Dissertationen: „Microenvironnement immunitaire des tumeurs“

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De, Vries-Brilland Manon. „Caractérisation du microenvironnement immunitaire des carcinomes papillaires du rein“. Electronic Thesis or Diss., Angers, 2023. http://www.theses.fr/2023ANGE0017.

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Article 1 : Inhibiteurs de points de contrôle dans le carcinome rénal papillaire métastatique : le carcinome papillaire à cellules rénales (pRCC) est le CCR à cellules non claires (nccRCC) le plus courant et une entité distincte, bien qu'hétérogène, associée à de mauvais pronostics. Le paysage thérapeutique du pRCC métastatique (mpRCC) reposait jusqu'à présent sur des thérapies ciblées, imitant les développements antérieurs dans le carcinome rénal métastatique à cellules claires. Cependant, les antiangiogéniques ainsi que les inhibiteurs de mTOR ne conservent qu'une activité limitée dans le mpRCC. Alors que le développement d'inhibiteurs de points de contrôle immunitaires (ICI) est actuellement en cours chez les patients atteints de mpRCC, notre objectif était de discuter des données d'activité précoces et du potentiel de futures stratégies thérapeutiques en monothérapie ou en association. L'expression de points de contrôle immunitaires tels que PD-L1 et de cellules immunitaires infiltrantes dans le pRCC pourrait fournir des informations sur leur immunogénicité potentielle, bien que celle-ci soit actuellement mal décrite. Sur la base de données rétrospectives et prospectives, l'efficacité de l'ICI en monothérapie reste limitée. Les associations avec des inhibiteurs de la tyrosine-kinase, notamment avec des inhibiteurs anti-MET, présentent des taux de réponse prometteurs et pourraient entrer dans la norme de soins chez les patients non traités. Un travail collaboratif est nécessaire pour affiner le paysage moléculaire et immunitaire du pRCC et poursuivre les efforts visant à mettre en place des essais cliniques prédictifs basés sur des biomarqueurs dans ces tumeurs rares.Article 2 : Analyses complètes du microenvironnement tumoral immunitaire dans le carcinome papillaire à cellules rénales. Contexte : le carcinome papillaire à cellules rénales (pRCC) est le CCR à cellules non claires (nccRCC) le plus courant et associé à de mauvais résultats dans le contexte métastatique. Dans cette étude, nous avions pour objectif d'évaluer de manière exhaustive le microenvironnement tumoral immunitaire (TME), largement inconnu, des patients atteints de pRCC métastatique et d'identifier des cibles thérapeutiques potentielles. Méthodes : nous avons effectué une analyse quantitative de l'expression génique du TME en utilisant la méthodologie du compteur MCP, sur 2 cohortes indépendantes de pRCC localisés (n=271 et n=98). Nous avons ensuite caractérisé le TME, en utilisant l'immunohistochimie (n = 38) et le séquençage d'ARN (RNA-seq) (n = 30) sur des pRCC métastatiques de la cohorte prospective de l'essai AXIPAP. Résultats : le clustering non supervisé a identifié 2 « sous-types de TME » dans chacune des cohortes : le « immuno-enrichi » et le « immuno-faible ». Au sein de la cohorte de l'essai AXIPAP, le cluster « immuno-enrichi » était significativement associé à un plus mauvais pronostic. selon la médiane de survie globale à 8 mois (IC95%, 6-29) versus 37 mois (IC95%, 20-NA, p=0,001). Les 2 signatures immunitaires, Teff et JAVELIN Renal 101 Immuno signature, prédictives de La réponse aux inhibiteurs de point de contrôle immunitaire (IPC) dans le ccRCC était significativement plus élevée dans le groupe « enrichi sur le plan immunitaire » (p < 0,05 ajusté). Enfin, 5 gènes différentiellement surexprimés ont été identifiés, correspondant principalement aux populations de lymphocytes B. Conclusion : pour la première fois, en utilisant RNA-seq et IHC, nous avons mis en évidence un sous-type immunitaire TME spécifique du pRCC métastatique, significativement plus infiltré par la population T et Bimmune. Ce groupe « immunoenrichi » semble avoir un pronostic plus défavorable et pourrait avoir une valeur prédictive potentielle de réponse à l’immunothérapie, justifiant la confirmation de ces résultats dans une cohorte de pRCC métastatiques traités par CPI et en association avec des thérapies ciblées
Article 1: Checkpoint inhibitors in metastatic papillary renal cell carcinoma : papillary Renal Cell Carcinoma (pRCC) is the most common non-clear cell RCC (nccRCC) and a distinct entity, although heterogenous, associated with poor outcomes. The treatment landscape of metastatic pRCC (mpRCC) relied so far on targeted therapies, mimicking previous developments in metastatic clear-cell renal cell carcinoma. However, antiangiogenics as well as mTOR inhibitors retain only limited activity in mpRCC. As development of immune checkpoint inhibitors (ICI) is now underway in patients with mpRCC, we aimed at discussing early activity data and potential for future therapeutic strategies in monotherapy or combination. Expression of immune checkpoints such as PD-L1 and infiltrative immune cells in pRCC could provide insights into their potential immunogenicity, although this is currently poorly described. Based on retrospective and prospective data, efficacy of ICI as single agent remains limited. Combinations with tyrosine-kinase inhibitors, notably with anti-MET inhibitors, harbor promising response rates and may enter the standard of care in untreated patients. Collaborative work is needed to refine the molecular and immune landscape of pRCC, and pursue efforts to set up predictive biomarker-driven clinical trials in these rare tumors. Article 2 : Comprehensive analyses of immune tumor microenvironment in papillary renal cell carcinoma. Background : papillary Renal CellCarcinoma (pRCC) is the most common non-clear cell RCC (nccRCC), and associated with poor outcomes in the metastatic setting. In this study, we aimed to comprehensively evaluate the immune tumor microenvironment (TME) ,largely unknown, of patients with metastatic pRCC and identify potential therapeutic targets. Methods : we performed quantitative gene expression analysis of TME using MCP-counter methodology, on 2 independent cohorts of localized pRCC (n=271 and n=98). We then characterized the TME, using immunohistochemistry (n=38) and RNA-sequencing (RNA-seq) (n=30) on metastatic pRCC from the prospective AXIPAP trial cohort. Results: unsupervised clustering identified 2 "TME subtypes", in each of the cohorts : the “immune-enriched” and the “immune-low”.Within AXIPAP trial cohort, the “immune-enriched” cluster was significantly associated with a worse prognosis according to the median overall survival to 8 months (95%CI, 6-29) versus 37 months (95%CI, 20-NA,p=0.001).The 2 immune signatures, Teff and JAVELIN Renal 101 Immuno signature, predictive of response to immune checkpoint inhibitors (CPI) in ccRCC, were significantly higher in the “immune-enriched” group (adjusted p<0.05). Finally, 5 differentially overexpressed genes were identified, corresponding mainly to B lymphocyte populations. Conclusion : for the first time, using RNA-seqand IHC, we have highlighted a specific immune TME subtype of metastatic pRCC, significantly more infiltrated with T and Bimmune population. This “immune-enriched” group appears to have a worse prognosis and could have a potential predictive value for response to immunotherapy, justifying the confirmation of these results in a cohort of metastatic pRCC treated with CPI and incombination with targeted therapies

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Pinot, Roussel Hélène. „Étude du microenvironnement immunitaire des tumeurs du poumon avec réarrangement ALK et rôle des lymphocytes résidents mémoires dans les tumeurs muqueuses (poumon, ORL)“. Thesis, Sorbonne Paris Cité, 2016. http://www.theses.fr/2016USPCB086.

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Les cancers du poumon se placent au quatrième rang des cancers tous sexes confondus et constituent la première cause de mortalité par cancer pour l’homme et la troisième chez la femme. Le pronostic est sombre avec une survie relative globale estimée à 43% à 1 an et 14% à 5 ans. Les adénocarcinomes, les carcinomes épidermoïdes et les carcinomes à grandes cellules selon la classification OMS 2015 correspondent à 85% de ces cancers. Les adénocarcinomes pulmonaires ont été scindés en de multiples entités grâce aux progrès des techniques de biologie moléculaire ayant permis d’identifier différentes mutations (EGFR, RAS..) ou réarrangement chromosomique (EML4-ALK), à l’origine de ces tumeurs. Différentes thérapies ciblées ont pu ainsi être développées afin de contrecarrer ces anomalies tels que le crizotinib en cas de réarrangement EML4-Alk ou l’erlotinib en cas de mutation de l’EGFR. Chacun de ces sous-types tumoraux a une présentation clinique et une évolution qui lui est propre. Nous nous sommes particulièrement intéressés au réarrangement ALK, car la génération de néoépitopes dérivés de ce réarrangement pourrait induire une réponse immunitaire. Par ailleurs, il avait été montré dans des lymphomes qu’une translocation NPM-ALK induisait l’expression de PD-L1 via Stat 3. Or la liaison de PD-L1 à PD-1 exprimé par les lymphocytes T (LT) délivre un signal inhibiteur à ces cellules. Ce mécanisme d’échappement constitue une cible thérapeutique via des anticorps qui bloquent cette interaction. Le premier objectif de ce travail a consisté à caractériser la réponse immunitaire effectrice (LT-CD8) et les mécanismes régulant cette réponse (expression de PD-L1, de PD1, infiltration par des LT régulateurs, perte du CMH de classe 1) dans les adénocarcinomes du poumon avec un réarrangement ALK. Cette étude a été réalisée avec une nouvelle méthode de quantification des cellules immunes reposant sur une analyse multiparamétrique in situ fluorescente avec une analyse spectrale permettant de s’affranchir des problèmes de compensation de fluorescence. J’ai montré que les tumeurs du poumon avec un réarrangement ALK exprimaient plus fréquemment PD-L1 que les tumeurs non mutées ou présentant une mutation de l’EGFR. Si le nombre médian de lymphocytes T-CD8+, exprimant ou non PD1 ne différait pas entre les différents groupes, nous avons montré que les tumeurs ALK réarrangé présentaient, avec une fréquence plus grande, une expression de PD-L1 associée à un infiltrat LT-CD8+ total ou intratumoral ou CD8+PD1+ total ou intra-tumoral supérieurs à la médiane. Cette corrélation n’était pas retrouvée, ni dans les ADC EGFR muté ni dans les ADC non ALK, non EGFR, non KRAS. L’expression de PD-L1 associée à l’infiltration par les LT-CD8 exprimant PD-1 sont considérées comme des biomarqueurs de réponse à l’immunothérapie par des anti-PD-1/PDL-1. Cette caractérisation du microenvironnement des tumeurs du poumon avec un réarrangement ALK pourrait permettre de mieux comprendre le profil de réponse des patients à cette immunothérapie. La paroi alvéolaire du poumon est une surface muqueuse séparant l’organisme du monde extérieur. Or il est connu que la réponse immunitaire muqueuse n’est pas similaire à la réponse observée dans le sang aussi bien en termes de phénotype des cellules présentes dans ces deux compartiments que par le mode de génération et d’induction de ces cellules. Dans un premier travail de l’équipe nous avons montré que seule une vaccination par voie nasale (voie muqueuse) permettait le recrutement dans une tumeur de la sphère ORL ou du poumon, de LT anti-tumoraux et la régression de tumeurs muqueuses ORL et pulmonaires, contrairement à une vaccination par voie systémique (intramusculaire). Cette efficacité de la vaccination muqueuse était associée à l’induction de lymphocytes T résidents mémoires (Trm) dans les sites muqueux (poumon, ORL) caractérisés par l’expression des intégrines CD103 et CD49a. (...)
Lung cancer is the most common cause of cancer-related mortality worlwide and a therapeutic challenge. Approximately 5% to 6% of non-small cell lung carcinoma (NSCLC) have chromosomal rearrangements of the anaplastic lymphoma kinase (ALK) gene, which mainly involve the echinoderm microtubule–associated protein-like 4 (EML4) gene as a partner. Even if the ALK tyrosine kinase inhibitor (TKI), crizotinib, has been successfully developed in these patients, resistance invariably occurs leading to tumor relapse. The ALK rearranged protein is immunogenic, was shown to induce PD-L1 and highlight the potential of immunotherapy in this cancer. The first issue of our work was to set up an immunofluorescence multiplex platform to comprehensively analyse the tumor microenvironment of a retrospective cohort of 29 ALK positive ADC, compared to 27 EGFR mutated ADC and 25 wild type ADC. Mean number of total CD8+T cells expressing or not PD-1 and the ratio of CD8/regulatory T cells weren’t significantly different between the various subgroups. The percentage of tumor cells expressing PD-L1 were higher in the ALK positive ADC, than in the EGFR positive ADC or WT lung cancer. We found a significant correlation in ALK positive ADC between the number of total or intratumoral (intraT) CD8+ or PD-1+CD8+T and the expression of PD-L1 by tumor cells suggesting a possible role of adaptive immunity in the regulation of PD-L1 on these tumor cells. Furthermore, the percentage of patients displaying two criteria of clinical response (% PD-L1 on tumor cells and infiltration by intraT PD-1+CD8+ or CD8+T cells) was higher in the ALK positive ADC. According to our results, a subgroup of ALK rearranged lung ADC patients may represent good candidates to be treated by anti-PD-1/PD-L1 antibodies. The alveolar wall is a mucosal site in contact with the environment. Resident memory T cells (Trm) found most prominently at mucosal sites represent a new subset of long lived memory T cells that remain in tissue and do not recirculate. Due to their role in local immunity, strategies to elicit Trm after vaccination have been developed. We and others clearly showed that mucosal immunization were more efficient than the conventional systemic route (intramuscular, subcutaneous) to elicit Trm at the mucosal tumor site. Indeed, the mucosal route of immunization imprints T cells with a mucosal homing program defined by a profile of integrin and chemokine receptors promoting their homing to the site of initial activation. A correlation was observed between the ability to elicit these cells at the tumor site and the control of tumor growth. The second issue of this work was to characterize in a mouse model Trm after mucosal cancer vaccine administration and in human lung cancer. We first developed various original strategies (mucosal immunization, use of mucosal vector, modulation of TGF, parabiosis experiments) to elicit or inhibit Trm in a preclinical model of head and neck cancer. All these experiments converged to demonstrate that the induction of Trm are required for the control of tumor growth. In order to extrapolate this role of Trm in humans, we found that the number of Trm correlated with a better overall survival in lung cancer in multivariate analysis. The induction of Trm may represent a new surrogate biomarker for the efficacy of cancer vaccine

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Jary, Marine. „Analyse du microenvironnement et de l'oncogenèse des cancers colorectaux surexprimant l’Angiopoiétine 2“. Thesis, Bourgogne Franche-Comté, 2019. http://www.theses.fr/2019UBFCE016.

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Le cancer colorectal est une maladie grave et fréquente, pour laquelle la survie s'est considérablement améliorée du fait de l'essor des thérapeutiques et des stratégies de combinaisons médico-chirurgicales, même en situation métastatique. C'est également une entité hétérogène, pour laquelle la personnalisation de la prise en charge reste réduite, de par l'absence de scores pronostiques ou prédictifs utilisés en routine et guidant les pratiques. Les classifications moléculaires établies n'ont pas de caractère prédictif et semblent inadaptées au stade métastatique, mais elles peuvent apporter de l'aide à la meilleure compréhension de la biologie des cancers colorectaux et de leur microenvironnement. L'utilisation de tests sériques récapitulant les caractéristiques de la tumeur serait probablement plus simple et moins couteux. La recherche de biomarqueurs résumant les caractéristiques de la tumeur, et guidant les traitements, est donc un enjeu majeur.Ce travail de thèse a porté sur l'étude de l'Angiopoietine 2, de la signature génique et protéique qui lui est associée, et sur l'analyse du microenvironnement et de la réponse immunitaire périphérique Th1 chez des patients atteints d'un cancer colorectal.La première partie du travail a consisté à étudier la valeur pronostique de l'Angiopoietine 2 au sein d'une cohorte de patients atteints d'un cancer colorectal métastatique. Un seuil discriminant de l'Angiopoietine 2 a été établi, définissant les patients de mauvais pronostic, indépendamment associé à la survie globale. Ce dosage améliorait la capacité discriminante de scores pronostiques classiques. La seconde partie du travail a consisté à identifier, à partir de bases de données transcriptomiques, les caractéristiques des patients porteurs de cancer colorectaux et surexprimant l'Angiopoietine 2. Les voies de signalisation et les gènes associés à cette entité de tumeur ont été analysés, pour mieux comprendre les éléments qui confèrent un mauvais pronostic, et pour définir des candidats, protéines sécrétées, pouvant être dosées chez les patients. Une signature génique puis sérique a été élaborée, reflétant le stroma l'angiogenèse l'invasion et la chimiorésistance. Le dosage des marqueurs ANGPT2, CD138 et STC1 sur une cohorte de patients a confirmé l'association de ces biomarqueurs au caractère de chimiorésistance. Cette signature associée aux tumeurs surexprimant l'Angiopoietine 2 est inversement corrélée à la réponse immunitaire dans les premières approches réalisées. Ceci nous a incité à étudier l'effet de la réponse immunitaire périphérique CD4 de type Th1 anti télomérase, COA1 et mésothéline, sur la survie globale des patients atteints de cancers colorectaux métastatiques. L'étude sérique de l'Angiopoietine 2 y a été associée. Nous avons ainsi validé des données récemment publiées dans d'autres localisations tumorales, attestant de la valeur pronostique de la réponse immunitaire périphérique, sur la survie globale pour les cancers du côlon métastatiques (étude prospective Epitopes-CRC02). Une corrélation inverse entre réponse immunitaire CD4 de type Th1 et l'ANGPT2 a été confirmée.Ces travaux ouvrent la voie sur le ciblage spécifique des tumeurs présentant la signature Angiopoietine 2 de chimiorésistance et de stroma abondant, par une approche combinatoire associant des thérapeutiques ciblant le microenvironnement tumoral. Un monitoring est également réalisable pour accompagner ces futurs projets de recherche, et les modèles pronostiques à venir intégreront ces données au sein des tests de survie multi-paramétriques
Colorectal cancer (CRC) is a severe and frequent disease, with important survival improvement due to therapeutic new approaches and surgical methods, even in metastatic setting. It is an heterogeneous entity, and personalized strategies are mandated, whereas few predictive and prognostic biomarkers are available in practical care. Molecular classifications are useful to better understand CRC biological characteristics, but they do not have predictive values, and seem to be inadequate for metastatic setting. Seric biomarkers are attractive since they could recapitulate tumor features, while being simpler and less expansive. There is a need to investigate surrogacy biomarkers illustrating intra tumoral microenvironment, in order to adapt treatment strategies.This thesis is about the clinical and molecular characterization of Angiopoietin 2 (ANGPT2) associated colorectal cancer. Assessment of microenvironment and peripheral immune Th1 response are performed and correlated with this entity.Prognostic value of ANGPT2 in metastatic colorectal cancer was studied in the first part of the manuscript. We described that ANGPT2 plasmatic levels were associated with a worst overall survival in metastatic setting. In the second part, using the open source transcriptomic tools, we decided to define the specific molecular signaling pathways correlated to ANGPT2 expression in CRC and its prognostic value in localized CRC. A specific signature was drawn, combining genes associated with stroma, invasion, angiogenesis, and chemo-resistance. Looking for associated secreted proteins, we could identify a seric signature (combining STC1, CD138 and ANGPT2), predictive for chemo-resistance. An negative correlation was observed between ANGPT2 signature and immune response. The last part of the thesis then explored the prognostic value of anti TERT peripheral immune Th1 response in metastatic colorectal cancer (Epitopes-CRC02 study), and validated its beneficial role for predicting OS. A negative correlation was confirmed, in seric measurement between CD4 immune response and ANGPT2.This work paves the way for individualized treatments in tumors harboring ANGPT2 associated characteristics', targeting the stromal and immune microenvironment. This immune and stromal biomonitoring is feasible and have to be associated to futures clinical studies. Future prognostic scores should probably assess the place of these biomarkers in order to improve their discriminant values

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Anna, François. „Développement d'une immunothérapie anti-tumorale basée sur un récepteur antigénique chimérique (CAR) ciblant le point de contrôle immunitaire HLA-G : implications pour les tumeurs et leur microenvironnement“. Thesis, Université de Paris (2019-....), 2019. https://wo.app.u-paris.fr/cgi-bin/WebObjects/TheseWeb.woa/wa/show?t=4021&f=26655.

