Academic literature on the topic 'Aminopeptidases – antagonistes et inhibiteurs'

Le traitement de la crise migraineuse repose actuellement sur les anti-inflammatoires non stéroïdiens (AINS) et les triptans, qui sont les deux seules classes pharmacologiques dont l’efficacité thérapeutique a été démontrée avec un haut niveau de preuve dans cette indication. Ces deux classes pharmacologiques ne couvrent cependant pas tous les besoins thérapeutiques des migraineux. Deux programmes de développement clinique méritent une attention particulière et concernent les antagonistes des récepteurs du CGRP et les agonistes du récepteur 5-HT1F de la sérotonine. L’approche prophylactique est un élément capital du traitement de la migraine épisodique qui concerne plus d’un tiers des migraineux. Actuellement, cette approche prophylactique est possible au travers de plusieurs traitements pharmacologiques ayant un bon niveau de preuve dans cette indication et appartenant à diverses classes pharmacologiques : bêta-bloquants (propranolol, métoprolol), antiépileptiques (divalproate de sodium, topiramate, gabapentine), inhibiteurs calciques (flunarizine), antidépresseurs tricycliques et antagonistes sérotoninergiques (pizotifène). L’approche prophylactique peut également faire appel en seconde intention à des molécules mises plus récemment sur le marché mais dont le niveau de preuve dans cette indication est plus faible : vérapamil, venlafaxine, lisinopril et candesartan. Enfin, il convient de ne pas oublier l’utilisation d’anciens traitements (oxétorone) toujours en usage dans certains pays (comme la France). Devant le manque de spécificité, de nouveaux médicaments émergent, les plus importants étant les anticorps monoclonaux antagonistes du Calcitonin Gene-Related Peptide (CGRP), mais de nombreux autres sont en phase I ou II de recherche tels que les modulateurs de la fonction endothéliale, les antagonistes orexinergiques, l’ocytocine, les inhibiteurs non sélectifs des phosphodiestérases, les modulateurs des jonctions communicantes. Enfin, un futur plus lointain repose sur les neuropeptides hypothalamiques (Pituitary Adenylate Cyclase-Activating Polypeptide, PACAP ; neuropeptide Y, NPY), les inhibiteurs de synthèse de l’oxyde nitrique (NO) et les canaux ioniques activés par l’acidité extracellulaire (ASIC, Acid-Sensing Ion Channels).

Les antagonistes de la vitamine K (AVK) ont été lespiliers du traitement anticoagulant depuis plus d’un demisiècle.Les AVK sont principalement utilisés pour la préventiondes Accidents Vasculaires Cérébraux et des embolies systémiques chez les patients atteints de fibrillation atriale(FA). L’avènement des Anticoagulants Oraux Directs (AOD)avec quatre nouveaux agents - les inhibiteurs directs dufacteur Xa (apixaban, edoxaban et rivaroxaban) et l’inhibiteur direct de la thrombine (dabigatran) ont été approuvéspour cette indication.Compte-tenu des nombreuses limites des AVK, tellesque les interférences alimentaires, les interactions médicamenteuses et les préoccupations concernant les complications hémorragiques, l’attractivité des AOD est fondéeet de plus en plus reconnue

Les points de contrôle du système immunitaire sont des systèmes moléculaires qui complètent les processus déclenchés par la reconnaissance antigénique en contrôlant l’inhibition ou l’activation des lymphocytes et des cellules myéloïdes, notamment celle des lymphocytes T régulateurs (Treg), permettant ainsi de combiner réponses immunes et maintien de la tolérance au soi. En cancérologie, l’inhibition de points de contrôle inhibiteurs vise à amplifier les réponses immunitaires existantes dirigées contre les tumeurs. Parmi ces points de contrôle inhibiteurs, dont des