Auswahl der wissenschaftlichen Literatur zum Thema „Protéines liant les odorants“

Alors que, pour la plupart, les médicaments actuels sont de petites molécules inhibant l’action d’une protéine en bloquant un site d’interaction, la dégradation ciblée des protéines, découverte il y a une vingtaine d’années via les petites molécules PROTAC, connaît aujourd’hui un très grand développement, aussi bien au niveau universitaire qu’industriel. Cette dégradation ciblée permet de contrôler la concentration intracellulaire d’une protéine spécifique comme peuvent le faire les techniques basées sur les acides nucléiques (oligonucléotides antisens, ARNsi, CRISPR-Cas9). Les molécules PROTAC sont des chimères hétéro-bifonctionnelles capables de lier simultanément une protéine spécifique devant être dégradée et une E3 ubiquitine ligase. Les PROTAC sont donc capables de provoquer l’ubiquitinylation de la protéine ciblée et sa dégradation par le protéasome 26S. De nature peptidique, puis non peptidique, les PROTAC sont maintenant administrables par voie orale. Ce détournement du système ubiquitine protéasome permet aux molécules PROTAC d’élargir considérablement le champ des applications thérapeutiques puisque l’élimination de protéines dépourvues de poches ou de crevasses bien définies, dites difficiles à cibler, devient possible. Cette technologie versatile a conduit à la dégradation d’une grande variété de protéines comme des facteurs de transcription, des sérine/thréonine/tyrosine kinases, des protéines de structure, des protéines cytosoliques, des lecteurs épigénétiques. Certaines ligases telles que VHL, MDM2, cereblon et IAP sont couramment utilisées pour être recrutées par les PROTAC. Actuellement, le nombre de ligases pouvant être utilisées ainsi que la nature des protéines dégradées sont en constante augmentation. Deux PROTAC sont en étude clinique pour les cancers du sein (ARV471) et de la prostate (ARV110). La dégradation spécifique d’une protéine par le protéasome peut aussi être induite par d’autres types de molécules synthétiques : colles moléculaires, marqueurs hydrophobes, HaloPROTAC, homo-PROTAC. D’autres constituants cellulaires sont aussi éligibles à une dégradation induite : ARN-PROTAC pour les protéines se liant à l’ARN et RIBOTAC pour la dégradation de l’ARN lui-même comme celui du SARS-CoV-2. Des dégradations induites en dehors du protéasome sont aussi connues : LYTAC, pour des chimères détournant la dégradation de protéines extracellulaires vers les lysosomes, et MADTAC, pour des chimères détournant la dégradation par macroautophagie. Plusieurs techniques, en particulier des plates-formes de criblage, la modélisation mathématique et la conception computationnelle sont utilisées pour le développement de nouveaux PROTAC efficaces.

L’objectif de cette étude est de formuler une saucisse à base de viande de dromadaire qui s’aligne avec la tendance des « allégations santé » visant à réduire la consommation de viandes rouges conventionnelles et de graisses animales. Par ailleurs, l’effet de la substitution de la fécule de pomme de terre, couramment utilisé en tant qu’agent liant dans les produits charcutiers, par la farine intégrale d’éleusine (Eleusine coracana L.) sur la qualité de la saucisse a été étudié. L’éleusine est cultivée dans l’oasis de Chenini-Gabès, située dans le sud-est de la Tunisie. L’analyse de sa composition révèle une teneur 70,19% en carbohydrates, dont 11,5% sont des fibres alimentaires, 13,53% de protéines, 2,75% de cendres, 1,81% de lipides et 0,25% de composés phénoliques. Sa capacité de rétention d’eau atteint 150 g d’eau/100 g. Par ailleurs, l’activité anti-DPPH• de l’extrait eau/éthanol révèle une valeur de CI50 de 60 µg/ml. Ensuite, la stabilité de la saucisse de dromadaire a été suivie pendant 21 j de stockage réfrigéré. L’introduction de la farine d’éleusine n’a pas altéré la qualité sensorielle, et a réussi à maintenir les caractéristiques texturales, à stabiliser la couleur et les pigments héminiques, et à limiter l’oxydation des lipides. Les résultats de cette étude suggèrent que la farine d’éleusine se positionne comme un substitut prometteur de la fécule de pomme de terre dans la fabrication de saucisses. Il est intéressant d’approfondir les recherches dans ce domaine afin d’explorer davantage les applications potentielles de la farine d’éleusine dans l’industrie alimentaire.

