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Dissertationen zum Thema „Voies de sécrétion“
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Ehre, Camille. „Régulation de la sécrétion de mucus par les cellules mucosécrétrices des voies respiratoires“. Paris 6, 2004. http://www.theses.fr/2004PA066105.
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Chapeton, Montes Julie Andrea. „Caractérisation des voies alternatives de sécrétion des protéines S100A8/A9 et S100A12 par les neutrophiles humains“. Master's thesis, Université Laval, 2015. http://hdl.handle.net/20.500.11794/26156.
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Bien que les protéines S100A8/A9 et S100A12 exprimées par les neutrophiles ne possèdent pas de peptide signal, elles sont retrouvées dans le sérum de patients souffrant de diverses maladies inflammatoires. Les mécanismes de sécrétion de ces protéines demeurent peu connus ainsi que les agonistes qui favorisent leur sécrétion. Nous avons donc émis l´hypothèse que plusieurs voies de sécrétion alternative ainsi que plusieurs agonistes des neutrophiles pourraient participer à la libération de ces protéines. Dans un premier temps, nous avons étudié les stimuli capables de provoquer la sécrétion de la calprotectine et/ou de la S100A12. Dans une deuxième partie, nous nous sommes intéressés aux signaux et mécanismes alternatifs de sécrétion impliqués dans le relargage de ces protéines. L’ensemble de ces travaux montre la complexité des voies de sécrétion alternatives impliquées dans la sécrétion des protéines S100 et comment ces voies sont influencées par l’activation des neutrophiles par différents agonistes.Although S100A8/A9 (calprotectin) and S100A12 proteins expressed by neutrophils lack a signal peptide, they are found in the serum of patients with various inflammatory diseases. However, the mechanisms of secretion and the agonists that promote their secretion are still unknown. We hypothesized that several alternative secretory pathways and several agonists of neutrophils may participate in the release of S100A8/A9 and S100A12 protein. Initially, we studied the stimuli inducing the secretion of calprotectin and / or S100A12. In a second part, we were interested in signals and alternative mechanisms of secretion involved in the release of the calprotectin and S100A12. In conclusion, this study shows the complexity of alternative secretion pathways involved in S100 secretion and that these pathways are influenced by the activation of neutrophils by various agonists.
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Ruffin, Manon. „Caractérisation du canal chlorure ANO1 au niveau pulmonaire dans la mucoviscidose et étude de son implication dans la réparation de l’épithélium des voies aériennes“. Paris 6, 2013. http://www.theses.fr/2013PA066167.
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L’épithélium qui tapisse les voies aériennes des patients atteints de mucoviscidose (CF) est soumis à des infections récurrentes et une inflammation continue qui génèrent des lésions. La réparation de l’épithélium pulmonaire CF est anormale et provoque à terme un remodelage tissulaire qui affecte de façon irréversible la fonction pulmonaire des patients. Une des stratégies thérapeutiques proposées pour compenser la déficience du canal chlorure (Cl-) CFTR, muté dans la mucoviscidose, consiste à activer une voie alternative de sécrétion de Cl-. En 2008, ANO1 (anoctamine 1) a été identifiée comme protéine responsable de la conductance Cl- activée par le Ca2+ (CaCC). Cette protéine n’a pas été caractérisée au niveau pulmonaire dans le contexte CF mais a été impliquée dans les mécanismes de prolifération et de migration de cellules cancéreuses. Ces observations nous ont conduits à étudier l’implication d’ANO1 dans la réparation de l’épithélium bronchique CF. Nous avons dans un premier temps confirmé le retard de réparation épithéliale bronchique CF. Nous avons ensuite mis en évidence une diminution de la conductance Cl- d’ANO1 dans les cellules CF que nous avons reliée à une diminution de son expression. Enfin, nous avons montré que l’inhibition et la surexpression d’ANO1 induisent respectivement une diminution et une augmentation de la réparation épithéliale bronchique. L’ensemble de ces résultats suggère que la dérégulation d’ANO1 participe à la réparation anormale de l’épithélium des voies aériennes CF et d’autre part, que l’utilisation d’activateurs spécifiques d’ANO1 pourrait permettre d’améliorer la réparation du tissu pulmonaire chez les patients atteints de mucoviscidoseCystic fibrosis (CF) airway epithelium is constantly subjected to injury events due to chronic infection and inflammation. CF airway epithelium repair is abnormal and induces a tissue remodeling which contributes to the lung function decline of CF patients. To offset the CFTR chloride (Cl-) channel deficiency in CF, it has been proposed to activate an alternative route for Cl- secretion. In 2008, ANO1 (anoctamin 1) protein has been identified as responsible of Ca2+-activated Cl- conductance (CaCC). ANO1 has not been characterized in CF airways but recent evidence indicates a role for ANO1 in proliferation and migration of tumor cells. Thus, our main objectives were to study ANO1 in non-CF and CF airway and to assess ANO1 involvement in airway epithelial repair We first showed that cell proliferation and migration during repair are delayed in CF compared to non-CF bronchial epithelial cells. We then established that ANO1 Cl- channel activity was significantly decreased in CF compared to non-CF bronchial epithelial cells. To explain this decrease in CF cells, we compared ANO1 expression in non-CF and CF bronchial epithelial cell lines, primary cells, airways of wild-type and F508del mice and lung explants from non-CF and CF patients. In all these models, ANO1 expression was markedly lower in CF compared to non-CF. Finally, we established that ANO1 inhibition or overexpression were associated respectively with decreases and increases in cell proliferation and migration. Taken together, our results suggest that ANO1 dysregulation contributes to abnormal CF bronchial epithelial repair and secondly, that ANO1 correction may improve lung tissue repair in cystic fibrosis patients
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Bernard, Karen. „Identification et caractérisation de modulateurs de la sécrétion d'ions chlorure dans différents modèles cellulaires de l'épithélium bronchique humain“. Nice, 2004. http://www.theses.fr/2004NICE4022.
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Les voies aériennes transportent des sels et de l’eau pour hydrater le liquide de surface les recouvrant. Le rôle primordial du canal CFTR dans ces transports a été souligné par la découverte des mutations du gène CFTR associées à la mucoviscidose. La stimulation de canaux CL-alternatifs au CFTR, comme les CACC, est proposée dans la lutte contre cette pathologie. Mon travail de thèse a pour objectif l’étude des mécanismes de régulation de ces voies de sécrétion. Cette étude, utilisant différents modèles cellulaires de l’épithélium bronchique humain, montre le rôle clé des canaux K+SK4 dans l’établissement de la force électromotrice indispensable au processus de sécrétion. La localisation préférentielle de ces canaux à la membrane apicale des cellules caliciformes, sécrétrices de mucines, suggère une fonction spécifique de ces canaux au sein de cette population cellulaire. Le transport de NACL de l’épithélium des voies aériennes est sous le contrôle de nombreux facteurs, incluant les neurotransmetteurs et les nucléotides extracellulaires. Cette étude montre, pour la première fois, la stimulation de la sécrétion des ions CL- d’un modèle cellulaire de l’épithélium bronchique humain par les neuropeptides de la famille de l’arginine vasopressine. Les récepteurs V1 et V2 sont impliqués dans cette réponse et les effecteurs stimulés sont les canaux CFTR et SK4. La stimulation de l’activité de transporteurs basolatéraux est également supposée. Le travail souligne également l’importance du récepteur purinergique P2Y6, dont le ligand endogène est l’UDP, dans la stimulation de la sécrétion anionique de nos modèles d’étudeThe airway epithelium secretes salt and fluid to maintain the optimal of the airway surface liquid. The CFTR CL-channel role in these transports is crucial as underlined by the discovery of CFTR gene mutations, which are responsible for the cystic fibrosis disease. A therapeutic approach would be to stimulate the activity of alternatives CL-channels to overcome the loss of functional CFTR. The aim of this study was to clarify the mechanisms underlying the regulation of these secretion pathways. This work shows the key role of SK4 channels in modulating airway epithelium CL-secretion. Their opening at the basolateral membrane of epithelial cells creates the driving force for CL-transport. In addition, their preferential location at the apical site of the goblet cells, which secrete mucins, suggest a specific role of these channels in this cellular population subtype. NACL transport of airways is under control of various factors such as neurotransmitters and extracellular nucleotides. This study is the first to report the stimulation of CL-seretion of a human bronchial epithelial cell line by neuropeptides belonging the arginin vasopressin family. The induced response is mediated by V1 and V2 receptors to vasopressin and the stimulated effectors are CFTR and SK4 channels. The stimulation of basolateral transporter activity us also supposed. This work also underlines the importance of purinergic P2Y6 receptors in the stimulation of anion secretion of the cellular models used in this study
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Vilmont, Valérie. „Nouvelles voies de régulation des localisations intra- et extra-cellulaires de la protéine FADD“. Thesis, Paris 5, 2013. http://www.theses.fr/2013PA05T003.
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La protéine FADD (Fas associated death domain) est l’adaptateur clé de la voie de signalisation apoptotique dépendante des récepteurs de mort de la famille du TNF (tumor necrosis factor). Au cours des dix dernières années, il est apparu évident qu’au-delà de son rôle majeur dans la mort cellulaire, FADD est impliqué dans d’autres processus biologiques comme le développement embryonnaire, la réponse immunitaire innée ou encore la progression du cycle cellulaire. De même, il est devenu clair que la localisation subcellulaire de FADD est déterminante pour sa fonction. Identifier les voies de régulation de l’expression de la protéine est donc d’une importance capitale. En 2008, notre équipe a mis en évidence, dans un modèle murin de la thyroϊde, un nouveau mécanisme de régulation de l’expression de la protéine via la sécrétion. En parallèle, le laboratoire a rapporté que la présence de FADD dans le sérum de patients cancéreux était corrélée à l’agressivité des tumeurs et l’inflammation. (Tourneur et al, 2012). L’objectif de ce travail de thèse était de comprendre le mécanisme par lequel FADD était sécrété, et de déterminer, le cas échéant, les modalités de sa régulation. Un troisième objectif est apparu au cours de la thèse : identifier de nouveaux modes de régulation de l’expression de FADD. Au moyen d’une lignée modèle humaine, nous avons montré que l’expression de la protéine humaine pouvait être régulée via une voie non-conventionnelle de sécrétion, tout comme dans le modèle murin. En parallèle de la caractérisation de cette sécrétion, nous avons montré que celle-ci pouvait être régulée par la kinase anti-apoptotique CK2 (casein kinase 2). Enfin, nous montrons que la CK2 régule la localisation nucléaire de FADD via une phosphorylation dépendante de la sous-unité régulatrice de la kinase et que la CK2 pourrait interagir directement avec FADD. Ces résultats constituent la première démonstration de la régulation de FADD par sécrétion par des cellules humaines et les premiers à rapporter un nouveau mode de régulation de la localisation subcellulaire de FADD par la CK2. Les conséquences de ces résultats en regard des fonctions connus de FADD sont discutéesThe FADD protein (Fas associated death domain) is the key adaptor molecule of the apoptotic signaling pathway triggered by death receptors of the TNF (Tumor necrosis factor) superfamily. During the last decade, it became obvious that, in addition to its major role in cell death, the protein was also involved in other biological processes like the embryonic development, the immune response or even cell cycle progression. Evidence also showed that the protein sub-cellular localization was a key determinant to its functions. Therefore, the identification of underlying regulatory mechanisms dictating FADD expression was of significant importance. In 2008 our laboratory identified, in a thyroid murine model, a new mechanism controlling FADD expression, namely via secretion. We discovered that the loss of FADD expression from tumor cells, by secretion, could be correlated to cancer aggressiveness as well as inflammation (Tourneur 2012). The goal of this thesis work was to apprehend the mechanism by which FADD was secreted and determine, in that case, the modalities of this regulation. A third objective of this work was to identify new potential regulatory pathways of FADD expression. By means of a human cell line model, we showed that, similarly to the mouse model, the expression of human FADD could be regulated via unconventional secretion. In parallel to the characterization of the secretory process itself, we demonstrated that secretion could be negatively regulated by the anti-apoptotic kinase CK2 (casein kinase 2). Finally, we showed that CK2 could regulate FADD nuclear localization via a regulatory sub-unit-dependent phosphorylation and that FADD and CK2 could directly interact. These results are the first to demonstrate that human FADD expression could be regulated via secretion and that FADD sub-cellular localization could be modulated by CK2. The consequences of such regulation with regards to known FADD functions are discussed
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Senta, Helena. „L'étude des voies de sécrétion des cellules AtT20 l'association amylase d'orge et calreticuline dans le trafic distal de la glycoprotéine“. Thèse, Université de Sherbrooke, 2008. http://hdl.handle.net/11143/5834.
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Dans le but d'étudier les voies de la sécrétion on a exprimé l'amylase d'orge dans les cellules neuroendocrines AtT20. Nos recherches démontrent que le site consensus de glycosylation présent dans la structure primaire de l'amylase d'orge est fonctionnel et qu'il est facilement reconnu par la machinerie de glycosylation. Ceci est la première fois que la glycosylation de l'amylase d'orge est produite. Cette glycosylation est du type riche en mannose et l'enzyme glycosylée maintient son activité catalytique envers son substrat l'amidon. Efficacement exprimée, la glycoprotéine est sécrétée dans le milieu extracellulaire. Cependant, cette sécrétion ne répond pas à la stimulation par sécrétagogue ce qui prouve qu'elle est exclue de la voie de sécrétion régulée (grains de sécrétion matures). Curieusement, on observe une nette différence dans la proportion de la glycoforme de la protéine sécrétée et celle retenue dans la cellule. Par des études dynamiques (marquage radioactif) on a pu établir que la proportion de la glycoforme retrouvée dans la sécrétion ne dépasse pas 50 % de la protéine totale tandis qu'on retrouve une moyenne de 70 % de la glycoforme dans la cellule. On a aussi observé ce comportement de l'amylase dans les cellules pancréatiques AR42J et les cellules PC12 de la glande surrénale. Par pontage chimique on a confirmé l'association d'amylase d'orge avec une autre protéine et identifié cette dernière comme étant la calréticuline. Selon nos résultats, dans les cellules AtT20, la calréticuline normalement résidente du réticulum plasmique, se lie spécifiquement à l'amylase glycosylée et l'accompagne du réticulum endoplasmique jusqu'à un compartiment acide localisé dans une région distale du post trans -Golgi. De plus, en neutralisant le pH intracellulaire, on a démontré un changement de la distribution et de la proportion d'amylase glycosylée dans la cellule, indiquant que la dissociation du complexe calréticuline-amylase pourrait se faire suite à un changement de pH dans ce compartiment. Enfin, nos recherches mettent en évidence un changement draconien de la distribution de la calréticuline cellulaire suite à la transfection de l'amylase. Les résultats apportés démontrent que le trafic de l'amylase d'orge dans les cellules neuroendocrines pourrait se faire via la calréticuline par un mécanisme actif et hautement spécifique. Dans un deuxième volet, notre étude avait pour but d'étudier le rôle du domaine C des alpha-amylases. Ce domaine structural présent dans toutes les amylases et faiblement associé au baril catalytique n'a pas un rôle défini. Nous avons construit des mutants du domaine C manquant un ou plusieurs feuillets [beta]. Transfectées dans les cellules, ces protéines mutantes ne sont pas détectées ni dans le milieu de sécrétion ni dans la cellule. De plus, nous n'étions pas en mesure de détecter leur activité catalytique. Par contre, dans le système d'expression in vitro les mutant sont efficacement traduits et transloqués dans les microsomes. Malgré ceci, les protéines demeurent catalytiquement inactives comme observé in vivo . Selon nos résultats, le seul mutant détectable dans les cellules conserve trois des quatre feuillets [beta] faisant face au domaine A. Nos résultats démontrent qu'un domaine C entier d'une amylase de source différente pourrait remédier à l'expression de la protéine dans les cellules sans toutefois reconstituer l'activité enzymatique. Ceci nous indique qu'un domaine C intact est nécessaire pour le bon repliement de la protéine et aussi pour une activité enzymatique valide.
