Auswahl der wissenschaftlichen Literatur zum Thema „Recolección de muestras de sangre“

Para evaluar la utilidad del método de recolección de muestras de sangre en papel de filtro para la detección de anticuerpos anti-dengue mediante un ELISA de Inhibición recientemente desarrollado en nuestro laboratorio, se realizó una toma simultánea de muestras de sangre en papel de filtro y de suero, de donantes de Banco de Sangre. Ambas muestras fueron conservadas a -20ºC y probadas a los 15 dias, 3 y 6 meses respectivamente. A las muestras que resultaron positivos se les amplió el rango de dilución para determinar título. Al realizar la comparación entre ambas muestras, sangre en papel de filtro y suero, encontramos que no existían diferencias de detección significativas, tanto para los casos positivos como los negativos. No obstante se observó en ambas muestras y de forma general una disminución del titulo de anticuerpos (una dilución) al transcurrir el tiempo máximo establecido en nuestro estudio (6 meses).

<p>En el Marco del proyecto UNNE Salud, el objetivo del presente trabajo es informar la prevalencia de las parasitosis en niños y adolescentes seleccionados y relacionar esta afección con la concentración de eosinófilos obtenidos en muestras de sangre venosa. Junto al consentimiento informado, se realizó la recolección de los datos a 197 personas de ambos sexos entre 5 y 23 años de edad pertenecientes a la localidad de general pinedo de la Provincia del Chaco, la recepción de muestras de materia fecal (seriado-técnica de concentración) y toma de muestra de sangre venosa (anticoagulada con EDTA). Se realizó hematocrito (método de microhematocrito) con microcentrífuga rolco y el recuento diferencial de leucocitos (May grünwald giemsa). El recuento de Leucocitos se realizó en cámara de neubauer. Para el análisis de los datos se usó Minitab15 y Microsoft excel (2003 – 2007). Del total de las muestras de materia fecal examinadas (n = 197), 29% resultaron positivas. Estas se reagruparon en: parasitosis simples, asociaciones dobles y asociaciones triples. Blastocystis hominis mostró mayor proporción en las parasitosis simples, en un 50% en las asociaciones dobles y en un 67% en las asociaciones triples. En muestras sanguíneas, se realizó un hemograma, con especial atención a las determinaciones de Hematocrito, recuento de Leucocitos, determinación de la fórmula leucocitaria relativa y absoluta para evidenciar la eosinofilia. En la búsqueda de la asociación, (cálculo de odds ratio 95% Ic) sólo muestra una tendencia con un amplio rango de distribución que no logra consolidar esta tendencia, razón que lleva a ampliar el número de muestreos en el tiempo para el seguimiento de estos sujetos seleccionados.</p><p> </p>

El propósito de la presente investigación es relacionar la anemia con el nivel nutricional de las gestantes adolescentes que acudieron al Centro de Salud Alto de la Alianza durante el periodo de 2012, en el departamento de Tacna. La muestra se seleccionó en adolescentes gestantes comprendidas entre las edades de 12 a 19 años que visitaron en el primer, segundo y tercer trimestre de gestación. Se ha utilizado como instrumento de recolección de datos las fichas e historias clínicas, toma de muestras de sangre para el análisis de hemoglobina y una encuesta para saber el conocimiento del nivel nutricional. En conclusión, del total de 25 adolescentes gestantes, el 52% presenta anemia, siendo el tipo leve el más predominante. Además, se ha determinado que el conocimiento nutricional que poseen es inadecuado.

Introducción. El EDTA es el anticoagulante de elección en los laboratorios de hematología para la conservación de la muestra de sangre total. Existen dos tipos, EDTA K2 y EDTA K3, y su diferencia radica en la cantidad de moléculas de potasio. Algunas guías sugieren que hay diferencias entre el anticoagulante EDTA K2 y el K3 para el proceso del hemograma; sin embargo, con las nuevas presentaciones de los tubos que traen las casas comerciales, no se tiene claro si en realidad aún hay diferencia entre los dos anticoagulantes, y si esto puede alterar el resultado del hemograma, tanto en el resultado cuantitativo, como en el cualitativo. Objetivo. Comparar los recuentos leucocitarios, la hemoglobina, el hematocrito, el volumen corpuscular medio, las plaquetas y la morfología celular en muestras de sangre periférica con EDTA K2 y EDTA K3, en diferentes tiempos (0, 1 y 2 horas). Materiales y métodos. Se realizó un estudio cuasi-experimental, multivariado, multifactorial, que tiene como unidad de análisis la sangre anticoagulada con EDTA K2 y EDTA K3, extraída de 53 individuos a través de un muestreo no probabilístico por conveniencia. Resultados. Al comparar los resultados del estudio morfológico por medio del extendido de sangre periférica y los datos cuantitativos del hemograma, se encontró que no hay diferencias estadísticamente significativas usando EDTA K2 o K3. Conclusión. Se evidenció que el uso del EDTA K2 o EDTA K3 como anticoagulante de elección, procesando las muestras en un tiempo adecuado después de su recolección, no afecta los parámetros cuantitativos del hemograma automatizado ni los morfológicos.