La classe C des Récepteurs Couplés aux Protéines G (RCPG) comprend plusieurs membres aux fonctions physiologiques importantes comme par exemple les récepteurs des principaux neurotransmetteurs excitateurs (glutamate) et inhibiteurs (GABA) du système nerveux, les récepteurs des goûts umami et sucré et les récepteurs sensibles au calcium. Ces récepteurs possèdent une architecture moléculaire particulière, caractérisée par la présence d’un large domaine extracellulaire (ECD) relié à un domaine membranaire composé de 7 hélices transmembranaires (7TM). De plus, ils forment tous des dimères obligatoires, la dimérisation étant fondamentale pour leur fonction. La fixation d’agoniste dans l’ECD induit l’activation du récepteur. L’activité des agonistes peut être modulée de manière allostérique par des modulateurs positifs (PAM) ou négatifs (NAM), se liant au domaine 7TM. Il est important de comprendre comment les changements de conformation induits par la liaison des agonistes au sein du domaine extracellulaire sont transmis au domaine transmembranaire mais aussi de comprendre les bases structurales et moléculaires de la régulation allostérique des récepteurs de la classe C. Les progrès récents de la microscopie électronique en conditions cryogéniques (cryoEM) ont permis des avancées sans précédent dans le décryptage des bases structurelles et moléculaires des mécanismes d’activation des RCPG de classe C, et notamment du récepteur métabotropique du glutamate de type 5 (mGlu5). Le glutamate entraîne une fermeture et un changement d’orientation des domaines extracellulaires qui induit un mouvement important entre les sous-unités, rapprochant les 7TM et stabilisant la conformation active du récepteur. La diversité de conformations inactives pour les récepteurs de la classe C était inattendue mais propice à une activation possible par des PAM. Ces derniers stabilisent une conformation active des 7TM, indépendante des changements conformationnels induits par les agonistes, représentant un mode alternatif d’activation des récepteurs mGlu. Nous présentons et discutons ici les caractérisations structurales récentes des récepteurs de classe C, en soulignant les résultats qui rendent cette famille de récepteurs unique. La compréhension de la base structurelle de la signalisation des dimères de mGlu représente une réalisation historique et ouvre la voie à l’analyse de la signalisation des dimères de RCPG en général. Ces analyses structurales devraient également ouvrir de nouvelles voies pour la conception de médicaments ciblant cette famille de récepteurs qui sont aussi des cibles thérapeutiques.