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Au cours de la dernière décennie, l’avènement des immunothérapies antitumorales a été une vraie percée dans le monde de la cancérologie avec le succès clinique des inhibiteurs de point de contrôle immunitaire (ICP) ou des thérapies cellulaires basées sur l’utilisation de récepteurs antigéniques chimériques (CAR). Cependant, aujourd’hui elles montrent leurs limites contre les tumeurs solides, notamment à cause d’un manque d’antigène spécifique et d’un microenvironnement tumoral complexe capable de moduler la réponse immune au profit de l’expansion des cellules cancéreuses. La molécule HLA-G est une protéine immunosuppressive participant exclusivement à la tolérance foeto-maternelle en contexte normal mais dont la fonction a été détournée par les tumeurs pour inhiber la réponse effectrice à son encontre. HLA-G est donc identifié comme un excellent antigène associé aux tumeurs et son inhibition est un élément crucial pour restaurer la réponse immunitaire anti-tumorale. Cependant, aucune stratégie immunothérapeutique ciblant HLA-G n’existait jusqu’à aujourd’hui.L’absence de traitement efficace contre ou ciblant HLA-G provient de l’incapacité à générer efficacement des anticorps contre cette protéine complexe du fait de la présence de nombreuses isoformes et de leurs caractères immunotolérogéniques. Dans la première partie de ces travaux, grâce à une méthode d’immunisation originale basée sur l’utilisation de vecteurs lentiviraux, nous avons pu générer des anticorps capables de reconnaitre le site d’interaction de HLA-G avec ses récepteurs et donc de potentiellement bloquer la fonction ICP de HLA-G. La deuxième partie de cette étude décrit la génération d’une thérapie CAR ciblant HLA-G en tant qu’antigène spécifique aux tumeurs. Tout d’abord, nous nous sommes préalablement concentrés sur la régulation et l’expression de la chaine CAR au niveau transcriptionnel. Cette approche visait à limiter les multiples effets secondaires liés à une thérapie CAR tels que l’activation continue des cellules CAR-T ou l’élimination de cellules saines exprimant l’antigène ciblé. Nous avons ensuite généré deux nouveaux CAR de 3ème génération capable de reconnaitre spécifiquement les isoformes majoritaires de HLA-G en contexte tumoral, et nous avons démontré leur efficacité à éliminer des tumeurs exprimant HLA-G in vitro et in vivo. Enfin, une série d’optimisations ont été réalisées sur la structure des protéines CAR pour augmenter leur capacité cytotoxique et permettre leur régulation par l’introduction du gène suicide iC9 pour les modèles précliniques. Nous démontrons pour la première fois que la thérapie CAR anti-HLA-G est extrêmement efficace in vitro et in vivo.Enfin, nous discutons du potentiel des immunothérapies anti-HLA-G aussi bien au travers des anticorps monoclonaux bloquants que des cellules CAR-T dans le contexte des tumeurs solides, de leurs implications sur le microenvironnement et de leur possible combinaison avec d’autres immunothérapies
Over the last decade, anti-tumor immunotherapies have been a breakthrough in the oncology field following the clinical successes obtained with immune checkpoint inhibitors (ICPs) or chimeric antigenic receptors (CAR) based therapies. However, they are less effective against solid tumors, especially because of the lack of tumor specific antigen and of a tumor microenvironment capable of inhibiting the immune response favoring the tumor expansion. The HLA-G molecule is an immunosuppressive protein originally exclusively demonstrated to be involved in maternal-fetal tolerance but whose function has been hijacked by tumors to inhibit and escape from immune responses. HLA-G is now identified as an exquisite tumor associated antigen and its inhibition is crucial to restore the anti-tumor immune responses. Yet, no immunotherapy directed against HLA-G has been developed to date.The lack of effective treatment against or targeting HLA-G is related to the inefficiency to induce antibodies against this complex protein since HLA-G could be expressed through several isoforms that are immunosuppressives. In the first part of this study, thanks to an original immunization method based on the use of lentiviral vectors, we demonstrate the possibility to generate antibodies which are capable to recognize the HLA-G interaction domain with its receptors and are expected to inhibit the ICP function of HLA-G. The second part describes a CAR-T cell immunotherapy targeting HLA-G for its TAA properties. We first focused on the regulation and on the expression of the CAR chain at the transcriptional level. This approach was meant to limit the side effects caused by CAR therapies such as continuous activation of the CAR-T cells or elimination of healthy cells expressing the targeted antigen. We then generated two new 3rd generation CARs demonstrated to specifically recognize major HLA-G isoforms expressed by tumor cells and to eradicate HLA-G expressing tumor cells in vitro and in vivo. Several optimizations were carried out on the CAR chain structure to increase CAR-T cells cytotoxic function and to control their persistence through the insertion of the iC9 suicide gene. Given the results presented here, we provide the first vitro and vivo proofs of concept that a CAR therapy directly targeting HLA-G, and more generally an ICP is strikingly efficient.Finally, we discussed the potential for both anti-HLA-G blocking monoclonal antibodies and CAR-T cells immunotherapies against solid tumors and its implication against the tumor microenvironment and possible combinations with other immunotherapies

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Sidot, Emmanuelle. „Rôle des cellules tuft dans l'homéostasie et les cancers intestinaux“. Thesis, Montpellier, 2018. http://www.theses.fr/2018MONTT057.

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Au cours de ma thèse, je me suis intéressée à une population cellulaire rare et peu étudiée de l’épithélium intestinal ; les cellules tuft. La fonction de ces cellules fut longtemps débattue dans la littérature, jusqu’à ce que nous découvrions leur fonction dans l’initiation de la réponse immune de type II en réponse à une infection parasitaire. De manière intéressante, ces cellules sont présentes de manière massive et transitoire au sein des lésions adénomateuses précoces et certains groupes ont suggéré l’implication de ces cellules en tant que cellules souches tumorales. Les principaux objectifs de ma thèse ont été de déterminer le rôle des cellules tuft au cours de la tumorigenèse intestinale et colorectale.Nous avons montré que l’absence de cellules tuft impacte le processus de tumorigenèse à la fois dans l’intestin grêle, dans des souris de la lignée Apc14/+, et au niveau du colon, après traitement avec un agent carcinogène. Nos données indiquent que si les cellules tuft n’agissent pas en tant que cellules souches tumorales, leur absence impacte certaines populations de cellules immunitaires. Afin de déterminer les mécanismes permettant aux cellules tuft de moduler le microenvironnement immunitaire, nous avons identifié par analyse transcriptomique de cellules tuft isolées par cytométrie en flux, des gènes codant pour des médiateurs connus pour être impliqués dans la communication avec le système immunitaire. Des analyses in-vivo, permettront de valider d’un point de vue fonctionnel l’implication de ces médiateurs immunitaires dans la fonction immuno-régulatrice des cellules tuft ainsi que dans le développement tumoral.L’ensemble de ces travaux a permis d’identifier une fonction immuno-régulatrice des cellules tuft au cours d’une infection parasitaire, mais aussi très probablement lors du développement tumoral. La compréhension des mécanismes permettant aux cellules tuft de moduler certaines populations de cellules immunitaires permettra d’identifier des cibles d’intérêt thérapeutique potentiel pour le traitement de patients atteints d’un cancer colorectal
I focused my PhD project on a scare epithelial cell population referred as tuft cells. Their function has been debated for decades in the literature, until we discovered their crucial role in the initiation of the so-called type-2 immune response following parasitic infection. Interestingly, tuft cells are present in early adenomatous intestinal lesions and literature suggested that these cells could act as cancer stem cells. The main objective of my PhD was to determine the tuft cell function during intestinal and colorectal cancer.We showed that tuft cells deficiency impacts both intestinal and colorectal tumorigenesis process, using Apc14/+ mouse strain and chemically induced carcinogenesis model, respectively. Our data indicate that tuft cells are not cancer stem cells, but that these cells are able to regulate immune cell populations. To get more insights into mechanisms allowing tuft cells to modulate the immune microenvironment, we identified, by transcriptomic analysis of FACS-isolated tuft cells, specific genes encoding mediators involved in the crosstalk with the immune system. Functional in-vivo validation of the most relevant candidates will identify tuft cells derived factors crucial for the immune-regulatory tuft cell function and for tumor development.This work allowed to highlight the immune-regulatory function of tuft cells during parasitic infection and likely during tumor development. A better knowledge of the mechanisms allowing tuft cells to shape either a pro- or an anti-tumoral microenvironment, will potentially paves the way for new therapeutic strategies regarding intestinal and colorectal tumorigenesis

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Arakelian, Tsolère. „Impact of Targeting the Autophagy Related Gene Beclin 1 on the Immune Landscape of Melanoma“. Thesis, Université Paris-Saclay (ComUE), 2018. http://www.theses.fr/2018SACLS193.

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L'immunothérapie basée sur le blocage des points de contrôle immunitaire (ICBs) est un traitement prometteur pour les patients atteints de mélanome ; cependant, seule une petite sous-population en tire un bénéfice à long terme. Un des défis pour améliorer l'efficacité et étendre le bénéfice des ICBs aux patients non répondeurs est de concevoir des approches innovantes permettant de transformer les tumeurs dites "froides ou désertes pour les cellules immunitaire" en tumeurs dites "chaudes ou infiltrées par les cellules immunitaires" qui sont éligibles aux ICBs. Nous avons étudié l'impact du ciblage du gène de l'autophagie Beclin1 sur le paysage immunitaire des tumeurs de mélanome B16-F10. Nos résultats ont démonté que ce ciblage inhibait significativement la croissance tumorale B16-F10 et augmentait l'infiltration des leucocytes CD45+. Le phénotypage immunitaire a révélé une augmentation de l'infiltration de cellules NK (Natural Killer) actives, de macrophages inflammatoires et résidents de type 1, de cellules dendritiques et de lymphocytes T CD8+ actifs. L’inhibition de la croissance tumorale Becn1- n'était plus observée par la déplétion des CD8+ de l'hôte, soulignant ainsi leur rôle dans le contrôle du développement de ces tumeurs. Nos résultats ont démontré que La régulation du paysage immunitaire des tumeurs Becn1- était associée à une modulation du réseau de cytokines/chémokines dans le microenvironnement tumoral (TME). Ainsi, les tumeurs Becn1- présentaient une signature de cytokines inflammatoires (comprenant CCL5, CXCL10 et IFNg) qui pourrait être responsable de l'établissement de microenvironnement inflammatoire permissif aux cellules CD8. Nous avons révélé que la surexpression de l'IFNg dans le TME des tumeurs Becn1- était responsable de l'induction de PD-L1 sur les cellules tumorales par la voie d'activation JAK/STATs. En conclusion, cette étude met en évidence Beclin1 comme une cible majeure, capable d'induire l'infiltration des cellules effectrices immunitaires dans les mélanomes en induisant une signature inflammatoire. Elle fournit également la preuve de concept pour combiner des inhibiteurs d'autophagie avec les ICBs comme une approche de pointe pour améliorer leur efficacité
Immune Checkpoint Blockades (ICBs)-based immunotherapy has emerged as a promising treatment for melanoma patients; however only a small subset of patients reaps a long term benefit. One of the major challenges to enhance the efficacy and extend the benefit of ICBs to non-responder patients is to design innovative approaches allowing the switch of “immune desert cold tumors” to “immune infiltrated hot tumors" which are eligible for ICB-based therapies. Here, we investigated the impact of targeting the early autophagy gene Beclin1 on the immune landscape of B16-F10 melanoma tumors. We found that targeting Beclin1 (Becn1-) significantly inhibited B16-F10 tumor growth and increased the infiltration of CD45+ leukocytes into the tumor bed. Immune phenotyping revealed an increased infiltration of active Natural Killer (NK) cells, inflammatory and resident type 1 macrophages, dendritic cells, and active CD8+ T lymphocytes. The inhibition of Becn1- tumor growth was no longer observed by depleting host CD8+ T cells, thus highlighting their major role in the control of Becn1- B16-F10 tumor development. We showed that Beclin1-dependent regulation of the immune landscape was associated with profound modulation of the cytokine/chemokine network in the tumor microenvironment (TME). Importantly, we revealed that Becn1- tumors displayed an inflammatory cytokine signature (comprised, but not restricted to, CCL5, CXCL10 and IFNg) that could be responsible for the switch from cold non T-inflamed to hot T-inflamed tumors. Mechanistically, we reported that the overexpression of IFNg in Becn1- TME was responsible for the induction of Programed Death ligand-1 (PD-L1) on tumor cells through the activation of JAK/STATs pathway. Overall, this study highlights Beclin1 as a valuable target, able to drive immune effectors cells into the melanoma tumors by inducing an inflammatory signature. This study provides the proof of concept for combining drugs inhibiting early autophagy process along with ICBs as a cutting-edge approach to improve their efficacy

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Trimaglio, Giulia. „An orthotopic syngeneic mouse model to study the role of DCIR in colorectal cancer“. Thesis, Toulouse 3, 2020. http://www.theses.fr/2020TOU30053.

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Le cancer colorectal (CCR) est le troisième cancer le plus fréquent et le deuxième cancer le plus mortel dans le monde. En conséquence, de nouveaux biomarqueurs diagnostiques ainsi qu’une amélioration des traitements actuels sont nécessaires. Les tumeurs se développent dans des microenvironnements complexes où les cellules cancéreuses interagissent et modulent la réponse immunitaire locale pour persister et se multiplier. Les lectines de type C, exprimées notamment par les cellules de l’immunité, régulent la réponse anti-cancéreuse, et donc le développement tumoral. Parmi elles, l'immunorécepteur des cellules dendritiques (DCIR), a été montré comme jouant un rôle immunitaire majeur au cours des maladies infectieuses et auto-immunes. À l’inverse, son rôle dans l'immunité tumorale reste méconnu. L'analyse des données transcriptomiques de deux cohortes de patients atteints de CCR a révélé un lien entre une expression élevée de DCIR et une meilleure survie des patients. Dans ce contexte, l'objectif principal de ma thèse était de déterminer l'impact de DCIR sur le développement du CCR et la réponse immunitaire associée. Dans ce but, j’ai établi un modèle murin préclinique, orthotopique et syngénique du CCR consistant en l'injection intracaecale de cellules tumorales MC38 exprimant la luciférase (MC38-fLuc+) dans des souris C57BL/6. Le suivi de la croissance tumorale par bioluminescence a montré que, malgré l’acquisition initiale de tumeurs solides par toutes les souris, seulement 30% des souris ont développé un CCR progressif et mortel, tandis que les autres animaux ont spontanément rejeté leurs tumeurs. Aucun rejet des tumeurs CCR MC38 n'a été observé en l'absence d'immunité adaptative, ni lors de l'injection de cellules MC38 dans d'autres sites anatomiques. L'immunophénotypage par transcriptomique et cytométrie de flux a révélé que les souris développant des tumeurs progressives présentaient une réponse immunitaire pro-tumorale, définie par une signature caractéristique des lymphocytes T régulateurs, détectable peu après l'implantation tumorale, et par une infiltration de cellules myéloïdes suppressives connues pour favoriser la croissance tumorale. En revanche, les souris rejetant les tumeurs présentaient une signature pro-inflammatoire précoce et un microenvironnement anti-tumoral enrichi en lymphocytes T CD8+. Ainsi, nos résultats démontrent un rôle du microenvironnement spécifique du côlon dans la régulation de l'équilibre entre les réponses immunitaires anti- ou pro-tumorales et souligne l'importance d'utiliser des modèles murins orthotopiques pour les études in vivo. Dans la seconde partie de ma thèse, j’ai utilisé ce modèle murin de CCR pour comparer le développement tumoral dans des souris C57BL/6 de type sauvage ou des souris déficientes pour l’expression de mDcir1 (mDcir1-KO), un homologue murin du DCIR humain. Bien que l'absence de mDCIR1 n'ait aucune incidence sur le pourcentage de souris développant ou rejetant les tumeurs du CCR, nous avons observé que les animaux mDcir1-KO développaient des tumeurs plus importantes que les sauvages En accord avec ce résultat, nous avons constaté une infiltration plus faible de lymphocytes CD8+ cytotoxiques et une activation moindre des lymphocytes T CD4+ et CD8+ (c'est-à-dire T-BET+, CD44haut, CTLA-4+) dans les tumeurs des souris mDcir1-KO par rapport aux souris sauvages. Ainsi, nos données indiquent un rôle protecteur et anti-tumoral de DCIR pendant le développement du CCR, probablement dû à une dérégulation de l'équilibre existant entre la tumeur et la réponse immunitaire. Dans l'ensemble, cette étude ouvre la voie à la mise au point éventuelle de biomolécules pharmacologiques ciblant DCIR pour déclencher une réponse immunitaire anti-tumorale efficace dans le contexte du CCR et au-delà
Colorectal cancer (CRC) is the third most common and second deadliest cancer worldwide accounting for 900.000 deaths in 2018. Consequently, there is a strong need for new biomarkers as well as an improvement of the current treatments. Tumors develop in complex microenvironments where cancer cells constantly crosstalk with, and modulate, the local immune response to persist and replicate. C-type lectins receptors, expressed in particular by immune cells, actively regulate the immune response to cancer cells and, therefore, tumor development. Dendritic cell immunoreceptor (DCIR), a C-type lectin expressed by myeloid cells, has been shown to play a major role in immunity to infectious and autoimmune diseases. Yet, the role played by DCIR in tumor immunity remains unknown. Analysis of publicly available transcriptomic data from two cohorts of CRC patients revealed an association between high DCIR gene expression and improved survival of patients. In this context, the principal objective of my PhD thesis was to determine the role played by DCIR in the immune response during CRC development. First, I developed an orthotopic syngeneic pre-clinical CRC mouse model consisting in the intra-caecal injection of engineered MC38 tumor cells expressing firefly luciferase (MC38-fLuc+) in C57BL/6 mice. Monitoring of the tumor growth by bioluminescence revealed that, despite an initial growth of solid tumors in all the mice, only 30% of mice developed a progressive lethal CRC, while the remaining animals spontaneously rejected their solid tumor and survived more than 100 days. No rejection of tumors was observed in the absence of adaptive immunity, nor when MC38-fLuc+ cells were injected in other anatomical locations (i.e., liver and skin). Immunophenotyping by transcriptomic and flow cytometry showed that mice with progressive CRC tumors exhibited a pro-tumor immune response, characterized by a regulatory T cell pattern, discernible shortly post-tumor implantation, as well as myeloid suppressor cells that are well-known to favor tumor growth. By contrast, tumor-rejecting mice presented an early pro-inflammatory response and an anti-tumor microenvironment enriched with CD8+ T cells. Taken together, our results demonstrate a preponderant role of the colon-specific microenvironment in regulating the balance between anti- or pro-tumor immune responses and underline the importance of using orthotopic mouse models for in vivo studies. In a second part of my thesis, we used this CRC mouse model to compare the tumor development in wild-type (WT) C57BL/6 mice or mice deficient for mDcir1 (mDcir1-KO), a murine homologue of human DCIR. While the lack of mDCIR1 has no impact on the percentage of mice developing or rejecting CRC tumors, we observed that mDcir1-KO animals developed bigger tumors than their WT counterparts. In line with this result, we found a lower infiltration of cytotoxic CD8+ and decreased activation of both CD4+ and CD8+ T cells (i.e., T-BET+, CD44high, CTLA-4+) in CRC tumors from mDcir1-KO mice compared to WT mice. Altogether, our data point to a protective and anti-tumor role of DCIR during CRC development, probably due to a dysregulation of the balance existing between the tumor and the immune response. Overall, this study paves the way for the potential future development of pharmacological biomolecules targeting DCIR to trigger an efficient anti-tumor immune response in the context of CRC and beyond

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Augustin, Jérémy. „Caractérisation du microenvironnement tumoral immunitaire des carcinomes hépatocellulaires réséqués“. Electronic Thesis or Diss., Sorbonne université, 2021. https://accesdistant.sorbonne-universite.fr/login?url=https://theses-intra.sorbonne-universite.fr/2021SORUS409.pdf.

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Les carcinomes hépatocellulaires (CHC) répondent mal à l’immunothérapie et leur environnement immun n’est pas bien caractérisé. Notre objectif était de faire le pont entre les aspects morphologiques, viraux et immuns et analyser leur impact sur la sensibilité à l’immunothérapie. Nous avons réalisé une analyse transcriptomique de l’environnement immun de 170 CHC: 23% d’étiologie virale B (VHB), 29% d’étiologie virale C (VHC), 16% d’étiologie métabolique, 17% d’étiologie alcoolique, 14% d’étiologie indéterminée. Nous avons corrélé les profils transcriptomiques aux données cliniques, morphologiques et virales (ARN prégénomique du VHB). Nous n’avons pas observé de différence globale dans l’environnement immun des CHC en fonction des étiologies, mais avons identifié 3 clusters du VHB donc aucun n’exprimait d’interféron-γ (contre 25% des CHC toutes étiologies confondues). Le Cluster 1, associé à une récurrence élevée, avait un profil immun ambivalent et chaud, surexprimait des marqueurs d’épuisement mais montrait morphologiquement une faible densité de lymphocytes T et était associé à la présence d’une transcription du VHB. Le Cluster 2, aussi associé à une récurrence élevée, était enrichi en sous-type macrotrabéculaire et avait profil immun froid. Le Cluster 3, de meilleur pronostic, était plus développé sur foie cirrhotique et montrait un niveau intermédiaire d’infiltration de cellules immunes, sans expression de marqueurs d’épuisement. En conclusion, nous montrons des spécificités immunes au sein des CHC liés à l’HBV, en relation avec des facteurs viraux transcriptionnels, et avec une portée pronostique
Hepatocellular carcinoma (HCC) shows globally low response to immunotherapy and HCC immune microenvironment is not well characterized. Our objective was to connect immune, viral and morphologic aspects of HCC and understand how they intervene in sensitivity to immune checkpoint blockade. In this study, we performed a transcriptomic analysis of onco-immune genes to characterize the tumor microenvironment of 170 HCC: 23% hepatitis B (HBV), 29% hepatitis C (HCV), 16% metabolic syndrome, 17% alcohol consumption related, and 14% of undetermined etiology. We correlated gene expression profiles with clinical, morphological and viral features. We did not observe difference of immune microenvironment at a global scale, between etiologies. But within HBV group, we identified 3 Clusters. None of of these clusters expressed ϒ-interferon (compared to 25% of HCC of all etiologies combined). Cluster 1 showed an ambivalent « hot » and exhausted profile with higher expression of exhaustion markers but lower densities of T lymphocytes by immunostaining. This Cluster was associated with HBV transcription and patients from this Cluster showed higher recurrence. Cluster 2 was enriched with macrotrabecular massive subtype and was immunologically “cold” and was also associated with higher recurrence. At last, Cluster 3 was developed much more on cirrhotic liver and showed an intermediate level of immune cells infiltration, with no marker of exhaustion. It was associated with lower recurrence. In conclusion we highlight viral related specificities within HBV HCC, associated with prognostic significance

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Rochefort, Juliette. „Le microenvironnement immunitaire des Carcinomes épidermoides de la cavité orale“. Thesis, Paris 6, 2017. http://www.theses.fr/2017PA066351/document.