El objetivo fue determinar los valores hematológicos del cocodrilo de Tumbes (Crocodylus acutus), especie categorizada en peligro crítico de extinción por el Estado Peruano. Se realizó la recolección de muestras de sangre por punción del seno venoso localizado en la region cervical postoccipital de individuos machos separados en dos grupos etarios (15 individuos juveniles y 15 individuos sub adultos) aparentemente sanos del Centro de Acuicultura Tuna Carranza, Puerto Pizarro en Tumbes, Perú. Luego de colectar la sangre en tubos con heparina de litio, se realizaron los frotices para hemograma y se llenaron microcapilares para la determinación de hematocrito. Las muestras fueron enviadas y procesadas en el Laboratorio de Patología Clínica de Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia de la Universidad Peruana Cayetano Heredia. Se obtuvieron los siguientes valores promedios: 23,56% ± 3,23 de hematocrito, 8,48 g/dL ± 2,13 de hemoglobina, 0,988 106/µL ± 4,54 de glóbulos rojos y 5,90 ± 4,27 103/µL de glóbulos blancos: 2,68 103/µL ± 1,51 de heterófilos, 1,58 103/µL ± 1,4 de linfocitos, 2,35 103/µL ± 2,4 de eosinófilos, 1,45 103/µL ± 1,71 de basófilos y 0,50 103/µL ± 0,85 de monocitos. No se encontraron diferencias estadísticas significativas entre grupos etarios.

La sangre del cordón umbilical y la médula ósea humana son una alternativa para el aislamiento y cultivo de células madre mesenquimales, útiles en terapias de regeneración tisular e inmunomodulación. El objetivo de este trabajo fue aislar y cultivar células madre mesenquimales a partir de la sangre del cordón umbilical y de la médula ósea. Se recolectaron muestras de sangre de cordón umbilical en el servicio de Gineco-Obstetricia del Hospital Occidente de Kennedy en Bogotá, Colombia. La recolección de médula ósea se realizó en los servicios de ortopedia y traumatología del hospital universitario San Ignacio de Bogotá, Colombia. Se evaluó la tasa de generación celular, características morfológicas por microscopia invertida y tinción de Wright, asi como el inmunofenotipo de las poblaciones celulares por citometría de flujo.<p>La eficiencia de aislamiento de las células madre mesenquimales a partir de sangre de cordón umbilical fue del 30% con una tasa de generación entre 20 y 50 minutos. A partir de médula ósea el aislamiento fue del 100%, con un tiempo de generación entre 16 y 39 minutos. Se observaron diferencias morfológicas por tinción de Wright y la presencia de progenitores hematopoyéticos durante el cultivo primario (3.54% de CD34+/CD45+), que disminuían cuando se realizaba el primer pase del cultivo (0.19% de CD34+/CD45+). El aislamiento de células madre mesenquimales es más eficiente a partir de medula ósea.</p><p>Se observan diferencias morfológicas por microscopia invertida y tinción de Wright entre células aisladas de sangre de cordón umbilical y médula ósea. El antígeno CD105 constituye un marcador importante en el establecimiento del perfil inmunofenotípico de células madre mesenquimales.</p>

Introducción: La información del levantamiento de cadáver constituye la primera fase de la necropsia requerida para contrastarla con información obtenida, por lo que es primordial su estudio. Objetivos: Revisión del procesamiento de escena y hallazgos de necropsia en casos de muerte por proyectil de arma de fuego (PAF). Diseño: Descriptivo, retrospectivo, transversal. Institución: Instituto de Medicina Legal, Ministerio Público, e Instituto de Patología, UNMSM. Material de estudio: Informes de Levantamiento de Cadáver y Necropsia Medicolegal. Intervenciones: Muestreo aleatorio por conglomerados, incluyendo informes de levantamiento de cadáver y necropsia de casos de muerte por PAF en el segundo semestre 2011. Principales medidas de resultados: Medida de tendencia central, frecuencias y porcentaje. Resultados: De 100 levantamientos de cadáver, hubo escena primaria (85%), escena protegida (65%), personal de criminalística PNP en escena (85%), recojo arma de fuego (20%), recuperación de proyectil (45%), levantamiento de huellas dactilares (35%), recolección de muestras de sangre (90%), toma de muestras para absorción atómica (87%), perennización de escena (85%). La herida penetrante fue la más frecuente (47%), con compromiso del segmento cabeza (37%), disparo a larga distancia (65%), etiología homicida (90%). Conclusiones: Los criterios utilizados para mejor evaluar la investigación pericial, antes no comprendidos, sirvieron para sistematizar la información requerida para mejorar la calidad pericial. La incidencia encontrada fue herida penetrante, cefálica, a larga distancia, escena primaria, perennizada, con recuperación de proyectiles en escena y necropsia.