antagonistes sont en utilisation clinique, se trouvent CTLA-4 (cytolytic T-lymphocyte-associated antigen 4 ou CD152), PD-1 (programmed cell death 1, ou CD279), PD-L1 (programmed cell death-ligand 1, ou CD274), LAG-3 (Lymphocyte-activation gene 3, ou CD223), TIM3 (T-cell immunoglobulin and mucin-domain containing-3), TIGIT (T cell immunoreceptor with Ig and ITIM domains), VISTA (V-domain Ig suppressor of T cell activation), ou B7/H3 (ou CD276). La stimulation de points de contrôle activateurs tels que les molécules de co-activation CD28, CD137 (aussi appelé 4-1BB), OX40 [aussi appelé tumor necrosis factor receptor superfamily, member 4 (TNFRSF4)], GITR (Glucocorticoid-induced tumor necrosis factor receptor family-related protein) ou CD40, est également testée en cancérologie, le plus souvent en combinaison avec un antagoniste de point de contrôle inhibiteur. Dans les maladies auto-immunes et inflammatoires, des antagonistes de points de contrôle activateurs (CD28, CD40) et des agonistes de points de contrôle inhibiteurs (LAG-3) sont également à l’essai. Dans cette revue, nous mettons l’accent sur certains modulateurs de points de contrôle pour lesquels le mécanisme d’action a été particulièrement étudié. Cette description ne pouvant être exhaustive, nous avons regroupé dans le Tableau I l’ensemble des anticorps monoclonaux (AcM) ou protéines recombinantes en usage clinique à notre connaissance, modulant l’action d’un point de contrôle du système immunitaire.

Contrairement aux autres produits addictogènes qui agissent via des cibles spécifiques (récepteurs opiacés pour l’héroïne, récepteur cannabinoïde CB1 pour le cannabis, récepteurs nicotiniques pour le tabac, transporteurs des monoamines pour la cocaïne), l’alcool ne se fixe pas sur une cible en particulier, mais intervient à de multiples niveaux, enzymatiques, réceptoriels, etc., dans le cerveau. Certes, comme celle des autres produits addictogènes, la prise d’alcool entraîne une activation du système de récompense (reward system), et donc la libération de dopamine au niveau des projections de la voie méso-cortico-limbique, mais elle provoque aussi une facilitation de la neurotransmission GABAergique inhibitrice et, au contraire, une diminution de la neurotransmisision glutamatergique excitatrice, via des modulations allostériques des récepteurs impliqués (GABA A d’une part, NMDA d’autre part). La répétition de ces actions du fait de la prise répétée d’éthanol déclenche des processus adaptatifs de telle sorte que l’efficacité de la neurotransmission GABAergique diminue progressivement au profit d’une facilitation de la neurotransmission glutamatergique, conduisant à une hyperexcitabilité neuronale, caractéristique de l’alcoolo-dépendance. Si le dysfonctionnement cérébral qui en résulte est bien en cause dans le syndrôme de manque, dès lors son inversion par des agents facilitateurs du GABA ou inhibiteurs du glutamate pourrait ouvrir la voie à des traitements réellement efficaces de l’alcoolo-dépendance. De fait, le baclofène et le gamma-hydroxy-butyrate, en activant directement les récepteurs GABA B, voire des modulateurs allostériques positifs de ces récepteurs, ont d’ores et déjà fait la preuve de leur capacité à réduire l’alcoolo-dépendance [1]. Par ailleurs, des antagonistes des récepteurs NMDA et des modulateurs inhibiteurs de la neurotransmission glutamatergique (dont l’acamprosate) sont également efficaces [2]. Enfin, d’autres composés qui conduisent aussi à une diminution de l’hyperexcitabilité neuronale, mais en bloquant des canaux calciques voltage-dépendants comme la gabapentine et la prégabaline, pourraient renouveler l’arsenal pharmacologique du traitement de l’alcoolo-dépendance [3].

