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Dissertationen zum Thema „Vecteur viraux“
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Link, Peggy. „Identification des déterminants viraux responsables de la spécificité de transmission du Grapevine fanleaf virus par son nématode vecteur Xiphinema index“. Université Louis Pasteur (Strasbourg) (1971-2008), 2005. http://www.theses.fr/2005STR13140.
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Le Grapevine fanleaf virus (GFLV) est responsable de la maladie du court-noué de la vigne qui affecte près de 30 % du vignoble français et n’épargne pas les autres pays viticoles. Ce virus est spécifiquement transmis par le nématode Xiphinema index et son génome est constitué de deux ARN simple brin de polarité positive. Mon travail de thèse a porté sur l’identification des déterminants viraux responsables de la spécificité de transmission du GFLV par Xiphinema index. Des travaux préalables ont montré que ces résidus étaient situés sur l’ARN2, plus précisément au niveau des 9 aminoacides C-terminaux de la protéine de mouvement et des 504 aminoacides de la protéine de capside. Une approche de génétique inverse a consisté à construire des ADNc chimériques de l’ARN2, au niveau desquels, des aminoacides cibles d’origine GFLV ont été remplacés par leurs correspondants chez l’Arabis mosaic virus (ArMV), un autre virus responsable de la maladie du court-noué qui est spécifiquement transmis par Xiphinema diversicaudatum et non par Xiphinema index. Les ARN2 chimériques obtenus ont été associés à l’ARN1 du GFLV pour tester leur infectivité sur plantes hôtes herbacées à infection systémique ainsi que leur transmissibilité par Xiphinema index. Ces travaux ont permis de montrer que seule la protéine de capside porte les déterminants de la spécificité de vection. Un modèle tridimensionnel de la capside du GFLV a été élaboré à partir de la structure cristallographique du Tobacco ringspot virus pour identifier les aminoacides situés en surface, conservés par le GFLV et spécifiques de ce virus, et ainsi éclairer le choix des mutations d’échanges de résidus. Parmi les mutants développés, deux ont déclenché une infection systémique sur plante. Leur transmissibilité par Xiphinema index est en cours d’étude. La transmissibilité des autres mutants affectant la protéine de capside n’a pas pu être testée, étant donné qu’ils ne sont pas infectieux in planta, vraisemblablement suite à un défaut d’encapsidation des ARN suggéré par des expériences de protection d’ARN après électroporation de protoplastes de Chenopodium quinoaGrapevine fanleaf virus (GFLV) causes fanleaf degeneration, one of the most severe viral diseases of grapevines worlwide. This virus is specifically transmitted by the nematode Xiphinema index and its genome consists of two single-stranded positive-sense RNA species. My thesis work focused on the identification of the molecular determinants involved in the specific transmission of GFLV by Xiphinema index. Previous studies indicated that residues responsible for transmission map to RNA2, in particular within the 9 C-terminal amino acids of the movement protein and the 504 amino acids of the coat protein. Chimeric cDNA of RNA2 were constructed by exchanging GFLV residues by their counterparts in Arabis mosaic virus (ArMV), another virus responsible for fanleaf degeneration that is specifically transmitted by Xiphinema diversicaudatum but not by Xiphinema index. The infectivity of chimeric RNA2 was tested on systemic herbaceous host plants in the presence of GFLV RNA1, as well as their transmissibility by Xiphinema index. Results indicated that the coat protein is the sole viral determinant for the specific transmission. A 3D model of the GFLV capsid was constructed from the crystal structure of Tobacco ringspot virus to identify surface amino acids that are specific and conserved among GFLV isolates for mutagenesis experiments. Two of the coat protein mutants systemically infected host plants. Their transmissibility by Xiphinema index is being tested. The transmissibility of the other mutants was not determined because they did not infect systemically host plants likely because their RNA are not encapsidated, as shown by RNA protection assays upon electroporation of Chenopodium quinoa protoplasts
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BRUYERE, ARNAUD. „Etude des determinants viraux impliques dans la transmission du beet western yellows virus (bwyv) par son vecteur, le puceron myzus persicae“. Strasbourg 1, 1997. http://www.theses.fr/1997STR13128.
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Le beet western yellows virus ou bwyv est un luteovirus, qui infecte de tres nombreuses dicotyledones d'interet agronomique et provoque des jaunisses caracteristiques. Ce virus, limite aux tissus phloemiens de la plante hote, est transmis par un puceron, myzus persicae, selon le mode persistant et circulant. La capside de ce virus est constituee de deux proteines : une proteine majeure ou proteine de coque (cp) de 22,5 kda, codee par l'orf 3 et une proteine mineure ou proteine de readthrough (rt) de 74 kda. Cette proteine de rt est exprimee a partir des orf 3 et 5 grace a un mecanisme de translecture du codon de terminaison de l'orf 3, sous forme d'une proteine de fusion entre la proteine de cp et le domaine de rt. Avant mon arrivee au laboratoire, il avait ete montre que cette proteine etait necessaire a la transmission de ce virus par son vecteur. Mon travail de these a consiste a determiner les motifs presents dans cette proteine, impliques dans la transmission. Dans ce but, nous avons cree des mutants du bwyv touches dans la proteine de rt et etudie leur transmissibilite, par differentes methodes. Les resultats obtenus permettent de diviser le domaine de rt en deux sous domaines : (1) la region n-terminale du domaine de rt, tres conservee parmi les luteovirus, qui est strictement necessaire a l'expression et a l'incorporation de la proteine de rt et donc a la transmission du bwyv et intervient egalement dans l'accumulation du virus dans la plante ; (2) la region c-terminale du domaine de rt, peu conservee, qui n'est pas requise a la transmission, mais contient des determinants pour l'apparition des symptomes. Enfin, nous avons montre qu'il existe une relation entre la transmissibilite du bwyv et l'interaction in vitro entre le bwyv et la symbionine (chaperonine de type hsp-60), proteine d'origine endosymbiotique, extraite du puceron vecteur : seuls le bwyv et les mutants transmissibles se lient a la symbionine.
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Cottard, Virginie. „Développement et utilisation de vecteurs viraux et cellulaires en thérapie génique anti-inflammatoire : application à un modèle de polyarthrite rhumatoïde“. Paris 7, 2003. http://www.theses.fr/2003PA077029.
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Avenel, Allan. „Caractérisation et immunomodulation de la réponse cellulaire contre les produits de thérapie génique“. Electronic Thesis or Diss., Nantes Université, 2024. http://www.theses.fr/2024NANU1028.
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Les virus adéno-associés recombinants (rAAV) plus prévalent avec 45% de positivité, suivi de l'AAV8 sont des outils efficaces pour le transfert de gènes in vivo, (24%). De plus, l'évaluation du profil d’expression avec 8 médicaments approuvés par la FDA ou l'EMA aux cytokinique _ a permis de montrer des différences de États-Unis et en Europe. Cependant, il reste des fonctionnalité des lymphocytes anti-AAV8 et anti-AAV9. obstacles majeurs à surmonter pour que leur application Afin de mettre en évidence ces différences, jai développé lini é un protocole permettant d’enrichir la très rare population chez les patients. En effet, des effets indésirables liés à de lymphocytes anti-AAV8 et anti-AAV9 via leur sécrétion l'activation du système immunitaireà la suite de l'injection d'IFN-y chez des donneurs sains (n=6 et n=9 systémique de fortes doses de rAAV chez des patienen respectivement). Ces cellules ont ensuite été analysées clinique ont été rapportés, pouvant entrainer la par cytométrie spectrale grâce à un panel de 26 couleurs snspetuondeces&sals Cflemumnnleeslmpmnelmt de caractériser ces cellules selon leur partie due à une réactivation de la réponse cellulaire phénotype et leur état de différenciation. Celaa permis impliquant les lymphocytes T mémoires, développés lors d'identifier une importante sous-population de LTCD8 EM dune infection par 'AAV sauvage au cours de I'enfance. en réponse à l'AAV8 et à l'AAV9. De plus, une sous- Cette réponse reste peu caractérisée malgré son fort population de LTCD8 EMRA dans un état de impact potentiel sur l’efficacité du traitement et la santé du différenciation avancé a pu être identifié en réponse à patient. Ce travail de thèse vise donc à améliorer I'état de l'AAV8. Le développementde ces outils et les éléments connaissance de cette réponse cellulaire pré-existante de réponse qu'ils ont permis d'apporter devrait permettre, contre l'AAV. Pour cela, nous avons d'abord étudié la à — terme, — d'élaborer de nouvelles stratégies prévalence de la réponse cellulaire contre 6 s d'immunomodulation permettant de diminuer d’AAV utilisés en clinique dans une cohorte de 45-145 l'immunogénicitéde ces vecteurs AAV chez l'Homme. donneurs sains de la région Pays de la Loire. Cela a permis de mettre en évidence que, dans notre cohorte, l'AAV9 était leRecombinant adeno-associated viruses Of positive donors, followed by AAV8 with 24%. In addition,(rAAVS) are efficient tools for in vivo gene transfer,with 8 drugs approved by the FDA or the EMA in theUnited States and Europe. However, there are stillmajor hurdles to overcome to improve their efficiencyand safety in clinics. Actually, severe adverse eventsrelated to the activation of the host's immune systemfollowing systemic injection of high doses of rAAV.into patients have been reported, leading in somecases to clinical trials hold. This immunotoxicity ispartly due to a reactivation of a T cell-mediatedcellular response, developed after primary wild-typeAAV infection during childhood. This response is stillpoorly characterized, despite its strong potentialeffect on treatment efficacy and patient health. Theaim of this thesis is therefore to improve ourknowledge on this pre-existing cellular response toAAV. We first studied the prevalence of the cellularresponse towards 6 AAV serotypes used in clinicaltrials in a cohort of-45-145 healthy donors from thePays de la Loire area. Our results show that in ourcohort, AAV9 was the most prevalent with 45%assessment of the cytokine expression profile highlighteddifferences between anti-AAV8 and anti-AAV9 T cells. To furthercharacterize these cells, | developed a protocol to enrich thevery rare population of anti-AAV8 and anti-AAV9 T lymphocytesdepending on their IFN-y secretion in healthy donors (n=6 andn=9 respectively). These cells were then analyzed by spectralcytometry using a panel of 26 colors to characterize themaccording to their phenotype and state of differentiation. Thisallowed us to identify a subpopulation of EM CD8 T-cells inresponse to AAV8 and AAV9. Moreover, a subpopulation ofEMRA CD8 T-cells in an advanced state of differentiation wasidentified in response to AAV8. The development of these toolswill allow to develop innovative immunomodulatory strategies to prevent AAV immunogenicity in patient
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BELIN, CHRISTOPHE. „Recherche des determinants viraux impliques dans la transmission du virus du court-noue de la vigne (gflv) par son vecteur, le nematode xiphinema index“. Université Louis Pasteur (Strasbourg) (1971-2008), 1999. http://www.theses.fr/1999STR13078.
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Le grapevine fanleaf nepovirus (gflv) et l'arabis mosaic nepovirus (armv) sont les agents de la maladie du court-noue de la vigne. Malgre une tres forte identite de sequence, gflv et armv sont transmis specifiquement par les nematodes xiphinema index et x. Diversicaudatum. Le genome de ces virus est reparti sur deux arn qui codent pour deux polyproteines. L'arn-1 assure la replication des arn et code pour la proteinase 1d#p#r#o qui mature les polyproteines. L'arn-2 est responsable de la specificite de vecteur ; il code pour la proteine 2a necessaire a sa replication et pour les proteines de mouvement (2b#m#p) et de coque (2c#c#p) permettant l'infection systemique des plantes. Pour localiser les determinants viraux responsables de la specificite gflv/x. Index, des arn-2 recombinants ont ete construits en remplacant des sequences codant pour des proteines entieres de l'arn-2 du gflv ou des domaines de la proteine 2c#c#p du gflv par les sequences correspondantes de l'armv. L'etude de ces recombinants indique l'existence d'interactions virus-specifiques des 9 residus c-terminaux de la proteine 2b#m#p avec la proteine 1d#p#r#o et avec la proteine 2c#c#p. La trans-encapsidation des arn gflv dans la capside armv a ete observee. Des proteines 2c#c#p hybrides gflv/armv ne sont pas capables de s'assembler. Un test de transmission specifique par x. Index a ete mis au point. Il confirme que la transmission par x. Index passe par une retention specifique du virus dans le nematode. L'utilisation des isolats recombinants ecarte l'intervention de l'arn satellite des nepovirus et montre que la proteine 2b#m#p n'est pas responsable de la specificite de transmission.
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Vaysse, Laurence. „Développement de vecteurs non viraux pour le transfert de gène dans l'épithélium respiratoire“. Bordeaux 2, 2000. http://www.theses.fr/2000BOR28795.
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Doucet, Gilles. „Les vecteurs viraux pour le développement de thérapies géniques ex vivo dans les cellules du muscle squelettique humain“. Master's thesis, Université Laval, 2007. http://hdl.handle.net/20.500.11794/19481.
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Venail, Frédéric. „Transfert d'ADN dans la cochlée de mammifère par vecteur adénoviral : mise au point technique vers un modèle de régénération de l'organe de Corti utilisant l'interférence ARN“. Montpellier 1, 2008. http://www.theses.fr/2008MON1T024.
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Les surdités de perception résultent principalement de la destruction des cellules neurosensorielles de la cochlée, partie de l'oreille interne dédiée à l'audition. Ces pertes sont irréversibles chez le mammifère, car les cellules ciliées détruites ne sont pas renouvelées à partir de leurs cellules de soutien comme chez les oiseaux ou les reptiles. Chez ces animaux, la régénération des cellules ciliées est étroitement liée à la régulation de la cycline p27kip1. Le but de ce travail était de déterminer si l'inhibition de p27kip1 pouvait entraîner une division et une différenciation des cellules de soutien en cellules sensorielles. Dans une première partie, nous montrons que les vecteurs adénoviraux sont capables d'infecter bon nombre de types cellulaires dans la cochlée de rat in vitro et in vivo, dont les cellules ciliées et les cellules de soutien de l'organe de Corti. Les capacités d'infection de ces virus dépendant étroitement de la présence et des conditions d'accès aux récepteurs adénoviraux (CAR et intégrines αvβ3 et αvβ5) mais aussi de la perméabilité des membranes séparant les différents compartiments liquidiens de la cochlée. Dans une seconde partie, nous avons utilisé un vecteur adénoviral capable d'inhiber de façon inductible la synthèse de la protéine p27kip1 par un mécanisme d'interférence ARN. Nous avons pu observer in vitro des mitoses parmi les cellules de soutien postnatales de rat (Hensen, Deiters, et cellules bordantes). Certaines cellules semblaient capables de se différencier et de perdre leur phénotype de cellules de soutien au profit de marqueurs de cellules ciliées. Ce résultat démontre la première fois la possibilité d'induire un phénomène de régénération mitotique dans la cochlée de mammifère, ouvrant ainsi une voie prometteuse aux thérapies géniques des surdités.
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Léger, Psylvia. „Etude comparée de l'infection de cellules de l'hôte mammifère et de cellules du vecteur moustique par le virus de la Fièvre de la Vallée du Rift“. Paris 7, 2009. http://www.theses.fr/2009PA077073.
