Dissertations / Theses: 'Aminopeptidases – antagonistes et inhibiteurs'

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Ponzoni, Adele Asia. "Development and Application of Mass Spectrometry Methods to Qualify Models and Compounds to Support the Discovery of Small Molecules Modulators of Antigen Presentation." Electronic Thesis or Diss., Université de Lille (2022-....), 2024. http://www.theses.fr/2024ULILS059.

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Abstract:

The challenges of drug discovery can be addressed through a multidisciplinary approach that integrates various scientific disciplines. Analytical chemistry has contributed significantly to advances in research and development of new drugs, with mass spectrometry-based techniques being widely applied in this context. The primary objective of this thesis is to support a drug discovery program targeting the endoplasmic reticulum aminopeptidases, ERAP1 and ERAP2, by developing and applying advanced analytical methods, specifically spectrometry imaging (MSI) and liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MS/MS). ERAPs are involved in processing and presenting immunogenic antigens to T cells, and their inhibition is considered an innovative therapeutic strategy for autoimmune and oncological diseases. Three research projects targeted the validation of preclinical models and the characterization of candidate compounds to evaluate their pharmacodynamic (PD) and pharmacokinetic (PK) profiles.In the first project, matrix-assisted laser desorption/ionization (MALDI)-MSI was used to study biochemical changes in a preclinical model of ankylosing spondylitis, the HLA-B27 transgenic rat.Spatially resolved, untargeted metabolomic and lipidomic analyses revealed candidate biomarkers of two deregulated mechanisms linked to gut inflammation, intestinal permeability and immune infiltration. These findings validate the relevance of this model for testing the efficacy of ERAPs inhibitors. In the second project, a quantitative LC-MS/MS method was developed to measure the ERAP1-dependent tumour antigen GSW11, serving as a biomarker of efficacy for an ERAP1 inhibitor, and further validating the compound’s mechanism of action in vitro. Despite method optimization, the endogenous peptide could not be detected, highlighting the technical challenges associated with peptide extraction and analysis from complex biological samples. This led to the identification offactors affecting peptide recovery and detection, offering insights for future method development in peptidomics for pharmacodynamic studies. The third project focused on the biodistribution and metabolism of a candidate ERAP2 inhibitor in vivo. Quantitative MSI was successfully employed to measure the compound's concentration invarious organs, revealing its potential therapeutic applicability. Biotransformation products of the compound were detected and investigated both in vitro and in vivo. These findings pave the way for further characterization of the compound, supporting decision-making processes in future stages of drug development.This research highlights the importance of continuously evaluating preclinical models and compounds to support informed decision-making in drug discovery, ultimately reducing the risk of failures in advanced stages. Future research will focus on integrating these approaches to provide a comprehensive characterization of ERAP inhibitors, combining quantitative tissue analysis with biomarker modulation in preclinical models. The ultimate goal is to identify ERAPs inhibitors with a favourable therapeutic profile for clinical development in autoimmune and oncological indications
Les défis de la découverte de médicaments peuvent être abordés par une approche multidisciplinaire qui intègre diverses disciplines scientifiques. La chimie analytique a contribué de manière significative aux avancées dans la recherche et le développement de nouveaux médicaments, les techniques basées sur la spectrométrie de masse étant largement appliquées dans ce contexte.L'objectif principal de cette thèse est de soutenir un programme de découverte de médicaments ciblant les aminopeptidases du réticulum endoplasmique, ERAP1 et ERAP2, en développant et en appliquant des méthodes analytiques avancées, spécifiquement l'imagerie par spectrométrie (MSI) et la spectrométrie de masse en tandem avec chromatographie liquide (LC-MS/MS). Les ERAPs sont impliquées dans le traitement et la présentation d'antigènes immunogènes aux lymphocytes T, et leur inhibition est considérée comme une stratégie thérapeutique innovante pour les maladies autoimmunes et oncologiques. Trois projets de recherche ont ciblé la validation des modèles précliniques et la caractérisation des composés candidats pour évaluer leurs profils pharmacodynamiques (PD) et pharmacocinétiques (PK). Dans le premier projet, l’imagerie par spectrométrie de masse à désorption-ionisation laser assistée par matrice a été utilisée pour étudier les changements biochimiques dans un modèle préclinique de spondylarthrite ankylosante, le rat transgénique HLA-B27. Des analyses métabolomiques et lipidomiques untargeted résolues spatialement ont révélé des biomarqueurs candidats de deux mécanismes dérégulés liés à l'inflammation intestinale, la perméabilité intestinale et l'infiltration immunitaire. Ces résultats valident la pertinence de ce modèle pour tester l'efficacité des inhibiteurs des ERAP.Dans le deuxième projet, une méthode LC-MS/MS quantitative a été développée pour mesurer l'antigène tumoral dépendant de l'ERAP1, GSW11, servant de biomarqueur d'efficacité pour un inhibiteur de l'ERAP1, et validant davantage le mécanisme d'action du composé in vitro. Malgré l'optimisation de la méthode, le peptide endogène n'a pas pu être détecté, soulignant les défistechniques associés à l'extraction et à l'analyse de peptides à partir d'échantillons biologiques complexes. Cela a conduit à l'identification de facteurs affectant la récupération et la détection des peptides, offrant des perspectives pour le développement futur de méthodes en peptidomique pour des études pharmacodynamiques.Le troisième projet a porté sur la biodistribution et le métabolisme d'un inhibiteur candidat del'ERAP2 in vivo. La MSI quantitative a été employée avec succès pour mesurer la concentration du composé dans divers organes, révélant son applicabilité thérapeutique potentielle. Des produits de biotransformation du composé ont été détectés et étudiés à la fois in vitro et in vivo. Ces résultats ouvrent la voie à une caractérisation plus approfondie du composé, soutenant les processus de prise de décision dans les étapes futures du développement de médicaments.Cette recherche souligne l'importance d'évaluer en permanence les modèles précliniques et les composés pour soutenir une prise de décision éclairée dans la découverte de médicaments, réduisant ainsi le risque d'échecs dans les phases avancées. Les recherches futures se concentreront sur l'intégration de ces approches pour fournir une caractérisation complète des inhibiteurs de l'ERAPs,en combinant l'analyse tissulaire quantitative avec la modulation des biomarqueurs dans des modèles précliniques. L'objectif ultime est d'identifier des inhibiteurs des ERAP ayant un profil thérapeutique favorable pour le développement clinique dans les indications auto-immunes et oncologiques

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Gras, Simon. "Caractérisation des aminopeptidases N du parasite Eimeria tenella et implication en tant que cibles thérapeutiques de nouvelle génération pour lutter contre les coccidioses aviaires." Thesis, Tours, 2013. http://www.theses.fr/2013TOUR4042/document.

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Abstract:

Eimeria tenella est l’un des parasites apicomplexes à l’origine de la coccidiose aviaire, l’une des plus importantes maladies parasitaires de l’industrie avicole. Dans le but de caractériser les facteurs de pathogénicité d’E. tenella, nous nous sommes intéressés aux protéases et plus particulièrement aux aminopeptidases N. Nous avons caractérisé Et-ApN1 et identifié Et-ApN3, deux aminopeptidases d’E. tenella. Et-ApN1 présente de fortes homologies avec PfA-M1, l’homologue de Plasmodium falciparum, au niveau des séquences, des structures, des propriétés biochimiques, du clivage et de la localisation. L’ensemble des résultats suggèrent qu’Et-ApN1 est impliquée dans le développement parasitaire. Pour évaluer son rôle de cible thérapeutique potentielle, nous avons criblé une bibliothèque de molécules et identifié une nouvelle molécule le C36, qui inhibe directement l’activité d’Et-ApN1 et entraîne un arrêt du développement d’E. tenella in vitro. Cet effet inhibiteur est également observé chez Toxoplasma gondii et P. falciparum. Dans le but d’améliorer la solubilité du C36 pour de futures études in vivo, le C36 a été pharmaco-modulé. Les perspectives de ces travaux viseront à prouver l’implication directe des Et-ApN dans le développement d’E. tenella
Eimeria tenella is an apicomplexan parasite causing avian coccidiosis, one of the most important parasitic diseases in world poultry industry. To identify E. tenella pathogenesis factors, we were interested in proteases and more specifically in aminopeptidases N. We characterized Et-ApN1 and identified Et-ApN3, two aminopeptidases of E. tenella. We revealed strong homologies in the sequences, structures, biochemical properties, cleavage patterns and localization between Et-ApN1 and PfA-M1, the homologue from Plasmodium falciparum. Taken together, our results suggest that, as PfA-M1, Et-ApN1 is involved in parasite development and could be considered as a therapeutic target. To confirm this hypothesis, we screened a small molecule library and identified the compound C36. This molecule not only inhibits Et-ApN1 but also the in vitro development of E. tenella. This inhibition of parasite development was also observed for Toxoplasma gondii and P. falciparum. In perspectives, a pharmaco-modulation approach will be performed to improve chemical properties of the compound C36. New molecules derived from C36 will then be tested in vivo. Future studies will aim to prove the direct implication of Et-ApN in E. tenella development

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Guilini, Pauline. "Synthèse de nouveaux inhibiteurs des fonctions plaquettaires, antagonistes des récepteurs P2Y1 et P2Y12." Strasbourg, 2011. http://www.theses.fr/2011STRA6189.

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Abstract:

Les maladies ischémiques, causées principalement par des thromboses artérielles, sont la première cause de mortalité dans les pays développés. Les antiagrégants plaquettaires sont des médicaments destinés à empêcher la formation des thromboses artérielles. Une stratégie thérapeutique consiste à inhiber les récepteurs responsables de l’activation des plaquettes : le récepteur P2Y12 et le récepteur P2Y1. Pour obtenir une réponse optimale d'agrégation des plaquettes, l'activation synergique des deux récepteurs P2Y1 et P2Y12 a été démontrée. Le travail décrit dans ce mémoire concerne la synthèse de ligands bivalents, c’est à dire le développement d’une seule entité chimique qui combine deux antagonistes ciblant ces deux récepteurs qui pourrait ainsi présenter un intérêt en assurant un effet antiplaquettaire efficace tout en préservant une capacité hémostatique suffisante. Après avoir développé une série d’analogues du cangrelor présentant une chaîne thioalkylée en position C-2 par substitution de 2-halogénonucléosides, les tests d’agrégation plaquettaire ont révélé que ces composés ont un effet inhibiteur sur l’agrégation induite par l’ADP, néanmoins uniquement à forte concentration. La préparation d’un précurseur du MRS2279 qui a pour but de cibler sélectivement le récepteur P2Y1, nous a permis d’envisager la synthèse d’hétérodimères susceptibles d’inhiber les deux récepteurs P2Y12 et P2Y1. En combinant trois « parties » : une adénosine pour la partie OUEST, un bras espaceur (cystamine, di-, tri- et tétraéthylène glycol) et un précurseur du MRS2279 pour la partie EST, nous avons effectué la synthèse de plusieurs ligands bivalents originaux non phosphorylés. Les tests d’agrégation plaquettaire des dimères ainsi obtenus montrent que ceux-ci n’ont pas un effet inhibiteur assez puissant pour pouvoir poursuivre les tests biologiques. Cependant la phosphorylation des 2 pharmacophores semble une solution prometteuse quant à l’activité des ligands bivalents
Ischemic diseases due to arterial thrombosis are the leading cause of death in developed countries. Antiplatelet agents are drugs which prevent the formation of arterial thrombosis. A therapeutic strategy consists in inhibiting the receptors responsible for platelet activation: the P2Y12 and P2Y1 receptor. For an optimal response of platelet aggregation, synergistic activation of both receptors has been demonstrated. The work described in this thesis deals with the synthesis of bivalent ligands, i. E the development of a single chemical entity that combines two antagonists targeting these receptors. This strategy may be conjugating an effective antiplatelet effect along with a sufficient hemostatic capacity. A serie of analogues of cangrelor, which are thioalkylated at C-2 position, were synthesized from 2-halogenonucleosides. The platelet aggregation tests on those compounds revealed an inhibitory effect on aggregation induced by ADP, but only in high concentrations. The preparation of a precursor of MRS2279 (a selective P2Y1 antagonist), allowed us to focus on the synthesis of heterodimers which may inhibit both receptors P2Y1 and P2Y12. Toward this goal, we combined three parts: an adenosine for the Western part, a linker (cystamine, di-, tri-and tetraethylene glycol) and a precursor of MRS2279 for the Eastern part. We performed the synthesis of several original bivalent ligands which are no phosphorylated. The dimers platelet aggregation tests show that they have no sufficient inhibitory effect to continue the biological tests. However, the phosphorylation of the two pharmacophores appears a promising approach for the activity of those bivalent ligands

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Al-Masri, Mounir. "Conception, synthèse et évaluation des dérivés d'aminobenzosubérone comme inhibiteurs potentiels des aminopeptidases de la famille M1." Thesis, Mulhouse, 2017. http://www.theses.fr/2017MULH2862.

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Abstract:

Les aminopeptidases de la famille M1 sont des protéases qui catalysent l’hydrolyse d’une liaison peptidique en position N-terminale. Ce sont des métalloprotéases avec un ion zinc dans leur site actif conservé dans tous les membres de cette famille de protéine. Ces enzymes sont impliqués dans de nombreux processus physiologiques normaux, mais également dans des désordres métaboliques, tels que la progression tumorale, des maladies auto-immunes, ainsi que dans des infections virales, bactériennes et parasitaires. Pour ces raisons, ces aminopeptidases sont considérées comme des cibles thérapeutiques potentielles pour traiter ou diagnostiquer diverses maladies. En 2006, le laboratoire a découvert le châssis moléculaire de type 3-amino-2-benzosubérone inhibant puissamment et sélectivement et un des membres de cette famille d’aminopeptidases, à savoir l’APN. La conception et la synthèse des dérivés de ce châssis moléculaire comme inhibiteurs potentiels et sélectifs pour cinq autres membres de la famille M1 (APN, ERAP1/2, IRAP et PfA-M1) est au cœur de ce travail. Des études pharmacologiques, pharmacocinétiques jusqu’aux essais précliniques ont été menées et leurs résultats seront présentés dans le cas de l’inhibition de PfA-M1
Aminopeptidases of the M1 family are proteases that catalyze the hydrolysis of a peptide bond in the N-terminal position. These are metalloproteases with a zinc ion in their active site conserved in all members of this protein family. These enzymes are involved in many normal physiological processes, but also in metabolic disorders, such as tumor progression, autoimmune diseases, as well as in viral, bacterial and parasitic infections. For these reasons, these aminopeptidases are considered potential therapeutic targets for treating or diagnosing various diseases. In 2006, the laboratory discovered the powerful and selectively inhibiting 3-amino-2-benzosuberone molecular chassis and one of the members of this family of aminopeptidases, namely the APN. The design and synthesis of derivatives of this molecular chassis as potential and selective inhibitors for five other members of the M1 family (APN, ERAP1 / 2, IRAP and PfA-M1) is at the heart of this work. Pharmacological, pharmacokinetic and preclinical studies have been conducted and their results will be presented in the case of PfA-M1 inhibition

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Kolb, Stéphanie. "Conception, synthèse et évaluation biologique d'inhibiteurs des phosphatases CDC25 à visée anti-tumorale." Paris 5, 2009. http://www.theses.fr/2009PA05S006.

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Abstract:

Les phosphatases CDC25 sont des éléments-clé de la régulation du cycle cellulaire, activant les complexes CDK-cyclines. Ces enzymes sont sur-exprimées dans de nombreux cancers ce qui en fait des cibles intéressantes pour le développement de nouveaux agents anti-tumoraux. Le programme de conception d'inhibiteurs des CDC25 s'est développé sur un crible 777 silico/in vitro identifiant deux séries chimiques. La première, comportant un motif [l]pyrindine, est cytotoxique sur lignées tumorales, mais inactive sur lignée saine. La seconde, autour d'un noyau thiazolopyrimidine, inhibe l'activité de CDC25 et s'avère cytotoxique sur lignées tumorales. L'inhibiteur le plus puissant cible CDC25 sur un test plus spécifique. Un crible à moyen débit a été réalisé sur une librairie de nouveaux composés possédant le noyau thiazolopyrimidine et préparée par chimie clic. Une collection de dimères avec un motif thiazolidinone a été synthétisée et inhibe l'activité des phosphatases CDC25 et PTP1B
The development of CDC25 phosphatase inhibitors is an interesting approach towards new anti-tumour agents. CDC25 play key roles in cell cycle regulation and are over-expressed in numerous cancers. In order to identify promising inhibitors, we conducted in silico/in vitro screening which led to the discovery of potent molecules. [Ijpyrindine derivatives provided antiproliferative activities against cancerous cell lines but none towards a normal cell type. Structural modifications on the thiazolopyrimidine core, led to compounds which inhibit CDC25 activity and display cytotoxic activities against tumor cells. The most efficient inhibitor targets CDC25B in cells. To improve the activity of this series, novel derivatives were rapidly identified, following parallel "click" synthesis in solution and in situ screening for CDC25 inhibition. Finally, a series of dimers was designed from the thiazolopyrimidine core and evaluated for their inhibitory activity against a panel of phosphatases

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Munkonda, Mercedes Nancy. "Caractérisation d'inhibiteurs des nucléoside triphosphate diphosphohydrolase-1,2,3 et 8 chez l'humain et la souris." Master's thesis, Université Laval, 2008. http://hdl.handle.net/20.500.11794/20692.

