fragmentos dentais, aleatoriamente divididos em 12 grupos. Após serem restauradas as cavidades, os fragmentos foram submetidos a ciclos térmicos e de desmineralização e remineralização, simulando um alto desafio cariogênico. Sobre os fragmentos restaurados, ainda, foram aplicados dentifrícios contendo ou não flúor 5 minutos por dia. As diferenças no desenvolvimento de lesões experimentais de cárie adjacente às restaurações foram avaliadas por 5 examinadores calibrados, através de inspeção visual, atribuindo-se escores de 0 a 3. Os resultados foram avaliados pelo teste de Kruskal-Wallis seguido pelo teste de comparações múltiplas (?=0,05). Quando associados ao dentifrício fluoretado, os materiais restauradores não diferiram entre si em relação ao potencial cariostático. Ketac-Fil foi o único material que não diferiu significativamente quando associado com o dentifrício com ou sem flúor. Sob as condições experimentais do estudo, a associação dos materiais restauradores ao dentifrício fluoretado resultou em uma maior ação cariostática, exceto para o cimento de ionômero de vidro, que não diferiu com a aplicação dos dentifrícios
Abstract: The prevention or arrestment of caries lesions around restorations may be done through plaque removal and use of topical fluorides. Restorative materiaIs that release fluoride are still recommended for patients with high caries risk, although the real effect of their association with topical fluorides is not known. The aim of this study was to evaluate, in vitro, the cariostatic effect of six restorative materiaIs that contain fluoride associated with fluoride and non-fluoride dentifrices on human dental enamel. Standardized class V cavities were prepared on 240 enamel fTagments,randomly assigned in 12 groups. After cavity restoration, the fragments were submitted to 1000 thermal cycles, and to demineralization/remineralization cycles, simulating a high cariogenic challenge. During pH cycles, slurries of fluoride and non-fluoride dentifuces were applied for tive minutes after demineralization solution. Artificial caries-like lesions formations were scored independently and blindly by tive calibrated examiners, using a 0 to 3 ordinal scale through visual inspection. The data were evaluated by Kruskal-Wallis test, followed by paired comparisons test (?=0,05). There were no significant differences among restorative materiaIs when associated with fluoride dentifuces. Ketac-Fil was the unique that did not differ when associated with fluoride or non-fluoride dentifrices. Under experimental conditions, the association of restorative materiaIs with a fluoride dentifrice provided better cariostatic effect, except to the conventional glass ionomer cement, whose effect did not change with the dentifrice application
Mestrado
Dentística
Mestre em Clínica Odontológica

Made available in DSpace on 2014-10-09T12:45:42Z (GMT). No. of bitstreams: 0
Made available in DSpace on 2014-10-09T14:08:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 07547.pdf: 3406360 bytes, checksum: 406686ad4b2502e338bc7922d8dd8788 (MD5)
Dissertacao (Mestrado Profissionalizante em Lasers em Odontologia)
IPEN/D-MPLO
Intituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares, IPEN/CNEN-SP; Faculdade de Odontologia, Universidade de Sao Paulo

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Dissertacao (Mestrado Profissionalizante em Lasers em Odontologia)
IPEN/D-MPLO
Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares, IPEN/CNEN-SP; Faculdade de Odontologia, Universidade de Sao Paulo

Orientadores: Maria Beatriz Borges de Araujo Magnani, Lourenço Correr Sobrinho
Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba
Made available in DSpace on 2018-08-03T19:01:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Romano_FabioLourenco_M.pdf: 652972 bytes, checksum: 9ad8cc42b5869946d1b78d8003552d1b (MD5) Previous issue date: 2003
Mestrado

Fitoterapija (gr. phyton – augalas, therapeia – gydymas) – tai ligų profilaktika ir gydymas, vartojant augalų dalis ar jų preparatus. Nuo seno lietuvių liaudies medicinoje gerai žinomi sidabražolinių (Potentilla) genties augalai. Lietuvoje auga 17 Potentilla genties augalų rūšių, kai kurios iš jų kultūrinės. Šio darbo tikslas yra atlikti biologiškai veiklių medžiagų – flavonoidų ir raugų – išskyrimą iš Potentilla genties augalų (Potentilla anserina L., Potentilla erecta L., Potentilla fruticosa L.) nustatyti veikliųjų medžiagų kiekio kitimus skirtingu augalų vegetacijos metu (birželio – rugsėjo mėnesiais) ir atlikti šių augalinių žaliavų antioksidacinio bei antimikrobinio poveikio tyrimus. Tyrimo medžiaga ir metodai. Tyrime naudota Potentilla genties augalinė žaliava surinkta Šiaulių rajone, Gruzdžių miške (P.anserina žolė, P.erecta šakniastiebiai ir žolė) bei Šiaulių universiteto botanikos sode (P.fruticosa žolė). Permanganatometrinio titravimo metodu buvo nustatytas rauginių medžiagų kiekis tirtuose Potentilla genties augalinėse žaliavose. Naudojant parūgštintą vandenilio chlorido rūgštimi 70% etanolį ir 70% etanolį spektrofotometriniu ir efektyviosios skysčių chromatografijos (ESC) metodu buvo nustatyti bendri flavonoidų kiekiai tirtose augalinėse žaliavose. Antioksidaciniam aktyvumui įvertinti buvo taikomas fotometrinis 2,2-difenil-1-pikrilhidrazilo (DPPH•) laisvojo radikalo sujungimo metodas. Antimikrobinis poveikis įvertintas atliekant tyrimus su triptozės sojos agare 2... [toliau žr. visą tekstą]
Phytotherapy (Greek origin phyton – plant, therapeia – treatment) means the prevention of disease and medical treatment using parts of plants or their extracts. Since ancient times Cinquefoil (Potentilla) family plants have been well-known in Lithuanian non-traditional medicine, comprising over 17 species, some of them are cultivated. Aims and Objectives. To extract biologically active substances – flavonoids and tannins – from Potentilla plants (Potentilla anserina L., Potentilla erecta L., Potentilla fruticosa L.) in order to determine the quantity changes at different times of plant vegetation (June – September), and to research antioxidant and antibacterial effect of those plants. Materials and Methods. Potentilla raw material was collected in the region of Šiauliai, Gruzdžiai forest (Herba Potentillae anserinae, Rhizoma et herba Potentillae erectae) and Šiauliai University Botanical Garden (Folium cum flore Potentillae fruticosae). Permanganatometric titration method was used to find out how much tannin the selected Potentilla contained. Also, spectrophotometric and HPLC methods allowed to measure flavonoid while using 70% of ethanol with hydrochloric acid and 70% of ethanol in the raw vegetation. To evaluate the anti-oxidizing activity photometric 2,2-difenil-1-pikrilhydrosil (DPPH•) free radical method was applied. Antibacterial impact was evaluated with triptosis on soya crop in a hangar for 24 hours at 35 - 37º C using cultivated microorganisms. Results. The tested... [to full text]

Orientador : Renato Mazzonetto
Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba
Made available in DSpace on 2018-08-03T14:39:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cravinhos_JulioCesardePaulo_M.pdf: 1159055 bytes, checksum: f08ec26d27fdeac90561fc608b698f2d (MD5) Previous issue date: 2003
Mestrado