Analisar o volume de solução a ser desprezado do cateter de pressão arterial invasiva a partir de quatro volumes mínimos para obtenção de amostra sanguínea com hemoconcentração eficaz para análise laboratorial. Estudo observacional transversal, com análise laboratorial, realizado em uma unidade de terapia intensiva no Estado do Rio de Janeiro. Os dados coletados foram armazenados no software Microsoft Excel® e analisados no SPSS Statistics®20.0, por análise estatística descritiva e de variância usando ANOVA e Tukey. Foram analisadas 157 amostra e percebeu-se que mesmo em comparações múltiplas não há diferença significativa entre os quatro volumes analisados, isto é, os volumes comparados não evidenciaram diferença dos resultados dos valores de hematócrito e hemoglobina. Concluiu-se que é possível recomendar o menor volume a ser desprezado do cateter de pressão arterial invasiva para uma amostra sanguínea eficaz, sendo este o volume de 1,5ml para cateteres arteriais radiais ou femorais.Descritores: Monitorização Hemodinâmica, Coleta de Amostras Sanguíneas, Cuidados Críticos. Blood disposal in an open invasive blood pressure systemAbstract: Analyze the volume of solution to be discarded from the invasive blood pressure catheter from four minimum volumes to obtain blood samples with effective hemoconcentration for laboratory analysis. Cross-sectional observational study, with laboratory analysis, carried out in an intensive care unit in the State of Rio de Janeiro. The collected data were stored in Microsoft Excel® software and analyzed using SPSS Statistics®20.0, using descriptive and variance statistical analysis using ANOVA and Tukey. 157 samples were analyzed and it was noticed that even in multiple comparisons there is no significant difference between the four volumes analyzed, that is, the volumes compared did not show any difference in the results of the hematocrit and hemoglobin values. It was concluded that it is possible to recommend the smallest volume to be discarded from the invasive blood pressure catheter for an effective blood sample, this being the volume of 1.5 ml for radial or femoral arterial catheters.Descriptors: Hemodynamic Monitoring, Blood Specimen Collection, Critical Care. Eliminación de sangre en un sistema abierto de presión arterial invasivaResumen: Analice el volumen de solución que se desechará del catéter invasivo de presión arterial a partir de cuatro volúmenes mínimos para obtener muestras de sangre con hemoconcentración efectiva para análisis de laboratorio. Estudio observacional transversal, con análisis de laboratorio, realizado en una unidad de cuidados intensivos en el estado de Río de Janeiro. Los datos recopilados se almacenaron en el software Microsoft Excel® y se analizaron usando SPSS Statistics®20.0, usando análisis estadísticos descriptivos y de varianza usando ANOVA y Tukey. Se analizaron 157 muestras y se observó que, incluso en comparaciones múltiples, no existe una diferencia significativa entre los cuatro volúmenes analizados, es decir, los volúmenes comparados no mostraron ninguna diferencia en los resultados de los valores de hematocrito y hemoglobina. Se concluyó que es posible recomendar que se descarte el volumen más pequeño del catéter invasivo de presión arterial para obtener una muestra de sangre efectiva, siendo este el volumen de 1,5 ml para catéteres arteriales radiales o femorales.Descriptores: Monitorización Hemodinâmica, Recolección de Muestras de Sangre, Cuidados Críticos.

En este artículo se muestran los resultados del comportamiento de la demanda de componentes sanguíneos de personas en el banco de sangre de un centro hospitalario del Valle del Cauca; el cual permitirá, en un estudio posterior servir de base para la planeación y control de toda la cadena de suministro de sangre en toda la región del Valle del Cauca. Dentro de esta primera fase se tiene en cuenta la caracterización del comportamiento de la demanda de los glóbulos rojos, la cual será estimada a través de la recolección de datos de demanda en una entidad prestadora de servicios de salud y a través de pruebas de bondad de ajuste se identificó que la demanda no se adapta a ningún tipo de distribución de probabilidad, por lo que se acudió a la simulación discreta a través de distribuciones empíricas para elaborar los pronósticos más adecuados para cada tipo de grupo sanguíneo; concluyendo que el hemocentro debería realizar pedidos cada dos semanas de la siguiente manera: para el tipo de sangre A-: 2 unidades, A+: 43 unidades, AB-: 1 sola unidad, AB+: 2 unidades, para B-: 1 unidad, B+: 8 unidades, O- :4 unidades y finalmente para O+: 45 unidades de sangre.