La détection de molécules odorantes et de composés organiques volatils (COVs) fait l'objet d'une demande croissante dans divers domaines tels que l’industrie alimentaire, la parfumerie, le diagnostic médical, la surveillance environnementale, etc. Bien que précises et fiables, les méthodes les plus couramment employées - la chromatographie en phase gazeuse couplée à la spectrométrie de masse et les panels de nez humain ou encore des nez de chiens dressés- présentent un certain nombre d'inconvénients notamment en termes de coût et de temps. En réponse à ces contraintes, les nez électroniques (NEs) sont alors apparus comme des outils prometteurs pour l’analyse de COVs. Inspirés du nez biologique, ces dispositifs biomimétiques se composent généralement d'un ensemble de capteurs chimiques à réactivité croisée combinés à un système de reconnaissance des formes. Au cours des trois dernières décennies, les nez électroniques ont démontré leur potentiel significatif pour l'analyse des COV dans de nombreux domaines. Toutefois, l'une des principales faiblesses de la plupart des NEs existants est leur sélectivité limitée. Pour répondre à cette problématique, les efforts de recherche se sont multipliés au cours de la dernière décennie pour explorer l'utilisation de matériaux biologiques issu du système olfactif comme matériaux de détection afin d'améliorer les performances des NEs. Dans ce contexte, notre équipe au sein du laboratoire Systèmes Moléculaires et Nanomatériaux pour l'Energie et la Santé (SyMMES, UMR 5819), a conceptualisé un nez bioélectronique utilisant l’imagerie par résonance de plasmons de surface comme technique de transduction et employant de petits peptides comme matériaux de détection. Cette technologie a conduit à la création d'Aryballe, une société qui a réussi à miniaturiser et à commercialiser le dispositif. Ce projet de thèse fait partie du projet ANR OBP-Optinose (ANR-18-CE42-0012) et vise principalement à explorer le potentiel des protéines liant les odorants (OBPs) en tant que nouveaux matériaux de détection pour le développement de nez bioélectroniques.Au cours de la thèse, nous avons utilisé une combinaison d'OBPs de type sauvage et d’OBPs plus sélectives, qui ont été conçues et génétiquement modifiées pour avoir des propriétés de liaison spécifiques pour certains COVs cibles. Notre approche expérimentale consistait à étudier les divers paramètres susceptibles d’impacter les performances des biocapteurs à base d'OBP pour la détection de COVs en phase gazeuse. Ainsi, dans un premier temps, nous avons entrepris une caractérisation complète des couches d'OBP immobilisée en surface. Nous avons commencé par évaluer la stabilité des protéines en phase gazeuse, un élément crucial pour assurer leur activité. Ensuite, nous avons approfondi notre analyse en examinant la densité et l'orientation des OBPs après leur dépôt sur la surface d’or de la puce. Car ces facteurs peuvent impacter la sensibilité de notre système. Nous avons également examiné l’impact du glycérol sur les couches d’OBPs. En outre, nous avons réalisé des recherches approfondies sur le mécanisme d'hydratation des couches d'OBP qui nous ont permis de mieux comprendre comment les conditions d'humidité influencent la réactivité des biocapteurs. Enfin, nous avons démontré les bonnes performances du nez bioélectronique à base d’OBP en phase gazeuse en termes de sélectivité, stabilité et répétabilité
The detection of odorant molecules and volatile organic compounds (VOCs) is the subject of growing demand in various fields such as food industry, perfumery, medical diagnostics, environmental monitoring and so on. Although accurate and reliable, the most commonly used methods - gas chromatography coupled with mass spectrometry and panels of human noses or trained dogs- have a number of drawbacks, particularly in terms of cost and time. In response to these limitations, electronic noses (eNs) have emerged as promising tools for the analysis of VOCs. Inspired by the biological nose, these biomimetic devices generally consist of a set of cross-reactive chemical sensors combined with a pattern recognition system. Over the past three decades, eNs have demonstrated their great potential for VOC analysis in many areas. However, one of the main weaknesses of most existing eNs is their limited selectivity. In response to this problem, research efforts have multiplied over the last decade to explore the use of biological materials from the olfactory system as sensing materials in order to improve the performance of eNs. In this context, our team at the Molecular Systems and Nanomaterials for Energy and Health laboratory (SyMMES, UMR 5819), has conceptualized a bioelectronic nose using surface plasmon resonance imaging as a transduction technique and employing small peptides as sensing materials. This technology led to the creation of Aryballe, a company that has successfully miniaturized and commercialized the device. This thesis project is a part of the ANR project OBP-Optinose (ANR-18-CE42-0012), which aims to explore the potential of