The challenges of drug discovery can be addressed through a multidisciplinary approach that integrates various scientific disciplines. Analytical chemistry has contributed significantly to advances in research and development of new drugs, with mass spectrometry-based techniques being widely applied in this context. The primary objective of this thesis is to support a drug discovery program targeting the endoplasmic reticulum aminopeptidases, ERAP1 and ERAP2, by developing and applying advanced analytical methods, specifically spectrometry imaging (MSI) and liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MS/MS). ERAPs are involved in processing and presenting immunogenic antigens to T cells, and their inhibition is considered an innovative therapeutic strategy for autoimmune and oncological diseases. Three research projects targeted the validation of preclinical models and the characterization of candidate compounds to evaluate their pharmacodynamic (PD) and pharmacokinetic (PK) profiles.In the first project, matrix-assisted laser desorption/ionization (MALDI)-MSI was used to study biochemical changes in a preclinical model of ankylosing spondylitis, the HLA-B27 transgenic rat.Spatially resolved, untargeted metabolomic and lipidomic analyses revealed candidate biomarkers of two deregulated mechanisms linked to gut inflammation, intestinal permeability and immune infiltration. These findings validate the relevance of this model for testing the efficacy of ERAPs inhibitors. In the second project, a quantitative LC-MS/MS method was developed to measure the ERAP1-dependent tumour antigen GSW11, serving as a biomarker of efficacy for an ERAP1 inhibitor, and further validating the compound’s mechanism of action in vitro. Despite method optimization, the endogenous peptide could not be detected, highlighting the technical challenges associated with peptide extraction and analysis from complex biological samples. This led to the identification offactors affecting peptide recovery and detection, offering insights for future method development in peptidomics for pharmacodynamic studies. The third project focused on the biodistribution and metabolism of a candidate ERAP2 inhibitor in vivo. Quantitative MSI was successfully employed to measure the compound's concentration invarious organs, revealing its potential therapeutic applicability. Biotransformation products of the compound were detected and investigated both in vitro and in vivo. These findings pave the way for further characterization of the compound, supporting decision-making processes in future stages of drug development.This research highlights the importance of continuously evaluating preclinical models and compounds to support informed decision-making in drug discovery, ultimately reducing the risk of failures in advanced stages. Future research will focus on integrating these approaches to provide a comprehensive characterization of ERAP inhibitors, combining quantitative tissue analysis with biomarker modulation in preclinical models. The ultimate goal is to identify ERAPs inhibitors with a favourable therapeutic profile for clinical development in autoimmune and oncological indications
Les défis de la découverte de médicaments peuvent être abordés par une approche multidisciplinaire qui intègre diverses disciplines scientifiques. La chimie analytique a contribué de manière significative aux avancées dans la recherche et le développement de nouveaux médicaments, les techniques basées sur la spectrométrie de masse étant largement appliquées dans ce contexte.L'objectif principal de cette thèse est de soutenir un programme de découverte de médicaments ciblant les aminopeptidases du réticulum endoplasmique, ERAP1 et ERAP2, en développant et en appliquant des méthodes analytiques avancées, spécifiquement l'imagerie par spectrométrie (MSI) et la spectrométrie de masse en tandem avec chromatographie liquide (LC-MS/MS). Les ERAPs sont impliquées dans le traitement et la présentation d'antigènes immunogènes aux lymphocytes T, et leur inhibition est considérée comme une stratégie thérapeutique innovante pour les maladies autoimmunes et oncologiques. Trois projets de recherche ont ciblé la