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Porras, Grégory. „Implication conditionnelle des récepteurs sérotoninergiques dans le contrôle de l'activité des voies dopaminergiques nigro-striée et méso-accumbale chez le rat“. Bordeaux 2, 2002. http://www.theses.fr/2002BOR20951.
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Lian, Yen-Ling. „Mechanisms of retrograde transport from Golgi apparatus to endoplasmic reticulum“. Electronic Thesis or Diss., Université Paris sciences et lettres, 2022. http://www.theses.fr/2022UPSLS067.
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Les cellules de mammifères sont caractérisées par la coexistence de plusieurs voies de transport, dont le transport antérograde et rétrograde. L'appareil de Golgi joue un rôle central dans le traitement et le tri des protéines dans le trafic bidirectionnel. Le système Retention Using Selective Hooks (RUSH) permet de synchroniser le transport des protéines depuis le RE et d'analyser systématiquement les voies sécrétoires. Grâce à l'interaction entre la streptavidine (Str) et un peptide de liaison à la streptavidine (Streptatividin Bioding Peptide, SBP), la protéine rapporteur peut être retenue dans le RE et ensuite libérée par l'ajout de biotine. Cependant, la biotine a une grande affinité pour la streptavidine, ce qui nuit à la réversibilité du test RUSH. Grâce aux ligands artificiels de la streptavidine (ALiS), le transport rétrograde du Golgi vers le RE peut être analysé à l'aide de l’outil RUSH après lab-vage de ALiS.Le test RUSH réversible a d'abord été mis en place pour étudier deux mécanismes de transport rétrograde depuis Golgi vers le RE, notamment la voie médiée par le motif KDEL et la voie de recyclage des enzymes de glycosylation. Str-KDEL ou Ii-Str ont été utilisées comme protéines d’ancrage et les enzymes golgiennes ManII* (Mannosidase II)-SBP-EGFP ou ST* (Sialyltransférase)-SBP-GFP ont été utilisées comme rapporteurs RUSH. Notre analyse cinétique a montré que le transport de l’appareil de Golgi vers le RE de ManII* et de ST* est plus lent par la voie de recyclage des enzymes de glycosylation que par la voie induite par le motif KDEL. Pour caractériser le rôle des facteurs de régulation dans le transport rétrograde médié par le motif KDEL, nous avons réalisé des expériences d'ARNi ciblant COG3 et Rab6. Nos données montrent que la déplétion de COG3 entraîne un retard dans le transport rétrograde de ManII* et ST* et que la déplétion de Rab6 entraîne une altération du trafic de ST*, ce qui est cohérent avec les études précédentes. Nos données confirment l’existence et la différence de cinétique du transport rétrograde Golgi-RE dépendant du motif KDEL et le recyclage des enzymes golgiennes de glycosylation.Enfin, nous avons synchronisé le transport des enzymes golgiennes de glycosylation endogènes en utilisant des approches de knock-in CRISPR-Cas9 ou CRISPaint et l’outil RUSH. La distribution subcellulaire de ManIIEN-SBP-mNeonGreen, GalNAc-T1EN-SBP-mNeonGreen et B4GalT1EN-SBP-EGFP a été détectée dans le Golgi, et nous avons pu synchroniser leur transport bidirectionnel grâce à l'expression de Str-KDELMammalian cells are characterized by the co-existence of multiple pathways, including anterograde and retrograde transport. The Golgi apparatus has a central role in processing and sorting cargos in the bi-directional trafficking. The Retention Using Selective Hooks (RUSH) system allows to synchronize the transport of cargos from the ER to downstream compartments and to systematically analyze the secretory routes. Owing to the interaction of streptavidin (Str) and streptavidin-binding peptide (SBP), the reporter protein can be retained in the ER and then released by the addition of biotin. However, biotin has a high affinity to streptavidin, impairing reversibility of the RUSH assay. With the Artificial Ligands of Streptavidin (ALiS), Golgi-to-ER retrograde transport can be monitored using RUSH upon their washout.The reversible RUSH assay was firstly set up to study two mechanisms of Golgi-to-ER retrograde transport, including the KDEL-mediated retrieval pathway and the glycosylation enzyme recycling pathway. Core streptavidin fused with the ER-retention signal (Str-KDEL), or with the invariant chain (Ii-Str) were used as hooks. Golgi-resident enzymes, ManII* (Mannosidase II)-SBP-EGFP or ST* (Sialyltransferase)-SBP-GFP served as Golgi-targeted RUSH reporters. Our kinetic analysis showed that the Golgi-to-ER transport of ManII* and ST* are both slower through the glycosylation enzyme recycling pathway than the KDEL-meditated retrieval pathway. To characterize the role of putative regulatory factors in KDEL-mediated retrograde transport, we performed RNAi experiments targeting to COG3 and Rab6. Our data showed that knockdown of COG3 resulted in delayed retrograde transport of ManII* and ST*, and the depletion of Rab6 led to impaired trafficking of ST*, consistent with the previous studies. Our data indicated that there are two distinct pathways regulating the retrograde transport of Golgi cargos, including KDEL-mediated ER retrieval and ER recycling of Golgi glycosylation enzymes.Lastly, we have generated endogenous tagged Golgi glycosylation enzymes using CRISPR-Cas9 or CRISPaint knock-in approaches and applied the reversible RUSH assays in the selected clones. The subcellular distribution of endogenous ManIIEN-SBP-mNeonGreen, GalNAc-T1EN-SBP-mNeonGreen and B4GalT1EN-SBP-EGFP were detected in Golgi, and we were able to synchronize the bidirectional transport through the expression of Str-KDEL
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Allombert, Julie. „Rôles des voies de signalisation à di-GMP cyclique chez Legionella pneumophila“. Thesis, Lyon 1, 2014. http://www.theses.fr/2014LYO10161/document.
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Legionella pneumophila est une bactérie aquatique qui prolifère en se répliquant à l’intérieur de cellules amibiennes. Elle peut persister dans ces environnements en vivant en communauté sous forme de biofilms. L’inhalation par l’Homme d’eau contaminée, vaporisée par les réseaux d’eau chaude ou les tours aéro‐réfrigérantes, peut mener à l’infection des macrophages pulmonaires qui se traduit par une grave pneumonie appelée légionellose. Le di‐GMP cyclique (diGMPc) est impliqué, chez diverses espèces bactériennes, dans la transition entre les modes de vie mobiles et sessiles, et chez certains pathogènes, dans la régulation de la virulence. Mon travail de thèse vise à démontrer l’implication des voies de signalisation à diGMPc dans le contrôle de la virulence et de la formation de biofilms par L. pneumophila. Cette implication a été étudiée grâce à l’inactivation systématique de chacun des gènes codant les protéines du métabolisme du diGMPc chez la souche L. pneumophila Lens. Notre étude a révélé que trois de ces protéines, Lpl0780, Lpl0922 et Lpl1118, sont spécifiquement requises pour le contrôle de la virulence et, plus particulièrement, pour la survie précoce lors de l’infection de cellules‐hôtes via l’orchestration de la sécrétion de facteurs de virulence dans la cellule‐hôte. Lpl1118 participerait également à la biogénèse de la vacuole de réplication. Cinq autres de ces protéines sont impliquées dans la régulation de la formation et de l’architecture des biofilms. L’une d’elles est, plus particulièrement, requise pour la formation de biofilms en présence d’oxyde nitrique. Ces résultats contribuent à une meilleure compréhension de l’organisation complexe et spécifique des voies de signalisation à diGMPc chez L. pneumophila et pourraient permettre d’envisager une lutte plus efficace contre ce pathogèneLegionella pneumophila is a bacterium that proliferates in fresh water environments through the replication within amoebas. These bacteria can persist in these environments through biofilm formation. The inhalation of aerosolized contaminated water through hot water systems or cooling towers can induce the infection of human lungs, leading to a severe pneumonia called legionellosis. Cyclic di‐GMP (c‐di‐GMP) in involved, in various bacterial species, in the motility‐to‐sessility transition, and in some pathogens, in virulence control. My work aims to demonstrate the involvement of signaling pathways that use c‐di‐GMP in virulence control and biofilm formation of L. pneumophila. This involvement was investigated by systematically inactivating each gene encoding a c‐di‐GMP‐metabolizing enzyme in L. pneumophila Lens strain. Our work revealed that 3 of these proteins, Lpl0780, Lpl0922 and Lpl1118 are specifically involved in virulence control and, particularly, in the early survival during host cell infection through the orchestration of virulence factors secretion within host cell. Lpl1118 is particularly required for replicative vacuole biogenesis. Five other proteins, participate in the formation and architecture of biofilms. One of them is more specifically involved in biofilm formation in the presence of nitric oxide. These results help to better understand the complexity and the specificity of c‐di‐GMP signaling pathways in L. pneumophila and should allow the exploration of more effective ways to fight this pathogen
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Estupina, Corinne. „Effets du cycle sexuel, du stress aigu et de composés stéroi͏̈diens sur la sécrétion et la synthèse de la somatostatine hypothalamique : implication des voies glutamatergiques et gabaergiques“. Montpellier 1, 1997. http://www.theses.fr/1997MON1T008.
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Voulhoux, Romé. „La voie Xcp chez pseudomonas aeruginosa : Un modèle d'étude de la voie générale de sécrétion“. Aix-Marseille 2, 2000. http://www.theses.fr/2000AIX22038.
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Choquet, Armelle. „Les voies d'inhibition de la cellule pariétale gastrique : action des prostaglandines“. Montpellier 1, 1989. http://www.theses.fr/1989MON13503.
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Papin, Julien. „Bases moléculaires des défauts sécrétoires des cellules ß pancréatiques lors de la glucotoxicité“. Thesis, Bordeaux 1, 2009. http://www.theses.fr/2009BOR13986/document.
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La glucotoxicité, ou exposition prolongée à de hautes teneurs en glucose, altère la fonction des cellules ß-pancréatiques et participe au développement du diabète. Il a été démontré que dans les cellules ß, la glucotoxicité engendre des modifications de l’expression génique, des altérations des voies de signalisation Ca2+-dépendantes et de l’exocytose ainsi qu’une augmentation de l’apoptose. Les mécanismes moléculaires responsables de ces altérations sont encore peu connus, mais ces observations suggèrent que des changements du profil d’expression génique des cellules ß-pancréatiques en sont à l’origine. Afin de mieux comprendre les conséquences de la glucotoxicité, une étude génomique a été menée dans la lignée de cellules ß-pancréatiques INS-1E. Cette étude a révélé l’existence de variations significatives des taux d’expression de plusieurs gènes importants pour la fonction des cellules ß, codant pour des protéines impliquées notamment dans le métabolisme glucidique et les différentes étapes de la voie de sécrétion d’insuline. D’autre part, cette approche a également révélé de profonds changements dans les voies de signalisation dépendantes de l’AMPc. Si le rôle prédominant du Ca2+ dans la régulation de la voie de sécrétion de l’insuline a été mis en évidence et bien caractérisé, l’implication et l’importance de l’AMPc dans ce processus restent mal définies. L’AMPc, au même titre que le Ca2+, module l’activité de nombreuses protéines de signalisation, régule l’expression génique et intervient également dans le trafic vésiculaire et la sécrétion d’insuline. De manière intéressante, l’expression de l’adénylate cyclase 8 (ADCY8) est fortement diminuée en condition de glucotoxicité. Ceci suggère qu’un défaut de synthèse d’AMPc pourrait être à l’origine du remaniement des voies de signalisation impliquées dans la régulation de la sécrétion d’insuline. Nous avons donc décidé d’étudier, plus en profondeur, les conséquences fonctionnelles de la diminution de l’expression de l’ADCY8 sur ces voies. Nos résultats suggèrent que l’ADCY8, une isoforme peu exprimée dans les cellules ß- pancréatiques? et stimulée par le Ca2+, se trouve au carrefour des voies de signalisation activées par le glucose et le GLP-1. La diminution de son expression est ainsi partiellement responsable des effets induits par la glucotoxicité sur la régulation de la sécrétion d’insuline. D’autre part, plusieurs résultats récents suggèrent l’implication des voies de signalisation AMPc-dépendantes dans la protection des cellules ß contre l’apoptose et dans ce contexte, le rôle de l’ADCY8 dans ces cellules a été abordéGlucotoxicity, or prolonged exposure to elevated levels of glucose, alters the function of pancreatic??-cells and is involved in diabetes pathogenesis. It has been demonstrated that glucotoxicity modifies gene expression and induces considerable changes in [Ca2+]i and in cAMP-dependent signalling (Dubois et al, Endocrinology, 148(4):1605-14 ; 2007) as well as a it decreases insulin exocytosis in response to glucose and increases apoptosis. The molecular mechanisms of these effects are not known but several observations suggest that changes in gene expression profiles are involved. To address that, a genomic study has been done in the clonal b-cell line INS-1E and revealed important modifications in the expression rates of many genes involved in glucose metabolism and vesicular traffic. This approach also revealed the alteration of cAMP-mediated signalling pathways and as the role of calcium and the importance of the correlation between cAMP and Ca2+-mediated signalling pathways had been shown, it was interesting to address the role of this second messenger in this process. Actually, cAMP regulates the activity of a large number of signalling proteins, it is also an important messenger involved in vesicular traffic, insulin secretion and gene expression. Interestingly, we also found that the expression of the adenylyl cyclase VIII (ADCY8) was largely diminished by glucotoxicity and this suggests that an alteration of cAMP synthesis could be involved in the decrease of insulin secretion in this condition. For this reason, we decided to address the functional consequences of altered ADCY8 expression on cAMP-mediated signalling pathways and on its correlation with the decrease of insulin secretion in glucotoxicity. Our results demonstrate a requirement for ADCY8 in glucose as well as in GLP-1 activated signalling pathways and strongly suggest a central role for ADCY8 in glucotoxicity. Moreover, recent publications suggest the implication of cAMP-mediated signalling pathways in the protection of b-cells against apoptosis induced by glucotoxicity, and the role of ADCY8 in this process was investigated
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Bruneau, Alix. „Régulation de l'expression membranaire du transporteur de phospholipides biliaires ABCB4 : effet de mutations Functional Defect of Variants in the Adenosine Triphosphate–Binding Sites of ABCB4 and Their Rescue by the Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator Potentiator, Ivacaftor (VX-770) Structural analogues of roscovitine rescue the intracellular traffic and the function of ER-retained ABCB4 variants in cell models“. Thesis, Sorbonne université, 2019. http://www.theses.fr/2019SORUS048.
