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Dissertationen zum Thema „Infections à Pseudomonas aeruginosa – Thérapeutique“
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Alexandre, Youenn. „Développement d'une application oropharyngée de lactobacilles pour lutter contre les infections respiratoires à Pseudomonas aeruginosa“. Thesis, Brest, 2014. http://www.theses.fr/2014BRES0046/document.
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Pseudomonas aeruginosa est un pathogène opportuniste responsable de pneumonies. Il est particulièrement impliqué dans la mortalité des patients sous ventilation mécanique et des patients atteints de la mucoviscidose. Ces infections sont difficiles à traiter en raison de l’existence de nombreuses résistances aux antibiotiques chez cette bactérie et des alternatives thérapeutiques s’avèrent donc nécessaires. Nous avons ainsi émis l’hypothèse qu’une application oropharyngée de lactobacilles pourrait permettre de limiter les infections à P. aeruginosa et leurs effets chez les patients concernés. L’objectif principal de ce travail était d’évaluer les effets d’un mélange de lactobacilles dans un modèle murin de pneumonie à P. aeruginosa. Les effets de lactobacilles isolés dans les cavités orales de volontaires sains sur la formation de biofilm et l’activité élastolytique de P. aeruginosa PAO1 ont été mesurés in vitro. Les effets des lactobacilles sélectionnés ont ensuite été évalués dans un modèle d’infection de cellules épithéliales respiratoires(A549) par P. aeruginosa PAO1 puis dans un modèle murin de pneumonie à P. aeruginosa PAO1. Les effets de 87 lactobacilles sur la formation de biofilm et l’activité élastolytique de P. aeruginosa PAO1 ont été déterminés in vitro,aboutissant à la sélection de 3 et 5 souches ayant respectivement inhibé la formation de biofilm et l’activité élastolytique de P. aeruginosa PAO1. Parmi ces souches, L. fermentum K.C6.3.1E, L. paracasei ES.D.88 et L. zeae Od.76,qui étaient les souches les plus actives contre la formation de biofilm ou l’activité élastolytique et les plus acidifiantes lors de croissances dans une salive artificielle, ont été associées dans un mélange testé dans un modèle cellulaire d’infection à P. aeruginosa PAO1. Ce mélange n’a pas eu d’effet cytotoxique et a démontré un effet cytoprotecteur vis-à-vis de l’infection à P. aeruginosa PAO1. In vivo, l’administration intratrachéale de ces mêmes bactéries de façon prophylactique a permis d’une part de réduire les charges pulmonaires en P. aeruginosa PAO1 et d’autre part de réduire ses effets pro-inflammatoires au niveau pulmonaire (IL-6, TNF-α). Ces résultats prometteurs laissent entrevoir la possibilité de nouvelles applications thérapeutiques pour les probiotiquesPseudomonas aeruginosa is an opportunistic pathogen that causes pneumonia and which is involved in themortality of mechanically-ventilated or cystic fibrosis patients.These infections are difficult to treat because of the existence of many antibiotic resistances in P. aeruginosa and therapeutic alternatives are needed. Our hypothesis was that the use of probiotics could be an alternative to antibiotic therapy in order to reduce P. aeruginosa infections and its injurious and pro-inflammatory effects in lungs.The main goal of this work was to evaluate the effects of lactobacilli in a murine model of P. aeruginosa pneumonia.The first step of this work was to screen lactobacilli isolated from oral cavities of healthy volunteers against biofilmformation and elastolytic activity of P. aeruginosa PAO1. The effects of selected lactobacilli were then evaluated in amodel of infection of lung epithelial cells by P. aeruginosa PAO1 and in a murine model of P. aeruginosa PAO1pneumonia. Eighty-seven lactobacilli were tested in vitro, leading to the selection of 3 and 5 strains respectively active against biofilm formation and elastolytic activity. The most active strains (L. fermentum K.C6.3.1E, L. paracasei ES.D.88and L. zeae Od.76) toward biofilm formation and elastolytic activity were chosen to be tested in vitro, in a cell model of P. aeruginosa PAO1 infection. This mix showed cytoprotective effect against P. aeruginosa PAO1. Finally, the prophylactic intratracheal administration of the mix of lactobacilli in mice allowed to reduce the pulmonary loads in P.aeruginosa PAO1. In the same time, the pro-inflammatory effects(IL-6 and TNF- α) of the infection were reduced. These promising results suggest the possibility of new therapeutic applications for probiotics
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Fangous, Marie-Sarah. „Nouvelle thérapeutique anti-Pseudomonas aeruginosa dans la mucoviscidose : les Lactobacillus spp. Lactobacilli intra-tracheal administration protects from Pseudomonas aeruginosa pulmonary infection in mice – a proof of concept, in Beneficial Microbes 10 (8), December 2019 Prevalence and dynamics of Lactobacillus sp. in the lower respiratory tract of patients with cystic fibrosis, in Research in Microbiology 169 (4-5), May-June 2018“. Thesis, Brest, 2019. http://www.theses.fr/2019BRES0056.
