Auswahl der wissenschaftlichen Literatur zum Thema „Maladie de Verneuil – Cytologie“

L’hidradénite suppurée (HS) est une dermatose inflammatoire chronique affectant 1% de la population française. Les lésions se présentent sous forme d’abcès et de fistules très douloureux dans les zones riches en poils notamment les aisselles et la zone périnéale. L’HS est la maladie dermatologique avec la plus faible qualité de vie. En effet, les patients HS présentent une souffrance psychologique importante se traduisant par une honte vis-à-vis de leurs lésions, une isolation sociale et le développement d’états dépressifs. De nos jours, les traitements proposés ne permettent pas la guérison mais seulement une amélioration des symptômes. L’HS est communément décrite comme une maladie atteignant le follicule pileux. En effet, l’occlusion du follicule entraînerait sa rupture et la dissémination de bactéries et de kératine dans le derme initiant une inflammation qui deviendrait chronique. Notre équipe s’intéresse aux cellules de la gaine externe du follicule pileux que l’on nomme ORS pour Outer Root Sheath cells. Nous avons montré que les ORS isolées à partir de patients HS (ORS-HS) présentaient un phénotype pro-inflammatoire se traduisant par la sécrétion spontanée de deux chimiokines, CXCL10 et CCL5. Le but de ma thèse était d’identifier les mécanismes moléculaires et cellulaires à l’origine du phénotype pro-inflammatoire des ORS-HS. Nous avons posé l’hypothèse qu’une dérégulation du cycle cellulaire des ORS entraînerait un stress réplicatif et une accumulation d’ADN cytoplasmique qui induirait la production d’IFN de type I via STING. L’analyse transcriptomique des ORS-HS a mis en évidence une signature IFN de type I et une dérégulation des gènes du cycle cellulaire. L’étude clonotypique des ORS-HS confirme une augmentation du potentiel de prolifération des ORS-HS. De plus, l’analyse par cytométrie de flux des populations des cellules du follicule pileux a révélé l’absence de la population cellules souches quiescentes CD200+ CD34- CD49f+ CytoK15high en faveur des cellules progénitrices prolifératives CD200+ CD34- CD49f+ CytoK15lowchez les patients HS. La capacité augmentée de prolifération des ORS-HS nous a conduit à analyser leur cycle cellulaire. Nous avons montré une accumulation d’ORS-HS en phase S. Afin de déterminer si cette accumulation était lié à un stress réplicatif, nous avons étudié la vitesse de la fourche de réplication de l’ADN. Nous avons observé une altération de la vitesse de la fourche de réplication de l’ADN et une activation spontanée de la voie ATR-CHK1, voie activée lors des dommages à l’ADN, dans les ORS-HS. Des études récentes ont montré que les dommages à l’ADN menaient à la formation de micronuclei qui en se dissociant libéraient l’ADN dans le cytosol et activaient le senseur STING. Les ORS-HS présentaient plus de micronuclei et une accumulation d’ADN cytosolique comparés aux ORS-HD. L’étude des ORS-HS transfectées par des siRNA dirigés contre STING et IFI16, montre une diminution des transcrits de l’IFNb. Ces résultats suggèrent l’implication de la voie IFI16/STING dans la signature IFN de type I des ORS-HS. Nos résultats révèlent qu’un défaut de l’homéostasie des HFSC serait le primum movens de la maladie et initierait une boucle inflammatoire. Le stress réplicatif des ORS-HS, les dommages à l’ADN ainsi que la voie STING seraient impliqués dans ce mécanisme. L’inflammation pourrait également contribuer à la perturbation de l’homéostasie des HF-SC ce qui créerait un cercle vicieux inflammatoire. Durant notre étude, nous avons remarqué l’existence de deux groupes de patients : un groupe présentait un stress réplicatif et une activation des voies de dommages à l’ADN élevé alors que l’autre groupe était plus faible pour ces deux paramètres. Il serait intéressant de définir de nouveaux biomarqueurs permettant de distinguer ces deux groupes de patients afin de proposer des thérapies ciblées