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ABCB4 est exprimé à la membrane canaliculaire des hépatocytes où il sécrète un composant majeur de la bile : la phosphatidylcholine. Plus de 500 mutations d’ABCB4 sont associées à des maladies biliaires. La pathologie la plus sévère est la PFIC3, qui se développe tôt dans l’enfance et progresse rapidement vers l’insuffisance hépatique. La transplantation hépatique reste la seule thérapie efficace. Le développement d’alternatives représente donc un enjeu majeur. Cette thèse s’intéresse à l’effet de cinq mutations décrites chez des patients et situées dans les sites de liaison à l’ATP d’ABCB4. En combinant la modélisation 3D avec des études in vitro, nous avons montré que ces mutations sont responsables d’un défaut d’activité d’ABCB4. Nous avons mis en évidence que le VX-770, un médicament approuvé en clinique pour traiter les patients atteints de mucoviscidose, restaure l’activité des cinq mutants. Ces travaux ouvrent des perspectives de repositionnement du VX-770 pour le traitement ciblé de patients atteints de pathologies biliaires liées à ABCB4. La seconde partie de cette thèse consiste à étudier le rôle de l’interaction du domaine N-terminal d’ABCB4 avec la kinase MRCKalpha. L’inhibition ou l’extinction de cette kinase montrent que MRCKalpha joue un rôle dans la régulation de l’expression membranaire d’ABCB4 en contrôlant son internalisation depuis la membrane plasmique. En inhibant la protéine MLC2, effecteur de MRCKa, nous avons ensuite montré que l’effet de MRCKalpha sur l’expression d’ABCB4 passe par MLC2, qui est un partenaire du domaine linker d’ABCB4. Notre travail montre un rôle commun de ces deux partenaires dans la régulation de l’internalisation d’ABCB4ABCB4 is exclusively expressed at the canalicular membrane of hepatocytes where its function is to translocate phosphatidylcholine (PC) into bile. Variations in ABCB4 gene sequence are associated with several chronic and progressive liver diseases. The most severe is PFIC3 which develops early in childhood and most often requires liver transplantation. Less severe diseases are the intrahepatic cholestasis of pregnancy and the low phospholipid- associated cholelithiasis syndrome which occur in young adults. Up to now, about 500 disease-causing ABCB4 variants have been reported. A challenge is to find pharmacological treatments for the severe forms of the diseases. We have studied the effect of five disease-causing variations that reside in the highly conserved motifs of ABC transporters, involved in ATP binding. Using three-dimension structural modeling and in vitro studies, we showed that the five mutants were normally processed and targeted to the plasma membrane, whereas their PC secretion activity was dramatically decreased. PC secretion activity of the mutants was rescued by the clinically approved CFTR potentiator ivacaftor (VX-770). These results pave the way for personalized therapy in ABCB4-related diseases.The second part of my project was aimed at investigating the potential role of two ABCB4 partners, the kinase MRCKalpha and its effector the myosin light chain II (MLCII) in the expression and function of ABCB4. We found that downregulation of both partners didn’t affect the canalicular localization of ABCB4 but led to a reduction of its endocytosis. Our results open new insights into the mechanisms underlying the regulation of ABCB4 expression and function
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Jutras, Isabelle. „Maturation et ciblage des protéines dans la voie de sécrétion régulée“. Thesis, National Library of Canada = Bibliothèque nationale du Canada, 2000. http://www.collectionscanada.ca/obj/s4/f2/dsk1/tape2/PQDD_0015/NQ55464.pdf.
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Payet, Laurie-Anne. „Effets des acides gras saturés sur la voie de sécrétion. Relation avec la mucoviscidose“. Thesis, Poitiers, 2013. http://www.theses.fr/2013POIT2299/document.
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Les acides gras saturés (AGS) altèrent la fonctionnalité des organites dans de nombreux types cellulaires. Il a été proposé que ce processus, également nommé lipointoxication, puisse être responsable de plusieurs pathologies humaines telles que le diabète de Type 2.Au niveau cellulaire, l'accumulation d'AGS est associée à une augmentation du taux de saturation des phospholipides (PL) membranaires, les composants majoritaires des membranes des organites, mais également du taux de céramides, impliqués dans l'induction de l'apoptose.Dans une première partie de ce travail, nous avons étudié, chez le modèle cellulaire simple Saccharomyces cerevisiae, la contribution relative des PL saturés et des céramides à la cytotoxicité des AGS. Nous avons pu démontrer que les céramides agissaient à des étapes précoces de la voie de sécrétion, alors que les PL saturés impactaient des étapes plus tardives en altérant en particulier la formation de vésicules de sécrétion.Parallèlement, nous avons également constaté que le taux d'AGS était significativement augmenté dans les PL membranaires des patients atteints d'une maladie génétique, la mucoviscidose. La mutation la plus fréquente responsable de cette maladie, résulte en la rétention de la protéine correspondante dans le réticulum endoplasmique. Des molécules pharmacologiques, capables de corriger le trafic de la protéine à sa destination finale ont été isolées in vitro, mais des limitations importantes ont pu être observées lors des tests cliniques. Nous proposons dans le présent manuscrit que la lipointoxication liée aux AGS pourrait être un écueil important à l'utilisation des correcteurs actuels pour le traitement de la mucoviscidoseSaturated fatty acids (SFA) have been reported to alter organelle integrity in many cell types. This process, also known as lipotoxicity, has been proposed to be responsible for several human pathologies such as type 2 diabetes.At the cellular level, SFA accumulation is associated with an increase of the saturation rate of membrane phospholipids (PL), the major components of organelle membranes, and an increase of ceramides levels, implicated in apoptosis induction.In the first part of this work, we took advantage of a simple yeast-based model to study the relative contributions of saturated PL and ceramides to SFA cytotoxicity. We demonstrated that ceramides act early in the secretory pathway, while saturated PL impact the later steps, and particularly the formation of secretory vesicles.In parallel, we observed that SFA amounts were significantly increased in the membrane PL of cystic fibrosis (CF) patient cells. The most common mutation responsible for this genetic disease results in the retention of the corresponding protein in the endoplasmic reticulum. Pharmacological agents, which correct the mistrafficking of the protein, have been isolated in vitro, but they did not show significant improvements in clinical trials. We propose in the present manuscript, that SFA-related lipointoxication could be an important bottleneck for the use of these pharmacological agents in clinical trials
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Page, Anne-Laure. „Les chaperons impliqués dans la voie de sécrétion de type III de Shigella flexneri“. Paris 7, 2002. http://www.theses.fr/2002PA077137.
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Chapon, Virginie. „Régulation des gènes xcp codant pour la voie générale de sécrétion de Pseudomonas aeruginosa“. Aix-Marseille 2, 1997. http://www.theses.fr/1997AIX22008.
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Les proteines secretees par pseudomonas aeruginosa sont exprimees en general en fin de phase exponentielle de croissance. La regulation de la synthese d'au moins trois proteines secretees (elastase, protease alcaline, exotoxine a) est sous le controle du regulateur positif lasr. Ce regulateur est homologue a luxr, un activateur implique dans la bioluminescence chez photobacterium fischeri. Luxr est active par une petite molecule appelee autoinducteur dont la synthese necessite la presence du gene luxi. Cette molecule diffusible s'accumule dans le milieu et active luxr a haute densite cellulaire. Le mecanisme de regulation faisant intervenir le couple luxr/luxi est appele quorum sensing. Des genes analogues a luxi de p. Fischeri ont ete identifies chez p. Aeruginosa: les genes lasi et vsmi. Lasi et vsmi permettent chacun la synthese de molecules autoinductrices. Le partenaire de vsmi est un activateur transcriptionnel, produit du gene vsmr. Le couple vsmr/vsmi est necessaire pour la production d'un certain nombre de proteines secretees, des rhamnolipides, de pigments. Deux circuits de regulation par autoinduction coexistent donc chez p. Aeruginosa. Les genes xcp a 40' sont organises en deux unites de transcription divergentes. L'expression de ces deux operons est coordonnee et induite en fin de phase exponentielle de croissance, suggerant l'intervention d'un mecanisme de controle de type quorum sensing. L'etude de l'expression des genes xcp dans differents contextes genetiques a montre qu'ils sont sous le controle des deux systemes lasr/lasi et vsmr/vsmi. Il existe donc une regulation coordonnee entre la machinerie de secretion et les proteines secretees par cette machinerie. La comprehension des mecanismes fins de regulation des genes xcp contribuera a l'obtention d'une vision globale du controle genetique de la production (synthese et secretion) des facteurs de virulence chez p. Aeruginosa
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Guédin, Sandrine. „L'hémagglutinine filamenteuse de Bordetella pertussis : voie de sécrétion et caractérisation de son transporteur FhaC“. Lille 1, 2001. https://pepite-depot.univ-lille.fr/RESTREINT/Th_Num/2001/50376-2001-27.pdf.
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Bordetella pertussis, la bactérie à gram négatif responsable de la coqueluche, synthétise et sécrète de nombreuses toxines et adhésines dont l'hémagglutinine filamenteuse (FHA). La FHA est l'adhésine majeure responsable de la fixation de la bactérie au tractus respiratoire de l'hôte ainsi que la protéine extracellulaire la plus abondante de B. Pertussis. Elle est synthétisée avec un peptide-signal clivé à son passage de la membrane cytoplasmique, suggérant qu'elle traverse la membrane cytoplasmique via la machinerie sec. Elle traverse ensuite la membrane externe via une seule protéine auxiliaire spécifique, FhaC. Ce mode de secrétion à 2 partenaires, la protéine sécrétée et sa protéine auxiliaire spécifique ( "Two-Partner-Secretion" ou TPS), est présent chez diverses bactéries pathogènes. Nous avons cherché à déterminer si la FHA traverse le périplasme en cours de sécrétion, et à étudier l'influence de sa conformation sur sa sécrétion via FhaC. Nous avons greffé par voie génétique à un troncat N-terminal de la FHA, un domaine protéique qui adopte un repliement globulaire maintenu par un pont disulfure intramoléculaire, CtxB. La formation de ce pont disulfure est catalysée par une disulfide oxydase périplasmique, DsbA. La sécrétion de cette protéine chimérique n'a été possible que lorsque la formation du pont disulfure de CtxB était empêchéeL'observation qu'un domaine globulaire entrave la sécrétion de la FHA via FhaC, suggère que la FHA pourrait transiter par le périplasme sans s'y replier, et traverser la membrane externe dans une conformation étendue. FhaC appartient à une famille de protéines de membrane externe (TpsB) toutes impliquées dans la sécrétion de facteurs de virulence et peu caracterisées. FhaC a été purifiée et incorporée dans des membranes artificielles ou elle formerait des canaux perméables aux sucres et aux ions. Nous avons également établi un modèle topologique de FhaC selon lequel FhaC formerait un tonneau dans la membrane externe, et l'avons testé par l'insertion aléatoire d'épitopes. Nos résultats ont confirmé que l'extrémité N-terminale est exposée à la surface cellulaire et que la moitié C-terminale forme un tonneau transmembranaire. Enfin, un changement de conformation a été mis en évidence dans la portion C-terminale de FhaC au cours de la sécrétion de la FHA
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Quillet, Aurelien. „Role des microARNs dans le controle de la voie de la sécrétion régulée dans les phéochromocytomes“. Thesis, Normandie, 2018. http://www.theses.fr/2018NORMR049/document.