validation des modèles précliniques et la caractérisation des composés candidats pour évaluer leurs profils pharmacodynamiques (PD) et pharmacocinétiques (PK). Dans le premier projet, l’imagerie par spectrométrie de masse à désorption-ionisation laser assistée par matrice a été utilisée pour étudier les changements biochimiques dans un modèle préclinique de spondylarthrite ankylosante, le rat transgénique HLA-B27. Des analyses métabolomiques et lipidomiques untargeted résolues spatialement ont révélé des biomarqueurs candidats de deux mécanismes dérégulés liés à l'inflammation intestinale, la perméabilité intestinale et l'infiltration immunitaire. Ces résultats valident la pertinence de ce modèle pour tester l'efficacité des inhibiteurs des ERAP.Dans le deuxième projet, une méthode LC-MS/MS quantitative a été développée pour mesurer l'antigène tumoral dépendant de l'ERAP1, GSW11, servant de biomarqueur d'efficacité pour un inhibiteur de l'ERAP1, et validant davantage le mécanisme d'action du composé in vitro. Malgré l'optimisation de la méthode, le peptide endogène n'a pas pu être détecté, soulignant les défistechniques associés à l'extraction et à l'analyse de peptides à partir d'échantillons biologiques complexes. Cela a conduit à l'identification de facteurs affectant la récupération et la détection des peptides, offrant des perspectives pour le développement futur de méthodes en peptidomique pour des études pharmacodynamiques.Le troisième projet a porté sur la biodistribution et le métabolisme d'un inhibiteur candidat del'ERAP2 in vivo. La MSI quantitative a été employée avec succès pour mesurer la concentration du composé dans divers organes, révélant son applicabilité thérapeutique potentielle. Des produits de biotransformation du composé ont été détectés et étudiés à la fois in vitro et in vivo. Ces résultats ouvrent la voie à une caractérisation plus approfondie du composé, soutenant les processus de prise de décision dans les étapes futures du développement de médicaments.Cette recherche souligne l'importance d'évaluer en permanence les modèles précliniques et les composés pour soutenir une prise de décision éclairée dans la découverte de médicaments, réduisant ainsi le risque d'échecs dans les phases avancées. Les recherches futures se concentreront sur l'intégration de ces approches pour fournir une caractérisation complète des inhibiteurs de l'ERAPs,en combinant l'analyse tissulaire quantitative avec la modulation des biomarqueurs dans des modèles précliniques. L'objectif ultime est d'identifier des inhibiteurs des ERAP ayant un profil thérapeutique favorable pour le développement clinique dans les indications auto-immunes et oncologiques

Eimeria tenella est l’un des parasites apicomplexes à l’origine de la coccidiose aviaire, l’une des plus importantes maladies parasitaires de l’industrie avicole. Dans le but de caractériser les facteurs de pathogénicité d’E. tenella, nous nous sommes intéressés aux protéases et plus particulièrement aux aminopeptidases N. Nous avons caractérisé Et-ApN1 et identifié Et-ApN3, deux aminopeptidases d’E. tenella. Et-ApN1 présente de fortes homologies avec PfA-M1, l’homologue de Plasmodium falciparum, au niveau des séquences, des structures, des propriétés biochimiques, du clivage et de la localisation. L’ensemble des résultats suggèrent qu’Et-ApN1 est impliquée dans le développement parasitaire. Pour évaluer son rôle de cible thérapeutique potentielle, nous avons criblé une bibliothèque de molécules et identifié une nouvelle molécule le C36, qui inhibe directement l’activité d’Et-ApN1 et entraîne un arrêt du développement d’E. tenella in vitro. Cet effet inhibiteur est également observé chez Toxoplasma gondii et P. falciparum. Dans le but d’améliorer la solubilité du C36 pour de futures études in vivo, le C36 a été pharmaco-modulé. Les perspectives de ces travaux viseront à prouver l’implication directe des Et-ApN dans le développement d’E. tenella
