Auswahl der wissenschaftlichen Literatur zum Thema „Récepteur alpha de l'acide rétinoïque“

Les récepteurs nucléaires de l'acide rétinoïque (AR) appelés RAR, se comportent comme des facteurs de transcription inductibles par le ligand. La transcription des gènes cibles induite par l'AR, nécessite la fixation des RAR au niveau de séquences spécifiques des promoteurs et met en jeu des changements conformationnels des récepteurs qui contrôlent l'association/dissociation de toute une panoplie de corégulateurs. Cependant, en plus de ce modèle génomique et nucléaire bien établi, l'équipe du Dr Cécile Rochette-Egly a montré récemment que l'AR a aussi des effets non-génomiques et induit rapidement la voie de signalisation p38MAPK/MSK1 qui ensuite cible les RAR pour des cascades de phosphorylations et module la transcription des gènes cibles. Pendant mon travail de thèse, j'ai mis en exergue trois nouveaux concepts originaux du mécanisme d'action du sous-type RARα. J'ai montré qu'une sous-population de RARα est présente dans des microdomaines membranaires, les radeaux lipiques ou "lipid rafts"où elle interagit avec les protéines Gαq. Cette interaction est le signal des effets non génomiques de l'AR, l'activation de la voie de la p38MAPK. Ces effets ont été corrélés à l'activité des gènes cibles de l'AR, prouvant ainsi leur nécessité. J'ai identifié un nouveau partenaire de RARα, la profiline IIA. J'ai analysé le mécanisme moléculaire de l'interaction et démontré qu'elle a lieu dans le noyau. La profiline IIA s'est révélée être un régulateur des effects génomiques de RARα et est recrutée avec RARα au niveau des promoteurs des gènes cibles. Finalement j'ai mis en évidence une nouvelle fonction de RARα dans le contrôle de l'adhésion et de l'étalement des cellules. D'où l'hypothèse de nouveaux effets génomiques de RARα avec la profiline IIA dans le contrôle de l'expression des protéines d'adhésion. Cependant, de manière inattendue, j 'ai identifié une nouvelle population de RARα dans le cytoplasme de ces cellules. D'où l'hypothèse de nouveaux effets non génomiques dans le cytoplasme, via l'interaction de RARα avec des protéines d'adhésion.

La vitamine A est un facteur nutritionnel qui est métabolisé en acide rétinoïque (RA). Au niveau moléculaire, la découverte des gènes codant pour les récepteurs de l'acide rétinoïque (RARs et RXRs) ont permis d'effectuer des progrès considérables dans la compréhension du mécanisme d'action de RA. Chaque classe de récepteur consiste en trois sous-types appelés [alpha], [beta] et [gamma] et leurs isoformes respectifs. [. . . ] Ce travail consistait à étudier le domaine de liaison (LBD) du récepteur humain de l'acide rétinoïque [alpha] (hRAR[alpha]) et plus particulièrement visait à répondre à trois questions : l)Y-a t-il une ou plusieurs cystéine(s) du hRAR[alpha]-LBD intervenant dans l'interaction récepteur-ligand ? 2)Y-a t-il un ou plusieurs résidu(s) arginine impliqué(s) dans cette interaction ? 3)Quelle est la région minimale du récepteur nécessaire pour garder l'interaction récepteur-ligand ? [. . . ]

Les retinoides, derives actifs de la vitamine a, jouent un role important de controle de la differenciation et de la proliferation cellulaires. L'un de ces derives, l'acide retinoique tout-trans, suscite un tres grand interet car il est implique dans la morphogenese et est propose pour la chimioprevention et le traitement de certains cancers. Le mecanisme d'action des retinoides met en jeu des recepteurs nucleaires (rar alpha, beta et gamma) appartenant a la superfamille des recepteurs steroidiens/thyroidiens. La comprehension du mecanisme moleculaire d'action des retinoides et la synthese de derives agonistes ou antagonistes specifiques d'un recepteur necessitent de bien connaitre le domaine de fixation au ligand des rar. La surexpression du domaine e de rar alpha, sous forme de proteine de fusion, dans un systeme bacterien nous a permis de proceder a sa purification et a sa caracterisation biochimique. La proteine recombinante est purifiee avec une activite specifique de 100 pmol/mg et un rendement de purification de 10%. La constante de dissociation mesuree, apres optimisation des conditions d'etude de l'interaction recepteur-ligand, est de 3,1 nm pour l'acide retinoique tout-trans, et 1,8 nm pour un derive de synthese, le cd367. Les reactifs specifiques des cysteines et des arginines provoquent une diminution de l'activite de liaison de rar alpha. Le ligand protege tres bien le site actif vis-a-vis de l'effet des reactifs des thiols. Cette protection est moins efficace en presence des reactifs des arginines. Ces observations suggerent que des residus cysteines et arginines sont localises dans le site actif du domaine e de rar alpha et participent a l'interaction recepteur-ligand. La caracterisation des cysteines situees dans, ou a proximite, du site actif a ete abordee par une approche indirecte qui utilise la spectrometrie de masse en mode electrospray. Nous presentons ici des resultats preliminaires de la premiere etape de notre etude qui consiste en l'analyse, en spectrometrie de masse, des peptides obtenus apres coupure chimique du domaine e de rar alpha.