Orientador: Jose Roberto de França Arruda
Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Mecanica
Made available in DSpace on 2018-08-06T11:13:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Padilha_PauloEduardoFranca_M.pdf: 721382 bytes, checksum: 8fae387ba335cdb5b3e7b462935121c1 (MD5) Previous issue date: 2006
Resumo: Neste trabalho é feita uma comparação de técnicas analíticas e experimentais de Análise de Caminhos de Transferência Vibroacústicos. A Análise de Caminhos de Transferência, ou TPA como é conhecida pela abreviatura em inglês, é uma ferramenta para se avaliar a contribuição de diferentes caminhos de propagação de energia vibroacústica entre uma fonte e um receptor ligados entre si por várias conexões. Uma aplicação típica de TPA é quantificar e determinar a importância relativa desses caminhos numa dada banda de freqüência, verificando-se a contribuição mais significativa para o receptor. Nessa análise, basicamente duas quantidades devem ser obtidas: as forças operacionais em cada caminho de transferência e a Função de Resposta em Freqüência desses caminhos. Essas funções podem ser obtidas tanto experimentalmente quanto analiticamente, considerando-se ou não a impedância mecânica da fonte vibroacústica. As forças operacionais podem ser diretamente obtidas de medições, usando um transdutor de forças, ou indiretamente estimadas a partir de medições auxiliares. Neste trabalho são apresentados dois métodos de obtenção indireta das forças operacionais ¿ o Método da Rigidez Complexa e o Método da Inversão de Matrizes ¿ associados com as duas possíveis configurações para determinação das Funções de Resposta em Freqüência ¿ incluindo e excluindo a impedância da fonte. Essas técnicas são aplicadas a dois modelos: um analítico e um experimental. avaliadas com esse modelo analítico, comentando-se suas vantagens e desvantagens. São avaliados ainda os efeitos do acoplamento entre fonte e receptor e entre os caminhos de transferência. Os experimentos foram realizados numa estrutura concebida como um modelo simplificado de um automóvel. As forças foram obtidas através dessas duas técnicas indiretas e comparadas com as medidas com transdutores de força. Como no modelo analítico, as forças e FRF foram estimadas na presença e na ausência da fonte, e a contribuição de cada caminho calculada através dessas técnicas e configurações. A resposta do receptor, calculada como uma combinação dos diferentes caminhos de transferência, foi comparada à medida nas condições operacionais, de modo a se verificar a exatidão de cada método utilizado. As vantagens e limitações desses métodos e configurações experimentais são então comentadas para uso em aplicações práticas
Abstract: In the present work, analytical and experimental techniques of Vibro-Acoustic Transfer Path Analysis are compared and discussed. Transfer Path Analysis (TPA) is a tool to evaluate the contribution of different vibro-acoustic energy propagation paths between a source and a receiver linked to each other by a number of connections. TPA is typically used to quantify and rank the relative importance of these paths in a given frequency band, determining the most significant one to the receiver. When applying TPA two basic quantities have to be determined: the operational forces at each transfer path and the Frequency Response Functions of these paths. These functions can be obtained either experimentally or analytically, considering or not the mechanical impedance of the source. Operational forces can be directly measured by force transducers or indirectly estimated from auxiliary response measurements. Two methods to obtain the operational forces indirectly ¿ the Complex Stiffness Method and the Matrix Inversion Method ¿ associated with two possible configurations to determine the Frequency Response Functions ¿ including and excluding the source impedance ¿ are presented and discussed in this work. These estimation techniques are applied to two models: an analytical and an experimental model. Analytically, these techniques are applied to a lumped parameter model. The advantages and drawbacks of them are commented and the effect of coupling between source and receiver and among transfer paths is analyzed with this theoretical approach. The experiments are done in a test structure conceived as a simplified model of an automotive vehicle. The forces are obtained via these two techniques and compared to those measured by force transducers. Like in the analytical model, forces and Frequency Response Functions are estimated in the presence and in the absence of the source, and the contribution of each path is calculated based on the combinations of these different estimation methods and setups. The contributions of the different paths at the receiver location are calculated using each estimation method and are compared to those obtained in the operational condition in order to verify the accuracy of these methods. The advantages and limitations of the methods and test setups are then discussed for use in practical applications
Mestrado
Mecanica Computacional
Mestre em Engenharia Mecânica

Orientador: Theo Guenter Kieckbusch
Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Quimica
Made available in DSpace on 2018-07-22T12:27:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Souza_CelioAugustoGomesde_D.pdf: 6160486 bytes, checksum: 11f44d148291f7c6c6eadc01760c4fe3 (MD5) Previous issue date: 1997
Resumo: O resumo poderá ser visualizado no texto completo da tese digital
Abstract: The abstract is available with the full electronic digital document
Doutorado
Engenharia de Processos
Doutor em Engenharia Química

Orientador: Janito Vaqueiro Ferreira
Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Eletrica
Made available in DSpace on 2018-08-04T09:11:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Mariano_SilvioLuiz_M.pdf: 10538477 bytes, checksum: b5e594a3783a5571c8face1a74dae202 (MD5) Previous issue date: 2005
Resumo: Este trabalho apresenta a análise numérica e experimental do índice de vibro-impacto em alavancas de transmissão mecânica. Foram desenvolvidos modelos de alavanca que consideram não-linearidades na estrutura. Métodos para quantificação do vibro-impacto foram obtidos na literatura e implementados para o levantamento de curvas, as quais indicam a variação do índice de Vibro-impacto com relação à variação dos parâmetros dos modelos desenvolvidos. A técnica da Transformada de Hilbert também foi implementada para levantamento das forças não-lineares atuantes nos modelos. Foram utilizadas três bancadas para identificação das forças não-lineares atuantes e validação da técnica salientada, que utiliza sinais de força, deslocamento, velocidade e aceleração. As curvas de rigidez não-Hnear foram identificadas coerentemente, as quais tiveram validação pelo levantamento da rigidez das mesmas bancadas por medições estáticas. Dois modelos numéricos de alavanca, utilizando massas concentradas, foram estudados. Nestes identificaram-se curvas de força não-Hnear e levantaram-se curvas de sensibilidade do índice de Vibro-impacto à variação dos parâmetros dos modelos. Mostrou-se que a técnica da Transformada de Hilbert pode ser utilizada para a identificação de sistemas não-lineares e que o estudo de sensibilidade em modelos de vibro-impacto pode ser obtido sem muita dificuldade
Abstract: This work presents a study about a numerical and experimental vibro-impact level analisys in mechanical gearshift levers. It was developed gearshift lever models which consider nonlinearities in the structure. Methods to vibro-impact quantification were obtained in the available literature and were implemented to obtain curves which show the vibro-impact level change with the modification of the parameters of the developed models. Hubert Transform techniques were also implemented to obtain nonlinear forces implemented on the models. To verify the efficiency of these techniques, three test rigs with nonlinearities were developed and the nonlinear forces were identified. The techniques need the displacement, velocity and acceleration signals to calculate the forces. The nonlinear forces curves were identified and validated with the static forces measured. Two models of gearshift levers were developed, using lumped masses. In these models the nonlinear forces curves and the sensibility to the vibro-impact level with modifications in the model parameters were obtained. It was showed that the Hubert Transform techniques are reliable to identify nonlinear systems and that the sensibility study in vibro-impact can be obtained easily
Mestrado
Mecanica dos Sólidos e Projeto Mecanico
Mestre em Engenharia Mecânica

Made available in DSpace on 2014-10-09T12:49:32Z (GMT). No. of bitstreams: 0
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Dissertacao (Mestrado)
IPEN/D
Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN/CNEN-SP

Orientadores: João Sarmento Pereira Neto, Simonides Consani
Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba
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Resumo: O objetivo desta pesquisa foi avaliar in vitro a resistência ao cisalhamento de braquetes ortodônticos metálicos submetidos a duas reciclagens consecutivas com jato de óxido de alumínio, em função de quatro tipos diferentes de materiais fixadores. A amostra consistiu de 40 incisivos bovinos para confecção dos corpos-de-prova. Quarenta braquetes metálicos edgewise, de incisivo central Ultraminitrim (Dentaurum), foram colados nos dentes bovinos com os seguintes materiais fixadores: Transbond XT, Concise, Smartbond e Fuji Orto, seguindo as instruções do fabricante. Após a colagem os corpos-de-prova foram armazenados em água destilada numa estufa a 37ºC por 24 horas e submetidos à 500 ciclos térmicos com 30 segundos em cada balho (5ºC e 55ºC). O ensaio de resistência ao cisalhamento foi realizado numa máquina Instron com velocidade de 0,5mm/min. Os braquetes removidos foram reciclados com jateamento de óxido de alumínio (50 micrômetro) e colados novamente no mesmo corpo-de-prova, utilizando os mesmos materiais fixadores. Após o segundo ensaio de resistência ao cisalhamento, os procedimentos de reciclagem, recolagem e ensaio de força foram repetidos. Os dados foram submetidos à análise de variância e ao teste de Tukey (p=0.05), aplicado para cada sistema adesivo nos diferentes tratamentos dos braquetes metálicos. Foi comprovado que reciclagens repetidas, utilizando o jateamento de óxido de alumínio, não interferem na resistência adesiva, independente do sistema adesivo empregado. Dentre os adesivos utilizados, o Transbond XT apresentou os maiores valores de resistência ao cisalhamento, independente do tratamento do braquete. Assim, concluímos que o efeito cumulativo das reciclagens não afetou a resistência ao cisalhamento de braquetes metálicos e que o efeito adesivo do material utilizado para fixação do braquete não foi alterado pelas reciclagens repetidas
Abstract: The aim of this research was to evaluate in vitro shear bond strength of metallic orthodontic brackets submitted to two consecutive recyclings with aluminium oxide air abrasion, making use of four different bond materials. The sample consisted of 40 bovine incisives. Forty metallic orthodontic edgewise brackets of central incisor Ultraminitrim (Dentaurum), were fixed in the bovine teeth with the following bonded material: Transbond XT, Concise, Smartbond and Fuji Orto, following the manufacturer's instructions. After bonding, they were stored in distilled water in incubators at 37ºC for 24 hours and submitted to 500 thermal cycles with 30 seconds in each bath (5ºC and 55ºC). The shear bond strength was determined with an Instron universal machine with 0,5mm/min speed. The removed brackets were recycled with aluminium oxide air abrasion (50 micrometer) and bonded again in the same bovine incisive, using the same bond material. After the second shear bond strength test the recycling procedures, the rebonding and shear bond strength test were repeated. The data were submitted to Analysis of Variance and Tukey's test (p=0.05), applied for each adhesive system in different treatments of metallic brackets. It was demonstrated that repeated recyclings, using the aluminium oxide air abrasion, don't interfere in the adhesive resistance, independent of the employed bond material. Among the used bond materials, Transbond XT presented the largest resistance values of shear bond strength, independent of the treatment of the bracket. Thus, we concluded that the recycling cumulative effects didn't affect the shear bond strength of metallic orthodontic brackets and that the effect bond material used for fixation of the bracket was not altered by the repeated recyclings
Mestrado
Ortodontia
Mestre em Ortodontia