Eimeria tenella is an apicomplexan parasite causing avian coccidiosis, one of the most important parasitic diseases in world poultry industry. To identify E. tenella pathogenesis factors, we were interested in proteases and more specifically in aminopeptidases N. We characterized Et-ApN1 and identified Et-ApN3, two aminopeptidases of E. tenella. We revealed strong homologies in the sequences, structures, biochemical properties, cleavage patterns and localization between Et-ApN1 and PfA-M1, the homologue from Plasmodium falciparum. Taken together, our results suggest that, as PfA-M1, Et-ApN1 is involved in parasite development and could be considered as a therapeutic target. To confirm this hypothesis, we screened a small molecule library and identified the compound C36. This molecule not only inhibits Et-ApN1 but also the in vitro development of E. tenella. This inhibition of parasite development was also observed for Toxoplasma gondii and P. falciparum. In perspectives, a pharmaco-modulation approach will be performed to improve chemical properties of the compound C36. New molecules derived from C36 will then be tested in vivo. Future studies will aim to prove the direct implication of Et-ApN in E. tenella development

Les maladies ischémiques, causées principalement par des thromboses artérielles, sont la première cause de mortalité dans les pays développés. Les antiagrégants plaquettaires sont des médicaments destinés à empêcher la formation des thromboses artérielles. Une stratégie thérapeutique consiste à inhiber les récepteurs responsables de l’activation des plaquettes : le récepteur P2Y12 et le récepteur P2Y1. Pour obtenir une réponse optimale d'agrégation des plaquettes, l'activation synergique des deux récepteurs P2Y1 et P2Y12 a été démontrée. Le travail décrit dans ce mémoire concerne la synthèse de ligands bivalents, c’est à dire le développement d’une seule entité chimique qui combine deux antagonistes ciblant ces deux récepteurs qui pourrait ainsi présenter un intérêt en assurant un effet antiplaquettaire efficace tout en préservant une capacité hémostatique suffisante. Après avoir développé une série d’analogues du cangrelor présentant une chaîne thioalkylée en position C-2 par substitution de 2-halogénonucléosides, les tests d’agrégation plaquettaire ont révélé que ces composés ont un effet inhibiteur sur l’agrégation induite par l’ADP, néanmoins uniquement à forte concentration. La préparation d’un précurseur du MRS2279 qui a pour but de cibler sélectivement le récepteur P2Y1, nous a permis d’envisager la synthèse d’hétérodimères susceptibles d’inhiber les deux récepteurs P2Y12 et P2Y1. En combinant trois « parties » : une adénosine pour la partie OUEST, un bras espaceur (cystamine, di-, tri- et tétraéthylène glycol) et un précurseur du MRS2279 pour la partie EST, nous avons effectué la synthèse de plusieurs ligands bivalents originaux non phosphorylés. Les tests d’agrégation plaquettaire des dimères ainsi obtenus montrent que ceux-ci n’ont pas un effet inhibiteur assez puissant pour pouvoir poursuivre les tests biologiques. Cependant la phosphorylation des 2 pharmacophores semble une solution prometteuse quant à l’activité des ligands bivalents
Ischemic diseases due to arterial thrombosis are the leading cause of death in developed countries. Antiplatelet agents are drugs which prevent the formation of arterial thrombosis. A therapeutic strategy consists in inhibiting the receptors responsible for platelet activation: the P2Y12 and P2Y1 receptor. For an optimal response of platelet aggregation, synergistic activation of both receptors has been demonstrated. The work described in this thesis deals with the synthesis of bivalent ligands, i. E the development of a single chemical entity that combines two antagonists targeting these receptors. This strategy may be conjugating an effective antiplatelet effect along with a sufficient hemostatic capacity. A serie of analogues of cangrelor, which are thioalkylated at C-2 position, were synthesized from 2-halogenonucleosides. The platelet aggregation tests on those compounds revealed an inhibitory effect on aggregation induced by ADP, but only in high concentrations. The preparation of a precursor of MRS2279 (a selective P2Y1 antagonist), allowed us to focus on the synthesis of heterodimers which may inhibit both receptors P2Y1 and P2Y12. Toward this goal, we combined three parts: an adenosine for the Western part, a linker (cystamine, di-, tri-and tetraethylene glycol) and a precursor of MRS2279 for the Eastern part. We performed the synthesis of several original bivalent ligands which are no phosphorylated. The dimers platelet aggregation tests show that they have no sufficient inhibitory effect to continue the biological tests. However, the phosphorylation of the two pharmacophores appears a promising approach for the activity of those bivalent ligands