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Abstract:

L'objectif principal de cette étude consistait à identifier et à caractériser des inhibiteurs de l'activité enzymatique des Nucléosides Triphosphates Diphosphohydrolases (NTPDases) de la membrane cytoplasmique, soient les NTPDase 1, 2, 3 et 8. Ainsi, dans un premier temps, nous avons caractérisé l'inhibition de certains antagonistes des récepteurs P2 sur les NTPDases. Puis, nous avons produit et testé des inhibiteurs spécifiques de ces enzymes, tels des anticorps monoclonaux. Nos résultats nous permettent de conclure que certains antagonistes des récepteurs P2 tels la suramine, le NF279, le réactif bleu-2 sont aussi des inhibiteurs non sélectifs de l'activité enzymatique des formes humaines et murines des NTPDasel, 2, 3 et 8. Parmi les antagonistes testés, le plus puissant s'est avéré être le NF279. Soulignons cependant, qu'il suffit d'une modification chimique de certains de ces antagonistes pour obtenir une inhibition plus sélective de certaines NTPDases. Finalement nous avons produit et caractérisé un anticorps dirigé contre la NTPDase3 humaine qui inhibe spécifiquement cette enzyme. Ce nouvel anticorps monoclonal que nous avons produit au laboratoire représente actuellement le premier inhibiteur spécifique d'une NTPDase. Dans ce travail, nous avons également démontré que cet anticorps monoclonal est très efficace dans différents types d'expérimentation telles le Western blot, l'immunohistochimie et la cytométrie de flux. L'identification et la caractérisation de ces outils permettront une meilleure compréhension des mécanismes par lesquels les nucléotides extracellulaires, via l'activation des récepteurs P2, modulent des fonctions biologiques importantes telles le développement, la sécrétion endocrinienne, l'inflammation et les réactions immunitaires.

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Henrion, Daniel. "Développement d'un modèle de surcharge cardio-vasculaire de calcium : réactivité vasculaire et effets des inhibiteurs de l'enzyme de conversion de l'angiotensine I et des inhibiteurs de flux calciques." Nancy 1, 1991. http://docnum.univ-lorraine.fr/public/SCD_T_1991_0454_HENRION.pdf.

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Abstract:

Parmi les modifications cardio-vasculaires engendrées par le vieillissement, la surcharge calcique vasculaire revêt une importance particulière. Le taux de calcium total aortique augmente en effet de 150 fois entre les âges de 10 et 90 ans chez l'Homme. Un modèle de surcharge calcique cardio-vasculaire a été développé chez le rat adulte jeune. Un jour de traltement par la vitamine D3 (1 x 300 000 UI/kg, par voie intramusculaire) et la nicotine (2 x 25 mg/kg, per os), suivi de 16 jours de repos (modèle 1/16), induit une surcharge calcique localisée au coeur, aux artères, et aux organes "cibles" de la vitamine D (reins et intestin). In vitro, dans l'aorte et le lit mésentérique, la surcharge calcique provoque une baisse de la réactivité à la noradrénaline et à la sérotonine, ainsi qu'une diminution de la fonction endothéliale. Ces modifications sont provoquées par la surcharge calcique, en présence d'un profil lipidique plasmatique normal. L'isradipine (inhibiteur de flux calciques, IFC) prévient la surcharge calcique dans le lit mésentérique et l'artère caudale. Les inhibiteurs de l'enzyme de conversion de l'angiotensine l (IEC : captopril et perindopril) et l'isradipine préviennent la perte de réactivité à la noradrénaline dans le lit mésentérique et l'aorte. Les IEC et IFC rétablissent la fonction endothéliale dans le lit mésentérique alors que seuls les IEC la rétablissent dans l'aorte. La réversibilité de la surcharge calcique dans les artères de résistance ainsi que la réversibilité des modificatlons de réactivité vasculaire induites par cette même surcharge, permettent d'entrevoir une stratégie thérapeutique des troubles cardio-vasculaires qu'elle engendre lors du vieillissement et de l'hypertension artérielle. Le modèle que nous décrivons dans cette thèse constituera un outil important dans la recherche de nouvelles substances médicamenteuses.

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Cano, Virginie. "Conception et synthèse d'inhibiteurs pour l'étude du site actif d'une UDP-glucuronosyltransférase recombinante hépatique humaine : l'UGT1*6." Nancy 1, 1997. http://www.theses.fr/1997NAN12155.

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Abstract:

Des molécules originales, inhibiteurs des UDP-glucuronosyltransférases, ont été conçues, synthétisées puis testées. Ces composés constituent des sondes précieuses pour explorer l'organisation des sites actifs de ce groupe de protéines impliquées dans le métabolisme des xénobiotiques, dont les médicaments, et dans celui de substances endogènes (bilirubine, acides rétinoïques,. . . ). Les molécules synthétisées, dont la structure est analogue à celle du substrat, l'acide UDPglucuronique, permettent de caractériser plus spécifiquement le domaine peptidique interagissant avec ce co-facteur. Les principaux résultats obtenus à l'issue de ce travail sont regroupés en trois parties principales correspondant aux trois groupes d'inhibiteurs considérés. 1- Une série chimique composée d'une cinquantaine de molécules dérivées de l'uridine a été synthétisée en faisant varier la nature des motifs chimiques positionnés successivement sur le cycle pyrimidique de l'uracile ou sur les groupements 2', 3' et 5' du ribose. L'effet inhibiteur de chaque molécule a d'abord été estimé d'après la mesure des 150. Pour les inhibiteurs les plus performants, une analyse cinétique détaillée a été entreprise visant à déterminer la constante d'inhibition ainsi que le mode d'inhibition. 2- Ces inhibiteurs ont été comparés à ceux précédemment obtenus au laboratoire comme les acides arylalkyl carboxyliques (inhibiteurs compétitifs) et les N-acyl-phénylamino alcools reliés par un bras espaceur à l'uridine (analogues de l'état de transition). En particulier, ils ont été utilisés pour caractériser le site de fixation de la 4-méthylombelliférone de l'UDP-glucuronosyltransférase 1. 6 après mutation des acides aminés Histidine 54 et Arginine 52 (Mutants H54A, H54Q, R52A). 3- Une série d'inhibiteurs dérivés des acides triphénylalkyl carboxyliques comportant une fonction alcool terminale primaire à la place de l'acide carboxylique et différant par la longueur de la chaîne alkyle a été testée sur des microsomes hépatiques de rats. Ils exercent un effet inhibiteur puissant et compétitif vis-à-vis de la glucuronoconjugaison de la bilirubine. Les résultats obtenus permettent de mieux comprendre les bases moléculaires stériques et électroniques de l'interaction des substrats avec les UDP-glucuronosyltransférases
New UDP-glucuronosyltransferases inhibitors have been designed, synthetized and tested in order to probe the active sites of these proteins which are involved in the metabolism of xenobiotics, such as drugs, and endobiotics such as bilirubin, retinois acids,. . . The synthetized molecules, whose stucture is analogous to the donor substrate UDP-glucuronic acid, allowed us to characterize more specifically the peptidic domain interacting with this substrate. The maiIÏ results are gathered in three different parts, according to the group of inhibitors considered. 1- Uridine being the mother compound, a chemical series of about fifty molecules has been synthetized by varying the nature of the chemical groups placed successively on the base moiety or on the 2', 3' and 5' positions of the sugar. The inhibitory effect has frrst been estimated in terms of IC50. For the most powerful inhibitors, a detailed kinetic study gave us the inhibition constant and the type of inhibition. 2- These inhibitors have been compared to those previously obtained in the laboratory, such as arylalkyl carboxylic acids (competitive inhibitors) and N-acyl-phenylamino alcohols attached to a uridine molecule by a spacer (transition-state analogs). They have been used to characterize binding site of 4-methylumbelliferone of the UDP-glucuronosyl transferase 1. 6 after mutation of amino-acids His54 and Arg52 (mutants H54A, H54Q and R52A). 3- A series of inhibitors derived from triphenylalkyl carboxylic acids containing a primary alcohol group instead of the carboxylic acid group and with various carbon chain length has been tested on rats hepatic microsomes. They show a strong inhibitory effect on bilirubin glucuronidation. The results obtained allowed us to better understand the molecular and electronic basis of substrates interaction with UDP-glucuronosyl transferases

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Scoliège-Harcouet, Laura. "Transport intestinal de bêta-lactamines orales : caractérisation et modulation par les antagonistes des canaux calciques et les inhibiteurs." Paris 11, 1995. http://www.theses.fr/1995PA114808.

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Chillon, Jean-Marc. "Impact hémodynamique du vieillissement et de la surcharge calcique vasculaire chez le rat : effet des inhibiteurs de flux calciques et des inhibiteurs de l'enzyme de conversion de l'angiotensine I." Nancy 1, 1991. http://www.theses.fr/1991NAN10452.

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Akue-Gedu, Rufine. "Conception rationnelle et synthèse d'inhibiteurs potentiels de la topoisomérase II : synthèse complète de la camptothécine." Lille 2, 2004. http://www.theses.fr/2004LIL2S013.

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Abstract:

Les topoisomérases sont la cible de certains médicaments anticancéreux. L’ellipticine et ses dérivés sont de bons modèles d’inhibiteurs de la topoisomérase II. Ils interagissent aussi directement avec l’ADN par intercalation. L’acétate de 2-N-méthyl-9-méthoxyelliptinium (CEPTIUM*) a été utilisé en clinique dans le traitement du cancer du sein. Il est retiré du marché à cause de sa forte toxicité. Le but de notre travail est de concevoir et de synthétiser de nouvelles molécules analogues de l’ellipticine en modifiant sa structure par pharmacomodulation. Nous proposons également une synthèse complète et originale d’un inhibiteur de la topoisomérase I, la camptothécine. De nombreuses molécules ont été synthétisées et confiées à un industriel pour être testées
Topoisomerases I and II are target anticancer agents. Ellipticine and its derivates are good models for inhibitors of topoisomerase II. They also directly interact with DNA by intercalation. The 2-N-methyl-9-méthoxyelliptinium acetate (CEPTIUM*) was introduced in clinical treatment of breast cancer. To date it is no more commercialized because of its high toxicity. Our work was to design and to synthesize novel analogues of ellipticine obtained by modification of its structure by pharmacomodulation. Furthermore, anoriginal and full synthesis of inhibitor of topoisomerase I, the camptothecin is described. Most of the synthesized molecules have been sent for biological testings

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Li, Aixiao. "Molecular modeling of non-bonding interactions in biomolecules-ligand systems." Paris 7, 2009. http://www.theses.fr/2009PA077032.

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Abstract:

Ce travail est consacré à la modélisation des interactions entre des inhibiteurs et des molécules impliquées dans la cancérisation, dans le but notamment d'établir de manière précise les modes d'interaction biomolécules-ligand. Dans la famille des CDK (cyclin dépendant kinases) nous nous sommes intéressés à la sélectivité que présente un nouvel inhibiteur (2PU) vis-à-vis de CDK4 par rapport à CDK2. Les méthodes employées : dynamique moléculaire, calculs d'énergies d'interaction, docking et méthodes mixtes du type ONIOM ont permis d'établir les raisons précises de la sélectivité en mettant en évidence des interactions privilégiées (notamment des liaisons H) entre l'inhibiteur et CDK4. Sur le plan méthodologique la méthode ONIOM (à deux ou trois couches) a fait l'objet d'une étude minutieuse et originale quant à la procédure de définition de la partition du système. Une nouvelle approche est proposée. La stabilisation du DNA G-quadruplex par un nouveau ligand (TQMP) a également été étudiée par dynamique moléculaire, ce qui a permis de préciser les modes d'interaction et de démontrer la sélectivité de l'un des deux sites possibles d'interaction
This work is devoted to modelling the interactions between some inhibitors and molecules involved in cancer development and aims at precisely establishing the interactions modes between the ligands and the biomolecules. In the CDK (cyclin dependant kinases) family we have examined the selectivity of a new inhibitor (2PU) towards CDK4 as compared to CDK2. The techniques we have used : molecular dynamics interaction energies calculation, molecular docking and mixed methods of the ONIOM type allowed us to establish the precise causes of this selectivity, showing the existence of specific interactions (H bonds, among others) between the inhibitor and CDK4. From a methodological point of view, the ONIOM method (with 2 or 3 layers) has been carefully examined with respect to the System partitioning procedure. A new approach is proposed. The stabilisation of G-quadruplex DNA by a new ligand (TQMP) has also been studied with molecular dynamics, which allowed establishing the interaction modes and show the selectivity of one of the 2 possible interaction sites

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Padrón-Barthe, Laura. "LEI/L-DNase II : mécanisme d'activation et régulation de la mort cellulaire." Paris 5, 2006. http://www.theses.fr/2006PA05D044.

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Abstract:

La mort cellulaire est un processus indispensable à l'homéostasie des organismes. Les premières protéases impliquées dans l'apoptose furent les caspases. Cependant, leur participation n'est plus considérée comme une étape obligatoire, plusieurs effecteurs indépendants de l'activation des caspases ayant été mis en évidence. Un de ces effecteurs, caractérisé dans notre laboratoire, est la LEI/L-DNase II. Cette protéine appartient à la famille des serpines. Nous avons montré que la LEI (antiprotéase) change de conformation en découvrant un site endonucléase, la transformant ainsi en L-DNase II (endonucléase). En même temps, le changement de conformation découvre un site de nucléarisation qui permet sa translocation dans le noyau. Lorsque la LEI n'est pas transformée en L-DNase II, celle-ci protège les cellules de l'apoptose. Lors de l'induction par l'étoposide, la LEI empêche l'activation de la caspase-8 à travers l'inhibition de la cathepsine D dans deux modèles de mort indépendants des caspases : la dégénérescence rétinienne induite par la lumière et le paraptose des cellules somato-lactropes
The first proteases implicated in apoptosis were the caspases. But their participation in this process is no longer considered as indispensable. Other non-caspases proteases have been implicated in apoptosis, such as LEI/L-DNase II. LEI/L-DNase II belongs to the serpin superfamily. We show that LEI (antiprotease) is transformed into L-DNase II by a conformational modification. This conformational change also uncovers a nuclear translocation site, allowing this L-DNase II (endonuclease) to go to the nucleus to degrade DNA. When cells are induced with etoposide, wich does not permit the conformational change of LEI, this serpin protect cells from caspase-8 activation by indirect inhibition of cathepsin D. We have also implicated L-DNase II into two models of caspase independent cellular death : light-induced retinel degeneration and paraptosis of somato-lactotropes cells

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Sfaxi, Fatma. "Identification d'un inhibiteur endogène des convertases comme agent anti-tumoral et anti-métastatique." Paris 7, 2012. http://www.theses.fr/2012PA077197.