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Les carcinomes épidermoïdes de la cavité orale (CECO) représentent environ 25% des cancers de la tête et du cou (HNSCC). Ils sont associés à un mauvais pronostic avec une survie à 10 ans n'excédant pas ~ 30%. Alors que le virus du papillome humain (HPV) est un facteur de risque reconnu dans les HNSCC, il n'est pas impliqué dans les CECO dont les principaux facteurs de risque sont liés à la consommation d'alcool et de tabac. Cependant, plusieurs auteurs notent une part croissante de CECO chez des patients non exposés à l’alcool et au tabac (facteurs de risque négatifs: RF-) et dont le statut HPV est négatif. Il est aujourd’hui reconnu que le microenvironnement immunitaire (TME) peut jouer un rôle majeur dans la progression et l'échappement tumoral. Dans notre travail, nous avons cherché à savoir si les CECO RF- sont épidémiologiquement différents des CECO RF+ (facteurs de risques positifs: RF+) et si la composition immunitaire du TME et des cellules circulantes diffère selon ces deux groupes. Ainsi, dans une première partie, nous avons étudié une cohorte rétrospective de 553 patients atteints de CECO et comparé les paramètres cliniques et épidémiologiques entre les patients RF+ et RF-. Ensuite, nous avons étudié de manière prospective par rapport aux facteurs de risque ces deux entités d'un point de vue immunitaire en analysant des échantillons de sang et de tissus de 87 patients et en les comparant à des échantillons de tissus et de sang de témoins sains. Notre travail a permis d'associer une hétérogénéité clinique à des profils immunologiques distincts pouvant prédire un pronostic différent pour les patients RF+ ou RF- : puisque les CECO sont des cancers inflammatoires présentant un important infiltrat de divers composants immunitaires innés, il s'est avéré que la numération sanguine des lymphocytes T CD8+ supérieure à 306 cellules/μL chez les RF- et des cellules T régulatrices (Treg) supérieure à 47 cellules/μL chez les patients RF+ ont respectivement été associées à une meilleure survie sans maladie (DFS). En revanche, un pourcentage plus élevé de cellules Th17 dans le sang ou le TME de patients RF+ a été associé à une moins bonne survie sans récidive (DFS). Dans une troisième partie de cette thèse, nous avons étudié la migration d'un sous-ensemble de Treg exprimant CCR2, (récepteur de chimiokine pour CCL2), et montré qu'une diminution des Treg CCR2+ circulants chez les patients atteints de CECO était associée à une augmentation des Treg CCR2+ dans le TME. Enfin, en étudiant les structures lymphoïdes tertiaires (TLS), décrites dans le TME de divers cancers solides mais très peu dans les CECO, nous avons confirmé qu’ils étaient présents dans ces cancers et que de fortes densités de TLS sont principalement associées aux stades précoces du cancer et sont des facteurs de bon pronostic
Oral squamous cell carcinomas (OSCC) represent about 25% of Head and Neck Cancer (HNSCC). They are associated with a very poor prognosis with a 10-year survival which not exceeds ~30%. While the Human Papilloma Virus (HPV) is a more recognized risk factor for oropharyngeal HNSCC, HPV is not involved in OSCC whose the main risk factors are related to the consumption of alcohol and tobacco. However, an increase of OSCC in patients who are not exposed to alcohol and tobacco (non-smoker-non-drinker: NSND) and whose the HPV status is negative is now reported. It is well known that immune tumor microenvironment (TME) may play a major role in tumor progression and tumor escape. Whether OSCC in NSND patients are epidemiologically different from OSCC occurring in smoker/drinker (smoker-drinker: SD) patients, and may have different immune composition of their TME and of circulating immune cells as well is addressed in this thesis. Thus in a first part, we studied a retrospective cohort of 553 OSCC patients and compared clinical and epidemiological parameters between NSND and SD patients. Then, we have prospectively studied in relation to risk factors these two entities from an immune point of view by analyzing blood and tissue samples from 87 patients and comparing them to tissue and blood samples from healthy controls (HD). Our work has allowed to associate this clinical heterogeneity with distinct immunological profiles that may predict different prognosis for NDNS or SD patients: since OSCC are inflammatory cancers presenting an important infiltrate of various innate immune components, it turned out that blood count of CD8+ T cells >306/µL in NSND and blood count of regulator T cells (Treg) >47/µL in SD patients were associated with a better disease free survival (DFS), respectively. By contrast, higher percentage of Th17 cells in the blood or TME from SD patients were associated with a bad DFS. In a third part of this thesis, we studied the migration of a Treg subset that expressed CCR2, a chemokine receptor for CCL2, and showed that a decrease of circulating CCR2+ Treg in OSCC patients was associated with an increase of CCR2+ Treg in the TME. Finally, by studying tertiary lymphoid structures (TLS) that have been described in the TME of various solid cancers but very few in OSCC, we confirmed that TLS are present in OSCC cancers and that high densities of TLS are mainly associated with early stages of cancer and are factors of good prognosis

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Kirilovsky, Amos. „Etude du microenvironnement des cancers colorectaux et implications pronostiques“. Paris 6, 2010. http://www.theses.fr/2010PA066460.

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Le microenvironnement des tumeurs colorectales est composé d’un infiltrat immunitaire important. Nous avons étudié in situ les interactions entre les systèmes de défense de l’hôte et le cancer par plusieurs techniques à haut débit. Nous avons observé une diminution de la réponse immunitaire adaptative associée à la progression tumorale (stade TNM et dissémination précoce) au centre de la tumeur (CT) et à la marge d’invasion (IM). Nous avons pu démontré que la baisse précède la survenue des métastases, du fait qu’une diminution est déjà présente lors d’étapes précoces de la dissémination que constituent l’invasion des vaisseaux sanguins et l’invasion péri-nerveuse. En revanche, l’invasion des ganglions de drainage semble précéder une diminution de l’infiltrat immunitaire du fait que seule une forte invasion est corrélée à une diminution de la densité de lymphocytes T. De façon intéressante, nous avons également observé qu’une forte densité de vaisseaux lymphatiques en IM était associée à l’absence d’envahissement local et à distance. Les vaisseaux lymphatiques pourraient drainer des antigènes dans les ganglions et entrainer une réaction immunitaire antitumorale. Sur un plan clinique, la prise en compte de la réaction immunitaire en CT et IM nous a permis de découvrir que le critère immunologique CD3 était indépendant et plus important que celui fournit par l’évaluation anatomopathologique de la tumeur pour la survie des patients. L’analyse combinée des densités de lymphocytes T effecteurs CD8+ et T mémoires CD45RO+ parmi les tumeurs localisées, pour lesquelles il n’existe pas de standard pour le traitement adjuvant, a permis d’identifier les patients à risque de rechute.

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Alamé, Melissa. „Intégration de données et caractérisation du microenvironnement tumoral de tumeurs rares“. Thesis, Montpellier, 2020. http://www.theses.fr/2020MONTT046.

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Le recueil des données issues des technologies de haut débit, et en particulier le séquençage de nouvelle génération (NGS) a largement contribué à la compréhension de la biologie des tumeurs et leurs classifications moléculaires, par notamment la caractérisation d’anomalies génétiques diagnostiques, pronostiques, ou ciblant les patients éligibles à certaines thérapeutiques (théranostique). Ces marqueurs du cancer ont intégré les panels d’analyses médicales existantes et promeuvent une médecine davantage personnalisée en oncologie.La compréhension de la contribution du microenvironnement tumoral (MET) dans la progression tumorale, et l’identification de mécanismes de résistance aux traitements, a révolutionné la biologie du cancer et la prise en charge des patients en oncologie. A l’ère des immunothérapies, la classification des tumeurs sur la base de la composition de leur MET a identifié des groupes de patients qui corrèlent avec la survie et la réponse à certains traitements. Ainsi, pour une majorité des cancers, une classification immunologique des tumeurs a été établie, complétant les classifications histologiques et moléculaires précédemment érigées. Malgré de considérables efforts, ces classifications immunologiques et moléculaires demeurent incomplètes. En particulier, certaines entités tumorales rares et agressives nécessitent une caractérisation approfondie. En outre, la majorité des études portant sur le MET se sont davantage concentrées sur l’étude de la composition cellulaire et semblent avoir négligé la cartographie des réseaux d’interactions intercellulaires des cancers. L’avènement des technologies basées sur la cellule unique répond à cet impair, mais se focalise essentiellement sur les cancers fréquents.Dans ma thèse, j’ai intégré différentes méthodes d’analyse de données et j’ai développé une nouvelle approche inférant des réseaux d’interactions ligand – récepteur, s’appuyant sur une base de données (LRdb), développée par l’équipe du Pr Colinge, pour caractériser le MET de deux tumeurs rares, les carcinomes canalaires de la glande salivaire et les lymphomes B diffus à grandes cellules B primitifs du SNC.La combinaison de méthodes bioinformatiques et d’analyses statistiques multivariées classiques et avancées, m’a permis d’intégrer des données de transcriptomique totale et de protéomique provenant d’échantillons frais et de données TCGA. Les techniques informatiques utilisées ont été complétées par des technologies d’immunomarquage couplées à de l’analyse d’images digitales afin de recueillir des validations expérimentales.D’importants efforts ont été déployés pour placer nos résultats dans une perspective clinique. En particulier, cette approche a permis d’identifier des groupes de MET d’intérêt clinique, des mécanismes d’évasion immune et de résistance à certains traitements, de nouveaux axes thérapeutiques, et des biomarqueurs
The development of high-throughput technologies, especially Next Generation Sequencing, has triggered considerable advances in tumor understanding and molecular classification. Patient subgroups for a same tumor have been defined and characterized. Those subgroups are typically associated with a particular prognosis or eligible to a specific targeted therapy. These progresses paved the way towards personalized medicine.The understanding of the contribution of the tumor microenvironment (TME) to disease aggressiveness, progression, and therapy resistance is another revolution in cancer biology and patient care. The contribution of the aforementioned high-throughput technologies was essential. At the era of immunotherapy, the sub-classification of tumors based on their TME composition identified patient subgroups correlated to survival and to their response to this particular class of drugs. Despite a formidable community effort, the molecular and immunological classification of tumors has not been completed for every cancer, some rare and aggressive entities still require thorough characterization. Moreover, most TME studies have focused on the cellular composition and they neglected the mapping of the intercellular communications networks occurring in neoplasms. The advent of single-cell technologies is filling this gap, but with a strong focus on the most frequent cancers.In my thesis, I have both deployed advanced data integration methods and a novel approach to infer ligand-receptor networks relied on a database (LRdb), which is developed by the Colinge Lab, to characterize the TME of two rare tumors, Salivary Duct Carcinoma (SDC) and Primary Central Nervous System Diffuse Large B-Cell Lymphoma (PCNSL). I have combined classical – yet advanced – bioinformatic and multivariate statistics methods integrating bulk transcriptomics and proteomics data, including fresh and TCGA data. Those computational techniques were supplemented with immunofluorescence and immunohistochemistry coupled with digital imaging to obtain experimental validations. To accommodate limited patient cohorts, I have searched for highly coherent messages at all the levels of my analyses. I also devoted important efforts relating our findings with the literature to put them in a clinical perspective. In particular, our approach revealed TME groups of tumors with particular prognosis, immune evasion and therapy resistance mechanisms, several clinical biomarkers, and new therapeutic perspectives

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L'Hermitte, Antoine. „Rôle de LECT2 dans le microenvironnement immunitaire au cours de la cancérogènese hépatique“. Thesis, Université Paris-Saclay (ComUE), 2016. http://www.theses.fr/2016SACLS360/document.

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Le carcinome hépatocellulaire (CHC) est la deuxième cause de mortalité par cancer dans le monde. Plusieurs études attestent du rôle du microenvironnement tumoral (MET) comme acteur fondamental de la carcinogenèse. A l’aide de modèles murins mimant un sous groupe de CHC fréquent, notre équipe avait identifié la molécule LECT2 comme un effecteur moléculaire important du MET dans le contrôle de l’agressivité tumorale.L'objectif de ma thèse a été d’adresser le rôle fonctionnel de LECT2 dans le microenvironnement immunitaire au cours du CHC.A l’aide de modèles murins, nous observons que l’absence de LECT2 entraine une accumulation importante de cellules myéloïdes dans le MET. Nous montrons que ces cellules myéloïdes sont immatures, arborent des capacités immunosuppressives puissantes vis-à-vis des lymphocytes T et ont un programme transcriptionnel permettant une action promotrice de tumeurs. De façon intéressante, l’accumulation de ces acteurs dans le microenvironnement est associée à l’émergence de nodules tumoraux indifférenciés exprimant des marqueurs de transition épithélio-mésenchymateuse/cellules progénitrices/métastases.D’un point de vue mécanistique, nous avons démontré une perte de différenciation plus importante des hépatocytes en absence de LECT2 dans des conditions d’activation de la signalisation β-caténine. Nous montrons également par des expériences de co-culture que les cellules myéloïdes infiltrant les tumeurs en absence de LECT2 ont une forte capacité à induire une perte de différenciation des hépatocytes.Enfin, nous avons analysé l'expression de LECT2 dans une vaste cohorte d’échantillons humains de CHC. Nous montrons que la diminution d’expression de LECT2 corrèle fortement avec 1)- la présence d’invasion vasculaire, 2)- la perte de différenciation des hépatocytes tumoraux et 3)- la présence d’infiltrats inflammatoires.L’ensemble de ces données démontre que LECT2 agit comme un régulateur essentiel dans la cancérogénèse hépatique à travers son action double sur les hépatocytes et sur la fonction des cellules myéloïdes infiltrant les tumeurs. Ainsi, ces travaux identifient LECT2 comme un biomarqueur potentiel ouvrant de nouvelles perspectives de traitement du CHC
Hepatocellular carcinoma (HCC) is the second cause of cancer-rel ated death worldwide. Several studies highlighted the tumor microenvironment (TEM) as a key player in cancer from initiation to progression steps of tumorigenesis. Using relevant HCC mouse models, our team identified the chemokine-like LECT2 as a critical actor of liver TEM in the control of tumor aggressiveness.The aim of my thesis was to address functionally the role of LECT2 in the immune microenvironment during HCC.Using mouse models, we observed that the absence of LECT2 induces a significant accumulation of myeloid cells in the TEM. We showed that these myeloid cells were immature, harbored strong immunosuppressive capabilities on T cells and expressed a transcriptional program sustaining tumor progression. Interestingly, the accumulation of these actors in the microenvironment is associated with the emergence of poorly differentiated tumor nodules expressing epithelial-to-mesenchymal transition / progenitor / metastasis markers.Mechanistically, we demonstrated that LECT2-deficient hepatocytes in the context of β-catenin activation were able to perform EMT like WT hepatocytes do after TGF-β1 challenge. In co-culture experiments, we demonstrated that tumor-infiltrating myeloid cells in the absence of LECT2 have a strong ability to induce hepatocyte EMT.Finally, we analyzed the expression of LECT2 in a vast cohort of HCC liver samples and found that downregulation of LECT2 expression strongly correlates with 1) - the presence of vascular invasion, 2) – histological grade and 3) - the presence of inflammatory infiltrates.Altogether, our data demonstrate that LECT2 acts as a strong regulator of liver tumor aggressiveness through its dual action on hepatocytes and impact on the function of tumor infiltrating myeloid cells. This work identifies LECT2 as a new biomarker for HCC and pave the way to new therapeutic strategies

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Canonici, Alexandra. „Effet du microenvironnement sur les molécules d'adhérenceRôle dans la migration cellulaire“. Aix-Marseille 1, 2009. http://www.theses.fr/2009AIX11032.

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Les facteurs du microenvironnement modulent la migration en modifiant la capacité d'adhérence des cellules à la MEC et aux cellules voisines, grâce aux intégrines et aux cadhérines. Les objectifs de cette thèse ont été d'étudier l'impact de l'IGF-I et de Saccharomyces boulardii sur la migration. Nous avons mis en évidence que la E-cadhérine, l'IGF-IR et l'intégrine alpha v forment un complexe sous le contrôle de la alpha-caténine, in vitro et ex vivo. Nous avons également pu observer que l'IGF-I déstabilise le complexe. Ceci induit la migration des cellules sur vitronectine. De plus, des résultats préliminaires montrent que les radeaux lipidiques sont impliqués dans la migration et dans le contrôle des jonctions intercellulaires. Ces microdomaines membranaires pourraient donc jouer un rôle dans la perturbation du complexe E-cadhérine/IGF-IR/intégrine alpha v. Nous avons montré que le surnageant de S. Boulardii accélère la migration des cellules épithéliales coliques. Nous avons également pu déterminer que S. Boulardii module l'adhérence des cellules sur vitronectine et sur collagène de type I. La modification de ces propriétés adhésives explique sans doute l'accélération de la migration. Par ailleurs, nous avons mis en évidence que S. Boulardii diminue la perméabilité cellulaire, suggérant que S. Boulardii peut aussi agir sur les contacts intercellulaires. L'ensemble de ces travaux montre que le microenvironnement cellulaire peut moduler la migration, et ainsi affecter la restitution intestinale et la progression tumorale. Une meilleure compréhension de ces mécanismes permettrait d'identifier de nouvelles molécules en traitement des MICI ou du cancer colique.

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Castells, Magali. „Implication du microenvironnement dans la progression tumorale ovarienne“. Toulouse 3, 2012. http://www.theses.fr/2012TOU30099.

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Le cancer ovarien est rare (moins de 5000 cas par an en France) mais au pronostic sombre dû à une résistance élevée aux traitements de chimiothérapie. Plusieurs axes de recherche ont été développés pour répondre à cette problématique notamment l'étude du rôle du microenvironnement dans la néoangiogénèse tumorale et dans l'acquisition de la chimiorésistance par les cellules tumorales. Je me suis plus particulièrement focalisée sur les Hospicells, cellules péritonéales qui ont été isolées à partir d'ascites de patientes atteintes de cancer des ovaires de stade III. Préalablement, le laboratoire avait montré que les Hospicells sont capables de favoriser la croissance tumorale in vivo via une potentialisation de l'angiogénèse. J'ai mis en évidence que les Hospicells seules ne sont pas capables d'induire la néoangiogénèse tumorale in vitro mais qu'in vivo, elles induisent le recrutement de macrophages, cellules pro-angiogéniques au niveau de xénogreffes de cellules tumorales/Hospicells. Il a été montré précédemment que les Hospicells sont impliquées dans l'acquisition de la chimiorésistance des cellules cancéreuses via, entre autres, l'échange membranaire de pompes d'efflux. J'ai pour ma part mis en évidence que des molécules sécrétées par les Hospicells induisent également la chimiorésistance des cellules cancéreuses ovariennes sans contact direct. J'ai montré dans ce modèle une inhibition partielle de l'apoptose résultant notamment d'une modification de la signalisation apoptotique dans les cellules cancéreuses ovariennes, se traduisant par la diminution de l'activation des caspases effectrices 3 et 7
Ovarian cancer is rare but has a bad prognosis due to a high level of chemoresistance to the reference treatment, carboplatin. We focused on the role of the microenvironment in ovarian cancer progression. The team previously demonstrated that Hospicells are able to potentialize tumour growth and angiogenesis in vivo. My aim was to determine how Hospicells interact with tumoral cells and other microenvironment partners to promote cancer proliferation. I showed that Hospicells alone cannot induce tumoral neoangiogenesis in vitro and they promote macrophage recruitment in tumours and enhance the synthesis of several cytokines involved in angiogenesis (IL-6, IL-8 and VEGF) through macrophages. Hospicells are also involved in chemoresistance acquisition via membrane exchange and efflux pumps transfer. This original mechanism working through direct contact between cells is probably not the only one responsible for this chemoresistance. Indeed, I showed that molecules secreted by Hospicells can also induce ovarian cancer cells chemoresistance. In order to identify the mechanism through which ovarian cancer cells can become chemoresistant under microenvironment stimulation, I studied the role of Hospicells in apoptosis protection after carboplatin treatment. Hospicells conditioned medium can partially inhibit apoptosis by apoptotic signalling pathway modifications and notably a decreased activation of effector caspases (caspases 3 and 7)

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Foy, Pierre-Emmanuel. „Conséquences des infections virales respiratoires sur le microenvironnement tumoral pulmonaire“. Electronic Thesis or Diss., Sorbonne université, 2024. https://accesdistant.sorbonne-universite.fr/login?url=https://theses-intra.sorbonne-universite.fr/2024SORUS044.pdf.

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Le cancer bronchique, ou pulmonaire, est la première cause de décès dans le monde par cancer. Le traitement repose sur la chirurgie, quand la tumeur est résécable, et sur un traitement adjuvant associant généralement la chimiothérapie à la radiothérapie, l'immunothérapie ou les thérapies ciblées.Les patients atteints de cancer du poumon non à petites cellules (CBNPC) sont fréquemment exposés à des infections virales telles l'Influenza A (IAV) ou le SARS-CoV-2. Le microenvironnement tumoral (MET) est un écosystème complexe et hétérogène qui conditionne la croissance des cellules tumorales, la réponse aux traitements et la survie des patients. L'infection du MET par un virus représente une perturbation qui peut impacter l'évolution tumorale. Dans la cellule infectée, l'ARN viral est reconnu par des senseurs viraux, incluant TLR7, conduisant à la production d'interféron de type I (IFN-I) et l'expression d'ISG (Interferon-Stimulated-Genes).Récemment, notre équipe a démontré que l'infection par l'IAV de souris porteuses de tumeurs pulmonaires entraîne une accélération de la croissance tumorale dépendante des senseurs viraux. De plus, l'IAV induit l'expression d'une signature transcriptomique composé de gène impliqué dans le métabolisme de détoxification des médicaments et associé à la chimiorésistance que nous avons appelé « signature REVIS-DM ». Cette découverte suggère que l'IAV induit une chimiorésistance impliquant la détoxification des xénobiotiques.Chez les patients CBNPC, la co-expression de la signature REVIS-DM et d'une signature ISG confère un mauvais pronostic aux patients. In-vitro, nous avons confirmé que l'infection de lignées tumorales CBNPC induit une résistance spécifique aux sels de platine et l'expression de gènes codant pour des enzymes du métabolisme des médicaments. In-vivo, nous avons confirmé que l'infection par l'IAV induit une chimiorésistance au Cisplatine. De plus, nous avons constaté que l'infection par l'IAV entraîne une augmentation de l'invasion à partir d'un modèle de culture 3D, en lien avec l'initiation de l'EMT. Nos prochains travaux vont porter sur les mécanismes conduisant à la chimiorésistance et l'invasion par les cellules infectées. De nombreux éléments de la littérature ont permis d'apporter des hypothèses, notamment l'implication du stresse oxydatif, des senseurs viraux et des ISG.En parallèle, nous avons étudié les conséquences du SARS-CoV-2 sur le MET et si l'infection par le virus induit des modifications de l'immunité anti-tumorale. En effet, le COVID-19 a été associé à de fortes perturbations immunitaires telles que l'inflammation et une lymphopénie. Dans le cadre du cancer, ces phénomènes pourraient entraîner une modification de l'immunité anti-tumorale et donc de la progression tumorale. Pour répondre à ces questions, nous avons réalisé une étude du MET de patients CBNPC ayant contracté le COVID-19 en utilisant deux technologies : le RNAseq et l'immunohistochimie multiplex. Enfin, nous avons réalisé l'infection ex-vivo de fragments de tumeurs en culture afin d'étudier l'impact direct du virus sur le MET.Les conséquences des virus respiratoires sur le MET pulmonaire sont peu documentées. Ainsi, notre étude apporte un éclairage nouveau sur les liens qu'il existe entre la cellule tumorale et les virus de l'environnement
Lung cancer is the world's leading cause of cancer-related death. Treatment is based on surgery, when the tumor is resectable, and adjuvant therapy, generally combining chemotherapy with radiotherapy, immunotherapy or targeted therapies.Patients with non-small cell lung cancer (NSCLC) are frequently exposed to viral infections such as Influenza A (IAV) or SARS-CoV-2. The tumor microenvironment (TME) is a complex, heterogeneous ecosystem that conditions tumor cell growth, treatment response and patient survival. Infection of the TME by a virus represents a disruption that can impact tumor progression. In the infected cell, viral RNA is recognized by viral sensors, including TLR7, leading to the production of type I interferon (IFN-I) and the expression of ISG (Interferon-Stimulated-Genes).Recently, our team demonstrated that IAV infection of lung tumor-bearing mice results in viral sensor-dependent acceleration of tumor growth. Furthermore, IAV induces the expression of a transcriptomic signature composed of genes involved in drug detoxification metabolism and associated with chemoresistance, which we have termed the "REVIS-DM signature".This finding suggests that IAV induces chemoresistance involving xenobiotic detoxification.In NSCLC patients, co-expression of the REVIS-DM signature and an ISG signature confers a poor prognosis. In-vitro, we confirmed that infection of NSCLC tumor lines induces specific resistance to platinum salts and expression of genes encoding drug metabolizing enzymes. In-vivo, we confirmed that IAV infection induces chemoresistance to Cisplatin. Furthermore, we found that IAV infection leads to increased invasion from a 3D culture model, in connection with EMT initiation. Our future work will focus on the mechanisms leading to chemoresistance and invasion by infected cells. A number of hypotheses have been put forward in the literature, including the involvement of oxidative stress, viral sensors and ISGs.In parallel, we investigated the consequences of SARS-CoV-2 on MET and whether infection with the virus induces changes in anti-tumor immunity. Indeed, COVID-19 has been associated with strong immune disturbances such as inflammation and lymphopenia. In the context of cancer, these phenomena could lead to altered anti-tumor immunity and hence tumor progression. To answer these questions, we conducted a MET study of NSCLC patients infected with COVID-19 using two technologies: RNAseq and multiplex immunohistochemistry. Finally, we performed ex-vivo infection of tumor fragments in culture to study the direct impact of the virus on the MET.The impact of respiratory viruses on pulmonary MET is poorly documented. Our study sheds new light on the links between tumor cells and environmental viruses

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Atsou, Kokou Kevin. „Modélisation mathématique des interactions tumeurs-système immunitaire : phase d'équilibre et d'échappement“. Thesis, Université Côte d'Azur, 2020. http://www.theses.fr/2020COAZ4101.