La filtración glomerular se calcula por la depuración de creatinina endógena (DCE) en orina de 24 horas, con limitaciones en su recolección y dificultades para los pacientes. Sin embargo, existen fórmulas propuestas para estimar esta función renal. Objetivo. Aplicar la fórmula Cockcroft–Gault de filtración glomerular y compararla con método químico colorimétrico en gestantes. Diseño. Estudio observacional, correlacional, prospectivo y transversal. Lugar. Laboratorio central, Hospital Nacional Sergio Bernales de Lima, Perú. Participantes. Mujeres gestantes. Métodos. Previo consentimiento informado, se procesaron muestras de sangre y orina de 24 horas de 92 gestantes, entre noviembre 2015 y enero 2016. Se utilizó el coeficiente de correlación de Pearson entre los resultados DCE de la fórmula Cockcroft–Gault y la obtenida en suero-orina de 24 horas. Resultados. La muestra tuvo una distribución normal analizada por el estimador Smirnov-Kolmogorov. El promedio de la DCE en orina de 24 horas fue 73,65 ± 19,85 mL/min, la obtenida por la fórmula Cockcroft-Gault fue 99,82 ± 18,75 mL/min, con diferencia significativa a la prueba t para muestras relacionadas (p &lt; 0,000), y la correlación entre dichos métodos de laboratorio fue baja (r=0,561) en todas las gestantes y por trimestre, mostrando falta de correlación con la prueba coeficiente de correlación-concordancia de Lin (ccc) (p &lt; 0,01). La sensibilidad (S) fue 0,50; especificidad (E) 0,591, el valor predictivo positivo (VPP) 0,212 y el negativo (VPN) 0,881. Conclusiones. La DCE obtenida por fórmula Cockcroft–Gault con la DCE suero-orina de 24 horas en gestantes tuvo baja correlación (r = ⦋0,4 a 0,67⦌), con niveles bajos de S, E VPP y VPN, por lo que no es recomendable su uso en gestantes.

La Revisión Crítica Titulada: EFICACIA DE LOS MÉTODOS NO FARMACOLÓGICAS PARA DISMINUIR EL DOLOR OCASIONADO POR VENOPUNCIÓN EN EL PACIENTE PEDIATRICO DE EMERGENCIA, cuyo objetivo fue identificar la eficacia de los métodos no farmacológicos para disminuir el dolor en niños. Dicha investigación se justifica porque los procedimientos invasivos relacionados con agujas, como la venopunción, son una de las principales causas de dolor e intranquilidad en los pacientes pediátricos cuando son atendidos en urgencias. La metodología es Investigación Secundaria, Enfermería Basada en la Evidencia, (búsqueda sistemática de una respuesta, basada en la investigación), en la que se planteó la pregunta ¿Qué estrategias no farmacológicos se pueden emplear para el manejo del dolor pediátrico en venopunción ? y su viabilidad con el esquema de PICOT, la estrategia de búsqueda de datos consultados fue a través de las bases de MEBLINE , DIRECT SCIENCIE, GOOGLE ,BVS SALUD ,Se encontraron 07 artículos de investigación relacionado al tema planteado (revisiones sistemáticas, ensayos aleatorios, investigaciones cuasi experimentales) . Se aplicaron la Guía de Validez y utilidad aparentes de Gálvez Toro a los 07 artículos encontrados. De los cuales se seleccionó 01 artículo y para su evaluación se utilizó la plantilla de ASTETE, la investigación presenta un nivel de evidencia II3 y su grado de recomendación es B. El artículo seleccionado dio respuesta a la pregunta de investigación se puede usar medidas no farmacológicas como dispositivo de vibración más frio y distracción dirigida que ayudan a disminuir el dolor durante la venopunción.

La toma de muestras de sangre es un proceso que se ha quedado relativamente estancado en el aspecto tecnológico en comparación a otros procedimientos médicos tales como para cirugías o procesamientos de imágenes (resonancia magnética, radiografías, entre otras). El éxito de una venopunción recae completamente en la habilidad y experiencia del tecnólogo médico. Incluso los más experimentados pueden fallar resultando en la incomodidad, daño y dolor provocado al paciente. A fin de solventar este problema, se ha diseñado en el presente trabajo una propuesta para una realización precisa y exacta del procedimiento de punción de las venas, mediante el uso de actuadores en sistemas que ofrezcan una resolución adecuada y el uso de sensores que permitan una captura y procesamiento de imágenes adecuada. Además, otro aspecto que se le agrega al diseño será el rotulado de las muestras obtenidas, dado que en la actualidad aún se generan confusiones por intercambio de muestras, lo cual solo perjudica aún más al paciente. El resultado es un robot con múltiples grados de libertad y diversos subsistemas con sus correspondientes actuadores y sensores. Estos subsistemas son: de punción, de almacenamiento de tubos y de rotulado. Esta división en subsistemas se da, ya que se requerirá que el sistema realice varias funciones con el fin de obtener las muestras rotuladas.
Tesis