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Abstract:

Les proprotéines convertases (PCs) sont des protéases impliquées qui maturent et activent des protéines impliquées dans les différentes étapes de tumorigenèse et de métastases tels que des facteurs de croissance, certains de leurs récepteurs, des métalloprotéinases et des molécules d'adhésions. La découverte d'inhibiteurs des PCs pourrait donc constituer une nouvelle stratégie dans le traitement de certains cancers. Récemment, la serpine Spn4A de Drosophila Melanogaster a été décrite comme un inhibiteur potentiel de la Furine humaine. D'autre part, le pro-segment de la Furine a été décrit par des études récentes comme un inhibiteur des PCS capable d'inhiber le pouvoir tumorigénique des cellules tumorales. Mon travail de thèse a porté sur l'étude de l'effet de ces deux inhibiteurs naturels des pcs sur la progression tumorale et la formation de métastases. J'ai pu donc démontrer que ces deux inhibiteurs induisent une diminution de la maturation des substrats des PCs notamment IGF-1R, ce qui induit une inhibition de la phosphorylation de Akt et donc une diminution du pouvoir prolifératif des cellules tumorales et une augmentation de leur sensibilité vis-à-vis des molécules pro-apoptotique. Par ailleurs, ces inhibiteurs induisent une diminution de la capacité des cellules tumorales à former des tumeurs et des métastases hépatiques lorsqu'elles sont injectées réciproquement en sous-cutanée et en intra-splénique chez les souris. Ces résultats démontrent la possibilité de l'utilisation des inhibiteurs naturels des PCS ou de molécules qui en dérivent dans le traitement du cancer et des métastases hépatiques seuls ou en combinaison avec des traitements existants
Proprotein convertases (PCs) located along the constitutive secretory pathway (Furin, PACE4, PC5 and PC7) are involved in the proteolytic cleavage and/or expression of various neoplasia-related mediators, making them promising targets in cancer therapy. These include growth factors, receptors, adhesion molecules, and various proteases. To date, only Spn4A, a Drosophila melanogaster serpin, and pp-Furin was naturally occuring inhibitor known that efficiently inhibits PCs. Here, we show that this two inhibitors inhibits PCs activity and the metastatic potential of colon cancer cells. When expressed in colon carcinoma cells, they inhibited processing of PC substrates and reduced anchorage-independent growth, invasiveness and enhanced chemosensitivity. In vivo, they repressed tumor development and formation of liver metastases in response to intrasplenic/portal inoculation of colon cancer cells. These results suggest the potential use of those inhibitors or their derivates as a useful adduct for prevention of colorectal liver metastasis

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Daskiewicz, Jean-Baptiste. "Inhibiteurs flavonoïdiques de la glycoprotéine-P : effets des substituants, nature des sites d'interaction et transport." Lyon 1, 2001. http://www.theses.fr/2001LYO10135.

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Abstract:

La résistance des cellules cancéreuse aux molécules antitumorales est, dans la plupart des cas, liée à la surexpression au niveau de leur membrane plasmique de transporteurs de type ABC. Ces protéines, en hydrolysant l'ATP, sont capables de déplacer les agents cytotoxiques de l'intérieur vers l'extérieur des cellules. L'un des acteurs majeurs pour effectuer ce transport est la glycoprotéine-P (Pgp). L'utilisation des flavonoi͏̈des, molécules d'origines naturelle, a été proposée pour moduler l'action de ce transporteur. Ils seraient capables d'interagir avec la Pgp soit en mimant l'ATP, soit en se fixant au même site que les modulateurs stéroi͏̈diens. Au cours de ce travail de doctorat, nous avons étudié les relations structure/activité des flavonoi͏̈des par rapport à leur capacité d'interaction avec la Pgp. L'affinité des composés a été mesurée in vitro par atténuation de fluorescence d'un résidu tryptophane contenu dans le domaine NBD2 de la Pgp, et sur culture de cellules leucémiques MDR par cytométrie de flux en présence d'une drogue fluorescente. Les modifications structurales ont porté sur des groupements hydroxyles, méthoxyles et isoprénoi͏̈des. Il s'est avéré que d'une part, l'introduction d'une chaîne prényle avait un effet fortement positif sur l'affinité des flavonoi͏̈des pour la Pgp et que d'autre part, la majorité des flavonoi͏̈des interagissent plutôt avec un site modulateur fixant les stéroi͏̈des. Seuls les dérivés C-isoprénylés ont démontré une capacité à inverser le phénotype MDR sur culture de cellules leucémiques, avec pour la 8-prényl-chrysine, une activité supérieure à celle de la cyclosporine A, l'un des modulateurs de référence de la Pgp. Enfin, nous avons pu vérifier grâce à l'utilisation de composés radiomarqués, que les flavonoi͏̈des testés, contrairement à la quasi-totalité des modulateurs, n'étaient pas eux-mêmes, transportés par la Pgp. Ceci laisse donc augurer des possibilités de développements cliniques futurs pour ces composés.

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Labrie, Philippe. "Développement de modèles 3D-QSAR et synthèse de nouveaux inhibiteurs de la glycoprotéine-P de type anthranilamide et leur évaluation in vitro et in vivo." Thesis, Université Laval, 2007. http://www.theses.ulaval.ca/2007/24453/24453.pdf.

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Mathieu, Romain. "Dérivés d'adénines et pyrazolotriazines isostères : synthèses et relations structure-activité." Strasbourg 1, 2004. http://www.theses.fr/2004STR13219.

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Abstract:

Les dérivés de l'adénine sont très répandus dans la nature et modulent de nombreuses fonctions cellulaires. Dans un premier temps, nous nous sommes intéressés aux dérivés de l'adénosine substitués en position 2 afin de développer de nouveaux ligands des récepteurs purinergiques P2Y1. La synthèse de différents dérivés 2-substitués du MRS-2179 (N6-méthyl-2'-déoxyadénosine-3',5'-bisphosphate) avait pour objectif de mieux appréhender les relations structure-activité autour de cette position. La stratégie de synthèse adoptée mettant en œuvre une stannylation régiosélective des 6-chloropurines, appliquée en série 2'-déoxyadénosine, conduit efficacement à l'intermédiaire 2-iodé (5 étapes, rendement global de 18%). Les réactions de couplage catalysées par le palladium nous ont ensuite permis d'introduire de multiples substituants en position 2 avec des rendements très satisfaisants. Enfin, les nucléotides finaux ont été obtenus par phosphorylation des hydroxyles 3' et 5'. L'exploration topologique du récepteur P2Y1 par ces dérivés a montré l'existence d'une poche hydrophobe qui tolère les substituants alkyles jusqu'au propyle. De plus, le dérivé 2-éthynyle (LPI-448) est 10 fois plus puissant que l'antagoniste de référence MRS-2179 et présente de très fortes propriétés antiagrégantes plaquettaires in vitro. Nous avons ensuite poursuivi cette exploration en série pyrazolo[1,5-a]-1,3,5-triazine isostère à la recherche de nouvelles interactions. Divers substituants (groupements fonctionnels variés reliés à l'hétérocycle par une chaîne alkyle de longueur variable) ont été introduits en position 8 avec de bons rendements par réaction de couplage de type Heck et Sonogashira. Parmi cette collection d'analogues, une dizaine de composés sont des inhibiteurs puissants des PDE-4 dont le composé chef de file (LPI-444) qui se distingue par ses propriétés remarquables (CI50 = 31 nM et excellent profil de sélectivité vis-à-vis des PDE-1, 2, 3 et 5)
The adenine derivatives are widely distributed in nature and regulate a broad range of cell functions. We have first focused our interest on the adenine derivatives substituted at the 2-position in order to develop new P2Y1 receptor antagonists. Various 2-substituted derivatives of MRS-2179 (N6-methyl-2'-deoxyadenosine-3',5'-bisphosphate) have been synthesized with the goal to better understand structure-activity relationships around this position. Thus, we have adopted a chemical pathway using a selective 2-stannylation of 6-chloropurine on the 2'-deoxyadenosine scaffold, for an efficient synthesis of the 2-iodo intermediate (5 steps, 18% overall yield). Then, the palladium-catalyzed cross-coupling reactions allowed us to introduce various substituents at 2-position in high yields. Finally, the hydroxyls 3' and 5' were phosphorylated to afford the desired nucleotides. This topological exploration of the P2Y1 receptor highlighted a medium hydrophobic pocket which tolerated alkyl substituents until propyl. The 2-ethynyl derivative (LPI-448) was 10-fold more potent than the reference MRS-2179 and strongly inhibited in vitro platelet aggregation. Then, we continued this exploration by means of an isosteric pyrazolo[1,5-a]-1,3,5-triazines series in order to discover new interactions. Various substituents (functional groups linked to the heterocycle by an alkyl chain of variable length) were introduced at 8-position in good yields through Sonogashira and Heck cross-coupling reactions. Among this series, ten derivatives strongly inhibited PDE-4 and the lead compound (LPI-444) exhibited remarkable properties (IC50 = 31 nM and excellent PDE-1, 2, 3, 5 selectivities)

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Demeilliers, Bénédicte. "Hémodynamique et fonctions rénales chez le rat : étude comparative entre antagonistes de l'angiotensine II et inhibiteurs de l'enzyme de conversion." Montpellier 2, 1998. http://www.theses.fr/1998MON20078.

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Dinh, Nguyen Tung. "Conception et synthèse d’une nouvelle classe d’antidépresseurs combinant des effets antagonistes α2A noradrénergiques et inhibiteurs de la recapture des monoamines." Paris 11, 2007. http://www.theses.fr/2007PA114827.

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Abstract:

Selon la théorie monoaminergique, les antidépresseurs classiques sont supposés agir par augmentation des concentrations des monoamines dans le cerveau au niveau des fentes synaptiques, soit par inhibition de la recapture de noradréaline (NA) ou de sérotonine (5-HT), soit par inhibition de leur métabolisme. Cependant, tous les antidépresseurs ont un délai de 4 à 6 semaines. Afin de pallier ce défaut, la recherche se focalise sur des molécules qui possèdent plusieurs actions pharmacologiques. Une série de molécules portant un cycle (4)5-imidazoline réagissant à la fois comme antagoniste α2A noradrénergique et inhibiteur de la recapture de la 5-HT et/ou de la NA a été découverte par l’Institut de Recherches Servier. Les études QSAR 3D ont été menées avec pour but de proposer de nouvelles structures afin de modifier les propriétés biologiques inhérentes à cette famille, tout en conservant, voire augmentant leurs affinités aux récepteurs étudiés. A l’issue de ces études, trois modifications ont été proposées (sur le cycle imidazoline, l’espaceur et l’indane). Quatre nouvelles molécules dont la modification a porté sur l’hétérocycle imidazoline ont pu être synthétisées. Un hétérocycle original : la triazoline a été également suggérée mais toutes les tentatives pour la préparer n’ont pas abouti à cause de la fragilité des intermédiaires de synthèse. Différentes voies de synthèse ont été également explorées afin d’introduire des groupements hydrophobes contenant des atomes de fluor sur la partie indane et espaceur. Cependant, aucune n’a pu aboutir. Les quatre molécules synthétisées ont été testées. Elles ont montré un mauvais profil antagoniste α2A noradrénergique mais un bon profil inhibiteur de la recapture de la 5-HT
The monoaminergic hypothesis of depression assumes that classical antidepressants act by raising monoamine levels in the brain (synaptic clefs). This is accomplished either by inhibition of monoamine (noradrenaline(NA) and/or serotonine (5-HT)) metabolism or by blockade of monoamine uptake. However, the major handicap of current antidepressant agents is the 4-6 week delay. To reduce this delay, research effort aimed to identify a molecule endowed with NA and/or 5- HT re-uptake inhibitor properties and antagonist activity at presynaptic α2A-noradrenergic autoreceptors. Based on this strategy, a family of molecules having an imidazoline ring substituted in the 4(5) position, which possesses the required pharmacological profiles, was discovered by the Institut de Recherches Servier (IdRS). 3D-QSAR studies were undertaken in order to suggest new structures to alter the inherent biological properties in maintaining or even in increasing their affinity with studied receptors. From these studies, modifications were proposed on three levels (on the imidazoline ring, spacer and indane). Four new molecules whose modifications focused on the heterocyclic imidazoline ring have been synthesized. An original heterocycle, the triazoline, has also been suggested but all attempts to prepare it were unsuccessful because of the fragility of synthetic intermediates. Different synthetic routes have also been explored to introduce hydrophobic fluorinated groups on the indane and spacer. However, none has been successful. The four molecules synthesized were tested. They have shown a bad antagonist α2Anoradrenergic profile but a good re-uptake inhibitor of 5-HT profile

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Gilleron-Rombaux, Pauline. "Conception, synthèse et évaluation pharmacologique de nouveaux inhibiteurs de farnésyltransférase potentiellement utilisables dans le traitement du cancer." Lille 2, 2005. http://www.theses.fr/2005LIL2S015.

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Abstract:

L'observation selon laquelle 30 % des cancers humains, dont 90 % des cancers du pancréas et 50 % du côlon, sont concernés par la présence de gènes ras mutés a conduit de nombreuses équipes à cibler la protéine Ras pour développer de nouveaux agents anticancéreux. Les protéines Ras sont de petites protéines G qui jouent le rôle de relais entre les récepteurs de facteurs de croissance et des voies de transduction, telles que la voie PI3K /Akt ou la cascade des MAP-Kinases. Elles ne peuvent exercer leurs fonctions transformantes que lorsqu'elles sont ancrées dans la membrane plasmique, ancrage en grande partie dû à la chaîne farnésyle, amenée sur la protéine par la farnésyltransférase (FTase), une métalloenzyme à zinc. Ainsi, des inhibiteurs de farnésyltransférase (FTIs), mimant la séquence CA1A2X C-terminale de la protéine Ras (C : Cys, A1 et A2 : 2 acides aminés, X : Met, Ser), ont été développés afin de bloquer l'activité de Ras. Trois FTIs sont actuellement en développement clinique. Cependant, il semble que l'activité antitumorale des FTIs n'est pas simplement due à l'inhibition de la fonction de Ras et que d'autres protéines farnésylées, telles que RhoB ou Rheb, pourraient intervenir. Dans le cadre de nos recherches visant à élaborer de nouveaux inhibiteurs de farnésyltransférase, nous avons préparé une chimiothèque focalisée de 64 composés mimétiques de la boîte CA1A2X par une méthode de synthèse parallèle sur support solide. Les deux hits sélectionnés à l'issue du criblage de cette librairie, ainsi que des études de modélisation moléculaire, nous ont permis de concevoir trois séries d'inhibiteurs originaux, dans la structure desquels le groupement chélateur de zinc (C), à savoir le motif 1-(4-cyanobenzyl)-5-méthylimidazole, est laissé constant : - deux séries où l'espaceur est un cycle diazépane substitué ou non par un phényle, et dans lesquelles nous avons fait varier le résidu hydrophobe (X), - une série dans laquelle l'espaceur est un cycle pipérazine ou diazépane non substitué et les groupements hydrophobes sont rigidifiés en tricycle. L'évaluation pharmacologique des composés synthétisés (in vitro et in vivo pour 2 composés) nous a permis d'établir des relations structure-activité et ainsi de proposer de nouvelles structures
The finding that 30 % of human cancers, with 90 % pancreas cancers and 50 % colon cancers, are concerned by the presence of mutant ras genes has led to the targetting Ras protein for the development of new anticancer agents. Ras proteins are small G proteins which have the crucial function of transducing intracellular signals from growth factor receptor to several signal transduction pathways, such as the PI3K/Akt and the MAP-Kinases cascades. Ras requires localization at the plasma membrane to exert its oncogenic effects, which is mainly dependent on the prenylation of protein by Zn-metalloenzyme farnesyltransferase (FTase). Thus, farnesyltransferase inhibitors (FTIs), mimetics of the CA1A2X sequence of the Ras protein (C : Cys, A1 and A2 : 2 amino acids, X : Met, Ser), have been designed to inhibit Ras processing. Three FTIs are currently in clinical trials. However, it seems that the antitumor activity of FTIs is not due exclusively to Ras inhibition, but may also involve inhibition of other farnesylated proteins, like RhoB or Rheb. In our search for new FTIs, we have designed a focused library of 64 compounds, mimetics of the CA1A2X motif, by a parallel synthesis method on solid support. Two hits selected after screening this library and molecular modelling studies have enabled us to consider the design of three series of original compounds, in which the 1-(4-cyanobenzyl)-5-methylimidazole zinc chelator (C) is constant : - two series where the spacer is a diazepane substituted or not by a phenyl and in which hydrophobic moiety (X) is the variation component, - a series in which the spacer is a piperazine or a diazepane and hydrophobic moieties are restricted in tricycle. Pharmacological evaluation of the synthetized compounds (in vitro and in vivo for 2 compounds) has enabled us to establish structure-activity relationships and thus to propose new appropriate structures

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Serradji, Nawal. "Synthèse et étude des propriétés pharmacologiques d'antagonistes du PAF, inhibiteurs de la réplication du VIH-1." Paris 5, 2001. http://www.theses.fr/2001PA05P616.

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Abstract:

L'infection du système nerveux central par le virus de l'immunodéficience humaine de type 1 (VIH-1) se caractérise par l'apparition de dysfonctionnements cognitifs et moteurs, regroupés sous le terme de démence associée au SIDA, chez une grande partie des individus atteints de ce syndrome. Au niveau cellulaire, cette infection se traduit par une mort neuronale. Une fois infectés, les macrophages, principales cibles du virus dans le cerveau, sont le siège d'une production importante de Tumor Necrosis Factor-alpha, une cytokine pro-inflammatoire, et de PAF, le médiateur phospholipidique majeur de l'inflammation, tous deux reconnus comme neurotoxiques. Ainsi, la synthèse de composés antagonistes du PAF représente une stratégie thérapeutique potentielle et complémentaire dans la recherche de traitements contre l'infection par le VIH et ses conséquences [. . . ]
Human immunodeficiency virus (HIV) infection can induce a neurological disease termed acquired immunodeficiency syndrome (AIDS) associated dementia (ADD). HIV-infected macrophages, the main target of the virus in the brain, produce high levels of Tumor Necrosis Factor-alpha, a proinflammatory cytokine and PAF, a phospholipidic mediator implied in the inflammatory processes and both are known to be potent neurotoxic compounds. Thus, PAF-antagonists are a putative therapeutic strategy in the treatment of HIV infection and its consequences [. . . ]

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Jacob, Claire. "Régulation du stress oxydant par les phosphodiestérases de type 4 : implication des MAP kinases." Rennes 1, 2003. http://www.theses.fr/2003REN1B069.