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Les récents succès de l'immunothérapie pour le traitement du cancer ont mis en évidence l'importance des interactions entre les cellules tumorales et les cellules immunitaires. Cependant, ces interactions reposent sur des mécanismes extrêmement complexes, ce qui rend difficile la conception de traitements efficaces visant à renforcer la réponse immunitaire. Par conséquent, les modèles mathématiques décrivant la croissance tumorale sont nécessaires pour reproduire et prédire fidèlement la dynamique spatio-temporelle de ces interactions. Le but de cette thèse est de proposer un modèle mathématique de croissance tumorale, décrivant l'interaction de la tumeur avec les cellules immunitaires. Pour ce faire, nous avons commencé par introduire un modèle mathématique destiné à décrire au moyen d'un système d'équations aux dérivées partielles les premières étapes des interactions entre les cellules immunitaires effectrices et les cellules tumorales. Le modèle est structuré en taille et en espace, et il prend en compte la migration des cellules effectrices cytotoxiques spécifiques de l'antigène tumoral vers le micro-environnement tumoral via un mécanisme chimiotactique. Nous avons étudié sur des bases numériques le rôle des paramètres clés du modèle tels que la division et les taux de croissance des cellules tumorales, ainsi que les taux de conversion et de mortalité des cellules immunitaires. Nos principales conclusions sont doubles. Premièrement, le modèle présente un contrôle possible de la croissance tumorale par la réponse immunitaire; néanmoins, le contrôle n'est pas complet en ce sens que les états d'équilibre asymptotiques conservent des tumeurs résiduelles et des cellules immunitaires activées. Deuxièmement, les hétérogénéités spatiales de la source des cellules immunitaires peuvent réduire considérablement l'efficacité de la dynamique de contrôle, faisant apparaître des schémas de rémission-récurrence. Par suite, nous avons développé des méthodes numériques pour prédire les paramètres des états d'équilibre sans exécuter des simulations du problème d'évolution. En utilisant des méthodes d'analyse de sensibilité globale, nous avons étudié le rôle des paramètres du modèle et identifié un impact prédominant du système immunitaire sur le taux de division des cellules tumorales. Nous avons montré que les meilleures stratégies thérapeutiques consistaient à augmenter la force de l'action létale des cellules immunitaires sur les cellules tumorales et le taux de conversion des cellules immunitaires naïves en cellules effectrices. Nous avons ensuite validé cette méthode à l'aide d'analyses rétrospectives expérimentales et cliniques. Ces résultats peuvent être utilisés dans le traitement du cancer pour concevoir des combinaisons thérapeutiques optimisées. Enfin, nous avons introduit un modèle mathématique destiné à décrire la double nature de la réponse immunitaire, avec l'activation de mécanismes à la fois anti-tumoraux et pro-tumoraux. La compétition entre ces effets antagonistes conduit soit à des phases d'équilibre, soit à des phases d'échappement. Ce modèle est utilisé pour étudier l'efficacité des stratégies d'immunothérapie comparant l'effet des monothérapies à l'effet la combinaison de thérapies. Les résultats ont indiqué que la combinaison de stratégies d'immunothérapie est plus efficace pour contrôler la croissance tumorale mais le succès du traitement est fortement conditionné par une combinaison appropriée entre la dose du traitement et le temps d'administration du traitement
The recent successes of immunotherapy for the treatment of cancer has highlighted the importance of the interactions between tumor cells and immune cells. However, these interactions are based on extremely complex mechanisms, making it difficult to design an effective treatment aimed at strengthening the immune response. Therefore, the mathematical models of tumor growth are needed to faithfully reproduce and predict the spatio-temporal dynamics of tumor growth. The aim of this thesis is to propose a mathematical model for tumor growth, describing the interaction of the tumor with the immune cells. We started by introducing a mathematical model intended to describe by means of a system of partial differential equations the earliest stages of the interactions between effector immune cells and tumor cells. The model is structured in size and space, and it takes into account the migration of the tumor antigen-specific cytotoxic effector cells towards the tumor micro-environment by a chemotactic mechanism. We investigated on numerical grounds the role of the key parameters of the model such as the division and growth rates of the tumor cells, and the conversion and death rates of the immune cells. Our main findings were two-fold. Firstly, the model exhibits a possible control of the tumor growth by the immune response; nevertheless, the control is not complete in the sense that the asymptotic equilibrium states keep residual tumors and activated immune cells. Secondly, space heterogeneities of the source of immune cells can significantly reduce the efficiency of the control dynamics, making patterns of remission-recurrence appear. Next, we developed numerical methods to predict the parameters of the equilibrium states without running simulations of the evolution problem. By using global sensitivity analysis methods, we investigated the role of the parameters of the model and identified a predominant impact of the immune system over division rate of tumor cells. We showed that the best therapeutic strategies were to increase the strength of the lethal action of immune cells on tumor cells and the conversion rate of naive immune cells into effector cells. We then validated this method using retrospective experimental and clinical analyses. These findings can be used in cancer treatments to design optimized therapy combinations. Finally, we introduced a mathematical model intended to describe the dual nature of the immune response, with the activation of both anti-tumor and pro-tumor mechanisms. The competition between these antagonistic effects leads to either equilibrium or escape phases. This model is used to investigate the efficacy of immotherapy strategies comparing the effect of monotherapies to the effect of combination of therapies. The findings indicated that combination of immunotherapy strategies are more efficient in controling tumor growth but the success of the treatment is strongly conditionned by the administrated dose and the time of the treatment administration

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Camus, Matthieu. „Etude des paramètres immunologiques du microenvironnement tumoral associés au pronostic des patients atteints de cancers colorectaux“. Paris 6, 2008. http://www.theses.fr/2008PA066020.

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Dans ce travail de thèse, j’ai pu démontrer le rôle des réponses immunitaires adaptatives cytotoxiques de type 1 (Th1), assurées par les lymphocytes T (LT) et notamment par les LT CD8+ cytotoxiques, dans le contrôle de l’invasion métastatique précoce dans les cancers colorectaux. La forte densité des LT mémoires CD45RO+ au sein des tumeurs primaires est associée à un pronostic favorable chez les patients étudiés. La densité, l’organisation et la coordination spatiale des facteurs cellulaires et moléculaires impliqués dans les réponses Th1 sont associées au devenir clinique des patients. Enfin, nous avons mis en évidence une altération progressive des réponses immunitaires antitumorale au cours du développement des cancers colorectaux. L’ensemble de nos résultats suggère que la prise en compte des paramètres immunologiques apporte un complément d’information crucial pour l’établissement du pronostic des patients atteints de cancer colorectaux.

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Raynaud, Adeline. „Développement d'anticorps basés sur des anticorps à domaine unique à des fins d'immunomodulation du microenvironnement“. Thesis, Aix-Marseille, 2019. http://www.theses.fr/2019AIXM0175.

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Le caractère invasif d’un cancer est déterminé non seulement par le génotype des cellules tumorales, mais aussi par le dialogue cellules tumorales/environnement extracellulaire qui participe à la mise en place d’un environnement immunosuppresseur. De nouvelles stratégies d’immunothérapie visant des points de contrôle de l’activation lymphocytaire par le biais d’anticorps dits immunomodulateurs ont récemment révolutionné les approches thérapeutiques pour certains cancers. Ces anticorps ont pour objectif de bloquer des points de contrôles inhibiteurs ou au contraire de stimuler des points de contrôle activateurs afin de réinstaurer une réponse anti-tumorale efficace. Ces stratégies qui ciblent principalement les cellules T ont permis d’obtenir des résultats remarquables dans le traitement de différents types de cancers mais présentent certaines limites. Moduler l’activité de cellules immunitaires innées, notamment les cellules NK, constitue une piste particulièrement prometteuse. Dans ce contexte, le but ce projet de thèse a consisté à développer de nouveaux formats d'anticorps immunomodulateurs ciblant le récepteur activateur NKG2D exprimé par différentes populations de cellules (NK, TCD8+, NKT, et Tγδ) et possédant un rôle majeur dans l’immunosurveillance des cancers. Les formats d’anticorps créés sont constitués de fragments d’anticorps à domaine unique dérivés de camélidés séléctionnés grâce à la technologie de phage display. Les molécules générées ont été caractérisées pour leurs propriétés de liaison à NKG2D et pour leurs capacités à activer et recruter des cellules NK au travers de différents tests fonctionnels in-vitro
Invasiveness of a cancer is determined not only by the genotype of the tumor cells, but also by the tumor cell/extracellular environment dialogue that contributes to the establishment of an immunosuppressive environment and tumor escape. New immunotherapy strategies targeting checkpoints of lymphocyte activation using immunomodulatory antibodies have recently revolutionized therapeutic approaches for some cancers. These antibodies aim to block inhibitory checkpoints (PD-1 / PD-L1, CTLA-4) or, on the contrary, to stimulate activating checkpoints (4-1BB, OX40) in order to reinstate an effective anti-tumor response. These immunomodulation strategies that primarily target effector T cells have achieved remarkable results in the treatment of different types of cancer but have certain limitations. Modulating the activity of innate immune cells, especially NK cells, is a particularly promising approach. In this context, the goal of this thesis project in collaboration with the pharmaceutical company Sanofi was to develop new formats of immunomodulatory antibodies targeting the NKG2D activating receptor expressed by different cell populations (NK, TCD8+, NKT, and Tγδ) with a major role in the immunosurveillance of cancers. Our antibodies (Fab-Like) consist of the human CH1 and CL domains as a natural motif of heterodimerization and single-domain antibody fragments derived from camelids selected using phage display. Bivalent (NKG2DxNKG2D) and bispecific (NKG2DxHER2) molecules generated were characterized for their NKG2D binding properties and their ability to activate and recruit NK cells through various in vitro functional assays

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Fernandes, Julien. „Etude de la formation d'agrégats multicellulaires de carcinomes ovariens et du remodelage du microenvironnement tumoral“. Cergy-Pontoise, 2010. http://biblioweb.u-cergy.fr/theses/2010CERG0457_diff.pdf.

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Les adénocarcinomes ovariens dérivent de la transformation maligne de l’épithélium ovarien de surface, et se développent et se propagent au sein de différents microenvironnements. Les cellules transformées peuvent s’exfolier à partir de la surface de l’ovaire et former des agrégats multicellulaires appelés «sphéroïdes». Leur dissémination implique l’interaction « physique » des cellules cancéreuses ovariennes entre elles, leur permettant de survivre «en suspension» au sein de l’ascite, mais également, l’interaction des cellules avec un microenvironnement matriciel lors de leur réimplantation sur le tissu sain. Le travail de thèse contribue à une meilleure compréhension des mécanismes moléculaires impliqués lors des interactions au sein d’agrégats multicellulaires tumoraux ainsi que lors de leur implantation. Le rôle du système adhésif composé de la vitronectine et de son récepteur, les intégrines αv, ainsi que celui de la fibronectine ont plus particulièrement été appréhendé
The ovarian adenocarcinomas derive from the malignant process of the epithelium ovarian surface, and develop and propagate within various microenvironments. The transformed cells can exfoliate from the ovarian surface form multicellular aggregates called “spheroids”. Their dissemination involves the “physical” interaction of the ovarian cancer cells between them, allowing them to survive “in suspension” within the ascite, but also, the interaction of cells with a matrix microenvironment during their reimplantation on healthy tissue. The work of this thesis contributes to a better understanding of the molecular mechanisms involved during the interactions within tumoral multicellular aggregates as well as during their dissemination. The role of the adhesive system consisted of the vitronectine and his receptor, integrin αv, as well as that of the fibronectine were more particularly studied

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Sulpice, Laurent. „Rôle du microenvironnement dans la progression du cholangiocarcinome intrahépatique : mécanismes moléculaires impliqués et recherche de biomarqueurs pronostiques“. Thesis, Rennes 1, 2014. http://www.theses.fr/2014REN1B001/document.

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Le but de ce travail était de rechercher le rôle du microenvironnement dans la progression tumorale du cholangiocarcinome intrahépatique (CCIH) par une approche translationnelle, associant recherche fondamentale et clinique. Une étude transcriptomique du stroma tumoral a permis de mettre en évidence une signature spécifique de celui-ci, dont l’analyse non supervisée montrait un enrichissement dans les gènes de la matrice extracellulaire, du cycle cellulaire, de la voie TGFβ et des marqueurs de cellules souches. Ces résultats ont été validés au niveau protéique par immunohistochimie sur tissue microarrays à partir d’une cohorte indépendante. La corrélation de ces résultats avec les données cliniques a permis de démontrer que le niveau d’expression de l’Osteopontin dans le stroma était un facteur de risque indépendant de récidive et de survie. Par ailleurs, nous avons démontré que le taux sérique d’Osteopontin préopératoire des patients porteurs d’un CCIH était significativement supérieur à celui de sujets sains. Avec un seuil déterminé à 57,8 ng/ml, la sensibilité et spécificité de ce biomarqueur diagnostique était respectivement de 80 et 100%. De plus, nous avons apporté des arguments supplémentaires concernant le rôle des cellules souches cancéreuses dans la progression du CCIH, en mettant en évidence une corrélation entre le niveau d’expression de marqueurs souches tels qu’EpCAM et CD44 dans le stroma tumoral ainsi que dans le tissu fibreux du foie « sain » péri-lésionnel et le risque de récidive. Les résultats de notre étude ont confirmé le rôle central du microenvironnement dans la progression du CCIH, permis de mettre en évidence 2 nouveaux biomarqueurs pronostiques, et ouvert de nouvelles voies de recherche thérapeutiques
The aim of this study was to specifically determine through a translational approach combining basic and clinical research, the role of the microenvironment in the tumor progression of intrahepatic cholangiocarcinoma (ICC). By gene expression profiling, we identified a signature that significantly discriminate the tumor stroma from non-tumor fibrous tissue, and the functional analysis of differentially expressed genes showed an enrichment in genes of the extracellular matrix , the cell cycle, the TGFb pathway and stem cell markers. Tissue microarray analysis using an independent cohort of ICC patients validated at a protein level the increased expression of selected candidate genes. Statistical analysis between basic and clinical data demonstrated that the stromal expression of Osteopontin was an independent prognostic marker for overall and disease-free survival. We also demonstrated that the preoperative serum level of Osteopontin was significantly higher in ICC patients than in healthy subjects. Our results identified the best diagnostic threshold to 57,8 ng/ml, associated with a sensitivity and specificity reaching to 80 and 100%, respectively. Moreover, we showed that level expression of stem cell markers such as EpCAM and CD44 in tumor stroma as well as in the fibrous non tumor liver tissue was correlated with recurrence, suggesting the pivotal role of cancer stem cells in ICC prognosis. In conclusion, our study confirmed the major involvement of the microenvironment in the progression of CCIH, allowed to identify two new prognostic tumor biomarkers, and highlighted new pathways for targeted therapeutics

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Lopès, Amélie. „Infection chronique par les souches Escherichia coli colibactine-positives : impacts sur le micro-environnement immunitaire colique dans le contexte du cancer colorectal“. Thesis, Université Clermont Auvergne‎ (2017-2020), 2018. http://www.theses.fr/2018CLFAS006/document.

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L’implication du microbiote intestinal dans le développement du cancer colorectal (CCR) et dans la réponse aux traitements anti-cancéreux est de plus en plus évidente. Plusieurs études indépendantes ont montré que la muqueuse intestinale de patients atteints de CCR est anormalement colonisée par des souches d’Escherichia coli pouvant présenter des propriétés invasives et ayant acquis des facteurs de virulence. Plus de la moitié de ces souches sont porteuses de l’îlot pks responsable de la synthèse d’une génotoxine : la colibactine, qui peut interférer directement avec l’ADN ou avec le cycle cellulaire des cellules de l’hôte, et générer des mutations. Plusieurs études indépendantes sur différents modèles animaux de CCR ou sur lignées cellulaires ont décrit d’autres mécanismes d’action de ces bactéries qui pourraient jouer un rôle dans la carcinogenèse colique : interactions avec le système immunitaire et l’inflammation et induction de la sénescence cellulaire qui s’accompagne de la libération de facteurs de croissance ayant un effet pro-tumoral sur les cellules épithéliales. Cependant, faute de lien entre ces études physiopathologiques parcellaires, l’étude de l’association des bactéries E. coli avec le CCR doit être poursuivie. Le but de ces travaux de thèse était de préciser l’effet d’une infection chronique par E. coli colibactine-positive, notamment sur le micro-environnement immunitaire colique et son implication sur la carcinogenèse colique, et sur l’efficacité anti-tumorale d’une stratégie d’immunothérapie ciblant le checkpoint immunologique PD-1. Afin d’étudier les interactions microbiote-système immunitaire-hôte, nous avons choisi de travailler sur le modèle APCMin/+, modèle murin de référence du CCR. Dans un premier temps, nous avons développé et validé une nouvelle méthode pour quantifier les cellules immunitaires dans le côlon de ce modèle. Cette méthode, basée sur des marquages immunofluorescents et une analyse numérique d’image dotée d’un apprentissage automatique (dit « machine learning »), nous a permis de distinguer, quantifier et localiser ces cellules dans trois compartiments d’intérêt d’une section colique entière : la muqueuse, les follicules lymphoïdes et les tumeurs. Après validation, cette méthode d’imagerie nous a permis d’obtenir une analyse précise de l’environnement immunitaire colique dans le modèle de souris APCMin/+ chroniquement infectées par une souche E. coli colibactine positive isolée d’une muqueuse de patients CCR. Nous avons montré in vivo que cette bactérie induit un environnement pro-carcinogène dépendant de la présence de la colibactine, avec une augmentation de populations pro-inflammatoires telles que les neutrophiles et d’enzyme pro-inflammatoire (myéloperoxydase), accompagnée de la diminution de cytokines antiinflammatoires. Ce contexte procarcinogène est renforcé par la diminution des Lymphocytes T (LT) anti-tumoraux dans la muqueuse et la tumeur. Cet effet a également été observé chez les patients atteints de CCR porteurs de souches E. coli colibactine-positives avec une baisse de la population des LT CD3+. Enfin, nous avons démontré qu’une infection par E. coli colibactine-positives induit une résistance à une immunothérapie anti-tumorale ciblant le checkpoint immunologique PD-1. Ces résultats suggèrent que la diminution des LT induite par l’infection chronique du tube digestif par des E. coli colibactine-positives pourrait être liée à cette résistance au traitement. Ainsi, les travaux effectués lors de cette thèse permettent de confirmer le rôle clé de certaines bactéries du microbiote intestinal et du dialogue complexe de celui-ci avec le système immunitaire, dans la carcinogenèse colique et la réponse aux traitements anti-cancéreux. (...)
Multiple evidences show the role of microbiota in colorectal cancer (CRC) development and anti-tumor drug responses. Various independent studies demonstrated that Escherichia coli strains with specific invasive properties and virulence factors abnormally colonize CRC patient mucosa. More than half of these strains harboring the pks pathogenic island coding for the synthesis of a genotoxin named colibactin. This genotoxin can impair directly DNA synthesis or cellular cycle and provokes genomic instability. Many different studies highlighted others bacteria-associated mechanisms leading to colorectal carcinogenesis as crosstalk between immune responses, inflammatory events, and/or cell senescence induction. However, the mechanisms by which CRC-associated E. coli promote colorectal carcinogenesis are diverse and some-what specific to the animal models and the microbial status of the animals (germ-free or Specific Pathogen Free). However, modulation of immune response and inflammation seems to play a central role in these mechanisms.The aim of this work was to evaluate the impact of chronic infection by colibactin-positive E. coli in a CRC reference model, the APCMin/+ mice colon focusing on inflammation and immune cells. First, we developed and validated an innovative method to quantify immune cells in APCMin/+ mice, based on immunostainings and digital image analysis. Thanks to the machine learning approach, we succeeded to precisely discriminate, quantify and localize these cells in three regions of interest: mucosa, lymphoid follicle and tumor. After the complete validation of this new method, we accurately examined the impact of a chronic infection with a colibactin-positive E. coli strain isolated from a CRC patient, on the APCMin/+ colon immune microenvironment. Particularly, we demonstrated the induction of a pro-carcinogenic environment by these bacteria in vivo, in a colibactin dependent manner, with both an increase of the pro-inflammatory neutrophil enzyme (myeloperoxydase) and cells, and a decrease of anti-inflammatory cytokines. This carcinogenesis-associated context is emphasized by the decrease of anti-tumor T cells in colon mucosa and tumor. This phenomenon is equally observed in CRC patients, with a decrease of T cells in patient tumors, which are harboring the colibactin-positive E. coli. Finally, we demonstrated for the first time that colibactin-positive E. coli infection induce resistance to an anti-tumor immunotherapy treatment based on PD-1 immune checkpoint blockade. Our results suggest that the decrease of T cells induce by colibactin-positive E. coli chronic infection could lead to the impairment of an immunotherapy response. To conclude, this thesis work confirms the crosstalk between some specific bacteria from intestine microbiota and the immune system in carcinogenesis and anti-tumor drug efficacy. In longer term, these results suggest that the colibactin-positive E. coli presence could be used as a poor prognosis biomarker in CRC and particularly to predict response to anti-PD-1 immunotherapy

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Coito, Sylvie. „Rôle de la molécule CD99 dans la régulation de l'expression des molécules du complexe majeur d'histocompatibilité de classe I“. Nice, 2006. http://www.theses.fr/2006NICE4002.