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario
La leptospirosis es una zoonosis re-emergente de distribución mundial, producida por bacterias patógenas del genero Leptospira. El cuadro clínico en humanos varía desde asintomático hasta letal. La transmisión de la bacteria a un hospededero susceptible se realiza por contacto directo o indirecto con orina de animales infectados. Dentro de la epidemiología los cursos de agua cumplen un rol significativo, ya que la bacteria es hidrofílica, permaneciendo viable en agua por largos períodos de tiempo. Los animales de vida silvestre son un importante reservorio, siendo los roedores el caso más estudiado, también se ha evidenciado transporte renal y largos periodos de leptospiruria, en mustélidos, zorrillos y mapaches. Al respecto estudios recientes en Francia han revelado 86% de prevalencia de anticuerpos contra Leptospira, y un porte renal de un 23%, por pruebas de PCR, en visón americano (Neovison vison). Con el fin de detectar Leptospiras patógenas en visones americanos de vida libre, introducidos en el sur de Chile, se tomaron muestras de sangre y riñón desde animales capturados en 3 regiones distintas del país (Los Ríos, Los Lagos y Aysén). Se detectaron Leptospiras patógenas mediante PCR en 29 de 57 individuos. Las muestras de riñón presentaron mayores resultados positivos en proporción a la cantidad de muestras analizadas. Las regiones de los Lagos y de Aysén obtuvieron mayores tasas de captura y alto porcentaje de individuos positivos. Neovison vison presentó un alto porcentaje de portación de Leptospira (50%), pudiendo ser un importante agente diseminador de esta bacteria. Debido a su capacidad invasiva de ambientes naturales, y a la interacción con especies domésticas y silvestres nativas se deben realizar estudios que lo confirmen
Financiamiento: Proyecto Fondecyt No. 1100139

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario
El Virus Distemper Canino (VDC) es el agente causal de una grave enfermedad multisistémica de perros y otras especies del orden Carnívora. Distemper Canino (DC) se presenta como una enfermedad altamente contagiosa, que puede alcanzar una elevada morbilidad y mortalidad. El amplio espectro de signos clínicos dificulta el diagnóstico clínico de la enfermedad y hace necesario la confirmación a través de exámenes de laboratorio. La detección molecular de VDC presenta ventajas en el diagnóstico de la enfermedad. En el presente trabajo se implementó la técnica de Reacción en Cadena de la Polimerasa –versión anidada- previa trascripción inversa (n-RT-PCR) para la detección del gen de la fosfoproteína viral (gen P). Como controles positivos se utilizaron RNA proveniente de cepas vacunales y de muestras positivas a otros genes de VDC mediante RT-PCR. Como controles negativos se utilizó RNA de muestras de perros sin signos clínicos de la enfermedad y como control de reactivos agua libre de nucleasas. Posteriormente, se utilizó la técnica en 10 muestras de campo de perros con sospecha clínica de la enfermedad, detectándose el genoma viral en el 100% de las muestras analizadas, generando una banda cercana a los 430 pb, correspondiente a la secuencia blanco buscada del gen de la fosfoproteína de VDC. Los productos de amplificación se caracterizaron por su gran intensidad y nitidez, no observándose bandas de amplificación inespecíficas. Finalmente, se realizó la secuenciación de los productos obtenidos del n-RT-PCR, obteniendo un elevado porcentaje de identidad nucleotídica respecto a las secuencias nucleotídicas del gen P almacenadas en el GenBank®. Esto permitió establecer que el n-RT-PCR implementado en esta Memoria de Título permite la detección de VDC. La implementación de esta técnica permitirá realizar la detección antemortem del virus y, por lo tanto, facilitar el diagnóstico y tratamiento temprano de la enfermedad
Proyecto FIV 121014019102010

En el presente estudio se buscó evaluar el efecto coagulante de la tela de la araña Scytodes longipes aplicados en muestra de sangre humana. MÉTODO: Estudio experimental de controles paralelos. La muestra de sangre fue obtenida de un paciente joven sano. La tela de araña fue producida por un grupo de arañas cazadas y criadas en semicautiverio durante 1 año. La tela se repartió en los grupos: Peso 1 (3-4 mg); Peso 2 (5-6 mg) y Peso 3 (7-8 mg) que fueron desinfectados y esterilizados. Se evaluó el efecto coagulante mediante la medición del Tiempo de Coagulación y el Tiempo de Protrombina. RESULTADOS: El análisis estadístico usado fue la prueba de Bonferroni para determinar entre qué grupos de estudio había diferencias significativas. La tela de la araña Scytodes longipes posee efecto coagulante mostrando una reducción significativa de Tiempo de Coagulación y Tiempo de Protrombina (P < 0.05). En cuanto a la comparación del efecto coagulante entre los grupos de peso, se encontró una diferencia que no fue estadísticamente significativa. Sin embargo en el Tiempo de Protrombina, se halló que a mayor peso, el efecto coagulante mejora significativamente (P < 0.05).
The present study sought to evaluate the coagulant effect of spider silk Scytodes longipes applied in human blood sample. METHODS: Experimental study of parallel controls. The blood sample was obtained from a healthy young patient. The silk was produced by a group of spiders hunted and bred in semi-captivity for 1 year. The fabric is partitioned into groups: Weight 1 (3-4 mg); Weight 2 (5-6 mg) and Weight 3 (7-8 mg), wich were disinfected and sterilized. Coagulant effect was evaluated by measuring the Coagulation Time and Prothrombin Time. RESULTS: The statistical analysis used was the Bonferroni test to determine between study groups had significant difference. The spider silk Scytodes longipes has coagulating effect showing a significant reduction in Coagulation Time and Prothrombin Time (P <0.05). As for the comparison between groups coagulating effect weight, there is a difference that was not found statistically significant. However in the Prothrombin Time, it was found that the higher the weight, the coagulant effect is significantly improved (P <0.05).
Tesis