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Abstract:

Nous avons montré : 1/ dans les neutrophiles de rat que les phosphodiestérases de type 4 (PDE4) inhibaient ERK1/2 par une interaction directe et que les inhibiteurs PDE4 inhibaient le production d'O2[Anion superoxyde] induite par le fMLP par une activation de ERK1/2 indépendante de l'AMPc. 2/ chez le patient atteint de bronchopneumopathie chronique obstructive (BPCO) que les inhibiteurs PDE4 étaient plus efficaces dans les cellules mononuclées que dans les neutrophiles pour inhiber la production d'O2 induite par le fMLP et que cette inhibition se faisait par une voie dépendante de l'AMPc et par une inhibition directe de ERK1/2. Cette étude nous a permis d'en déduire une application au traitement des BCPO : l'association d'un inhibiteur PDE4 avec un activateur de PKA ou avec un inhibiteur de MEK1/2 pourrait augmenter l'efficacité du traitement sur la production d'O2 qui entretient l'état inflammatoire du tissu pulmonaire.

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Ma, Jia. "Proprotéines convertases dans la tumorigenèse et la métastase." Paris 7, 2011. http://www.theses.fr/2011PA077083.

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Abstract:

PC5/6 est une serine protéase qui fait partie de la famille des proprotéines convertases (PCs). Contrairement aux autres PCs dont l'expression plutôt ubiquitaire et dont l'implication dans différents processus physiologiques et pathologiques y compris le cancer a été démontée, le rôle PC5/6 dans la progression tumorale et la métastase est mal connu. Mon travail de thèse avait pour objectif d'étudier le rôle de PC5/6 dans l'acquisition du phénotype malin des cellules cancéreuses, la progression tumorale et la formation de métastases. L'analyse des différentes lignées tumorales montre que, contrairement aux PCs qui se trouvent dans la voie de sécrétion (furine et PC7) et qui sont bien exprimées dans les lignées cancéreuses et tumeurs humaines analysées et à l'expression de PACE4 qui est variable, l'expression de PC5/6 est très faible ou absente. Des analyses plus approfondies ont révélées que l'expression de PC5/6 dans les cellules tumorales est inhibée suite à des modifications épigénétiques et l'inhibition de ces processus par des agents pharmacologiques induit la réexpression et l'activité de PC5/6. L'introduction de PC5/6 dans les cellules de cancer du colon (CT-26) réduit leur prolifération, leur capacité à former des colonies dans l'agar mou leur invasion et migration. In vivo, l'expression de PC5/6 dans les cellules CT-26 bloque leur capacité à induire la formation de tumeurs et formation de métastases hépatiques chez la souris mude. L'expression du pro-segment de PC5/6 dans les cellules exprimant cette convertase induit une exagération de leur phénotype malin. L'ensemble de ces résultats suggère le rôle suppresseur de tumeur de PC5/6
The serine -protease PC5/6 is a member of the proprotein convertase (PCs) family that contains. Unlike other PCs whose expression is rat ubiquitous and shown involved in various physiological and pathological processes including cancer, the role of PC5/6 in tumor progression î metastasis are still poorly understood. During my PhD, I studied the role of PC5/6 in the acquisition of the malignant phenotype of cancer cells, tumor progression and metastasis. When analyzing different tumor cell lines, we observed that PCs presents in the secretory pathway (furin and PC7) were highly expressed in can cell lines and human tumors analyzed (the expression of PACE4 is variable), the expression of PC5/6 is greatly reduced or absent. Further anahlysis revealed that the inhibition of PC5/6 expression in tumor cells due to epigenetic modifications and inhibition of these later processes pharmacological agents induced re-expression and activity of PC5/6 by tumor cells. The introduction of PC5/6 in the CT-26 colon cancer cell 1 reduced the cellular prolifération, the ability to form colonies in soft agar, invasion and migration. In vivo, the expression of PC5/6 in CT-26 c blocks their ability to induce tumor formation (injected subcutaneously) and the formation of liver metastases (injected into the hepatic circulation in nude mice. The expression of the pro-segment of PC5/6 (an endogenous inhibitor of PC5/6) in cells expressing this convertase induced exaggeration of their malignant phenotype by their ability to proliferate, migrate and invade the extracellular matrix. Taken together, these results suggest PC5/6 is a new tumor suppressor

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Djimdé, Atimé. "Etude pharmaco-toxicologique de nouvelles molécules anti-pla₂." Paris 7, 2009. http://www.theses.fr/2009PA077061.

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Abstract:

La réaction inflammatoire est un processus généralement bénéfique pour l'organisme dans la mesure où elle assure sa défense. Cependant, elle induit aussi des complications sévères qualifiées de pathologies inflammatoires. Des anti-inflammatoires stéroïdîens ou non ont été synthétisés, mais leurs effets secondaires en limitent l'utilisation thérapeutique, Les PLA₂ humaines sécrétées non pancréatiques (snp-PLA2) jouent un rôle majeur dans la propagation et l'amplification de l'inflammation. Ces enzymes hydrolysent la liaison ester en position sn-2 des phospholipides et entraînent la libération de médiateurs lipidiques de l'Inflammation. Partant du PMS 1062 qui possède une forte lipophilie (log P = 7), des études de structure-activité ont conduit à la synthèse de molécules moins lipophiles. Les nouveaux PMS induisent une inhibition spécifique de la PLA2~il avec des concentrations inhibitrices de l'ordre de 31 nM à 2,5 μM. L'étude pharmaco-toxicologique réalisée sur des lignées cellulaires RAW 264. 7 et HepG2 nous a permis de préciser le mécanisme d'action anti-PLA₂ des nouveaux PMS. Nous montrons que ces composés sont non seulement dépourvus de toxicité in vitro mais protègent aussi contre le stress oxydant, la perturbation du fonctionnement mitochondrial et Tapoptose. Le PMS 1398 de la série des pipérazines est un puissant inhibiteur des HPLA₂ des groupes II, V et X. Moins toxique que le PMS 1062, le PMS 1398 maintient un bon fonctionnement mitochondrial par son effet antioxydant. Par ailleurs, avec un log P de 4,9 il offre aussi une meilleure biodisponibilité. Son activité pharmacoiogique nécessite cependant d'être vérifiée in vivo
The inflammatory reaction is generally a beneficial process. However, it also induces severe complications described as inflammatory diseases. To fight them, steroid and non-steroid anti-inflammatory drugs have been synthesized, but their side effects limit their therapeutic use, The human non-pancreatic secreted PLA2 (nps-PLA2), which are involved in inflammatory diseases, have a major role in their spread and magnification. These ubiquitous enzymes hydrolyze the ester link on the sn-2 position of phospholipids and induce the release of lipid mediators of inflammation. Based on the leader, PMS 1062, which has a high lipophilicity {log P = 7), structure-activity studies were conducted and led to less lipophilic molecules with a better bioavailability. Some new molecules induce a specific inhibition of PLA2-II with inhibitory concentrations from 31 nM to 2. 5|μM. The pharmaco-toxicological study conducted on macrophages and HepG2 cells, allowed us to clarify the mechanism of anti-PLA2 action of new compounds and their effects on inflammatory mediators. We have found that these potent inhibitors of HPLA₂are not only devoid of in vitro but also protect against oxidative stress, disruption of mitochondrial function and apoptosis. One of them, PMS 1398, in the piperazine series, is a potent inhibitor of HPLA2 groups II, V and X. It also appears as a better inhibitor of pro-inflammatory cytokines. Less toxic than PMS 1062, PMS 1398 maintains good mitochondrial function by its antioxidant effect With a log P of 4. 9 it also offers improved bioavailability. Its pharmacological activity requires, however, to be verified in vivo

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Salfati, Katy. "Effets comparés des inhibiteurs de l'enzyme de conversion et des antagonistes des récepteurs AT1 de l'angiotensine II sur l'insuffisance cardiaque." Paris 5, 2001. http://www.theses.fr/2001PA05P038.

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Sallem, Wafa. "Synthèse et évaluation des activités pharmacologiques de dérivés pipéraziniques antagonistes du PAF et inhibiteurs de la réplication du VIH-1 : relations structure-activité." Paris 5, 2006. http://www.theses.fr/2006PA05P617.

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Abstract:

L'infection du système nerveux central par le VIH-1 se produit rapidement dès les premiers stades de la maladie et mène à l'apparition de troubles neurologiques et cognitivo-moteurs rassemblés sous le terme de démence associée au SIDA. Le facteur d'activation des plaquettes (PAF), un puissant neurotoxique, joue un rôle important dans ces désordres neurologiques. Le laboratoire de Pharmacochimie Moléculaire a montré qu'un dérivé pipérazinique trisubstitué, le PMS 601, présente une activité antagoniste du récepteur du PAF (PAF-R, CI50 = 8 µM) couplée à une activité anti-VIH-1 sur des cultures de macrophages dérivés de monocytes infectées par la souche VIH-1/BaL (CE50 = 11 µM). Cette thèse s'inscrit dans le cadre d'une étude de relations structure-activité autour du PMS 601 afin d'améliorer sa double activité. L'interprétation des résultats anti-PAF-R est argumentée par la modélisation moléculaire et par l'établissement de cartes de potentiels électrostatiques négatifs
The infection of the central nervous system by HIV-1 occurs early after the systemic infection. Mild to severe neurological complications, as a consequence of this infection, are known as AIDS dementia complex. Platelet-activating factor (PAF), a neurotoxin, plays an important role in these neurological dysfunctions. Our laboratory showed that a trisubstituted piperazine, PMS 601, presents a PAF-receptor antagonist activity (8 µM IC50) and an anti-HIV-1 activity in monocyte-derived macrophages infected with HIV-1/BaL (11 µM EC50). We describe here the structure-activity relationships study realized around PMS 601 in order to increase its dual activity. Molecular modelling and 3D electrostatic potential maps calculation of certain compounds are also presented to understand their anti-PAF activity

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Telliez, Aurélie. "Etude du mécanisme d'action d'inhibiteurs de l'activité tyrosine kinase de l'EGFR sur des lignées cancéreuses prostatiques humaines." Lille 2, 2006. http://www.theses.fr/2006LIL2S037.

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Abstract:

A l'heure actuelle, le cancer de la prostate de pathologies non encore solutionnées par les traitements anticancéreux existants. Pour progresser dans la résolution de ce problème, en plus des thérapies hormonales et des agents cytotoxiques classiques, la recherche évolue vers de nouvelles stratégies thérapeutiques ciblant des facteurs indispensables à la prolifération et à la survie des cellules cancéreuses. Le récepteur de l'epidermal growth factor (EGF-R) est une protéine tyrosine kinase (PTK) jouant un rôle clé dans le développement des cellules et tissus normaux et présentant une activité augmentée dans un grand nombre de cancers, dont le cancer de la prostate. Différentes stratégies tendant à cibler les domaines extra- (anticorps, immunotoxines, ligands cytotoxiques) et intra- (inhibiteurs tyrosine kinase) cellulaires de ce récepteur ont été développées. Bien qu'il existe une grande homologie structurale entre les protéines tyrosine kinase au niveau du domaine intracellulaire assurant la liaison à l'ATP, plusieurs inhibiteurs TK sélectifs de l'EGF-R sont actuellement en essais cliniques. Parmi eux, l'Iressa* (ZD1839) a déjà montré son efficacité en monothérapie dans de nombreuses tumeurs solides (poumons, sein, prostate. . . ) et son utilisation en association avec une radiothérapie ou des agents cytotoxiques ciblant l'ADN est favorable. Cette 4-anilinoquinazoline présente cependant une toxicité pulmonaire non négligeable et semble être la cause de plusieurs décès par pneumonie interstitielle au Japon. Afin de limiter cette toxicité, le laboratoire a envisagé et synthétisé des analogues de l'Iressa* : éthers dissymétriques à noyau quinazoline (chaînes diéthylaminoéthoxy et n-butoxy en position 6 ou 7). L'objectif de mon travail a été de déterminer le mécanisme d'action de ces 4-anilinoquinazolines in vitro, sur des lignées cancéreuses prostatiques humaines hormonodépendantes (LNCaP) et hormonoindépendantes (PC3 et DU145). Après la mise au point d'une technique de dosage de l'activité TK de l'EGFR par marquage radioactif, l'activité des différents composés a été recherchée. Les propriétés de l'Iressaù et des analogues structuraux ont ensuite été déterminées sur différents paramètres cellulaires (prolifération, cycle cellulaire, survie et invasion). En plus des relations structure-activité qui ont été dégagées, les composés synthétisés ont montré un pouvoir proapoptotique et anti-invasif intéressant et supérieur au composé de référence. Afin de progresser dans la compréhension de leur mécanisme d'action, une analyse de puces à ADN, QPCR et western blot ont été menées et ont permis de déterminer l'impact des composés sur l'expression de certains gènes.

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Drieu, La Rochelle Christophe. "Vasomotricité des gros troncs et des artérioles coronaires au repos et à l'exercice chez le chien éveillé : effets des inhibiteurs beta-adrénergiques et des antagonistes calciques." Paris 5, 1991. http://www.theses.fr/1991PA05P621.

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Brunin, Thierry. "Conception et synthèse de dérivés de la camptothécine inhibiteurs potentiels de la topoisomérase I." Lille 2, 2004. http://www.theses.fr/2004LIL2S028.

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Abstract:

L cancer est une des maladies les plus préoccupantes et les plus répandues dans les pays industialisés. Cette maladie est due à une prolifération anarchique des cellules. Les topoisomèrases I et II sont des enzymes impliquées dans la division cellulaire. La topoisomérase I est surexprimée dans de nombreuses formes de cancer, son inhibition est donc une voie dans la lutte contre le cancer. La camptothècine est un alcaloide naturel connu depuis de nombreuses années pour ces propriétés antitumorales. Son mode d'action est une inhibition de la topoisomèrase I. Elle présente cependant une trop forte toxicité pour être utilisé en thérapeutique. Nous avons syntètisé de nouveaux dérivés de la camptothécine modifiés en position 5
Cancer is one of the most worrying and widespread disease in industrial countries. This disease is due to an anarchic proliferation of cells. Topoisomerase I and II are enzymes involved in cell division. Topoisomerase I is overexpressed in many types of cancer, so its inhibition is a pathway to fighting cancer. Camptothecin is a natural alcaloïd well known for many years for its antitumor properties. Its way of action is the inhibition of topoisomerase I. However, it shows too much toxicity to be used as a medicine. We have synthesised new derivatives of camptothecine modified at position 5

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Cousaert, Nicolas. "Conception et synthèse d'inhibiteurs de métalloprotéases et de cibles à ligand acide." Phd thesis, Université du Droit et de la Santé - Lille II, 2008. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00356629.

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Abstract:

L'objectif de ce travail était de développer de nouvelles voies d'obtention de produits acides potentiellement ligand du zinc dans le cadre d'un projet plus vaste mené au laboratoire sur deux cibles biologiques appartenant à la famille des métalloprotéases à zinc, l'aggrécanase et l'enzyme de conversion de l'angiotensine de type 2.
La stratégie chimique utilisée a été la phase solide à l'aide d'une résine chlorure de trityle. La synthèse a été effectuée à partir de dérivés amino-acide protégés par un carbamate de fluorénylméthyle ou d'éthylène-oxy-triméthyle silicium permettant une déprotection en parallèle de la fonction amine une fois la fonction acide fixée à la résine. Nous avons obtenu une chimiothèque de 400 composés. A partir de ces 400 produits un hit a été identifié comme inhibiteur potentiel de l'aggrécanase 2. Des études de relations structures activités d'analogues de ce hit sont actuellement en cours.
En parallèle, comme le tétrazole fait partie des fonctions chimiques potentiellement ligand du zinc et est une fonction phare dans le développement d'inhibiteurs du récepteur à l'angiotensine 2 (AT1), nous avons développé une nouvelle technique de greffage de tétrazole sur résine et de synthèse de chimiothèque biphényltétrazole.Ces travaux ont permis la mise au point d'une nouvelle méthode de synthèse de biphényltétrazole en phase homogène au micro-onde et la synthèse innovante de dérivés biphényltétrazole en phase solide exemplifié par la synthèse de l'irbésartan en phase solide.
Nous avons ensuite développé des dérivés biphényltétrazole pyrazole. Pour cette famille de molécules, nous avons exploité les études effectuées sur la réaction de Buchwald que nous avons adaptée à nos composés. De plus ces mêmes travaux ont permis la mise au point d'une nouvelle réaction d'obtention de dérivés para-iodophényle pyrazole en une seule étape et qui ouvre une nouvelle voie rétrosynthétique de dérivés phényle pyrazole. Cinq de ces produits ont montré sur activité sur le récepteur AT1.