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Le Virus de la Fièvre de la Vallée du Rift (VFVR) est un virus appartenant à la famille des Bunyaviridae et au genre Phlebovinis. Cet arbovirus, transmis par les moustiques, infecte l'homme et les ruminants et est à l'origine de nombreuses épidémies/épizooties. Le segment S utilise une stratégie ambisens afin de coder la nucléoprotéine N ainsi que la protéine non structurale NSs. Bien que le cycle viral soit exclusivement cytoplasmique, NSs forme des filaments nucléaires. Cette protéine est à l'origine d'au moins deux mécanismes délétères lors de l'infection de cellules de mammifère. En interagissant avec la sous-unité p44 du facteur général de transcription TFIIH, NSs induit progressivement l'inhibition de la transcription générale. De plus, nos résultats mettent en évidence la fonction d'antagoniste de l'interféron P (IFN(3) de cette protéine. Cette dernière interagit avec les protéines cellulaires SAP30, appartenant aux co-répresseurs, et le facteur de transcription YY1. Ces interactions sont à l'origine de l'inhibition de l'expression de l'IFNp. Contrairement à ce qui est observé chez le mammifère, l'infection de cellules de moustique semble asymptomatique. Afin de déterminer les événements moléculaires à l'origine de ce contraste frappant, nous avons étudié l'infection de cellules de moustique et montré la conservation des interactions entre NSs et les orthologues de p44 et de SAP30 dans ces cellules. Dans les cellules d'arthropode, le mécanisme d'inhibition transcriptionnelle est semblable à celui observé dans les cellules murines. Toutefois, la protéine NSs est progressivement éliminée, ce qui entraîne la levée de l'inhibition délétèreThe Rift Valley Fever Virus (RVFV) is an arbovirus transmitted by mosquitoes to humans and livestock that causes dramatic epidemies and epizootics. As a member of the Phlebovirus genus of the Bunyaviridae family, the short segment (S) of its genome has an ambisens coding strategy for the nucleoprotein N and the non structural protein NSs. The later present an unusual localization to the nucleus, where it forms filamentous structures in mammalian cells. Through the interaction with several cellular factors, the NSs protein can be considered as a virulent factor. Interaction of NSs with p44, a subunit of the general transcription factor TFIIH, induces a progressive inhibition of the cellular RNA synthesis. NSs is also responsible of a specific inhibition of the interferon (3 (IFN(3) pathway when interacting with SAP30 and the transcription factor YY1, both required for the cell antiviral response. Contrary to mammals, the infection of mosquito cells by the RVFV remains asymptomatic. As the filamentous structure in the nucleus vanishes early after infection of mosquito cells, we analyzed the interaction of the NSs protein with the mosquito orthologs of the p44 and SAP30. A transient shutoff of the transcription is associated when NSs is present in the nucleus of mosquito cells, whereas the cleafance of NSs correlates with RNA synthesis restoration. These findings highlight the role of the NSs protein for differential pathogenesis observed between arthropod and mammal
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Lourenco, Sofia. „Etude de la modulation de la traduction du virus de l'hépatite C par des facteurs viraux en cis et en trans et développement de nouveaux outils via le système lentiviral“. Paris 6, 2008. http://www.theses.fr/2008PA066333.
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Le virus de l’hépatite C (VHC) est actuellement responsable d’un problème de santé mondiale infectant environ 3% de la population. Le VHC possède une molécule d’ARN simple brin et de polarité positive ainsi que deux régions non codantes (NC) 5’ et 3’. La traduction virale a lieu via une séquence interne d’entrée des ribosomes (IRES) située dans la région 5’NC. L’objectif de ce travail de thèse a été de clarifier le rôle de facteurs viraux en cis (3’NC) et en trans (C, NS5A, NS5B) dans la régulation de l’activité traductionnelle de l’IRES. Nous avons utilisé un système double rapporteur ARN, ciblant ainsi la traduction. D’après l’activité relative de l’IRES mesurée (rapport RLuc/FLuc) différents points ont été observés : 1) la région 3’NC stimule fortement l’activité IRES en cis, ce qui dépend de la structure secondaire globale; 2) une modulation dose et génotype dépendante de la traduction a été démontrée en présence de C et NS5B ; 3) aucun effet synergique n’a été observé entre les protéines virales ou entre les différents facteurs viraux. D’après ces résultats, les facteurs viraux étudiés agiraient de façon séquentielle pour moduler la traduction virale. Nous nous sommes ensuite focalisés sur le développement de nouveaux outils. Nous avons établi un système lentiviral bicistronique, qui s’est révélé efficace pour le criblage de drogues. Les expériences actuellement en cours visent l’établissement d’une lignée exprimant constitutivement l’ARN polymérase du phage T7 (T7 RNAp), permettant à la fois une analyse fine de la fonctionnalité de l’IRES, le criblage de drogues ainsi que l’étude d’autres virus, remplaçant le système vaccine couramment utiliséHepatitis C virus (HCV) is responsible of a major health problem, infecting 3% of world population. Hepatitis C Virus (HCV) possesses a positive single-stranded RNA genome with highly structured non coding (NC) regions at its extremities: 5’NC and 3’NC. Translation initiation of HCV RNA occurs via an Internal Ribosome Entry Site (IRES) located at its 5’end. Our aim was to clarify the role of cis (3’NCR) and trans (C, NS5A, NS5B) viral factors on the regulation of IRES activity. By the use of a dual RNA reporter system, targeting the translation step and avoiding the cryptic IRES promoter activity, relative IRES activities measured in luminometry (= RLuc/FLuc activities ratio) revealed the following features : 1) all the HCV 3’ non coding (NC) sequences tested highly stimulate in cis the IRES efficiency; 2) a dose and genotype dependent modulation of the translation in trans was shown with the capsid and NS5B ; and 3) not any cooperative effect could be obtained either between viral proteins, or in the presence of both cis and trans factors. Taking together these results encouraged us to propose a model in which the viral factors tested act sequentially to modulate viral translation and the switch to replication. We then focus on the development of novel tools for evaluating the IRES activity analysis. We established a bicistronic lentiviral system, which revealed efficient for drugs screening, however not adequate for a precise IRES activity analysis. Experiments actually in progress aim the precise analysis of IRES activity, drugs screening and in addition the study of other viruses, replacing the vaccine system currently used
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Boni, Sébastien. „Observation in vitro de la modulation de l'activité traductionnelle de l'IRES du virus de l'hépatite C par certains facteurs viraux et mise au point d'un système d'étude cellulaire de son activité via un vecteur lentiviral“. Paris 6, 2006. http://www.theses.fr/2006PA066446.
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Le virus de l’hépatite C pose un grave problème de santé du fait de sa prévalence élevé (3%) dans la population mondiale. Il est l’agent viral responsable de la survenue d’hépatites chroniques évoluant progressivement vers une cirrhose et/ou un carcinome hépatocellulaire. Son génome est composé d’un ARN monocaténaire de polarité positive d’environ 9600 nucléotides, flanqué à ses deux extrémités des régions 5’ (5’NC) et 3’ (3’NC) non codantes. Sa traduction est initiée par l’entrée directe des ribosomes au niveau d’une séquence hautement structurée et complexe, localisée dans la région 5’NC : l’IRES (Internal Ribosome Entry Site). La conservation de cette région entre les différents génotypes et sous-types viraux et son rôle fondamental dans l’initiation de la traduction, première étape du cycle viral, font de l’IRES une cible thérapeutique considérable en l’absence d’un traitement efficace et d’un vaccin. Les mécanismes d’initiation de la traduction au niveau de cette structure sont relativement bien connus, cependant la modulation de son activité reste mal comprise et demeure un sujet de controverse. Nous avons mis en évidence, in vitro, à l’aide d’un système de gène rapporteur un rôle modulateur dose-dépendant de la protéine structurale de capside (C-VHC) ajoutée en trans, ainsi qu’un rôle activateur en cis de la région 3’NC sur l’activité de l’IRES. Afin d’étudier et de valider ces observations ex vivo, nous avons mis au point un système cellulaire d’expression basé sur l’emploi de vecteurs lentiviraux. Ces derniers expriment un transcrit bicistronique comportant l’IRES du VHC et ont permis de quantifier l’activité traductionnelle de l’IRES dans les conditions proches de celles de l’infection virale au sein de différentes lignées cellulaires, et de valider notre système d’étude en testant l’inhibition de l’IRES par des agents thérapeutiques utilisés dans le traitement contre l’infection par le VHC.
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Bergeron, Corinne. „Composition génétique de semences vaccinales H3N2 et construction d'un virus vecteur : une histoire d'encapsidation de segments chez les virus influenza de type A“. Phd thesis, Université Claude Bernard - Lyon I, 2009. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00625467.
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L'empaquetage des huit segments du génome des virus influenza de type A est une des étapes clef du cycle viral. Il intervient également dans l'apparition de virus réassortants, les virus pandémiques par exemple, ce qui en fait un enjeu fondamental de la recherche actuelle.Nous avons étudié ce mécanisme au cours de deux études, la première portant sur les vaccins antigrippaux (réassortiment), la seconde visant à construire un virus vecteur (incorporation d'un segment hétérologue). Les semences vaccinales sont obtenues par co-infection d'oeufs de poule embryonnés avec deux souches virales une donneuse (souche circulante de référence) et une accepteuse (A/Puerto Rico/8/34 (H1N1) (PR8)). L'analyse de la composition génétique de treize semences vaccinales H3N2 montre que le segment PB1 de la souche donneuse est présent dans plus de 50 % des semences analysées et qu'une grande variété de réassortants,allant de 6:2 à 2:6 (PR8:H3N2), peut résulter de ces coinfections. Des expériences de compétition d'encapsidation de segments à l'aide de la génétique inverse révèlent que l'encapsidation sélective du segment PB1 dépend de son environnement génétique notamment l'origine virale des segments HA et NA. La seconde partie de mon travail de thèse a été consacrée à la construction d'un vecteur réplicatif sur la base d'un virus influenza H3 naturel sans segment NA. Aucune des constructions contenant le transgène gfp n'a été incorporée dans les particules virales, contrairement à ce qui a été décrit dans la littérature. Bien que les mécanismes moléculaires régissant l'incorporation des segments des virus influenza A demeurent très complexes, le fond génétique semble être déterminant pour ce processus.
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Dimier, Julie. „Développement d'un vecteur virus de la vaccine, réplicatif et atténué, pour la vaccination antivariolique et pour la vaccination contre la fièvre hémorragique à virus Ebola“. Phd thesis, Université de Grenoble, 2012. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00870840.
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Le virus Ebola, responsable d'une fièvre hémorragique virale létale et le virus de la variole, agent étiologique de la variole, sont des armes biologiques potentielles. Il n'existe pas de traitement ou de prophylaxie autorisés contre le virus Ebola, quelques candidats vaccins étant en cours de développement. Concernant la variole, des vaccins dits de première génération (virus de la vaccine) ont permis l'éradication de la maladie cependant ils sont à l'origine de complications post-vaccinales parfois sévères alors que des vaccins plus récents dits de troisième génération, non-réplicatifs, ont été développés pour leur innocuité mais restent faiblement immunogènes. Nous avons récemment développé plusieurs vecteurs viraux de type virus de la vaccine (VACV) par délétion d'un certain nombre de facteurs de virulence. Nous avons évalué leur innocuité, leur immunogénicité et leur efficacité en tant que candidats vaccins antivarioliques chez la souris puis utilisé l'un de ces vecteurs pour développer un candidat vaccin bivalent antivariolique et anti-virus Ebola. Ces virus de la vaccine délétés sont réplicatifs mais fortement atténués. Ils induisent une réponse en anticorps neutralisants spécifiques anti-vaccine similaire à celle induite par le vaccin antivariolique de première génération et induisent des réponses immunitaires cellulaires CD4+ et CD8+ spécifiques suffisantes pour protéger l'animal d'un challenge létal de cowpoxvirus en intranasal, simulant une infection par le virus de la variole. Le virus délété le plus immunogène et le plus sûr, nommé MVL, a été utilisé pour construire un vecteur viral codant pour la glycoprotéine du virus Ebola (EGP). Le gène entier d'EGP ou une forme chimérique d'EGP (fusion entre l'ectodomaine d'EGP et le domaine transmembranaire de la glycoprotéine B5 du VACV) ont été clonés dans le génome du vecteur viral. Ces deux vecteurs produisent des virus ayant incorporé EGP dans leur enveloppe. Ces deux candidats vaccins recombinants induisent de fortes réponses humorales spécifiques anti-EGP et anti-vaccine chez la souris immunocompétente. En conclusion, nous avons développé plusieurs candidats vaccins antivarioliques aussi immunogènes et efficaces que le vaccin historique et avec une atténuation similaire aux vaccins de troisième génération. L'un de ces candidats (MVL) a été utilisé comme vecteur viral pour exprimer la glycoprotéine hétérologue EGP, contre laquelle il induit une réponse immunitaire humorale forte
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Carrière, Marie. „Ciblage de vecteurs non viraux de thérapie génique“. Phd thesis, INAPG (AgroParisTech), 2002. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00005659.
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L'efficacité du transfert de gènes non viral est limitée par les barrières physiologiques qui entravent le cheminement de l'ADN jusqu'au noyau des cellules cibles. Ce travail a permis de concevoir et d'étudier trois outils visant à améliorer cette efficacité.
Un premier volet concerne le ciblage du noyau cellulaire. Une banque de plasmides comportant une séquence aléatoire a été construite dans le but d'identifier une séquence nucléotidique permettant l'interaction du plasmide avec une protéine karyophile qui pourrait l'escorter jusqu'au noyau cellulaire. Le caractère aléatoire de la banque a été validé mais les séquences recherchées n'ont pas pu être identifiées grâce aux tests que nous avons employés.
Le peptide de localisation nucléaire IBB de l'importine a été couplé de façon covalente au squelette d'un plasmide dans le but de promouvoir la fixation du plasmide aux protéines récepteurs d'import nucléaire. La spécificité de l'interaction entre ce plasmide-IBB et les récepteurs cellulaires n'a pas pu être démontrée, les tests employés n'ont pas permis de mettre en évidence un import nucléaire accru de ces plasmides. En revanche le peptide IBB compacte l'ADN, améliorant la lipofection par modification des caractéristiques physico-chimiques du lipoplexe.
Le deuxième volet de ce travail concerne le ciblage extracellulaire, envisagé dans le système modèle du récepteur aux asialoglycoprotéines des hépatocytes. Des liposomes cationiques à têtes de ciblage galactosylées ont permis de définir les caractéristiques structurales et physico-chimiques les plus favorables pour l'accessibilité de la tête de ciblage. L'intégration d'un espaceur polyéthylèneglycol au lipide galactosylé a permis de limiter l'internalisation non spécifique des lipoplexes dans les cellules non visées, nous n'avons pas observé de ciblage des hépatocytes.
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Carrière, Marie. „Ciblage de vecteurs non viraux de therapie genique“. Paris, Institut national d'agronomie de Paris Grignon, 2002. http://www.theses.fr/2002INAP0001.
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L'efficacite du transfert de genes non viral est limitee par les barrieres physiologiques qui entravent le cheminement de l'adn jusqu'au noyau des cellules cibles. Ce travail a permis de concevoir et d'etudier trois outils visant a ameliorer cette efficacite. Un premier volet concerne le ciblage du noyau cellulaire. Une banque de plasmides comportant une sequence aleatoire a ete construite dans le but d'identifier une sequence nucleotidique permettant l'interaction du plasmide avec une proteine karyophile qui pourrait l'escorter jusqu'au noyau cellulaire. Le caractere aleatoire de la banque a ete valide mais les sequences recherchees n'ont pas pu etre identifiees grace aux tests que nous avons employes. Le peptide de localisation nucleaire ibb de l'importine a ete couple de facon covalente au squelette d'un plasmide dans le but de promouvoir la fixation du plasmide aux proteines recepteurs d'import nucleaire. La specificite de l'interaction entre ce plasmide-ibb et les recepteurs cellulaires n'a pas pu etre demontree, les tests employes n'ont pas permis de mettre en evidence un import nucleaire accru de ces plasmides. En revanche le peptide ibb compacte l'adn, ameliorant la lipofection par modification des caracteristiques physico-chimiques du lipoplexe. Le deuxieme volet de ce travail concerne le ciblage extracellulaire, envisage dans le systeme modele du recepteur aux asialoglycoproteines des hepatocytes. Des liposomes cationiques a tetes de ciblage galactosylees ont permis de definir les caracteristiques structurales et physico-chimiques les plus favorables pour l'accessibilite de la tete de ciblage. L'integration d'un espaceur polyethyleneglycol au lipide galactosyle a permis de limiter l'internalisation non specifique des lipoplexes dans les cellules non visees, nous n'avons pas observe de ciblage des hepatocytes.
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Vial, Thomas. „Le virus de la dengue détourne le métabolisme des phospholipides du moustique pour sa réplication“. Thesis, Toulouse 3, 2020. http://www.theses.fr/2020TOU30036.