Antecedentes: El glioblastoma (GB) es el glioma maligno más frecuente. Mediante el tratamiento multidisciplinar con cirugía, radio y quimioterapia se consigue una supervivencia mediana de 15 meses. La metilación del promotor del gen O-6-Metilguanina-DNA-metiltransferasa (MGMT) es un conocido factor pronóstico y predictivo de respuesta a temozolomida en estos tumores, pero su análisis de manera repetida es complejo. Las rebiopsias cerebrales comportan un riesgo para el paciente, además, las muestras de tejido obtenidas pueden no representar la heterogeneidad tumoral. Los avances en el uso de biomarcadores en biopsia líquida la están posicionando como una solución a estos inconvenientes. La determinación de la metilación de MGMT se puede llevar a cabo con diversas técnicas, siendo la PCR específica de metilación (MSP) la más utilizada, tanto en ensayos clínicos como en la práctica diaria. La pirosecuenciación es una técnica sencilla y con resultados objetivos que se ha demostrado útil para el análisis de esta alteración epigenética. En este proyecto, hemos determinado el estado de metilación del promotor de MGMT, en muestras de tejido y en ctDNA de muestras sanguíneas, utilizando las técnicas de MSP y pirosecuenciación. Metodología: Se analizó la metilación de MGMT en tejido y sangre de pacientes con GB. 81 muestras de tejido y 83 de sangre, fueron valoradas mediante MSP (CpG 74-78 y 84-87), mientras que 78 de tejido, 56 de suero y 55 de plasma, lo fueron mediante pirosecuenciación (CpG 74-78). Para la pirosecuenciación, se consideraron dos puntos de corte con relevancia clínica: aquel que dividía la cohorte en dos grupos según la máxima diferencia en supervivencia global, llamado “mejor punto de corte”, y el porcentaje mínimo a partir del cual la metilación ya tenía un impacto clínico, llamado “punto de corte mínimo”. Ambos puntos de corte tenían significación estadística. Resultados: El “mejor punto de corte” en tejido fue de 11,4%, mientras que el “punto de corte mínimo” fue de 5%. El 48,6% de casos fueron positivos para la metilación en tejido, mediante MSP y el 55,7% lo fue por pirosecuenciación. Ocho casos no metilados por MSP, se detectaron metilados por pirosecuenciación, mientras que en 3 muestras pasó a la inversa. Asimismo, 4 muestras no valorables por MSP tuvieron resultado por pirosecuenciación. En plasma, el “mejor punto de corte” para la pirosecuenciación fue 3,4%. 14,9% casos fueron metilados por MSP, mientras que el 28,6% lo fue por pirosecuenciación. El “mejor punto de corte” en suero fue de 1,6%, un valor inferior a las muestras de DNA no metilado comercial y sin correlación significativa con la supervivencia global. Por este motivo, el suero se descartó para análisis adicionales. Conclusiones: La MSP y la pirosecuenciación, una vez definido el punto de corte, son dos métodos válidos para la determinación de la metilación del promotor del gen de MGMT, en tejido de pacientes con GB. Aunque la concordancia entre ellos no es perfecta, ambos ofrecen resultados que se correlacionan con la supervivencia y la respuesta al tratamiento con agentes alquilantes. Por lo tanto, ambas técnicas son útiles para detectar pacientes que podrían beneficiarse de dichos tratamiento. Pese a que, en nuestro proyecto, se ha demostrado la presencia de ctDNA en sangre y plasma de pacientes con GB, la sensibilidad para la detección de la metilación de MGMT, con los dos métodos, es baja. El suero no es una buena fuente para la determinación de metilación de MGMT en ctDNA.
Background: Glioblastoma (GB) is the most frequent malignant glioma. Methyl Guanine Methyl Transferase (MGMT) promoter methylation is a known prognostic and predictive factor of response to temozolomide in these tumors. However, repeating MGMT analysis is not always feasible. Brain rebiopsies involve risk to the patient. Moreover, tissue biopsies could not always represent the tumor heterogeneity. Advances in the use of biomarkers in liquid biopsy are positioning it as a solution to these disadvantages. MGMT methylation status analysis can be carried out through several techniques, being the methylation-specific PCR (MSP) the most used. Pyrosequencing is a simple method that has proved useful for this analysis. In this project, we have determined the MGMT promoter methylation status, in tissue samples and in ctDNA from blood samples of GB patients, by MSP and pyrosequencing. Methodology: MGMT methylation was analyzed in tissue and blood from patients diagnosed with GB. We used MSP (CpG 74-78 and 84-87) in 81 tissue samples and 83 blood samples, and pyrosequencing (CpG 74-78) in 78 tissue, 56 serum and 55 plasma samples. For pyrosequencing, two cut-off points with clinical relevance were considered: one that divided the cohort into two groups according to the maximum difference in overall survival, called "best cut-off point", and the minimum percentage from which the methylation had already a clinical impact, called the "minimum cut-off point". Both were statistical significant. Results: The "best cut-off point" in tissue was 11.4%, while the "minimum cut-off point" was 5%. The 48.6% of cases were positive for methylation in tissue, by MSP, and 55.7% by pyrosequencing. Eight unmethylated cases by MSP resulted methylated by pyrosequencing, whereas in 3 samples the results were reversed. Similarly, 4 samples that were not assessed by MSP had a result by pyrosequencing. For plasma samples, the "best cut-off" for pyrosequencing was 3.4%. 14.9% were methylated by MSP, while 28.6% were methylated by pyrosequencing. The "best cut-off" in serum was 1.6%, a value below the commercial unmethylated DNA, and it had no significant correlation with overall survival. For this reason, the serum was discarded for further analysis. Conclusions: MSP and pyrosequencing, once the cut-off point is defined, are two valid methods for the MGMT methylation status assay, in tissue of GB patients. Even thought the agreement between them is not perfect, both results correlate with survival and response to treatment with alkylating agents. Therefore, both techniques are useful. Although our project has shown the presence of ctDNA in blood and plasma of GB patients, the sensitivity to determine MGMT methylation, by either method, is low. The serum does not represent a good source to assess MGMT methytation in ctDNA.