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Parent, de Curzon Olivier. "Sidération myocardique post-exercice chez le chien : effets des antagonistes des canaux calciques de type L et T." Paris 5, 1998. http://www.theses.fr/1998PA05P213.

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Huyet, Jessica. "Mécanismes d'activation et d'inactivation du récepteur minéralocorticoïde : approches structurale et fonctionnelle." Paris 7, 2007. http://www.theses.fr/2007PA077135.

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Abstract:

L'aldostérone exerce ses effets en se liant au récepteur minéralocorticoïde (MR), un facteur de transcription appartenant à la superfamille des récepteurs nucléaires. L'objectif de cette thèse était de caractériser, au niveau moléculaire, le mode de liaison de ligands au MR humain et au MR portant la mutation activatrice S810L, responsable d'une hypertension artérielle. Dans ce but, les domaines de liaison de l'hormone (LBD) du MRwt et du MRS810L complexé à la déoxycorticostérone, un agoniste du MRwr et du MRS810L, ont été exprimés, purifiés et cristallisés et leurs structures cristallographiques ont été résolues. Nous avons également résolu la structure du LBD du MRS810L complexé à la progestérone et à la spironolactone, deux antagonistes du MRwrqui activent le MRS810L. Ces structures ont permis de montrer que le LBD du MR adopte le repliement tridimensionnel caractéristique des récepteurs nucléaires, de caractériser la position de l'extrémité C-terminale dans la conformation active et de caractériser le mode de liaison des ligands dans le MRwt et le MRS810L. Des études de mutagenèse dirigée ont permis d'identifier les contacts responsables de la stabilisation du MRwt et du MRS810Ldans leur conformation active et ceux impliqués dans l'affinité des ligands. Elles nous ont permis également de suggérer que le mécanisme d'ouverture et de fermeture de la cavité de liaison du MR met en jeu un déplacement discret de l'hélice H12, sans modifier l'ancrage de l'extrémité C-terminale. En conclusion, ces études ont permis de mieux comprendre les mécanismes d'activation et d'inactivation du MR permettant ainsi de concevoir de nouveaux antagonistes puissants et sélectifs du MR
Aldosterone exerts its effects by binding to the mineralocorticoid receptor (MR), a transcription factor belonging to the nuclear receptor superfamily. The aim of this work was to characterize at the molecular level the binding mode of ligands to the human MR and the MR harboring the activating mutation S810L, responsible for arterial hypertension. In this aim, the ligand-binding domain (LBD) of MRwr and MRS810L bound to deoxycorticostérone, an agonist of both MRwt and MRS810L, have been expressed, purified and crystallized, and their crystal structures solved. We also determined the structure of the LBD of MRS810L bound to progesterone and spironolactone, two MRwt antagonists which activate the MRS810L. These structures have allowed showing that the LBD of MR adopts the canonical structure of nuclear receptors LBD, characterizing the position of the C-terminal extension of MR in its active state, and characterizing the binding mode of ligands within MRwt and MRS810L- Structure-guided mutagenesis studies allowed identifying the contacts responsible for the stabilization of MRwt and MRS810L in their active conformation and those involve in the affinity of ligands for the receptor. We also suggested that the mechanism by which the ligand enters the ligand-binding cavity involves a slight displacement of the helix H12, without modifying the anchoring of the C-terminal extension. As a conclusion, these studies allowed improving our understanding of the MR activation and inactivation mechanisms for designing potent and selective MR antagonists

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Duong, Vanessa. "Régulation de l'expression et de l'activité des récepteurs des oestrogènes : rôle de Mdm2 et des inhibiteurs d'histones désacétylase." Montpellier 1, 2006. http://www.theses.fr/2006MON1T014.

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Abstract:

Les objectifs de ce travail de thèse ont été d'étudier les mécanismes de régulation de la stabilité et de la transactivation des récepteurs des oestrogènes (RE). Le premier volet concerne l'étude du rôle de l'oncoprotéine Mdm2 et du stress cellulaire. Il était connu que l'hormone régulait négativement l'expression du REα par le système ubiquitine/protéasome. Nous avons montré que Mdm2 participait à la régulation de la stabilité de la protéine REα. Mdm2 forme un complexe ternaire avec les protéines p53 et REα et les agents de stress cellulaire co-stabilisent la protéine p53 et le REα et abolissent ainsi la régulation négative de l'accumulation du REα par l'hormone. Par ailleurs, nos résultats suggèrent que la protéolyse du REα n'est pas requise pour l'activité transcriptionnelle. Dans la deuxième partie, nous avons étudié le rôle de l'acétylation, au travers de l'action des inhibiteurs de HDAC (HDACi), sur la régulation de l'expression et de l'activité transcriptionnelle des RE. Les HDACi modulent l'activité des antioestrogènes partiels par un mécanisme dépendant de la répression de l'expression du REα engendrée par les HDACi. Contrairement à cet effet sur le REα, l'inhibition des HDAC induit l'expression du REβ. De plus, l'hormone et les HDACi agissent en synergie sur l'induction de l'activité transcriptionnelle des RE et ce, de façon plus marquée pour REβ par rapport à REα. Enfin, l'expression des RE potentialise l'activité antiproliférative des HDACi de manière plus efficace pour REβ. Nos résulats indiquent que cet effet résulte, au moins en partie, d'une régulation différentielle de l'expression de gènes du cycle cellulaire par les HDACi en présence du REα et du REβ.

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Compain, Sandy. "Conception, synthèse et évaluation biologique d'une nouvelle série d'inhibiteurs, de type N-hydroxy Pyridine-2-one, visant la méthionine aminopeptidase d'E. coli : amélioration des activités antibactériennes via les métallodrogues." Thesis, Sorbonne Paris Cité, 2015. http://www.theses.fr/2015USPCB094.

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Abstract:

La Méthionine Aminopeptidase est une métalloenzyme présente chez tous les procaryotes et essentielle à la maturation des protéines chez les bactéries. Malgré sa présence chez les eucaryotes,c’est une cible attractive pour développer de nouveaux antibiotiques. A ce jour, de nombreux inhibiteurs visant cette cible ont été développés mais aucun n’a fait l’objet de recherche avancée car l’effet antibactérien était trop limité. Nous nous sommes intéressés à la MetAPI d’E.coli(EcMetAP) comme modèle de Gram (-). Ainsi, une nouvelle série d’inhibiteurs présentant une fonction 1-Hydroxypyridin-2-one (HOPO) comme motif chélatant, a été conçue, synthétisée et les activités évaluées in vitro et in cellulo. Le design de ces ligands a été effectué par une étude en modélisation moléculaire en partant des structures RX de l’enzyme à Mn (EcMetAP-Mn) co-cristalliséeavec un ligand acide hydroxamique résolues précédemment dans l’équipe. Les études en dynamique moléculaire ont permis de sélectionner trois familles de ligand. Ces molécules ont ensuite été synthétisées. Pour la famille de ligands substitués en 5 du cycle HOPO par un methyl indole, la stratégie de synthèse classique n’a pas permis d’obtenir les ligands souhaités mais, une HOPO fonctionnalisée par un dérivé résultant de l’ouverture du cycle indolique a été isolée et totalement caractérisée. Sur l’ensemble des molécules mises au point, cinq d’entre elles ont une bonne affinité pour la MetAP-Mn, avec des CI50 inférieures à 5 μM. Les molécules présentent dans l’ensemble une activité antibactérienne modérée. L’activité est améliorée en présence de polymyxine nonapeptide, un perméabilisant membranaire. Afin de pallier le problème du manque de perméabilité des bactéries Gram (-), la stratégie de métal-chaperone associant autour d’un cation métallique l’inhibiteur et un ligand auxiliaire fonctionnalisé par un perméabilisant, a permis d’améliorer les activités antibactériennes
Methionine aminopeptidase (MetAP) is an ubiquitous metalloprotein present in allprokaryotes and essential to the maturation of proteins in bacteria. Despite to be also present in eukaryotes, it is an attractive target to design new antibacterial agents. Numerous inhibitors targeting MetAP have been developed these last years, but none of then have been further studied because of too low antibacterial activities. We chose to work on MetAP1 from E. coli strain (EcMetAP), as an example of Gram negative bacteria, for which several X-ray structures of the enzyme in complex with inhibitors are available in the literature. A new series of inhibitors functionalized by a 1-hydroxypyrdin-2-one (HOPO) as chelating group has been designed and synthesized. The backbone of these HOPOs has been designed by molecular modeling, starting from the X-ray structure of EcMetAP loaded with Mn(II) incomplex with simple hydroxamic acids and previously solved in the lab. Three types of ligands have been selected and further synthesized. However HOPO substituted in position 5 by a methyl indole could not be obtained, instead a polyfunctionalized molecule with a HOPO substituted by a ring-opening derivative of the indole was isolated and completely characterized. The biological activities of all the molecules were determined. Five of them displayed inhibitory effect against EcMetAP-Mn with IC50 lower than 5 μM. The antibacterial activities are modest againt a wild type E. coli strain and an E. coli strain deleted from the AcrAB efflux pump system, but the sensitivity is increased by adding polymyxin nonapeptide. So, the results can be improved using the metal- chaperone strategy previously developed in the team, which allows, by grafing a permeabilizing agent on an ancillary ligand complexed to a metal cation with the HOPO inhibitor, to favor the uptake of the drug by the bacteria

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Mateo, Lou. "Synthèse et évaluation de nouveaux antagonistes des récepteurs CXCR1-2 pour cibler conjointement l’angiogenèse et l’inflammation dans les pathologies cancéreuses." Thesis, Université Côte d'Azur, 2021. http://www.theses.fr/2021COAZ4006.

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Abstract:

L’angiogenèse et l’inflammation sont deux acteurs primordiaux dans le développement et la progression de nombreux cancers. Une meilleure connaissance des mécanismes cellulaires a permis l’essor des thérapies ciblées anti-angiogéniques. L’intérêt de ces thérapies ciblées anti-angiogéniques, est limité du fait de l’apparition de résistances. En parallèle de la voie du VEGF, il existe un second axe pro-angiogénique et pro-inflammatoire : la voie des CXCL-ELR+/CXCR, qui est particulièrement sollicitée dans le cancer et notamment dans le cancer du rein métastatique. Le but de cette thèse a été de développer de petites molécules originales capables d’inhiber l’interaction ligands/récepteurs (CXCL/CXCR1-2) afin d’avoir une action duale : à la fois anti-inflammatoire et anti-angiogénique. Le motif 2-aminobenzothiazinone a été choisi pour la préparation de trois familles d’inhibiteurs. Des stratégies de synthèse divergentes permettent d’obtenir les composés des deux premières familles, bien que les conditions opératoires aient nécessité une adaptation en fonction de la réactivité de chaque substrat. La dernière famille de molécules, est accessible selon une stratégie de synthèse linéaire qui comporte cependant des limitations lors de la dernière étape de cyclisation. Les évaluations biologiques des molécules obtenues ont mis en évidence un composé prometteur possédant une IC50 de 0.6 μM sur la lignée 786-O et inhibant la chimiotaxie des cellules exprimant les récepteurs CXCR1-2. Des études supplémentaires vont être effectuée pour confirmer ces résultats préliminaires encourageants afin d’envisager par la suite une campagne in vivo sur des poissons-zèbres, avec ce composé afin d’étudier sa capacité à entraver l’angiogenèse
Cancer is one of the main causes of death in the world. Angiogenesis and inflammation represent two essential hallmarks in the development and progression of tumors and are essential for the survival of the cancer cells. Better knowledge of cellular mechanisms has enabled the development of targeted anti-angiogenic therapies. However, the emergence of resistance constitutes the main limitation of these current anti-angiogenics targeted therapies, as you may know the anti-VEGF therapies. But in parallel to the VEGF pathway, another crucial pro-angiogenic and pro-inflammatory axis in cancers is required: the CXCL-ELR+/CXCR pathway, particularly in metastatic kidney cancer. The aim of this work was to develop original small organic molecules able to inhibit the ligand/receptor interaction (CXCL-ELR+ / CXCR1-2) in order to have both anti-inflammatory and anti-angiogenic activities. The 2-aminobenzothiazinone pattern was chosen for the preparation of 3 new classes of inhibitors. Divergent synthesis strategies were used to obtain the members of families 1 & 2, although the conditions have been adapted according to the reactivity of each substrate. The last family of molecules was prepared according to a linear synthesis. However, this latter strategy displayed some limitations during the cyclisation step. Thereafter, biological evaluations revealed a promising compound exhibiting an IC50 of 0.6 μM on the 786-O cell line compared with our reference molecule (IC50 = 2 μM). Other result highlighted that this compound also exerted an inhibition of the chemotaxis of cells expressing CXCR1-2 receptors. Further studies on zebrafish are planned with this compound in order to study its ability to interfere with the angiogenesis phenomenon in vivo

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Coude, Marie-Magdelaine. "Etude des effets d'un nouvel inhibiteur des bromodomaines dans les leucémies aigües." Sorbonne Paris Cité, 2015. http://www.theses.fr/2015USPCC125.

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Abstract:

Les bromodomaines BRD2/3/4 ont été identifiées comme des cibles clés dans le maintien du processus leucémique. Un nouvel inhibiteur oral de BRD, la thiénotriazolodiazépine : OTX015, est actuellement disponible. Nous rapportons ici ses effets biologiques sur des lignées cellulaires de LAL et de LAM ainsi que sur des échantillons frais de patients. L'exposition des cellules à OTX015 entraine l'inhibition de la croissance, un arrêt du cycle et l'apoptose à des concentrations submicromolaires dans des lignées de leucémies aiguës ainsi que sur des cellules leucémiques provenant de patients, comme décrit avec l'inhibiteur JQ1, chef de fil des inhibiteurs de BET. Le traitement par JQ1 et OTX15 induit des profils d'expression génique semblables dans des lignées cellulaires sensibles, y compris une sous-expression de c-MYC et une sur-expression d'HEXIMI. L'exposition à OTX015 a également induit une forte diminution de l'expression de BRD2/4 et c-Myc et une augmentation d'HEXIM1 au niveau protéique, tandis que celle de BRD3 était inchangée. Les niveaux d'ARNm, après une exposition à OTX015, de c-myc, BRD2/3/4 et HEXIM1 ne sont toutefois pas corrélés avec la viabilité observée. Au sein des LAM certain processus leucémique sont mieux identifiés que d'autre, la mutation de NPM1, entrainant une relocalisation cytoplasmique de la protéine perturbant ces activités, a été étudiée par Bacarani. C'est pourquoi la relocalisation de NPM1 observée sous OTX015 est extrêmement prometteuse. Nos résultats indiquent qu'OTX015 et JQ1 ont des effets biologiques similaires, soutenant l'évaluation en cours d'OTX015 dans un essai de phase lb chez les patients leucémiques réfractaires ou en rechutes
The bromodomain (BRD) and extraterminal (BET) proteins including BRD2, BRD3 and BRD4 have been identified as key targets for leukemia maintenance. A novel oral inhibitor of BRD2/3/4, the thienotriazolodiazepine compound OTX015, suitable for human use, is available. Here we report its biological effects in AML and ALL cell lines and leukemic samples. Exposure to OTX015 lead to cell growth inhibition, cell cycle arrest and apoptosis at submicromolar concentrations in acute leukemia cell lines and patient-derived leukemic cells, as described with the canonical JQ1 BET inhibitor. Treatment with JQ1 and OTX15 induces similar gene expression profiles in sensitive cell lines, including a c-MYC decrease and an HEXIM1 increase. OTX015 exposure also induced a strong decrease of BRD2, BRD4 and c-MYC and increase of HEXIM1 proteins, while BRD3 expression was unchanged. C-MYC, BRD2, BRD3, BRD4 and HEXIM1 mRNA levels did not correlate however with viability following exposure to OTX015. Sequential combinations of OTX015 with other epigenetic modifying drugs, panobinostat and azacitidine have a synergic effect on growth of the KASUMI cell line. In some leukemia AML processes are better identified than others, NPM1 mutation causing a cytoplasmic protein relocation disrupting these activities was studied by Bacarani et al. Therefore relocation of NPM1 observed under OTX015 is extremely promising for these pathologies. Our results indicate that OTX015 and JQ1 have similar biological effects in leukemic cells, supporting the ongoing evaluation of OTX015 in a Phase lb trial in refractory leukemia patients or relapses

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Leclercq, Julien. "Conception, synthèse et évaluation pharmacologique de nouveaux inhibiteurs de la kinésine Eg5." Thesis, Lille 2, 2014. http://www.theses.fr/2014LIL2S026/document.