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Le phéochromocytome (PCC) est une tumeur neuroendocrine rare qui se développe principalement aux dépens des cellules chromaffines de la médullo-surrénale. Dans la majorité des cas, les PCCs sont caractérisés par une hypersécrétion de catécholamines responsables de divers effets délétères chez les patients dont le principal est une hypertension (phéochromocytomes symptomatiques, PS). Cependant, il existe également une forme particulière de PCCs asymptomatiques qui sécrètent des taux physiologiques de catécholamines (phéochromocytomes incidentaux, PI). Parmi les patients porteurs de PI, certains sont hypertendus (PIH) et d’autres non (PIN). Afin de mieux caractériser les différents profils sécrétoires de PCCs (PS et PI), nous avons recherché une implication potentielle des microARNs (miRNAs). Nous avons réalisé une analyse transcriptionnelle des miRNAs exprimés dans 32 échantillons de PCCs (12 PS, 12 PIN et 8 PIH). Le miRNome a été réalisé par qRT-PCR microfluidique (Taqman Low Density Array, TLDA) pour 671 miRNAs. L’analyse statistique (Limma) des données d’expression a permis d’identifier 4 miRNAs significativement sur-exprimés (hsa-miR-7-1-3p, 7-2-3p, 26a-1-3p et 550a-3p) et 3 miRNAs sous-exprimés (497-3p, 32-5p, 190b-5p) dans les tumeurs PIN par rapport aux PS. Pour identifier les cibles potentielles des miRNAs, de nombreux logiciels de prédictions bioinformatiques sont disponibles en ligne mais les résultats qu’ils génèrent sont très divergents. Afin de contourner ce problème nous avons développé miRabel, un nouvel outil de prédiction des cibles potentielles des miRNAs et des fonctions biologiques qui leurs sont associées. Le principe général consiste à agréger les résultats de 3 autres algorithmes de prédiction sélectionnés pour leur complémentarité. Au final, les analyses des courbes ROC (Receiver Operating Characteristic), de la précision et du Recall ont montré que cet outil est plus efficace i) que les algorithmes qu’il agrège et ii) que d’autres logiciels de prédictions couramment utilisés tels que miRWalk, MBSTAR et TargetScan. Une analyse d'enrichissement (Modular Enrichment Analysis ou MEA, Genecodis3) des cibles prédites pour les miRNAs différentiellement exprimés a révélé qu’ils peuvent moduler significativement l’activité de quelques dizaines de voies de signalisation dont celles du cytosquelette d’actine et des SNAREs (impliquées dans le transport vésiculaire). En se basant sur l’expression des miRNAs, leurs énergies d’hybridation avec leurs cibles ainsi que leurs effets physiologiques potentiels, les ARNm des gènes PAK3, MLCP, MLCK (cytosquelette d’actine), SNAP25 et STX1A (SNAREs) ont été retenus pour la suite de l’étude. Les essais luciférases ont mis en évidence une interaction entre la totalité de l’extrémité 3’UTR des ARNm de MLCK et miR-32, STX1A et miR-550a-3p, SNAP25 et miR-7-1-3p ainsi que miR-550a-3p. Les autres interactions testées se sont révélées négatives. Les analyses par RT-qPCR ont montré une diminution significative du niveau d’ARNm de MLCK et de STX1A suite à la transfection de miR-32-5p et miR-550a-3p respectivement. Concernant SNAP25, un effet inhibiteur de miR-550a-3p / 7-1-3p est observé. Cet effet a été confirmé au niveau protéique pour STX1A et SNAP25Pheochromocytomas (PCC) are rare neuroendocrine tumors which arise from chromaffin cells of the adrenal medulla. In most cases, PCCs are characterized by a hypersecretion of catecholamines, which is responsible for most of deleterious effects in the patients with hypertension being the main symptom (symptomatic pheochromocytomas, SP). However, some PCCs are asymptomatic and secrete physiological levels of catecholamines (Incidental Pheochromocytomas, IP). Among patients with an IP, some are hypertensive (HIP) and other are strictly normotensive (NIP). In order to better understand the different secretory profiles of PCCs (SP and IP), we investigated the potential role of microRNAs (miRNAs) in this process. We started by identifying differentially expressed miRNAs between 12 SP, 12 NIP and 8 SP. The miRNome was done by microfluidic qRT-PCR (Taqman Low Density Array, TLDA) for 671 miRNAs. Statistical analysis (Limma) of the expression results identified 4 miRNAs significantly over-expressed (hsa-miR-7-1-3p, 7-2-3p, 26a-1-3p et 550a-3p) and 3 under-expressed (497-3p, 32-5p, 190b-5p) in NIP tumors when compared to SP. To identify potential miRNAs’ targets, numerous bioinformatic prediction methods are available but their results are quite divergent. To circumvent this issue, we developed miRabel, a new miRNAs’ targets prediction tool and their associated biological functions. MiRabel aggregated the results of 3 other prediction algorithms selected for their features complementarity. The analysis of ROC, precision and recall curves showed that this tool is more efficient i) than the aggregated prediction methods and ii) than other recent or widely used tools such as miRWalk, MBSTAR and TargetScan. A Modular Enrichment Analysis (MEA, Genecodis3) of the miRNAs’ predicted targets revealed that they could potentially regulate the activity of a few pathways of which the actin cytoskeleton and the SNAREs (involved in vesicular transport). PAK3, MLCP, MLCK (Actin cytoskeleton), SNAP25 and STX1A (SNAREs) were selected to be experimentally validated based on miRNA’s expression, hybridization energy and potential physiological impact. Experimental validations of the selected interactions are achieved by luciferase gene reporter, RT-qPCR assays and western-blots following the transfection of studied miRNAs. Luciferase assays showed a direct interaction between the whole 3’UTR of MLCK mRNA and miR-32-5p, STX1A and miR-550a-3p, SNAP25 and miR-7-1-3p as well as miR-550a-3p. The other tested interactions came out to be negative. A significant decrease of MLCK mRNA and STX1A were observed by RT-qPCR analysis after transfecting miR-32-5p and miR-550a-3p respectively. As for SNAP25, the inhibitory effect of miR550a-3p/7-1-3p could be observed. This effect was confirmed at the protein level by western-blots for STX1A and SNAP25. We then evaluated the physiological effect of miR-550a-3p/7-1-3p on the regulated secretion of PC12 rat PCC cells. This was achieved using a nano-luciferase fused to growth hormone 1 (GH1). Once stimulated (59 mM potassium and 2 mM barium), miR-550a-3p over-expression decreased the secretory capacity of PC12 cells while miR-7-1-3p could not. This project represents the first study aiming to understand the regulation of the catecholamine secretion pathway by miRNAs in the pathophysiological context of PCC patients. Eventually, the characterization of this miRNA’s network should improve patient care in the field of hypersecreting neuroendocrine tumors
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Élias, Salah. „Contribution à la caractérisation des mécanismes moléculaires impliquant la chromogranine A dans l'établissement de la voie de sécrétion régulée dans les cellules neuroendocrines“. Rouen, 2010. http://www.theses.fr/2010ROUES004.
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Des études récentes d'invalidation du gène codant la chromogranine A (CgA) ont suggéré que cette protéine jouerait un rôle clé dans la biogenèse des granules de sécrétion (GS) au sein des cellules neuroendocrines. Néanmoins, les mécanismes moléculaires impliqués au cours de ce processus demeurent mal connus. Récemment, nous avons montré que l'expression de la CgA dans les cellules non-endocrines COS-7 induit la biogenèse de structures granulaires apparentées aux GS, capables de stocker et de sécréter la CgA et des hormones co-exprimées (NPY, GH), de manière calcium-dépendante. Les analyses des cellules COS-7 exprimant la CgA en microscope confocale et en vidéomicroscopie, associées à des approches biochimiques, ont permis d'établir des interactions entre les granules contenant la CgA, les microtubules et les filaments d'actine. Ces deux éléments du cytosquelette exercent des fonctions régulatrices sur le trafic intracellulaire et l'exocytose calcium-dépendante des granules contenant la CgA. Ces résultats suggèrent que la CgA est suffisante pour induire la biogenèse de GS et instaurer ainsi une voie de sécrétion régulée dans des cellules non-endocrines. Le clonage de la CgA de grenouille ayant révélé la conservation des régions N- et C-terminales au cours de l'évolution des vertébrés, nous avons émis l'hypothèse de leur implication en tant que déterminants fonctionnels de la CgA. Ainsi, nos résultats démontrent que les peptides conservés confèrent à la CgA sa capacité à former des GS et dirigent l'adressage et la libération régulée des hormones exogènes co-exprimées avec la CgA dans les cellules COS-7, ainsi que la POMC endogène dans les cellules corticotropes AtT20The nature of the sorting signals for entry of proteins into the dense-core secretory granules (SG) and the molecular machinery required to generate SG remain unclear. Recent studies revealed that chromogranin A (CgA) deficiency is associated with hormone storage impairment, suggesting that CgA plays a major role in the formation of SG in neuroendocrine cells. The cloning of frog CgA revealed high conservation though evolution of the global acidity and of the terminal regions of the protein, suggesting that these features are essential for the biological activity of CgA. Expression of CgA in the non-endocrine COS-7 cells induced the formation of dense-core vesicles containing CgA. As SG in neuroendocrine cells, trafficking and exocytosis of CgA-containing granules required interactions with microtubules and actin filaments. These SG-like organelles were able to store hormones that could be released in a calcium-dependent manner. Deletion of the terminal regions of CgA resulted in a reorientation of the proteins from the regulated to the constitutive secretory pathway, indicating that these domains were essential for the formation of functional SG-like structures in COS-7 cells. Expression of CgA in the corticotrope AtT20 cells increased POMC levels in SG, whereas the expression of terminal deletion-mutants provoked retention of the hormone in the Golgi area. Thus, CgA, but not its truncated forms, promoted POMC sorting to the regulated secretory pathway. Our results demonstrate that CgA, through its conserved terminal domains, directs the formation of SG and the sorting and release of hormones
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Renier, Sandra. „Déterminants protéiques de la voie de sécrétion Sec impliqués dans la formation de biofilm chez Listeria monocytogenes“. Phd thesis, Université Blaise Pascal - Clermont-Ferrand II, 2012. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00844396.
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Listeria monocytogenes est une bactérie pathogène impliquée dans la toxi-infection alimentaire à l'origine de la listeriose, une maladie peu fréquente mais avec un taux de mortalité de 25 % chez l'homme. Cette bactérie est capable de former un biofilm lui permettant de mieux résister aux stress environnementaux ainsi qu'aux traitements de décontamination. Une nouvelle stratégie d'analyse génomique a été développée et a permis de cibler des systèmes de sécrétion et des protéines potentiellement impliqués dans la formation de biofilm. L'inactivation de la voie SecA2 entraîne la formation d'un biofilm aérien et par conséquent fragile. Ce morphotype est capable de croître de façon sessile à 20°C sur du polystyrène alors que ce n'est pas le cas pour la souche sauvage. De nouvelles protéines sécrétées de façon SecA2 dépendante ont été identifiées par l'étude de l'exoprotéome du mutant ΔsecA2 en comparaison avec celui de la souche sauvage. Le rôle des lipoprotéines dans la formation de biofilm ainsi que leur maturation par les peptidases signal de type II, LspA et LspB, a également été abordé. La combinaison d'une analyse de l'expression des gènes codant les lipoprotéines au cours de la formation de biofilm avec l'analyse génomique basé sur le sécrétome a permis de cibler trois lipoprotéines, dont LpeA qui serait impliquée dans les phases tardives de formation de biofilm. Enfin, l'importance majeure de LspA dans la maturation des lipoprotéines, a été mise en évidence par l'étude de l'exoprotéome des doubles mutant ΔlgtΔlspA et ΔlgtΔlspB en comparaison avec celui de Δlgt.
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Renier, Sandra Anne Angèle. „Déterminants protéiques de la voie de sécrétion Sec impliqués dans la formation de biofilm chez Listeria monocytogenes“. Thesis, Clermont-Ferrand 2, 2012. http://www.theses.fr/2012CLF22307/document.
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Listeria monocytogenes est une bactérie pathogène impliquée dans la toxi-infection alimentaire à l’origine de la listeriose, une maladie peu fréquente mais avec un taux de mortalité de 25 % chez l’homme. Cette bactérie est capable de former un biofilm lui permettant de mieux résister aux stress environnementaux ainsi qu’aux traitements de décontamination. Une nouvelle stratégie d’analyse génomique a été développée et a permis de cibler des systèmes de sécrétion et des protéines potentiellement impliqués dans la formation de biofilm. L’inactivation de la voie SecA2 entraîne la formation d’un biofilm aérien et par conséquent fragile. Ce morphotype est capable de croître de façon sessile à 20°C sur du polystyrène alors que ce n’est pas le cas pour la souche sauvage. De nouvelles protéines sécrétées de façon SecA2 dépendante ont été identifiées par l’étude de l’exoprotéome du mutant ΔsecA2 en comparaison avec celui de la souche sauvage. Le rôle des lipoprotéines dans la formation de biofilm ainsi que leur maturation par les peptidases signal de type II, LspA et LspB, a également été abordé. La combinaison d'une analyse de l’expression des gènes codant les lipoprotéines au cours de la formation de biofilm avec l’analyse génomique basé sur le sécrétome a permis de cibler trois lipoprotéines, dont LpeA qui serait impliquée dans les phases tardives de formation de biofilm. Enfin, l’importance majeure de LspA dans la maturation des lipoprotéines, a été mise en évidence par l’étude de l’exoprotéome des doubles mutant ΔlgtΔlspA et ΔlgtΔlspB en comparaison avec celui de ΔlgtListeria monocytogenes is a foodborne pathogenic bacteria responsible for listeriosis, a rare but high mortality rate disease in humans (25 %). This bacterium can form biofilm allowing a better resistance to environmental stresses as well as decontamination treatments. A new strategy for genomic analysis was developed and allowed to target secretion systems and proteins potentially involved in biofilm formation. Inactivation of the SecA2 pathway leads to the formation of an aerial and fragile biofilm. This morphotype is able to grow in a sessile mode at 20 °C on polystyrene whereas this is not the case for the wild type strain. New proteins secreted in a SecA2 manner were identified by comparing the ΔsecA2 exoproteome to the one of the wild type. The role of lipoproteins in biofilm formation and their maturation by the signal peptidase II, LpsA and LspB, was also tackled. Combining expression analysis of genes encoding lipoproteins during biofilm formation with genomic analysis based on the secretome allowed targeting three lipoproteins, including LpeA, which appeared to be involved in the later stages of biofilm formation. Finally, the importance of LspA in the maturation of lipoproteins,was highlighted by comparing of the double mutant ΔlgtΔlspA and ΔlgtΔlspB exoproteomes to the one of Δlgt
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Ferrandez, Yann. „Caractérisation du second système de sécrétion de type II chez la bactérie phytopathogène Erwinia chrysanthemi“. Lyon, INSA, 2008. http://theses.insa-lyon.fr/publication/2008ISAL0109/these.pdf.
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Chez les bactéries à Gram négatif, toutes les protéines destinées à la membrane externe sont synthétisées avec une séquence signal qui est clivée lors de leur acheminement. Ce clivage s’effectue lors du passage de la membrane interne, par LepB pour les protéines intégrales de la membrane externe ou par LspA pour les lipoprotéines. Les séquençage du génome de Dickeya dadantii a permis de mettre en évidence une seconde machinerie de sécrétion de type II nommée Stt (pour Second Type Two). En aval de ce système se trouve un gène dénommé pnlH dont le produit est homologue à des pectines lyases. L’étude de cette protéine a montré qu’elle est un substrat de la machinerie Stt qui permet son passage de la face interne de la membrane externe à sa face externe. En l’absence de Stt ou chez Escherichia coli, PnlH est localisée à la face interne de la membrane externe. Cet ancrage est dû à l’extrémité N-terminale de la protéine qui n’est pas clivée lors du passage de la membrane interne et contient toute l’information pour l’adressage de la protéine. En effet, la fusion des 41 premiers acides aminés de PnlH à des protéines de différents compartiments cellulaires provoque l’adressage de celle-ci à la membrane externe. L’analyse plus approfondie de cette partie N-terminale montre certaines caractéristiques d’une séquence signal Tat-dépendante, permettant le passage de la membrane interne par le système Tat. L’analyse de mutants de la séquence signal ou de la machinerie Tat a confirmé que celle-ci est nécessaire pour le transfert de PnlH à travers la membrane interne. Ainsi, l’analyse de l’adressage de PnlH à la membrane externe a permis de mettre en évidence une nouvelle voie d’acheminement de protéines à la membrane externe des bactéries. Ce nouveau mécanisme de ciblage de protéines à la membrane externe est probablement répandu puisque PnlH est aussi localisée à la membrane externe quand elle est exprimée dans le E. Coli. PnlH n’étant pas détectée comme substrat de la machinerie Tat par les programmes de prédiction, cela suggère qu’il reste à découvrir d’autres protéines de la membrane externe Tat-dépendante encore non identifiéesIn Gram negative bacteria, ali the proteins destined for the outer membrane arc synthesized with a sequence signal which is cleaved during their routing. This cleavage is perfonned during the passage of the inner membrane, by LepB for outer membrane proteins (OMPs) or by LspA for lipoproteins. The sequencing of the genome of Dickeya dadamii allowed to bring to Light a second type II secretion machinery named Stt (for Second Type Two). Downstream to this system is a gene called pnlH, the product of which has homology with pectin lyases. The study of this protein showed that it is a substrate of the Stt machinery which allows its passage from the inner face to the outer face of outer membrane. In absence of Stt or in Escherichia coli, PnlH is localized in the inner face of the outer membrane. This anchoring is due to the terminal extremity of the protein which is not cleaved during the crossing of the inner membrane and contains all the information for the addressing of the protein. Indeed, the fusion of the first 41 amino acids of PnlH with proteins of various cellular compartments allows the addressing of these hybrids to the outer membrane. A more detailed analysis of this N-tenninal part shows characteristies of a Tat-dependant sequence signal, allowing the passage of the inner membrane by the Tat system. Analysis of mutants of the sequence signal or of the machinery Tat confirmed that this one is necessary for the passage of PnlH through the inner membrane. So, the analysis of the addressing of PnlH to the outer membrane allowed the identification a new way of routing of proteins to the outer membrane of bacteria. This new mechanism of targeting of proteins in the outer membrane is probably widespread because PnlH is also localized in the outer membrane when it is expressed in E. Coli. Since PnlH is not detected as a substrate of the Tat machinery by the prediction programs this suggests that other Tat targeted outer membrane proteins remain to be identified
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Clément, Romain. „Influence de la petite protéine GTPasique Cdc42 sur la voie de sécrétion du canalCFTR dans des cellules épithéliales bronchiques“. Thesis, Poitiers, 2012. http://www.theses.fr/2012POIT2281/document.