odorant binding proteins (OBPs) as novel sensing materials for the development of bioelectronic noses.During the thesis, we used a combination of wild-type and more selective OBPs, which were designed and genetically modified to have specific binding properties for target VOCs. Our experimental approach was to study various parameters that could have an impact on the performance of OBP-based biosensors for the detection of VOCs in the gas phase. First, a complete characterization of the OBP layers after immobilization on surface was carried out. The stability of the proteins in the gas phase was assessed, which is crucial to ensure their activity. The density and orientation of the OBPs were also studied since they may have impact on the sensitivity of the system. In addition, the impact of glycerol and humidity on the OBP layers was investigated. In particular, in-depth research into the hydration mechanism of the OBP layers was carried out, which enabled us to gain a better understanding of how humidity influences the reactivity of the biosensors. Finally, we demonstrated the good performance of OBP-based bioelectronic nose in the gas phase in terms of selectivity, stability, and repeatability

L'etude decrite dans le present manuscrit constitue une base de travail qui devrait permettre la mise a jour d'un des maillons de la chaine, probablement complexe, de la communication cellulaire chez l'organisme relativement simple qu'est la myxobacterie stigmatella aurantiaca. Par analogie au systeme de transduction des eucaryotes, nous avons pu mettre en evidence dans un premier temps, une proteine membranaire liant le gtp, appelee proteine g54, dont neuf aminoacides ont pu etre determines. Cet element de sequence presente des homologies avec une autre gtpase membranaire isolee chez pseudomonas fluorescens et escherichia coli. Lepa, indispensable a la croissance cellulaire mais dont la fonction reste cependant a determiner. Dans un second temps, nous avons pu isoler et sequencer le gene d'une nucleoside diphosphate kinase. Cette enzyme, qui constitue la principale source de gtp intracellulaire, est impliquee dans le developpement de la drosophile et la proliferation de metastases dans differents modeles eucaryotes. L'etude du role de cette enzyme dans le developpement de s. Aurantiaca est egalement motivee par la mise en evidence d'interactions etroites entre la ndp kinase et diverses gtpases, dont les proteines g membranaires et transductrices, chez les eucaryotes. Le clonage du gene codant pour la proteine g54 devrait permettre de determiner si cette proteine joue effectivement un role dans la transduction des siganux chez s. Aurantiaca, et si tel est le cas d'etudier ses interactions avec la ndp kinase

L'épigénétique est un composant essentiel du fonctionnement des génomes eucaryotes. Les divers phénomènes épigénétiques modifient l'état chromatinien et participent à la plasticité du génome, mais aussi au maintien de son identité fonctionnelle à travers les générations cellulaires. Parmi ces processus, la méthylation de l'ADN joue un rôle fondamental dans la régulation de l'expression des gènes.Chez les mammifères, la méthylation de l'ADN est associée à la répression transcriptionnelle, et elle remplit au moins trois fonctions essentielles. Premièrement, elle permet de réprimer les séquences répétées afin de préserver l'intégrité du génome. Deuxièmement, la méthylation contrôle l'expression des gènes soumis à l'empreinte parentale, qui sont des régulateurs cruciaux du développement et de la vie adulte. Enfin, la méthylation permet de réprimer certains gènes tissu-spécifiques dans les organes où ils doivent être silencieux. En plus de ces rôles physiologiques, la méthylation est liée au cancer. En effet, des patrons de méthylation anormaux sont fréquemment observés dans les cellules tumorales, et ces anomalies participent à la transformation cellulaire par plusieurs mécanismes.La méthylation exerce ces effets par l'intermédiaire de protéines dédiées, qui reconnaissent spécifiquement l'ADN méthylé et contrôlent la transcription en modulant la chromatine. Trois familles de protéines liant l'ADN méthylé sont connues chez les mammifères, et elles totalisent entre elles neuf membres. De nombreux arguments suggèrent que cette liste est encore incomplète, et que des protéines humaines liant l'ADN méthylé restent à découvrir. Dans cette optique, nous avons opté pour deux types d'approches distinctes, une approche basée sur la littérature et une approche génétique. L'étude des protéines candidates ne nous a pas permis d'identifier de nouvelles protéines liant l'ADN méthylé et l'approche génétique par phage display a révélé deux protéines intéressantes, CHD3 et HMGB1 qui doivent désormais être validées par des approches in vivo et in vitro.Par ailleurs, nous avons entrepris l'étude de la régulation des éléments répétés par la protéine Zbtb4 chez la souris. Les expériences préliminaires indiquent une possible régulation des satellites mineurs par Zbtb4. Le rôle de cette régulation sera, par la suite, approfondi.