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Abstract:

Le cancer est un problème très présent dans nos sociétés modernes. En effet en 2010 il touchait plus de 10 millions de personnes dans le monde. Aujourd'hui cette maladie est la première cause de mortalité dans les pays industrialisés.Malheureusement, les thérapies envisagées restent fréquemment insuffisantes et possèdent de nombreux effets secondaires qui ternissent les bienfaits du traitement. Pour éviter justement cette toxicité auprès des cellules saines, la recherche développe depuis quelques années des traitements ciblés. La plupart des médicaments antimitotiques actuellement sur le marché présentent de forts effets secondaires notamment cardiologiques, hématologiques et neurotoxiques.Nous nous sommes donc intéressés à une autre cible thérapeutique intervenant toujours au niveau de la mitose mais provoquant moins d'effets néfastes et pouvant être surexprimée dans les cellules cancéreuses: la kinésine humaine Eg5.La kinésine humaine Eg5 est indispensable au bon fonctionnement de la mitose. Elle possède un rôle essentiel dans les premières étapes du cycle cellulaire et est requise pour la séparation des centrosomes à chaque pôle de la cellule.La suppression ou l'inhibition d'Eg5 bloque la cellule en pré-métaphase avec un fuseaumonoastral caractéristique formé de deux centrioles non séparés entourés des chromosomes et des microtubules. Le maintien de ce type de fuseau provoque l'activation des checkpoints du cycle cellulaire et provoque l'apoptose.Notre travail consiste en la synthèse de composés susceptibles d'inhiber la kinésine humaine Eg5 et de bloquer ainsi le développement des cellules cancéreuses.Le recherche de nouveaux ligands potentiels de la kinésine Eg5 est effectué selon un mode de conception rationnel fondé sur l'analyse de la structure tridimensionelle des complexes protéines/ligands ou "structure-based drug design". Ces travaux sont réalisés en utilisant les outils de modélisation moléculaire par la mise en oeuvre de méthode "de novo".L'ensemble des informations recueilli au travers de logiciels très performants permet l'obtention d'un modèle statistiquement significatif destiné à la conception et à la prédiction des activités biologiques.Ces travaux associés à l'expertise chimique du laboratoire, ont permis la conception de trois nouvelles familles, potentielles ligand d'Eg5, de structure: triazoloquinazolinone, triazolométhylquinazolinone, dihydroimidazoquinazolinone
Cancer is a real problem in our civilization. Indeed, in 2010, it affected more than 10 million people in the world. Today, this disease is the first cause of death in industrialized countries.Unfortunately, the proposed therapies remain frequently insufficient and lead to side effects which remove the benefits of the medical treatment. In order to avoid the toxicity to safe cells, since a few years, researches have been done to develop targeted therapies. Most of the anti-mitotic drugs actually available on the market lead to important side effects such as cardiological, hematological and neurotoxic problems.Thus, we interested to another therapeutic target which still acts at the level of the mitosis but causing fewer side effects and can be overexpressed into the cancer cells: the mitotic kinesin Eg5.The mitotic kinesin Eg5 plays an important role in the early stages of mitosis and is one of the most attractive target enzymes in antimitotic drug development. The modulation of the Eg5 activity has been shown to cause aberrant mitotic spindle formation, cell cycle arrest during mitosis and the inhibition of proliferation of tumor cells in culture. With regard to the potential of Eg5 modulators in the treatment of human cancers, we report the design, synthesis and biological studies of quinazolinone derivatives as mitotic kinesin Eg5 inhibitors. We developed three series of molecules derived from quinazolin-4-one scaffold following a “de novo drug design” strategy

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Gautier, Benoit. "Evaluation biochimique et biologique d'antagonistes des récepteurs au VEGF à visée anti-angiogénique." Paris 5, 2009. http://www.theses.fr/2009PA05S004.

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Abstract:

L'angiogenèse tumorale constitue une cible thérapeutique novatrice dans le traitement des cancers à tumeurs solides. Elle est, entre autre, initiée par la fixation du VEGF, un facteur pro-angiogénique sur ces récepteurs, les VEGFR. Le laboratoire s'est orienté vers une approche anti-angiogénique originale, consistant à développer des ligands antagonistes des VEGFR. Ce travail de thèse a consisté en l'évaluation biologique de ligands peptidiques conçus rationnellement et de ligands non peptidiques issus d'un criblage in sïlico. Leur activité biochimique et biologique a été évaluée sur des tests de déplacement non radioactifs préalablement mis au point puis examiné sur cellules endothéliales. Les résultats ont montré leurs effets antagonistes avec des spécificités différentes pour les VEGFR. Enfin, une étude approfondie par RMN et par un Ala-scan a mis en évidence les résidus des peptides impliqués dans l'interaction avec les VEGFR
Tumoral angiogenesis is a novel therapeutic target in the treatment of solid tumor cancers. It is initiated, among others, by the binding of VEGF, a pro-angiogenic factor, on these receptors, the VEGFR. At the laboratory, we develop VEGFRs antagonists as original anti-angiogenic approach. This thesis has consisted in the biological assessment of peptides designed rationally and non-peptidic compounds identified by an in silico screening. Their biochemical activity was evaluated on non-radioactive displacement assays previously developed and then examined on endothelial cells. The results showed their antagonist effect with different specificities for VEGFR. Finally, a detailed study by NMR and by an Ala-scan showed residues of peptides involved in the interaction with VEGFR

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Cardi, Delphine. "Etude du mutant E255L de l'ATPase Ca²+ SERCA1a de lapin et de l'ATPase Ca²+ PfATP6 de Plasmodium falciparum : Expression chez la levure S, cervisiae, purification, characterisation et essai d'inhibition par un antipaludéen puissant, l'artemisinine." Paris 11, 2009. http://www.theses.fr/2009PA11T046.

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Silpa, Laurence. "Synthèse de nouveaux composés pour la prévention et/ou le traitement de coccidiose aviaire." Thesis, Tours, 2014. http://www.theses.fr/2014TOUR4041.

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Abstract:

Les parasites du genre Eimeria sont des parasites apicomplexes provoquant des maladies graves, appelées coccidioses. Ce genre compte sept espèces qui envahissent spécifiquement les cellules épithéliales des intestins de poulet. L’espèce de choix étudiée dans notre laboratoire est Eimeria tenella. La prophylaxie repose sur les vaccins qui sont onéreux et les traitements anticoccidiens, qui sont administrés dans l’alimentation dès l’éclosion du poussin. Depuis 50 ans, l’utilisation massive de ces molécules s’accompagne de l’émergence de populations parasitaires résistantes. Les modes d’action des cibles parasitaires des anticcocidiens étant peu connus, il est difficile de mettre en place une stratégie de contournement de la résistance. Dans l’optique de répondre aux besoins des éleveurs, une collaboration entre le laboratoire de chimie organique et celui de parasitologie a été mise en place en utilisant la capacité de composés chimiques à inhiber l’invasion ou le développement des parasites. Notre stratégie repose sur la syntèse, le développement ainsi que l’évaluation de l’efficacité des composés pouvant potentiellement être utilisés en tant qu’inhibiteurs de la coccidiose aviaire. Un criblage de composés nous a permis d’identifier deux composés « chefs de files », inhibant le processus d’invasion et de développement des parasites au sein de la cellule hôte. Les pharmacomodulations entreprises ont engendrés la découverte de composés plus actifs avec des valeurs d’IC50 égales à 0,8 et 3,4 µM respectivement
Intracellular developing parasites that belong to the apicomplexan phylum represent a great threat to both animal and human being health. Apicomplexan contains a genus of parasites called Eimeria. This genus is composed of seven species which cause avian coccidiosis such as E. tenella, the most virulent agent. Control of E. tenella is presently accomplished by a prophylaxis that uses vaccines and anticoccidial drugs. However, the rapid emergence of drug resisitant parasites coupled with the expense of most vaccines has led us to a search of new approaches to control coccidiosis via the synthesis of new compounds. In order to achieve that goal, collaboration between two laboratories has been established. Our strategy relies on the laboratories scientific knowledge in two complementary domains such as oraganic chemistry and parasitology. Our research is based on the effectiveness that synthesized compounds could have to inhibit parasites first steps of infection of the host cells. The screening of compounds has led us to the discovery of two lead compound inhibiting the invasion and development process of the parasites. Undertaken pharmacomodulations of these leads have allowed us to lower these concentrations values to 0,8 and 3,4 µM

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Cros, Julien. "OGG1 et NEIL1, de nouvelles cibles pour la lutte contre le cancer : recherche et caractérisation fonctionnelle et structurale d’inhibiteurs." Thesis, Orléans, 2021. https://theses.univ-orleans.fr/prive/accesESR/2021ORLE3145_va.pdf.

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Abstract:

L’ADN de tout organisme est continuellement endommagé par des agents physiques ou chimiques d’origines endogène ou exogène. Les dommages de l’ADN qui en résultent peuvent être à l’origine de l’apparition de mutations ou de mort cellulaire. Pour pallier à ces effets délétères, les organismes ont développé des systèmes de réparation de l’ADN. Le système de réparation par excision de base (BER) est la voie majeure de réparation des bases endommagées et est initié par des ADN glycosylases telles que hOGG1 et hNEIL1. Ces enzymes reconnaissent spécifiquement les bases lésées et les éliminent. Paradoxalement, les réparations initiées par ces protéines peuvent diminuer l’effet thérapeutique de certains traitements, notamment anti-cancéreux. En exploitant le principe de létalité synthétique, le ciblage thérapeutique de hOGG1 et hNEIL1 pourrait être pertinent pour lutter contre certains cancers, mais aussi contre des maladies neurodégénératives (Huntington) ou des processus inflammatoires pathologiques. Au travers du criblage « moyen débit » de banques de petites molécules naturelles ou synthétiques, mon travail de thèse a consisté en l’identification de nouveaux inhibiteurs sélectifs de hNEIL1 et hOGG1 et en la caractérisation de leur mode d’action par des études biochimiques et structurales. Si nous avons pu mettre en lumière des fonctions chimiques essentielles et quelques déterminants structuraux et fonctionnels relatifs à leurs modes d’action, de nombreuses zones d’ombre demeurent et mériterons d’être explorés dans le futur. En revanche, l’utilisation d’un homologue archéen de hOGG1, l’enzyme PabAGOG, a permis de proposer un modèle tridimensionnel cohérent d’un complexe hOGG1/inhibiteur pour l’un des meilleurs inhibiteurs que nous avons identifiés. Finalement, ces nouveaux composés comptent parmi les meilleurs inhibiteurs de hOGG1 et hNEIL1 identifiés à ce jour et certains d’entre eux devraient bénéficier d’une évaluation in cellulo
DNA is continuously damaged by physical or chemical agents from endogenous or exogenous sources. These damages can induce mutation or cell death. To counteract these deleterious effects, organisms have developed DNA repair systems. The Base Excision Repair System (BER) is the major pathway to repair damaged bases. It is initiated by DNA Glycosylases such as hNEIL1 and hOGG1 which specifically recognize and remove oxidized bases. However, in some situation like conventional cancer treatment, the repairs initiated by these enzymes can lead to therapeutic resistance. Therefore, based on the synthetic lethality concept, selective inhibition of hNEIL1 and hOGG1 could be relevant in some pathologic contexts like cancer, but also against neurodegenerative diseases (Huntington) or pathological inflammatory processes. This thesis work aimed to identify new selective inhibitors of hNEIL1 and hOGG1 with a "medium throughput" screening of natural or synthetic small molecule libraries, and to characterize their mode of action through biochemical and structural studies. Although we identified some essentials chemicals functions and some leads to understand the action mode of our inhibitors, many areas remains unveiled and deserve to be explored in the future. However, the use of an archaeal homologue of hOGG1, the enzyme PabAGOG, has allowed us to propose a coherent three-dimensional model of an hOGG1/inhibitor complex for one of the best inhibitors we have identified. Finally, these new inhibitors are among the best inhibitors of hOGG1 and hNEIL1 identified to date and some of them will undergo in cellulo evaluation

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Fitoussi, Mathieu. "Intérêt des inhibiteurs de l' enzyme de conversion de l' angiotensine et des antagonistes des récepteurs AT1 de l' angiotensine dans le traitement de l' insuffisance cardiaque." Paris 5, 1995. http://www.theses.fr/1995PA05P214.

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Hoch, Lucile. "Etudes moléculaires et pharmacologiques du récepteur Smoothened." Thesis, Paris 11, 2015. http://www.theses.fr/2015PA11T042/document.

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Abstract:

La voie de signalisation Hedgehog (Hh) joue un rôle fondamental au cours du développement embryonnaire et participe au maintien des niches neurogéniques dans le cerveau adulte (Ruat et al, 2015). Son activation requiert la liaison d’un peptide Hh sur le récepteur Patched (Ptc) qui réprime l’activité constitutive de Smoothened (Smo), un membre de la classe F des récepteurs couplés aux protéines G (Wang et al, 2013). La dérégulation de la voie Hh peut conduire au développement de tumeurs, comme les médulloblastomes ou les carcinomes basocellulaires. Des agonistes et des antagonistes de Smo ont été développés et présentent un intérêt thérapeutique dans le traitement des maladies neurodégénératives et des tumeurs Hh-dépendantes, respectivement (Ruat and Hoch, 2015). Les études cristallographiques du Smo humain (hSmo) complexé à différents ligands ont identifié deux types d’antagonistes ; ceux se liant principalement aux boucles extracellulaires de Smo (site 1, comme le LY2940680) et ceux se liant plus profondément dans la cavité transmembranaire (site 2, comme le SANT 1) (Ruat et al, 2014).Mes travaux de thèse ont conduit à la caractérisation du composé acylguanidine MRT-92, l’un des plus puissants antagonistes du récepteur Smo. Le MRT-92 inhibe différentes réponses biologiques induites par l’activation de la voie Hh, notamment la prolifération des précurseurs des cellules granulaires du cervelet de rat avec une affinité sub-nanomolaire. Le MRT 92 bloque aussi la translocation de Smo dans le cil primaire induite par l’activation de la voie Hh. Le développement de sa forme tritiée [3H]MRT-92 (Kd = 0.3 nM pour hSmo) a permis d’étudier les interactions des modulateurs avec le récepteur hSmo et d’analyser les résistances associées aux mutations de hSmo. Le composé MRT 92 se lie au récepteur hSmoD473H, résistant au traitement par le GDC-0449, suggérant son intérêt thérapeutique pour le traitement de cette résistance. Par une modélisation moléculaire et une étude de mutagenèse, j’ai identifié que le MRT-92 se lie sur un nouveau site au niveau du domaine transmembranaire de Smo qui se superpose aux sites 1 et 2 préalablement décrits. Le développement d’un modèle pharmacophorique des agonistes de Smo a permis le criblage virtuel d’une banque de molécules et l’identification du composé quinolone GSA-10. Le GSA-10 stimule une voie Hh non canonique qui permet la différenciation des cellules mésenchymateuses C3H10T1/2 en ostéoblastes en se fixant au récepteur Smo. Contrairement au composé SAG, agoniste de référence de Smo, le GSA-10 n’induit pas de prolifération cellulaire des cellules granulaires du cervelet de rat et n’augmente pas la transcription des gènes cibles de la voie tels que Gli1 et Ptc. Le GSA-10 est la première molécule agoniste de Smo qui n’induit pas sa translocation au cil primaire. De plus, nous avons observé que la forskoline, un inhibiteur de l’adénylate cyclase, est un régulateur positif et négatif de la différenciation ostéoblastique induite par le GSA-10 et le SAG, respectivement. Le GSA-10 nous a également permis de mettre en évidence deux formes conformationnelles de Smo, SmoSAG et SmoGSA-10, pouvant être discriminées pharmacologiquement par les antagonistes de Smo. Plusieurs antagonistes comme le GDC-0449, le CUR61414, la cyclopamine ou le MRT-92 perdent leur sensibilité pour inhiber le SmoGSA-10. L’ensemble de ce travail a conduit au développement de nouveaux outils pharmacologiques qui pourraient permettre d’améliorer notre compréhension des mécanismes impliqués dans la modulation de l’activité du récepteur Smo et permettre le développement de nouvelles molécules en clinique pour le traitement des tumeurs du cerveau Hh-dépendantes
The Hedgehog (Hh) signaling pathway plays a critical role during embryogenesis and participates to the maintenance of neural stem cells in the adult brain (Ruat et al, 2015). Its activation requires the binding of a Hh peptide to its receptor Patched (Ptc) which represses the constitutive activity of Smoothened (Smo), a member of class F G-protein-coupled receptors (Wang et al, 2013). Deregulation of the Hh pathway is associated with the development of tumors, such as medulloblastoma and basal cell carcinoma. Agonists and antagonists of Smo are candidates for the treatment of degenerative diseases and Hh-linked tumors, respectively (Ruat and Hoch, 2015). Crystallization studies of human Smo (hSmo) bound to different ligands have identified two types of 7 transmembrane-directed antagonists : those binding mostly to extracellular loops (site 1, e.g., LY2940680) and those penetrating deeply in the 7-transmembrane cavity (site 2, e.g., SANT-1) (Ruat et al, 2014).The present work allowed the caracterization of the acylguanidine MRT-92, one of the most potent Smo antagonist. MRT-92 inhibits Smo induced-responses in different cell-based assays, notably the proliferation of rat cerebellar granule cell with nanomolar potency. We developed its tritiated derivative [3H]MRT-92 (Kd= 0.3 nM for hSmo) for creating a comprehensive framework for the interaction of small molecule modulators with hSmo and for understanding chemoresistance linked to hSmo mutations. MRT-92 binds to the mutated hSmoD473H receptor resistant to GDC-0449 treatment, suggesting its therapeutic interest for the treatment of this resistance. Guided by molecular docking and site-directed mutagenesis data, we demonstrated the existence of a third type of Smo antagonists represented by MRT 92 that simultaneously recognized and occupied both sites 1 and 2.The development of a pharmacophoric model of Smo agonists allowed a virtual screening strategy to identify the GSA-10 compound, a quinolinecarboxamide. GSA-10 stimulates a non-canonical Hh pathway allowing C3H10T1/2 mesenchymal cells differentiation into osteoblasts. However, GSA-10 does not induce Gli-dependent reporter gene transcription nor rat cerebellar granule cell proliferation, and it does not regulate the subcellular localization of Smo at the primary cilium. Moreover, we observed that forskolin, a known activator of adenylate cyclase, is a positive and negative regulator of GSA-10 and SAG-mediated cell differentiation, respectively. Our data provide also evidences for two different conformational forms of Smo named SmoSAG and SmoGSA-10, which can be pharmacologically discriminate by Smo antagonists. Different antagonists including GDC 0449, CUR61414, Cyclopamine and MRT-92 loose their sensibility to inhibit SmoGSA-10.The present work allowed the identification of new pharmacological tools which should be useful for understanding the mechanisms underlying the resistance of Smo inhibitors in cancer cells and may help to design new therapies with improved pharmacological properties for treating Hh-linked brain tumors