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Plus de la moitié de la population mondiale est exposée au risque d'infection par le virus de la dengue (DENV) en raison de la distribution mondiale de ses moustiques vecteurs. Il n'existe ni vaccin ni traitement efficace. La seule stratégie disponible repose sur les insecticides, contre lesquels les moustiques développent une résistance. Les virus utilisent le métabolome de l'hôte pour la réplication et la dissémination. C'est particulièrement vrai pour les virus enveloppés comme le DENV qui dépend des membranes lipidiques de l'hôte pour compléter son cycle de vie. Pour atteindre un environnement métabolique optimal, les virus perturbent le métabolome de l'hôte. La compréhension de ces altérations chez les moustiques vecteurs pourrait révéler de nouvelles stratégies pour bloquer la transmission du DENV. Ici, nous avons caractérisé comment le DENV détourne le lipidome du moustique Aedes aegypti. Pour décrire les changements métaboliques tout au long du cycle du DENV chez le moustique, nous avons débeloppé une méthode de chromatographie liquide et de spectrométrie de masse à haute résolution (LC-HRMS) à différents stades de l'infection chez le vecteur. Nous avons révélé une reconfiguration majeure des phospholipides tout au long du cycle du DENV chez le moustique, dans les cellules, l'intestin moyen et le moustique entier. Pour déchiffrer la façon dont le virus reconfigure les phospholipides, nous avons caractérisé phylogénétiquement les isoformes de l'enzyme acylglycerol-phosphate acyltransférase (AGPAT) et identifié celles qui catalysent une étape limitante dans la biogenèse des phospholipides. Nous avons constaté que l'infection par le DENV diminuait l'expression de AGPAT1, dont la déplétion renforce l'infection en maintenant des concentrations élevées d'aminophospholipides (aminoPL), en particulier la phosphatidylcholine (PC) et la phosphatidyléthanolamine (PE), pendant le cycle du DENV chez le moustique. En démontrant que la sous-régulation de AGPAT1, causé par le virus, fournit un environnement proviral, nous révèlons le premier facteur métabolique hôte chez les moustiques et soulignent le rôle des aminophospholipides dans le cycle cellulaire viral. Nous avons ensuite cherché à confirmer que le virus influence la biosynthèse des aminoPL et déterminer à quel stade du cycle viral la reconfiguration des aminoPL est nécessaire. La biosynthèse de novo de PC et de PE est connue sous le nom de voie de Kennedy, où un diacylglycérol (DAG) incorpore soit un groupe choline, soit un groupe éthanolamine. [...]More than half of the world population is at risk of dengue virus (DENV) infection because of the global distribution of its mosquito vectors. There is neither effective vaccine nor therapeutics. The only available strategy relies on insecticides, against which mosquitoes are developing resistance. Viruses utilize the host metabolome for replication and dissemination. This is particularly true for envelope viruses like DENV that relies on host lipid membranes to complete their life-cycle. To reach an optimal metabolic environment, viruses subvert the host metabolome. Understanding DENV-mosquito metabolic interactions will reveal novel strategies to stop DENV transmission. Here, we characterized how DENV hijacks the Aedes aegypti mosquito lipidome to identify targets for novel transmission-blocking interventions. To describe metabolic changes throughout the mosquito DENV cycle, we deployed a Liquid chromatography-high resolution mass spectrometry (LC-HRMS) workflow at different stages of vector infection. We revealed a major phospholipid reconfiguration throughout the DENV mosquito cycle, in cells, midguts, and whole mosquitoes. To decipher how DENV reconfigures phospholipids, we phylogenetically characterized acylglycerolphosphate acyltransferase (AGPAT) enzyme isoforms and identified those (i.e., AGPAT1) that catalyze a central rate-limiting step in phospholipid biogenesis. We found that DENV infection decreased AGPAT1 expression, which depletion enhances infection by maintaining high aminophospholipid (aminoPL) concentrations, especially phosphatidylcholine (PC) and phosphatidylethanolamine (PE), during DENV mosquito cycle. By demonstrating that DENV-mediated AGPAT1 downregulation provides a proviral environment, these results reveal the first metabolic host factor in mosquitoes and emphasize the role of aminophospholipids in DENV cellular cycle. We then undertook to precise how DENV influences aminoPL biosynthesis and what stage of DENV cellular cycle requires aminoPL reconfiguration. De novo biosynthesis of PC and PE is known as the Kennedy pathway, where a diacylglycerol (DAG) incorporates either a choline or an ethanolamine group. AminoPL remodeling by deacylation/reacylation then ensures membrane dynamism that participates in membrane rearrangements. Using isotopic labelling through ethanolamine or choline supplementation, we showed that DENV modulates PC and PE biosynthesis by interacting with membrane remodeling.[...]
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Fromont, Emmanuelle. „Analyse comparative de la transmission de cinq virus dans des populations de chats domestiques (Felis catus L. )“. Lyon 1, 1997. http://www.theses.fr/1997LYO10190.
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La relation entre une population de parasites et une population d'hotes ne depend pas uniquement des especes en cause. On cherche ici l'influence respective de la population hote et de la transmission parasitaire sur la dynamique de cinq infections virales du chat domestique (felis catus). L'interet des populations de chats est que leurs structures spatiale, sociale et genetique varient en fonction du milieu. Les cinq virus etudies sont le virus d'immunodeficience feline vif, le virus leucemogene felin vlf, l'herpesvirus felin hvf, le calicivirus felin cvf et le parvovirus felin pvf. Leur dynamique est etudiee pendant deux a six annees de suivi dans cinq populations. L'analyse des donnees fait appel a des methodes ecologiques et epidemiologiques. La dynamique du vlf est approfondie par la construction de plusieurs modeles compartimentaux. Le pvf, qui a essentiellement une transmission indirecte, est influence par la densite des chats. La circulation des autres virus depend de la structure sociale : l'effectif du groupe social (vlf, hvf) et l'existence de relations amicales (vlf) ou agressives (vif) frequentes. Le vlf a egalement une persistance inconstante. L'etude sur le terrain et la modelisation suggerent que l'extinction de cette infection est liee a la fragmentation spatiale et a la dynamique de la population. Ces resultats montrent que la dynamique et la structure spatiale et sociale de la population hote constituent des barrieres a la transmission parasitaire, dont l'efficacite varie selon les parasites. En consequence les virus peuvent influencer certains aspects de la socialite du chat : la repartition spatiale (pvf), l'effectif du groupe social (vlf, hvf) et l'existence de relations amicales ou agressives (vif, vlf). Ces resultats doivent etre appliques a la gestion des populations naturelles. La gestion des problemes parasitaires ne peut pas suivre un modele general mais doit prendre en compte les modalites de transmission des parasites en cause.
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Claron, Michaël. „Synthèse de vecteurs peptidiques non-viraux : vectorisation et ciblage tumoral“. Thesis, Grenoble, 2013. http://www.theses.fr/2013GRENV036/document.
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Dans l’optique de développer de nouveaux agents bio-inspirés pour la détection et/ou le traitement des cellules cancéreuses, nos travaux se sont tournés vers la synthèse de macromolécules peptidiques complexes ayant la capacité de reconnaître les cellules tumorales. Ces travaux visent à développer des molécules permettant de cibler des particularités cellulaires présentes sur les cellules tumorales dans le but d’obtenir un traitement personnalisé via une vectorisation active permettant une augmentation de l'efficacité thérapeutique et une réduction intrinsèque de la toxicité du traitement. Pour cela, ces biomolécules doivent posséder à la fois un site de reconnaissance pour la liaison avec des protéines présentes à la surface de la cellule cible et un ou plusieurs éléments utilisés pour détecter et/ou détruire la cible. Ces systèmes ont été élaborés à partir d'un châssis moléculaire cyclodécapeptidique présentant des propriétés conformationnelles particulières. Plusieurs approches ont été envisagées. La première a consisté à rechercher de nouveaux ligands de récepteurs tumoraux en s'inspirant du domaine de reconnaissance d'un anticorps monoclonal thérapeutique. Dans ce contexte, nous avons proposé la conception de mimes du Rituximab ciblant l'antigène CD20 utilisé dans le traitement des lymphomes Non-Hodgkinien. Dans la seconde approche, nous avons développé des vecteurs destinés à des applications d'imagerie tumorale. Pour cela, des châssis multivalents présentant des ligands peptidiques RGD ciblant l'intégrine alpha-v-beta-3 ont été conjugués avec différents agents de détection puis évalués par des techniques d'imagerie telles que la TEP, la TEMP et l’imagerie optique. Toujours dans un but de diagnostic des cellules tumorales, nous nous sommes par la suite tournés vers l’application à la capture cellulaire. Pour cela, une surface d’or à été modifiée via la formation d’une monocouche organisée SAM (« Self-assembled monolayer ») présentant des cyclodextrines. Un gabarit peptidique adéquat a ainsi permis la capture et le relargage sélectif de cellules tumorales mesurées par la technique de microbalance à quartz. Ces mêmes vecteurs, validés pour le diagnostic ont par la suite été couplés à des peptides cytotoxiques issus d’une protéine pro-apoptotique « Bax ». Enfin, une dernière partie a été consacrée à la recherche de nouveaux composés comportant plusieurs éléments de ciblage tumoraux. Ces molécules présentent deux ligands de ciblage des récepteurs surexprimés sur la membrane et peuvent ainsi permettre une meilleure sélectivité vis-à-vis des tissus tumorauxIn order to develop new agents for cancer diagnosis and treatment, our work aims to synthesize complex peptide macromolecules that are able to specifically recognize cancer cells. Our goal is to increase the therapeutic efficiency and reduce the toxicity of currently available drugs using "targeted strategies". In this context, we designed sophisticated macromolecules encompassing a cell recognition domain and one or several components used to detect and/or destroy the target. This system was prepared starting from a cyclodecapeptidic scaffold presenting particular conformational properties. Different approaches were considered. First of all our work was to investigate new tumor receptor ligands based on the recognition domain of a therapeutics monoclonal antibody. We proposed the design of Rituximab mimics which targets the CD20 antigen used for the treatment of Non-Hodgkin lymphoma. In a second approach, we prepared new vectors for tumor imaging. For this purpose, multivalent scaffolds containing RGD peptide that targets alpha-v-beta-3 integrin were combined with several detection elements and evaluated by using PET, SPECT and optical imaging techniques. We also used this peptide vector for the selective cell capture and release from flowing suspensions, using a gold surface modified with a cyclodextrin-containing self-assembled monolayer (SAM). A scaffold containing ferrocenyl and -RGD- ligands permitted the selective capture and release of tumor cells. This experiment was monitored by QCM-D. This vector has been next grafted to a cytotoxic peptide that was discovered from a pro-apoptotic protein named “Bax”. Finally, we designed new molecules which include an additional ligand for the cell’s surface to increase the selectivity and the affinity of tumor tissue
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Veron, Philippe. „Intéractions entre cellules dendritiques humaines et vecteurs viraux de thérapie génique“. Paris 11, 2007. http://www.theses.fr/2007PA11T053.
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Berthold, François. „Grapevine fanleaf virus replication : viral proteins and host factors“. Strasbourg, 2015. http://www.theses.fr/2015STRAJ086.
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Melendez, Matias. „Site-specific Excision-Dependent (SED) vectors : a novel concept in herpes simplex virus type-1-based gene transfer vectors“. Thesis, Lyon 1, 2011. http://www.theses.fr/2011LYO10269.
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L'objectif de mon sujet de thèse était de développer un nouveau type de vecteur viral pour le transfert de gènes, et de faire la preuve de concept de l'efficacité de ce vecteur en culture de cellules et chez la souris. L'idée centrale est de se servir de la très grande capacité transgénique du virus de l'herpès simplex de type 1 (HSV-1) pour transformer le génome de ce virus en une sorte de plateforme, ou rampe de lancement, qui permettra la production in vivo d'un vecteur herpétique secondaire de type amplicon, qui portera le transgène thérapeutique à d'autres cellules, augmentant ainsi significativement le nombre de cellules qui recevront le transgène. Cette plateforme pourra également être utilisée en culture de cellules, pour améliorer la production de vecteurs amplicons non contaminés par du virus auxiliaire. De plus, les vecteurs amplicons ainsi produits, in vivo comme in vitro, ne porteront pas de séquences d'ADN bactériennes. L'élimination de l'ADN bactérien est très importante, tant pour diminuer la réponse cellulaire innée induite par la pénétration du vecteur, que pour éviter la répression de l'expression transgénique. Dans le système de vecteurs que nous nous proposons de développer, le génome d'un vecteur herpétique de type amplicon, entouré par deux sites loxP en orientation parallèle, se trouvera intégré dans le génome d'un virus herpétique recombinant. Dans les cellules infectées par le vecteur herpétique recombinant, et sous l'action de la recombinase Cre, le génome de l'amplicon sera dissocié du génome herpétique le contenant, générant ainsi deux génomes séparés dans le noyau de chaque cellule. Après dissociation, le génome du virus recombinant deviendra défectif à cause de la perte des signaux d'encapsidation (qui seront excisés avec le génome amplicon) et servira en tant que génome auxiliaire, permettant l'amplification et l'encapsidation du génome amplicon, portant le transgène, dans des particules herpétiques. Dans la mesure où chaque cellule infectée par le vecteur recombinant deviendra une usine à produire des amplicons, le nombre de cellules recevant le transgène thérapeutique porté par les amplicons devrait être considérablement élargi. Puisque le génome amplicon sera dissocié du génome HSV-1 recombinant suite à un événement de recombinaison spécifique de site, nous avons donné à ce système le nom de "Site-specific Excision-Dependent" (SED) vectors. Ce nouveau système pourra être utilisé de deux manières différentes en fonction de la localisation du gène codant pour la recombinase Cre. D'une part, il sera utilisé pour produire des stocks de vecteurs amplicons in vitro (virus SEDVITRO), auquel cas la recombinase Cre sera exprimée par les cellules dans lesquelles se fera la production d'amplicons. D'autre part, il sera utilisé pour générer des vecteurs amplicons in vivo (virus SEDVIVO), au sein de l'organisme inoculé, auquel cas la recombinase Cre sera exprimée à partir du génome du virus recombinantA major obstacle to gene therapy is the inability to transduce sufficient numbers of cells in a target organ or tissue to achieve improvement from the disease state. This applies particularly to the neuromuscular system, considering both the disseminated nature of muscles and the challenges involved in scaling up results from small animal models to the clinical treatment of human disorders. The aim of this project was to develop and validate (in vitro and in vivo) a new concept on HSV-1-based viral vectors, conceived to significantly expand the number of target cells that will receive the vectors expressing the therapeutic transgene. The novel vectors should retain the high safety standards that are common to replication incompetent vectors, and avoid the incorporation of bacterial DNA sequences, which had been identified as responsible for gene silencing and activation of immune responses. This new vector system is based on a replication-incompetent HSV-1 recombinant vector carrying a secondary HSV-1 amplicon vector genome integrated in its own genome. Upon infection of target cells, the secondary vector genome will be dissociated from the carrier vector genome as a subgenomic fragment through Cre/loxP-based site specific recombination, therefore generating two progeny genomes, a defective amplicon vector genome and the remaining of the replication-incompetent HSV-1 genome. This latter genome will act as a defective helper, expressing the proteins required to allow amplification and packaging of the amplicon vector genome into virus particles. In this way, the incoming recombinant HSV-1 vector can be described as a vector platform that will launch a secondary vector, the amplicon vector carrying the therapeutic transgene, to interconnected neurons or muscle cells. Since the secondary vector will be excised from the carrier genome through a site-specific recombination event, we will refer to this system as Site-specific Excision-Dependent (SED) vectors. Two major improvements over currently used HSV-1-based vectors will be introduced in SED vectors. First, they will allow to produce high amounts of high-titre helper-free amplicon vector stocks in vitro without using bacterial plasmids, therefore highly improving the methods to prepare vectors stocks both in quantitative, qualitative and biosafety terms (SEDVITRO). Second, they will allow generating and launching amplicon vectors in vivo, in the SED-vector infected cells, therefore significantly expanding the number of transduced target cells and increasing the penetration of the therapeutic transgene, while retaining the safety level of replication-incompetent vectors (SEDVIVO)
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Girod, Anne. „Production de vecteurs rétroviraux par des lignées transcomplémentantes aviaires : augmentation du titre en vecteurs et analyse des formes virales parasites produites“. Lyon 1, 1995. http://www.theses.fr/1995LYO10312.