Role of hair follicle stem cells in hidradenitis suppurativa physiopathologyHidradenitis suppurativa (HS) is a chronic inflammatory dermatosis which affects 1% of the French population. Lesions are painful and characterized by abcesses, fistulaes and malodorous discharges. They appear in hair rich skin areas like the armpits, the pubis and the buttock. HS causes a high extent of emotional and physical distress, as well as social embarrassment, isolation and depression, making it the common dermatosis which leads to the most severe impairment of quality of life. As most treatments have been unsatisfactory, and as there are many recurrences, HS remains difficult to cure.HS appears to be a primary abnormality in the pilosebaceous-apocrine unit, which leads to follicular occlusion, perifollicular cyst development which traps commensal microbes, and rupture into the dermis. Our team focused on hair follicle cells and especially Outer Root Sheath Cells (ORS). We previously showed that ORS isolated from hair follicle of HS patients (HS-ORS) spontaneously secrete IP10 (CXCL10) and RANTES (CCL5). The aim of my thesis is to characterize molecular and cellular mechanisms involved in this pro-inflammatory phenotype of HS-ORS. We hypothesized that cell cycle deregulation in the ORS leads to replication stress and accumulation of cytoplasmic ssDNA, inducing IFN synthesis involved in the establishment of chronic inflammation.First, we performed a transcriptomic analysis of HS-ORS, which revealed an interferon signature and an alteration of cell cycle pathways. Colony-forming efficiency assay of ORS showed a much higher colony-forming ability of HS-ORS compared to healthy donor (HD)-ORS. We highlighted the loss of quiescent hair follicle stem cell population described as CD200+ CD34- CD49f+ CytoK15high cells and an increased number of proliferating cells in HS patients. The increased number of proliferating ORS cells in HS patients led us to analyse their cell-cycle distribution. The percentage of ORS in S phase was increased in HS patients. We next asked whether this was due to increased replication stress, which is defined as a global perturbation of the DNA replication program altering the speed of replication forks and activating the ATR-CHK1 pathway. We observed that the progression of replication fork was severely altered in HS-ORS. Moreover, the ATR-CHK1 pathway was spontaneously activated in HS-ORS cells. Recent evidence indicates that micronuclei formation is increased upon DNA damage and their rupture exposes DNA to cytosolic nucleases and activates the STING pathway. We observed an accumulation of ssDNA and micronuclei in the cytoplasm of HS-ORS. Thus we analyzed STING pathway. In HS patients, ORS lacking STING expressed reduced levels of IFN-β transcripts compared to ORS transfected with a scramble siRNA. Lastly, we revealed that STING activation was mediated by the DNA binding protein IFI16.We report the first mechanistic analysis of the etiology of HS in the hair follicle stem cells (HF-SC) compartment. Our results suggested that modifications of HF-SC homeostasis are the primum movens to initiate an inflammatory loop. Replicative stress leads to genomic DNA damage triggering inflammatory response through IFI16-STING pathway. Inflammation could also contribute to the perturbation of HF-SC homeostasis which perpetuates the inflammatory circle. Future work will focus on mechanisms which lead to quiescence loss of HF-SC. During our study, we noticed two groups of HS patients: one with high replicative stress and DNA damage activation and another with moderate replicative stress and DNA damage activation. It would be of interest to define new biomarkers to distinguish these two groups of patients in order to propose personalized treatment

Ce travail de thèse porte sur le développement de modèles cellulaires murins de l'ataxie de Friedreich, maladie neurodégénérative autosomique récessive due à une perte de fonction de la frataxine. Le premier modèle reproduit le déficit partiel en frataxine observé chez la grande majorité des patients, grâce à l'utilisation d'un ribozyme. Ce modèle cellulaire a été utilisé pour cribler une chimiothèque d'un millier de composés à la recherche de molécules thérapeutiques. J'ai par la suite mis en place une stratégie d'invalidation complète du gène murin de la frataxine par utilisation d’une recombinase fluorescente et d’un allèle conditionnel. Alors que l'invalidation complète de la frataxine dans des fibroblastes immortalisés entraîne un phénotype létal, l'expression transgénique de différents variants de frataxine humaine porteurs de mutations faux-sens (G130V et I154F) permet de restaurer la viabilité des cellules totalement déficientes en frataxine murine endogène. Ces premiers modèles cellulaires porteurs de mutations faux-sens présentent un phénotype spécifique de la pathologie , corrélé à la sévérité clinique des mutations