L'épigénétique est un composant essentiel du fonctionnement des génomes eucaryotes. Les divers phénomènes épigénétiques modifient l’état chromatinien et participent à la plasticité du génome, mais aussi au maintien de son identité fonctionnelle à travers les générations cellulaires. Parmi ces processus, la méthylation de l’ADN joue un rôle fondamental dans la régulation de l’expression des gènes.Chez les mammifères, la méthylation de l'ADN est associée à la répression transcriptionnelle, et elle remplit au moins trois fonctions essentielles. Premièrement, elle permet de réprimer les séquences répétées afin de préserver l’intégrité du génome. Deuxièmement, la méthylation contrôle l’expression des gènes soumis à l’empreinte parentale, qui sont des régulateurs cruciaux du développement et de la vie adulte. Enfin, la méthylation permet de réprimer certains gènes tissu-spécifiques dans les organes où ils doivent être silencieux. En plus de ces rôles physiologiques, la méthylation est liée au cancer. En effet, des patrons de méthylation anormaux sont fréquemment observés dans les cellules tumorales, et ces anomalies participent à la transformation cellulaire par plusieurs mécanismes.La méthylation exerce ces effets par l'intermédiaire de protéines dédiées, qui reconnaissent spécifiquement l'ADN méthylé et contrôlent la transcription en modulant la chromatine. Trois familles de protéines liant l'ADN méthylé sont connues chez les mammifères, et elles totalisent entre elles neuf membres. De nombreux arguments suggèrent que cette liste est encore incomplète, et que des protéines humaines liant l'ADN méthylé restent à découvrir. Dans cette optique, nous avons opté pour deux types d’approches distinctes, une approche basée sur la littérature et une approche génétique. L’étude des protéines candidates ne nous a pas permis d’identifier de nouvelles protéines liant l’ADN méthylé et l’approche génétique par phage display a révélé deux protéines intéressantes, CHD3 et HMGB1 qui doivent désormais être validées par des approches in vivo et in vitro.Par ailleurs, nous avons entrepris l’étude de la régulation des éléments répétés par la protéine Zbtb4 chez la souris. Les expériences préliminaires indiquent une possible régulation des satellites mineurs par Zbtb4. Le rôle de cette régulation sera, par la suite, approfondi
Epigenetic phenomena are key contributors to the function of eukaryotic genomes. These processes act on chromatin, and they are used to render the genome dynamic, but also stable throughout successive rounds of cell division. Among epigenetic processes, DNA methylation is especially well known for its role in the regulation of gene expression.In mammals, DNA methylation is strongly correlated with transcriptional repression, and fulfills at least three essential roles. First, it maintains repeated sequences transcriptionally silenced, thus ensuring the stability of the genome. Second, it is responsible for the proper regulation of parentally imprinted genes, which are crucial regulators of embryonic development and adult life. Finally, DNA methylation ensures that some tissue-specific genes are kept inactive in the organs in which they should be repressed. Besides these roles in the physiology of normal cells, DNA methylation has strong links to cancer. Indeed the pattern of DNA methylation on the genome is frequently altered in cancer cells, and these anomalies contribute to transformation by several mechanisms.DNA methylation does not control transcription directly, but instead acts via a set of dedicated proteins that specifically recognize methylated DNA and repress transcription by acting at the chromatin level. At present, three families of such proteins, totalling 9 members altogether, are known in humans. However, several lines of evidence suggest that the list is not exhaustive, and that other human proteins that bind methylated DNA remain to be found. This was the goal of the current project.To this end, we opted for two distinct types approaches, an approach based on literature and a genetic approach. The study of candidate proteins does not allow us to identify new methylated DNA binding proteins and the genetic approach by phage display revealed two proteins of interest, HMGB1 and CHD3 that must now be validated by in vivo and in vitro approaches.Furthermore, we studied the regulation of DNA repeats by Zbtb4 in mice. Preliminary results show a regulation of minor satellites by Zbtb4. The role of this regulation will be analyse further in the future