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L'un des mécanismes les plus efficaces d'échappement des cellules tumorales à la surveillance immune est la perte d'expression des molécules du Complexe Majeur d'Histocompatibilité de classe I (CMH-I) à leur surface. Il a été observé que la glycoprotéine, CD99, composée d'une forme longue (FL) et d'une forme courte (FC), influençait l'expression du CMH-I dans une lignée B. Dans notre modèle de lignée lymphoïde T Jurkat JE 6. 1, rendue déficiente en CD99, le niveau d'expression à la surface cellulaire du CMH-I est fortement diminué comparativement aux cellules sauvages. De plus, la transfection des 2 isoformes de CD99 dans les cellules déficientes en CD99 (CD99-/-) permet la restauration du niveau d'expression du CMH-I. Nos résultats montrent que dans ce modèle de lignée cellulaire T, en présence d'IFN-g, la présence de CD99 est nécessaire à l'expression en surface des molécules du CMH-I néo-synthétisées. Mesurée en RT-PCR quantitative en temps réel, sur les cellules T au repos et sous IFN-g, la transcription des gènes du CMH-I et des gènes intervenant dans l'apprêtement antigénique est similaire dans les 3 types cellulaires exprimant ou non CD99. Néanmoins, sous IFN-g, dans les cellules CD99-/-, les molécules du CMH-I n'atteignent pas la surface aussi rapidement que dans les autres types cellulaires. Enfin, des études en microscopie confocale ont permis de visualiser la rétention des molécules du CMH-I dans des régions intra-cytoplasmiques correspondant à des vésicules du trans-golgi marquées par p230 trans-golgi. De plus, nous avons comparé l'expression des molécules du CMH-I et de CD99 dans une lignée tumorale pulmonaire et dans des cellules tumorales versus des cellules saines de 18 patients atteints d'adénocarcinomes pulmonaires provenant de la tumorothèque de Nice. Sur les prélèvements de tissus pulmonaires sains et tumoraux obtenus à partir de patients, nous observons une perte du niveau de transcrits des gènes du CMH-I, confirmant les données de la littérature, ainsi que de la plupart des gènes participant à l'apprêtement peptidique, dans les tissus tumoraux comparativement aux tissus sains. De plus, nous décrivons également la perte de transcription d'une nouvelle molécule CD99 qui présente une perte prédominante de la FL. In vitro, le niveau d'expression du CMH-I est fonction des isoformes de CD99. En effet, la sur-expression de la FL de CD99 induit une augmentation de l'expression du CMH-I et de la machinerie d'apprêtement des peptides antigéniques tandis que la FC de CD99 diminue l'expression du CMH-I. Le CMH-I est au centre de la réponse immune en présentant d'une part les peptides antigéniques aux cellules cytotoxiques T et d'autre part en régulant l'activité des cellules Natural Killer. Une diminution de l'expression des molécules du CMH-I en surface est l'un des mécanismes utilisés par les tumeurs pour échapper à la réponse immune. Ainsi nos résultats suggèrent l'influence des isoformes de CD99 dans l'échappement tumoral via la régulation de l'expression des molécules du CMH-I
The loss or the down regulation of the class I Major Histocompatibility Complex (MHC-I) on the cell surface is one of the major mechanisms for tumoral cell to escape from the immune response. It have been previously described that the glycoprotein CD99, a 32kd transmembrane molecule that belongs to a new family of proteins, composed by a long isoform (type I) and by a spliced isoform (type II) can influence the MCH-I expression level in a B cell line. We describe here that CD99 powerfully regulates the level of MHC-I. The expression of MHC-I is tightly linked to the cell surface of variants from the same cell line: CD99 negative cells (CD99-/-) display a level of MHC-I reduced by half as compared to wild type (WT JE) cells. After CD99 cDNA transfection (CD99+/+) MHC-I expression was fully recovered. Strikingly, gamma-IFN (IFN-g) does not lead to an up-regulation of MHC-I expression on CD99-/- cells compared to the four-fold increase of MHC-I expression on WT JE and on CD99 retransfected cells. Of note, IFN-g did not affect CD99 expression. We have observed, using confocal microscopy that, contrary to CD99 positive cells, MHC-I molecules were stored in the cytoplasmic vesicles and less exported to the cell surface in CD99-/- cells. Yet, we observed no modification of the transcription levels of the antigen processing machinery (APM) genes. The second part of the work was a study of a tumoral model, with a cancer lung, using a cell line, and eighteen tissues samples from patients with histological confirmed tumor of lung provided by the Biobank Tissue Unit Laboratory of Clinical and Experimental Pathology, Pasteur's hospital, (Nice). In vitro, the expression level is dependent from CD99 isoforms. The sur-expression of the type I isoforms induce an up-regulation of MHC-I molecules and of the APM genes whereas, the CD99 type II isoforms decrease the MHC-I expression level. On healthy lung tissues and on tumoral tissues obtained from surgery samples, the transcription of MHC-I genes are down regulated on tumoral tissues as the literature, as well as most APM genes. What is more, we described the loss of the transcription of a new molecule, CD99, which were predominant on the CD99 type I isoform. Our observations might be relevant to tumors and virus escape since loss or down regulation of MHC I molecules is an important feature which keep tumors and virus infected cells below the cytotoxic T-cell detection levels

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Chen, Ting. „Similarities and differences of the early immune responses to tumor or embryo implantation“. Paris 6, 2011. http://www.theses.fr/2011PA066127.

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Les lymphocytes T régulateurs naturels (Treg) établissent la tolérance à l’émergence de la tumeur. Les tumeurs entraînent la réponse rapide des Treg déjà activés/en mémoire (amTreg), qui domine la réponse des cellules T effecteurs naïves (Teff). Nous faisons l’hypothèse que des mécanismes similaires mènent à la tolérance des fœtus. Cette thèse se concentre sur l’analyse des parallèles entre les réponses immunitaires aux tumeurs et à l’implantation de l’embryon. Nous avons identifié une sous-population de Treg qui apparait comme un régulateur dans l’implantation de la tumeur/embryon, les similarités étant frappantes. Comme les tumeurs, les amTreg spécifiques aux autoantigènes sont rapidement recrutés et activés au niveau des ganglions drainant l’embryon, ceci peu après l’implantation. Mais à l’inverse, la seule élimination des Treg n’est pas toujours suffisante pour entraîner l’avortement ; en parallèle, la pré immunisation maternelle contre les antigènes du fœtus n’est pas assez puissante pour induire la perte des fœtus, sauf si la délétion des Treg est imposée au même moment – contrairement aux tumeurs, puisque la pré-immunisation contre les antigènes des tumeurs conduit au rejet complet de la tumeur même quand les Treg sont présents. Ceci révèle un réseau protecteur robuste qui assure le succès de la grossesse. Les fonctionnalités partagées par les réponses immunitaires dans les grossesses et cancers peuvent avoir des implications réciproques dans des applications thérapeutiques. Nous avons aussi testé sur des souris les effets d’injections d’IL2 à faible dose sur de courtes périodes sur la régression des avortements spontanés, qui a montré des résultats prometteurs.

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Kadlub, Natacha. „Tumeurs des maxillaires avec anomalies du développement : à partir des modèles de tumeurs kératokystiques odontogènes et du chérubinisme“. Thesis, Sorbonne Paris Cité, 2015. http://www.theses.fr/2015PA05T045/document.

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Afin de mieux comprendre les bases physiopathologiques des tumeurs osseuses des mâchoires, nous avons étudié deux modèles de tumeurs associées à des mutations génétiques connues : la tumeur kératokystique odontogène (TKO), liée à la mutation de PTCH1, et le chérubinisme, lié à la mutation de SH3BP2. Au regard des travaux d’oncogénétique, nous formulons l’hypothèse que le développement des tumeurs ostéolytiques bénignes des mâchoires de l’enfant et leur agressivité repose sur un mécanisme génétique. Nous avons montré que la présence d’une mutation de PTCH1 (germinale avec syndrome de Gorlin) dans les TKO était un facteur de mauvais pronostic, stimulant un centre tumoral secondaire, responsable de lésions à distance, mais que cette agressivité pouvait aussi être liée à des mécanismes inflammatoires. Dans le chérubinisme, nous avons montré que la mutation était responsable du phénotype, mais que le type de mutation n’influençait pas le pronostic ni l’agressivité. L’agressivité tumorale est liée au phénotype des cellules géantes multinucléées (cellules myéloïdes à différenciation macrophagique ou ostéoclastique). Nous avons montré, que le modèle murin ne pouvait pas s’appliquer à la pathologie humaine, avec notamment un rôle très secondaire du TNF-α. Enfin nous avons démontré le rôle important de NFATc1 dans la physiopathologie du chérubinisme qui nous a permis de proposer, le tacrolimus, comme le premier agent thérapeutique efficace. Nos résultats suggèrent que les mutations induisent la pathologie et que les changements du microenvironnement (liés à la flore buccale ou à l’éruption dentaire) entretiennent la pathologie
To determine pathophysiological bases of jawbone tumors, we studied two genetic models of jawbone tumors: keratocystic odontogenic tumors (KOT) associated to PTCH1 mutation and cherubism associated to SH3BP2 mutation. From oncogenetic theory, we postulate that genetic background controls the development of benign children jawbone tumors. From our work, we demonstrated that PTCH1 mutation (germline mutation in Gorlin syndrome) was an unfavorable prognosis factor for KOT, leading to distant and independent daughter tumors. Moreover, we showed, that chorionic inflammation was associated with a high recurrence rate. In cherubism, SH3BP2 mutation produced cherubism phenotype, but the type of mutation did not affect the aggressiveness of the disease. Cherubism aggressiveness was determined by the phenotype of giant multinucleated cells (whether osteoclasts or macrophages). Furthermore, we showed that murine model could not be transposed to human pathology; indeed it appeared that TNF- α did not play a critical role in human cherubism. On the other side, we showed that NFATc1 played a crucial role in cherubism pathophysiology; this observation allowed us to propose, the tacrolimus, as an effective treatment for this disease. Our results suggest that genetic background induced tumor development, and that microenvironment changes (due to flora of the oral cavity and to teeth eruptions) are responsible to the maintenance and the progression of the disease

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Juzan, Rathier Monique. „Propriétés immunomodulatrices des métabolites de l'acide arachidonique produits par les tumeurs neuro-endocrines bronchiques humaines“. Bordeaux 2, 1992. http://www.theses.fr/1992BOR28171.

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Les tumeurs neuro-endocrines bronchiques humaines, carcinoides et carcinomes a petites cellules ont une evolution clinique diametralement opposee. Les substances elaborees par ces tumeurs ont-elles une action sur le systeme immunitaire du malade. Des xenogreffes chez le rat de ces deux types de tumeurs ont produit une stimulation au niveau des glandes mammaires des animaux ainsi qu'une attenuation de la reaction de rejet du greffon habituellement observee lors de xenogreffes. Les eicosanoides secretes par les greffons tumoraux pourraient etre responsables de ces phenomenes. Les eicosanoides produits par des lignees cellulaires de carcinome bronchique a petites cellules et par des cellules tumorales de carcinoide ont ete identifies et doses par elisa, hplg, sh. Les cellules tumorales liberent in vitro des prostaglandines et des metabolites des 5, 9, 12 et 15 lipoxygenases. L'immunomodulation induite par ces metabolites a ete exploree, elle montre que la reponse proliferative des lymphocytes humains et la cytotoxicite non restreinte au complexe majeur d'histocompatibilite sont modifiees par les eicosanoides produits par les tumeurs. Mais il n'existe pas de relation entre l'immunosuppression induite par les eicosanoides et la difference d'evolutivite de ces deux types de tumeurs

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Messai, Yosra. „Etude de la réponse cytotoxique lors de la progression tumorale : rôle de la cytokeratine 18“. Paris 6, 2010. http://www.theses.fr/2010PA066214.

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Vey, Nelly. „Cellules dendritiques plasmacytoïdes et immunosurveillance ou échappement immunitaire dans le cancer du sein : impact des signaux activateurs versus inhibiteurs du microenvironnement tumoral“. Thesis, Lyon 1, 2014. http://www.theses.fr/2014LYO10255.

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Le cancer du sein est une maladie impactant le système immunitaire dont le rôle évolue au cours de la tumorigénèse, allant de la détection et l'élimination des cellules transformées (immunosurveillance) à la promotion du développement tumoral (immunosubversion). Les efforts déployés pour définir de nouvelles stratégies thérapeutiques ont révélé que rétablir l'immunité anti-tumorale chez les patientes permettrait d'améliorer leur pronostic. Durant ma thèse, nous avons mis en évidence l'existence de signaux activateurs et inhibateurs des pDC dans les cancers du sein, qui confèrent aux pDC un rôle dans l'immunosurveillance et dans l'échappement immunitaire du cancer du sein respectivement. Nous avons ainsi montré que le TGF-beta et le TNF-alpha sont impliqués dans l'inhibition fonctionnelle des TApDC en réprimant l'expression et l'activation d'IRF-7. Dans un second temps, nous avons montré i) la présence de complexes [ADN-LL37] produits par les neutrophiles dans les tumeurs et capables d'induire la production d'IFN-alpha par les pDC, ii) l'expression des gènes associés aux IFN-I dans les tumeurs de sein et iii) un rôle majeur de la voie des IFN-I dans l'immunosurveillance des tumeurs mammaires chez la souris. De plus, des données préliminaires chez la souris suggèrent que les pDC participent à l'immunosurveillance anti-tumorale in vivo. Les travaux présentés dans ce manuscrit apportent de nouvelles données sur le rôle des pDC dans l'immunosurveillance des cancers du sein et ouvrent sur de nouvelles stratégies d'immunothérapie anti-tumorale ciblant les pDC
Breast cancer are disease impacting immune system whose play role during tumorigenesis, to detect and eliminate malign cells (immunosurveillance) or promote tumoral development (immunosubversion). Efforts to define new therapeutic strategies revealed that restoring anti-tumor immunity in patients would improve their prognosis. During my thesis, first, we demonstrated the existence of stimulatory and inhibitory signals of pDCs in the breast, which give the pDCs a role in immunosurveillance and immune escape of breast cancer, respectively. We showed that TGF-beta and TNF-alpha are involved in the functional inhibition of TApDC repressing IRF-7 expression and activation. Secondly, we showed i) the presence of [DNA LL37] complex produced by neutrophils in tumors that can induce the production of IFN-alpha by pDCs, ii) the expression of type I IFN associated genes in breast tumors and iii) a major role of IFN-I pathway in immunosurveillance of mammary tumors in mice. In addition, in mice, preliminary data suggest that pDC could play a role in anti-tumor immunosurveillance in vivo. The work presented in this thesis provide new data on the role of pDCs in immunosurveillance of breast cancers, and open new anti-tumor immunotherapy strategies targeting pDCs

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Loumagne, Laure. „Démonstration in vivo du rôle de la molécule HLA-G dans l'échappement des tumeurs solides au système immunitaire“. Paris 7, 2013. http://www.theses.fr/2013PA077063.

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Parmi les mécanismes immunosuppresseurs développés par les tumeurs, l'expression inductible de la molécule de tolérance HLA-G a été décrite dans de nombreuses lésions en association à un mauvais pronostic. En particulier, la forme soluble de HLA-G a été mesurée à des taux élevés dans des ascites malignes ainsi que dans le plasma de patients atteints de cancers et inhibe les fonctions d'effecteurs anti¬tumoraux in vitro. Néanmoins, la démonstration du rôle de la forme sécrétée de HLA-G in vivo dans l'échappement tumoral au système immunitaire restait à être apportée. Malgré l'absence d'homologue murin de HLA-G, son étude chez la souris est pertinente de par son interaction avec le récepteur inhibiteur murin PIR-B orthologue des récepteurs ILT humains qui génère des effets comparables à ceux décrits chez l'homme. Grâce à la mise en place d'un modèle d'études de tumeur syngénique chez la souris, nous démontrons que HLA-G permet à une tumeur immunogène d'échapper au rejet anti-tumoral chez des hôtes immunocompétents et de se développer de façon similaire à une tumeur faiblement immunogène. Une altération de la réponse humorale, un défaut quantitatif et fonctionnel des LT, une expansion des MDSC et une réduction de l'infîltrat tumoral en LB et LT sont les principaux mécanismes par lesquels HLA-G favorise l'échappement tumoral. Ces effets induits par HLA-G valident les études in vitro basées sur des cellules humaines impliquant HLA-G dans de nombreux mécanismes d'inhibition de l'immunité. En conclusion, nos données renforcent l'importance de considérer HLA-G comme une cible prometteuse d'optimisation des immunothérapies en bloquant son expression ou sa fonction
IAmong the immunosuppressive mechanisms developed by tumors, the inducible expression of immuno-tolerogenic HLA-G molecule by tumor cells has been evidenced in more than one thousand malignancies from various origins in association with poor prognosis. Particularly, the soluble form of HLA-G was measured at high concentrations in malignant effusions and plasma from cancer patients and inhibits anti-tumor effectors functions in vitro. Nevertheless, the role of secreted HLA-G in contributing to tumor evasion from immune System in vivo remained to be demonstrated. Despite non-described murine homolog of HLA-G, investigating its role in vivo is relevant based on interaction with murine PIR-B, ortholog of human ILT, which mediates comparable effects than those described in humans. Using a syngeneic tumor model, we demonstrate that HLA-G enables an immunogenic tumor to escape from anti-tumor rejection in immunocompetent hosts and to develop similarly to a poorly immunogenic tumor. Impairment of humoral response, quantitative and functional T cell defect, expansion of MDSC, and decrease of T and B cell tumor infiltrate constitute the main mechanisms by which HLA-G favors tumor escape. These HLA-G-mediated effects validate in vitro studies based on human cell lines involving HLA-G in numerous immune inhibitory mechanisms. In conclusion, our findings reinforce the importance to consider HLA-G as a promising target to optimize immunotherapy by blocking its expression or function

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Bergot, Anne-Sophie. „Les lymphocytes T régulateurs spécifiques du soi : clés de l’immunité des tumeurs“. Paris 6, 2008. http://www.theses.fr/2008PA066399.

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En présence de tumeur, des lymphocytes T régulateurs (Tregs) et effecteurs (Teffs) sont recrutés dans le ganglion drainant et la tumeur. Les Teffs ne mènent au rejet tumoral qu’en l’absence de Tregs : les Tregs infiltrant la tumeur inhibent les Teffs CD8+ cytotoxiques via l’inhibition des CD4+ auxiliaires. Le recrutement des Tregs au niveau du ganglion drainant est un évènement précoce, à l’émergence de la tumeur : les Tregs, et surtout les Tregs mémoires, ont une cinétique de réponse mémoire contre les antigènes partagés par les cellules normales et tumorales, alors que les Teffs ont une cinétique de réponse primaire contre les néoantigènes tumoraux. Si les Teffs ont un phénotype mémoire contre la tumeur, ils ne sont alors plus sensibles à la suppression par les Tregs. En l’absence de Tregs, une bonne réponse effectrice nécessite la présence d’un bon antigène tumoral (rejet tumoral). Mais un antigène trop immunodominant peut restreindre la réponse effectrice et mener à l’échappement des tumeurs (nouveau variant)

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Anson, Marie. „Rôle de la voie Wnt/beta-caténine dans l'homéostasie immunitaire hépatique“. Paris 7, 2010. http://www.theses.fr/2010PA077103.

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La voie Wnt/p-caténine est une voie majeure dans la carcinogenèse du foie. De plus, le développement de CMC est favorisé par des conditions inflammatoires chroniques. Pourtant, aucune donnée n'est disponible quant aux liens entre la voie Wnt/ß-caténine et l'inflammation. Dans ce contexte, nous avons étudié les relations entre la voie Wnt/ß-caténine et le microenvironnement hépatique et l'implication du système immunitaire dans la tumorigenèse dépendante de p-caténine. Nous avons montré que l'inflammation est un nouvel acteur impliqué dans la tumorigenèse hépatique induite par l'activation de la ß-caténine. En effet, la ß-caténine est capable d'induire un programme inflammatoire associée à la production de différentes chimiokines, à l'activation de NF-KB dans l'hépatocyte et à l'activation des cellules NKT. De manière intéressante, nous avons montré que la ß-caténine contrôle simultanément des effecteurs pro inflammatoires et des signaux opposés, comme LECT2, qui participe au maintien d'un faible niveau inflammation. De plus, nous avons montré que la délétion de LECT2, ainsi que la délétion des NKT de type I, se caractérise par une augmentation de l'initiation et de la progression tumorale, conduisant à des tumeurs peu différenciées et plus agressives, avec dans certains cas, la présence de métastases pulmonaires. Ceci met en évidence le rôle anti-tumoral des NKT de type I dans la carcinogenèse induite par l'activation de la ß-caténine dans le foie. Nos résultats montrent que, par le contrôle de médiateurs pro et anti-inflammatoires, la signalisation Wnt/ß-caténine est capable de mettre en place un milieu inflammatoire qui détermine le degré d'agressivité des tumeurs
Wnt/ß-catenin signaling is one of the major carcinogenic pathways of the liver. Chronic inflammation was reported to be a key déterminant stimulating the development of human hepatocellular carcinoma (HCC). Until now, no one has addressed a link between the Wnt/ß-catenin signaling triggered in hepatocytes with inflammation. During this study, we decided to investigate this relationship within the liver microenvironment and to explore the involvement of the immune System in ß-catenin-dependent liver tumorigenesis. We showed for the first time that inflammation was a new participant in ß-catenin-induced tumorigenesis. Indeed, we demonstrated that ß-catenin was able to instruct a complex inflammatory program associated to the synthesis of inflammatory chemokines, the activation of NF-KB signaling pathway in hepatocytes and finally by targeting specifically invariant NKT cells. Interestingly, we found that p-catenin simultaneously controls pro inflammatory mediators and opposite signals, such as LECT2 that chronically lowers inflammatory level. Moreover, we showed that either LECT2 or type I NKT deletion significantly accentuetes initiation and progression stages of ß-catenin-dependent tumorigenesis, evidenced by the occurrence of undifferentiated, proliferative and aggressive tumors associated with pulmonary metastasis. Our results demonstrate the anti-tumoral role played by type I NKT cells during ß-catenin-induced liver tumorigenesis. In conclusion, we identified that by controlling pro and anti-inflammatory signals, Wnt/ß-catenin pathway orchestrates the establishment of an inflammatory milieu that determines the aggressiveness of tumors

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Cornet, Sébastien. „Optimisation de la réponse immunitaire dirigée contre les antigènes de tumeurs universels : de la recherche au développement clinique“. Paris 6, 2005. http://www.theses.fr/2005PA066283.