Les leucémies aiguës promyélocytaires (LAP) sont caractérisées par une signature chromosomique, la translocation t(15;17) résultant en un gène de fusion associant PML au gène codant le récepteur [alpha] de l'acide rétinoïque (RARA). Dans de rares cas de LAP atypiques (LAP-L), RARA est fusionné à différents partenaires : PLZF, NPM et NuMA. Au cours de ce travail, nous avons réalisé l'étude moléculaire d'un der(17) associé à une LAP-L. Par la technique de 5' RACE PCR, nous avons identifié un cinquième partenaire de RARA, STAT5b qui appartient à la famille des facteurs de transcription cytosoliques (Signal Transducer and Activator of Transcription) activés par les tyrosine kinases JAK. [. . . ]
Acute promyelocytic leukaemia (APL) exhibits a characteristic t(15;17) translocation that fuses the PML gene on 15q22 to the retinoic acid receptor [alpha] (RARA) gene on 17q12-q21. 1. In a small subset of acute promyelocytic-like leukaemias (APL-L), RARA is fused to a different partner: PLZF, NPM or NuMA. We report on the molecular characterization of a RARA gene rearrangement in a patient with an APL-L associated with a der(17). Thanks to the 5' RACE PCR approach, we demonstrate that the Signal Transducer and Activator of Transcription STAT5b gene is fused to RARA; STAT5b belongs to a family of latent cytosolic transcription factors activated by JAK tyrosine kinases

L'acide rétinoïque, un dérive de la vitamine a, est un élément clef du contrôle de la prolifération et de la différenciation cellulaires. Son mécanisme d'action met en jeu l'activation de gènes cibles, notamment via deux récepteurs nucléaires. Dans cette étape, les récepteurs de l'acide rétinoïque tout-trans (rar) et de son dérive 9-cis (rxr) se lient sous forme d'heterodimeres à des éléments de réponse appelés rare. Le positionnement précis des deux récepteurs sur l’ADN cible est déterminé par plusieurs motifs structuraux qui forment des interfaces de mémorisation des récepteurs et d'interaction avec l’ADN. Nous avons mis au point une stratégie basée sur des modifications chimiques spécifiques d'amino-acides afin d'examiner le rôle des lysines, arginines, cystéines, histidines, tyrosines et tryptophane du rar dans ses fonctions de liaison a l’ADN, d'homodimerisation et d'heterodimerisation en présence et en absence d’ADN. Nous avons observé une implication différentielle de ces aminoacides dans les différentes fonctions testées. Dans un deuxième temps, le radio marquage des lysines accessibles du rar natif a permis de localiser ces résidus dans la 8#e heptad repeat au sein du domaine de liaison au ligand. Ces résultats fournissent une mise en évidence directe de l'implication différentielle de résidus a groupement basique, thiol ou aromatique dans les propriétés de liaison a l’ADN, homodimerisation et heterodimerisation du rar, et illustrent la mise en jeu de plusieurs interfaces de dimerisation.