Les aminopeptidases de la famille M1 sont des protéases qui catalysent l’hydrolyse d’une liaison peptidique en position N-terminale. Ce sont des métalloprotéases avec un ion zinc dans leur site actif conservé dans tous les membres de cette famille de protéine. Ces enzymes sont impliqués dans de nombreux processus physiologiques normaux, mais également dans des désordres métaboliques, tels que la progression tumorale, des maladies auto-immunes, ainsi que dans des infections virales, bactériennes et parasitaires. Pour ces raisons, ces aminopeptidases sont considérées comme des cibles thérapeutiques potentielles pour traiter ou diagnostiquer diverses maladies. En 2006, le laboratoire a découvert le châssis moléculaire de type 3-amino-2-benzosubérone inhibant puissamment et sélectivement et un des membres de cette famille d’aminopeptidases, à savoir l’APN. La conception et la synthèse des dérivés de ce châssis moléculaire comme inhibiteurs potentiels et sélectifs pour cinq autres membres de la famille M1 (APN, ERAP1/2, IRAP et PfA-M1) est au cœur de ce travail. Des études pharmacologiques, pharmacocinétiques jusqu’aux essais précliniques ont été menées et leurs résultats seront présentés dans le cas de l’inhibition de PfA-M1
Aminopeptidases of the M1 family are proteases that catalyze the hydrolysis of a peptide bond in the N-terminal position. These are metalloproteases with a zinc ion in their active site conserved in all members of this protein family. These enzymes are involved in many normal physiological processes, but also in metabolic disorders, such as tumor progression, autoimmune diseases, as well as in viral, bacterial and parasitic infections. For these reasons, these aminopeptidases are considered potential therapeutic targets for treating or diagnosing various diseases. In 2006, the laboratory discovered the powerful and selectively inhibiting 3-amino-2-benzosuberone molecular chassis and one of the members of this family of aminopeptidases, namely the APN. The design and synthesis of derivatives of this molecular chassis as potential and selective inhibitors for five other members of the M1 family (APN, ERAP1 / 2, IRAP and PfA-M1) is at the heart of this work. Pharmacological, pharmacokinetic and preclinical studies have been conducted and their results will be presented in the case of PfA-M1 inhibition

Les phosphatases CDC25 sont des éléments-clé de la régulation du cycle cellulaire, activant les complexes CDK-cyclines. Ces enzymes sont sur-exprimées dans de nombreux cancers ce qui en fait des cibles intéressantes pour le développement de nouveaux agents anti-tumoraux. Le programme de conception d'inhibiteurs des CDC25 s'est développé sur un crible 777 silico/in vitro identifiant deux séries chimiques. La première, comportant un motif [l]pyrindine, est cytotoxique sur lignées tumorales, mais inactive sur lignée saine. La seconde, autour d'un noyau thiazolopyrimidine, inhibe l'activité de CDC25 et s'avère cytotoxique sur lignées tumorales. L'inhibiteur le plus puissant cible CDC25 sur un test plus spécifique. Un crible à moyen débit a été réalisé sur une librairie de nouveaux composés possédant le noyau thiazolopyrimidine et préparée par chimie clic. Une collection de dimères avec un motif thiazolidinone a été synthétisée et inhibe l'activité des phosphatases CDC25 et PTP1B