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La mucoviscidose est causée par des mutations du gène CFTR (p.Phe508del étant la plus fréquente). Celui-ci code pour la protéine CFTR qui constitue un canal chlorure exprimé à la face apicale des cellules épithéliales. Au niveau du reticulum endoplasmique (RE), le contrôle de qualité conformationnelle oriente la majorité du CFTR en cours de repliement vers une voie de dégradation. Une fraction limitée du WT-CFTR parvient cependant à se replier correctement et peut ensuite progresservers la surface cellulaire, contrairement au Phe508del-CFTR (qui est néanmoins fonctionnel). Lorsque des formes mutées sont exportées à partir du RE, grâce à des traitements correcteurs, elles sont alors instables à la membrane plasmique. Par ailleurs, il a été montré que l'organisation des microfilaments d'actine participe à l'ancrage du canal au cytosquelette et à sa stabilité. Or, la petite GTPase Cdc42 influence la dynamique de nucléation de l'actine fibrillaire. Au cours de nos travaux, nous avons testé l'implication de Cdc42 et de certains de ses effecteurs dans la régulation de WT-CFTR dans des cellules épithéliales bronchiques. Dans ce cadre, la fonction de la voie Cdc42 a été perturbée par des traitements pharmacologiques et par ARN interférence. Les résultats obtenus, principalement par biotinylation de surface, ont permis de proposer que (1) la protéine Cdc42 participe à ladégradation de formes mal repliées de CFTR dans les étapes précoces et tardives de la voie de sécrétion et (2) la voie Cdc42, par son implication dans l'organisation de l'actine F corticale, affecte l’ancrage du canal chlorure au cytosquelette et régule ainsi son recrutement dans des vésicules d'internalisationCystic Fibrosis is caused by CFTR gene mutations (p.Phe508del being the most frequently encountered). The CFTR protein functions as a chloride channel expressed at the plasma membrane of epithelial cells. Its productive folding in the endoplasmicreticulum (ER) is poorly efficient and unfolded proteins are therefore targeted to degradation. Nevertheless, a limited fraction of WT-CFTR acquires a native conformation and then progesses into the secretory pathway. In the case of Phe508del-CFTR, virtually all channels are degraded at this step except through corrector treatments. Under these conditions the mutant remains unstable at the plasma membrane (although it is functionnaly competent). Furthermore, it has been shown that fibrillar actin organization is involved in CFTR tethering to the cytoskeleton and channel stability. Moreover, the small GTPase Cdc42 promotes F actin nucleation. In the present study, we aimed at testing the involvement of Cdc42, and of some of its effectors, in WT-CFTR regulation in epithelial airway cells. In this context, Cdc42 pathway function was altered through pharmacological treatments or siRNAmediated depletions. Our results, mainly obtained via cell surface biotinylation assays, led us to propose that (1) Cdc42 is involved in misfolded CFTR degradation at early and late steps of the secretory pathway, and (2) Cdc42 pathway, through its F actin organization function, affects CFTR anchoring to the cytoskeleton and thus regulates its endocytosis
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Michiels, Fabrice. „Résultats du traitement de la maladie de Cushing par adénomectomie transsphénoi͏̈dale“. Bordeaux 2, 1995. http://www.theses.fr/1995BOR2M134.
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Guérin, Jérémy. „Etude de la dynamique conformationnelle de FhaC, le transporteur membranaire de l'hémagglutinine filamenteuse de Bordetella pertussis“. Thesis, Lille 2, 2014. http://www.theses.fr/2014LIL2S032/document.
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La voie de sécrétion bactérienne de type V permet l’exportation à la surface cellulaire de protéines dont certaines ont été identifiées comme d’importants facteurs de la pathogénicité bactérienne. Le type V regroupe la sécrétion des autotransporteurs et la sécrétion à deux partenaires (TPS). Les autotransporteurs sont constitués d’un domaine en tonneau β; et d’un domaine passager. L’interaction de l’autotransporteur avec le complexe protéique Bam, dont la pièce centrale est le transporteur BamA, permet l’insertion dans la membrane externe du tonneau β; et la sécrétion du passager. En revanche, la sécrétion à deux partenaires fait intervenir deux protéines, l’une appelée TpsA correspondant à la protéine exportée et l’autre, TpsB, formant un tonneau β qui contrôle le transport à travers la membrane externe. Les protéines TpsB sont spécifiques à leur(s) TpsA associée(s), et font partie de la superfamille des transporteurs Omp85 qui effectuent l’insertion de protéines dans la membrane externe bactérienne comme BamA, et dans celles des organites eucaryotes dont les chloroplastes et les mitochondries. Au cours de mon doctorat, je me suis intéressé à la sécrétion de l’hémagglutinine filamenteuse (FHA), qui est l’adhésine majoritaire de Bordetella pertussis, l’agent étiologique de la coqueluche. Cette adhésine qui permet à la bactérie de coloniser le tractus respiratoire de l’hôte est une protéine TpsA de 220 kD. Elle est très efficacement sécrétée par la voie de sécrétion à deux partenaires grâce à son transporteur spécifique TpsB nommé FhaC. L’étude cristallographique de FhaC a révélé un tonneau β; à 16 brins qui forme un canal dans la membrane externe obstrué par l’hélice-α; amino-terminale, H1, partagée par la majorité des TpsB, et par une boucle de surface, L6, conservée dans la superfamille Omp85. Cette conformation suggère un état au repos dans lequel le canal bouché ne pourrait pas transporter son partenaire. Afin de comprendre comment la FHA transite à l’intérieur du pore, il est donc nécessaire de connaître les changements de conformations que subit FhaC. Durant mon travail de thèse, nous avons apporté une vision plus dynamique de la sécrétion à deux partenaires en utilisant le couple FHA/FhaC comme modèle d’étude. Pour cela nous avons utilisé principalement la Résonance Paramagnétique Electronique (RPE). Cette technique de biophysique permet d’étudier FhaC en solution ou réincorporée dans une bicouche lipidique et de rendre compte de la mobilité à un site donné par l’utilisation de sondes paramagnétiques. Ainsi nous avons pu montrer que FhaC est en équilibre entre plusieurs conformations, avec H1 dans le pore ou du côté périplasmique de FhaC. La présence de la FHA déplace cet équilibre, favorisant ainsi la sortie de l’hélice hors du pore. Nous avons, par ailleurs, pu démontrer expérimentalement que la FHA transitait bien à l’intérieur du pore formé par FhaC et que l’hélice H1 se trouvait alors dans le périplasme. L’étude de la boucle L6 nous a permis de montrer que la mobilité de cette boucle était fortement contrainte à l’intérieur du pore même lors de la reconnaissance avec la FHA. Ce ralentissement de mobilité est lié, en autre, à une interaction avec un résidu d’un motif conservé présent sur le brin β13 qui influence la taille du pore. De manière plus générale, cette étude de la dynamique de FhaC contribue à la compréhension des mécanismes moléculaires de la voie TPS et des transporteurs de la superfamille Omp85Type V secretion in bacteria mediates the export to the cell surface of proteins, some of which have been identified as important factors of pathogenicity. Type V includes the secretion of autotransporters and the ‘Two-partner Secretion’ (TPS) pathway. Autotransporters consist of a β barrel domain and a passenger domain. The interaction of autotransporters with the Bam complex, of which the BamA transporter is the central component, allows the insertion of the β; barrel in the outer membrane and the secretion of passenger domain. In contrast, the two-partner secretion involves two proteins, the exported ‘TpsA’ protein and its TpsB partner that controls its transport across the outer membrane. TpsB proteins are specific to their associated TpsA(s) and belong to the superfamily of the Omp85 transporters, which carry out the insertion of proteins into the bacterial outer membrane, like BamA, or in the outer membranes of eukaryotic organelles including chloroplasts and mitochondria. For my PhD work, I have been interested in the secretion of filamentous hemagglutinin (FHA), which is the major adhesin of Bordetella pertussis, the causative agent of whooping cough. This adhesin allows the colonization by this bacterium of its host’s respiratory tract. This protein corresponds to a 220kD TpsA protein efficiently secreted by its specific transporter TpsB named FhaC. Crystallographic studies have revealed that FhaC harbours a 16-stranded β;-barrel occluded by both the N-terminal α;-helix, H1, shared by the majority of TpsB proteins, and by a surface loop, L6, that carries a conserved, hallmark motif of the Omp85 superfamilly. This conformation suggests that FhaC is in a resting state in which the channel does not transport its partner. To understand how the FHA passes through the FhaC pore, it is necessary to address the conformational changes undergone by FhaC. During my thesis work, we provided a more dynamic view of the TPS pathway using the FHA/FhaC couple as study model. For this we used Electron Paramagnetic Resonance (EPR). This biophysical technique allows to study of FhaC in solution or reincorporated into a lipid bilayer and it reports the mobility at specific sites of the protein by using paramagnetic probes. Thus we have shown that FhaC is in equilibrium between multiple conformations, with H1 in the pore or at the periplasmic side of FhaC. The presence of FHA displaces the conformational equilibrium, promoting the exit of the helix going from the pore. We have also experimentally demonstrated that FHA does transit through the pore formed by FhaC while helix H1 is then in the periplasm. The study of the L6 loop enabled us to show that the mobility of this loop is highly constrained in the pore and remains so upon the recognition of FHA. Its slow mobility is linked to an interaction between an invariant L6 residue and a conserved motif present on the β; strand 13 of the barrel. This interaction affects the size of the FhaC pore.More generally, the study of the dynamics of FhaC contributes to the understanding the molecular mechanisms of the TPS pathway and of transporters of the Omp85 superfamily
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Hodak, Hélène. „Les partenaires et interactions périplasmiques au cours de la sécrétion de l'hémagglutinine filamenteuse par la voie à deux partenaires chez Bordetella pertussis“. Lille 2, 2007. http://www.theses.fr/2007LIL2S005.
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Bordetella pertussis est une bactérie à Gram négatif. Son enveloppe est formée par une membrane cytoplasmique et une membrane externe, les deux étant séparées par le compartiment périplasmique aqueux. Ce sont autant d'obstacles que doit franchir la FHA pour se retrouver dans le milieu extérieur. La FHA est sécrétée par l'une des six voies de sécrétion connues chez les bactéries à Gram négatif, la sécrétion à deux partenaires ou TPS (« two- partner secretion »). La voie TPS est classiquement associée à la sécrétion de protéines de virulence chez de nombreux pathogènes, notamment Haemophilus influenza, Erwinia chrysanthemi, Yersinia pestis, etc. Le premier partenaire de cette voie est la protéine sécrétée, de la famille TpsA, ici la FHA. Le protéines TpsA sont très grandes en taille, supérieure à 100 kDa, et ce sont en général des adhésines ou hémolysines. Elles possèdent toutes un domaine N-terminal caractéristique d'environ 300 résidus appelé le « domaine TPS ». Ce domaine est essentiel à la sécrétion et chez plusieurs protéines TpsA, on y a trouvé des résidus importants pour la sécrétion. Chaque protéine TpsA possède un transporteur dédié, de la famille TpsB, dont les membres formeraient des canaux dans la membrane externe. Il n'est toujours pas clairement établi si la sécrétion se fait par le pore individuel de la protéine TpsB, ou bien s'il se produit une oligomérisation de TpsB et la protéine TpsA passerait par le canal central ainsi formé. Le partenaire TpsB de la FHA est appelé FhaC. La FHA est produite dans le cytoplasme sous forme d'un très grand précurseur de 360 kDa, appelé FhaB. Grâce à son peptide signal N-terminal, FhaB est reconnu et exporté dans le périplasme par la machinerie Sec, où une signal-peptidase de type Lep clive le peptide signal. Une fois dans le périplasme, FhaB semble conserver une conformation non repliée puisque dans les extraits périplasmiques, le précurseur est retrouvé dans la fraction insoluble. Le passage de la membrane externe se fait via FhaC qui vraisemblablement reconnaît FHA au niveau de la face périplasmique de la membrane externe et assure ensuite sa translocation vers l'extérieur. A la surface de la bactérie, la protéase SphB1 clive FhaB en libérant ainsi dans le milieu la FHA mature de 220 kDa. La plus petite portion sécrétable de la FHA, qui contient donc le signal de sécrétion au complet, correspond aux 30 kDa du côté N-terminal et a été nommée Fha30. Cette région correspond principalement au domaine TPS. Nous avons entamé une analyse plus approfondie du domaine TPS pour identifier le signal de sécrétion de la FHA afin d'établir un modèle qui pourrait servir pour toute la famille de protéines TpsA. Nous avons obtenu en 2004 la première structure cristalline d'une protéine de la famille TpsA, celle de Fha30. Cette structure nous a permis de voir que le domaine TPS formait une hélice beta droite à section transversale triangulaire avec quatre brins beta anti-parallèles extra-helicaux. Etant donné que les prédictions de structure secondaire indiquent que la FHA contient tout le long une série de répétitions prédits en brins beta, l'hélice beta observée sur Fha30 se prolonge vraisemblablement dans la partie centrale de la FHA. La structure nous a permis de voir que le domaine TPS s'étendait environ 100 résidus plus loin que ce que l'on croyait jusque là, ce qui nous a amené à élargir notre zone de recherche pour l'identification du signal de sécrétion de la FHA. Le domaine TPS est composé d'une alternance de régions non conservées et conservées LC1-C1-LC2-C1 (pour « conserved » et « less conserved ») qui s'étendent jusqu'à 250 résidus environ du N-terminus. Pour trouver les résidus faisant partie du signal de sécrétion, un grand nombre de mutations ponctuelles ou de délétions correspondant aux brins ne faisant pas partie de l'hélice beta, ont été introduites dans le domaine TPS et leur effet sur la sécrétion a été testé chez B. Pertussis. Nous avons utilisé Fha30 comme modèle de la protéine complète, puisqu'elle comporte vraisemblablement le signal de sécrétion entier. Un certain nombre de mutations dispersées dans le domaine TPS a permis d'abolir ou de diminuer la sécrétion, y compris les deux délétions. Pour pouvoir attribuer cet affet à un problème d'interaction avec le transporteur, nous avons mis au point un test d'interaction. Par la technique de co-précipitation (« pull down ») on observe cette interaction, mais uniquement lorsque Fha30 se trouvait dans une conformation non repliée. Pour ensuite identifier les résidus du domaine TPS impliqués dans la reconnaissance par FhaC et pouvoir tester un nombre élevé de mutants du domaine TPS, j'ai mis au point des conditions pour observer l'interaction avec FhaC par une technique d'interaction sur membrane (« far-western blotting » ou overlay). Les formes mutées de Fha30 produites dans le cytoplasme (qui n'ont donc pas encore vu le trasporteur) étaient non solubles, indiquant leur état non natif, donc semblable à celui de l'état supposé de la FHA dans le périplasme. Grâce au far-western blot, j'ai pu identifier plusieurs résidues capables de réduire l'efficacité de reconnaissance de Fha30 par FhaC. Le signal de sécrétion de FHA est composite puisque certains résidus sont conservés entre les protéines TpsA et d'autres ne le sont pas, ce qui peut rendre compte de la spécificité entre chaque transporteur TpsB et sa protéine TpsA. De plus, certains résidus lorsqu'ils étaient mutés étaient capables d'abolir la sécrétion de FHA alors qu'ils n'étaient pas impliqués dans l'interaction avec FhaC. Nous pensons qu'ils auraient plutôt un rôle structural, c'est à dire dans le repliement et/ou dans la stabilisation de la structure native de la FHA. Ainsi, le domaine TPS aurait deux fonctions : interaction avec FhaC et rôle structural important. Etant donné la conformation périplasmique non native de la FHA, nous avons émis l'hypothèse que des protéines telles que des chaperons périplasmiques pourraient protéger l'intermédiaire périplasmique contre la dégradation avant que la translocation via FhaC n'ait lieu. Plusieurs candidats ont été identifiés et ils ont la capacité d'empêcher l'agrégation de la Fha30 in vitro. L'un de ces candidats est une chaperon-protéase qui est essentielle à la sécrétion de la FHA. De plus, c'est uniquement son activité chaperon qui est importante pour la sécrétion de la FHA. Alors que la partie N-terminale de FhaC est importante pour l'interaction avec la FHA, des études de conductance sur FhaC, effectués avec Albano Méli au CBS de Montpellier, sur une série de mutants de FhaC ont montré que FhaC formait un canal perméable aux ions, et que sa partie C-terminale est suffisante pour former ce canal. Il existe une certaine corrélation entre l'activité de sécrétion de la FHA et les propriétés canal de FhaC, ce qui pourrait indiquer que la FHA emprunterait le canal présent dans le monomère FhaC pour traverser la membrane.