Retinoic acid receptor-related orphan receptor-alpha (RORa) is a transcription factor from the nuclearreceptor superfamily expressed by immune and non-immune cells involved in the regulation of obesity, insulin resistance (IR) and non-alcoholic steatohepatitis (NASH). Cholesterol, cholesterol-sulfate, 7-oxygenated sterols and oxysterols have been identified as potential endogenous RORa ligands. Tobetter understand the mechanisms of macrophage-expressed RORa regulation in obesity and IR, we generated a macrophage-specific RORa-deficient (MKO) mouse line by using a LysM-Cre and floxedRORa mouse line. We report that RORa deletion in macrophages does not impact on HFD-induced obesity and IR. Surprisingly, we did not confirm an earlier report on the effect of HFD on NASHdevelopment upon HFD feeding nor in the more severe and obesity-independent choline-deficient, Lamino acid-defined diet model. We thus, suspected that LysM copy number may play a role in thisdiscrepancy, as the genotype at the LysM locus is a major difference between the two independent linesof work. The LysM-Cre mice carry an insertion of Cre recombinase into the Lyz2 gene, leading to Creexpression under the control of the Lyz2 promoter and enhancers, but abolishing endogenous Lyz2expression. While we intentionally maintained similar Cre and Lyz2 expression between WT and MKO by using only hemizygous animals for this locus (comparing Rora+/+Lyz2Cre/+ with Rorafl/flLyz2Cre/+),floxed mice (Rorafl/flLyz2+/+) were used as WT control and compared with MKO mice missing informationabout the Lyz2 locus (Rorafl/fLyz2Cre/?) in the earlier study. As, we hypothesized that the observed impact of RORa deletion in macrophages on NASH in the earlier study likely did not result from a specific effect of RORa deletion, but rather from a different Lyz2 copy number between WT and MKO mice, we decidedto verify this hypothesis experimentally. Surprisingly, our preliminary findings showed that the Lyz2-deficient mice exhibit slight protection, rather than a detrimental effect, in HFD-induced obesity and IR, as determined by lower body weight and adipose tissue masses, significantly improved glycemic control and decreased epiAT inflammation. Interestingly, whole body Lyz2 deficiency had no impact on hepaticsteatosis (NAFL) in HFD-fed mice. Nonetheless, our preliminary findings even suggest that Lyz2deficiency might protect against advanced and obesity-independent choline-deficient, L-amino aciddefined diet-induced NASH. Taken together, these preliminary findings indicate that different Lyz2 genecopy number in control mice is unlikely to account for the discrepancy between our work and the earlier study. Overall, our results show that RORa deletion in macrophages does not alter the development of obesity and IR and question its role in NASH. On the other hand, we believe that further investigations are of significant interest in the context of obesity, IR, and advanced NASH, as Lyz2 might possess atherapeutic value
RORa (Retinoic acid receptor-related orphan receptor-alpha) est un facteur de transcription de la superfamille des récepteurs nucléaires exprimé par des cellules immunitaires et non immunitaires impliqué dans le contrôle de l'obésité, de l'insulinorésistance (IR) et de la stéatohépatite non alcoolique(NASH). Le cholestérol, le cholestérol-sulfate, les stérols 7-oxygénés et les oxystérols ont été identifiés comme des ligands endogènes potentiels RORa. Pour mieux comprendre le rôle de RORa exprimé parles macrophages dans l'obésité et I’IR, nous avons généré une lignée de souris déficientes en RORa spécifiques aux macrophages (MKO) en utilisant des lignées de souris LysM-Cre et RORa foxée. Nous résultats montrent que l’inactivation de RORa dans les macrophages n'a pas d'impact sur l'obésité et l’insuline-résistance induites par une régime riche en graisses (HFD). Étonnamment, contrairement àdes travaux, notre étude ne montre pas d'effet sur le développement de la NASH ni suite à un régime HFD, ni dans le modelé d’alimentation défini par les acides aminés L, plus sévère et indépendant de l 'obésité et déficient en choline. Nous avons donc soupçonné que le nombre de copies de LysM pouvait jouer un rôle dans cette divergence, car le génotype des souris au l locus LysM est une différence majeure entre les deux études indépendantes. Les souris LysM-Cre portent une insertion de la recombinase Cre dans le gène Lyz2, ce qui conduit à l'expression de Cre sous le contrôle du promoteurLyz2 et ses activateurs, mais abolit l'expression endogène de Lyz2. Alors que nous avons intentionnellement maintenu une expression similaire de Cre et de Lyz2 entre WT et MKO en utilisant uniquement des animaux hémizygotes pour ce locus (en comparant Rora+/+Lyz2Cre/+ avec Rorafl/flLyz2Cre/+), des souris foxées (Rorafl/flLyz2+/+) ont été utilisées comme contrôle de WT et comparées avec des souris MKO pour lesquelles il manquait des informations sur le locus Lyz2(Rorafl/flLyz2Cre/ ?) dans l'étude antérieure. Aussi, nous avons émis l'hypothèse que l'impact observé de la délétion de RORa dans les macrophages sur la NASH dans l'étude précédente ne résultait probablement pas d'un effet spécifique de la délétion de RORa, mais plutôt d'un nombre de copies Lyz2différent entre les souris WT et MKO et avons décidé de vérifier cette hypothèse expérimentalement.De manière surprenante, nos résultats préliminaires ont montré que les souris déficientes en Lyz2présentent une légère protection, plutôt qu'un effet néfaste, dans l'obésité et l'IR induites par le HFD,comme le montre la diminution du poids corporel et des masses de tissu adipeux, l'amélioration significative du contrôle de la glycémie et la diminution de l'inflammation de l'épiAT. Il est intéressant de noter que la déficience totale en Lyz2 n'a eu aucun impact sur la stéatose hépatique (NAFL) chez les souris nourries au HFD. Néanmoins, nos résultats préliminaires suggèrent même que la carence enLyz2 pourrait protéger contre la NASH induite par le régime alimentaire, carence en choline. Dans leur ensemble, ces résultats préliminaires indiquent que le nombre différent de copies du gène Lyz2 chez les souris de contrôle n'explique probablement pas la différence entre notre travail et l'étude précédente.Globalement, nos résultats montrent que la délétion de RORa dans les macrophages ne modifie pas le développement de l'obésité et de l’IR et remettent en question son rôle dans la NASH. D'autre part,nous pensons que des recherches plus approfondies sur le rôle du lysozyme présentent un intérêt significatif dans le contexte de l'obésité, de l’IR et de la NASH avancée, car Lyz2 pourrait avoir un intérêt thérapeutique