Documento de tesis de licenciatura
Dentro del ámbito forense se han buscado técnicas alternativas a los métodos cromatográficos y espectroscópicos tradicionales para realizar el tamizaje de drogas de abuso en matrices biológicas. Las técnicas que se han seleccionado preferentemente son las pruebas inmunoenzimáticas, que demuestran tener buena sensibilidad, son rápidas, fáciles de realizar, los reactivos que emplean presentan vida media prolongada y son económicos. Algunas de estas técnicas, han sido desarrolladas para el análisis en orina, lo cual genera inconvenientes para el examen toxicológico post-mortem, ya que en su mayoría se obtiene muestra sanguínea. Estas circunstancias han llevado a adaptar los métodos de inmunoensayo, que fueron diseñados principalmente para determinaciones de drogas en orina, a la detección de drogas en otros fluidos y tejidos corporales. El objetivo de esta investigación fue adecuar y validar el inmunoensayo EMIT, desarrollado para la identificación de drogas de abuso (tetrahidrocannabinol, cocaína, benzodiacepinas y anfetamina) en orina, para usarlo en muestras de sangre post-mortem, determinando los parámetros establecidos por las “Directrices para la validación de métodos analíticos y la calibración del equipo utilizado para el análisis de drogas ilícitas en materiales incautados y especímenes biológicos de la Oficina de las Naciones Unidas Contra la Droga y el Delito” (ONUDC). Se realizaron los estudios en muestras sanguíneas que de acuerdo con su historial se encuentran libres de las drogas de interés. Para la determinación de cada parámetro de validación se fortificó la muestra por un periodo de 24 horas en refrigeración, con una solución de la droga de interés de concentración conocida, se obtuvo plasma y se analizó en el equipo EMIT. Los resultados muestran que el método presenta buena selectividad, ya que no se encuentran sustancias que alteren los resultados. Con un límite de detección confiable establecido por el equipo. El método presenta buena repetibilidad y reproducibilidad ya que los valores medidos entre el día 1 y día 2 no presentan diferencias significativas y el Coeficiente de Variación (CV) es menor al 20%. Se evaluó la estabilidad de la muestra, obteniendo que para THC (tetrahidrocannabinol) y benzodiacepinas existe buena estabilidad en un periodo de 7 días en condiciones de refrigeración, mientras que para cocaína y anfetaminas su estabilidad es menor ya que el incremento de variabilidad de resultados se percibe a partir del día 2. En general se cumplen con las directrices establecidas por la UNODC, por lo que se establece que el método de inmunoensayo EMIT es viable para analizar muestras de sangre como alternativa a las muestras de orina.
Fiscalía General de Justicia del Estado de México, Coordinación General de Servicios Periciales, Departamento de Toxicología Forense

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Identifica genéticamente a especies de Plasmodium en base al gen que codifica la subunidad 18S ARNr en muestras de sangre de primates no humanos en cautiverio. El diseño de este estudio es observacional y transversal. Esta investigación es un estudio secundario en el que se usa muestras biológicas e información de un grupo de primates no humanos entre adultos, jóvenes y crías de ambos sexos pertenecientes al género Saimiri y Lagothrix evaluados durante los años 2011 y 2012 en algunas ciudades de Perú. El análisis es realizado mediante el software MEGA v6.0 y el programa Excel. Se realiza análisis descriptivo de las variables de las pruebas ensayadas usando los siguientes métodos: evaluación microscópica por gota gruesa, técnicas moleculares de PCR para confirmar la infección y secuenciamiento del gen 18S ARNr. Se encuentra que el 7.05 % (6/85) de primates no humanos están infectados con Plasmodium spp. En base al secuenciamiento y análisis filogenético molecular del gen 18S ARNr se observa infección por Plasmodium brasilianum en una muestra de primate Lagothrix lagotricha y por Plasmodium malariae en cuatro muestras de primates Saimiri sciureus. Concluye que los parásitos identificados en las muestras de estudio son Plasmodium malariae y Plasmodium brasilianum, este último previamente reportado como especie que infecta a primates no humanos del Nuevo Mundo.
Tesis