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Le laboratoire a developpe, a partir de retrovirus aviaires de type alsv, des lignees transcomplementantes productrices de particules vecteurs en condition helper-free. Nous avons ici recherche a augmenter le titre en particules produites par ces lignees transcomplementantes et analyse les formes virales recombinantes generees par ces systemes. L'introduction du genome vecteur dans la lignee d'empaquetage par infection plutot que par transfection a permis d'accroitre les titres des stocks de vecteurs retroviraux a des valeurs de 10#6 efu-(expressing forming unit)/ml. En revanche, le systeme ping-pong decrit pour les vecteurs retroviraux murins n'a pas permis d'obtenir l'amplification escomptee des titres en virus vecteurs. En outre, dans de telles cocultures, il apparait un virus competent pour la replication, qui porte les fonctions trans des genomes transcomplementants et les fonctions cis du genome vecteur. Les genomes transcomplementants sont deletes de la sequence d'encapsidation et de sequences necessaires a la transcription inverse et l'integration. Cependant, des arn transcrits a partir de ces genomes peuvent etre encapsides, retrotranscrits et s'integrer dans l'adn de la cellule cible. Ce transfert parasite, de l'ordre de 1 particule pour 10#5 particules vecteurs, peut etre explique par des evenements de recombinaison retrovirale entre le genome transcomplementant et le genome vecteur coencapsides. Ces formes virales parasites defectives pour la replication pourraient conduire, apres plusieurs cycles de replication successifs, a l'emergence de formes virales completes, comme celles observees dans le surnageant des cocultures decrites ci-dessus. Le genome des cellules de poule contient des sequences dites endogenes dont la structure est proche de celle des retrovirus. Lorsque les cellules lmh de leghorn noire sont utilisees pour la construction de lignees transcomplementantes, la presence de l'endogene ev3 conduit a la generation de formes virales parasites defectives pour la replication. Celles-ci representent 1% des particules virales produites. Ces resultats permettent d'obtenir une meilleure connaissance des systemes de production de vecteurs retroviraux
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Cresto, Noemie. „Etude de l'impact de la sur-expression de la partie C-terminale de LRRK2 mutée G2019S dans les neurones dopaminergiques de la substance noire“. Thesis, Université Paris-Saclay (ComUE), 2017. http://www.theses.fr/2017SACLS112.
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Les protéines alpha-synucléine (α-syn) et leucine-rich repeat kinase 2 (LRRK2) sont deux protéines ayant un rôle majeur dans la physiopathologie de la maladie de Parkinson (MP) et interviennent aussi bien dans les formes dites sporadiques que dans les formes familiales. La mutation G2019S du gène codant pour LRRK2 est la mutation la plus fréquente. Cette mutation induit une augmentation de l’activité kinase de LRRK2 qui conduit à sa toxicité. Plusieurs hypothèses convergent vers l’idée que LRRK2 et l’α-syn interagiraient pour conduire à la dysfonction et/ou la mort des neurones dopaminergiques (DA) de la substance noire (SNc) dans la MP. Dans la première partie de cette étude, différentes formes sauvage (WT) ou mutée (G2019S) de LRRK2 ont été surexprimées spécifiquement dans les neurones de la SNc via l’utilisation de vecteurs lentiviraux (LV) et adéno-viraux associés (AAV). La question principale de cette étude était d’évaluer si l’expression spécifiquement neuronale de LRRK2 induisait la dégénérescence des neurones DA de la SNc. Nous avons généré des constructions comportant uniquement la partie C-terminale de LRRK2 (ΔLRRK2) en aval du domaine LRR. In vitro, le fragment ΔLRRK2G2019S présente une activité kinase supérieure au fragment ΔLRRK2WT avec une augmentation d’activité comparable à la forme entière de LRRK2. In vivo, six mois après l’injection (PI) de ΔLRRK2 WT ou G2019S dans la SNc, les mesures du nombre de neurones montrent que seul le fragment ΔLRRK2G2019S induit une mort neuronale significative (30%) comparé à la forme ΔLRRK2WT, uniquement lorsque l’expression est générée via des vecteurs AAV. Ces résultats suggèrent que l’expression purement neuronale d’un fragment contenant le domaine kinase de LRRK2 est suffisante pour induire une dégénérescence de la SN. Dans la seconde partie du projet, nous avons étudié l’hypothèse que ΔLRRK2G2019S via son activité kinase amplifiée, pourrait augmenter la toxicité le l’α-syn mutée A53T. Pour répondre à cette question, les vecteurs AAV codant pour ΔLRRK2 G2019S ou une forme inactive de la kinase (ΔLRRK2G2019S/D1994A), et celui codant pour l’α-syn A53T ont été co-injectés dans la SNc. Les analyses réalisées à 6 et 15 semaines PI montrent que ΔLRRK2G2019S augmente la mort neuronale induite par l’α-syn A53T d’une manière kinase dépendante. Tous ces résultats supportent l’hypothèse que l’existence d’une interaction fonctionnelle entre LRRK2 et l’α-syn pourrait jouer un rôle fondamental dans la physiopathologie de la MP offrant des possibilités de stratégie de neuroprotection ciblant l’interaction LRRK2/α-synAlpha-synuclein (α-syn) and leucine-rich repeat kinase 2 (LRRK2) proteins are likely to play crucial roles both in sporadic and familial forms of Parkinson’s disease (PD). The most prevalent mutation in LRRK2 is the G2019S substitution which induces neurotoxicity through a marked increase of its kinase activity. A possible interplay between LRRK2 and α-syn may be involved in the dysfunction and/or in the death of dopaminergic (DA) neurons in the substantia nigra (SNc) in PD. In the first part of the study, we evaluated whether the overexpression of LRRK2G2019S using lentiviral vectors (LVs) and adeno-associated virus (AAV2/9), which can overexpress transgenes selectively in neurons could trigger neurodegeneration in the SNc, in other words, whether cell-autonomous mechanisms are sufficient to trigger the degeneration of DA neurons. We generated constructs corresponding to the C-terminal domain of LRRK2 (ΔLRRK2) containing the kinase domain. Results of assays performed in vitro indicated that ΔLRRK2 retains biochemical properties of full length LRRK2. Six months after the stereotaxic injection of LV-ΔLRRK2G2019S in the SNc, the number of DA neurons was unchanged, however, the infection of the SNc with AAV-ΔLRRK2G2019S but not with AAV-ΔLRRK2WT induced a significant ~30% loss of DA neurons. These results suggested that neuronal overexpression of the mutant kinase domain of LRRK2 was sufficient to trigger neurodegeneration in the SNc in the adult brain. In the second part of the study, we aimed at studying whether ΔLRRK2G2019S could increase the neurotoxicity of a mutant form of α-syn (A53T mutation) in vivo in DA neurons. We used a co-infection approach with AAV vectors encoding the α-synA53T, and ΔLRRK2 G2019S alone or with the D1994A mutation (ΔLRRK2G2019S/D1994A) that inactivates the kinase activity of LRRK2. AAVs were stereotaxically co-injected into the rat SNc and histological evaluation was performed at 6 and 15 weeks (early and late time points) post-infection. Results showed that ΔLRRK2G2019S increased the toxicity of α-synA53T in a kinase-dependent manner. Altogether, the present study supports the hypothesis that a functional interaction between LRRK2 and α-syn may play a key role in PD pathogenesis. The new “double hit” model we developed in rats may be of interest to test novel neuroprotective strategies targeting LRRK2/α-syn in vivo
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Abraham, Jean-Daniel. „Mise au point de préparations vaccinales basées sur des vecteurs viraux et dirigées contre l'infection par le virus de l'Hépatite C“. Strasbourg 1, 2003. http://www.theses.fr/2003STR13066.
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"Le Virus de l'Hépatite C (VHC) touche plus de 170 millions de personnes dans le monde. Les infections par ce virus conduisent au développement de stéatoses, de cirrhoses et de cancers du foie dans 5 à 20 % des cas. Du fait d'une faible multiplication des virions in vitro, et donc d'un manque de données quant aux propriétés intrinsèques des enzymes virales, peu de traitements antiviraux voient le jour. La vaccination semble pour l'instant la voie privilégiée dans la lutte contre l'épidémie. Des vecteurs viraux recombinants codant, d'une part, pour les protéines de structure natives ou modifiées ou, d'autre part, pour les protéines non structurales du VHC, ont été construits. Ces vecteurs sont basés sur un poxvirus (virus de la vaccine, souche MVA) et un adénovirus de type 5 non réplicatifs. Leur capacité à permettre la production des protéines VHC a été testée après infection de cellules hépatocytaires humaines par immunofluorescence ou Western Blot. L'immunogénicité de ces vecteurs viraux a été évaluée dans deux modèles murins. Les anticorps anti-VHC ont été détectés par test ELISA dans le sérum des souris immunisées. Les lymphocytes présents dans la rate ont été testés pour leur capacité à proliférer (tests d'incorporation de 3H-thymidine), à produire de l'IFN-g (tests ELISPOT) ou pour leur propriétés cytotoxiques (test de relargage de 51Cr) en présence des antigènes VHC. Nous avons ainsi pu démontrer l'induction plus efficace de réponses immunitaires dirigées contre la glycoprotéine d'enveloppe E2 lors d'immunisations réalisées avec le vecteur permettant l'expression de cette protéine à la surface cellulaire, en comparaison avec E2 native intracellulaire. Après avoir évalué les propriétés individuelles de chaque vecteur viral, les perspectives de ce projet sont d'évaluer l'immunité de combinaisons vaccinales de type "prime-boost", et de sélectionner les combinaisons les plus efficaces en vue d'inclure les vecteurs choisis dans des protocoles d'essais cliniques. "More than 170 millions people are infected by Hepatitis C Virus (HCV) throughout the world. Five to twenty percent of these infections lead to cirrhosis and hepatocarcinoma. Few datas about viral enzymes have been collected, due to the absence of an efficient in vitro replication system. Thus, few specific antiviral drugs are available to fight against the desease. Nowadays, vaccination seems the most promising strategy. Recombinant viral vectors, either encoding native or modified HCV structural proteins, or encoding non structural proteins, were engineered. These vectors were based on vaccinia virus (MVA strain) and adenovirus, which are both non replicative in most of mammalian cells. All vectors were first analyzed for their capacity to allow HCV proteins expression in hepatocellular transduced cells. Proteins were detected by immunofluorescence or Western Blot. The immunogenicity of the vectors was evaluated in two murine models (C57/Bl6 and HLA-A2. 1 transgenic mice). Anti-HCV antibodies were detected by ELISA in sera from immunized mice. Mice splenocytes were analyzed either for their ability to proliferate (3H-thymidine incorporation test), to produce IFN-g (ELISPOT), or for their cytotoxic properties (51Cr release CTL assay). Thus, we have demonstrated a more efficient induction of humoral and cellular immune response against the viral envelope glycoprotein E2 when mice were immunized with the vector encoding E2 expressed at the cell surface, compared with the intracellular native E2. After analysis of the immunogenicity of each vector, this work will lead to the evaluation of prime-boost combination and to the selection of adenoviral and poxviral vectors for clinical assays
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Mongiat-Artus, Pierre. „Stratégies d'adressage cellulaire de vecteurs viraux pour la thérapie génique en urologie“. Paris 11, 2002. http://www.theses.fr/2002PA11TO73.
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Cottis, Solène. „Viral manipulation and vectorial specificity mediated by interaction with the G3BP protein, Rasputin in Anopheles mosquitoes“. Electronic Thesis or Diss., Sorbonne université, 2022. http://www.theses.fr/2022SORUS437.
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Contrairement aux moustiques Aedes aegypti, vecteurs du virus chikungunya (CHIKV) et de nombreux arbovirus tels que le virus de la dengue et le virus Zika, les moustiques Anopheles gambiae sont les vecteurs du parasite Plasmodium, agent causal du paludisme. La réponse des agents pathogènes chez les anophèles a été très étudiée pour Plasmodium en raison de l'importance clinique de cet agent pathogène dans le monde. Le seul arbovirus connu activement transmis par ces moustiques est o'nyong-nyong (ONNV). Le potentiel vectoriel des anophèles pour la transmission virale est peu connu. Cependant, la présence d’arbovirus chez ces moustiques indique une possibilité pour les anophèles de devenir des vecteurs viraux plus importants à l'avenir. La réponse antivirale chez ces moustiques a été principalement étudiée avec ONNV, bien que peu d'information soit disponible sur le sujet. Les « Ras-GAP SH3 domain-binding protein » (G3BP) et leur orthologue, Rasputin, chez le moustique ont été très étudiés chez les mammifères et seulement explorés chez les moustiques Aedes en tant que facteurs proviraux. Cependant, le rôle de Rasputin chez les anophèles et le mécanisme moléculaire proviral exact médié par Rasputin et les G3BPs n’est pas connu. Par conséquent, le premier objectif de cette thèse est d'évaluer le rôle de Rasputin lors de l'infection de ONNV chez les moustiques anophèles en se concentrant sur la modulation de l’immunité antivirale. En utilisant une combinaison de méthodes génomiques, microscopiques et biochimiques, j'ai prouvé, pour la première fois, que Rasputin agit via un nouveau mécanisme de détournement viral médié par son interaction avec la protéine virale non structurale 3 (nsP3) de ONNV. Rasputin agit comme l’interrupteur entre une immunité stérile et une infection virale au cours de la première phase d'infection de l’abdomen chez les moustiques.La deuxième partie de mon projet de thèse se concentre sur les facteurs déterminants la spécificité vectorielle chez les moustiques en utilisant ONNV et CHIKV comme modèle expérimental. ONNV et CHIKV sont deux alphavirus étroitement apparentés avec de nombreuses similitudes dans leur biologie, la seule différence connue entre ces deux virus est leur transmission par deux genres de moustiques différents. Des études ont révélé que nsP3 pourrait être un déterminant de la spécificité vectorielle entre ces deux virus, par conséquent nous évaluons le rôle de l'interaction entre Rasputin et nsP3 dans ce processus. En utilisant différentes méthodes génomiques et cellulaires, j'ai mis en évidence que Rasputin agit comme facteur proviral de CHIKV chez les anophèles. J'ai également montré que l'interaction entre Rasputin et nsP3 est en partie dépendant de l’origine virale du domaine hypervariable de nsP3. J’ai pu mettre en évidence que cette interaction pourrait jouer un rôle, au moins partiel, dans la spécificité vectorielle. Enfin, j'ai étudié le rôle d'un nouveau facteur impliqué dans l'infection de ONNV codé par le gène AGAP000570. J'ai montré que ce facteur extracellulaire a un rôle proviral au cours de l'infection d’ONNV via un possible mécanisme paracrine. J'ai également étudié la relation entre ce facteur proviral et Rasputin lors d'une infection virale révélant que ces deux protéines pourraient agir dans la même voie et qu’elles peuvent réguler leurs expressions transcriptionnelles entre elles. Ces résultats génèrent de nouvelles informations biologiques sur la fonction provirale de Rasputin dans la manipulation des voies immunitaires antivirales chez les moustiques qui pourraient être étendues au rôle de l'orthologue G3BP chez les mammifèresAedes aegypti mosquitoes are vectors of many arboviruses including chikungunya virus (CHIKV), Dengue virus, yellow fever virus, and Zika virus. In contrast Anopheles gambiae transmit the parasite Plasmodium, causative agent of malaria. The response of Anopheles mosquitoes to pathogens has been studied mainly for Plasmodium due to the clinical importance of malaria. The only known arbovirus for which Anopheles is the primary vector is o’nyong-nyong virus (ONNV). It is not understood why Anopheles apparently do not display more vectorial potential for arboviruses, particularly because the presence of a virome and transmission of ONNV suggests a potential risk for Anopheles to become a more prominent arbovirus vector in the future. Antiviral response in Anopheles has primarily been studied using ONNV, although only relatively few reports have been published on the subject. The mosquito orthologs of Ras-GAP SH3 domain binding proteins (G3BP), called Rasputin, has been studied in mammals but barely examined in mosquitoes where Rasputin was shown to act as a proviral factor in Aedes, but the proviral molecular mechanism is not understood yet. The first objective of this thesis is to assess the role of Rasputin during ONNV infection in Anopheles mosquitoes and to determine the mechanism mediated by Rasputin. We hypothesis that Rasputin may interact with host antiviral immunity. By using a combination of genomic, cellular, and biochemical methods, I provide evidence that Rasputin is proviral because of the viral manipulation of Rasputin to modulate antiviral immune signaling pathways. These results indicate, for the first time, that Rasputin is required for viral hijacking as a physical target of the viral non-structural protein 3 (nsP3) of ONNV. The second part of my thesis project focused on vectorial specificity in mosquitoes by using the comparison of two closely related alphaviruses, ONNV and CHIKV, as an experimental model. ONNV and CHIKV display many similarities in their biology and pathology, with the major difference being their use of vector species (Anopheles and Aedes, respectively). Previous evidence suggested that nsP3 could be a determinant of vectorial specificity between those two viruses, and here we hypothesize that the role of the interaction between Rasputin and nsP3 of the two different viruses and mosquitoes has a role in vector specificity. By using genomic and cellular methods, I highlighted that Rasputin also acts as a proviral factor for CHIKV in an Anopheles cellular model. Moreover, we found that the match between Anopheles or Aedes Rasputin and the nsP3 of each virus is an important determinant of the cell-specific viral infection. Thus, the interaction between Rasputin and nsP3 of CHIKV and ONNV at least in part influences vectorial specificity for these alphaviruses. Finally, I studied the role of a new host factor involved in ONNV infection of Anopheles encoded by the gene AGAP000570. I characterized the proviral role of this extracellular factor during ONNV infection through a possible paracrine-like mechanism. I also assess the relationship between this secreted factor and Rasputin during viral infection and revealed that those two proteins could act in the same functional pathway. These results generate novel biological insight for the proviral function of Rasputin in manipulating antiviral immune pathways in mosquitoes that could be extended to the role of G3BP in mammals
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Hermal, Florence. „Recouvrement et modification de nanoparticules afin d’optimiser leurs propriétés physico-chimiques pour des applications pharmaceutiques“. Thesis, Strasbourg, 2019. http://www.theses.fr/2019STRAF058.