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Caignard, Anne. „Etude de la réponse immune dans un système de variants tumoraux coliques progressif et régressif chez le rat“. Dijon, 1990. http://www.theses.fr/1990DIJOS001.

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Des tumeurs expérimentales coliques ont été induites chez le rat syngénique BDIX par la 1. 2 diméthylhydrazine. Des lignées transplantables et des lignées cellulaires ont été établies à partir de ces tumeurs. A partir d'une de ces lignées cellulaires, la lignée DHD/K12, deux sous-populations ont été sélectionnées en fonction de leur sensibilité au détachement par la trypsine. Les cellules TR (trypsines résistantes) induisent des tumeurs progressives et métastatiques lorsqu'elles sont injectées en sous-cutané à l'hôte syngénique, constituant le variant PROb ; les cellules induisent des tumeurs qui régressent toujours en quelques semaines, constituant le variant REGb. Les variants PROb et REGb interagissent in vivo : le variant REG protege l'animal contre une seconde inoculation avec le variant PROb; les tumeurs PROb facilitent la croissance des cellules REGb en tumeurs progressives. Ces deux types d'interactions sont des réponses spécifiques dirigées contre la lignée transplantable DHD et les lignées cellulaires PROb et REGb qui en dérivent. Des expériences de transfert passif ont montré que la protection et la facilitation peuvent être reproduites par transfert de lymphocytes spléniques. In vitro, dans un MLTC (culture mixte de lymphocytes et de cellules tumorales) les splénocytes de rats porteurs d'une tumeur PROb ou REGb de 15 jours prolifèrent après restimulation par des cellules tumorales. Chez les rats porteurs d'une volumineuse tumeur PROb, des cellules suppressives apparaissent : ces cellules inhibent la prolifération des cellules spléniques immunes anti-REG stimulées in vitro par des cellules REGb. Les variants PROb et REGb ne diffèrent pas au niveau de leur génome : les variants PROb et REGb contiennent un oncogène CKI-RAS transformant. Les variants PROb et REGb ont été caractérisés par des anticorps monoclonaux. L'anticorps monoclonal F11, obtenu contre le variant REGb, marque de façon intense les cellules REGb et de façon hétérogène les cellules PROb. . .

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Heyman, Loraine. „Implantation péritonéale des adénocarcinomes ovariens humains : Implication de la vitronectine et de ses récepteurs“. Cergy-Pontoise, 2008. http://www.theses.fr/2008CERG0392.

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Les cancers épithéliaux de l’ovaire représentent une pathologie grave. Ils dérivent de la transformation maligne de l’épithélium ovarien de surface. Comme de nombreux cancers, ils résultent d’un processus multi-séquentiel, se développent et se propagent au sein de différents microenvironnements. Le développement d’un liquide d’ascite est souvent observé et permet aux grappes de cellules cancéreuses d’être « véhiculées » pour se répandre dans l’ensemble de la cavité péritonéale avant d’adhérer sur les parois mésothéliales du péritoine. Les mécanismes d’adhérence et de migration cellulaires impliqués lors de l’implantation des cellules cancéreuses sur le mésothélium ont été explorés. L’ensemble des résultats obtenus démontre le rôle de la vitronectine et de ses récepteurs au cours du processus et permettent d’envisager la mise au point de stratégies thérapeutiques visant à limiter cette implantation
Ovarian cancer is the most common fatal gynaecological malignancy in western countries. In about 90% of the cases, ovarian cancers arise from the transformation of the ovarian surface epithelium. Cells spread prevalently by a direct extension of the tumour to adjacent tissues and by a shedding of cancer cells from the primary tumour into the peritoneal cavity. Development of ascitic fluids is often observed and allow tumour spheroids transport in the peritoneal cavity. Cell adherence and migration processes during peritoneal dissemination are study. The results provide evidence that vitronectin and its receptors mediate adhesion and migration of ovarian cancer cells to mesothelium. Vitronectin and its receptors could be considered in strategies to prevent peritoneal tumour cell implantation

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Achour, Oussama. „Aide au ciblage du microenvironnement tumoral par le développement d’un nano-système de détection et de traitement des tumeurs avec inhibition ciblée de l’héparanase“. Thesis, La Rochelle, 2014. http://www.theses.fr/2014LAROS012/document.

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Le microenvironnement des cellules tumorales présente plusieurs particularités comme l'hypoxie, l'acidification du milieu extracellulaire et l'hypersécrétion d'enzymes hydrolytiques. Ces hydrolases, comme la cathepsine D et l'héparanase, interviennent dans les étapes de la progression tumorale et notamment l'angiogenèse. Cette thèse s'intègre dans un projet dont la finalité est de concevoir un nano-objet moléculaire enzymo-sensible qui réagirait d'une manière spécifique aux enzymes hypersécrétées dans le microenvironnement tumoral pour assurer de façon simultanée, une fonction de détection et de ciblage des tumeurs. La première partie de nos travaux a été consacrée à la conception et à la validation d'un lien peptidique intégrable dans l'objet moléculaire, sensible aux formes de la cathepsine D actives du microenvironnement tumoral de cancers mammaires. Cet objectif a été réalisé suite à l'étude cinétique de l'hydrolyse de 5 peptides par la cathepsine D mature et la pro-cathepsine D dans les conditions de pH du microenvironnement tumoral. Nous avons également étudié l'effet de l'hypoxie et de l'acidification du milieu extracellulaire sur la sécrétion des formes actives de la cathepsine D par la lignée tumorale de cancer mammaire MCF-7. Dans une deuxième partie, nous avons travaillé sur l'élaboration d'héparines de bas poids moléculaire pouvant assurer la fonction thérapeutique de l'objet moléculaire grâce à leur activité anti-angiogénique. Nous avons mis au point une méthode innovante pour la dépolymérisation de l'héparine qui consiste en une hydrolyse radicalaire par le péroxyde d'hydrogène assistée par les ultrasons. Cette technique permet la production d'oligosaccharides d'héparines caractérisées par des poids moléculaires et des degrés de sulfatation contrôlés. En fonction des conditions de dépolymérisation par cette technique, les héparines de bas poids moléculaires produites peuvent être utilisées comme anticoagulant ou anti-angiogénique
Tumor microenvironment is characterized by several particularities such as hypoxia, extracellular media acidification and the hyper-secretion of hydrolytic enzymes. These hydrolases, such as cathepsin D and heparanase, are involved in many steps of tumor progression like angiogenesis. This thesis is a part of a project that aims to develop a "smart" molecular nano-object that specifically reacts to hyper-secreted enzymes in the tumor microenvironment for the simultaneous detection and targeting of tumor. The first part of our work concerned the design and the validation of a peptide that is sensitive to active forms of cathepsin D which is a protease, unregulated in many tumors microenvironment such as breast cancers. This objective has been achieved following the kinetic study of the hydrolysis of 5 peptides by mature cathepsin D and procathepsin D in the pH conditions of the tumor microenvironment. On the other hand, we studied the effect of hypoxia and the acidification of the extracellular medium on the secretion of active forms of cathepsin D by the breast cancer cell line MCF-7. In a second part, we worked on the development of low molecular weight heparins that may provide therapeutic function of the molecular object through their anti-angiogenic activity. We have developed an innovative method for the depolymerization of heparin that consists on a radical hydrogen peroxide hydrolysis assisted by ultrasound. This technique allows the production of heparins oligosaccharides characterized by controlled molecular weight and degree of sulfatation. Depending on the depolymerization conditions by this technique, the produced low molecular weight heparins can be used as an anticoagulant or anti-angiogenic

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Duflo, Suzy. „Mécanismes moléculaires et cellulaires de la réparation tissulaire des cordes vocales : rôle de la matrice extracellulaire au niveau du microenvironnement tissulaire“. Aix-Marseille 2, 2008. http://www.theses.fr/2008AIX20668.

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La lamina propria des cordes vocales, décrite par Hirano, est l’élément clé des compétences vibratoires des cordes. Cette structure spécifique correspond au plan de glissement de la muqueuse de recouvrement sur le muscle vocal sous-jacent. Les cordes vocales, de part leur fonction de phonation, sont la cible de traumatismes minimes, constants, mais peuvent aussi subir des traumatismes plus importants dont les origines sont multiples. En réponse à ces traumatismes, il existe une réactivité responsable d’une réparation tissulaire. Cette réparation tissulaire peut se faire sur plusieurs modes : soit une réparation ad integrum des tissus avec un retour à l’état initial, soit une réparation aberrante conduisant à la formation de lésions pathologiques ou encore une réparation aboutissant, à la fin des mécanismes mis en jeu, à une cicatrice. Les lésions ou les cicatrices présentes au niveau de la lamina propria sont donc responsables de perturbations vibratoires et ainsi de dysphonies. La première partie de ce travail (Etude I), a permis d’étudier deux lésions bénignes et particulièrement communes des cordes vocales : le polype et l’œdème de Reinke, dont l’apparence macroscopique c’est à dire le phénotype peut varier ou être similaire. Nous avons été capables, grâce à l’étude de l’ADNc par Microarray, d’établir le profil d’expression génétique de ces deux lésions de façon à les différencier, mais aussi à établir les processus de réactivité tissulaire et moléculaire responsable de leur développement. L’œdème de Reinke est caractérisé par les changements relatifs au stress oxydatif avec la présence de mécanismes de défense et de protection cellulaire contre le stress oxydatif, évitant probablement toute évolution vers une transformation maligne. Le polype est le siège de mécanismes de remodelage de la matrice extracellulaire et de réparation tissulaire ; il est apparu comme une lésion inflammatoire avec un nombre élevé de fibroblastes qui assistent le processus de réparation. Il est régulé par un blocage de la progression cellulaire et n’apparaît pas comme une lésion induite par le stress oxydatif. En nous basant sur les résultats de l’étude I, nous avons, dans cette première partie, initié l’étude II, de façon à sélectionner les gènes d’intérêt au sein des lésions malignes impliqués dans les processus de développement et de réactivité tissulaire et moléculaire de ces lésions. Ces gènes jouent un rôle dans la prolifération cellulaire, l’angiogenèse et l’invasion tumorale. L’objectif final de cette étude II, est de mettre en évidence les mécanismes de développement et d’évolution des lésions bénignes et malignes des cordes vocales, en comparant le niveau d’expression des gènes sélectionnés par l’étude I et II. En effet, ces lésions bénignes et malignes, malgré une exposition chronique à des facteurs de risque « identiques » (tabac, stress oxydatif, phono-traumatisme), présentent des processus de réparation différents. Nous avons poursuivi l’étude des phénomènes de réparation tissulaire par l’étude des caractéristiques d’une matrice extracellulaire synthétique. La matrice extracellulaire de la lamina propria possède en effet des caractéristiques spécifiques responsables des caractéristiques vibratoires de l’ensemble de la lamina propria. Lors des phénomènes de réparation notamment, il peut apparaître un tissu cicatriciel très gênant pour la vibration et nous avons étudié à l’aide des procédés de la biologie moléculaire, la réparation tissulaire des cordes vocales sur un modèle animal in vivo. Nous avons ainsi montré l’intérêt de l’adjonction d’une matrice extracellulaire synthétique pour diminuer les risques de cicatrice fibreuse. L’acide hyaluronique qui est un des composants de la matrice extracellulaire est d’un intérêt majeur dans la réparation tissulaire. L’étude III a permis d’évaluer une matrice extracellulaire synthétique (MECs) à base d’acide hyaluronique et de gélatine (Carbylan TM-GSX) dans le but d’optimiser la réparation tissulaire et les propriétés biomécaniques des cordes vocales. L’injection de Carbylan TM-GSX 5% (5% de gélatine et 95% d’acide hyaluronique) a fourni un meilleur environnement moléculaire et a permis d’améliorer la réparation tissulaire et par conséquent les propriétés viscoélastiques des cordes vocales. Par la suite, nous avons été capables dans l’étude IV, d’identifier les mécanismes moléculaires impliqués et responsables de la réparation tissulaire à un stade précoce et de l’amélioration de celle ci. Dans l’étude V, nous avons évalué la réponse inflammatoire à l’injection de Carbylan TM-GSX 5% au niveau de la corde vocale et avons montré qu’elle n’avait aucune conséquence pathologique pour le tissu hôte.

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Bennaceur, Karim. „Etude de l'effet des gangliosides extraits à partir de tumeurs de mélanome humain sur les cellules dendritiquese“. Paris 7, 2007. http://www.theses.fr/2007PA077127.

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L'échappement tumoral est lié à de multiples facteurs et notamment à la libération par les cellules tumorales de facteurs solubles capables d'inhiber la fonction des cellules dendritiques. Parmi ces facteurs ont été incriminées différentes cytokines dont VEGF, IL-6, M-CSF et plus récemment, les gangliosides. Ces derniers sont des glycosphingolipides, constituants ubiquitaires des membranes cellulaires. Leur composition est altérée dans les cellules tumorales. L'objectif de ce travail a été premièrement, de tester l'effet des gangliosides GM3 et GD3, extraits de tumeurs de mélanome humain, sur la maturation phénotypique et fonctionnelle des cellules de Langerhans (CL) épidermiques humaines, première barrière immunitaire à la prolifération tumorale du mélanome. Les résultats obtenus montrent un effet immunosuppresseur des gangliosides de mélanome GM3 et GD3 sur les CL. En effet, ces gangliosides altèrent le phénotype des CL, inhibent leur fonction allostimulante ainsi que leur capacité de migration. Par ailleur, on a montré aussi que les gangliosides GM3 et GD3 induisent l'apoptose des CL indépendamment de l'altération phénotypiques. Dans une autre approche, nous avons complété les résultats montrant un effet apoptotique des gangliosides de mélanome GM3 et GD3 sur les cellules dendritiques générés in vitro à partir de monocytes en analysant les mécanismes impliqués dans ce processus. A cet effet, nous avons utilisé différents inhibiteurs enzymatiques. Les résultats obtenus montrent que l'apoptose induite par GM3 et GD3 était caspase-dépendante et ROS indépendante. Les inhibiteurs de la sphingomyelinase neutre ne réversent pas l'apoptose contrairement à la désipramtne, inhibiteur de la sphtngomyelinase acide, qui empêche l'apoptose uniquement avec le ganglioside GM3. Par ailleurs, l'apoptose induite par GM3 et non par GD3 est totalement empêchée par la L-cycloserine, cependant la myriocine et la fumonisine FB1 qui sont impliquées dans la synthèse de novo des céramides n'ont aucun effet. D'autres part l'addition de la N-oleoylethanolamine (NOE), sphingosine 1- phosphate (S1P) et le ceramide 1-phosphate (C1P) qui contrebalancent l'effet des céramides, empêchent partiellement ou complètement l'apoptose induite par GM3 et GD3 suggérant que les céramides sont impliqués dans le processus apoptotique des PC
Tumor escape is linked to multiple mechanisms, notably to the liberation, by tumour cells, of soluble factors that inhibit the function of dendritic cells (DC). Among these factors were incriminated different cytokines of which VEGF, IT-6, M-CSF and recently, the gangliosides. Gangliosides are ubiquitous, membrane-associated, glycosphingolipids, the composition and production of which is altered in many tumour cells. The objective of this work was first, to test the effect of the gangliosides GM3 and GD3 purified from human melanoma tumors, on phonotypical maturation and functional of human epidermal Langerhans cells (CL), first immune barrier against melanoma proliferation. The obtained results show an immunosuppressive effect of melanoma gangliosides on the CL. In fact, GM3 and GD3 gangliosides impair LC phenotype, inhibit their functions as well as their migration capacity. Besides, we showed also that melanoma gangliosides induce LC apoptosis independently of phonotypical alteration. In another approaches, we have completed the results showing an apoptotic effect of melanoma gangliosides GM3 and GD3 on the dendritic cells generated in vitro from monocytes while analyzing the implied mechanisms in this process. To this effect, we used different enzymatic inhibitors. The obtained results show that the apoptose induced by GM3 and GD3 was caspase-dependante and independent to ROS production. The inhibitors of neutral sphingomyelinase did not abrogate the apoptose in contrast to desipramine, which is an inhibitor of the acid sphingomyelinase, that abrogate DC apoptosis only with the ganglioside GM3. Furthermore, DC apoptosis induced by GM3 and no by GD3 is totally prevented by the l-cycloserine, nevertheless the myriocine and the fumonisine FB1 that are implied also in the novo céramides synthesis have no effect. On the other hand the addition of the n-oleoylethanolamine (NOE), sphingosine 1-phosphates to (S1P) and the ceramide 1-phosphates (C1P) that counterbalance the effect of the ceramides, prevent partially or completely DC apoptosis induced by GM3 and GD3 suggesting that the ceramides are implied in the apoptotic process of the PC

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Leca, Julie. „Impact du dialogue entre microenvironnement intra-tumoral et cellules tumorales dans l'adénocarcinome pancréatique“. Thesis, Aix-Marseille, 2016. http://www.theses.fr/2016AIXM4003.

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L’adénocarcinome pancréatique (PDA) présente une résistance accrue aux chimiothérapies. Un concept propose que sa composition cellulaire participe à ce processus en limitant l’accès aux drogues tout en modulant les capacités des cellules tumorales. En effet, les cellules non tumorales, principalement mésenchymateuses (CAFs) et immunitaires, représentent 70% de la masse tumorale et forment le microenvironnement intra-tumoral ou stroma. L’impact du stroma dans le développement et la progression des PDA se trouve être au centre d’un large champ d’investigations cliniques. Notre première étude a porté sur un facteur neurotrophique, Slit2, impliqué dans la guidance axonale est sécrété par les CAFs. Ce dernier induit une augmentation de la migration des cellules de Schwann et des changements morphologiques et quantitatifs des cellules neuronales. Ainsi, les nerfs se retrouvent plus nombreux et de taille plus importante dans la tumeur comparée à un pancréas sain, c’est ce qu’on appelle le remodelage neural. Notre second travail a permis d’identifier un complexe multi-protéique (ANXA6/LRP1/TSP1), associé au trafic vésiculaire, présent uniquement dans le compartiment stromal et plus particulièrement dans les CAFs. Ce complexe est porté par des vésicules extracellulaires et procure un avantage prolifératif et pro-migratoire aux cellules tumorales. Les données obtenues au cours de mon travail de thèse constituent un rationnel fort pour étudier le potentiel thérapeutique des éléments permettant le dialogue entre les différents compartiments de la tumeur dans le but de sensibiliser les cellules tumorales aux chimiothérapies et ainsi d’améliorer la survie des patients
Pancreatic adenocarcinoma (PDA) is particularly resistant to current therapies. A concept suggests that its cellular composition participates in this process, limiting drugs access and affecting tumor cells behavior. Indeed, non-tumor cells, mainly mesenchymal (including Cancer Associated Fibroblasts, CAFs) and immune cells display over 70% of the tumor mass and form the intra-tumoral microenvironment or stroma. The impact of stroma in PDA development and progression is at the center of many clinical investigations. Firstly, we studied a neurogenic factor, Slit2, implicated in axon guidance pathway and secreted by CAFs. Slit2 increases Schawnn cells migration and morphologic changes of neural cells. Indeed, nerve size and density are increased in a tumor compared to a healthy pancreas, that is called, neural remodeling. Secondly, we worked on a multi-proteic complex (ANXA6/LRP1/TSP1), associated to vesicular trafficking, only expressed in stromal compartment, and mainly in CAFs. This complex is present in extracellular vesicles and confers proliferative and pro-migratory capacities to tumor cells. Data obtained during my thesis constitute an important rationale to target the crosstalk between tumor and stromal compartment, in order to sensitize tumor cells to chemotherapy and improve patient survival

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Baracco, Elisa. „Rôle du profile immunogénétique des patients dans la réponse à la chimiothérapie“. Thesis, Université Paris-Saclay (ComUE), 2018. http://www.theses.fr/2018SACLS153.

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L'immunité antitumorale induite par les cellules dendritiques intratumorales contribue à l'efficacité de la chimiothérapie à base d'anthracycline dans le cancer. Nous avons identifié un allèle de perte de fonction du gène codant pour le récepteur formyl peptide 1 (FPR1) qui était associé à une faible survie sans métastases et à une survie globale chez les patientes atteintes d'un cancer du sein et colorectal recevant une chimiothérapie adjuvante.Les effets thérapeutiques des anthracyclines ont été abrogés chez les souris Fpr1 (-/-) porteuses de tumeurs en raison d'une immunité antitumorale altérée. Les cellules dendritiques déficientes en Fpr1 ne parvenaient pas à s'approcher des cellules cancéreuses mourantes et, en conséquence, ne pouvaient pas déclencher l'immunité des cellules T antitumorales.Des expériences réalisées dans un dispositif microfluidique ont confirmé que FPR1 et son ligand, l'annexine-1, favorisaient des interactions stables entre les cellules cancéreuses mourantes et les leucocytes humains ou murins.Nous avons également étudié la contribution possible de FPR1 à l'efficacité d'une combinaison de mitoxantrone (MTX) et cyclophosphamide (CTX) pour le traitement du cancer du sein induit par l'hormone.Le cancer du sein induit par une combinaison d'acétate de médroxyprogestérone (MPA) et de 7,12-diméthylbenz [a] anthracène (DMBA) a pu être traité avec succès avec MTX plus CTX dans la mesure où la croissance tumorale était retardée et la survie globale augmentée (par rapport à commandes traitées uniquement avec un véhicule).Toutefois, l'efficacité thérapeutique de la thérapie combinée a été complètement abolie lorsque les récepteurs FPR1 ont été bloqués au moyen de la cyclosporine H (CSH). Des études génétiques futures sur les cancers du sein traités par chimiothérapie néoadjuvante sont nécessaires pour valider ces résultats au niveau clinique.L'ensemble de ces résultats mettent en évidence l'importance de FPR1 dans les réponses immunitaires anti-cancéreux induites par la chimiothérapie
Antitumor immunity driven by intratumoral dendritic cells contributes to the efficacy of anthracycline-based chemotherapy in cancer. We identified a loss-of-function allele of the gene coding for formyl peptide receptor 1 (FPR1) that was associated with poor metastasis-free and overall survival in breast and colorectal cancer patients receiving adjuvant chemotherapy.The therapeutic effects of anthracyclines were abrogated in tumor-bearing Fpr1(-/-) mice due to impaired antitumor immunity. Fpr1-deficient dendritic cells failed to approach dying cancer cells and, as a result, could not elicit antitumor T cell immunity.Experiments performed in a microfluidic device confirmed that FPR1 and its ligand, annexin-1, promoted stable interactions between dying cancer cells and human or murine leukocytes.We investigated also the possible contribution of FPR1 to the efficacy of a combination of mitoxantrone (MTX) and cyclophosphamide (CTX) for the treatment of hormone-induced breast cancer.Breast cancer induced by a combination of medroxyprogesterone acetate (MPA) and 7,12-Dimethylbenz[a]anthracene (DMBA) could be successfully treated with MTX plus CTX in thus far that tumor growth was retarded and overall survival was extended (as compared to vehicle-only treated controls).However, the therapeutic efficacy of the combination therapy was completely abolished when FPR1 receptors were blocked by means of cyclosporin H (CsH). Future genetic studies on neoadjuvant chemotherapy-treated breast cancers are warranted to validate these findings at the clinical level.Altogether, these results highlight the importance of FPR1 in chemotherapy-induced anticancer immune responses

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Lim, Chetana. „Microenvironnement et angiogénèse : implications dans la stratégie onco-chirurgicale des métastases hépatiques synchrones des cancers colorectaux“. Thesis, Sorbonne Paris Cité, 2017. http://www.theses.fr/2017USPCC018/document.