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Sapriel, Guillaume. „Etude du rôle des protéines chaperon dans la sécrétion des protéines par la voie ABC (ATP-Binding Cassette) chez les bactéries à gram-négatif“. Paris 7, 2002. http://www.theses.fr/2002PA077222.
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Simard, François. „Régulation de l'expression génique et de la sécrétion des cytokines chez le neutrophile humain : implication de la voie des MAPK MEK/ERK et son découplage“. Mémoire, Université de Sherbrooke, 2012. http://hdl.handle.net/11143/6361.
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Le neutrophile humain est une composante essentielle du système immunitaire inné. Il joue un rôle-clé comme phagocyte professionnel pour la défense contre les agents externes. De plus, il a la capacité de libérer un large éventail de produits antimicrobiens et de produire également diverses protéines immunorégulatrices, dont une vaste gamme de cytokines (IL-8, MIP-1[alpha]/[beta], IP-10, I-TAC, TNF-[alpha], etc.). La génération de ces dernières permet le recrutement massif de neutrophiles et d'autres populations leucocytaires au site inflammatoire, contribuant ainsi au bon déroulement de la réponse inflammatoire. La génération de cytokines par le neutrophile humain est induite par différents agonistes, dont des molécules bactériennes (LPS, peptides N-formylés) ou les médiateurs inflammatoires (cytokines, chimiokines, facteurs de croissance). Ces molécules vont activer des récepteurs à la surface du neutrophile et déclancher ainsi plusieurs voies de signalisation et des facteurs transcriptionnels. Dans la présente étude, nous avons déterminé l'impact de la voie de signalisation MEK/ERK dans l'induction de l'expression des cytokines chez le neutrophile humain isolé du sang périphérique. Nous avons noté un découplage du module MEK/ERK suite à une stimulation avec certains agonistes pro-inflammatoires (LPS, TNF-[alpha]), mais par pour d'autres (fMLP, GM-CSF). L'utilisation de différentes classes d'agonistes et d'inhibiteurs pharmacologiques des voies de signalisation nous a permis de mettre en évidence les rôles différents de MEK et de ERK en ce qui concerne la sécrétion et la transcription de cytokines. Les kinases ERK et MEK sont toutes deux impliquées dans la sécrétion de cytokines, mais ERK est la seule des deux qui est associée à la transcription. Par contre, nous n'avons toujours pas identifié la kinase responsable de l'activation de ERK lorsque le module MEK/ERK est découplé. Enfin, à défaut d'identifier la kinase qui phosphoryle ERK, nous montrons que la MAP3K, TAK1, agit en amont de ERK et de MEK chez les neutrophiles. Nos résultats suggèrent que les thérapies basées sur l'inhibition de MEK devront être complémentées d'une inhibition de ERK, en particulier dans des maladies inflammatoires chroniques à forte prédominance neutrophilique.
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Arnoux, Pascal. „Étude structurale de la protéine HasA, un hémophore impliqué dans une voie originale d'acquisition du fer“. Paris 11, 2000. http://www.theses.fr/2000PA112081.
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Le fer est un élément essentiel pour la plupart des organismes vivants ; associé à des métalloprotéines, il intervient dans des mécanismes aussi variés que la photosynthèse, la respiration ou le transport d'oxygène. Les bactéries ont développé plusieurs voies d'acquisition de cet élément en fonction des changements du milieu extérieur. En cas de contact avec un hôte une source potentielle de fer se trouve dans les érythrocytes qui contiennent jusqu'à 300 mg. Ml 1 d'hémoglobine, une protéine contenant un cofacteur à fer : l'hème. Quelques bactéries, dont Serratia marcescens, sont capables d'utiliser le fer de l'hème de l'hémoglobine par l'intermédiaire de la sécrétion d'un hémophore appelé HasA. Celui-ci capte l'hème libre comme l'hème lié à l'hémoglobine, afin de l'acheminer vers le récepteur de la membrane externe (HasR) lequel, en retour, assure son transport vers l'intérieur de la cellule. Le mécanisme par lequel la protéine HasA est sécrétée fait appel à un transporteur de type ABC. Nous avons déterminé la structure tridimensionnelle du complexe hème / HasA dans trois formes cristallines. Un feuillet largement courbe, sur lequel viennent interagir les quatre hélices, forme le corps de la protéine. À l'interface entre ces deux parties de la structure est localisé le site de fixation de l'hème. Cette fixation se fait par l'intermédiaire de deux ligands axiaux : l'histidine 32 et la tyrosine 75. La géométrie du site de fixation de l'hème nous permet d'expliquer deux des principales propriétés biophysiques de la protéine HasA : d'une part le potentiel redox très bas de l'hème (550 mv) et d'autre part l'affinité relative de l'hème pour la protéine qui doit être à la fois élevée (pour capter l'hème) et modulable (pour pouvoir rendre l'hème au récepteur HasR). L'absence de densité électronique pour les quatorze derniers résidus importants pour la sécrétion indique que le motif relativement conservé ellaa est exposé au solvant et est flexible. Cette mobilité pourrait être un pré-requis dans le processus de sécrétion par la voie ABC-dépendante. La structure tridimensionnelle de l'hémophore HasA définit les bases structurales des mécanismes impliqués dans la captation de l'hème. Des expériences de mutagénèse dirigée permettront d'obtenir d'avantage d'informations concernant cette voie originale d'acquisition du fer.
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Delattre, Anne-Sophie. „Etudes fonctionnelles de FhaC de Bordetella pertussis, transporteur prototype de protéines à grande taille chez les bactéries à Gram négatif“. Thesis, Lille 2, 2010. http://www.theses.fr/2010LIL2S041.
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La coqueluche est une maladie respiratoire aiguë, causée par la bactérie à Gram négatif Bordetella pertussis. L’hémagglutinine filamenteuse (FHA) est une adhésine responsable de la colonisation du tractus respiratoire de l’hôte, ainsi qu’un antigène vaccinal important. La FHA est transportée à la surface de la bactérie par une protéine de membrane externe, FhaC, selon la voie de sécrétion à deux partenaires (voie TPS). Le couple FHA/FhaC sert de modèle aux systèmes TPS. FhaC fait également partie de la superfamille de transporteurs TpsB/Omp85 qui regroupe des protéines de la membrane externe des bactéries et de certains organites eucaryotes (dont les chloroplastes et mitochondries). La structure cristallographique de FhaC est la première à avoir été obtenue parmi les protéines de cette superfamille. Le tonneau β de FhaC est composé de 16 brins anti-parallèles, reliés par des boucles extracellulaires ou périplasmiques. Le canal formé par FhaC est obstrué par une hélice amino-terminale (H1) et une boucle de surface conservée dans la superfamille repliée à l’intérieur du tonneau (L6). Le domaine périplasmique de FhaC contient deux domaines « POTRA » (pour Polypeptide Transport Associated) en tandem. Ces domaines sont conservés dans la superfamille et seraient responsables d’interactions protéine-protéine. Mon travail de thèse a consisté à appréhender, à partir de la structure de FhaC, les mécanismes moléculaires de la sécrétion de la FHA. J’ai étudié le rôle d’une tétrade de résidus conservés dans la boucle L6, puis j’ai caractérisé les déterminants d’interaction présents dans les domaines POTRA de FhaC. Nos travaux ont montré que la tétrade conservée VRGY localisée à l’extrémité de L6 est impliquée dans la fonction de FhaC. Les substitutions de l’arginine et de la tyrosine en alanine (FhaC-R450A et FhaC-Y452A) ont montré que l’arginine était essentielle à la sécrétion de la FHA. De plus, la structure cristallographique de FhaC-R450A indique que la substitution ne perturbe pas la position de L6. L’analyse des propriétés du canal de ces deux variants reconstitués en bicouche lipidique montre en revanche une perturbation des canaux de FhaC-Y452A. Les substitutions n’altèrent pas l’étape de reconnaissance de FHA par FhaC. L’arginine serait donc impliquée dans une étape tardive de la sécrétion, alors que la tyrosine semble participer au positionnement de L6 ou à la régulation de sa mobilité au cours de la sécrétion et pourrait stabiliser FhaC « au repos ». J’ai également caractérisé les déterminants d’interaction des deux domaines POTRA de FhaC et montré que des résidus de l’extrémité de POTRA1 sont impliqués dans le recrutement de la FHA, probablement par interaction électrostatique. Deux sites majeurs d’interaction ont été identifiés dans des sillons hydrophobes des POTRA1 et 2, qui seraient compatibles avec l’hypothèse que les deux protéines interagissent par « beta augmentation ». L’étude du couple FHA/FhaC est un modèle pour la voie de sécrétion TPS. Nos résultats indiquent que les motifs structuraux conservés sont impliqués dans la fonction de la protéine et apportent des précisions sur les mécanismes moléculaires de la voie TPS et des transporteurs de la superfamille TpsB/Omp85Whooping cough is an acute respiratory disease caused by the Gram-negative bacterium Bordetella pertussis. The filamentous hemagglutinin (FHA) is an adhesin involved in colonization of the host’s respiratory tract, and a major vaccine antigen. FHA is transported to the cell surface by an outer membrane protein, FhaC by the two-partner secretion (TPS) pathway. The FHA/FhaC pair is a model for TPS systems. FhaC belongs to the TpsB/Omp85 superfamily whose members are found in the outer membranes of bacteria and organelles such as chloroplasts and mitochondria. The crystal structure of FhaC has been the first in this superfamily. The β barrel of FhaC is composed of 16 anti-parallel strands, linked by extracellular loops and periplasmic turns. The FhaC channel is blocked by an amino-terminal helix (H1) and a conserved extracellular loop (L6). The periplasmic domain of FhaC has two POTRA domains (“Polypeptide Transport Associated”) that are conserved in the TpsB/Omp85 superfamily and involved in protein-protein interactions. My PhD work aimed at investigating the molecular mechanisms of FHA secretion based on the FhaC structure. I analyzed the role of a conserved tetrad in the L6 loop, and I also characterized the determinants of interaction with FHA in the POTRA domains of FhaC. Our work has shown that the conserved VRGY tetrad of L6 is involved in FhaC’s function. Substitution of arginine and tyrosine by alanine (FhaC-R450A et FhaC-Y452A) indicated that the arginine residue is essential for FHA secretion. Moreover, the crystal structure of FhaC-R450A showed that the positioning of L6 is similar to that in the wild type protein. Channel analyses of both variants reconstituted in lipid bilayers indicated that the FhaC-Y452A channels are affected. Both substitutions have no effect on the recognition step in the periplasm. The arginine residue is thus most likely involved in a late step of FHA secretion, while the tyrosine residue might participate in the positioning of L6 positioning or the regulation of its mobility in the course of secretion; it could stabilize FhaC in its “resting state”. I also characterized the determinants of interaction with FHA of the POTRA domains of FhaC and showed that residues at the extremity of POTRA1 might be involved in FHA recruitment, probably by electrostatic interactions. Two major sites of interactions were identified in hydrophobic grooves in both POTRA1 and 2, which are in agreement with a model of interaction between the 2 proteins by “beta augmentation”. The FHA/FhaC pair is a model for the TPS pathway. Our results indicate that conserved structural motifs of FhaC are involved in the function of the protein and give new insights into the molecular mechanisms of the TPS pathway and of transporters of the TpsB/Omp85 superfamily
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Samba, Louaka Ascel Régis. „Détermination de la voie de signalisation cellulaire eucaryote détournée par la protéine bactérienne Cif“. Toulouse 3, 2009. http://thesesups.ups-tlse.fr/614/.