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La technique du recouvrement couche par couche (« Layer-by-Layer », LbL) s’est imposée en tant que méthode simple et efficace pour la modification et la fonctionnalisation de surfaces, notamment de nanoparticules. Nous avons exploré cette technique de recouvrement afin d’augmenter la résistance de liposomes conventionnels. Nous avons mis au point une procédure de formulation couche par couche en utilisant deux polyélectrolytes biodégradables et biocompatibles de charges opposées : la poly(L-lysine) (PLL) et l’acide poly(L-glutamique) (PGA). Cette procédure a permis de développer des formulations très homogènes de liposomes recouverts jusqu’à 6 couches de polymères (layersomes) et de liposomes recouverts de deux couches de polyélectrolytes réticulés. Le recouvrement a été caractérisé par diffusion dynamique de la lumière (DLS), par la technique de microbalance à cristal de quartz (QCM), ainsi que par transfert d’énergie entre deux molécules fluorescentes (FRET). Des études de stabilité des formulations à 4°C dans une solution tamponnée ont démontré que certaines structures sont stables sur 2 mois sans impacter leur capacité d’encapsulation. Les résultats suggèrent une meilleure résistance des liposomes recouverts en présence d’un détergent non-ionique (Triton™ X-100) ainsi qu’en présence de plasma. Dans un second temps, cette procédure a été adaptée au recouvrement de particules virales inactivées de type H5N1, dans le but de développer une forme « retard » du virus. Des particules virales recouvertes jusqu’à 4 couches de polymères ainsi que des particules recouvertes de 2 couches de polyélectrolytes réticulés ont été obtenues et caractérisées par DLS, par diffraction laser (LD) ainsi que par microscopies confocale et électronique à transmission. Des études de stabilité ont démontré que le recouvrement des virus conservés à 4°C est stable au moins 2 mois. Nous avons montré que le recouvrement n’a pas eu d’impact sur l’immunogénicité des particules virales et qu’un relargage différé du virus était probable. Ces travaux ont ainsi démontré l’adaptabilité de l’assemblage couche par couche de nanoparticules pour des applications pharmaceutiques variéesThe Layer-by-Layer (LbL) technique has emerged as a simple and effective method for surface modification and functionalization, especially of nanoparticles. We have explored this coating technique to increase the resistance of conventional liposomes. We have developed a layer-by-layer formulation procedure using two biodegradable and biocompatible polyelectrolytes with opposite charges: poly(L-lysine) (PLL) and poly(L-glutamic) acid (PGA). This procedure has allowed the development of very homogeneous formulations of liposomes coated with up to 6 layers of polymers (layersomes) and liposomes coated with two layers of cross-linked polyelectrolytes. The coating was characterized by dynamic light scattering (DLS), quartz crystal microbalance technique (QCM), and energy transfer between two fluorescent molecules (FRET). Studies on the stability of formulations at 4°C in a buffered solution have shown that some structures are stable over 2 months without impacting their encapsulation capacity. The results suggest a better resistance of the coated liposomes in the presence of a non-ionic detergent (Triton™ X-100) as well as in the presence of plasma. In a second step, this procedure was adapted to coat inactivated H5N1 virus particles in order to develop a "delayed" form of the virus. Viral particles coated with up to 4 polymer layers as well as particles coated with 2 layers of cross-linked polyelectrolytes were obtained and characterized by DLS, laser diffraction (LD) as well as confocal and transmission electron microscopy. Stability studies have shown that the coating of viruses stored at 4°C is stable for at least 2 months. We showed that the LbL assembly had no impact on the immunogenicity of the viral particles and that a delayed release of the virus was likely. This work has demonstrated the adaptability of layer by layer assembly of nanoparticles for various pharmaceutical applications
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Thevenet, Jonathan. „Développement de vecteurs viraux permettant une expression spécifique du transgène dans les neurones /“. Sion, 2008. http://doc.rero.ch/record/10794?ln=fr.
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Westmoreland, Patrick Riley. „Recombinant Adeno-associated Viral Vector Design Influences Genotoxic Potential“. The Ohio State University, 2018. http://rave.ohiolink.edu/etdc/view?acc_num=osu1514462220056427.
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Chen, Jiaxuan. „Amphiphilic dendrimers for nucleic acid delivery“. Electronic Thesis or Diss., Aix-Marseille, 2021. http://theses.univ-amu.fr.lama.univ-amu.fr/210310_CHEN_287zgujq865yybu380ckoiv981e_TH%20(1).pdf.
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La thérapie génique utilisant les acides nucléiques représente un des progrès les plus récents de la révolution biotechnologique en médecine en pouvant traiter presque toutes les maladies à sa racine. Cependant, les acides nucléiques sont sensibles à la dégradation enzymatique et leurs charges négatives sont un obstacle majeur pour l'absorption cellulaire. Dans ce contexte, les dendrimères amphiphiles émergent comme des vecteurs non viraux attrayants pour le transport d'acide nucléique car ils sont capables de bénéficier des avantages des vecteurs lipidiques et polymères. Dans ma thèse de doctorat, j'ai pu concevoir, synthétiser et caractériser une série de dendrimères amphiphiles pour la délivrance d'acide nucléique. Ces dendrimères amphiphiles portent soit des chaînes alkyle hydrophobes avec une insaturation variable, soit une chaîne bola-lipide avec un groupe thioacétal sensible aux espèces réactives de l'oxygène (ROS), soit des dendrons PAMAM hydrophiles avec différentes générations et terminaisons cationiques, y compris les fonctionnalités amine tertiaire, arginine et guanidine. J'ai ainsi pu établir des synthèses fiables et reproductibles de ces dendrimères. Des études préliminaires sur ces dendrimères ont révélé qu’avec des terminaisons arginine et guanidine ils montraient une meilleure efficacité pour le transport d'acide nucléique. En outre, les dendrimères bola-amphiphiles de différentes générations avaient des performances différentes pour la délivrance d'ADN et d'ARNsi. En conclusion, ces dendrimères amphiphiles sont des vecteurs non-viraux prometteurs pour la thérapie géniqueGene therapy via nucleic acid therapeutics represents the most recent advance made during the biotechnology revolution in medicine. While allowing the treatment of almost any disease with known gene sequence at its root, nucleic acid therapeutics are vulnerable to enzymatic degradation and their negative charge also presents a major obstacle for cellular uptake. Amphiphilic dendrimers are emerging as appealing non-viral vectors for nucleic acid delivery thanks to their ability to offer delivery advantages of both lipid and polymer vectors. In my PhD thesis, I designed, synthesized and characterized a series of amphiphilic dendrimers for nucleic acid delivery. These amphiphilic dendrimers bear either hydrophobic alkyl chains with varying levels of unsaturation or bola-lipid core with thioacetal group responsive to the reactive oxygen species (ROS), alongside hydrophilic PAMAM dendrons the generation number and cationic terminals (tertiary amine, arginine and guanidine functionalities) of which vary between amphiphilic dendrimers. I established a robust and reproducible synthesis for these dendrimers. Preliminary studies on the use of these dendrimers for nucleic acid delivery revealed that those with arginine and guanidine terminals showed better delivery efficiency compared to those bearing primary amine terminals. Also, performance of bola-amphiphilic dendrimers in DNA and siRNA delivery was generation-dependent. Collectively, the results provide both a proof-of-principle of the use of amphiphilic dendrimers as vectors for nucleic acid delivery, and a means to understanding the structure-activity relationship involved
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MIRAMON, MARIE-LAURE. „Synthese et evaluation de nouveaux vecteurs non-viraux biocompatibles pour le transfert de genes“. Rennes 1, 2001. http://www.theses.fr/2001REN10010.
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La therapie genique est une approche therapeutique consistant a compenser l'anomalie du fonctionnement d'un gene altere ou absent par l'apport d'un gene normal destine a prendre en charge la production de la proteine deficitaire. L'introduction du gene dans la cellule necessite la mise au point de systemes de vectorisation. Les vecteurs viraux sont particulierement efficaces mais immunogenes. L'utilisation de vecteurs de synthese est alors envisagee. Dans ce contexte, nous decrivons dans le premier chapitre la synthese de nouveaux amphiphiles bicatenaires cationiques ou neutres. La nature (i) des substrats de depart (glycine betaine, sucres, glycerol, aminoacides et acides gras) et (ii) des liaisons covalentes reliant les differentes unites, assurent la biocompatibilite des monomeres. Notre approche a ensuite consiste a determiner des relations structure - proprietes physico-chimiques - efficacite de transfection dont la generalisation devrait permettre de limiter les essais biologiques aux vecteurs les plus performants. Dans le second chapitre, l'influence de la structure chimique des molecules synthetisees sur leurs proprietes cristallines liquides lyotropes ainsi que sur l'architecture des agregats supramoleculaires en presence ou non d'adn, est analysee. Des etudes de microscopie sous lumiere polarisee ont mis en evidence l'aptitude des monomeres a former des structures lamellaires. De plus, la visualisation apres cryofracture des agregats adn / vecteur lipidique a revele que la nature des lipoplexes varie selon les conditions de formulation. Dans le troisieme chapitre, les essais de transfection d'adn realises sur des cellules d'origines diverses montrent une correlation structure / efficacite, modulee par la formulation
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Lecollinet, Sylvie. „Mécanismes d'interaction des vecteurs adénoviraux avec la muqueuse intestinale et conséquences pour la vaccination orale“. Paris 7, 2006. http://www.theses.fr/2006PA077121.
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Afin d'optimiser les vecteurs adénoviraux (Ad) pour une immunisation orale, nous avons souhaité caractériser lesT interactions des Ad avec la muqueuse intestinale et leurs conséquences sur l'induction de réponses immunitaires (RI). L'efficacité des Ad conventionnels dérivés du sérotype 5 (Ad5) pourrait être limitée par une faible disponibilité de leurs récepteurs au pôle apical de l'épithélium. Nous avons comparé le comportement de vecteurs dérivés d'AdS pseudotypés avec les fibres d'autres sérotypes humains, utilisant des récepteurs différents, dans des cultures d'épithélium intestinal différencié. Les vecteurs portant les fibres de certains Ad des sous-groupes B et D ont transduit l'épithélium humain depuis le pôle apical bien plus efficacement que l'AdS, en liaison avec leur capacité à s'attacher sur CD46 ou des sialoconjugués. Les Ad testés ont induit chez la souris C57B1/6 la production d'IgA intestinales, dont la cinétique et l'amplitude différaient fortement même pour des Ad partageant des récepteurs identiques. L'efficacité d'immunisation ne semble donc pas refléter la capacité de franchissement de l'épithélium in vitro. L'analyse de la distribution des transcrits viraux a cependant montré une bonne corrélation entre efficacité de transduction de l'intestin in vivo et in vitro. De plus, des réponses immunitaires identiques ont pu être observées entre des souris sauvages ou transgéniques pour le CD46 humain après administration d'un Ad portant une fibre CD46-dépendante. Au final, ces études suggèrent que l'interaction de la fibre avec son récepteur sur les cellules épithéliales ne constitue pas une étape limitant l'induction des RI après administration orale des AdIn an effort to optimise adenoviral vectors (Ad) for oral vaccination, we wish to characterise the interactions between Ad and intestinal mucosa and their consequences for the induction of immune responses (IR). The efficacy of conventional Ad derived from serotype 5 (Ad5) could be limited by the low availability of their receptors at the apical pole of epithelia. We have compared the behaviour of vectors derived from Ad5 and pseudotyped with the fibers of different human serotypes, known to use diverse receptors, in culture models of differentiated intestinal epithelium. Vectors bearing the fibers of certain Ad of subgroups B and D transduced human epithelium from the apical pole much more efficiently than Ad5, in relation to their capacity to use CD46 or sialoconjugates for attachaient. Upon intragastric (ig) immunisation of C57B1/6 mice, the tested vectors consistently elicited intestinal IgA secretion, whose kinetics and amplitude substantially differed even for Ad that used identical receptors. Thus vaccinal efficiency did not appear to mirror capacity to breach the epithelial barrier in vitro. However, analysis of intestinal expression of viral transcripts evidenced a good correlation between in vitro and in vivo intestinal transduction efficacies. Moreover, identical IR were detected in wildtype and human CD46 transgenic mice after ig administration of an Ad bearing a CD46-dependent fiber. When taken together, these studies suggest that the interaction between fiber and its cognate receptor on epithelial cells does not constitute a limiting step for induction of IR after oral administration of Ad
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Gaiffe, Emilie. „Les cellules apoptotiques vecteurs d'oncogènes viraux : Une voie alternative de la carcinogenèse associée aux HPV“. Thesis, Besançon, 2011. http://www.theses.fr/2011BESA3006/document.
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Chez les mammifères, les cellules apoptotiques peuvent être complètement dégradées par des cellules phagocytaires spécialisées ou servir de vecteur d'ADN Le transfert d'oncogènes via les cellules apoptotiques aboutit à la transformation des cellules receveuses uniquement si celles-ci sont déficientes en p53. Sachant que Fniicogène E6 des papillomavirus humains (HPV) à haut risque induit la dégradation de p53, il est concevable que son transfert par la cellule apoptotique soit à l'origine d'un mécanisme alternatif de carcinogenèse associée aux HPV. Afin de confirmer cette hypothèse, l'apoptose de cellules dérivées de cancer du col de l'utérus, abriiam ou non des séquences d'HPV, a été induite. En collaboration avec l'équipe de Patrick Sandoz du laboratoire d'optique de FEMTO-ST, nous avons adapté leur inicr;système référencé en position à l'observation automatisée de Finternalisation des cellules apoptotiques. Nous avons aussi déterminé que les cellules apoptotiques son! phagocytées par les fîbroblastes quel que soit leur statut virologique. Seules les cellules apoptotiques dérivées de cellules abritant de l'ADN d'HPV transforment les cellules receveuses. L'expression de l'ADN viral, dont E6, dans les fîbroblastes transformés ainsi que la perte d'expression des protéines p53 et p21 suggère que les oncogènes d'HPV pourraient être à l'origine de la transformation. Les résultats présentés dans ces travaux mettent en évidence un nouveau mécanisme de carcinogenèse associée aux HPV via la phagocytose des cellules apoptotiques, potentiellement impliqué dans la transformation de cellules primaires et la progression des tumeurs associées aux HPVApoptotic cells in mammals may be completely degraded by specialized phagocytic cells or serve as a DNA vector. The oncogene transfer via apoptotic cells leads to the transformation of récipient cells but only when they are p53 deficient. As the E6 oncogene of high-risk human papillomavirus (HPV) leads to p53 dégradation, its transfer from apoptotic cells may be the cause of an alternative mechanism of HPV-associated carcinogenesis. To confirm this hypothesis, we induced apoptosis of cervical cancer cells that may harbor HPV sequences. In collaboration with Patrick Sandoz's team at the FEMTO-ST optical laboratory, we used their position-referenced microsystem for the automated observation of apoptotic cell internalization. We also found that apoptotic cells are phagocytized by fibroblasts regardless of their virological status. Only apoptotic cells from cells harboring HPV DNA transform recipient cells. Viral DNA expression, including E6, in transformed fibroblasts and the loss of p53 and p21 protein expression suggest that HPV oncogènes may cause transformation. These results highlight a new mechanism of HPV-associated carcinogenesis via apoptotic cell phagocytosis. This mechanism may be involved in thé transformation of primary cells and the progression of HPV-associated tumors
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CLARY, LAURENCE. „Phospholipides et glycolipides comme constituants de systemes vecteurs de medicaments ou comme agents anti-viraux“. Nice, 1996. http://www.theses.fr/1996NICE4927.