Orientador: Francisco Jose de Souza Filho
Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba
Made available in DSpace on 2018-08-04T10:07:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Santos_JulioCesarBentodos_D.pdf: 777651 bytes, checksum: ead9155fe00aa49ebe36b753c9c89d8a (MD5) Previous issue date: 2005
Resumo: A presente pesquisa teve por finalidade avaliar, in vitro, a eficácia dos localizadores apicais, Bingo 1020, Novapex e Root ZX, nas posições 1mm aquém do ápice e na posição 0 (zero). Comparar a odontometria eletrônica na posição 0 com a medida real dos dentes. Comparar a odontometria radiográfica com a odontometria eletrônica utilizando o Bingo 1020 na posição 1mm aquém do ápice e na posição 0. Para tanto foram utilizadas 71 raízes de molares humanos, extraídos, com rizogênese completa e sem sinais de fratura apical. Dos molares inferiores utilizou-se raízes mesiais e dos molares superiores as raízes vestibulares. Foi realizada a abertura coronária . Após a radiografia, sendo essa o segundo critério de seleção, os dentes foram colocados em uma plataforma para a odontometria eletrônica. Essa plataforma teve a finalidade de manter os dentes em posição, com os respectivos ápices em contato com uma solução salina . A exploração do canal foi realizada com as limas 10 e 15 e a odontometria com a lima 20, sendo que a medida real foi obtida com lupa de aumento de 2,5 vezes , considerando a posição em que a lima emergia da constrição apical. A primeira medida eletrônica foi realizada na posição em que o localizador apical marcou 1mm aquém do ápice. A segunda medida, na posição 0. Esse procedimento foi realizado com os três localizadores apicais, perfazendo um total de 213 medidas na posição 1mm e 213 medidas na posição 0. Quarenta e quatro canais foram utilizados para avaliação radiográfica. O cálculo estatístico demonstrou que os localizadores apicais Bingo 1020, Novapex e Root ZX não foram significativamente diferentes entre si, nas medidas 1mm aquém do ápice e na posição 0mm, nas condições da pesquisa. Na comparação com a medida real o Root ZX apresentou uma maior porcentagem de aproximação, embora não significante, nos desvios de 0,5 mm e 0,75mm. Na odontometria radiográfica, considerando três avaliadores, houve diferença estatisticamente signicante em dois, em relação à odontometria eletrônica com o localizador apical Bingo 1020
Abstract: The aim of this study was to evaluate, in vitro, the measurement efficiency of the apex locators known as Bingo 1020, Novapex and Root ZX, at the positions of 1mm and 0mm from the apex; compare the electronic measurement at 0mm with the real measurement of the teeth; and compare the radiographic root canal measurement to the electronic measurement obtained by the Bingo 1020. For this, 71 extracted human molar roots, presenting complete root formation and no signs of apical fracture were selected and only the mesial roots of the inferior molars and the buccal roots of the superior molars were included in the study. The teeth were embedded in a resin ring and coronary access and radiographs were performed. After tooth radiography, considered the second criteria for selection, these were placed upon a platform for electronic root measurement. Such platform had the finality to maintain the teeth in position, with the respective apexes in contact with saline solution. Canal exploration was accomplished using files #10 and 15#, root measurement was performed with a file #20, and the real root measurement was determined when file emergence from the apical constriction was observed using a 2.5X magnifying glass. The first electronic measurement was made when the apex locator marked 1mm from the apex. The second measurement was noted at 0mm. Such sequence was performed using the three apex locators, adding up to a total of 213 measurements at 1mm and at 0mm from the apex. Forty-four root canals were used for radiographic evaluation. Statistic evaluation demonstrated that the apex locators Bingo 1020, Novapex and Root ZX were not statistically different among each other at the measurements of 1mm and 0mm from the apex under the conditions of this experiment. During the comparison with real root measurements, Root ZX presented the highest percentage approximation, although not statistically significant during deviation of 0.5mm and 0.75mm. Three different evaluators revealed significant statistical difference among two, when radiographic root measurement were compared to the Bingo 1020 apex locator
Doutorado
Endodontia
Doutor em Clínica Odontológica

Orientador: Renato Pavanello
Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Mecanica
Made available in DSpace on 2018-07-25T02:11:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Zavala_PauloAlexandreGalarce_M.pdf: 8555394 bytes, checksum: 8fdadf9f1b23563d93f65871a8ee18f8 (MD5) Previous issue date: 1999
Resumo: Neste trabalho buscou-se um Método de Acoplamento Fluido-Estrutura que levasse em consideração a presença de meio fluido infinito. Após uma revisão de literatura sobre tratamento de meios infinitos, adotou-se o Método Dirichlet-to-Neumann (DtN), por ser exato, não reflexivo e podendo ser diretamente inserido no Método de Elementos Finitos (MEF) usado na modelagem Fluido-Estrutura. Assim, a modelagem clássica em elementos finitos para meios estrutural e fluido são apresentadas conjuntamente com a formulação para alguns elementos simples bi-dimensionais. O Método DtN para meios fluido infinitos e semi-infinitos é apresentado junto com sua forma discretizada para inclusão no MEF, sendo discutida suas principais implicações. Um Método de Expansão de Resultados para fora do domínio discretizado é apresentado. A modelagem Fluido-Estrutura em meio fluido infinito usando-se o Mapeamento DtN (MEF jDtN) é apresentada. Na sequência, é feita a investigação do Método DtN, com a validação da implementação adotada, análise da influência dos parâmetros do Método DtN e análise do Método de Expansão dos Resultados. Para a investigação da modelagem Fluido-Estrutura com Mapeamento DtN foram escolhidos dois exemplos, o primeiro traz a comparação de resultados experimentais (de outro autor) do campo acústico radiado a partir de uma placa vibrando em meio aéreo (espaço completo) com resultados usando-se o MEF jDtN. O segundo exemplo traz a comparação de resultados obtidos usando-se o Método de Elementos de Contorno para o comportamento dinâmico estrutural de uma viga cantilever (engastada-livre) em uma parede infinita (semi-espaço) com resultados usando-se o MEF jDtN. Ao final, são apresentadas sugestões para trabalhos futuros dentro desta área de pesquisa
Abstract: This work were interested in finding a method of fluid-structure coupling with infinite fluid medium. After a literature analysis in infinite fluid medium modeling, were adopted the Dirichlet-to-Neumann (DtN) Method, wich is exact, non refiexive and can be directly included in the Finite Element Method (FEM) wich is used in fluid-structure modeling. First, the classic finite element modeling for structure and fluid are presented with the formulation of some simple bi-dimensional elements. The DtN Method for infinite and semi-infinite fluid medium is presented with the discretized form for inclusion in FEM. The main implications of that are discussed. A method of expansion of results for outside of the discretized domain is presented. The fluid-structure modeling with DtN mapping (FEMjDtN) is presented. A investigation of the DtN Method is shown, with validation of the computational code adopted, analysis of the influence of the DtN parameters and analysis of the Method of Expansion of Results. Two examples were choosen for the investigation of the fluid-structure modeling with DtN mapping. The first is a comparision of experimental results (made by other author) of the acoustic field radiated from a vibrating plate in air medium (fulI space) with results obtainned using FEMjDtN. The second, brings a comparision of results obtainned using the Boundary Element Method, for the dynamic behaviour of a cantilever beam (clamped-free) in an infinite wall (semispace) with results obtainned using the FEMjDtN. Finally, are presented sugestions for future works in this research area
Mestrado
Mecanica dos Sólidos e Projeto Mecanico
Mestre em Engenharia Mecânica