The development of CDC25 phosphatase inhibitors is an interesting approach towards new anti-tumour agents. CDC25 play key roles in cell cycle regulation and are over-expressed in numerous cancers. In order to identify promising inhibitors, we conducted in silico/in vitro screening which led to the discovery of potent molecules. [Ijpyrindine derivatives provided antiproliferative activities against cancerous cell lines but none towards a normal cell type. Structural modifications on the thiazolopyrimidine core, led to compounds which inhibit CDC25 activity and display cytotoxic activities against tumor cells. The most efficient inhibitor targets CDC25B in cells. To improve the activity of this series, novel derivatives were rapidly identified, following parallel "click" synthesis in solution and in situ screening for CDC25 inhibition. Finally, a series of dimers was designed from the thiazolopyrimidine core and evaluated for their inhibitory activity against a panel of phosphatases

L'objectif principal de cette étude consistait à identifier et à caractériser des inhibiteurs de l'activité enzymatique des Nucléosides Triphosphates Diphosphohydrolases (NTPDases) de la membrane cytoplasmique, soient les NTPDase 1, 2, 3 et 8. Ainsi, dans un premier temps, nous avons caractérisé l'inhibition de certains antagonistes des récepteurs P2 sur les NTPDases. Puis, nous avons produit et testé des inhibiteurs spécifiques de ces enzymes, tels des anticorps monoclonaux. Nos résultats nous permettent de conclure que certains antagonistes des récepteurs P2 tels la suramine, le NF279, le réactif bleu-2 sont aussi des inhibiteurs non sélectifs de l'activité enzymatique des formes humaines et murines des NTPDasel, 2, 3 et 8. Parmi les antagonistes testés, le plus puissant s'est avéré être le NF279. Soulignons cependant, qu'il suffit d'une modification chimique de certains de ces antagonistes pour obtenir une inhibition plus sélective de certaines NTPDases. Finalement nous avons produit et caractérisé un anticorps dirigé contre la NTPDase3 humaine qui inhibe spécifiquement cette enzyme. Ce nouvel anticorps monoclonal que nous avons produit au laboratoire représente actuellement le premier inhibiteur spécifique d'une NTPDase. Dans ce travail, nous avons également démontré que cet anticorps monoclonal est très efficace dans différents types d'expérimentation telles le Western blot, l'immunohistochimie et la cytométrie de flux. L'identification et la caractérisation de ces outils permettront une meilleure compréhension des mécanismes par lesquels les nucléotides extracellulaires, via l'activation des récepteurs P2, modulent des fonctions biologiques importantes telles le développement, la sécrétion endocrinienne, l'inflammation et les réactions immunitaires.

Parmi les modifications cardio-vasculaires engendrées par le vieillissement, la surcharge calcique vasculaire revêt une importance particulière. Le taux de calcium total aortique augmente en effet de 150 fois entre les âges de 10 et 90 ans chez l'Homme. Un modèle de surcharge calcique cardio-vasculaire a été développé chez le rat adulte jeune. Un jour de traltement par la vitamine D3 (1 x 300 000 UI/kg, par voie intramusculaire) et la nicotine (2 x 25 mg/kg, per os), suivi de 16 jours de repos (modèle 1/16), induit une surcharge calcique localisée au coeur, aux artères, et aux organes "cibles" de la vitamine D (reins et intestin). In vitro, dans l'aorte et le lit mésentérique, la surcharge calcique provoque une baisse de la réactivité à la noradrénaline et à la sérotonine, ainsi qu'une diminution de la fonction endothéliale. Ces modifications sont provoquées par la surcharge calcique, en présence d'un profil lipidique plasmatique normal. L'isradipine (inhibiteur de flux calciques, IFC) prévient la surcharge calcique dans le lit mésentérique et l'artère caudale. Les inhibiteurs de l'enzyme de conversion de l'angiotensine l (IEC : captopril et perindopril) et l'isradipine préviennent la perte de réactivité à la noradrénaline dans le lit mésentérique et l'aorte. Les IEC et IFC rétablissent la fonction endothéliale dans le lit mésentérique alors que seuls les IEC la rétablissent dans l'aorte. La réversibilité de la surcharge calcique dans les artères de résistance ainsi que la réversibilité des modificatlons de réactivité vasculaire induites par cette même surcharge, permettent d'entrevoir une stratégie thérapeutique des troubles cardio-vasculaires qu'elle engendre lors du vieillissement et de l'hypertension artérielle. Le modèle que nous décrivons dans cette thèse constituera un outil important dans la recherche de nouvelles substances médicamenteuses.