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Cif est une protéine produite par certaines souches d'Escherichia coli entéropathogènes (EPEC). Ces bactéries disposent d'un arsenal d'effecteurs qui sont injectés dans la cellule hôte par une seringue moléculaire (le système de sécrétion de type III). Cif est l'un de ces effecteurs qui appartient à la famille des cyclomodulines. Cette dernière est composée de molécules bactériennes capables de moduler le cycle cellulaire des cellules eucaryotes. Dans les cellules épithéliales, Cif provoque un arrêt du cycle cellulaire (effet cytostatique) à la transition G2/M qui est associé à l'accumulation de la forme inactive de CDK1, inducteur universel de mitose. Cet effet est à l'origine de l'appellation Cif, Cycle inhibiting factor. J'ai démontré que l'effet cytostatique n'est pas uniquement la conséquence d'un arrêt des cellules à la transition G2/M. En effet, suivant la phase du cycle cellulaire lors de l'infection des cellules avec une EPEC qui exprime Cif, la translocation de Cif peut provoquer un arrêt en G1/S ou en G2/M. Ces arrêts sont associés à la stabilisation de protéines p21waf1 et p27kip1, qui régulent les complexes CDK/cyclines responsables des transitions des phases G1/S et G2/M du cycle cellulaire. Nous avons récemment démontré que des homologues fonctionnels de Cif étaient présents dans d'autres bactéries tels que Burkholderia pseudomallei, Yersinia pseudotuberculosis, Photorhabdus asymbiotica (pathogènes humains) et Photorhabdus luminescens (symbiote d'un nematode pathogène d'insecte). Ces protéines, qui partagent une structure commune et un même site catalytique, appartiennent à la superfamille des cystéine protéases et acétyl transférases. Même si le lien entre cette activité enzymatique et l'arrêt du cycle cellulaire reste à découvrir, on peut néanmoins définir Cif comme une nouvelle famille de protéines partagée par des souches phylogénétiquement très éloignées, pathogènes d'organismes variés, d'insectes comme de mammifères. .The cycle inhibiting factor (Cif) belongs to a family of bacterial toxins, the cyclomodulins, that deregulate the host cell cycle. Upon injection into the host cell by pathogenic Escherichia coli, Cif inhibits G2/M transition via sustained inhibition of the mitosis inducer CDK1. I show that Cif induces not only G2 but also G1 cell cycle arrest depending on the stage of cells in the cell cycle during the infection. Those arrests were associated with stabilization of the cyclin-dependent kinase (CDK) inhibitors p21waf1 and p27kip1. CDKs complexes promote of the cell cycle transitions at both G1/S and G2/M. We recently demonstrated that functional Cif homologs are present in human pathogenic bacterial strains such as Burkholderia pseudomallei, Yersinia pseudotuberculosis, Photorhabdus asymbiotica and in symbiotic (for nematode) pathogenic (for insect) bacteria Photorhabdus luminescens. Those proteins, that share similar structures and catalytic sites, belong to the superfamily of enzymes including cystein proteases and acetyltransferases. Although the link between the activity and the cell cycle arrest remain to established, Cif proteins form a growing family of cyclomodulins that interact with very distinct hosts including insects, nematodes and humans. .
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Raux, Maurice. „Evaluation et comparaison des immunoglobulines présentes dans les sécrétions de sujets infectés par le virus VIH-1. Application aux essais vaccinaux“. Rouen, 1999. http://www.theses.fr/1999ROUES044.
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En vue de l'exploration de l'immunité muqueuse chez des sujets sains vaccinés par un vaccin SIDA, une étude portant sur une population de sujets infectés par le VIH-1 et au stade CDC II de la maladie a été menée. Les IgG totales, les IgA totales et les IgG et IgA anti-gp 120 MN et anti-p24 LAI ont été testés dans les salives totale, parotidienne et sous-linguale, les sécrétions cervico-vaginales (CVS) le liquide séminal et les prélèvements rectaux. L'albumine sérique était mesurée afin de calculer les coefficients relatifs d'excrétion (RCE). 44 volontaires infectés par le VIH-1 et 52 volontaires sains ont été inclus dans cette étude. Les concentrations en IgG totales dans tous les fluides sont plus élevées chez les sujets séropositifs que dans le groupe contrôlé. Le calcul des RCE a permis de mettre en évidence 3 catégories de prélèvements muqueux : des sécrétions sans production locale d'immunoglobulines comme le sperme, des sécrétions produisant des IgA et dont les IgG ont une origine transudative comme les fluides salivaires et rectaux et enfin les CVS pour lesquelles des IgA et des IgG sont produites localement. Pour tous les fluides la réponse anti-VIH-1 était portée principalement par l'isotype IgG, les titres les plus élevés étant observés dans les CVS. La réponse des IgA anti-VIH-1 est plus faible dans les sécrétions par rapport au sérum. Dans un deuxième temps, la nature de la réponse IgG a été explorée plus avant et les sous-classes d' IgG ont été testées. Le calcul des RCE indique une origine transudative des sous-classes, excepté dans les CVS pour lesquelles on détecte des IgG 1, IgG 2 et IgG 4 produites localement. Seules les CVS montrent une production locale en IgG 1 anti-gp120 MN. Les techniques Elisa développées ont été utilisées pour évaluer la réponse muqueuse anti-VIH dans deux essais vaccinaux des sujets vaccinés par voie parentérale et les niveaux de réponse ont pu être comparés à ceux obtenus chez les sujets séropositifs.
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Dumont, Adélie. „L'action ambivalente de l'agent anti-cancéreux 5-Fluorouracile sur les cellules myéloïdes immunosuppressives sous contrôle de l'acide docosahexaénoïque : Rôle de l'inflammasome NLRP3 et de la voie JNK dans la sécrétion de l'IL-1beta“. Thesis, Bourgogne Franche-Comté, 2018. http://www.theses.fr/2018UBFCI013/document.
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Selon une étude précédente, une limitation à l'efficacité anticancéreuse du 5-Fluorouracile (5-FU) repose sur la sécrétion d'IL-1β par des cellules myéloïdes immunosuppressives (MDSC). La libération d'IL-1β mature provient de l'activation de NLRP3 induite par le 5- FU et de l’augmentation de l’activité de la caspase-1 dans les MDSC, qui favorise la reprise de la croissance tumorale chez des souris traitées avec 5-FU. L'acide docosahexaénoïque (DHA) appartient à la famille des acides gras oméga-3 et possède des propriétés anticancéreuses et anti-inflammatoires qui pourraient améliorer la chimiothérapie à base de 5-FU. Dans ces travaux, nous démontrons que le DHA inhibe la sécrétion d'IL 1β induite par le 5 FU dans une lignée cellulaire de MDSC (MSC-2). Chez des souris porteuses de tumeurs traitées par 5 FU, nous avons montré qu'un régime alimentaire enrichi en DHA réduit la concentration d'IL 1β circulante et la récidive tumorale après une injection de 5 FU. Le traitement par 5 FU conduit à l'activation de JNK dans les MDSC et l'inhibiteur de JNK SP600125 diminue la sécrétion d’IL-1β. De plus, le DHA est capable de contrecarrer l'activation de JNK induite par 5-FU dans les MDSC, entraînant la chute de la libération de l’IL 1β. De plus, nous avons montré que la supplémentation en DHA dans les MDSC exposées au 5 FU diminuait l’activité de la caspase-1 ainsi que la modification des interactions entre NLRP3 et la caspase-1, ASC ou β-arrestine-2. De manière inattendue, la régulation de l'activité de la caspase-1 par le DHA était indépendante de JNK, ce qui suggère que le DHA pourrait contrôler la sécrétion de l’IL 1β par le biais de l'inflammasome NLRP3 et de la voie JNK. Enfin, nous avons trouvé une corrélation négative entre la teneur en DHA dans le plasma et l'induction du niveau d'IL 1β ou de la caspase-1 dans le sang de patients traités par chimiothérapie à base de 5-FU.L’ensemble de ces données fournissent de nouvelles informations sur la régulation de la sécrétion de l’IL-1β par le DHA et son bénéfice potentiel dans la chimiothérapie à base de 5-FUA limitation to 5-Fluorouracil (5-FU) anti-cancer efficacy relies on the secretion of IL-1β by myeloid-derived suppressor cells (MDSC) according to a previous pre-clinical report. The release of mature IL-1β originates from 5 FU mediated NLRP3 activation with increased caspase-1 activity in MDSC and sustains tumor growth recovery in 5 FU treated mice. Docosahexaenoic acid (DHA) belongs to omega-3 fatty acid family and harbors both anti cancer and anti inflammatory properties which might could improve 5 FU chemotherapy. Here, we demonstrate that DHA inhibits 5 FU induced IL 1β secretion produced by a MDSC cell line (MSC-2). In tumor-bearing mice treated with 5 FU, we showed that a DHA enriched diet reduces circulating IL 1β concentration and tumor recurrence after 5 FU injection. 5 FU treatment led to JNK activation in MDSC and JNK inhibitor SP600125 decreased IL 1β secretion. Moreover, DHA was able to counteract 5 FU mediated JNK activation in MDSC leading to the drop of IL 1β release. In addition, we showed that DHA supplementation in 5 FU exposed MDSC decreases caspase-1 activity along with a modification of the interactions between NLRP3 and caspase-1, ASC or β arrestin-2. Unexpectedly, the regulation of caspase-1 activity by DHA was independent of JNK which suggests that DHA could control IL 1β secretion through both NLRP3 inflammasome and JNK pathway. Interestingly, we found a negative correlation between DHA content in plasma and the induction of circulating IL 1β level or caspase-1 activity in patients treated with 5 FU based chemotherapy.Together, these data provide new insights on the regulation of IL 1β secretion by DHA and its potential benefit in 5-FU based chemotherapy
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Rabhi, Nabil. „Régulation de l'homéostasie du glucose et de la sécrétion d'inuline par le cofacteur transcriptionnel KAT2B - implication dans le développement du diabète de type II : rôle de KAT2B dans la cellule β pancréatique“. Thesis, Lille 2, 2016. http://www.theses.fr/2016LIL2S058.
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Les voies de signalisation activées par la réponse induite au mauvais repliement des protéines dans le réticulum endoplasmique (UPRer) jouent un rôle important dans l'adaptation de la cellule p pancréatique à son environnement. Le dysfonctionnement de ces voies déclenche une augmentation de l'expression des marqueurs du stress du RE, conduisant à la défaillance de la cellule p, à un défaut de sécrétion d'inuline et peut-être au développement du DT2. Alors que de nombreuses études ont montré une altération de l'expression de ces marqueurs dans les îlots de souris diabétiques ou les îlots de patients diabétiques, les mécanismes moléculaires impliqués restent mal connu. Dans ce manuscrit, nous montrons que les souris invalidées totalement ou spécifiquement pour le gène de la lysine acétyltransférase Kat2b présentent un défaut de sécrétion d'insuline et une gluco-intolérance marquée. Une analyse de l'ensemble des gènes régulés par Kat2b a révélé un rôle critique de ce cofacteur dans le maintien l'expression des gènes de l'UPR, ainsi que la fonction de la cellule p lors d'un stress métabolique. Nous observons que l'expression de Kat2b est diminuée dans les îlots de souris db/db et les îlots de patients diabétiques. De plus, l'expression de Kat2b est positivement corrélée avec l'expression de gènes de l'UPR dans les îlots humains. En conclusion, Kat2b est un régulateur transcriptionnel crucial pour la fonction et l'adaptation de la cellule p durant un stress métabolique en contrôlant l'UPR. Nous pensons que Kat2b représente une cible thérapeutique prometteuse pour le traitement du DT2The Endoplasmic Reticulum (ER) unfolded protein response (UPRer) pathway plays an important role for pancreatic p cells to adapt their cellular responses to environmental cues and metabolic stress. Although altered UPRer gene expression appears in rodent and human type 2 diabetic (T2D) islets, the underlying molecular mechanisms remain unknown. We show here that germ-line and p-cell specific disruption of the lysine acetyltransferase 2B (Kat2b) gene in mice leads to impaired insulin secretion and glucose intolerance. Genome wide analysis of Kat2b-regulated genes and functional assays revealed a critical role for Kat2b in maintaining UPRer gene expression and subsequent p-cell function. Importantly, Kat2b expression was decreased in db/db and in human T2D islets and correlated with UPRer genes in normal human islets. In conclusion, Kat2b is a crucial transcriptional regulator for adaptive P-cell function during metabolic stress by controlling UPRer and represents a promising target for T2D prevention and treatment
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Perrier, Anabelle. „Etude du trafic intracellulaire de la protéine M du coronavirus du syndrome respiratoire du Moyen-Orient (MERS-CoV)“. Thesis, Lille 2, 2019. http://www.theses.fr/2019LIL2S018.
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Les coronavirus sont une famille de virus émergents, comme l’ont montré les émergences récentes des coronavirus SARS-CoV (Severe acute respiratory syndrome coronavirus) et MERS-CoV (Middle-East respiratory syndrome coronavirus), pathogènes pour l’homme. Nous ne disposons ni d’antiviraux spécifiques ni de vaccins pour lutter contre les coronavirus.Des quatre protéines structurales du virus, la protéine M est le moteur de l’assemblage viral. Exprimée seule en cellules, elle peut dépasser le site d’assemblage dans la voie de sécrétion. Nous avons confirmé la localisation de MERS-M dans le TGN(trans-golgi network) et identifié deux signaux dans son domaine C-terminal impliqués dans son trafic : un signal DxE d’export du réticulum, et un signal KxGxYR de rétention dans le TGN. Le signal DxE avait déjà été identifié sur une autre protéine virale, tandis que le signal KxGxYR est un nouveau motif. Pour confirmer son rôle nous avons construit des chimères entre MERS-M et la protéine M du coronavirus IBV (Infectious bronchitis virus), localisée dans le compartiment intermédiaire entre le RE et le Golgi (ERGIC), et démontré que pour les deux protéines le domaine C-terminal est déterminant pour leur localisation spécifique.Un second projet de caractérisation de l’activité antivirale de la digoxigénine contre le HCoV-229E a été initié. Nous avons démontré que cette drogue inhibe le virus à une étape post-entrée, avec une concentration inhibitrice médiane (IC50) de 250nM, et qu’elle n’est pas toxique pour les cellules à cette concentration. Elle inhibe aussi l’infection par le virus de l’hépatite C, et elle semble cibler une étape précoce de la réplication des virus RNA (+)Coronaviruses are an important family of emerging pathogens, as shown by therecent emergence of pathogenic SARS-CoV (Severe acute respiratory syndromecoronavirus) and MERS-CoV (Middle-East respiratory syndrome coronavirus) in the lasttwo decades. There are still some knowledge gaps concerning the biology ofcoronaviruses and we do not have any specific treatment or vaccine.Among the four structural proteins of the virus, the M protein is considered to bethe motor of viral assembly. Expressed alone in cells, M proteins can go beyond theassembly site of the virus (Endoplasmic reticulum-Golgi intermediate compartment,ERGIC) in the secretory pathway. We confirmed MERS-M localization in the Trans-Golginetwork (TGN) and identified two signals involved in its intracellular trafficking in its Cterminaldomain: a DxE ER export signal, and a KxGxYR TGN retention signal. The DxEsignal was already identified on another viral protein, whereas the KxGxYR signal is anew motif. To confirm the role of KxGxYR signal in TGN retention, we constructedchimeras between MERS-M and the protein M of the Infectious bronchitis virus (IBV),located in the ERGIC. Our results suggest that for both MERS-M and IBV-M the Cterminaldomain is determinant for the specific localization of the proteins.We also initiated a project on the characterization of the antiviral activity ofdigoxigenin against HCoV-229E. Our results demonstrated that it inhibits HCoV-229E ata post-entry step, with an IC50 of 250nM, and that it is not toxic at this concentration.Digoxigenin also inhibits hepatitis C virus (HCV) and likely has an effect on an early stepof replication of RNA (+) viruses
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Goueslain, Lucie. „GBF1 est un facteur cellulaire requis pour la réplication du virus de l'hépatite C“. Phd thesis, Université du Droit et de la Santé - Lille II, 2010. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00480397.