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Les liposomes suscitent actuellement un formidable interet dans le domaine de la vectorisation de medicaments. Cependant, le nombre limite de molecules actuellement disponibles permettant la maitrise des parametres physico-chimiques et biologiques de ces systemes, limite leur champ d'utilisation. Pendant ces annees de these, nos efforts se sont donc concentres sur la conception et l'elaboration de nouvelles molecules amphiphiles fluorees derivees de la serine ou de 2,3-et 1,3-diaminopropanol. Ces composes possedent une tete polaire phosphocholine ou galactose et une ou deux chaines hydrophobes dont une au moins se termine par un segment fluore. Dans la premiere partie, nous decrivons la synthese de sept phosphocholines fluorees bicatenaires derivees des diaminopropanols et de la serine et l'evaluation biologique (dose toleree) de deux d'entre-elles. Ces composes sont des analogues de phosphatidylcholines, phospholipides naturels les plus abondants. L'etude de leur comportement thermotrope a ete realisee par analyse enthalpique differentielle a balayage. Dispersees dans l'eau, ces molecules forment des vesicules (mise en evidence par microscopie electronique) qui sont pour la plupart stables a la sterilisation thermique et au stockage. Les tests d'encapsulation d'une sonde hydrosoluble (la 5(6)-carboxyfluoresceine) ont montre que les liposomes obtenus peuvent encapsuler et retenir efficacement un compose hydrosoluble dans un tampon et dans le serum humain. Par contre, ces vesicules sont tres permeables a l'echange h#+/na#+. Dans la deuxieme partie, nous decrivons la synthese de cinq glycolipides derives de la serine a tete polaire galactose. Le galactose devrait permettre d'agir sur les proprietes biologiques des liposomes comme leur reconnaissance par les cellules hepatiques mais aussi comme site recepteur pour les interactions avec des virus (le vih par exemple, via sa glycoproteine gp 120). Ces composes incorpores dans des liposomes ne modifient pas la permeabilite membranaire du systeme vecteur. Enfin, deux d'entre-eux presentent une activite anti-vih sur des cultures cellulaires
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Top, Sokunthea. „Le virus myxomateux, vecteur vaccinal chez les ruminants : application à la bluetongue“. Toulouse 3, 2012. http://thesesups.ups-tlse.fr/1661/.
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Les poxvirus sont considérés comme des vecteurs vaccinaux de choix. Parmi eux le virus myxomateux (MYXV) prototype du genre leporipoxvirus a été positivement évalué chez différentes espèces animales, excepté les ruminants. Dans ce travail, nous avons évalué la souche atténuée SG33 du MYXV en tant que vecteur vaccinal non réplicatif chez les moutons. Dans un premier temps, nous avons étudié les interactions entre le SG33 et les cellules dendritiques (DC). Nous avons montré in vitro que le SG33 est capable d'infecter les DC, et préférentiellement la sous-population de DC de type Langerhans. Bien que le cycle de réplication du SG33 soit abortif, l'expression du transgène dans ces cellules a été démontrée. Après maturation, les DC ovines restent sensibles au SG33 mais entrent en apoptose dans les huit heures qui suivent l'infection. In fine, l'analyse du profil d'expression génique des DC infectées, montre que la majorité des gènes surexprimés est impliquée dans la réponse inflammatoire, la réponse immune et les voies de signalisation des interférons de type I. Par la suite, l'efficacité du SG33 comme vecteur vaccinal chez le mouton a été démontrée en utilisant comme modèle d'épreuve une souche hypervirulente du virus de la bluetongue (BTV). Des moutons ont été immunisés avec du SG33 exprimant la protéine VP2 associée ou non à la protéine VP5 du BTV. Seule l'immunisation avec le SG33 exprimant VP2 a permis d'induire une protection clinique et virologique contre une inoculation d'épreuve avec le BTV homologue. La protection est corrélée à la présence d'anticorps neutralisants chez les moutons avant inoculation d'épreuve. Les niveaux de VP2 produite par les 2 virus recombinants seraient à l'origine de la différence de protection observée. Finalement, la protéine VP7 étant responsable d'une protection croisée partielle entre sérotypes du BTV, nous avons montré que l'inoculation intradermique de SG33 exprimant VP7 à des moutons, induisait l'apparition d'une réponse humorale et cellulaire CD4+ spécifique de VP7. Toutefois, cette réponse immunitaire ne s'est pas révélée protectrice lors d'une inoculation d'épreuve hétérologue. Ces résultats indiquent que le MYXV est capable d'induire une réponse immune adaptative efficace, conduisant à une protection significative contre une inoculation d'épreuve sévère, faisant de ce virus, un vecteur prometteur pour la vaccination des ruminantsPoxviruses are deemed as vaccine vectors of choice. Among them, the myxoma virus (MYXV), the prototype of the Leporipoxvirus genus has proved its efficacy in different animal species but not in ruminants. In this work, we evaluated SG33, an attenuated strain of MYXV as a non-replicative vaccine vector in sheep. In a first study, we examined interactions between SG33 and ovine dendritic cells. We showed in vitro that SG33 infect ovine dendritic cells (DC) mainly the subpopulation of Langerhans-type. Expression of the recombinant antigen was demonstrated although the cycle of SG33 replication was abortive. After maturation, the ovine DC remained susceptible to MYXV, although apoptosis occured within eight hours after infection. Finally, analysis of the gene expression profile of infected DC highlighted that most overexpressed genes are involved in the inflammatory and immune responses, and the signaling pathways of type I interferon. Subsequently, the final demonstration of the SG33 efficacy as a vaccine vector in sheep was carried out using as challenge experiment. We used a highly virulent bluetongue virus challenge model to test protection of sheep previously immunised with SG33 expressing the major VP2 protein antigen of BTV, associated or not with the VP5 protein. We showed that only two immunisations with SG33 expressing VP2 alone elicited a significant clinical and virological protection in sheep against the homologous BTV challenge. Protection was mainly correlated with the presence of neutralising antibodies in sheep before challenge. Differences of VP2 expression between the two SG33 recombinant viruses may explain the differences of protection observed in this study. Finally, since VP7 protein of BTV was suggested to induce cross protective immunity between BTV serotypes, we showed that intradermal inoculation of sheep with SG33 expressing the VP7 protein, can generate an humoral and a CD4+ cellular immune response specific to VP7. However, this immune response did not provide protection against an heterologous BTV challenge. Taken together, these results indicate that MYXV is able to induce an effective adaptive immune response in sheep, leading to significant protection against a severe challenge, making this virus a promising vector for vaccination of ruminants
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Mulot, Michaël. „Analyse fonctionnelle du récepteur de l'éphrine de Myzus persicae et mise en évidence de son rôle dans la transmissino du virus de la jaunisse du navet“. Thesis, Strasbourg, 2018. http://www.theses.fr/2018STRAJ004/document.
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Les polérovirus infectent une large gamme de plantes d’intérêt économique. Ils sont transmis par un insecte vecteur, le puceron, selon le mode circulant non-multipliant. Le virus, acquis par le puceron lors de l’ingestion de sève sur une plante infectée, traverse l’épithélium des cellules intestinales puis celui des glandes salivaires par un mécanisme de transcytose impliquant des récepteurs encore inconnus. Le récepteur de l’éphrine (Eph) est une protéine membranaire dont un domaine est capable de se lier dans la levure aux protéines structurales des polérovirus. En développant des techniques basées sur l’ARN interférence, nous avons montré que l’acquisition orale d’ARN double brin ciblant Eph chez le puceron Myzus persicae permet de réduire de manière reproductible l’internalisation des polérovirus dans le corps du puceron. Les pucerons ainsi traités transmettent le virus avec une efficacité réduite. Eph pourrait donc assurer la fonction de récepteur des polérovirus chez M. persicaePoleroviruses infect a wide range of economically important plants. They are transmitted in a circulative and non-propagative mode by an insect vector, the aphid. The virus particles are acquired by aphids when ingesting the sap from an infected plant and cross successively the epithelia of the midgut and the salivary gland cells by a transcytosis mechanism that relies on the presence of unknown receptors.The ephrin receptor (Eph) is a membrane protein which contains a domain able to bind in yeast to the structural proteins of poleroviruses. By developing methods based on RNA interference, we have shown that oral acquisition of double-stranded RNA targeting Eph in the aphid Myzus persicae can reproducibly reduce polerovirus internalization into the aphid's body. Such treated aphids transmit the virus to plants with a lower efficiency. Eph could therefore function as a receptor for poleroviruses in M. persicae
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Suleman, Muhammad. „Interaction des vecteurs vaccinaux dérivés de l'adénovirus humain de sérotype 5 avec des cellules dendritiques“. Paris 7, 2011. http://www.theses.fr/2011PA077022.
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Les vecteurs vaccinaux dérivés de l'adénovirus humain de sérotype 5 (Ad5) induisent de fortes réponses immunitaires (RI) dirigées contre l'antigène codé par le transgène dans diverses espèces de mammifères. Les RI induites présentent une forte orientation T helper (Th) 1, et les vecteurs à base d'AdS sont reconnus comme une vecteur vaccinale prometteuse pour l'induction des réponses des lymphocytes T CD8+. Cependant, les interactions entre ces vecteurs et des cellules présentatrices d'antigène professionnelles (CFA) qui déclenchent les RI adaptatives demeurent peu connues. Les cellules dendritiques (CD) sont des CFA professionnelles dotées de la capacité d'activer des lymphocytes T naïfs, et sont donc à l'origine des RI adaptatives. Les CD sont capables de distinguer différentes catégories d'agents pathogènes, et d'induire des RI qui sont proportionnelles au niveau du risque perçu et appropriées à l'agent pathogène en cause pour en ce qui concerne la nature des effecteurs du système immunitaire déployés. Cette plasticité est liée à l'existence de sous-populations distinctes de CD, et en particulier les CD CD8α+ ou CD8α‾, qui sont spécialisées dans la présentation d'antigène exogène par les voies classes I et II, respectivement. À l'heure actuelle, cependant, la contribution relative de différentes sous-populations de CD à l'origine des RI adaptatives par les vaccins à base d'AdS est inconnue. Cette information est nécessaire pour optimiser les interactions entre les vaccins Ad5 et les sous-populations de CD, afin d'amplifier les RI et même d'induire de manière sélective les RI les plus à même de protéger contre l'agent pathogène cible. À cette fin, nous avons exploré comment les vecteurs dérivés de l'AdS interagissent avec les CD spléniques murines. Premièrement, nous avons étudié les interactions entre des vecteurs dérivés de l'AdS et les CD CD8α+ ou CD8α‾. Bien que dans les expériences menées ex vivo et in vivo les CD CD8α+ and CD8a‾ aient capté un vecteur dérivé de l'AdS avec la même efficacité, l'expression du transgène et la présentation d'un antigène codé par le transgène par les molécules du CMH classe I ont été plus efficaces dans les CD CD8α+. En outre, après transduction in vivo et ex vivo avec un vaccin dérivé d'AdS, les lymphocytes T CD8+ spécifiques d'antigène ont été activés plus efficacement par les CD CD8a+ que par les CD CD8α‾. Deuxièmement, nous avons étudié comment l'AdS est capté par les CD muqueuse in situ, après l'inoculation de l'AdS dans des anses intestinales. Les données préliminaires ont indiqué que l'AdS est efficacement transporté vers le tissu sub-épithélial à travers des cellules spécialisées (cellules M) présentes dans l'épithélium associé aux follicules et capté par les CD muqueuses du tissu lymphoïde associé au tube digestif. Les complexes composés de l'AdS et les IgA secrétaires (SIgA) seront préparés pour évaluer le potentiel des SIgA à améliorer la stabilité des vecteurs dérivés de l'Ad5 dans le milieu intestinal et leur franchissement de la barrière muqueuse. Enfin, dans le but d'améliorer le tropisme des vecteurs vaccinaux, des vecteurs biotinylés de manière chimique ou métabolique ont été couplés via la neutravidine soit aux anticorps biotinylés dirigés contre les récepteurs d'endocytotiques présents à la surface des CD soit aux ligands biotinylés de ces mêmes récepteurs. Les expériences menées à l'aide des CD dérivées de la moelle osseuse de souris ont démontré que le reciblage peut améliorer l'attachement, l'expression du transgène et la présentation de l'antigène codé par le transgène par les molécules du CMH de classe I Cette stratégie pourrait être exploitée afin d'améliorer la présentation de l'antigène codé par le transgène par certaines sous-populations de CD, de manière à amplifier le RI ou à induire des RI d'une qualité la plus à même de protéger contre l'agent pathogène cibléVaccine vectors derived from human adenovirus sérotype 5 (Ad5) elicit robust immune responses (IR) directed against the antigen encoded by the transgene in diverse mammalian species. The induced IR exhibits a pronounced T helper (Th) 1 orientation, and Ad5-based vectors are recognized as a leading vaccine platform for induction of CD8+ T lymphocyte responses. Much, however, remains to be learned as regards how these vectors interact with professional antigen presenting cells (APC) to induce adaptive IR. Dendritic cells (DC) are professional APC endowed with the ability to prime naïve T lymphocytes, and are thus seminal in adaptive IR. DC are able to distinguish different classes of pathogens, and induce IR that are proportional to the perceived risk and appropriate, as regards the nature of the immune effectors deployed, for the pathogen in question. This plasticity is related to the existence of distinct DC subsets, such as theCD8α+ and CD8α‾ DC subsets that are specialised in presentation of exogenous antigen by class I and class II pathways, respectively. At present, however, the relative contribution of different DC subsets to the initiation of adaptive IR by Ad5-based vaccines is unknown. This information is needed to optimise interactions between Ad5-based vaccines and DC subsets, so as to amplify immune responses and even selectively elicit pathogen-appropriate IR. To this end, we have explored how Ad5-based vectors interact with murine splenic DC. First, we have investigated the interaction of Ad5-based vectors with CD8α+ or CD8α‾ DC subsets. Although in both ex vivo and in vivo experiment CD8α+ and CD8α‾ PC subsets captured an Ad5-based vector to a similar extent, transgene expression and subsequent MHC class I display of a transgene-encoded antigen were more efficient in CD8a+ DC. Moreover, following in vivo an ex vivo transduction with an Ad5-based vaccine, antigen-specific CD8+ T lymphocytes were more effïciently activated by CD8a+ DC than by CD8a" DC. Second, we have studied how Ad5 is captured by mucosal DC in situ, after intestinal loop inoculation of Ad5. Preliminary data have indicated that Ad5 is effïciently translocated to the subepithelial tissue via specialized M cells present in follicle-associated epithelium and captured by mucosal DC in gut-associated lymphoid tissue. Conjugates of Ad5 with secretory IgA are to be tested to improve stability of Ad5 in the intestinal milieu an enhance breaching of the mucosal barrier. Last, in an attempt to improve the tropism of vaccine vectors, chemically or metabolically biotinylated Ad have been coupled via neutravidin to either biotinylated antibodies or natural ligand directed against endocytotic receptors present at the surface of DC. Trial experiments that have been performed using murine bone marrow DC have shown that retargeting can improve attachment, transgene expression and MHC class presentation of transgene-encoded antigen. This strategy could be exploited to improve delivery of transgene-encoded antigen to selected DC subsets, so as to amplify IR or elicit pathogen-appropriate IR
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Tan, Joanne Li-Ching, und n/a. „Development of Orf virus as a vaccine vector : manipulation of structural proteins for surface display of immunogenic peptides“. University of Otago. Department of Microbiology & Immunology, 2009. http://adt.otago.ac.nz./public/adt-NZDU20090427.144304.
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Orf virus (ORFV) has the potential to be developed as a vaccine vector. Its ability to stimulate non-specific as well as specific immune responses in permissive and non-permissive hosts stands it in good stead to be utilised as such a tool. The fusion of immunogenic peptides to vaccinia virus (VACV) structural proteins have been shown to improve their immunogenicity due to presentation of the foreign antigens in a particulate form that can stimulate both B and T cells. The aims of this study were to fuse foreign antigens to ORFV structural proteins to demonstrate proof-of-concept that such surface display could also render the foreign antigens more immunogenic.