Des molécules originales, inhibiteurs des UDP-glucuronosyltransférases, ont été conçues, synthétisées puis testées. Ces composés constituent des sondes précieuses pour explorer l'organisation des sites actifs de ce groupe de protéines impliquées dans le métabolisme des xénobiotiques, dont les médicaments, et dans celui de substances endogènes (bilirubine, acides rétinoïques,. . . ). Les molécules synthétisées, dont la structure est analogue à celle du substrat, l'acide UDPglucuronique, permettent de caractériser plus spécifiquement le domaine peptidique interagissant avec ce co-facteur. Les principaux résultats obtenus à l'issue de ce travail sont regroupés en trois parties principales correspondant aux trois groupes d'inhibiteurs considérés. 1- Une série chimique composée d'une cinquantaine de molécules dérivées de l'uridine a été synthétisée en faisant varier la nature des motifs chimiques positionnés successivement sur le cycle pyrimidique de l'uracile ou sur les groupements 2', 3' et 5' du ribose. L'effet inhibiteur de chaque molécule a d'abord été estimé d'après la mesure des 150. Pour les inhibiteurs les plus performants, une analyse cinétique détaillée a été entreprise visant à déterminer la constante d'inhibition ainsi que le mode d'inhibition. 2- Ces inhibiteurs ont été comparés à ceux précédemment obtenus au laboratoire comme les acides arylalkyl carboxyliques (inhibiteurs compétitifs) et les N-acyl-phénylamino alcools reliés par un bras espaceur à l'uridine (analogues de l'état de transition). En particulier, ils ont été utilisés pour caractériser le site de fixation de la 4-méthylombelliférone de l'UDP-glucuronosyltransférase 1. 6 après mutation des acides aminés Histidine 54 et Arginine 52 (Mutants H54A, H54Q, R52A). 3- Une série d'inhibiteurs dérivés des acides triphénylalkyl carboxyliques comportant une fonction alcool terminale primaire à la place de l'acide carboxylique et différant par la longueur de la chaîne alkyle a été testée sur des microsomes hépatiques de rats. Ils exercent un effet inhibiteur puissant et compétitif vis-à-vis de la glucuronoconjugaison de la bilirubine. Les résultats obtenus permettent de mieux comprendre les bases moléculaires stériques et électroniques de l'interaction des substrats avec les UDP-glucuronosyltransférases
New UDP-glucuronosyltransferases inhibitors have been designed, synthetized and tested in order to probe the active sites of these proteins which are involved in the metabolism of xenobiotics, such as drugs, and endobiotics such as bilirubin, retinois acids,. . . The synthetized molecules, whose stucture is analogous to the donor substrate UDP-glucuronic acid, allowed us to characterize more specifically the peptidic domain interacting with this substrate. The maiIÏ results are gathered in three different parts, according to the group of inhibitors considered. 1- Uridine being the mother compound, a chemical series of about fifty molecules has been synthetized by varying the nature of the chemical groups placed successively on the base moiety or on the 2', 3' and 5' positions of the sugar. The inhibitory effect has frrst been estimated in terms of IC50. For the most powerful inhibitors, a detailed kinetic study gave us the inhibition constant and the type of inhibition. 2- These inhibitors have been compared to those previously obtained in the laboratory, such as arylalkyl carboxylic acids (competitive inhibitors) and N-acyl-phenylamino alcohols attached to a uridine molecule by a spacer (transition-state analogs). They have been used to characterize binding site of 4-methylumbelliferone of the UDP-glucuronosyl transferase 1. 6 after mutation of amino-acids His54 and Arg52 (mutants H54A, H54Q and R52A). 3- A series of inhibitors derived from triphenylalkyl carboxylic acids containing a primary alcohol group instead of the carboxylic acid group and with various carbon chain length has been tested on rats hepatic microsomes. They show a strong inhibitory effect on bilirubin glucuronidation. The results obtained allowed us to better understand the molecular and electronic basis of substrates interaction with UDP-glucuronosyl transferases