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Gras-Champel, Valérie. "Evaluation des facteurs de risque des accidents hémorragiques et de leur évitabilité chez les patients sous antivitamine K (AVK)." Amiens, 2009. http://www.theses.fr/2009AMIED002.

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Abstract:

Les antivitamines K (AVK) sont des médicaments très largement utilisés en thérapeutique. Il est estimé qu’environ 900 000 patients français sont traités par AVK chaque année. Le bénéfice du traitement anticoagulant est bien établi dans des pathologies cardiovasculaires variées. D’après une étude menée par le réseau des Centres Régionaux de Pharmacovigilance en 1998, les hémorragies sous AVK représentent la première cause d’hospitalisation pour accident iatrogène médicamenteux en France. Toutes les recommandations émises jusqu’à présent n’ont pas réussi à modifier de façon significative la pratique clinique puisqu’en 2007 une nouvelle étude confirme que les hémorragies sous AVK sont toujours au premier rang du risque iatrogène médicamenteux. En fait, la difficulté du maniement des AVK est liée à une marge thérapeutique étroite et à une grande variabilité inter et intra-individuelle de la réponse au traitement. De multiples facteurs de risques interviennent dans cette variabilité. Nous avons essayé d’identifier ceux d’entre eux qui étaient les plus impliqués dans le risque hémorragique. C’est en premier lieu l’INR qui apparaît essentiel dans la surveillance du traitement AVK. Son maintien dans la zone thérapeutique, son suivi régulier et une réactivité du praticien face à un surdosage doivent être des objectifs prioritaires. Les autres facteurs mis en avant sont, l’alcoolisme chronique, un traumatisme ou des lésions digestives récentes, une indication hors AMM, une co-médication (paracétamol, allopurinol ou héparine), une erreur de prise par le patient, une inobservance thérapeutique. Certaines des observations suggèrent qu’une partie des hémorragies pourrait être liée à des pratiques d’anticoagulation insuffisamment rigoureuse. Partant de ce constat factuel que l’anticoagulation n’est pas optimale pour une proportion importante de patients, nous avons tenté en adaptant une échelle déjà publiée de quantifier la part attribuée à l’évitabilité des accidents hémorragiques de notre travail. Cette évaluation montre que 50 à 65% d’entre eux auraient pu être totalement ou potentiellement évités par une prise en charge plus rigoureuse du traitement anticoagulant. Face à ce constat, il est impératif que tous les professionnels de santé concernés (médecins, pharmaciens, biologistes, infirmières…) se mobilisent et fassent évoluer leurs pratiques, notamment en termes de coordination des soins, d’information et d’éducation thérapeutique du patient. Dans ce sens, la communication visant à sensibiliser l’ensemble des professionnels de santé doit continuer. Quoi qu’il en soit, et en attendant d’autres solutions, la mise sous AVK doit faire l’objet d’une réflexion au cas par cas, tenant compte à la fois du bénéfice attendu (indication) et du risque potentiel (complications hémorragiques avant tout), lui-même lié au terrain (co-morbidités), aux affections intercurrentes et aux patients (co-médications, compliance), mais aussi d’un suivi biologique attentif et d’une réévaluation au moins annuelle du rapport bénéfice/risque. C’est à ces conditions que la qualité de la prise en charge des patients devrait pouvoir s’améliorer et permettre la diminution du risque iatrogène lié aux AVK
Oral anticoagulant treatment (OAT) is widely used in therapy. Each year, nearly 900 000 french patients are estimated to be treated by OAT. The benefit of the anticoagulant treatment is well-established in various cardiovascular diseases. In France, the national network of regional pharmacovigilance centres ran a study during 1998. The bleeding complications due to the OAT were the first cause of adverse drug reactions leading to a hospitalization. Until now, all the recommendations have not succeeded in significantly change the clinical practice. A new study led during 2007 confirmed that bleeding complications due to OAT were always at the first line of the adverse drug reaction risk. The OAT is difficult to handle. In fact, this is due to a narrow therapeutic safety zone and to a great variability of the response to the treatment in individuals and between individuals. Many risk factors play a part in this variability. In this study, we tried to identify the risk factors mostly involved in the bleeding complications. First, the INR was essential for the monitoring of the OAT. The targets must be first and foremost the keeping in the therapeutic range, the regular follow up and the physician adaptability to an overdosage. The other factors put forward were: a chronic alcoholism, a trauma, recent digestive lesions, a prescription not complying with the marketing authorization application, a simultaneous treatment (acetaminophen, allopurinol or heparin), a patient mistake in taking the drug and a lack of therapeutic compliance. Some of the cases suggested that a part of the bleeding could be linked to insufficiently rigorous anticoagulation practices. The findings were that anticoagulation was not optimal in a great proportion of patients. From this point, by adapting a published score, it was attempted to quantify the part allocated to the preventability of bleeding events of this study. This assessment showed that 50 to 65% of these events could be totally avoided or potentially avoided by a more rigorous management of the OAT. Faced with such findings, all the concerned health providers (physicians, chemists, biologists, nurses …) must be aware to the issue. They must make their practices evolved mainly in terms of health care coordination, in terms of information and in terms of therapeutic education of the patient. In this way, the communication aiming at making all the health providers aware of the issue should be carried on. Anyway, until we get other solutions, the OAT must be thoughtfully prescribed individually. The expected benefit (indication) and the potential risk (bleeding events above all) itself linked to the background (co morbidity), to the concomitant ailments and to the patients (concomitant treatments, compliance), must be taken into account. The biological follow up must be close. The benefit /risk ratio must be assessed no less than annually. Under these conditions, the quality of the patient management should improve and lead to the decreasing of the iatrogenic risk due to OAT

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Charton, Julie. "Conception, synthèse et évaluation de composés benzimidazoliques à visée thérapeutique." Lille 2, 2004. http://www.theses.fr/2004LIL2S020.

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Abstract:

Le travail présenté dans ce mémoire porte sur la conception et la synthèse de composés benzimidazoliques à visée thérapeutique. La première partie s’est articulée autour de la synthèse et de l’évaluation d’activateurs d’une protéine kinase, adénosine monophosphate dépendante, l’AMP-kinase ou AMPK, cible thérapeutique potentielle dans le traitement du diabète de type 2. La synthèse des composés a été menée autour d’un activateur, de structure benzimidazolique, identifié lors d’un criblage systématique. La séparation des enantiomères d’un des composés actifs obtenu au cours de cette étude a été réalisée par Chromatographie Liquide Haute Performance sur une phase stationnaire chirale. La seconde partie a consisté en la conception et la synthèse de chimiothèques focalisées autour d’une structure de type benzimidazole dite « privilégiée ». Un premier travail nous a amené à appliquer le principe de la chimie combinatoire pour préparer une chimiothèque d’acides hydroxamiques, afin d’identifier les inhibiteurs potentiels d’une métalloprotéase à zinc, l’aminopeptidase N. Le second travail, articulé autour de la synthèse d’antagonistes d’un des récepteurs de l’hormone de mélano-concentration, nouvelle cible thérapeutique potentielle dans le traitement de l’obésité, nous a conduit à préparer une chimiothèque de 240 composés benzimidazoliques permettant ainsi un criblage du récepteur dans un test d’inhibition de la liaison du ligand à son récepteur.

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Pierre, François. "Rôle et fonction des gènes YPO2857 et YPO2371 dans la peste." Thesis, Lille 2, 2012. http://www.theses.fr/2012LIL2S024.

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Abstract:

La peste est une maladie mortelle qui survient le plus souvent après piqûre de puce et, plus rarement après l’inhalation d’aérosol contaminé. Elle est causée par la bactérie Yersinia pestis. Cette dernière a récemment émergé de Yersinia pseudotuberculosis, une bactérie responsable le plus souvent d’une maladie bénigne du tube digestif. Y. pestis et Y. pseutoduberculosis produisent des protéines homologues à Ivy (inhibitor of vertebrate lysozyme) et MliC (membrane bound lysozyme inhibitor of C-type lysozyme) d’Escherichia coli. Il avait été suggéré qu’Ivy et MliC jouent un rôle dans la virulence bactérienne. Mais, aucune preuve expérimentale n’étayait cette hypothèse avant notre travail. De plus, des études suggéraient que le rôle physiologique d’Ivy serait de contrôler les autolysines bactériennes plutôt que de protéger la bactérie contre le lysozyme rencontré au cours d’une infection. Nous avons montré que Y. pestis (mais pas Y. pseudotuberculosis) nécessite Ivy pour résister au lysozyme et aux polynucléaires neutrophiles lors de l’infection. Par contre, Y. pestis n’a pas besoin de MliC pour produire la peste. Nos conclusions sont fondées sur des données provenant (1) de la quantification de la survie bactérienne au contact au contact du lysozyme, du sérum et de phagocytes ; (2) de la mesure de virulence (en utilisant différent modèles de peste, plusieurs souches et espèce de rongeurs et, des souris neutropéniques ou KO pour la production de lysozyme) ; (3) de l’évaluation de la réponse inflammatoire chez la souris. Notre travail a démontré l’importance des inhibiteurs de lysozyme dans la virulence bactérienne et suggère que l’acquisition verticale d’ivy par Y. pestis a joué un rôle important dans l’émergence de la peste
Yersinia pestis (the agent of flea-borne plague) harbors genes encoding putative homologues of the respectively periplasmic and membrane-bound vertebrate lysozyme inhibitors Ivy and MliC. Both inhibitors are thought to control autolytic activity rather than protect bacteria against lysozyme molecules encountered during host infection. Here, we show that MliC was not required for lysozyme resistance and the development of plague. In contrast, Y. pestis required Ivy for lysozyme resistance when grown at 37°C but not at 21°C (the optimal temperature for flea-borne transmission). Deletion of ivy did not affect Y. pestis’ ability to grow in human serum or resist human macrophages but it did decrease resistance to human polymorphonuclear neutrophils. Y. pestis lacking Ivy had attenuated virulence in rodent models of bubonic and pneumonic plague but was fully virulent in lysozyme M-deficient or GR1+ cell-depleted mice. Our results demonstrate the importance of vertebrate lysozyme inhibitors in bacterial pathogenesis and support a scenario in which Y. pestis deposited in the dermis produces Ivy to inhibit the lysozyme released by polymorphonuclear neutrophils. Our results also suggest that once Y. pestis is in the flea gut, it resists lysozyme via an Ivy-independent mechanism. Lastly, Yersinia pseudotuberculosis (Y. pestis’ recent ancestor, which causes self-limited bowel disease in humans) did not require Ivy for lysozyme resistance or virulence. Thus, our study also shows that a gene which is not necessary for the virulence of an ancestral bacterium may become essential in the emergence of a new pathogen

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Joha, Mohamad Sami. "Mécanismes de résistance aux inhibiteurs de tyrosine kinase sur le modèle de leucémie myéloïde chronique." Lille 2, 2009. http://www.theses.fr/2009LIL2S042.

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Abstract:

La leucémie myéloïde chronique (LMC) est une transformation maligne d’une cellule souche hématopoïétique, caractérisée par une anomalie génétique acquise : le chromosome Philadelphie (Ph), résultant de la translocation réciproque t(9 ;22)(q34 ;q11), et son équivalent moléculaire, l’oncogène BCR-ABL. La protéine BCR-ABL présente une activité tyrosine kinase constitutive qui agit sur les voies de survie et de prolifération. La progression de la maladie vers la phase accélérée puis blastique s’accompagne d’anomalies génétiques additionnelles marqueurs d’une instabilité génomique croissante. La responsabilité de BCR-ABL dans la genèse de cette instabilité génomique est fortement suspectée. Dérivé de 2-phénylaminopyrimidines, l’Imatinib inhibe l’activité tyrosine kinase de BCR-ABL ainsi que la prolifération de lignées cellulaires BCR-ABL positives et induit leur apoptose. Les échecs du traitement par l’Imatinib sont dus à des mécanismes de résistance qui ne sont pas tous entièrement caractérisés. Des nouveaux inhibiteurs de tyrosine kinases (ITKs) ou des associations avec l’Imatinib ont été développés afin de la surmonter. Cependant, une résistance croisée et multiple demeure difficile à traiter et nécessite une meilleure compréhension des mécanismes de résistance afin d’éradiquer la maladie dans un avenir proche. Les travaux réalisés au cours de cette thèse ont montré que la présence de microremaniements génétiques (traduisant une instabilité) au sein de progéniteurs leucémiques CD34+ de patients traités par l’Imatinib corrélait avec la perte de réponse à l’Imatinib chez les patients diagnostiqués en phase chronique, suggérant que la résistance à l’Imatinib pourrait être corrélée aux altérations génétiques survenant précocement dans la physiopathologie de la maladie. 113 gènes affectés ont été détectés dont certains sont localisés dans des régions connues pour être hypervariables (CNV) suggérant un rôle de ces régions dans le développement de la LMC ou la résistance à l’Imatinib. Nous avons mis en évidence la présence d’une anomalie acquise récurrente dans telle région localisée en 8p23. 1 qui groupe les gènes de la famille de la Défensine B. Ce microremaniement n’est pas lié à la résistance à ii l’Imatinib car il est retrouvé dans les populations cellulaires CD34+ Ph+ et Ph-, il peut donc être considéré comme un marqueur de l'instabilité d’une sous-population cellulaire clonale de CD34+ présentant une grande prédisposition à acquérir des altérations génétiques additionnelles, comme la fusion BCR-ABL. Nos études montrent que des altérations secondaires pourraient être le support d’une résistance à l’Imatinib. La résistance à l’Imatinib peut alors être liée à la dérégulation des voies de signalisation en amont ou en aval de BCR-ABL, affectant ainsi la prolifération, la survie, la différenciation et l’intégrité du génome. Il semble donc que le traitement par l’Imatinib seul ne soit pas suffisant pour éradiquer la maladie. Pour cette raison, de nouvelles molécules à associer avec l’Imatinib sont actuellement en cours d’évaluation. Parmi ces associations, les inhibiteurs de la voie Ras ont montré une certaine efficacité dans la restauration de l’activité proapoptotique de l’Imatinib. Il était donc intéressant de chercher une cible thérapeutique régulant négativement cette voie afin de surmonter cette résistance. GILZ (Glucocorticoid-Induced Leucine Zipper) inhibe la voie Ras/Raf par une interaction directe. Il inhibe également la voie NFκB dont certains antagonistes sont capables de surmonter la résistance à l’Imatinib. Nos résultats montrent, pour la première fois, que l’expression de GILZ est diminuée dans des lignées humaines ou murines exprimant BCR-ABL sensibles ou résistantes aux ITKs ainsi que dans les cellules dormantes résiduelles isolées d’un modèle cellulaire murin développé au laboratoire. L’expression forcée de GILZ dans ces lignées résistantes restaure la sensibilité à l’Imatinib. Nos résultats montrent que le mécanisme passe par une inhibition de la voie mTORC2/AktSer473. Elle est due à une interaction directe de GILZ avec mTORC2 permettant l’activation de FoxO3a et l’induction de l’expression de la protéine proapoptotique Bim. Dans ce système, GILZ augmente l’expression de Bim tandis qu’Imatinib, par ses effets "Off-target", diminue celle de Mcl-1 inversant ainsi le rapport des membres antiapoptotiques/proapoptotiques de la famille Bcl-2 et entrainant l’apoptose. Le traitement séquentiel par les glucocorticoïdes puis l’Imatinib induit l’apoptose de cellules souches de patients résistants par le même mécanisme, suggérant que la modulation de l’expression de GILZ pourrait iii représenter une nouvelle stratégie thérapeutique pour cibler les cellules leucémiques résistantes ou résiduelles. La régulation de la voie mTORC2/AktSer473 semble être d’une importance cruciale dans la survie des cellules BCR-ABL+, ainsi que dans la résistance aux ITKs. Parmi les gènes méthylés dans notre étude, on retrouve un gène impliqué dans la régulation de cette voie et qui code pour la phosphatase PHLPP (PH domain and Leucine rich repeat Protein Phosphatase) dont l’activité est de déphosphoryler la sérine 473 d’Akt favorisant son inactivation. Nos résultats montrent que la réexpression du variant 1 de cette phosphatase (PHLPP1) dans notre modèle murin de résistance restaure la sensibilité à l’Imatinib et que la répression de celui-ci n'est pas exclusivement due à l'activité tyrosine kinase de BCR-ABL, mais aussi à des modifications épigénétiques. Nos études ont permis d’identifier des gènes impliqués dans la résistance des LMC aux ITKs et de proposer de nouveaux traitements pour surmonter cette résistance en inhibant la voie AktSer473.