L'olfaction est une modalité sensorielle qui peut être utilisée pour réduire le stress engendré par les conditions d'élevage en porcheries industrielles. Pour comprendre le mécanisme de codage, nous avons utilisé des composés apaisants(acides gras et stéroi͏̈des)comme sondes, pour rechercher leurs protéines olfactives de liaison au sein des trois types de muqueuses olfactives. Quatre lipocalines, possédant toutes des propriétés de liaison différentes pour les composés apaisants, ont été identifiées et caractérisées. L'implication des odeurs maternelles dans le comportement d'apaisement a conduit à l'étude des continuités odorante et protéique trans-natale. Les trois protéines majeures de l'aire olfactive ont été sur-exprimées en cellules de levure Pichia pastoris et soumises à divers tests de liaisons avec les composés apaisants. Ce travail démontre le rôle fondamental de premier filtre sélectif que jouent les protéines olfactives dans la détection de signaux apaisants.

Le rôle des protéines de liaison aux odeurs OBP (Odorant Binding Protein) situées dans le mucus nasal chez les mammifères n'a pas encore été clairement élucidé. Elles appartiennent à la famille des lipocalines. Le but de ce travail était de déterminer les spectres d'affinités des OBP humaines pour des odorants divers, afin de voir s'ils recouvrent le panel d'odorants perçus par l'être humain, cela, dans le but de déterminer le rôle potentiel des 3 OBP humaines hOBP-2A, hOBP-2AB et hOBP-2B, très homologues (89 à 95 %), dans la discrimination des odorants chez l'Homme. Les OBP recombinantes ont été produites par les cellules de levures Pichia pastoris puis purifiées par chromatographie échangeuse d'anions et précisément caractérisées avant de subir les tests fonctionnels de fixation de molécules odorantes. Les résultats obtenus ont été comparés à ceux publiés pour le variant hOBP-2A en utilisant les mêmes ligands. Les constantes d'affinité sont de l'ordre du micromolaire et les 3 OBP humaines ont une affinité marquée pour les aldéhydes et les acides gras à longue chaîne et montrent des différences d'affinité entre elles. Leurs structures tridimensionnelles ont été modélisées afin d'interpréter les données fonctionnelles. Le variant hOBP-2B révèle une différence structurale par rapport aux deux autres, ce qui est corrélé aux résultats fonctionnels. Les spectres de liaison aux odorants des 3 OBP humaines ne sont peu différents ne couvrent pas tout le panel d'odorants perçus par l'Homme, suggérant que les OBP n'ont pas un rôle majeur dans la discrimination des odeurs mais pourraient avoir une fonction dans l'interaction avec les récepteurs olfactifs
The function of Odorant Binding Protein located in the mammal nasal mucus is stinn unknown They belong to the lipocalin structural superfamily. The aim of this work was to investigate the odorant binding specificity of human OBP, to determine whether they take into account the diversity of perceived odorant molecules, and whether these very homologous proteins (hOBP-2A, -2AB and -2B) are involved in human odorant discrimination. Binding affinity of hOBP-2B and -2AB for different odorants were be compared to the already known properties of hOBP-2A. Recombinant proteins were produced by the heterologous expression systems : Pichia pastoris and purified by anion exchange chromatography purification, thoroughly characterised proteins were submitted to functional studies. Binding of odorants was measured by displacement of a hydrophobic fluorescent probe. Results obtained for hOBP-2B and -2AB were compared to those already published for -2A with the same odorant panel. As for hOBP-2A, measured affinities were in the micromolar range and OBPs showed