Friedreich ataxia (FRDA) is an autosomic recessive neurodegenerative disease due to a loss of function of frataxin. My thesis project was to develop cellular models to unravel frataxin function and FRDA physiopathology and to identify new therapeutic molecules. The first model reproduced frataxin partial deficiency, as observed in a vast majority of patients, by using a ribozyme strategy targeted against murine frataxin. This cellular model has been used to screen a one-thousand compounds library for therapeutic molecules. Moreover I have set up a strategy based on complete inactivation of the murine frataxin gene by using a fluorescent recombinase associated with frataxin conditional allele. Complete frataxin deficiency in murine immortalized fibroblasts led to cell death. However this lethal phenotype could be rescued by transgenic expression of some human frataxin missense mutants (G130V and I154F). These first missense mutants cellular models displayed a spontaneous phenotype specific for Friedreich ataxia and the severity of the model was correlated with the clinical consequences of the mutations

La maladie de Gaucher (MG) est une maladie génétique rare due à un déficit de l'enzyme Glucocérébrosidase qui entraine une altération du métabolisme des glucosphingolipides et leur accumulation dans les monocytes/macrophages. Les atteintes viscérales, osseuses et hématologiques sont les symptômes principaux de la MG. L'étude des paramètres hématologiques des patients anémiés montre qu'ils présentent i) un nombre de réticulocyte circulant non-adapté au degré de l'anémie, ii) une concentration élevée de l'Erythropoïétine et du Growth differentiation factor-15, iii) mais ne présentent aucun indice plasmatique lié à une hémolyse. Ces données suggèrent une origine centrale de l'anémie dans la MG. Les expériences d'érythropoïèse in vitro réalisées à partir de CD34+ issus de patients atteints de la MG ont révélé une accélération de la différenciation érythroïde comparé aux contrôles. Cette dysérythropoïèse est observée en présence, mais aussi en l'absence des macrophages, suggérant une anomalie intrinsèque aux progéniteurs érythroïdes Gaucher. Les précédents travaux du laboratoire ont montré que les globules rouges (GR) des patients atteints de la MG possèdent des propriétés anormales. L'étude de l'effet du traitement par enzymothérapie de substitution (ERT) sur ces propriétés a montré que l'ERT normalise les anomalies morphologiques et celles liées à la déformabilité des GR. En revanche l'ERT n'a pas d'effet sur l'adhérence et l'agrégation des GR. Ces propriétés étant essentielles à la circulation normale des GR, nos résultats suggèrent une implication des GR dans les phénomènes de vaso-occlusion et d'infarctus osseux dans la MG qui persistent parfois malgré l'ERT
Gaucher disease (GD) is an inherited rare disease caused by P-Glucocerebrosidase deficiency, leading to glycosphingolipid accumulation in cells of the mononuclear-macrophage lineage. Visceral enlargement, bone involvement, thrombocytopenia and mild anemia are the major manifestations of GD. We investigated the hematological characteristics of GD patients. We did not find any index related to hemolysis but some features of anemia with a central origin were evidenced. Lndeed, anemic patients exhibit low reticulocyte counts than expected, despite elevated erythropoietin, Growth differentiation factor-15 and soluble Transferrine receptor's levels (markers of ineffective erythropoiesis) in plasma. In vitro erythropoiesis experiences from peripheral CD34+ cells revealed an accelerated differentiation of erythroid progenitors in GD patients when experiments were performed with, but even without macrophages (MP), suggesting an inherent defect in erythroid progenitors. Our previous studies demonstrated red blond cells (RBC) abnormalities in GD. We studied the effects of enzyme replacement therapy (ERT) on RBC abnormalities. We showed that ERT normalized morphological and deformability defects of GD RBC but not their adherence and aggregation properties. These results suggested a role of RBCs in vaso-occlusion crises and bone infarcts in GD and could explain the persistence of these symptoms in some treated patients. These experiments demonstrate an anemia with central defect and the dyserythropoiesis independently of MP defects in GD. They confirm RBC abnormalities, in part normalized by the ERT and highlight the role of the erythroid compartment in the physiopathology of GD