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L’augmentation préoccupante de la résistance aux antibiotiques de Pseudomonas aeruginosa (PA) nécessite la recherche de thérapies alternatives telles que les Lactobacillus. Dans cette thèse, différents travaux ont été réalisés :1) Sur un modèle murin de pneumonie aigüe à PA, nous avons démontré l’effet bénéfique de l’administration intratrachéale d’un mélange de 3 souches de Lactobacillus provenant de lait ou de la cavité orale de patients sains.2) Nous avons ensuite prospectivement étudié la population en Lactobacillus des expectorations de patients atteints de mucoviscidose (CF). La prévalence moyenne de portage était de 61%.3) Parmi ces Lactobacillus issus de l’écosystème respiratoire des patients CF, nous avons constitué deux mélanges de 3 souches de Lactobacillus, sélectionnées pour leur activité anti-élastolytique et antipyocyanine in vitro. L’administration intranasale de ces mélanges à des souris C57Bl/6, 18h avant leur infection par PAO1, améliore significativement la survie à 7 jours des souris, ainsi que la clairance pulmonaire en PAO1 à 24h post-infection. Une diminution significative du recrutement pulmonaire des neutrophiles et des cytokines proinflammatoires était observée, associée à une augmentation de celle en IL-10.Ainsi, cette thèse démontre les effets bénéfiques de l’administration prophylactique des Lactobacillus par voie respiratoire sur la pneumonie aigue à PA. Ce résultat serait lié à l’immunomodulation de ces bactéries.Enfin, les propriétés contre l’élastase et la pyocyanine de ces souches in vitro ne présagent pas de leur activité in vivo, avec le mélange L. paracasei 9N, L. brevis 24C et L. salivarius 20C présentant seulement in vivo la meilleure activité (Brevet BIO17555)The alarming increase in antibiotic resistance of Pseudomonas aeruginosa (PA) requires studying alternative therapies, such as Lactobacillus. In this thesis, several studies were carried out:1) In a murine model of acute PA pneumonia, we have demonstrated the beneficial effect of intratracheal administration of a mixture of three Lactobacillus strains from milk or the oral cavity of healthy patients.2) We then prospectively studied the Lactobacillus population in sputum of patients with cystic fibrosis (CF). The average prevalence of carry was 61%.3) Lactobacillus from the respiratory ecosystem of CF patients were used to establish two mixtures of 3 Lactobacillus strains. Strains were selected for their antielastolytic and anti-pyocyanin effects in vitro.Intranasal administration of these mixtures to C57Bl / 6 mice, 18h prior to PAO1 infection significantly improves 7-day survival and pulmonary clearance of PAO1 24h postinfection.A significant decrease in lung neutrophil recruitment and pro-inflammatory cytokines was observed, while the production of IL-10 increased.This thesis demonstrates the beneficial effects of prophylactic respiratory administration of Lactobacillus on acute PA pneumonia. Anti-PA properties in vitro are not an indication of the in vivo activity. The mixture containing L. paracasei 9N, L. brevis 24C, and L. salivarius 20C show the best anti-PA activity (Patent BIO17555). This result is likely related to an immunomodulating effect of these bacteria
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Kheir, Saadé. „Etude d'une thérapie cellulaire par transplantation intrapulmonaire de macrophages dans le traitement d'une infection aigue à pseudomonas aeruginosa“. Thesis, Université de Paris (2019-....), 2019. http://www.theses.fr/2019UNIP7085.