a strong affinity for aldehydes and long chain fatty acids, exhibiting some differences from one OBP to another. Their 3D structures were modelled by homology with the human tear lipocalin in order to interpret the binding data. HOBP-2B revealed a structural difference, in correlation with the functional data. This work revealed that the slighlty different ligand binding spectrum of the 3 human OBP does not represent the large odorant diversity, suggesting that OBP do not have a major function in odorant discrimination in the human species. Nevertheless, OBP complexed with odorant might have a function in odorant receptor activation

Les proteines liant l'actine jouent un role regulateur en modulant la vitesse de polymerisation des actines g et l'organisation tridimensionnelle, intracellulaire des filaments d'actines. Elles font partie integrante de l'appareil contractile et definissent aussi la morphologie cellulaire. Ces proteines sont souvent presentes sous differents isoformes dans differents types cellulaires et s'affairent a des taches differentes. Leurs expressions varient dans des conditions physiologiques differentes et dans des cas pathologiques. Nous avons choisi trois de ces proteines: les tropomyosines, la gelsoline et la fodrine, pour une etude structure-fonction de ces molecules en utilisant les techniques du genie genetique. Dans un premier temps, nous avons utilise differentes methodes de clonage des adnc qui nous ont permis de constituer des outils. Ensuite, nous avons effectue une etude de type phyletique pour permettre, dans le cas des tropomyosines, de definir les regions specifiques de chaque isoforme. Puis nous avons regarde l'expression differentielle des isoformes de tropomyosine correspondant a l'etat differencie et non differencie d'une cellule en utilisant la lignee: hl60 ou u937 comme modeles. Nous avons, par la suite, mis au point une methode de clonage generale qui pourrait etre appliquee au clonage des proteines se liant a l'actine, basee sur des interactions proteine-proteine directes. D'autre part, au cours de ces travaux, nous avons mis au point quelques techniques de purification des acides nucleiques en utilisant la chromatographie liquide a haute performance

A partir d'une enzyme, la β-Iactamase, nous avons généré un anticorps antiidiotypique à activité β-Iactamase que nous avons nommé 9G4H9. En comparant les résidus essentiels à l'activité catalytique de la β-Iactamase, nous avons proposé un modèle de site actif pour l'anticorps 9G4H9 dans lequel nous avons identifié les résidus arginine 24, sérine 26, lysine 27, sérine 28 et acide glutamique en position 98 susceptible d'être impliqués dans l'activité catalytique. Nous avons montré l'implication de tous les résidus identifiés dans l'activité catalytique hormis le résidu lysine en position 27. L'anticorps 9G4H9 a servi de cible pour la sélection d'un peptide inhibiteur par phage-display, nommé Pep90, d'activités β-Iactamases et d'activités parentes. Au cours de cette étude, nous avons caractérisé les modalités d'interaction de Pep90 respectivement avec l'anticorps catalytique 9G4H9, le scFv 9G4H9, différentes classes de β-Iactamases et DD-peptidases
9G4H9, a catalytic antibody displaying β-lactamase-Iike activity, has been elicited by the anti-idiotypic approach using β-Iactamase as first antigen. We proposed an active site model for antibody 9G4H9 in which we find residues arginine 24, serine 26, lysine 27, serine 28 and glutamic acid 98 that could be involved in β-Iactamase activity. We showed that ail the residues are involved in catalysis except residue lysine 27. Ln the second part of the work, antibody 9G4H9 was used as target to screen β-Iactamase activity inhibitor among cyclic heptapeptide bank displayed on bacteriophage M13. One of the phage-displayed peptide (pep90) issued from the selection procedures was shown to be a competitive inhibitor of the β-Iactamase activity of the anti-idiotypic antibody, with a Ki = 38uM. We showed that Pep90 interact with several class of penicillin-binding protein, thus opening routes to the design of antibiotic-like molecules