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Azzouz, Brahim. "Association entre antihypertenseurs et psoriasis : lien de causalité, mécanisme d’action ? Psoriasis après exposition aux antagonistes des récepteurs à l’angiotensineII : un effet indésirable sous-estimé Psoriasis après exposition aux inhibiteurs de l’enzyme de conversion : donnéesde pharmacovigilance française et de la littérature Inhibiteurs calciques et psoriasis: enquête de pharmacovigilance, données de la littérature." Thesis, Reims, 2020. http://www.theses.fr/2020REIMP201.

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Abstract:

Le psoriasis est une dermatose érythrosquameuse pouvant détériorer la qualité de vie des patients. Plusieurs cas ou séries de psoriasis iatrogène avec les antagonistes des récepteurs à l’angiotensine II (ARA-II), les inhibiteurs de l'enzyme de conversion (IEC) et les inhibiteurs calciques (ICa) ont été publiés. Les données des études épidémiologiques évaluant l’association entre l’exposition à ces médicaments et le risque de psoriasis sont contradictoires. Le risque de psoriasis est uniquement mentionné dans les Résumés des Caractéristiques des Produits (RCP) de certaines molécules de la classe des IEC. Nous avons réalisé une étude cas/non-cas à partir de la Base Nationale de Pharmacovigilance (BNPV) afin d’évaluer si la mention du risque de psoriasis dans les RCP des ARA-II, des IEC et des ICa serait pertinente. Nous avons mis en évidence une disproportionnalité statistiquement significative pour chacune de ces classes, ce qui constitue un potentiel signal de pharmacovigilance. Le délai de survenue des manifestations psoriasiques est plus long avec les ICa qu’avec les ARA-II et les IEC, l’évolution des lésions psoriasiques est le plus souvent favorable à l’arrêt des médicaments. La prise concomitante de bétabloquant ne semble pas être un sur-risque de psoriasis. Les mécanismes physiopathologiques du psoriasis avec ces médicaments sont complexes, partiellement élucidés. Le risque de psoriasis sous ARA-II, IEC et ICa est méconnu de la communauté médicale. Les professionnels de santé doivent être sensibilisés à ce risque. Il nous parait judicieux que le risque de psoriasis soit mentionné dans les RCP des ARA-II, des IEC et des ICa
Psoriasis is an erythrosquamous dermatosis that can have a considerable negative impact on patient’s quality of life. Several case reports and case series of psoriasis related to angiotensin receptor blockers (ARBs), angiotensin converting enzyme inhibitors (ACEIs) and calcium channel blockers (CCBs) were published. Data from epidemiological studies regarding the association between these drugs and psoriasis risk were conflicting. Psoriasis risk is mentioned in the Summary of Product Characteristics (SmPC) of some, but not all ACEIs. We analyzed data from the French Pharmacovigilance Database (FPVD) in order to judge whether it is necessary to include a mention of psoriasis in the Summary of SmPCs of ARBs, ACEIs and CCBs. We highlighted a statistically significant disproportionality which constitutes a potential safety signal. Time to onset of psoriatic manifestations seems much longer with CCBs than ARBs and ACEIs, outcome of psoriatic lesions is most often favorable with drug discontinuation. Concomitant betablocker intake does not seem to be at higher risk of psoriasis. Physiopathological mechanism of psoriasis related to these drugs is complex, not yet elucidated. The risk of psoriasis with ARBs, ACEIs and CCBs is largely unknown to the medical community. Healthcare workers should be sensitized to this risk. Given the suggestive reports in the FPVD and in the literature, psoriasis risk should be mentioned in the SMPCs of ARBs, ACEIs and CCBs

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Guedj, Fayçal. "Etude des altérations phénotypiques induites par la modification du dosage génique de DYRK1A et développement de stragégies thérapeutiques." Paris 7, 2010. http://www.theses.fr/2010PA077222.

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Abstract:

Le syndrome de Down (SD) est l'anomalie génétique la plus fréquente avec une prévalence de 1/800 à la naissance. Ce syndrome est caractérisé par une série de signes phénotypiques de pénétrance variable incluant la morphogenèse du cerveau, la morphologie de la face et des membres, la brachycéphalie, des anomalies cardiaques congénitales, des malformations du tube digestif, une apparition précoce des signes histopathologiques de la maladie d'Alzheimer et un retard mental constant et d'intensité variable (QI=20-55). L'établissement des cartes de corrélation génotypes/phénotype chez des patients atteints de trisomies 21 partielles a permis d'identifier la région DCR-1 qui s'étend sur 2,5 Mb entre les gènes CBR1 et ERG et qui est associée à l'apparition de 13 signes cliniques du SD dont le retard mental suggérant un rôle important des gènes de cette région dans le SD. Le gène DYRK1A, localisé dans cette région, constitue un bon gène candidat dans l'apparition du retard mental associé au SD. Ce gène code pour une sérine/thréonine kinase à double spécificité capable de s'auto-activer par autophosphorylation et de phosphoryler un grand nombre de substrats protéiques incluant des facteurs de transcription, des facteurs d'épissage, des protéines importantes pour l'activité synaptique ainsi que d'autres protéines impliquées dans diverses fonctions biologiques et conditions pathologiques. Afin de comprendre le rôle de DYRK1A dans le développement normal et analyser l'effet de l'altération de son dosage génique sur la morphogenèse du cerveau et la plasticité synaptique, trois modèles murins présentant trois copies (hYac-TgDYRKIA, mBac-TgDyrklA) et une copie (DyrklA+/-) fonctionnelles de ce gène ont été utilisés. Dans la première partie du travail, une nouvelle lignée transgénique portant trois copies du gène DyrklA de la souris sous le contrôle de son promoteur endogène (modèle mBac-TgDyrklA) a été construite au laboratoire. L'analyse de l'expression du transcrit et de la protéine DyrklA dans les différentes parties du cerveau des souris mBac-TgDyrklA, hYac-TgDYRKIA et DyrklA+/- a révélé une expression dosage-génique dépendante de DyrklA validant ainsi l'utilisation de ces trois modèles dans les études du retard mental associé à la trisomie et à la monosomie libres ou partielles du chromosome 21. La deuxième partie était consacrée à l'étude de l'effet de la modification du dosage génique de DyrklA sur la morphogenèse du cerveau et les densités neuronale et gliale dans le cortex somatosensoriel (CSS) et le noyau thalamique VPL/VPM en combinant les techniques d'imagerie in vivo, de stéréologie et de western blotting. Les résultats obtenus montrent que la modification du dosage génique de DyrklA induit des altérations hétérogènes de la morphogenèse du cerveau (augmentation du volume chez les souris hYac-TgDYRKIA et mBac-TgDyrkla avec un effet plus important dans le thalamus/hypothalamus) et des densités neuronales (diminution de la densité neuronale dans le CSS et une augmentation dans le VPL/VPM) dans les différentes régions analysées. Ces altérations morphologiques sont associées à une altération de l'expression de la protéine MBP (marqueur de la morphologie neuronale), de la phosphorylation de FKHR (important dans la régulation du cycle cellulaire) et de la voie des MAP kinases suggérant un rôle crucial de ttyrklA dans la régulation de la balance apoptose/prolifération mais aussi de la croissance axonale et la myélinisation de ces axones. Les études comportementales effectuées dans la troisième partie de ce travail ont mis en évidence une altération de la mémoire spatiale dépendante de l'hippocampe, de la mémoire à long terme et de la fonction motrice chez les trois lignées de souris étudiées. Ces altérations comportementales sont accompagnées d'une diminution de l'activation de la CamKII dans l'hippocampe des souris hYac-TgDyrkl A adultes mais aussi d'une augmentation de la phosphorylation de AKT dans cette même région au stade postnatal P21. L'ensemble de ces résultats est en faveur d'un rôle important de DyrklA dans la régulation de la synaptogenèse et de la transmission synaptique. Enfin, une stratégie corrective des phénotypes observés chez les souris hYac-TgDYRKIA et Ts65Dn (trisomie 16 partielle de 104 gènes incluant DyrklA) a été développée en utilisant deux types de traitements à base d'EGCG auparavant identifié comme un inhibiteur spécifique de l'activité kinase de DyrklA. Les analyses morphométriques, comportementales et moléculaires ont montré que l'EGCG est capable de corriger de manière importante les différentes altérations observées chez les souris hYac-TgDYRKIA et Ts65Dn nous permettant de proposer le gène DyrklA comme cible potentielle d'une démarche correctrice : cette stratégie thérapeutique pourrait être utilisée dans le traitement du retard mental associé au SD
Down syndrome (DS) is the most common genetic disorder affecting 1/800 newborns. It is characterized by several phenotypic signs with a variable penetrance including alteration of the brain morphogenesis, morphology of the face and members, brachycephaly, congenital heart diseases, digestive tract malformations, an early onset of Alzheimer disease histopathological signs and a constant mental retardation with variable severity (IQ = 20-55). Construction of genotype/phenotype correlation maps in patients with partial trisomy 21 enabled the identification of DCR-1, a region of 2. 5 Mb between CBR1 and ERG associated with the apparition of 13 clinical signs of DS among which mental retardation suggesting an important role of the genes contained in this region for the DS phenotype. DYRK1A gene, localized in this region, is a good candidate gene for mental retardation associated with DS. It encodes a dual-specificity serine/threonine kinase activated via autophosphorylation on the tyrosine 321 residu and phosphorylates a myriad of protein substrates including transcription and splicing factors, proteins playing important roles in synaptic plasticity and others proteins implicated in a variety of biological functions and pathological conditions. To understand DYRK1A role in the normal development and analyze the effects of its gene dosage alteration on the brain morphogenesis and synaptic plasticity, two mouse models bearing three copies (hYac-TgDYRKl A, mBac-TgDyrkl A) and an haploinsufficient model with only one copy of this gene (Dyrkl A+/-) have been used in this study. In the first part of this work, a new transgenic mouse line containing three copies of the mouse DyrklA gene with its endogenous promoter (mBac-TgDyrklA model) has been constructed in our laboratory. DyrklA transcript and protein expression analysis in the different brain parts of adult mBac-TgDyrklA, hYac-TgDYRKIA and DyrklA+A mice revealed a gene-dosage dependent expression of DyrklA validating the use of these models in the studies of mental retardation associated with free or partial trisomy and monosomy of the chromosome 21. The seconds part of our study focused on the DyrklA gene dosage alteration impact on brain morphogenesis and neuronal and glial cell density in the somatosensory cortex (SSC) and the ventrobasal (VPL/VPM) thalamic nucleus by combining in vivo imaging, seterology and western blotting techniques. Results obtained showed that DyrklA gène dosage modification induces heterogeneous alterations of the brain morphogenesis (increased brain volume in hYac-TgDYRKIA and mBac-TgDyrklA with a more pronounced action on the thalamus/hypothalamus region) and neuronal densities (a decreased neuronal density in the SSC and an increased density in the VPL/VPM) in the different investigated régions. These morphological changes are associated with MBP (neuronal morphology marker) overproduction, FKHR (important for the cell cycle regulation) hyperphosphorylation and MAPKs signaling pathway dysregulation suggesting an important role of DyrklA in the apoptosis/proliferation balance regulation but also in the axonal growth and myelinization. Behavioral studies performed in the third part of our work highlighted an impairment of the hippocampus-dependent spatial memory, the long-term memory and the motor function in the three studied mouse lines. These behavioral phenotypes are linked to a decreased activation of CamKII observed in the hippocampus of hYac-TgDYRKIA mice, but also to an increased AKT phosphorylation in this region at postnatal day P21. Taken together, these results indicate clearly that DyrklA plays a major role in synaptogenesis and synaptic transmission regulation. Finally, a corrective strategy of the phenotypes observed in hYac-TgDYRKIA and Ts65Dn (Partial MM 16 trisomy with 104 triplicated genes including DyrklA) mice has been developed ,using two EGCG (identified as spécifie DyrklA inhibitor in vitro) based diets. Morphometric, behavioral and molecular analysis showed that EGCG is able to strongly correct the phenotypic alterations observed in hYac-TgDYRKIA and Ts6Dn mice allowing us to propose the DyrklA gene as a potential target for a therapeutic approach of the DS associated mental retardation

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Corera, Amadou Tidjane. "Effets des ions sur la capture de [3H]dopamine et sur la liaison des substrats et des inhibiteurs au transporteur neuronal de la dopamine marqué avec le [3H]WIN 35428 ou le [3H]Mazindol." Rouen, 2000. http://www.theses.fr/2000ROUES008.

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Abstract:

En vue de comprendre les rapports étroits qui existent entre les gradients électrochimiques transmembranaires et le processus de capture, nous avons étudié le rôle du KC1 dans la NA +-dépendance de la capture de la [3H]dopamine (DA) réalisée par des synaptosomes issus du striatum de rat. Nous avons ainsi montré que la capture est optimale lorsque les concentrations de Na + et de K + physiologiques extracellulaires sont reproduites. Leurs modifications provoquent un blocage de la capture de [3H]DA résultant de la perturbation de l'activité de l'ATPase Na +-K +-dépendante qui ne peut plus assurer le maintien des gradients ioniques transmembranaires. Nous avons ensuite tenté de caractériser la nature des interactions entre les ions (Na +, K +, Ca 2 +,) et la liaison au transporteur neuronal de la DA (TDA) d'un analogue de la cocaïne, le [3H]WIN 35428. Les résultats révèlent l'existence au sein du TDA de 2 sites par lesquels les ions régulent la liaison du [3H]WIN 35428 : un site externe et un site interne situés respectivement à l'extérieur et à l'intérieur du domaine de liaison du radioligand. Les sites externe et interne seraient liés par des interactions allostériques négatives alors que le site externe nous avons comparé l'effet des ions sur les liaisons d'inhibiteurs et de substrats au TDA marqué avec le [3H]Mazindol. Les résultats obtenus permettent de proposer un modèle du TDA qui comporterait des sites de liaison différents mais qui se recouvriraient partiellement. En extrapolant ces données à la capture de la DA, nous avons émis un modèle de fonctionnement du TDA dans le processus de capture dans les conditions physiologiques.

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Dissertations / Theses on the topic 'Aminopeptidases – antagonistes et inhibiteurs'

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