L’hidrosadénite suppurée (HS) ou maladie de Verneuil, est une maladie cutanée orpheline fréquente qui touche 1 % de la population générale. Elle se manifeste par des lésions inflammatoires récidivantes ou chroniques des plis axillaires, inguinaux et périnéaux. La sévérité clinique de la maladie varie selon les patients. Les lésions les moins sévères (lésions de stade 1 dans la classification de sévérité clinique de Hurley) sont des nodules inflammatoire centimétriques pouvant évoluer vers l’abcédation. Les lésions les plus sévères (lésions de stade 2 et 3 de Hurley) sont des lésions suppurées étendues et chroniques. Sur le plan histologique, la lésion primitive de l’HS semble être une hyperplasie de l’épithélium du follicule pileux. La physiopathologie de la maladie est mal connue et probablement multifactorielle, incluant des facteurs génétiques, hormonaux, infectieux et dys-immunitaires. Il a été montré récemment qu’une antibiothérapie à large spectre pouvait permettre d’obtenir une rémission clinique prolongée des lésions inflammatoires de l’HS. Objectif du travail : L’objectif principal de ce travail était d’identifier par des techniques de culture classique et de métagénomique bactérienne les espèces ou les flores bactériennes spécifiquement associées aux lésions d’HS des trois stades de sévérité clinique. Résultats : Nous avons identifié par culture bactérienne deux profils bactériens lésionnels. Le premier était représenté par Staphylococcus lugdunensis, et plus rarement par d’autres espèces bactériennes de la flore cutanée commensale (Propionibacterium acnes, staphylocoques à coagulase négative et Staphylococcus aureus). Le second correspondait à une flore anaérobie composée de bactéries anaérobies stricts, d’Actinomycetes et de streptocoques du groupe milleri. L’approche métagénomique a permis d’identifier les germes anaérobies stricts associés aux lésions : des cocci à Gram positif de la flore cutanée (principalement Anaerococcus spp., Peptoniphilus spp., Finegoldia spp.) des bacilles à Gram négatif anaérobies n’appartenant pas à la flore cutanée (Prevotella spp., Porphyromonas spp., Fusobacterium spp), Veillonellaceae et Corynebacteriaceae. Ce profil était caractéristique des lésions suppurées chroniques de stade 2 et 3 et était également associé à certaines lésions de stade 1. Les lésions des stades 2 et 3 présentaient une diversité bactérienne supérieure à celle des lésions de stade 1, avec un nombre plus élevé de taxons très minoritaires dans la flore cutanée (Fusobacteria, Bacteroidetes, Peptococcaceae, Erysipelotrichales). Conclusion : Cette étude démontre que certaines espèces bactériennes sont spécifiquement associées aux lésions d’HS. Ces espèces sont impliquées dans des infections cutanées, mais aussi dans des infections sévères, ce qui témoigne de leur pathogénicité. L’efficacité des antibiotiques chez les patients et les résultats de cette étude suggèrent qu’un processus infectieux participe à la présentation clinique de l’HS. Notre hypothèse est que ces infections surviennent en raison d’une anomalie primitive de la barrière cutanée folliculaire
Hidradenitis suppuratiav (HS) is an orphan skin inflammatory disease disease characterized by chronic or recurrent inflammatory lesions localized in the armpits, the inguinal and perineal folds. With a 1% prevalence of a general population, HS is an public health issue. The clinical severity of the disease is heterogeneous among patients. Most patients present the mild form of the disease with inflammatory nodules and abscesses (Hurley stage 1 lesions). More severe patients show extended chronically suppurating lesions (Hurley stage 2 and Hurley stage 3 lesions). The primary histological lesion of HS is characterized by epidermal follicular hyperplasia and perifollicular inflammation. The physiopathology of HS remains unclear. HS is probably a multifactorial disease, involving genetical, immunological and infectious factors. Indeed, wide-spectrum antibiotic treatments can significantly improve or induce prolonged clinical remissions of HS inflammatory lesions. Objective: The main objective of this work was to identify the bacterial species or flora specifically associated with Hurley