Orientador: Jose Ricardo Albergaria Barbosa
Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba
Made available in DSpace on 2018-08-06T03:00:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Oliveira_GreisonRabelode_M.pdf: 6578630 bytes, checksum: 77bd8ffe12b316550fcd3c7a8ce3dc9c (MD5) Previous issue date: 2006
Resumo: O propósito deste estudo foi avaliar in vitro a contaminação bacteriana através da interface implante/conector protético de quatro marcas comerciais de implantes endósseos de titânio comercialmente puro, buscando correlacioná-la com as dimensões dos microespaços e das adaptações na referida interface. Todos os sistemas empregados foram de fabricação nacional. Para isto, utilizaram-se, 80 implantes de dois estágios cirúrgicos, com seus respectivos conectores protéticos, sendo 40 Hexágonos Externo e 40 Hexágono Interno, divididos em 08 grupos de acordo com as marcas comercias e tipo de hexágono, contendo 10 implantes cada grupo. Grupo 1HE (10 implantes HE Master Screw®) e grupo 1HI (10 implantes HI Master Conect AR®), grupo 2HE (10 implantes HE INP Teres®) e grupo 2HI (10 implantes HI INP®), grupo 3HE (10 implantes HE Titamax®) e grupo 3HI (10 implantes HI Titamax II®), e grupo 4HE (10 implantes HE Serson®) e grupo 4 HI (10 implantes HI Serson Implus®). A análise microbiológica foi realizada após a incubação da espécie Streptococcus sanguis na parte interna do implante. Os implantes foram removidos das embalagens e manipulados com pinças estéreis ao redor do bico de Bunsen, de maneira que não perdessem as características de fabricação ou sofressem qualquer tipo de contaminação externa. Em seguida foi realizada a adaptação de um conector protético parafusado manualmente a um torque que variou de 20 a 30 Ncm de acordo com as recomendações dos fabricantes. A composição foi inserida em um meio de cultura BHI (Brain Heart Infusion) armazenada em uma estufa bacteriológica por um período de 30 dias até que ocorresse ou não contaminação externa do meio BHI. Leituras diárias para verificação da contaminação foram realizadas nesse período. Após os 30 dias todos os implantes foram submetidos a uma análise em microscopia eletrônica de varredura para a verificação das dimensões dos microespaços na interface implante/conector protético, com aumento variando de 25 vezes até 2500 vezes. Observou-se uma grande diferença no grau de contaminação bacteriana entre as marcas de implantes variando de 0 % para os implantes Titamax II® (Neodent - hexágono interno) e Serson® (Serson - hexágono externo), até 90% para os implantes Teres® (INP - hexágono externo), apresentando diferenças estatísticas significativas. Porém, considerando-se apenas os tipos de hexágono, de um modo geral, pode-se verificar que não houve diferença estatisticamente significante, no grau de contaminação bacteriana entre os implantes de hexágono externo e interno. Sendo que a média do microespaço na interface implante/conector protético, encontrada na análise de microscopia eletrônica de varredura não apresentou correlação com o grau de contaminação bacteriana
Abstract: The purpose of this study was to evaluate in vitro the bacterial contamination through the implant/ prosthetic connector interface of four commercial brands of commercially pure titanium endosseous implants, and correlate it with the microgap dimensions in this interface. All implant systems are nationally manufactured. Eighty two-stage implants and their respective prosthetic connectors (40 external hexagon - HE and 40 internal hexagon - HI) were divided into 8 groups of 10 implants each, according to the commercial brands and hexagon type. Group 1HE (10 implants HE Master Screw®), group 1HI (10 implants HI Master Conect AR®), group 2HE (10 implants HE INP Teres®), group 2HI (10 implants HI INP®), group 3HE (10 implants HE Titamax®), group 3HI (10 implants HI Titamax II®), group 4HE (10 implants HE Serson®) and group 4HI (10 implants HI Serson Implus®). The microbiological analysis was performed by incubation of Streptococcus sanguis in the internal part of the implants. The implants were removed from their packages and manipulated with sterile tweezers near a Bunsen burner, to prevent contamination or loss of their characteristics. A prosthetic connector was then adapted manually with a 20 to 30 Ncm torque, according to the manufacturers¿ recommendations. The composition was inserted in a Brain Heart Infusion (BHI) culture medium, and stored in a bacteriological stove for a period of 30 days, until the external contamination of the BHI medium could be assessed. Daily evaluations to verify the contamination were performed in this period. After 30 days, all implants were subjected to a scanning electron microscopic (SEM) analysis to assess the dimension of the microgaps in the implant/ prosthetic connector interface, under a 25 to 2500x magnification. Different contamination degrees of the groups could be observed, varying from zero% in brands Titamax II® (Neodent - internal hexagon) and Serson® (Serson - hexagon external), to 90% in the implants Teres® (INP - hexagon external), with statistically significant differences. However, when all HE and all HI implants were compared, there was no significant difference in the contamination degrees between external and internal hexagon implants. The mean microgap in the implant/ prosthetic connector interface, found in the SEM, did not present a correlation with the bacterial contamination degrees
Mestrado
Cirurgia e Traumatologia Buco-Maxilo-Faciais
Mestre em Clínica Odontológica

Orientador: Keizo Yukimitu
Banca:João Carlos Silos Moraes
Banca: Valmor Roberto Mastelaro
Banca: Mauro Luciano Baesso
Banca: Tomaz Catunda
Resumo: O desenvolvimento de sistemas e dispositivos ópticos deu origem à área hoje conhecida como fotônica. A busca por novas aplicações ou aprimoramento de sistemas optoeletrônicos tem levado à obtenção de novos materiais vítreos, os quais exigem minuciosa investigação com relação às suas propriedades físicas. Entre os vários sistemas vítreos estudados, os vidros teluritos destacam-se como um dos mais promissores vidros óxidos já desenvolvidos quando comparados com outros vidros clássicos, como os vidros silicatos, fosfatos e boratos. Desta forma, neste trabalho foram preparados vidros com diferentes composições para o sistema Li2O-TeO2-R (R: WO3 e Nb2O5), e caracterizados usando técnicas de análises térmicas, estruturais e ópticas. O estudo das propriedades térmicas é importante na determinação e entendimento do mecanismo de nucleação e crescimento de cristais, sendo, essencial este conhecimento quando o intuito for preparar vidros de alta qualidade exigidos para aplicações tecnológicas. O desenvolvimento tecnológico destes vidros requer que a nucleação intrínseca e o crescimento de cristais sejam suficientemente reduzidos para evitar perdas ópticas. O estudo estrutural destes vidros também é importante para determinação das unidades estruturais constituintes dos vidros. Sabe-se que a adição de metais de transição na matriz telurito provoca a diminuição das unidades TeO3 e aumenta as TeO4, assim, causando aumento da densidade do vidro e, conseqüentemente, aumento no índice de refração. As técnicas utilizadas foram as de análise térmica (DSC), FTIR, XRD, lente térmica (LT) e método de ângulo de Brewster para a obtenção do índice de refração
Abstract: The development of optical systems and devices is the area known as photonics. The search for new applications or improvements of optoelectronic systems has led to the obtaining of new glassy materials, which require thorough investigation with respect to their physical properties. Among the various glass systems studied, the tellurite glasses are presented as one of the most promising oxide glasses that have been developed, when compared with other classics glasses like silicates, phosphates and borates. Thus, in this work were prepared with different glass compositions for the system Li2O-TeO2-R (R: WO3 and Nb2O5) and characterized using techniques of thermal analysis, structural and optical properties. The study of thermal properties is important in determining and understanding the mechanism of nucleation and crystal growth and this knowledge is essential when the purpose is to prepare high-quality glasses required for technological applications. The technological development of these glasses demands sufficiently low intrinsic nucleation and crystal growth to avoid optics losses. The structural study of these glasses is also important for determining the structural units constituting the glass. It is known that the addition of transition metals in the tellurite glass matrix causes a decrease in the TeO3 and increases the TeO4 units and thus causing the increased of density of the glass and, consequently, increasing the refractive index. The techniques used were differential scanning calorimetry (DSC), Fourier transform infrared spectroscopy (FTIR), X-ray powder diffraction (XRD) and thermal lens (TL) and Brewster angle method for obtaining the refractive index
Doutor

ABBREVIATION E – strength of electric field τ – pulse duration HV – high voltage, short pulses LV – low voltage, long pulses MEM - Minimum Essential Medium S – MEM - Spinner Minimum Essential medium LISPB – low ionic strength pulsing buffer ECT – electrochemotherapy LLC – Lewis Lung Carcinoma DC-3F – Chinese hamster lung fibroblastocites LPB – fibrosarkoma cell line BLM – bleomycin CPA – cyclophosphamide LY – Lucifer Yellow 1. INTRODUCTION The delivery of appropriate short and intense electric pulses to living cells, either in suspension or in tissue, results in a transient and reversible alteration of their cell membrane [Mir et al., 1995; Neumann et al., 1989]. The concept widely accepted is that under influence of strong external electric field the potential difference on the cell membrane occurs [Bernhardt and Pauly, 1973]. As a result of it the nanosize transient aqueous pores in the plasma membrane are created [Abidor et al, 1979, Leikin et al., 1986]. The process is called electroporation and initiated pores are named electropores [Neumann et al., 1989]. It is proposed that at higher field strength and pulse duration more and larger pores are initiated [Glaser et al., 1988]. At the tolerant pulse intensities the resealing of pores takes place and membrane came back to the previous state. The process is called reversible electroporation - REP [Weaver and Chizmadzhev, 1966]. Resealing of pores is in a range of milliseconds - minutes and often is... [to full text]