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Lors du diagnostic de cancer colorectal, près d’un quart des patients ont des métastases hépatiques dites synchrones. Lorsque la tumeur primitive est asymptomatique, la stratégie chirurgicale (chirurgie première de la tumeur primitive versus chirurgie première des métastases hépatiques) reste débattue. Les recommandations actuelles ne reposent que sur des accords d’experts qui elles-mêmes sont basées sur des études cliniques rétrospectives. L’étude du microenvironnement tumoral a pris ces dernières années une place majeure dans la recherche sur le cancer. Elle a permis de changer de paradigme avec une nouvelle conception du processus métastatique : une tumeur primitive peut agir sur le microenvironnement du futur site métastatique pour créer une "niche pré-métastatique". Cette niche pré-métastatique permettrait secondairement la croissance des cellules tumorales via une angiogénèse tumorale et la formation de métastases. Par une triple approche à la fois fondamentale, translationnelle et clinique, nous avons obtenu des données qui suggèrent qu’une chirurgie première de la tumeur colique ou rectale permet de moduler l’angiogénèse au sein du microenvironnement hépatique. Cette stratégie chirurgicale permettrait également d’améliorer le pronostic oncologique des malades et l’efficacité des anti-angiogéniques
At the time of the diagnosis of colorectal cancer, nearly 25% of patients have synchronous liver metastases. When this tumor is asymptomatic, the question of surgical strategy (primary tumor first versus liver-first strategy) remains debated. Current recommendations are based on agreements of experts which are by themselves based on retrospective clinical studies. The study of the tumor microenvironment has taken in recent years a major place in the field of cancer research. It leads to new paradigm with a new conception of the metastatic process. It may be possible that the microenvironment of the metastatic sites can be modulated by the primary tumor to promote the formation of the pre-“metastatic niche”. This leads to promote the growth of cancer cells and increase the metastatic potential of primary tumor. By a multidisciplinary research including fundamental, translational and clinical approaches, we have shown that primary tumor first strategy could modulate tumor angiogenesis and liver metastatic process. It is associated with improved survival of patients and efficacy of the anti-angiogenic therapy

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Hoarau, Jessica. „Halfway Between 2D Models and Animal Models : a New Multicellular 3D Spheroid Model Organized to Study Tumor-Endothelium Interactions in Ovarian Cancer“. Thesis, Université Paris-Saclay (ComUE), 2019. http://www.theses.fr/2019SACLS111.

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Le cancer de l'ovaire (CO) est la cinquième cause de décès chez les femmes qui se caractérise par son diagnostic tardif (stades FIGO III et IV) et par l’importance de ses métastases abdominales souvent observées au moment du diagnostic. Le traitement repose sur une chirurgie cytoréductive complète associée à une chimiothérapie. Malheureusement, parmi les patientes ayant une rémission clinique complète après la fin du traitement initial, 60% des personnes atteintes d'un cancer épithélial de l'ovaire (CEO) à un stade avancé rechuteront dans les cinq ans.L'importance de la néo-angiogenèse dans le développement des tumeurs a poussé les chercheurs à étudier d'autres stratégies. Les thérapies anti-angiogéniques ciblant le système vasculaire tumoral sont désormais utilisées en association avec la thérapie cytotoxique standard dans le traitement des CEO. Malheureusement, les progrès réalisés grâce à cette approche offrent encore un succès limité, qui peut s'expliquer en partie par l'interaction hétérotypique entre les cellules endothéliales et la tumeur. Plusieurs études suggèrent un dialogue complexe entre les cellules cancéreuses de l'ovaire (OCC) et les cellules endothéliales (EC) pouvant entraîner une sensibilité différente à la chimiothérapie et aux traitements anti-angiogéniques conduisant à la progression tumorale.L’objectif de la présente étude est d’étudier le rôle des interactions entre EC et OCC dans la prolifération et la chimiorésistance des CEO. Pour modéliser l'endothélium de la tumeur, nous avons utilisé notre modèle de cellules endothéliales AKT activées (E4+EC). Nous avons démontré en utilisant un modèle de coculture 2D que l’endothélium activé induit une prolifération et une chimiorésistance accrues dans les CEO par l’activation de la signalisation de Notch. Nous avons montré que l’expression et l’activation des récepteurs Notch étaient augmentées dans les cultures en coculture et dans les OCC résistantes à la chimiothérapie.L’accumulation d’ascite dans l’abdomen des patientes atteintes de CO semble jouer un rôle clé dans le mécanisme de propagation des OCC. Les OCC isolées flottent généralement dans l'ascite et forment des sphéroïdes multicellulaires. Dans ce contexte, nous avons développé un nouveau modèle 3D de sphéroïde pour étudier les interactions tumeur-endothélium dans un modèle plus proche des conditions in vivo. Nous avons démontré que les E4+EC et OCC formaient des angiosphères organisées avec un noyau de cellules endothéliales entourées par des OCC qui prolifèrent rapidement. Nous avons établi que l'activation de l'AKT dans les EC était nécessaire pour la formation d'angiosphères organisées. Fait intéressant, dans les ascites de patientes CEO, nous avons pu trouver des structures très similaires à nos angiosphères. De plus, dans une cohorte rétrospective de 59 patientes, nous avons montré que les EC étaient AKT activé chez des patientes atteintes de CEO, ce qui confirme l'importance de l'activation d’AKT dans la CEO. De plus, nous avons démontré l'importance du FGF2, de la Pentraxine 3 (PTX3), du PD-ECGF et du TIMP-1 dans l'organisation de l'angiosphères. Enfin, nous avons confirmé le rôle de Notch3/Jag1 dans le cross-talk des OCC-EC dans la prolifération et l'invasion des OCC au péritoine.En conclusion, notre étude illustre l’importance des EC AKT activé dans les CEO. Au vu des résultats mitigés des traitements anti-angiogéniques, se concentrer sur la normalisation vasculaire dans l'angiogenèse pathologique pourrait être plus efficace. Bien que l'AKT soit difficilement ciblable, la caractérisation génétique des tumeurs pourrait potentiellement identifier un sous-ensemble de tumeurs avec une signalisation NOTCH aberrante qui constituerait une cible idéale pour des inhibiteurs spécifiques. Alors que nous nous dirigeons vers la médecine personnalisée et de précision, il pourrait y avoir une place pour l'inhibition de NOTCH dans les CO en combinaison avec d'autres stratégies thérapeutiques
Ovarian cancer (OC) is the most lethal gynecologic malignancy in developed countries and the fifth cause of death among women. OC is a heterogeneous disease, which is characterized by its late diagnosis (FIGO III and IV stages) and the importance of abdominal metastases often observed at the time of diagnosis. The mainstay of treatment involves complete cytoreductive surgery associated with platinum and taxane-based chemotherapy. Unfortunately, among patients achieving complete clinical remission after completion of initial treatment, 60% with advanced epithelial ovarian cancer (EOC) will relapse within five years.The importance of neo-angiogenesis in tumor formation, growth and dissemination has driven researchers to investigate into alternative strategies. Anti-angiogenic therapies targeting tumor vasculature are now used in combination with standard cytotoxic therapy in the treatment of EOC. Unfortunately, the progress achieved by this approach still offers limited success which can partly be explained by the heterotypic interaction between the tumor and endothelial cells. Evidence suggests a complex cross-talk between ovarian cancer cells (OCCs) and endothelial cells (ECs) that can result in the emergence of a heterogeneous tumoral and endothelial population with different sensitivity to chemotherapy and anti-angiogenic therapies leading to an increase of OCC proliferation and dissemination.The objective of the present study is to investigate the role of ECs and OCCs interactions in the proliferation and chemoresistance of EOC. To model tumor endothelium, we used our model of Akt-activated endothelial cells (E4+ECs). We demonstrated using a 2D co-culture model that activated endothelium induces increased proliferation and chemoresistance in EOC through the activation of Notch signaling. We showed that Notch receptor expression and activation are increased in co-culture and in OCCs resistant to chemotherapy.The accumulation of ascites in the abdomen of an OC patient seems to play a key role in the mechanism of OCC spreading. Detached cancer cells usually float in ascites and form multicellular spheroids. In this context, we developed a new model of organized multicellular 3D spheroid to study tumor-endothelium interactions in a model closer to in vivo conditions. We demonstrated that when cocultured in 3D condition, E4+ECs and OCCs formed organized tumor angiospheres with a core of endothelial cells surrounded by highly proliferating OCCs. We established that AKT activation in ECs was mandatory for the formation of organized angiospheres. Interestingly, in EOC patient ascites, we were able to find structures that were very similar to our angiospheres. In addition, in a retrospective cohort of 59 patients, we showed that ECs were AKT activated in EOC patients which support the importance of AKT activation in EC in EOC. Besides, we demonstrated the importance of FGF2, Pentraxin 3 (PTX3), PD-ECGF and TIMP-1 in angiosphere organization. Finally, we confirmed the role of Notch3/Jagged1 in OCCs-ECs crosstalk for OCC proliferation but also during peritoneum invasion.Altogether, our study illustrates the importance of AKT activated ECs in EOC. In a context of poor results of anti-angiogenic therapies in clinical settings, focusing on vascular normalization in pathological angiogenesis could be more efficient. While AKT is hardly targetable, the genetic characterization of tumors could potentially identify a subset of tumors with aberrant NOTCH signaling that would constitute an ideal target for specific inhibitors. As we move toward personalized and precision medicine, there might be a place for notch inhibition in advanced ovarian cancer in combination with other therapeutic strategies

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Le, Buanec Hélène. „Contribution au développement de vaccins visant à corriger l'immunosuppression stromale induite par les tissus infectés par le VIH-1 et par les tumeurs dépendantes de la protéine E7 du papillomavirus de type 16“. Paris 6, 2005. http://www.theses.fr/2005PA066060.

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Cuny, Thomas. „New regulatory mechanisms in the growth of endocrine tumors : digestive neuroendocrine tumors, pitiutary adenomas“. Thesis, Aix-Marseille, 2016. http://www.theses.fr/2016AIXM5061.

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Bien que rares, les tumeurs endocrines développées chez l'Homme demeurent problèmatiques. Une meilleure compréhension des mécanismes qui régulent leur croissance constitue un objectif essentiel pour identifier des cibles thérapeutiques nouvelles.Dans la première partie de cette thèse, nous avons étudié l'impact du microenvironnement tumoral (MeT), définit par l'ensemble des facteurs qui encerclent la niche tumorale primitive, sur la croissance des tumeurs endocrines digestives. In vitro, nous observons un effet prolifératif réciproque entre des fibroblastes, l'une des cellules pivots du MeT, et des lignées cellulaires humaines de tumeurs endocrines pancréatiques, tel qu'il est susceptible d'exister in situ. Dans une seconde partie, nous avons montré que le pegvisomant, un antagoniste du récepteur de l'hormone de croissance utilisé chez des patients atteint d'adénome hypophysaire somatotrope, n'a pas d'effet prolifératif in vitro sur les cellules somatotropes adénomateuses
Although rare, endocrine tumors developed in Humans remain problematic, such as a better understanding of their regulatory mechanisms of growth represent a step forward to identify new therapeutical targets.In the first part of this thesis, we investigated the impact of the tumor microenvironment (TME), as defined by the factors surrounding the tumor primitive niche, on the growth of human digestive endocrine tumors. We, here, showed the occurrence of a reciprocal proliferation between human fibroblasts, a key cell within the TME, and human pancreatic neuroendocrine tumor cell lines, suggesting that human fibroblasts may constitue a new therapeutical target of interest in the TME of digestive endocrine tumors. In a second part, we showed that pegvisomant (PEG), a growth hormone receptor antagonist currently used in patients with GH-secreting pituitary adenoma, did not impact in vitro the proliferation rate of GH-secreting adenoma cells and therefore is suitable in patients with a persisting GH-secreting pituitary adenoma residue after surgery

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El, Sissy Carine. „Analyse de la composante immunitaire des cancers colorectaux et de son impact potentiel sur les stratégies thérapeutiques“. Electronic Thesis or Diss., Sorbonne université, 2021. https://accesdistant.sorbonne-universite.fr/login?url=https://theses-intra.sorbonne-universite.fr/2021SORUS404.pdf.

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Dans ce travail de thèse, j’ai analysé la qualité de l’infiltrat immunitaire des cancers du rectum localement avancés (LARC) et montré qu’une adaptation du test Immunoscore aux biopsies diagnostiques (ISB : infiltration tumorale en lymphocytes T CD3+ et CD8+) était réalisable. Sur deux cohortes (n1 = 131, n2=118) de patients LARC traités par radiochimiothérapie néoadjuvante (nRCT) avant chirurgie, j’ai observé que la qualité de l’infiltrat immunitaire, évalué par ISB, avait une valeur pronostique en termes de survie sans récidive [HR= 0.21 ; 95%CI 0.06-0.78, P=0.009], et était prédictive de la qualité de la réponse à la nRCT (P<0.001). Les analyses transcriptomiques et protéiques tumorales ont montré une hétérogénéité de réponse immunitaire locale à la nCRT. Une augmentation significative du niveau d’expression de gènes impliqués dans la cytotoxicité (GZMA, GZMH, GZMK, PRF-1), la réponse Th1 (TBX21, STAT4), l’activation (CD69) et la co-stimulation inhibitrice (CTLA-4, LAG3) était observée chez les patients répondeurs. Le statut d’activation immunitaire post-nCRT, était corrélé à l’ISB initial. L’ISB couplé aux examens d’imagerie post-nRCT améliore la prédiction de réponse complète histologique à la nRCT, et donc la sélection de patients éligibles à une stratégie de conservation d’organe (Watch&Wait, W&W). Sur 2 cohortes indépendantes de patients W&W, un ISB High prédisait un faible risque de récidive à 5 ans (3% ; CI95% 0-10%). Enfin, nous avons montré que les patients répondeurs à la nRCT pourraient présenter des signes de stimulation immunitaire adaptative T et B, soulignant le bénéfice immunitaire d’une préservation d’organe (et des ganglions drainants) en situation de réponse à la nCRT
In this work, I analyzed the quality of the immune infiltrate of locally advanced rectal cancer (LARC) and showed that an adaptation of the Immunoscore test to diagnostic biopsies (ISB: tumor infiltration in T cells CD3+ and CD8+) was feasible. In two cohorts (n1=131, n2=118) of LARC patients treated with neoadjuvant radiochemotherapy (nRCT) before surgery, I observed that the quality of the immune infiltrate, assessed by ISB, had a prognostic value in terms of recurrence-free survival [HR= 0.21; 95%CI 0.06-0.78, P=0.009], and was predictive of the quality of the response to nRCT (P<0.001). Tumor transcriptomic and protein analyses showed heterogeneity in local immune response to nCRT. A significant increase in the expression level of genes involved in cytotoxicity (GZMA, GZMH, GZMK, PRF-1), Th1 response (TBX21, STAT4), activation (CD69) and inhibitory costimulation (CTLA-4, LAG3) was observed in responder patients. The post-nCRT immune activation status correlated with the initial ISB. ISB coupled with post-nRCT imaging improves the prediction of histological complete response to nRCT, and thus the selection of patients eligible for an organ preservation strategy (Watch&Wait, W&W). In 2 independent cohorts of W&W patients, a High ISB predicted a low risk of recurrence at 5 years (3%; CI95% 0-10%). Finally, we showed that nRCT responder patients could show evidence of adaptive T and B immune stimulation, highlighting the immune benefit of organ (and draining lymph node) preservation in the nRCT response setting

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Chirica, Mircea. „Analyse de la réponse immunitaire anti-tumorale selon les caractéristiques oncogénétiques du cancer colorectal“. Sorbonne Paris Cité, 2015. http://www.theses.fr/2015USPCC082.

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Les cancers colorectaux (CCR) se développent en face d'un système immunitaire important associé à la muqueuse intestinale. Les avancées récentes en immunologie tumorale ont mis en évidence le rôle de la réponse immunitaire dans le développement, l'évolution et le pronostic des cancers. Le système immunitaire est capable de modifier activement les cellules précancéreuses à fur et à mesure qu'elles apparaissent dans les tissus. La qualité de la réponse immunitaire contre la tumeur est un facteur pronostique important chez les patients atteints de CCR. Différents types de mutations génétiques impliqués dans le CCR ont étés décrites. Certaines sont associées à un meilleur pronostic (instabilité des microsatellites, MSI) et d'autres à un mauvais pronostic (BRAF). Ces résultats s'expliquent par la capacité de la tumeur à modeler la réponse immunitaire anti tumorale. D'autres biomarqueurs prédictifs ont été décrits tels les mutations des gènes KRAS, NRAS, PIK3CA et TP53 mais leur rôle pronostique reste incertain. Dans ce travail, nous avons étudié de façon comparative les lymphocytes T infiltrant la tumeur (TIL), la muqueuse non tumorale et les lymphocytes T du sang périphérique. Nous avons observé que les TIL ont un phénotype activé, avec engagement de la voie NKG2D dans des LT CD8. Nous montrons l'expansion d'une sous population de LT CD4 exprimant NKG2D qui présentent des fonctions cytotoxiques parmi les TIL et dans la muqueuse non tumorale. Enfin, nous montrons que les caractéristiques ontogénétiques des CCR influencent la réponse immunitaire à l'intérieur de la tumeur car les populations de TIL différent selon le statut MSI et de la présence d'une mutation KRAS ou NRAS
Colorectal cancers (CRC) develop in the face of an important immune system associated with the intestinal mucosal tissue. Recent advances in tumor immunology have highlighted the role of the immune response in the development, evolution and outcome of cancers. The immune system is thought to actively edit out pre-cancerous tells in tissues as they appear. The quality of the immune response against the tumor has emerged as an important prognostic factor in patients with CRC. Several studies have highlighted the different type of mutations and developmental processes involved in CRC. Some of these mutations are associated with better prognosis (microsatellite instability, MSI) and other with poor outcome (BRAF mutations). Some studies suggest that part of these differential outcomes is driven by the capacity of the tumor to induce a strong immune response. Several other predictive biomarkers have been described including mutations of the KRAS, NRAS, PIK3CA and TP53 genes but their prognostic role remains uncertain. In this study T tells infiltrating the tumor were compared to tells populating the unaffected neighboring mucosal tissue and tells from the peripheral blood. We observed that T tells from the tumor harbor an activated phenotype, with engagement of the NKG2D pathway in CD8 T tells. We show that mucosal and tumor-infiltrating T tells are enriched in NKG2D CD4 T tells, which exhibit cytotoxic functions. Finally, the oncogenic status of the cancer appears to influence the immune response within the tumor as T tell populations differ in MSI compared to MSS tumors and KRAS/NRAS mutated tumors compared to their wild type counterparts

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Sugano, Gaël. „Rôle de MFG-E8/lactadhérine dans la croissance tumorale“. Paris 5, 2009. http://www.theses.fr/2009PA05T057.

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La lactadhérine/MfgeS est une protéine sécrétée favorisant l'angiogénèse médiée par le VEGF et l'élimination des corps apoptotiques par les phagocytes, qui induit des réponses immunitaires tolérogéniques. Ces deux processus étant importants dans le développement du cancer, cette thèse a donc pour but d'étudier l'importance de la lactadhérine dans la croissance tumorale. Dans un modèle de carcinogénèse chimioinduite de tumeurs de la vessie, nous avons décrit un rôle pro-tumoral de la lactadhérine, principalement via l'induction d'une réponse immunitaire tolérogénique. Ces données corrèlent avec les données de deux banques de tumeurs de vessie humaines. Dans un second modèle de carcinogénèse génétique, nous n'avons pas observé de rôle majeur de la lactadhérine dans la croissance de tumeurs de l'intestin, bien que la lactadhérine soit fortement exprimée dans ces tumeurs. Ces travaux fournissent donc une base intéressante pour des thérapies anti-tumorales dans les cancers de vessie
MfgeS/lactadherin is a secreted protein promoting VEGF-mediated angiogenesis and removal of apoptotic bodies by phagocytes, which induce tolerogenic immune responses. These two processes being important in cancer development, this thesis therefore aims to study lactadherin importance in tumor growth. In a chemoinduced carcinogenic model of bladder tumors, we have described a pro-tumoral role for lactadherin, mainly through induction of a tolerogenic immune response. These data correlate with two human bladder tumor banks. In a second model of genetic carcinogenesis, we did not observe a major role for lactadherin in intestine tumors growth, even if lactadherin is strongly expressed in these tumors. Thus, these works provide an interesting basis for anti-tumoral therapies in bladder cancers

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Fortier, Manon. „Rôle de la MAP kinase p38α au cours d'une agression aiguë du foie Hepatospecific ablation of p38α governs the inflammatory response to promote efficient tissue repair during acute liver injury“. Thesis, Sorbonne Paris Cité, 2018. http://www.theses.fr/2018USPCB100.