Les retinoides sont des derives de la vitamine a qui jouent des roles cles dans de nombreux processus biologiques tels que la proliferation et la differenciation de nombreux types cellulaires. Les retinoides exercent leurs effets pleiotropiques par liaison a des recepteurs nucleaires, les recepteurs de l'acide retinoide tout trans (rars) et les recepteurs de l'acide 9-cis retinoique (rxrs) qui se lient generalement sous forme d'heterodimeres a des sequences specifiques d'adn pour reguler l'expression de leurs genes cibles. L'activite transcriptionnelle des recepteurs nucleaires peut etre controlee par la liaison de corepresseurs en l'absence de ligand et le recrutement de coactivateurs apres liaison du ligand. Elle peut etre aussi modulee par de nombreuses modifications post-traductionnelles dont la phosphorylation des recepteurs nucleaires. Dans ce travail, nous montrons que les isoformes alpha et gamma de pk-cs sont capables de phosphoryler hrar sur un seul residu, la serine 157. La modification de cette serine entraine une inhibition de l'activite transcriptionnelle du recepteur qui est correlee a une diminution de sa capacite a former des heterodimeres avec hrxr
Dans les cellules hela, nous avons egalement caracterise les isoformes de pk-cs presentes et demontre qu'un traitement prolonge par un ester de phorbol, le tpa, provoque non seulement une diminution d'expression des pk-cs et mais aussi une accumulation de la sous unite catalytique dans le noyau des cellules cibles. Nous montrons donc que hrar est une cible directe pour les pk-cs et qui controlent l'activite transcriptionnelle des recepteurs des retinoides pendant la proliferation et la differenciation cellulaire. La serine 157 est situee dans la boite t du recepteur, une region encore peu caracterisee mais soupconnee d'avoir un role dans les activites de liaison a l'adn et de dimerisation. Nous avons mute en alanine chacun des douze acides amines constituant la boite t et etudie l'effet de ces mutations sur l'activite transcriptionnelle des recepteurs et sur leurs activites de liaison a l'adn et de dimerisation. Nous montrons que ces mutations diminuent l'inductibilite transcriptionnelle vraisemblablement par modification de l'interaction avec les coactivateurs et les corepresseurs

Le syndrome de détresse respiratoire causé par une déficience du surfactant pulmonaire, de même que la bronchodysplasie pulmonaire, sont des complications fréquemment observées chez les prématurés. Certaines observations suggèrent que les stocks insuffisants d'acide rétinoïque sous la forme d'ester de rétinyl sont en grande partie responsables de ces pathologies. Cette déficience en acide rétinoïque pourrait elle-même affecter l'expression des récepteurs de l'acide rétinoïque et compromettre le processus de maturation pulmonaire, qui serait à l'origine du syndrome de détresse respiratoire. Par analogie chez les fumeurs, on observe une perte de l'expression du gène RAR[bêta] dès les premiers stades du processus néoplasique pulmonaire, suggérant que le RAR[bêta] joue un rôle clé durant le processus de tumorigénèse. L'acide rétinoïque (RA) est un dérivé de la vitamine A qui joue un rôle important dans le contrôle de la différenciation et de la prolifération cellulaire. L'action du RA s'effectue via deux familles de récepteurs nucléaires appelés RAR et RXR. Au laboratoire, nous nous intéressons au rôle joué par le récepteur RAR[bêta] dans le processus de la tumorigénèse et de la différenciation des cellules épithéliales pulmonaires. Afin d'étudier le rôle de RAR[bêta] dans ces processus, trois modèles de souris transgéniques précédemment générés par le docteur Bérard ont été utilisés. Ces animaux permettent la manipulation des niveaux d'expression de quatre des isoformes du RAR[bêta]. En conclusion, les résultats obtenus suggèrent que le RAR[bêta] est impliqué directement ou indirectement dans le contrôle de l'expression des différentes composantes du surfactant pulmonaire. Ces marqueurs de la différenciation cellulaire seront très utiles ultérieurement, lors des essais précliniques visant l'utilisation des rétinoïdes sélectifs comme agents de chimioprévention du cancer du poumon."--Résumé abrégé par UMI.