Little is known about ORFV structure and morphogenesis. When this study commenced, the ORFV genome had recently been sequenced and this revealed a large number of homologues in common with VACV. It was thus assumed that both viruses may share structural similarities and that ORFV also assumes the different morphological forms such as the mature virion (MV) and extracellular virion (EV) that are present in VACV. The MV and EV forms are both infectious, with the EV containing an additional membrane acquired from the trans-Golgi network during viral morphogenesis. Furthermore, specific viral proteins are associated with both the MV and EV membranes.
Six ORFV structural proteins ORFV 089, 10 kDa, F1, that are homologues of structural membrane proteins A13, A27 and H3 of VACV MVs, together with ORFV 109, ORFV 110 and B2, that are homologues of structural membrane proteins A33, A34 and F13 of VACV EVs were selected as possible candidates for manipulation. At present, there is some information available only for 10 kDa, F1 and B2. The 10 kDa is required for virus assembly, F1 for mediating cell attachment while B2 has been shown to induce significant antibody responses in sheep. Indeed proteomic analyses predicted similarities in the topologies of all of these proteins with their VACV counterparts.
Using this information, preliminary studies were conducted to generate recombinant ORFVs (rORFVs) which had FLAG fused to the terminus of the protein that was exposed on the surface of the virus particle. Three rORFVs 10 kDa, F1L and 110 were successfully generated. Immunogold labelling of FLAG proteins on virus particles isolated from lysed cells showed that FLAG-10 kDa and FLAG-F1 were displayed on the surface of MV particles whereas FLAG-ORFV 110 could not be detected. Western blot analyses of solubilised recombinant ORFV 110-FLAG particles revealed that FLAG-ORFV 110 was abundant and undergoes post-translational modification indicative of endoplasmic reticulum trafficking whereas FLAG-10 kDa and FLAG-F1 did not appear to be subjected to post-translational modifications. Fluorescent microscopy confirmed the prediction that ORFV 110-FLAG localised to the Golgi in virus-infected cells and immunogold labelling of EVs showed that ORFV110-FLAG became exposed on the surface of EV-like particles as a result of egress from the cell, suggesting that the membranes had been acquired from the Golgi. These modifications also appeared to have minimal effect on the infectivity of these rORFVs.
The study was extended by replacing the small FLAG peptide with an immunogenic protein (EG95), derived from the oncosphere of the zoonotic parasite Echinococcus granulosus. This protein is known to confer protection in immunised animals. Three rORFVs were generated in which a truncated version of the protein, EG95[Delta]TM, was fused to 10 kDa in the absence (rORFV 699) or presence (rORFV 700) of a linker, and also to F1 (rORFV 701). Western blot analyses of these solubilised particles demonstrated that the fusion proteins appeared to be post-translationally modified while immunogold labelling using anti-EG95 monoclonal antibodies successfully demonstrated the surface labelling on these rORFVs.
In order to test the immunogenicity of these rORFVs, prime-boost experiments in sheep were conducted using rORFVs 699, 700 and 701 and a glutathione-S-transferase (GST-EG95) based vaccine. The results showed the production of EG95-specific antibodies. In particular, antibody production by group rORFV 701 compared favourably with a control group that was primed and boosted by GST-EG95 vaccine. This was despite the slightly slower growth rates of rORFVs 700 and 701 and the decreased infectivity of all three rORFVs discovered in in vitro experiments.
In conclusion, these studies indicated the feasibility of this strategy to manipulate ORFV structural proteins for use as an agent for vaccine delivery.
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Iglesias, Maria Candela. „Les vecteurs lentiviraux comme outils pour la vaccination anti-virale“. Paris 7, 2006. http://www.theses.fr/2006PA077108.
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Les vecteurs lentiviraux de transfert de gènes sont devenus des vecteurs prometteurs en vaccination ils transduisent efficacement des cellules dendritiques. Ici nous avons évalué leur potentiel comme outils de vaccination anti-virale. Dans le cadre d'une vaccination thérapeutique contre le SIDA, nous avons testé deux types de vecteurs lentiviraux : soit codant des polyépitopes CTL immunodominants du VIH. Restreints par HLA-A2 ou HLA. B7 : soit codant des protéines du SIV. Les vecteurs polyépitopiques. Stimulent des réponses CTL puissantes et diversifiées chez des souris transgéniques, qui sont encore détectées 1. 5 mois après injection unique. Les vecteurs codant Gag ou Nef stimulent chez la souris des réponses T puissantes. Nous avons évalué chez le macaque Timmunogénicité du vecteur Nef-SIV. L'injection de particules vecteur et l'injection de PC autologues transduites ex vivo stimulent des réponses T puissantes. La protection contre l'infection par le WNV nécessite la production d'anticorps neutralisants. La capacité des vecteurs lentiviraux à déclencher une réponse humorale protectrice n'a jamais été testée auparavant. Nous avons construit un vecteur lentiviral codant pour une version sécrétée de la protéine de l'enveloppe du WNV. Une immunisation unique avec une dose minime de ce vecteur stimule une réponse humorale protectrice de longue durée, stérilisante, dès 7 jours après vaccination, contre une épreuve virale létale. Cette étude élargie l'applicabilité des vecteurs lentiviraux pour la vaccination contre des pathogènes pour lesquels une réponse humorale est nécessaire pour obtenir une protectionLentiviral vectors derived from hiv-1, due to their capacity to transduce non-dividinq cells, have become precious gane transfer Systems, their ability to efficiently transduce dendritic cells (PC), bas also led to their successful use as vaccination vectors. Here we evaluate their potential as anti-viral vaccination vectors. To design a therapeutic vaccination strateqy aqainst AIDS, we constructed lentiviral vectors encoding polyepitopes of immunodominant HLA-A2 or B7 restricted hiv-peptides, or SIV gene fragments. A single injection in mice results in a strong immunogenicity. When immunizing HLA-A2 or B7 transgenic mice with the polyepitope-encoding vector particles, elispot and cytotoxicity assays showed a strong and broad primary T cell immune response still detected 1. 5 months after a single immunization. Injection of a GAG or NEF- encodinq vector in mice induced strong CTL responses. The nef encoding vector was evaluated in macaques : injection of vector particles or ex-vivo transduced PC stimulate strong and diversified CTL responses. Lentiviral vectors are also capable of stimulating specific humoral immune responses in mice. We constructed a vector coding for secreted form of the West Nile Virus (WNV) envelope protein, a virus for which the humoral immune response is the essential component of protective immunity. A single immunization with a minute dose of this vector was efficient at eliciting a long-lasting, protective and sterilizing humoral immunity, only one week after priming, in a mouse model of WNV encephalitis. This study broadens the applicability of lentiviral vectors as vaccines against pathogens for which neutralizing antibodies are required
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Abdou, Souad. „Stratégie antisens d'inhibition de l'expression de gènes viraux (Coronavirus et Cytomegalovirus) : intérêt des cyclodextrines pour la vectorisation d'oligonucléotides“. Nancy 1, 1999. http://www.theses.fr/1999NAN12017.
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La stratégie antisens est basée sur la capacité des oligonucléotides à reconnaître spécifiquement leurs cibles et inhiber la synthèse des protéines. Toutefois l'utilisation d'oligonucléotides en thérapeutique est actuellement limitée. Les difficultés tiennent à leur dégradation rapide par les nucléases des milieux biologiques et à leur faible pénétration intracellulaire. Les recherches actuelles s'orientent vers le développement d'oligonucléotides chimiquement modifiés ou de systèmes transporteurs. L'approche de vectorisation des médicaments vise à moduler voire même à maîtriser la distribution et les propriétés effectrices d'un principe actif en l'associant à un système approprié, un vecteur. Les cyclodextrines, oligosaccharides cycliques de faible masse moléculaire, sont des biovecteurs de choix. Leur cavité hydrophobe leur permet d'inclure de nombreuses molécules, de plus elles sont facilement véhiculées dans l'organisme, non immunogènes et dépourvues de toxicité. Enfin, leur fonctionnalisation par des groupements chimiques devrait améliorer leur capacité de complexation et leur conférer des propriétés de reconnaissance spécifique de récepteurs cellulaires. Ce travail de recherche s'est attaché, d'une part, à concevoir et à expérimenter l'approche oligonucléotidique antisens la plus adaptée à l'inhibition de la production de virus (coronavirus et cytomegalovirus) et, d'autre part, à étudier les propriétés de ces oligonucléotides après leur complexation à des cyclodextrines fonctionnalisées par des groupements glycosylés ou aminés. [. . . ]
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Perrenot, Nicolas Guérin Jean-Luc. „Evaluation du virus myxomateux en tant que vecteur vaccinal chez les volailles“. [S.l.] : [s.n.], 2007. http://oatao.univ-toulouse.fr/1775/1/celdran_1775.pdf.
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Olayat, Sophie. „Utilisation de vecteurs rétroviraux aviaires pour l'étude de l'implication de gènes dans la resistance des oiseaux aux maladies viro-induites“. Tours, 1996. http://www.theses.fr/1996TOUR3309.
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Cosset, François-Loïc. „Tranfert de gènes par des vecteurs rétroviraux aviaires : élaboration de lignées cellulaires transcomplémentantes aviaires, mise au point d'un nouveau procédé de vaccination utilisation des vecteurs rétroviraux“. Lyon 1, 1990. http://www.theses.fr/1990LYO10102.
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Les retrovirus permettent la mise au point de vecteurs de transfert de genes efficaces, en substituant leurs genes par ceux que l'on veut faire vehiculer. Les structures retrovirales recombinantes qui en resultent sont alors defectives. Pour obtenir sous forme de particules virales vecteur ces structures recombinantes, il est imperatif d'elaborer des cellules dites transcomplementantes qui assurent la formation des seules particules virales vecteurs, ce qui conduit a un stock viral defectif qui ne peut alors perpetuer l'etat de viroproduction. Une premiere partie du travail presente dans ce memoire s'inscrit dans le cadre de l'amelioration des deux composantes du systeme de transfert: les vecteurs retroviraux, et les cellules transcomplementantes, a partir des virus de leucose aviaire (alsv), et en particulier des retrovirus rav-1 (rous associated virus) et aev (avian erythroblastosis virus). Nos resultats montrent qu'il est possible de constuire et de caracteriser des vecteurs retroviraux dont on peut obtenir des titres superieurs a 10#5 particules infectieuses par ml, egalement grace a l'amelioration de vecteurs permettant l'elaboration de cellules transcomplementantes. Une des ameliorations apportees sur les vecteurs retroviraux, consiste a definir parmi plusieurs retrovirus, quelles sont les regions les plus actives agissant en cis sur l'expression. Une des ameliorations apportees sur les constructions transcomplementantes est representee par l'insertion de genes de selection sur les genomes recombinants construits, et l'apport dans une cellule, des genes viraux gag, pol, env selon deux constructions distinctes. Une deuxieme partie du travail presente dans ce memoire porte sur une des possibilites d'utilisation du systeme de transfert de genes developpe, chez l'animal, a des fins de vaccinations, soit contre la leucose aviaire induite par les retrovirus, soit contre la maladie de newcastle indu
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Peterschmitt, Michel. „Identification sérologique et dynamique du maize streak virus dans le maïs et dans le vecteur Cicadulina mbila“. Paris 11, 1988. http://www.theses.fr/1988PA112077.
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Les virus sont considérés comme l'un des problèmes majeurs de la production du mais en Afrique Tropicale, en particulier le maize streak virus ( M. S. V. ) et dans une moindre mesure, le maize stripe virus et le maize mosaic virus. Après purification d'isolats réunionnais et production de sérum, une méthode de diagnostic fiable et rapide des 3 maladies virales a été mise au point, pour les besoins de la sélection, à l'aide d'une technique ELISA. Trois sérotypes de M. S. V. Ont été identifiés avec 5 anticorps monoclonaux un sérotype a été mis en évidence sur tous les échantillons de mais analysés, originaires de 11 pays, et sur certains de canne à sucre et poacées. Les 2 autres ont été détectés sur canne à sucre mais non sur mais. Le sérotype trouvé sur mais est transmis par Cicadulina mbila. Cette cicadelle peut être vectrice à des taux de virus inférieurs à 0,15 ng par insecte. Elle est capable d'en accumuler plus de 6 ng en un mois d'alimentation sur plante virosée. Par contre, après acquisition, la dégradation du virus est lente. Ces résultats permettent d’expliquer la bonne persistance du pouvoir infectieux en absence de multiplication virale. La tolérance de la variété composite IRAT 297 est liée à une résistance à la multiplication du virus et on à la limitation de son déplacement dans la plante. La progression de la maladie dans les feuilles est directement liée à la croissance foliaire. Par ailleurs, le virus n'est jamais détecté dans les limbes inoculés. Ces résultats suggèrent le développement d'une résistance des cellules des feuilles après leur différenciation. Plus une plante n’est âgée au moment de son infection, Moins elle en sera affectée. I 1 a été démontré que le suivi des symptômes de la virose sur feuille permet de sélectionner la résistance à la multiplication virale. Une relation a été établie entre cette résistance et une échelle de notation qui permet de cribler les variétés tolérantes d'après leurs symptômes. Cette tolérance peut être précisée par des dosages d'antigènes viraux mais la relation entre taux de virus et rendement reste à établir.
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Vega, Rua Anubis. „Émergence du virus chikungunya en Amérique et en Europe“. Electronic Thesis or Diss., Paris 6, 2015. https://accesdistant.sorbonne-universite.fr/login?url=https://theses-intra.sorbonne-universite.fr/2015PA066197.pdf.
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Le virus chikungunya (CHIKV), transmis par les moustiques Aedes aegypti et Aedes albopictus, constitue un problème majeur de santé publique. Depuis 2004, des épidémies de CHIKV ont été rapportées en Afrique, en Asie, dans les îles de l'Océan Indien, et en Europe. Seule l'Amérique semblait épargnée malgré la présence de fortes densités de moustiques vecteurs et de multiples importations du virus dans le continent par des voyageurs de retour de pays où le virus circulait. Nous avons abordé dans cette thèse le risque d'émergence du CHIKV en Amérique à partir d'une évaluation de la compétence vectorielle de 35 populations d'Ae. aegypti et Ae. albopictus locaux avec différentes souches de CHIKV. Ces populations sont compétentes vis-à-vis du CHIKV avec un rôle des glandes salivaires comme "filtre" de la transmission. De plus, le génotypage des Ae. albopictus d'Amérique par microsatellites a permis d'identifier un cluster génétique de populations se caractérisant par une faible transmission des souches de CHIKV de génotype Est-Centre-Sud-africain. En octobre 2013, des souches asiatiques de CHIKV ont été signalées dans la Caraïbe. Nous avons alors évalué la réceptivité de 11 populations d'Ae. aegypti et Ae. albopictus d'Amérique vis-à-vis de CHIKV de génotype asiatique et avons mis en évidence que les deux espèces étaient compétents pour assurer la diffusion du virus sur le continent. On note aussi qu'Ae. albopictus peut faciliter la propagation du CHIKV vers l'Europe. Néanmoins, la compétence vectorielle d'Ae. albopictus de France vis-à-vis de CHIKV asiatique est affectée négativement par des températures plus basses que celles habituellement observées dans les pays tropicauxChikungunya virus (CHIKV), transmitted mainly by the mosquitoes Aedes aegypti and Aedes albopictus, is a major public health problem. Since 2004, CHIKV epidemics have been reported in Africa, Asia, the Indian Ocean Islands, and Europe. Only the Americas seemed spared despite high densities of mosquitoes and multiple introductions of the virus to the continent by travelers returning from countries where CHIKV was circulating. We have assessed the risk of CHIKV emergence in the Americas by evaluating the vector competence of 35 local populations of Ae. aegypti and Ae. albopictus infected with different strains of CHIKV. These populations were shown to be susceptible to CHIKV infection, highlighting the predominant role of salivary glands as a "filter" of transmission. Genotyping of Ae. albopictus from the Americas using microsatellites allowed the identification of a genetic cluster of populations characterized by a low transmission of CHIKV strains of the East-Central-South-African genotype. In October 2013, Asian strains of CHIKV began circulating in the Caribbean. Thus, we evaluated the susceptibility of 11 populations of Ae. aegypti and Ae. albopictus to the Asian CHIKV genotype and showed that the two species were sufficiently competent to ensure dissemination of the virus throughout the continent. Furthermore, we showed that Ae. albopictus was likely to facilitate the spread of CHIKV to Europe. However, the vector competence of French Ae. albopictus to the Asian CHIKV genotype was negatively affected by temperatures lower than those usually found in tropical countries
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Agüero, González Jesús. „Desarrollo de vectores virales basados en el virus del manchado foliar de los cítricos (CLBV)“. Doctoral thesis, Universitat Politècnica de València, 2013. http://hdl.handle.net/10251/34342.