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Pseudomonas aeruginosa (P.a) est un bacille Gram négatif responsable d’infections chroniques associées à une mortalité élevée due à la prédilection de la bactérie à développer une résistance aux antibiotiques et l’inefficacité des thérapies actuelles. Notre groupe a montré dans un modèle d’infection aigue chez la souris, que l’élastase B (LasB), un facteur de virulence de P.a, dégrade la cytokine IL-6 et la molécule antimicrobienne Elafine et que la surexpression de ces deux médiateurs confère une protection aux souris en diminuant l’inflammation et augmentant la réparation. Les macrophages alvéolaires représentent la population myéloïde la plus abondante dans l’espace alvéolaire et jouent un rôle clé dans le maintien de l’homéostasie, l’initiation & la résolution de l’inflammation. Compte tenu de leur importance, ils sont très étudiés dans le cadre de développement de nouvelles approches de thérapie cellulaire. Nous avons donc émis l’hypothèse que le macrophage alvéolaire qui est également cible de P.a et de LasB plus particulièrement, puisse être un outil adéquat pour le transfert de la protection IL-6- et Elafine-médiée. L’objectif principal de ce travail est de modifier le macrophage avec des vecteurs adénoviraux permettant la surexpression de l’IL-6 et de l’Elafine, et de l’utiliser comme un outil thérapeutique dans un modèle de transplantation intrapulmonaire suivie d’une infection par P.a. Nous montrons que le transfert de macrophages génétiquement modifiés avec l’IL-6 et l’Elafine est protecteur. L’Elafine induit dans le macrophage une signature IL6/IL10/peptides antimicrobiens qui, en synergie avec l’IL-6, confère un phénotype régulateur à l’unité alvéolairePseudomonas aeruginosa (P.a) is a Gram-negative bacillus responsible for chronic infections associated with high mortality due to the bacterium's predilection for developing antibiotic resistance and the inefficacy of current therapies. Our group showed in a model of acute infection in mice that Elastase B (LasB), a virulence factor of Pa, degrades the cytokine IL-6 and the antimicrobial molecule Elafine and that the overexpression of these two mediators provides protection to mice by decreasing inflammation and increasing repair. Alveolar macrophages represent the most abundant myeloid population in the alveolar space and play a key role in maintaining homeostasis, initiation and resolution of inflammation. Given their importance, they are very much studied in the development of new approaches to cell therapy. We therefore hypothesized that the alveolar macrophage which is also targeted by P.a and LasB more particularly, may be an adequate tool for the transfer of IL-6- and Elafine-mediated protection. The main objective of this work is to modify the macrophage with adenoviral vectors allowing the overexpression of IL-6 and Elafine, and to use it as a therapeutic tool in an intrapulmonary transplantation model followed by a Pa infection We show that the transfer of genetically modified macrophages with IL-6 and Elafine is protective. Elafine induces in the macrophage an IL6 / IL10 / antimicrobial peptide signature which, in synergy with IL-6, confers a regulatory phenotype to the alveolar unit
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Loupias, Pauline. „Synthèse et étude d'analogues de sidérophores à large spectre antibactérien“. Thesis, Amiens, 2020. http://www.theses.fr/2020AMIE0032.