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario
La brucelosis canina es una enfermedad zoonótica causada por Brucella canis, la cual produce signos reproductivos como abortos en hembras e infertilidad en machos, siendo transmitida al hombre a través de contacto con perras que hayan parido o abortado recientemente o por exposición a la bacteria en laboratorios. La enfermedad actualmente presenta tres puntos críticos y que afectan directamente su control y prevención: i) no existen vacunas comerciales, ii) no hay tratamientos antimicrobianos exitosos y iii) existen problemas en el diagnóstico por cultivo tradicional debido a su lento crecimiento e intermitencia en la bacteremia, y problemas en la sensibilidad y especificidad de las técnicas serológicas en el diagnóstico indirecto. La Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) surge entonces como una opción de diagnóstico por ser altamente sensible y específica, otorgando además una pesquisa rápida. En el presente estudio se estableció la sensibilidad analítica de un protocolo de PCR convencional con partidores diseñados en el país en cultivo puro, muestras de sangre y orina para el diagnóstico de B. canis. La sensibilidad analítica en cultivo puro fue de 22,24 fg/μL de DNA y en muestras de sangre y orina experimentalmente contaminadas de 4,4x100 UFC/mL. La elevada sensibilidad analítica determinada sugiere que este protocolo puede ser utilizado como una alternativa de alto valor para el diagnóstico de B. canis en las muestras mencionadas, siendo importante continuar con esta línea de investigación, orientando estos hacia un estudio más detallado de especificidad y estudios de sensibilidad analítica en otras matrices.
Canine brucellosis is a zoonotic disease caused by Brucella canis, which produces reproductive signs such as abortion in bitches and infertility in dogs. These being transmitted to humans by contact with bitches that have recently given birth or aborted or by exposure to the bacteria in laboratories. Currently, the disease has three critical points that, to date, have not been resolved and that directly affect the control and prevention of this: i) there are no commercial vaccines, ii) no successful antimicrobial treatments and iii) problems in diagnosis; existing both difficulties to isolate the agent because of its slow growth and intermittent bacteremia in bacterial culture, and sensitivity and specificity problems in the numerous serological techniques. The PCR, thus, emerges as a diagnostic option due to its highly sensitive and specific nature, providing a fast diagnosis as a result. In the present study, the analytical sensitivity of conventional PCR protocol with primers designed in the country in pure culture, blood and urine samples for diagnosis of B. canis was established. The analytical sensitivity in pure culture was 22,24 fg/μL of DNA, and in experimentally contaminated blood and urine samples 4,4x100 UFC/mL. Given the high analytical sensitivity suggests that this protocol can be used as a highly valuable alternative for the diagnosis of this disease in the samples mentioned, understanding - consequently -, the major importance to continue this line of research, orienting these to a more detailed study of specificity, and analytical sensitivity studies in other matrices.

Unidad de práctica para optar al título de Químico Farmacéutico
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El Servicio Médico Legal (SML) de Santiago es una entidad pública dependiente del Ministerio de Justicia, cuya misión es asesorar a los Tribunales de Justicia y al Ministerio Público, en materias médico-legales, a través de la emisión de informes periciales, tanatológicos, psiquiátricos, clínicos, sexológicos y de laboratorio. El trabajo que a continuación se presenta, nace de la necesidad de la Unidad de Alcoholemia del SML, por identificar y cuantificar alcoholes de putrefacción, ya que es sabido que no todo el alcohol encontrado en una alcoholemia postmortem es de origen exógeno, sino que muchas veces es de origen endógeno. Para ello se realizaron curvas de calibración para n-propanol, alcohol que normalmente no existe en el cuerpo humano y que está asociado a la producción de etanol postmortem. Para el análisis se utilizó un cromatógrafo gaseoso con sistema Head-Space, con autosampler, detector FID y procesador de datos. Las concentraciones seleccionadas para estas curvas están de acuerdo a la bibliografía encontrada y que son: 0.01, 0.02, 0.03, 0.05, 0.08, 0.10 y 0.20 g /L y como estándar interno se utilizó terbutanol. Se realizaron ocho curvas de calibración en duplicado para cada valor de la curva, en las cuales el n-propanol resultó ser lineal y reproducible entre los resultados inter e intradía (con una desviación estándar de 0.1034 y un coeficiente de variación de 1.85 % entre sus pendientes). En una segunda parte se midieron muestras reales de sangre y cerebro de origen tanatológico, con indicios de descomposición, de forma de relacionar la presencia de n-propanol con la producción de etanol postmortem en forma endógena