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Los cítricos son el cultivo frutal económicamente más importante tanto en
España como en el resto de los países productores. La clave para mantener la
competitividad de este sector consiste en obtener material vegetal de alta calidad,
para lo cual son indispensables los programas de mejora. La mejora de cítricos por
métodos clásicos es muy complicada, por lo que hay que recurrir a las nuevas
tecnologías para intentar acelerar y optimizar el procedimiento. La reciente
secuenciación del genoma de dos especies de cítricos ha permitido identificar una
larga lista de genes candidatos a participar en determinados procesos biológicos. Sin
embargo, son necesarios nuevos análisis para asociar cada gen a un fenotipo
específico o función biológica.
El empleo de vectores virales para determinar la función de genes mediante
silenciamiento génico inducido por virus (VIGS) ha demostrado ser una herramienta
muy útil para los estudios de genética reversa realizados en plantas. Este sistema
presenta ventajas respecto a los métodos tradicionales para estudiar la función de
genes como son la mutagénesis o la transformación genética, ya que permite
ensayar la función de numerosos genes en un corto periodo de tiempo. Esto es
especialmente crítico en el caso de los cítricos, que poseen largos periodos juveniles
de entre 6 y 8 años y donde la transformación de plantas adultas es muy difícil.
Además, permite estudiar la función de genes que son esenciales para el crecimiento
o el desarrollo de la planta y cuyo análisis es inviable con los métodos tradicionales.
Al comienzo de la tesis se había desarrollado un vector viral para cítricos
basado en el virus de la tristeza de los cítricos (CTV) con el que se pueden expresar
proteínas pero que no se ha ensayado para estudiar la función de genes mediante
VIGS. En el laboratorio disponíamos de un clon infeccioso de cDNA del genoma
completo del virus del manchado foliar de los cítricos (CLBV), un virus que infecta a
todas las especies y variedades de cítricos ensayadas y es asintomático en la mayoría
de ellas. Este clon infeccioso se ha modificado para obtener vectores virales basados
en el genoma de CLBV que pueden servir tanto para expresar proteínas como para
silenciar mediante VIGS genes de cítricos para la mejora genética de este cultivo.
Para ello, se ha introducido un punto de corte único PmlI en dos zonas del genoma
de CLBV: en el extremo 3¿ no traducible (vector clbv3¿) o en la zona intergénica
localizada entre los genes de las proteínas de movimiento y cápsida (CP) (vector
clbvIN). Para la expresión de secuencias foráneas mediante la formación de un
nuevo RNA subgenómico (sgRNA) se delimitó la secuencia mínima promotora del sgRNA CP mediante clonación de fragmentos de distinta longitud en torno al origen
de transcripción de dicho sgRNA en el vector clbv3'. El fragmento de 92 bases
localizado entre los nt -42 y +50 respecto al inicio de transcripción del sgRNA CP
contenía todos los elementos necesarios para la promoción de un nuevo sgRNA in
vivo. Esta secuencia mínima promotora se clonó en los 2 vectores virales
previamente desarrollados para generar los vectores clbv3¿pr y clbvINpr,
respectivamente. Ambos vectores fueron capaces de producir un nuevo sgRNA y de
expresar proteínas recombinantes.
Para determinar la estabilidad de los vectores obtenidos se clonaron en ellos
fragmentos de secuencias lineales de distinto tamaño, o en tándem invertido para la
formación de una estructura en horquilla, y se inocularon en plantas de N.
benthamiana y cítricos. Todas las construcciones derivadas del vector clbv3' se
mostraron estables a lo largo de las diferentes brotaciones analizadas durante al
menos 3 años, comprobándose la replicación viral e integridad del inserto. Sin
embargo, no se detectó multiplicación viral con ninguna de las construcciones
derivadas del vector clbvIN. La estabilidad de las construcciones derivadas de los
vectores con el promotor duplicado dependía del tamaño del inserto. Con todas
ellas se detectó replicación viral pero se observaron eventos de recombinación
cuando se clonaban fragmentos superiores a 720 nt en el vector clbvINpr o 408 nt en
el vector clbv3'pr.
Un factor importante para determinar la eficiencia y funcionalidad de los
vectores desarrollados es conocer cómo se mueve y se distribuye el virus en los
distintos tejidos de la planta. Para ello se inocularon plantas de N. benthamiana y
cítricos con la construcción clbv3¿pr-GFP, que expresa GFP en los tejidos donde se
localiza el virus. En N. benthamiana, la observación de GFP permitió detectar la
presencia de CLBV en la mayoría de tejidos, acumulándose preferentemente en
óvulos y regiones meristemáticas. En cítricos no se pudo visualizar GFP pero el virus
se detectó en regiones meristemáticas mediante RT-PCR a tiempo real e hibridación
molecular. La acumulación de CLBV en tejidos meristemáticos explicaría la dificultad
de eliminar este virus mediante microinjerto.
Para evaluar la capacidad de los vectores clbv3'pr y clbvINpr para expresar
proteínas se clonó en ellos la secuencia completa del gen gfp y se cuantificó la
cantidad de proteína GFP sintetizada en las plantas infectadas. En N. benthamiana la
cantidad de GFP estimada para el vector clbv3'pr fue de 16 µg de proteína por
gramo de peso fresco, cantidad que resultó entre 5 y 6 veces superior a la estimada para el vector clbvINpr. Sin embargo, en cítricos, debido a la inestabilidad del vector
clbv3'pr, sólo se pudo cuantificar la proteína expresada por la construcción del
vector clbvINpr, estimándose en 0.6 µg de GFP por gramo de peso fresco.
La efectividad de los vectores clbv3', clbv3'pr y clbvINpr para silenciar genes
mediante VIGS se ensayó clonando fragmentos de genes tanto endógenos de
plantas (pds, actina, sulfur) como el gen gfp introducido experimentalmente en
plantas transgénicas. En cítricos todas las construcciones de los tres vectores
indujeron fenotipo de silenciamiento del gen ensayado, aunque el vector clbv3' fue
el más efectivo para el estudio de VIGS en este huésped. Sin embargo, en N.
benthamiana sólo se desencadenó el silenciamiento en las plantas inoculadas con la
construcción clbv3¿pr-hp58PDS, que expresa una horquilla de doble cadena de un
fragmento de 58 nt del gen pds. En todas las plantas silenciadas se detectó una
disminución del correspondiente mRNA del gen ensayado y una acumulación de
siRNAs derivados tanto del mRNA del gen insertado como del RNA genómico del
virus. Por otro lado, el fenotipo de silenciamiento de los genes ensayados se observó
en sucesivas brotaciones, lo que confirma la gran estabilidad de los vectores basados
en el genoma de CLBV.
Los vectores virales desarrollados en esta tesis constituyen una herramienta
eficiente para el estudio de la función de genes mediante genética reversa utilizando
la técnica VIGS. También pueden ser útiles para estudio de genética directa
mediante expresión de proteínas o para la protección del cultivo frente a
enfermedades producidas por virus, bacterias y hongos o frente a plagas de
invertebrados.Agüero González, J. (2013). Desarrollo de vectores virales basados en el virus del manchado foliar de los cítricos (CLBV) [Tesis doctoral no publicada]. Universitat Politècnica de València. https://doi.org/10.4995/Thesis/10251/34342
TESIS
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Moriette, Coralie. „Le virus de la maladie du sommeil des Salmonidés : mise au point d'un ADNc infectieux et obtention d'anticorps monoclonaux“. Paris 11, 2005. http://www.theses.fr/2005PA112140.
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Le Virus de la Maladie du Sommeil (VMS) a été caractérisé au laboratoire comme étant le premier alphavirus aquatique appartenant donc à la famille des Togaviridae. Au cours de ce travail de thèse nous avons poursuivi 3 objectifs : (i) élaboration d'un ADNc infectieux, (ii) génération d'un éventail d'anticorps monoclonaux contre les protéines non structurales et structurales du VMS, et cartographie de certains de ces anticorps, (iii) développement de méthodes diagnostiques pour le VMS. (i) Le génome du VMS est un ARN positif de 12 kb environ, entièrement séquencé. Il a été converti en ADNc et cloné dans un vecteur d'expression eucaryote sous le contrôle de différentes séquences promotrices : soit SP6 (dérivée du phage SP6), soit T7 (dérivée du phage T7), soit du CMV (promoteur précoce du cytomégalovirus). En premier lieu, des minigénomes dans lesquels un gène rapporteur (luciférase, GFP) remplace la région codante pour les protéines structurales ont été construits. Leur expression a été testée et mise au point en transfectant à des cellules de poisson, soit l'ARN synthétisé in vitro à partir du promoteur SP6, soit l'ADN plasmidique porteur des promoteurs CMV ou T7. De cette façon, nous avons déterminé les conditions nécessaires à la réplication du génome viral et à sa détection. Le VMS ne peut être exprimé lorsqu'il est fusionné à la séquence promotrice qui le précède, ce qui constitue une autre particularité de cet alphavirus atypique. Dans le système d'expression CMV/T7, le remplacement du gène rapporteur par la région codant pour les protéines structurales du VMS conduit à la production de particules virales réplicatives identiques au virus sauvage lorsque l'ADNc est transfecté à des cellules de poissonSleeping Disease Virus (SDV) has been characterised in our laboratory as being the first aquatic alphavirus belonging to the Togaviridae family. During this work, we pursue three objectives : (i) elaboration of an infectious cDNA, (ii) generation of a panel of monoclonal antibodies directed against structural and non structural viral proteins, (iii) development of an RT-PCR diagnostic method. (i) The SDV genome is a positive single strand of RNA of approximately 12 kb which sequence is determined. It has been converted in a full length cDNA and cloned in an eukaryotic expression vector under the control of several different promoters : either the SP6 promoter (derived from SP6 phage), or the T7 promoter (derived from T7 phage), or the CMV promoter (early promoter of cytomegalovirus). First, replicons expressing a reporter gene (luciferase, GFP) instead of the structural genes have been constructed. Expression of these replicons has been tested through transfection of fish cells using either RNA transcribed from SP6 promoter, or plasmid DNA carrying CMV or T7 promoters. It was not possible to express SDV genome when it is directly fused to the promoter. In the CMV/T7 expression system, replacement of reporter gene by the structural genes allowed the recovery of infectious viral particles when cDNA was transfected into fish cells. The virulence of this recombinant virus has been studied in vivo on juvenile rainbow trouts. We show that this virus is greatly attenuated and induce a long lasting protection. Otherwise, this system has been tested for development of a gene vector : a second transcriptional unit coding to the GFP protein has been inserted either upstream, or downstream of the structural genes
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Gaucheron, Jérôme. „Synthèse et évaluation de nouveaux lipides comme composants de vecteurs non-viraux pour le transfert de gènes“. Nice, 2000. http://www.theses.fr/2000NICE5483.
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Les travaux réunis dans cette thèse concernent la synthèse et l'évaluation in vitro et in vivo de nouveaux lipides comme composants de vecteurs non-viraux pour le transfert de gènes destinés à la thérapie génique. Ainsi, deux séries de lipides ont été développées et évaluées. La première est constituée par des lipides fluorés pour la formulation de lipoplexes "fluorés", la seconde, par des lipides bi-fonctionnels glyco-polyaminés pour la formulation de lipoplexes fonctionnels destinés à transfecter plus spécifiquement des cellules qui possèdent des récepteurs à glycosides.
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Altmeyer, Ralf. „Utilisation du mengo virus comme vecteur d'expression : applications au developpement de vaccins vivants“. Paris 7, 1994. http://www.theses.fr/1994PA077115.
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Nous avons etudie le potentiel de mengo virus recombinants a induire des reponses humorales et ctl heterospecifiques, ainsi que la pertinence de telles reponses dans la protection contre la maladie. Des recombinants du mengo virus ont ete construits par insertion de sequences heterologues venant de differents pathogenes non-apparentes, c'est-a-dire du virus de l'immunodeficience humaine type 1 (hiv-1), du virus de la rage ou du virus de la choriomeningite lymphocytaire (lcmv). Des virus viables ont pu etre obtenus lorsque les sequences heterologues ont ete fusionnees aux sequences codant pour la region n-terminale du peptide leader (l). Cette approche a permis de produire un recombinant portant 525 nucleotides additionnels. On a reussi a generer un recombinant mengo-hiv, vmln450, exprimant les domaines v3 a c4 de la gp120 du hiv-1. Suite a l'immunisation de souris, le vmln450 s'est montre capable d'induire une reponse humorale. Le vmln450 a egalement pu induire une reponse ctl specifique du hiv-1. De plus, une reponse immunitaire humorale a pu etre induite chez le singe apres immunisation avec le vmln450 par voie intramusculaire aussi bien qu'apres immunisation par voie orale. Nous avons de plus evalue la capacite des mengo virus a induire des reponses immunitaires heterospecifiques protectrices dans le modele de l'infection de la souris par le lcmv. Partant du fait que la protection contre la maladie lcm est mediee par des ctl specifiques, nous avons construit un recombinant, vlcmg4, codant pour un epitope ctl de la np du lcmv restreint a l'haplotype h-2#d. Le vlcmg4 induit une reponse ctl cd8+ chez des souris balb/c et protege contre une infection letale par le lcmv. Cette protection est extremement efficace car des doses minimes de 1 a 10 ufp suffisent pour proteger partiellement les animaux immunises
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Miot, Elliott. „Potential of the mosquito Aedes malayensis as an arbovirus vector in South East Asia“. Electronic Thesis or Diss., Sorbonne université, 2019. http://www.theses.fr/2019SORUS548.
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De nombreux virus transmis par les arthropodes (arbovirus), tels que ceux de la dengue (DENV) et de la fièvre jaune (YFV), circulaient à l’origine dans des cycles selvatiques et ont émergé chez l’Homme via des moustiques « bridge vectors » qui connectent les cycles de transmission selvatiques et humains. Ces « bridge vectors » peuvent aussi par transfert inverse établir de nouveaux cycles selvatiques. Cette thèse a évalué le potentiel de vecteur d’arbovirus d’un moustique répandu en Asie du sud-est, Aedes malayensis. Nous avons identifié Ae. malayensis pour la première fois au Laos lors de captures de moustiques dans une forêt de la réserve de Nakai Nam Theun. En utilisant des pièges à appâts humains sur le terrain, nous avons observé qu’Ae. malayensis pouvait piquer l’Homme et donc potentiellement agir comme « bridge vector ». En laboratoire, cette population selvatique d’Ae. malayensis a montré une faible compétence vectorielle relative pour DENV et YFV, et une absence d’attraction détectable pour l’odeur humaine. Cependant, des tests de compétence vectorielle et de pièges à appâts humains ont révélé qu’une population péri-domestique d’Ae. malayensis à Singapour était compétente pour YFV et entrait en contact avec l’Homme. Au final, ce travail de doctorat a souligné l’importance de ne pas négliger les vecteurs secondaires dans l’évaluation du risque d’émergence des arbovirusMany emerging arthropod-borne viruses (arboviruses) such as dengue virus (DENV) and yellow fever virus (YFV) originated in sylvatic cycles and have emerged among humans through spillover transmission by mosquito species that ‘bridge’ sylvatic and human transmission cycles. These bridge vectors can also mediate ‘spillback’ transmission of arboviruses from humans into novel sylvatic cycles. This PhD focused on Aedes malayensis, a mosquito species widely distributed in South East Asia, to assess its potential as an arbovirus vector. We identified Ae. malayensis for the first time in Laos during mosquito surveys conducted in a forested area of the Nakai Nam Theun National Protected Area (NNT NPA). Using field-based human-baited traps, we found that Ae. malayensis engaged in human-biting behavior and therefore could act as bridge vector in the NNT NPA. In laboratory conditions, this sylvatic population of Ae. malayensis displayed a relatively low vector competence for DENV and YFV and a lack of detectable attraction to human odor. However, vector competence assays and a human-baited trap survey showed that a peridomestic Ae. malayensis population in Singapore was competent for YFV and engaged in contact with humans. Overall, this PhD work highlighted that ancillary vectors should not be overlooked to fully assess the risk of arbovirus emergence