Made available in DSpace on 2014-10-09T12:32:57Z (GMT). No. of bitstreams: 0
Made available in DSpace on 2014-10-09T14:06:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 17894.pdf: 2451441 bytes, checksum: a74787cbf4366c714393f0684a412955 (MD5)
Dissertacao (Mestrado Profissionalizante em Lasers em Odontologia)
IPEN/D-MPLO
Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP; Faculdade de Odontologia, Universidade de São Paulo, São Paulo

L’objectif de ce projet a été de développer une approche bio-analytique permettant l’évaluation du danger inhérent à la multi-contamination de l’air intérieur en Ile-de-France. Des méthodes d’analyse chromatographique couplée à la spectrométrie de masse ont été développées et validées pour 62 composés d’intérêt présentant un potentiel perturbateur endocrinien (PE) avéré ou suspecté. Le potentiel PE a été évalué sur des bio-essais cellulaires de mesure de perturbation d’activité transcriptionnelle. Les résultats montrent que les familles de composés majoritaires dans l’air intérieur sont, par ordre décroissant : phtalates > muscs synthétiques > alkylphénols > parabènes. En outre, les composés sont prédominants en phase gazeuse, et les habitats les plus contaminés sont la crèche et la maison. L’air intérieur présente un potentiel PE de type œstrogénique, thyroïdien et anti-androgénique. En accord avec son profil de contamination, l’activité biologique de ce dernier se concentre majoritairement dans la phase gazeuse, et tend à être plus élevée dans la crèche et la maison. Une analyse dirigée par les bio-essais, ou effect-directed analysis (EDA), a été mise en œuvre pour identifier les composés cibles à l’origine des effets PE de l’air intérieur. Les composés suivants ont été identifiés comme étant potentiellement à l’origine d’effets PE observés : les phtalates, le méthyl-parabène, les alkylphénols, la cyperméthrine et les muscs synthétiques. Ce travail apporte des connaissances sur le danger inhérent à la multi-contamination de l’air intérieur ainsi que des données d’exposition utiles à une évaluation des risques sanitaires
The objective of this project was to develop a bio-analytical approach leading to the assessment of the inherent hazard of the indoor air multi-contamination. Chromatographic methods combined with mass spectrometry were developed and validated for 62 target molecules known or suspected as endocrine-disrupting (ED) compounds. The ED potential was assessed by cellular bioassays measuring perturbations of transcriptional activity. The data showed that the predominant families of compounds in indoor air were in the following descendant order: phthalates > musks > alkylphenols > parabens. The ED contaminants were mainly present in gaseous phase, and the most contaminated locations were the day nursery and the house. An estrogenic, thyroid and anti-androgenic potential was attributed to indoor air. In agreement with its contamination profile, the biological activity of the latter was concentrated predominantly in the gaseous phase, and tended to be higher in the day nursery and the house. An effect-directed analysis (EDA) was carried out to identify the target chemicals responsible for the ED effects of indoor air. The following chemicals were identified as being potentially responsible for the observed ED effects: phthalates, methyl-paraben, alkylphenols, cypermethrin and synthetic musks. This work provides both knowledge about the inherent hazard of the indoor air multi-contamination and exposure data useful in health risk assessment

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:03Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-06-27Bitstream added on 2014-06-13T20:41:14Z : No. of bitstreams: 1 sidel_sm_dr_ilha.pdf: 916747 bytes, checksum: 29e258472ed07d7364e52a3b2739b834 (MD5)
Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)
O desenvolvimento de sistemas e dispositivos ópticos deu origem à área hoje conhecida como fotônica. A busca por novas aplicações ou aprimoramento de sistemas optoeletrônicos tem levado à obtenção de novos materiais vítreos, os quais exigem minuciosa investigação com relação às suas propriedades físicas. Entre os vários sistemas vítreos estudados, os vidros teluritos destacam-se como um dos mais promissores vidros óxidos já desenvolvidos quando comparados com outros vidros clássicos, como os vidros silicatos, fosfatos e boratos. Desta forma, neste trabalho foram preparados vidros com diferentes composições para o sistema Li2O-TeO2-R (R: WO3 e Nb2O5), e caracterizados usando técnicas de análises térmicas, estruturais e ópticas. O estudo das propriedades térmicas é importante na determinação e entendimento do mecanismo de nucleação e crescimento de cristais, sendo, essencial este conhecimento quando o intuito for preparar vidros de alta qualidade exigidos para aplicações tecnológicas. O desenvolvimento tecnológico destes vidros requer que a nucleação intrínseca e o crescimento de cristais sejam suficientemente reduzidos para evitar perdas ópticas. O estudo estrutural destes vidros também é importante para determinação das unidades estruturais constituintes dos vidros. Sabe-se que a adição de metais de transição na matriz telurito provoca a diminuição das unidades TeO3 e aumenta as TeO4, assim, causando aumento da densidade do vidro e, conseqüentemente, aumento no índice de refração. As técnicas utilizadas foram as de análise térmica (DSC), FTIR, XRD, lente térmica (LT) e método de ângulo de Brewster para a obtenção do índice de refração
The development of optical systems and devices is the area known as photonics. The search for new applications or improvements of optoelectronic systems has led to the obtaining of new glassy materials, which require thorough investigation with respect to their physical properties. Among the various glass systems studied, the tellurite glasses are presented as one of the most promising oxide glasses that have been developed, when compared with other classics glasses like silicates, phosphates and borates. Thus, in this work were prepared with different glass compositions for the system Li2O-TeO2-R (R: WO3 and Nb2O5) and characterized using techniques of thermal analysis, structural and optical properties. The study of thermal properties is important in determining and understanding the mechanism of nucleation and crystal growth and this knowledge is essential when the purpose is to prepare high-quality glasses required for technological applications. The technological development of these glasses demands sufficiently low intrinsic nucleation and crystal growth to avoid optics losses. The structural study of these glasses is also important for determining the structural units constituting the glass. It is known that the addition of transition metals in the tellurite glass matrix causes a decrease in the TeO3 and increases the TeO4 units and thus causing the increased of density of the glass and, consequently, increasing the refractive index. The techniques used were differential scanning calorimetry (DSC), Fourier transform infrared spectroscopy (FTIR), X-ray powder diffraction (XRD) and thermal lens (TL) and Brewster angle method for obtaining the refractive index

Orientador : Caio Cezar Randi Ferraz
Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba
Made available in DSpace on 2018-07-27T21:14:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Yoshinari_GersonHiroshi_M.pdf: 10325543 bytes, checksum: a64dc6d8fec4ab1ae81e2442fe2fef85 (MD5) Previous issue date: 2000
Mestrado

Orientador: Renato Mazzonetto
Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba
Made available in DSpace on 2018-08-03T19:00:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Amaral_JoseIvoQueirozdo_D.pdf: 1822272 bytes, checksum: f6376ccbe26730cf7498f99e4595888d (MD5) Previous issue date: 2003
Doutorado