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Afin de lutter contre des agressions aiguës pouvant être induites par une hépatite virale, des toxines ou bien une surcharge médicamenteuse, le foie active différents processus interconnectés tels que la prolifération hépatocytaire, l'inflammation ou la mort cellulaire. Une protéine clé se trouve au carrefour de ces différents processus cellulaires : la protéine p38 alpha MAP (Mitogen Activated Protein) Kinase. Dans le foie, de nombreux travaux décrivent un double rôle de cette protéine. En effet, elle est considérée comme un suppresseur de tumeur en régulant négativement la prolifération des hépatocytes, cellules majoritaires du foie, mais peut aussi agir comme un oncogène en favorisant certains processus liés au cancer et notamment l'inflammation. Cependant, son action lors d'une agression aiguë du foie adulte reste peu caractérisée. L'objectif de mon travail de thèse était donc de caractériser le rôle de la protéine p38 alpha lors d"une agression hépatique aiguë, grâce à un modèle murin pour lequel l'expression de cette protéine est invalidée spécifiquement dans les hépatocytes (modèle murin KO). Pour répondre à cette question, nous avons utilisé le modèle expérimental d'hépatopathie classiquement utilisé pour reproduire la division hépatocytaire en contexte inflammatoire : le modèle du tétrachlorure de carbone (CCl4). L'injection de cet hépatotoxique à des souris entraîne une cytolyse hépatocytaire dans les zones centro-lobulaires rapidement suivie par une infiltration de cellules immunitaires et une prolifération compensatoire des hépatocytes sains, pour réparer le tissu lésé. Des souris contrôles et KO ont été sacrifiées à différents temps après injection permettant d'établir une cinétique post-CCl4, au cours de laquelle du sang et du tissu hépatique ont été collectés. Les lésions hépatiques, l'inflammation, l'apoptose et la prolifération ont ensuite été étudiées. Tout d'abord, nous avons observé que le nombre d'hépatocytes en phase S (marquage BrdU, taux de CyclinA2) est diminué en l'absence de p38a au cours de la phase de régénération post-CCl4. Par ailleurs, nous montrons que la perte d'expression de la protéine p38a confère un effet protecteur contre les lésions hépatiques induites par le CCl4. En effet, les zones de cytolyse et les taux d'alanine transaminase (reflet de la mort hépatocytaire) sont significativement diminués (de 40H à 60H post-CCl4) chez les souris KO. Pour expliquer ce phénotype, nous avons analysé l'apoptose au cours de la cinétique de régénération, mais nos résultats ne montrent pas de différences significatives dans la mise en place de ce processus entre les animaux contrôles et KO. En revanche, nous montrons que la réponse anti-oxydante dans le foie des animaux KO est amplifiée et pourrait donc participer à la protection du tissu hépatique. Enfin, nos observations immunohistochimiques montrent un recrutement massif de cellules inflammatoires dans les zones de cytolyse corrélé à une augmentation importante des niveaux de cytokines (comme le TNFa) et chimiokines pro-inflammatoires (CCL2 et CCL5). Laensemble de ces données suggèrent fortement que la déficience en p38a induit une réponse immunitaire spécifique favorisant le nettoyage et la réparation du tissu hépatique. En conclusion, mes travaux de thèse montrent que lors d'une lésion aiguë l'absence de la MAP Kinase p38a protège le foie en ajustant la balance « prolifération - réponse inflammatoire », favorisant ainsi une réparation précoce du tissu et le maintien de l'homéostasie hépatique
To prevent acute liver injuries induced by viral hepatitis, toxins or drug overload, liver activates different interconnected processes such as proliferation, inflammation or cell death. Interestingly, one protein is at the crossroad of these pathways: the MAP (Mitogen Activated Protein) kinase p38 alpha. Several studies showed a dual role for the p38a mitogen-activated protein kinase pathway in liver. Even if its role as a negative regulator of hepatocyte proliferation has been largely described, p38a may also harbor an oncogenic role involving cancer related-processes and notably inflammation. However, its function during an acute injury, in adult liver, remains uncharacterized. My thesis aim was to characterize p38 alpha MAP Kinase role during an acute liver injury thanks to a mouse model with a conditional hepatocyte specific deletion of p38a (KO model). To that end, we used an experimental hepatopathy system classically used to reproduce hepatocyte division in inflammatory context: the carbon tetrachloride model (CCl4). An injection of this hepatotoxic in mice induces hepatocyte cytolysis in centrilobular zone rapidly followed by immune cell infiltration and compensatory healthy hepatocyte proliferation to repair hepatic tissue. Control (CT) and KO mice were sacrificed at different timings after injection to establish a post-CCl4 kinetic, during which blood and liver tissue were collected. Liver injuries, inflammation, apoptosis and proliferation processes were then assayed. First, absence of p38a decreases hepatocyte number into cell cycle S phase (BrdU labelling, CyclinA2 levels) during regenerative process post-CCl4. Interestingly, we showed that p38a deficiency confers a protective effect against hepatic injuries induced by CCl4. Indeed, cytolysis areas and alanine transaminase levels (hepatocyte death reflection) were significantly decreased (40H to 60H post-CCl4) in KO mice. To explain this phenotype, we investigated apoptosis pathway during regenerative kinetic, but our results did not show any significant differences between CT and KO mice. On the other hand, antioxidant response is increased in KO livers and could therefore be involved in the hepatic tissue protection. Finally, immunohistochemistry analysis showed a massive inflammatory cell recruitment to cytolysis areas correlated with a significant increase of cytokines (as TNFa) and pro-inflammatory chemokines (as CCL2 and CCL5). These data strongly suggest that p38a deficiencies mediate a specific immune response to favor hepatic tissue clearance and repair. In conclusion, my thesis work shows that the absence of p38a MAP Kinase is hepatoprotective during an acute liver injury enhancing "proliferation - inflammatory response" balance, therefore promoting early tissue repair and maintaining liver homeostasis

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El, Guerrab Abderrahim. „Outils biologiques pour l'exploration des réponses cellulaires à l'hypoxie dans les tumeurs mammaires invasives“. Thesis, Clermont-Ferrand 1, 2011. http://www.theses.fr/2011CLF1MM20.

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Les carcinomes mammaires invasifs sont des tumeurs solides, au sein desquelles le fort pouvoir de prolifération des cellules cancéreuses entraîne la formation de zones hypoxiques. Les mécanismes cellulaires d’adaptation à la diminution des apports en oxygène sont principalement déterminés par des facteurs de transcription hétérodimériques induits par l’hypoxie (HIF-1 et HIF-2, hypoxia inducible factor). Le monomère alpha de ces complexes est déstabilisé en situation de normoxie. Les récepteurs aux facteurs de croissance épidermique (EGFR) peuvent également augmenter la traduction de l’ARNm codant ces monomères indépendamment de l’oxygène. La première partie de la thèse repose sur le développement de deux clones cellulaires fluorescents stables et inductibles par l’hypoxie, à partir d’une lignée de carcinome mammaire invasif triple négatif surexprimant le récepteur EGFR (MDA- MB-231). Le modèle CA9-GFP permet de restituer l’activité transcriptionnelle des complexes HIFs et le modèle GFP-P564 traduit la stabilité de leur sous-unité alpha. La fluorescence des deux modèles cellulaires est fortement induite en situation d’hypoxie (1% O2) et en présence d’agents mimétiques de l’hypoxie (cobalt, desferrioxamine et diméthyl-oxalyl glycine). Ces modèles ont ensuite été utilisés pour évaluer l’effet de trois thérapies anti-EGFR sur les voies de réponses à l’hypoxie. Le cétuximab et le lapatinib n’ont aucun effet sur la fluorescence des cellules alors que le géfitinib diminue l’intensité du signal en situation d’hypoxie. Ces différences sont associées à un impact similaire sur la migration et la viabilité cellulaire traduisant ainsi une sensibilité différentielle à ces trois composés anti-EGFR. La deuxième partie de la thèse s’est ensuite orientée vers la quantification par RT-qPCR de 45 gènes inductibles par l’hypoxie et impliqués dans le développement du cancer du sein sur une série rétrospective portant sur 32 exérèses de carcinomes mammaires invasifs précoces. Une analyse comparative des données a été effectuée en fonction des critères anatomo-pathologiques (stade, grade, statut en récepteur HER2, rechute). Une surexpression coordonnée de l’ensemble des gènes est observée dans les tumeurs de haut grade, HER2+ et pour les sujets ayant récidivé. La comparaison des groupes « rechute » versus « non rechute » a permis de sélectionner six marqueurs de référence s’exprimant de manière significative. Elle permet en outre la réalisation d’un algorithme basique de classement des individus en fonction du risque de récidive. Celui-ci a été validé par la construction de courbes de survie (méthode de Kaplan-Meier et test du Mantel-Haenszel). L’utilisation combinée des deux modèles cellulaires fluorescents permet l’identification et la caractérisation dynamique de molécules agissant directement ou indirectement sur les réponses cellulaires à l’hypoxie tumorale. L’analyse de l’expression de gènes connus pour leur profil agressif et régulés par le microenvironnement tumoral, constitue un outil clinique d’aide au pronostic des cancers du sein
The invasive breast cancers are solid tumors, wherein the proliferation of cells causes the formation of hypoxic zones. Cellular adaptive responses to reduced oxygen concentrations are mainly determined by heterodimeric transcription factors induced by hypoxia (HIF-1 & HIF-2, Hypoxia Inducible Factors). The alpha subunits of HIF are rapidly degraded under normoxic conditions. HIF complexes are also regulated by activation of epidermal growth-factor receptor (EGFR) signaling pathways in an oxygen-independent manner. The first part of this work was to develop stable fluorescent clones for examining responses to hypoxia from a metastatic triple-negative breast cancer cell line overexpressing EGFR (MDA-MB-231). The Ca9-GFP and GFP-P564 cell models allow to assess HIF activity and alpha subunits stability, respectively. In both models, fluorescence signals were strongly increased with hypoxia-mimicking reagents (cobalt, desferrioxamine and dimethyl-oxalyl glycine) and under hypoxia (1% O2). The impact of three EGFR inhibitors on HIF activity and stability was assessed. Cetuximab and lapatinib did not affect the signal induced by hypoxia, whereas gefitinib sharply reduced its intensity in both models. The differential effect of these three EGFR-targeted therapies on hypoxia responses was correlated with a similar impact on viability and cell migration. The second part of this work focused on the relative quantification using qPCR analysis of 45 genes involved in hypoxia responses and in the development of breast cancer, from a retrospective series of 32 tumor samples from patients with early- stage invasive breast cancer. A comparative analysis was performed according to anatomo-pathological criteria (stage, grade, HER2 status, and relapse). A coordinated overexpression of all genes was observed in high-grade and HER2+ tumors and in the group of patients that relapsed. The comparison of gene expression between "relapse" and "no relapse" groups was used to identify six reference markers. It also allowed to develop a basic algorithm to classify patients according to the risk of relapse. This algorithm was validated by constructing survival curves (Kaplan-Meier method and Mantel-Haenszel test). Combined use of two fluorescent cell models allows identification and dynamic characterization of compounds able to directly or indirectly inhibit cellular responses to tumor hypoxia. Analysis of gene expression known for their aggressive character and regulated by the tumor microenvironment is a clinical tool for assessing breast cancer prognosis

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Gonçalves, Maia Maria João. „Le syndrome Xeroderma Pigmentosum : Un nouveau modèle pour l’étude du rôle des fibroblastes dans la modulation de la réponse immunitaire innée contre les cellules cutanées cancéreuses“. Electronic Thesis or Diss., Université Côte d'Azur (ComUE), 2019. http://www.theses.fr/2019AZUR4037.

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L’étiologie des cancers cutanées est liée à des mutations génétiques résultant de l’exposition aux rayonnements ultraviolets (UV) émis par le soleil. La propagation des cellules cancéreuses dépend aussi des interactions avec les cellules présentes dans le microenvironnement circulant, notamment des fibroblastes associés au cancer (FAC) et des cellules immunitaires. Xeroderma pigmentosum (XP) est une maladie génétique qui comprend 7 groupes de complémentation génétique (XP-A à XP-G). Les patients XP présentent une déficience du mécanisme de réparation des lésions de l’ADN provoquées par les UV. Ces patients sont susceptibles au développement précoce de très nombreux cancers cutanées. XP-C est le groupe de complémentation le plus représenté en Europe. Chez ces patients, les carcinomes spino-cellularies (CSC) sont plus fréquents que les carcinomes baso-cellulaires (CBC) (taux 5 : 1). Les CSC ont un potentiel métastatique plus élevé que les CBC. Des travaux précédents ont suggéré que la réponse immunitaire chez les patients XP pouvait être altérée, incluant un déficit de l’activité cytolytique des cellules Natural Killer (NK) et une diminution du nombre des lymphocytes T circulants.L’objectif central de cette thèse était, d’identifier des facteurs du microenvironnement impliqués dans la progression des cancer cutanées agressifs, en prenant comme modèle de susceptibilité au cancer, des cellules de patients XP-C. Une analyse transcriptomique comparant les fibroblastes WT et des patients XP-C a permis d’identifier que CLEC2A, un ligand activateur du récepteur NKp65 des cellules NK, est exprimé par les fibroblastes WT mais pas par les fibroblastes XP-C. Nos travaux ont pu montrer une diminution du niveau d’expression de CLEC2A au cours de la sénescence réplicative ; une absence dans les FAC et dans les CSC et que, des facteurs solubles secrétés para les CSC diminuent l’expression de CLEC2A. Ces résultats suggèrent que la perte de CLEC2A peut induire un déficit d’activation des cellules NK au sein du microenvironnement tumoral et dans les dermes des patients XP-C. Par la suite, nous avons élaboré un modèle de culture de peau 3D, dans lequel nous avons introduit des cellules NK, en présence ou absence d’anticorps bloquants CLEC2A. Ce modèle nous a permis de montrer que l’interaction CLEC2A/NKp65 régule l’invasion des CSC via un dialogue entre fibroblastes et cellules NK. Nos résultats suggèrent que l’expression de CLEC2A dans les fibroblastes WT contribue à la surveillance immunitaire dans la peau et que son absence, par des facteurs encore inconnus, favorise le développement des cancers agressifs chez les patients XP-C. CLEC2A peut être une cible dans le combat contre la progression des CSC
Skin cancer etiology is related to genetic mutations arising after ultraviolet (UV) sun exposure. The propagation of cancer cells is also dependent of a crosstalk with cells present in the surrounding microenvironment, mainly cancer associated fibroblasts (CAF) and immune cells. Xeroderma pigmentosum (XP) is a genetic disease that comprises seven groups of genetic complementation (XP-A to XP-G). XP patients present a default in the mechanism responsible for the repair of UV-induced DNA lesions. They are prone to develop skin cancers with high frequencies early in their life. XP-C is the most represented complementation group in Europe and in XP-C patients squamous cell carcinoma (SCC) are more frequent than basal cell carcinoma (BCC) (ratio 5:1). SCC have high metastatic potential compared to BCC. Previous studies suggested that the immune responses in XP patients could be altered with defects in their NK lytic activity and a decrease in the levels of circulating T lymphocytes. The main objective of this thesis was to identify microenvironment factors that could contribute to the progression of aggressive skin cancers using XP-C disease cells as a model of skin cancer susceptibility. Comparative transcriptomic analysis of WT and XP-C dermal patient’s fibroblasts revealed that CLEC2A, a ligand of the activating NK receptor NKp65 implicated in the activation of the innate immune system, is expressed in WT fibroblasts and absent in XP-C fibroblasts. Additional work showed that CLEC2A level is decreased in WT fibroblasts during replicative senescence, is absent in CAF and SCC, and is down regulated by soluble factors secreted by SCC cells. These results suggest that the loss of CLEC2A may induce a deficit of NK cell activation in the tumor microenvironment of SCC and in the dermis of XP-C patients. Elaboration of 3D skin culture models including NK cells and, in the presence or absence of blocking anti-CLEC2A antibody, allowed us to show that CLEC2A/NKp65 interaction regulates SCC cells invasion through a crosstalk between fibroblasts and NK cells. Our results suggest that the expression of CLEC2A in fibroblasts contributes to skin immune surveillance while, conversely, its absence under yet unidentified factors, favors the development of aggressive cancers in XP-C patients. CLEC2A could be a potential target in the fight against SCC progression

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Monnier, Justin. „Etude d'une nouvelle famille de peptides, les prokineticins, chez l'homme : rôle dans l'angiogénèse tumorale et dans la modulation du système immunitaire inné“. Rennes 1, 2009. http://www.theses.fr/2009REN1B121.

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L’objectif de mon travail de thèse a été d’évaluer l’implication d’une nouvelle famille de peptides, les prokineticins, dans l’angiogénèse associée au carcinome hépatocellulaire (CHC), ainsi que dans la régulation de chimiokines dans les cellules monocytaires. Les résultats de mes travaux ont montré que les prokineticins n’étaient pas associés à l’angiogénèse du CHC. De plus, nous montrons que PROK2 ainsi que les deux récepteurs PROKR1 et PROKR2 sont spécifiquement exprimés par les cellules de Kupffer qui sont les macrophages résidents du foie. Cette expression spécifique de PROK2 aux macrophages résidents du foie nous a amenés à étudier plus précisément leurs rôles dans des cellules myéloïdes. En utilisant des monocytes humains fraîchement préparés ainsi que des macrophages et des cellules dendritiques différenciés à partir des mêmes monocytes, nous démontrons que les prokineticins activent spécifiquement 3 chimiokines : CCL4, CXCL1, et CXXL8

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Girard, Pauline. „Pathophysiologie des pDCs et des Lymphocytes Tγδ en contexte de mélanome, et potentiel de leur interaction pour le développement de nouvelles thérapies The features of circulating and tumor-infiltrating gdT cells in melanoma patients display critical perturbations with prognostic impact on clinical outcome Potent Bidirectional Cross-Talk Between Plasmacytoid Dendritic Cells and γδT Cells Through BTN3A, Type I/II IFNs and Immune Checkpoints“. Thesis, Université Grenoble Alpes, 2020. http://www.theses.fr/2020GRALV042.

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.Les pDCs et Tγδ ont des rôles cruciaux dans l’initiation et l’orientation des réponses immunitaires. Leurs fonctions uniques, leur grande plasticité et leur capacité d’interagir avec de nombreux acteurs immunitaires leur permettent de créer un lien entre l’immunité innée et l’immunité adaptative. Elles contribuent donc grandement aux réponses immunitaires protectrices et pathogéniques, et sont de ce fait très prometteuses pour le développement d’immunothérapies anti-tumorales, autant en tant que vecteurs que cibles. Cependant, les lymphocytes Tγδ n’ont pas été étudiés de manière approfondie en contexte de mélanome, et les interactions entre pDCs et Tγδ n’ont été explicitées ni en contexte sain, ni en contexte mélanome, ou le contrôle immunitaire de la tumeur ‡ long terme est encore un défi. Nous avons réalisé une étude détaillée du phénotype et de la fonction des lymphocytes Tγδ circulant et infiltrant le mélanome, et analysé leur impact sur l’évolution clinique. Nous avons aussi caractérisé les interactions bidirectionnelles entre les pDCs et les Tγδ issus de sang de donneurs sains, et de sang ou de tumeur de patients. Nous avons mis en évidence que le mélanome détourne les fonctions effectrices des Tγδ dans le but d’échapper au contrôle immunitaire, et que les caractéristiques des Tγδ issus de sang ou de tumeurs de patients peuvent étre des bio-marqueurs prometteurs d’évolution clinique. Nous avons également montré que les interactions entre pDCs et Tγδ sont médiées par les IFNs de type I et II et par le récepteur BTN3A, essentiel pour l’activation des Td2+, et sont dérégulées en contexte de mélanome. L’administration de cytokines et d’anticorps ciblant les points de contrôle immunitaire peut rétablir des interactions fonctionnelles entre les deux populations cellulaires. De façon intéressante, nous avons observé une augmentation de l’expression de BTN3A sur les pDCs et Tγδ issus de sang de patients ou de tumeurs, tout en soulignant une potentielle dysfonction de cette molécule. Notre étude révèle que le mélanome détourne les interactions entre pDCs et Tgd notamment via la dérégulation de BTN3A. De tels résultats motivent l’exploitation de ces effecteurs immunitaires ainsi que de leur synergie, pour développer de nouvelles approches thérapeutiques exploitant leur potentiel anti-tumoral tout en évitant leur détournement par la tumeur pour améliorer l’évolution clinique des patients. Nos découvertes soutiennent l’exploitation de ces partenaires puissants et prometteurs pour élaborer de nouvelles stratégies thérapeutiques et restaurer des réponses immunes appropriées en contexte de cancer, infections et auto-immunité
Both pDCs and γδT cells harbor critical roles in immune responses induction and orientation. Their unique features, high functional plasticity and ability to interact with many immune cell types allow them to bridge innate and adaptive immunity. They actively contribute to protective and pathogenic immune responses, which render them very attractive both as targets and vectors for cancer immunotherapy. Yet, γδT cells have not been extensively explored in melanoma, and despite strategic and closed missions, cross-talks between pDCs and γδT cells have not been deciphered yet, neither in healthy context nor in cancers, especially in melanoma where the long-term control of the tumor still remains a challenge. We provided here a detailed investigation of the phenotypic and functional properties of circulating and tumor-infiltrating γδT cells in melanoma patients, as well as their impact on clinical evolution. We also characterized the bidirectional cross-talks between pDCs and γδT cells both from healthy donor’s blood, patient’s blood and tumor micro-environment. Our study highlighted that melanoma hijacked γδT cells to escape from immune control, and revealed that circulating and tumor-infiltrating γδT cell features are promising potential biomarkers of clinical evolution. We also demonstrated crucial bidirectional interactions between these key potent immune players though type I and II IFN and BTN3A that are dysfunctional in the context of melanoma. Reversion of the dysfunctional bidirectional cross-talks in melanoma context could be achieved by specific cytokine administration and immune checkpoint targeting. We also revealed an increased expression of BTN3A on circulating and tumor-infiltrating pDCs and γδT cells from melanoma patients but stressed out its potential functional impairment.Thus, our study uncovered that melanoma hijacked pDCs/ γδT cells bidirectional interplay to escape from immune control, and pointed out BTN3A dysfunction. Such understanding will help harnessing and synergizing the power of these potent immune cells to design new therapeutic approaches exploiting their antitumor potential while counteracting their skewing by tumors to improve patient outcomes. Our findings pave the way to manipulate these potent and promising cell partners to design novel immunotherapeutic strategies and restore appropriate immune responses in cancers, infections and autoimmune diseases

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Dissertationen zum Thema „Microenvironnement immunitaire des tumeurs“

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