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L'hépatite C est un problème de santé publique majeur aggravé par l'efficacité limitée des thérapies actuelles et l'absence de vaccin. Il est donc important d'identifier de nouvelles cibles thérapeutiques potentielles et pour cela une meilleure connaissance du cycle infectieux du virus de l'hépatite C (VHC) est indispensable. Comme pour de nombreux autres virus à ARN de polarité positive, l'étape de réplication du VHC est associée à d'importants remaniements membranaires qui conduisent à la formation d'un réseau membranaire désigné membranous web et de structures membranaires plus petites associées au reticulum endoplasmique. Cependant, la formation des complexes de réplication du VHC, en association étroite avec ces membranes cellulaires modifiées reste énigmatique. Au niveau cellulaire, de petites GTPases sont connues pour réguler la dynamique des membranes. Nos travaux montrent que l'infection par le VHC est inhibée, de façon dose-dépendante, par la bréfeldine A (BFA), un inhibiteur spécifique de l'action de GTPases de la famille ARF. L'activation des petites GTPases ARF est médiée par des facteurs d'échange nucléotidiques. En utilisant des ARN interférants ciblant les trois facteurs d'échange nucléotidique sensibles à la BFA nous avons observé que seule la réduction de l'expression de l'un d'entre eux, appelé GBF1, inhibe l'infection par le VHC. Ces résultats ont été confirmés par l'utilisation d'un inhibiteur chimique spécifique. D'autre part, la surexpression d'un mutant de GBF1 résistant à la BFA permet de restaurer l'infection par le VHC en présence de BFA. Par ailleurs, des analyses en immunofluorescence et microscopie électronique réalisées dans un contexte non réplicatif montrent que la BFA n'inhibe pas les réarrangements membranaires associés à la mise en place du membranous web. Collectivement nos résultats suggèrent que GBF1 est impliqué dans l'activité des complexes de réplication du VHC et notre travail établit un lien entre la voie de sécrétion de la cellule hôte et la réplication de l'ARN du VHC.
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Pepin, Émilie. „Étude dans la cellule bêta pancréatique de voies inhibitrices de la sécrétion d'insuline liées au métabolisme des lipides“. Thèse, 2013. http://hdl.handle.net/1866/9717.
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Le diabète de type 2 (DT2) est une maladie métabolique complexe causée par des facteurs génétiques mais aussi environnementaux, tels la sédentarité et le surpoids. La dysfonction de la cellule β pancréatique est maintenant reconnue comme l’élément déterminant dans le développement du DT2. Notre laboratoire s’intéresse à la sécrétion d’insuline par la cellule β en réponse aux nutriments calorigéniques et aux mécanismes qui la contrôle. Alors que la connaissance des mécanismes responsables de l’induction de la sécrétion d’insuline en réponse aux glucose et acides gras est assez avancée, les procédés d’inhibition de la sécrétion dans des contextes normaux ou pathologiques sont moins bien compris. L’objectif de la présente thèse était d’identifier quelques-uns de ces mécanismes de régulation négative de la sécrétion d’insuline dans la cellule β pancréatique, et ce en situation normale ou pathologique en lien avec le DT2.
La première hypothèse testée était que l’enzyme mitochondriale hydroxyacyl-CoA déshydrogénase spécifique pour les molécules à chaîne courte (short-chain hydroxyacyl-CoA dehydrogenase, SCHAD) régule la sécrétion d’insuline induite par le glucose (SIIG) par la modulation des concentrations d’acides gras ou leur dérivés tels les acyl-CoA ou acyl-carnitine dans la cellule β. Pour ce faire, nous avons utilisé la technologie des ARN interférants (ARNi) afin de diminuer l’expression de SCHAD dans la lignée cellulaire β pancréatique INS832/13. Nous avons par la suite vérifié chez la souris DIO (diet-induced obesity) si une exposition prolongée à une diète riche en gras activerait certaines voies métaboliques et signalétiques assurant une régulation négative de la sécrétion d’insuline et contribuerait au développement du DT2. Pour ce faire, nous avons mesuré la SIIG, le métabolisme intracellulaire des lipides, la fonction mitochondriale et l’activation de certaines voies signalétiques dans les îlots de Langerhans isolés des souris normales (ND, normal diet) ou nourries à la dière riche en gras (DIO)
Nos résultats suggèrent que l’enzyme SCHAD est importante dans l’atténuation de la sécrétion d’insuline induite par le glucose et les acides aminés. En effet, l’oxydation des acides gras par la protéine SCHAD préviendrait l’accumulation d’acyl-CoA ou de leurs dérivés carnitine à chaîne courtes potentialisatrices de la sécrétion d’insuline. De plus, SCHAD régule le métabolisme du glutamate par l’inhibition allostérique de l’enzyme glutamate déshydrogénase (GDH), prévenant ainsi une hyperinsulinémie causée par une sur-activité de GDH.
L’étude de la dysfonction de la cellule β dans le modèle de souris DIO a démontré qu’il existe une grande hétérogénéité dans l’obésité et l’hyperglycémie développées suite à la diète riche en gras. L’orginialité de notre étude réside dans la stratification des souris DIO en deux groupes : les faibles et forts répondants à la diète (low diet responders (LDR) et high diet responder (HDR)) sur la base de leur gain de poids corporel. Nous avons mis en lumières divers mécanismes liés au métabolisme des acides gras impliqués dans la diminution de la SIIG. Une diminution du flux à travers le cycle TG/FFA accompagnée d’une augmentation de l’oxydation des acides gras et d’une accumulation intracellulaire de cholestérol contribuent à la diminution de la SIIG chez les souris DIO-HDR. De plus, l’altération de la signalisation par les voies AMPK (AMP-activated protein kinase) et PKC epsilon (protéine kinase C epsilon) pourrait expliquer certaines de ces modifications du métabolisme des îlots DIO et causer le défaut de sécrétion d’insuline. En résumé, nous avons mis en lumière des mécanismes importants pour la régulation négative de la sécrétion d’insuline dans la cellule β pancréatique saine ou en situation pathologique. Ces mécanismes pourraient permettre d’une part de limiter l’amplitude ou la durée de la sécrétion d’insuline suite à un repas chez la cellule saine, et d’autre part de préserver la fonction de la cellule β en retardant l’épuisement de celle-ci en situation pathologique. Certaines de ces voies peuvent expliquer l’altération de la sécrétion d’insuline dans le cadre du DT2 lié à l’obésité. À la lumière de nos recherches, le développement de thérapies ayant pour cible les mécanismes de régulation négative de la sécrétion d’insuline pourrait être bénéfique pour le traitement de patients diabétiques.Type 2 diabetes (T2D) is a complex metabolic disease caused by genetic as well as environmental factors, such as sedentarity and obesity. Pancreatic β cell dysfunction is now recognized as the key factor in T2D development. Our laboratory is studying the mechanisms of regulation of insulin secretion by the pancreatic β cell in response to nutrients. While the knowledge of the mechanisms responsible for initiation of insulin secretion in response to glucose and fatty acids is quite advanced, the inhibitory processes of insulin secretion in normal or pathological situations are still poorly understood. This doctoral thesis has focused on the identification of some of the mechanisms responsible for negative regulation of insulin secretion in pancreatic β cell. We have addressed this issue under normal situation or pathological conditions related to T2D. We first tested the hypothesis by which a mitochondrial enzyme, short-chain hydroxyacyl-CoA dehydrogenase (SCHAD), negatively regulates glucose-induced insulin secretion (GIIS) by limiting the concentrations of some fatty acids and their derivatives such as acyl-CoA or acyl-carnitine molecules in the β cell. For this purpose, the downregulation of SCHAD by RNA interference (RNAi) was used in the pancreatic β cell line INS832/13. Then, we tested wether a prolonged administration of high-fat diet to mice (diet-induced obesity mouse model, DIO) would modulate intracellular metabolic and molecular pathways responsible for inhibition of insulin secretion. C57BL/6 mice were therefore fed a high-fat diet for 8 weeks followed by insulin secretion, intracellular lipid metabolism, mitochondrial function and intracellular signaling measurements on isolated pancreatic islets of Langerhans of those mice. Our results suggest that SCHAD negatively regulates GIIS and amino acid-induced insulin secretion. We propose that fatty acid oxidation by SCHAD would prevent the accumulation of short-chain acyl-CoAs or acyl-carnitines capable of potentiating insulin secretion. In addition, SCHAD regulates glutamate metabolism by the allosteric inhibition of glutamate dehydrogenase (GDH) preventing the hyperinsulinemia caused by excessive GDH activity. The study of β cell dysfunction in the DIO mouse model stratified LDR and HDR highlighted various fatty acid metabolism pathways involved in the reduction of GIIS. A decrease in the triglycerides/free fatty acid (TG/FFA) cycling associated with an increase in fatty acid oxidation and intracellular accumulation of cholesterol was shown to contribute to the decreased GIIS in DIO-HDR mice. Furthermore, alteration of AMP-activated kinase (AMPK) and protein kinase C epsilon (PKC epsilon) signaling pathways would be responsible for those alterations in metabolic pathways observed in DIO islets and cause decreased insulin secretion. In summary, we have shed light on important pathways negatively regulating insulin secretion in pancreatic β cell. These pathways could either limit the amplitude or duration of insulin secretion after a meal, or help to preserve β-cell function by delaying exhaustion. Some of those signaling pathways could explain the altered insulin secretion observed in T2D obese patients. In light of our research, the development of therapies targeting pathways that negatively regulate insulin secretion may be beneficial for treating diabetic patients.
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Bergeron, Valérie. „Étude des voies de signalisation en aval du récepteur FFA1/GPR40 dans la cellule bêta pancréatique“. Thèse, 2017. http://hdl.handle.net/1866/20252.
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Gouronnec, Alizée. „Analyse protéomique de la sénescence induite par la chimiothérapie dans le cancer de l'ovaire“. Thesis, 2020. http://hdl.handle.net/1866/25172.
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Les patientes atteintes d’un cancer de l’ovaire à cellules claires (COCC) de stade avancé ont un très faible taux de survie après 5 ans à cause d’une forte résistance aux traitements. Depuis 30 ans, la stratégie thérapeutique du COCC consiste en une combinaison de carboplatine et paclitaxel (CP). Il est donc urgent de proposer de nouveaux traitements pour ce cancer. En étudiant une lignée cellulaire issue d’un COCC, nous avons observé que le traitement CP induisait un état de sénescence. Les cellules sénescentes ne prolifèrent plus mais peuvent impacter leur environnement en sécrétant un mélange complexe de molécules. Proposer de nouveaux traitements pour cibler les cellules sénescentes induites par la chimiothérapie nécessite de mieux connaître leurs caractéristiques. Dans ce but, nous avons étudié les protéines à la surface des cellules sénescentes à l’aide d’une méthode de protéomique de pointe. Nous avons trouvé que la protéine DNAJC5 est fortement augmentée à la surface des cellules sénescentes. Cette chaperonne est impliquée dans les mécanismes d’exo- et endocytose, ainsi que dans une voie de sécrétion non-conventionnelle des protéines. Nous avons cherché à savoir si cette voie était activée dans les cellules sénescentes, et avons également étudié l’impact de l’inhibition de DNAJC5 sur la protéotoxicité des cellules, ainsi que sur l’établissement de la sénescence. Nos premiers résultats suggèrent que DNAJC5 aurait un rôle dans la sénescence qui n’a encore jamais été observé. À long terme, cette découverte pourrait contribuer au développement de nouveaux traitement dans le COCC.Patients treated for an advanced ovarian clear cell carcinoma (OCCC) have a poor 5-year survival rate due to treatment resistance. Since 30 years, the therapeutic strategy consists of a combination of carboplatin and paclitaxel (CP). It is of the upmost urgency to find new treatments against this cancer. We studied the impact of CP treatment on an OCCC cell line and observed that it induced a senescence state in the cells. Senescent cells do not proliferate anymore but have a huge impact on their microenvironment by secreting a complex mix of molecules. We need to know better the characteristics of chemotherapy-induced senescent cells to be able to target them with new treatments. Consequently, we studied the cell surface proteins of senescent cells with a cutting-edge proteomic method. We found that the protein DNAJC5 was upregulated at the cell surface of senescent cells. This chaperone is implicated in exo- and endocytosis mechanisms, as well as in a non-conventional secretion pathway. We wanted to know if this pathway was activated in senescent cells and we studied the impact of DNAJC5 inhibition on the cell proteotoxicity and on senescence establishment. Our first results suggest that DNAJC5 would have a role in senescence, which has never been observed. In the future, this discovery could contribute to the development of new treatments for the COCC.
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Mugabo, Yves. „Métabolisme du glucose et du glycérol dans la cellule pancréatique β et les hépatocytes et identification des voies de détoxification du glucose“. Thèse, 2016. http://hdl.handle.net/1866/18550.
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Meilleur, Caroline. „Étude de la sécrétion de la prosomatostatine humaine dans les cellules AtT20“. Thèse, 2004. http://hdl.handle.net/1866/14786.
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Renaud, Christian. „Étude de la sécrétion de la leptine gastrique chez le rat“. Thèse, 2005. http://hdl.handle.net/1866/15289.
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Antón, Angela. „Déterminants du mécanisme de ciblage de la proprotéine convertase PC5-A vers la voie de sécrétion régulée“. Thèse, 2004. http://hdl.handle.net/1866/15533.
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Turcotte, Cynthia. „Caractérisation de la voie permettant la viabilité de Schizosaccharomyces pombe en l'absence de calnexine“. Thèse, 2006. http://hdl.handle.net/1866/15236.
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Maréchal, Alexandre. „Implication de la chaperone calnexine dans le processus de sécrétion et la survie de la levure Schizosaccharomyces pombe“. Thèse, 2003. http://hdl.handle.net/1866/14776.
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