O presente trabalho apresenta a determinacao da estrutura tridimensional da L-aminoacido oxidase do veneno de Bothrops atrox (BatroxLAAO) e sua avaliacao como potencial agente biotecnologico. Quanto a caracterizacao estrutural, a enzima BatroxLAAO (6 mg/mL) foi submetida a varios screenings e, por meio destas variacoes, obtivemos um resultado ideal para o crescimento dos monocristais sob a condicao de 0,05 M de sulfato heptahidratado de zinco, 15% (v/v) de Polietilenoglicol monometil eter 550, controle de pH 5 com 0,1M de cacodilato de sodio. A utilizacao de parafina e silicone resultou na melhora dos cristais, revelando cristais unicos e de coloracao amarela, o que permitiu o melhor crescimento e difracao desses cristais, a 2,3 .. Estes dados permitiram a determinacao de estrutura terciaria de BatroxLAAO e, portanto, melhor entendimento dos mecanismos de atuacao da mesma. A proteina foi obtida, atraves de passos cromatograficos, com rendimento medio de 1,54% do veneno bruto. Esta apresentou acentuada inibicao da proliferacao celular de celulas tumorais HL-60, JURKAT, PC12 e B16F10, principalmente nas maiores concentracoes (50 e 100 Êg/mL). Ainda, o tratamento de celulas PBMC com BatroxLAAO, demonstrou baixa citotoxicidade em relacao ao tratamento das celulas tumorais. A viabilidade celular da Leishmania sp. foi analisada apos o tratamento com BatroxLAAO. A adicao de BatroxLAAO diretamente as formas promastigotas de diferentes especies de Leishmania resultou em morte dos parasitas de forma dose-dependente. As especies L. major e L. donovani foram as mais susceptiveis ao efeito toxico de BatroxLAAO. O efeito toxico apresentado pela BatroxLAAO foi quase completamente abolido pela adicao de catalase, sugerindo que a liberacao de H2O2 esta diretamente envolvida com o efeito da enzima. A atividade bactericida foi avaliada pela inibicao do crescimento das cepas de E. coli e S. aureus apos tratamento com a BatroxLAAO. A proteina (37,5 Êg/mL) apresentou alta atividade fungicida contra Candida albicans, com 100% da inibicao do crescimento das cepas. Foi avaliada a atividade tripanomicida, onde BatroxLAAO mostrou-se potencialmente ativa sobre T. cruzi. Foram realizados experimentos para a producao de anticorpo monoclonal (anti-BatroxLAAO). O anticorpo produzido apresentou reatividade ate diluicao 1:60000. No entanto, apos a realizacao do teste de ELISA com o anticorpo produzido e outras L-aminoacidos oxidases de diferentes venenos de serpentes, averiguamos que o anti-BatroxLAAO nao tem especificidade unica, ocorrendo reatividade para todos os venenos e proteinas testadas. Foram realizados ensaios in vivo para a deteccao da expressao dos genes FAS, BAX e BCL2. Os dados obtidos sugerem que BatroxLAAO apresenta potencial biotecnologico bastante evidente nas acoes leishmanicida e fungicida, bem como na atividade antitumoral, in vitro, mostrando-se um composto com potencial agente terapeutico.
This work presents the determination of three-dimensional structure of L-amino acid oxidase from Bothrops atrox (BatroxLAAO) and its evaluation as a potential biotechnology agent. Regarding the structural characterization, BatroxLAAO (6 mg / mL) underwent multiple screenings, and through these variations, we got an ideal result for the single crystals growth under condition of 0.05 M zinc sulfate heptahydrate, 15 % (v / v) polyethylene glycol monomethyl ether 550, pH control: 5.0 with 0.1 M sodium cacodylate. The use of paraffin and silicone resulted in the improvement of the crystals, revealing single and yellow crystals, which allowed better growth and diffraction of these crystals, to 2.3 . These data allowed the determination of tertiary structure BatroxLAAO and therefore better understanding of action mechanisms of this protein. The protein was obtained using three chromatographic steps, with an average yield of 1.54% from crude venom. This showed marked inhibition of cell proliferation on tumor cells as HL-60, Jurkat, PC12 and B16F10, especially at higher concentrations (50 and 100 g / mL). Also, treatment of PBMC cells with BatroxLAAO showed low cytotoxicity in comparison to the treatment on tumor cells. Cell viability of Leishmania sp. was analyzed after treatment with BatroxLAAO. The addition of BatroxLAAO directly to promastigotes forms of different species of Leishmania resulted in a dose-dependent death. The species L. major and L. donovani were more susceptible to the toxic effect of BatroxLAAO. The toxic effect presented by BatroxLAAO was almost completely abolished by the addition of catalase, suggesting that the release of H2O2 is directly involved with the effect of this enzyme. The bactericidal activity was evaluated by inhibiting the strains growth of E. coli and S.aureus after treatment with BatroxLAAO. The protein (37.5 g / mL) showed high fungicidal activity against Candida albicans with 100% growth inhibition of strains. We evaluated the trypanocidal activity, where BatroxLAAO proved to be potentially active against the T. cruzi parasite. Experiments were carried out for production of monoclonal antibody (anti-BatroxLAAO). The antibody showed reactivity produced by dilution until 1:60000. However, after performing the ELISA assay with the antibody produced and other L-amino acidoxidases from different snake venoms, we found that anti-BatroxLAAO did not present unique specificity, BatroxLAAO reacted with all poisons and proteins tested. Experiments, in vivo, were performed to detect the gene expression of FAS, BAX and BCL2. These data suggest that BatroxLAAO presented quite evident biotechnologic potential as leishmanicidal, fungicidal and antitumoral, in vitro, agent. Further studies are needed to confirm the potential therapeutic use of this protein.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciencias Biologicas
Made available in DSpace on 2012-10-16T11:22:24Z (GMT). No. of bitstreams: 0Bitstream added on 2016-01-08T20:50:29Z : No. of bitstreams: 1 105634.pdf: 3466410 bytes, checksum: 79441e0765fc553f0e35f030b9888d0b (MD5)
O extrato hidroalcoólico (EH) da Drymis winteri antagonizou de modo não competitivo diversos mediadores químicos envolvidos no processo inflamatório, nociceptivo, e alérgico, no útero isolado de rata e íleo, bexiga e traquéia isolada de cobaia (TIC). Porém antagonizou de maneira aparentemente competitiva a resposta contrátil ao U46619, composto 48/80, substância P e o b-ala8 neurocinina A(4-10) na TIC. O mesmo perfil farmacológico foi também observado com as frações aquosa, acetato de etila e clorofórmica obtidas das cascas da D.winteri. Os compostos flavonóides isolados das cascas da D.winteri a astilbina e o taxifolin quando testados na TIC, demostraram não serem os responsáveis pela atividade apresentada pelo EH da D.winteri. Porém três compostos sesquiterpenos ainda não identificados isolados das cascas da D.winteri denominados de composto 3, 5 e 9 demonstraram ser os responsáveis por parte das ações apresentadas pelo EH desta planta. O quarto composto sesquiterpeno identificado como sendo o 1-b-p-metoxi-coumaroiloxi poligodial, demonstrou ser também o responsável por parte das ações apresentadas pelo EH da D.winteri. Já o composto sesquitelpeno identificado como poligodial quando analisado no íleo e na TIC, presentou o mesmo perfil farmacológico do EH da D.winteri, demonstrando ser o principal composto ativo presente nas cascas desta planta.