stage 1, 2 and 3, using prolonged aerobic and anaerobic culture and bacterial metagenomics (454 sequencing of 16Sr DNA libraries). Results. Using bacterial culture, we identified two bacterial profiles associated with HS lesions . The first one was represented by Staphylococcus lugdunensis and rarely by other skin commensals (Propionibacterium acnes, coagulase negative staphylococci and Staphylococcus aureus). Results. The second one corresponded to a mixted anaerobic flora including strict anaerobes, Actinomycetes and milleri group streptococci. The metagenomic approach allowed to identify the anaerobic flora associated with lesions : Gram positive cocci from the cutaneous flora (mainly Anaerococcus spp., Peptoniphilus spp., Finegoldia spp.) and Gram negative rods which do not belong to the cutaneous microbiota (Prevotella spp., Porphyromonas spp., Fusobacterium spp), Veillonellaceae and Corynebacteriaceae. This profile was typically associated with Hurley stage 2 and 3 lesions but was also observed in Hurley stage 1 lesions. Hurley stage 2 and 3 lesions presented an increased bacterial diversity as compared to Hurley stage 1 lesions, with a higher number of taxa taxa rarely associated with normal skin microbiota (Fusobacteria, Bacteroidetes, Peptococcaceae, Erysipelotrichales). Conclusion. This study demonstrate that particular bacterial species are specifically associated with HS lesions. These species are cause soft tissue and skin infections, but also in severe infections arguing for their pathogenicity. These data provide a rationale for antibiotic use in HS, and suggests that the disease may be due to a primitive immune defect of the follicular skin barrier

Les symptômes majeurs de la maladie de Parkinson (akinésie, rigidité et tremblement) ne s'expriment que lorsque la déplétion dopaminergique dans le striatum a atteint 60 à 80%. Ceci implique donc l'existence de mécanismes compensatoires permettant de retarder l'apparition des symptômes moteurs au cours de la phase préclinique. Parallèlement, l'étude du modèle primate intoxiqué au MPTP a révélé la possibilité d'une récupération spontanée systématique des symptômes moteurs (Mounayar et al., 2007), suggérant également l'existence de mécanismes de compensation. Nous pensons que les mécanismes de compensation permettant la récupération des singes pourraient correspondre, au moins en partie, à ceux qui retardent l'apparition des symptômes dans la phase précoce de la maladie humaine. Nous avons donc étudié la récupération fonctionnelle observée chez le singe, afin de pouvoir identifier les processus mis en jeu. Nous nous sommes particulièrement intéressés au rôle que pourraient jouer la dopamine (DA) et la sérotonine (5-HT). Nous avons également cherché à savoir si les mécanismes de compensation prenaient leur origine au sein du striatum ou dans d'autres structures des ganglions de la base (tel que le GPe), ainsi que l'influence que pouvaient avoir les différents territoires (sensori-moteur et associativo-limbique). Pour cela, nous avons utilisé 4 approches : 1. Comportementale avec la cotation des symptômes et la réalisation de tâches abordant des processus exécutifs; 2. pharmacologique en utilisant la technique de micro-injections d'antagonistes et agonistes de la DA et la 5-HT, pour tenter de bloquer ou mimer de façon réversible les mécanismes de compensation chez des singes ayant récupéré ; 3. neuroimagerie TEP afin de confirmer la lésion DA suite à l'intoxication; 4. immunohistochimique afin de caractériser les dénervations dopaminergique et sérotoninergique dans le tissu cérébral des animaux récupérés. Par la suite, nous avons cherché à comprendre si une lésion sérotoninergique chronique et définitive pourrait permettre une réapparition de symptômes parkinsoniens compensés par le système 5-HT. Dans ce but, nous avons effectué une 2e intoxication sur les animaux récupérés en utilisant du MDMA (ecstasy). Ce travail a permis de confirmer le rôle essentiel de la dopamine résiduelle dans les mécanismes de compensation, et ce dans les différents territoires du striatum et dans le pallidum. La sérotonine aurait, pour sa part, un rôle moins important dans les mécanismes de compensation qui serait limité à une action au niveau des territoires sensori-moteurs du striatum. Ailleurs, la sérotonine serait plutôt impliquée dans l'expression de certains symptômes non-moteurs de la maladie