Neste trabalho, a microextração em fase líquida com membrana cilíndrica oca (HF-LPME), a microextração líquido-líquido dispersiva (DLLME) e a microextração em fase sólida na configuração de um filme delgado (SPME/TFME) foram empregadas como técnicas de microextração para a preparação de amostras microssomais no estudo de metabolismo in vitro de fármacos quirais com diferentes características ácido-base. Para análise empregou-se a cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC) com detector por absorção no UV e a cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas (LC-MS-MS). O fármaco neutro isradipina (ISR) foi o primeiro a ser abordado. Um método estereosseletivo empregando HFLPME- HPLC foi desenvolvido para a determinação dos enantiômeros da ISR e seu principal metabólito (um derivado piridínico da isradipina - PDI) em fração microssomal isolada de fígado de ratos. Os analitos foram extraídos de 1 mL de meio microssomal utilizando o procedimento HF-LPME na configuração duas fases, tendo o solvente acetato de hexila como fase aceptora. Pela primeira vez, o PDI e os enantiômeros da ISR foram resolvidos numa mesma corrida cromatográfica. Para esta separação foi utilizada uma coluna Chiralpak AD® e hexano:2-propanol:etanol (94/04/02, v/v/v) como fase móvel, na vazão de 1,5 mL min-1. A ISR e o PDI foram detectados em 325 nm e o padrão interno, oxibutinina, foi detectado em 225 nm. A validação do método mostrou valores de recuperação de 23% para o PDI e 19% para cada enantiômero da ISR, 50 ng mL-1 como limite de quantificação (LOQ) para todos os analitos e linearidade entre 50-5000 ng mL-1 e 50-2500 ng mL-1 para o PDI e cada enantiômero da ISR, respectivamente. O método desenvolvido e validado foi aplicado em um estudo de metabolismo in vitro, utilizando microssomas hepáticos de ratos, mostrando que o (+)-(S)-ISR foi preferencialmente metabolizado. Do mesmo modo que para a ISR, um método analítico empregando HF-LPME-HPLC no modo três-fases foi desenvolvido para a análise estereosseletiva concomitante do bufuralol (BF) e dos seus principais metabólitos 1\'- oxobufuralol (1\'-Oxo-BF) e 1\'-hidroxibufuralol (1\'-OH-BF) em preparações microssomais. As análises por HPLC foram conduzidas empregando uma coluna Chiralcel OD-H® com fase móvel composta por hexano:2-propanol:metanol:dietilamina (97,5/2,0/0,5/0,5, v/v/v/v), na vazão de 1,5 mL min-1 e detecção em 248 nm e 273 nm. As condições otimizadas da HFLPME foram: n-octanol como solvente orgânico, ácido acético 0,2 mol L-1 como fase aceptora, fase doadora com pH ajustado em 13 e agitação de 1500 rpm por 30 min. O método foi validado e apresentou valores de recuperação entre 63 - 69% para os analitos e mostrou-se linear entre 100 - 5000 ng mL-1 para cada enantiômero do 1\'-Oxo-BF e 100 - 2500 ng mL-1 para cada estereoisômero do 1\'-OH-BF (r > 0,99), com LOQ de 100 ng mL-1 para todos os analitos. O método desenvolvido e validado foi aplicado em um estudo de metabolismo in vitro do BF utilizando microssomas hepáticos de ratos, que mostrou formação predominante do (S)-1\'-Oxo-BF e do (R,R)-1\'-OH-BF. Um segundo fármaco básico abordado neste trabalho foi a ranolazina (RNZ). Para a análise enantiosseletiva da RNZ e de um de seus metabólitos (desmetil ranolazina - DRNZ) em fração microssomal isolada de fígado de ratos, foi desenvolvido um método estereosseletivo empregando a DLLME-LC-MS-MS. Os analitos foram extraídos de 0,5 mL de meio microssomal utilizando o procedimento DLLME, tendo o clorofórmio como solvente extrator e acetona como solvente dispersante. Pela primeira vez os enantiômeros da RNZ e DRNZ foram resolvidos numa mesma corrida cromatográfica. ii Para esta separação foi utilizada uma coluna Chiralcel OD-H® e hexano:etanol (60/40, v/v) e 0,05% de dietilamina como fase móvel, na vazão de 1,0 mL min-1. A validação do método mostrou valores de recuperação em torno dos 55 e 45% para os enantiômeros da RNZ e DRNZ, respectivamente. Os LOQ foram de 25 ng mL-1 para cada enantiômero da RNZ e 10 ng mL-1 para cada enantiômero da DRNZ. A linearidade foi estabelecida entre 10-1000 ng mL-1 e 25-2500 ng mL-1 para cada enantiômero da DRNZ e RNZ, respectivamente. O método desenvolvido e validado foi aplicado em um estudo de metabolismo in vitro utilizando microssomas hepáticos de ratos, mostrando que a metabolismo da RNZ foi enantiosseletivo. Finalmente, um método analítico empregando a SPME/TFME-LC-MS-MS foi desenvolvido para a análise simultânea do fármaco anfótero repaglinida (RPG) e dois dos seus principais metabólitos, a 2-despiperiril-2-amino-repaglinida (DA-RPG) e a 2-despiperidil-2-(5- carboxipentilamina)-repaglinida (DC-RPG) em fração microssomal isolada de fígado humano. A SPME/TFME foi conduzida com o auxílio do equipamento Multi Sampler SPME nas seguintes condições: pré-condicionamento dos blades com 1 mL de uma solução metanol:água (50/50, v/v) por 30 min, 60 min de extração e 90 min de dessorção com 1 mL de fase móvel. A análise por LC-MS-MS foi feita empregando uma coluna cromatográfica C18 em modo reverso, com fase móvel composta por acetonitrila:água (50/50, v/v) e 0,1% de ácido acético, na vazão de 0,5 mL min-1. A validação do método mostrou valores de recuperação acima dos 80% para todos os analitos. O LOQ foi de 2 ng mL-1 para todos os analitos, sendo o método linear no intervalo 2-1000 ng mL-1 para a RPG e 2-500 ng mL-1 para a DA-RPG e DC-RPG. Os analitos foram estáveis durante todo o protocolo analítico e de metabolismo. O método validado foi aplicado em um estudo de metabolismo in vitro utilizando microssomas hepáticos de humanos, mostrando que o perfil metabólico da RPG e a taxa de formação da DA-RPG e DC-RPG é alterada em função da concentração de proteínas microssomais no meio de incubação e também em função do tempo de incubação. Além disso, os resultados mostrama possibilidade de haver diversos outros metabólitos que não foram monitorados.
In the present work, the microextraction techniques hollow-fiber liquid phase microextraction (HF-LPME), dispersive liquid-liquid microextraction (DLLME) and solid phase microextraction based on thin film (SPME/TFME) were used as sample preparation techniques to study the in vitro metabolism of chiral drugs with distinct acid-base characteristics. High-performance liquid chromatography (HPLC) with UV detection and liquid chromatography coupled to mass spectrometry (LC-MS-MS) were used for the analyses. An enantioselective liquid chromatographic method using two-phase hollow- fiber liquid-phase microextraction (HF-LPME-HPLC) was developed for the determination of isradipine (ISR) enantiomers and its main metabolite (pyridine derivative of isradipine - PDI) in microsomal fraction isolated from rat liver. The analytes were extracted from 1 mL of microsomal medium using a two-phase HF-LPME procedure with hexyl acetate as the acceptor phase, 30 min of extraction and sample agitation at 1500 rpm. For the first time, ISR enantiomers and PDI were resolved. For this separation, a Chiralpak AD® column with hexane:2-propanol:ethanol (94/04/02, v/v/v) as mobile phase at a flow rate of 1.5 mL min-1 were used. The column was kept at 23 °C ± 2. The drug and metabolite detection was performed at 325 nm and the internal standard oxybutynin was detected at 225 nm. The recovery rates were 23% for PDI and 19% for each ISR enantiomer. The method presented quantification limits (LOQ) of 50 ng mL-1 and it was linear over the concentration range of 50-5000 ng mL-1 and 50-2500 ng mL-1 for PDI and each ISR enantiomer, respectively. The validated method was employed to an in vitro metabolism study of ISR using rat liver microsomal fraction, showing that (+)-(S)-ISR is preferentially metabolized. In the same way, a three-phase HF-LPME-HPLC method for the stereoselective determination of bufuralol metabolites, 1\'-oxobufuralol (1\'-Oxo-BF) and 1\'-hydroxybufuralol (1\'-OH-BF), in microsomal preparations is described for the first time. The HPLC analysis was carried out using a Chiralcel OD-H® column with hexane:2-propanol:methanol (97.5/2.0/0.5, v/v/v) plus 0.5% diethylamine as the mobile phase, and UV detection at 248 and 273 nm. The HF-LPME optimized conditions involved: n-octanol as the organic solvent, 0.2 mol L-1 acetic acid as the acceptor phase, donor phase pH adjusted to 13, sample agitation at 1500 rpm and extraction for 30 min. By using this extraction procedure, the recovery rates were in the range of 63- 69%. The method was linear over the concentration range of 100-5000 ng mL-1 for each enantiomer of 1\'-Oxo-BF and of 100-2500 ng mL-1 for each stereoisomer of 1\'-OH-BF. The quantification limits were 100 ng mL-1 for all analytes. The validated method was used to assess the in vitro metabolism of bufuralol using rat liver microsomal fraction that demonstrated predominant formation of (S)-1\'-Oxo-BF and (R,R)-1\'-OH-BF. A second basic drug addressed in this thesis is ranolazine (RNZ). For the chiral analysis of RNZ and one of its metabolites (desmethyl ranolazine - DRNZ) in microsomal fraction isolated from rat liver, an analytical enantioselective method using DLLME-LC-MS-MS was developed. The analytes were extracted from 0.5 mL of microsomal medium by DLLME. Chloroform was the extractor solvent and acetone the dispersive solvent. The enantiomers of RNZ and DRNZ were analyzed simultaneously for the first time using a Chiralcel OD-H® column and hexane:ethanol (60/40, v/v) plus 0.05% diethylamine as mobile phase at a flow rate of 1.0 mL min-1. Method validation showed recoveries in the order of 55 and 45% for the enantiomers iv of RNZ and DRNZ, respectively. The LOQs were 25 ng mL-1 for each RNZ enantiomers and 10 ng mL-1 for each DRNZ enantiomers. Linearity was established between 10-1000 ng mL-1 and 25-2500 ng mL-1 for each DRNZ and RNZ enantiomers, respectively. The validated method was employed to an in vitro metabolism study of RNZ using rat liver microsomal fraction, showing that the metabolism of RNZ is enantioselective. Finally, an analytical method was developed employing SPME/TFME-LC-MS-MS for the simultaneous analyses of the anphoteric drug repaglinide (RPG) and two of the its main metabolites 2-despiperidyl- 2-amino repaglinide (DA-RPG) and 2-despiperidyl-2-(5-carboxypentylamine) repaglinide (DC-RPG) in human microsomal fraction. The SPME/TFME procedure was carried out with the support of \"Multi Sampler SPME\" under the following conditions: conditioning of the blades with 1 mL of methanol:water (50/50, v/v) for 30 min, 60 min for extraction and 90 min for desorption with 1 mL of mobile phase. The LC-MS-MS analyses were performed using a C18 column under reversed phase conditions, with the mobile phase of acetonitrile:water (50/50, v/v) plus 0.1% acetic acid at a flow rate of 0.5 mL min-1. The method validation showed recoveries over 80% for all analytes. The LOQ was 2 ng mL-1 for all analytes, and the method was linear over the concentration range of 2 e 1000 ng mL-1 for RPG and of 2 a 500 ng mL-1 for DA-RPG and DC-RPG. The validated method was used to assess the in vitro metabolism profile of RPG by using human liver microsomes. These studies showed that the rate of formation of DA-RPG and DC-RPG depends on both microsomal protein concentration in the incubation medium and the incubation time. Furthermore, the results highlighted the possibility of formation of several other metabolites which have not been monitored.

The colon's epithelial lining exhibits a number of invaginations into the underlying tissue, called the crypts of Lieberkühn. Housing stem cells at their bases, these crypts play an essential role in the maintenance of the epithelium; however, the processes by which crypts form are not conclusively understood. This study deploys mathematical and experimental modelling to validate one potential mechanism: that cellular growth in the developing epithelium causes a build up of compressive stresses, resulting in buckling instabilities which initiate crypt formation. We begin with an extension to the model of Edwards & Chapman (2007), modelling the epithelium as a beam tethered to underlying tissue by a series of springs. Modelling growth parametrically as a sequence of equilibrium configurations attained by beams of increasing length, we demonstrate that competition between lateral supports and stromal adhesion determines buckling wavelength. We show how non-equilibrium relaxation of tethering forces affects post-buckled shapes, and illustrate that growth inhomogeneity has a much weaker influence upon buckled configurations than do variations of mechanical properties. An in-vitro study, in which we culture intestinal epithelial cells upon a flexible substrate, demonstrates that the cells can exert sufficient force to induce buckling upon reaching confluence. A corresponding one-dimensional model is presented, in which a growing, confluent cell monolayer adheres to a thin compressible elastic beam. The model exhibits buckling via parametric growth. Cell-substrate adhesion and growth inhomogeneity have minimal influence upon configurations. Compressibility is important only in separating bifurcation points; large-amplitude shapes are accurately approximated by incompressible solutions. A two-dimensional analogue of this model, which extends von Kármán plate theory, is then given. Axisymmetric configurations are compared with an alternative shell theory model, highlighting discrepancies arising from constitutive assumptions. Examining configurations of an inhomogeneous plate reveals that generation of multiple crypts by targeted softening alone is difficult; however, attachment to an elastic foundation can bias high frequency configurations.

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Dissertacao (Mestrado)
IPEN/D
Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN/CNEN-SP

In the nanoscale, the machinery of life is mainly composed by macromolecules and macromolecular complexes that through their shapes create a network of interconnected mechanisms of biological processes. The relationship between shape and function of a biological molecule is the foundation of structural biology, that aims at studying the structure of a protein or a macromolecular complex to unveil the molecular mechanism through which it exerts its function. What about the reverse: is it possible by exploiting the function for which a protein was naturally selected to deduce the protein structure? To this aim we developed a method, called CAMELS (Coupling Analysis by Molecular Evolution Library Sequencing), able to obtain the structural features of a protein from an artificial selection based on that protein function. With CAMELS we tried to reconstruct the TEM-1 beta lactamase fold exclusively by generating and sequencing large libraries of mutational variants. Theoretically with this method it is possible to reconstruct the structure of a protein regardless of the species of origin or the phylogenetical time of emergence when a functional phenotypic selection of a protein is available. CAMELS allows us to obtain protein structures without needing to purify the protein beforehand.

Orientador: Selma Giorgio
Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia
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Resumo: Nas infecções com o parasito do gênero Leishmania a incapacidade da célula hospedeira destruir os amastigotas leva à lesão a cronificar-se. A persistência e o aumento da carga parasitária levam a formação de um granuloma macrofágico, que resulta em áreas de inadequada perfusão e conseqüente alteração do microambiente tecidual. Assim, neste trabalho avaliamos durante a evolução da lesão de camundongos infectados com L amazonensis a expressão das proteínas HIF-1a e VEGF, que respondem ao estresse microambiental. Paralelamente, investigamos protocolos terapêuticos com HBO que modulem a curva de crescimento da lesão em modelos animais da infecção por Leishmania amazonensis. A expressão de HIF-1a ocorreu nas fases iniciais, crônicas e fases finais da infecção murina com L. amazonensis. Nas lesões cutâneas de camundongos da linhagem BALB/c a expressão de HIF-1a foi de localização difusa na lesão, enquanto que a expressão de HIF- 1a em lesões cutâneas da linhagem C57Bl/6 foi em forma de cluster restrita aos macrófagos parasitados. A expressão de VEGF nas lesões de ambas linhagens de camundongos foi discreta durante todo o período experimental e não aumentou com o tempo de infecção. O tratamento com oxigênio hiperbárico mostrou efeito deletério sobre formas promastigotas aumentando o acúmulo de lipídios citoplasmáticos e o nível de apoptose. O oxigênio hiperbárico diminuiu os efeitos patológicos e modulou a resposta imune. Concluímos que a expressão de HIF-1a durante a evolução da lesão leishmaniótica não está diretamente relacionada à expressão de VEGF e pode ser resultado de múltiplos fatores, que incluem fatores hipóxicos e não hipóxicos. Sugerimos também que o tratamento hiperbárico é capaz de modular a resposta imunológica e diminuir a progressão da lesão durante a leishmaniose murina
Abstract: The incapacity of host cell in killing amastigotes during Leishmania infections causes to chronic lesions. The increase of parasite burden leaves to macrophage accumulation and consequently granuloma formation that result in inadequate perfusion and tissue microenvironment alterations. Thus, in this work we evaluated the HIF-1a and VEGF expression, proteins that responses for environmental stress, during the course of L.amazonensis infection. We also investigated protocols for hyperbaric oxygen therapy that module the lesion progress in animal models infected with L. amazonensis. HIF-1a expression occurred in the early, chronic and in final stages of murine infection with L. amazonensis. BALB/c mice lesions showed a homogeneous expression of HIF-1a while footpads from C57Bl/6 mice showed HIF-1a expression restrict in clusters of heavily infected macrophages. The VEGF expression was not correlated to the evolution of lesion or the HIF-1 production in both stains. The hyperbaric oxygen treatment showed deleterious effects on promastigotes increasing cytoplasmtic lipids and apoptosis level. The HBO decreased pathological effects and modulated the immune response. The results suggest that the HIF-1a expression during lesion progress induced by L.amazonensis in both murine strains is the result of multiple factors, including hypoxic and non hypoxic factors. There is no direct relation between HIF-1a and VEGF expression during experimental cutaneous leishmaniasis. We also indicated that hyperbaric oxygen therapy was able to modulate immune response and decrease of lesion progress during murine leishmaniasis
Doutorado
Doutor em Parasitologia

The KDM5 family consists of four proteins, namely KDM5A, KDM5B, KDM5C and KDM5D. The KDM5 family of demethylase proteins counteract the tri-methylation of H3K4 and can function as transcriptional repressors. They can form a number of different multi-protein complexes that contain other chromatin-modifying factors and co-factors that aid in the recruitment of the protein complex to the genome, whilst also possessing the ability to bind to DNA directly through the ARID domain. Furthermore the KDM5 family has also been implicated in mediating nuclear receptor signalling. The KDM5 family are highly homologous and where co-expressed may act redundantly. A picture is emerging where the KDM5 family may dictate the shift in balance between cellular proliferation and differentiation and are therefore important during development. Although the KDM5 demethylase activity has attracted the greatest attention, it is apparent that this family is an important multi-faceted group of proteins. To study the function of KDM5B two knockout murine lines were generated. The Kdm5b null murine line resulted in early embryonic lethality, whereas a second murine line expressing a KDM5B protein lacking the ARID domain (!ARID) was viable and fertile but displayed a mammary gland phenotype, where terminal end bud development and side branching were delayed at puberty. Since intact oestrogen receptor (ER alpha) signaling is a prerequisite for nulliparous mammary gland development we examined the expression of the progesterone receptor in the adult nulliparous KDM5B !ARID murine mammary gland and found levels to be reduced as compared to the wild-type. Furthermore, co-immunoprecipition of tagged human KDM5B and ER alpha proteins demonstrated an in vivo interaction. These studies suggest that KDM5B is required during embryonic development and may be involved in the ER alpha signaling pathway during nulliparous mammary gland development. Our analysis of the C57BL/6J-Kdm5b !ARID pregnant mammary gland showed a delay in mammary gland morphogenesis and the female could nurse her pups at parturition. Investigation into the molecular mechanisms that may relate to this showed that KDM5B expression is required to positively regulate the PRLR/JAK2/STAT5 signalling pathway associated with mammary gland development during gestation.