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Ce travail de thèse a consisté à exploiter une nouvelle stratégie thérapeutique pour lutter contre Pseudomonas aeruginosa et Burkholderia pseudomallei, deux bactéries à Gram-négatif particulièrement préoccupantes. Alors que P. aeruginosa qui fait partie des bactéries ESKAPE est responsable de la majorité des infections nosocomiales, B. pseudomallei, anciennement classifiée dans le groupe de Pseudomonas, est impliquée dans la maladie de Whitmore et est considérée par les CDC comme une arme bioterroriste potentielle. Ces deux pathogènes possèdent des résistances naturelles et acquises à de nombreux antibiotiques par efflux ou via un défaut de perméabilité membranaire, ce qui rend les traitements difficiles. Devant cette urgence sanitaire, l'exploitation de la stratégie "Cheval de Troie", pour vectoriser les antibiotiques, peut permettre de restaurer leurs activités. Le fer constitue un micronutriment nécessaire à la survie des bactéries mais il est peu biodisponible du fait de sa faible solubilité dans l'eau. Pour l'acquérir, de nombreuses bactéries synthétisent des molécules de faible poids moléculaire, appelés sidérophores, capables de chélater le fer environnant. Les complexes formés sont alors reconnus spécifiquement par des récepteurs dépendants de TonB afin de transporter le fer au sein des bactéries. Selon leur type, les bactéries expriment différents récepteurs reconnaissant leurs sidérophores endogènes mais aussi des xénosidérophores ou des sidérophores synthétiques. L'utilisation de ces différents types sidérophores pour véhiculer un antibiotique ou un métal toxique tel que le gallium dans la bactérie a déjà conduit à des résultats prometteurs. Les objectifs de cette thèse étaient de synthétiser de nouveaux sidérophores de structure pipérazinique, de nouveaux conjugués sidérophore-antibiotiques et des complexes toxiques sidérophore-gallium. Des études physico-chimique et biologique ont aussi été menée afin de valider l'intérêt des structures choisies dans la chimiothérapie anti-infectieuseThis work consisted in exploiting a new therapeutic strategy to fight Pseudomonas aeruginosa and Burkholderia pseudomallei, two Gram-negative bacteria particularly concerning. While P. aeruginosa, which is part of the ESKAPE bacteria, is responsible for the majority of nosocomial infections, B. pseudomallei, formerly classified in the Pseudomonas group, is involved in Whitmore's disease and is considered by the CDC as a potential bioterrorist weapon. These two pathogens have natural and acquired resistance to many antibiotics by efflux or via a lack of membrane permeability, which makes treatment difficult. Facing this health emergency, the use of the "Trojan Horse" strategy to vectorize antibiotics can help restore their activities. Iron is a micronutrient necessary for the survival of bacteria, but it is not very bioavailable due to its low solubility in water. To acquire it, many bacteria synthesize molecules of low molecular weight, called siderophores, capable of chelating the surrounding iron. The complexes formed are then recognized specifically by TonB-dependent receptors in order to transport iron within bacteria. Depending on their type, bacteria express different receptors recognizing their endogenous siderophores but also xenosiderophores or synthetic siderophores. The use of these different kinds of siderophores to carry an antibiotic or a toxic metal such as gallium into the bacteria has already led to promising results. The objectives of this PhD were to synthesize new siderophores of piperazine structure, new siderophore-antibiotic conjugates and toxic siderophore-gallium complexes. Physico-chemical and biological studies were also carried out in order to validate the interest of the structures chosen in anti-infectious chemotherapy
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Lasry, Judith. „Les Pseudomonas aeruginosa dans l'environnement“. Paris 5, 1998. http://www.theses.fr/1998PA05P233.
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Wilton, Alison Jane. „Iron-regulated surface antigens of Pseudomonas aeruginosa“. Thesis, Aston University, 1989. http://publications.aston.ac.uk/12564/.
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Gharse, Sachin. „Antibacterial strategies for improved eradication of Pseudomonas aeruginosa infections“. Diss., University of Iowa, 2018. https://ir.uiowa.edu/etd/6110.
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Cystic fibrosis (CF) is a hereditary multi-organ disorder characterized by formation of thick, viscous mucus in the lungs, leading to decreased fluid clearance and significant bacterial colonization. The bacteria form colonies, called biofilms, that are attached to the mucosal surface and produce a protective polymeric matrix. The matrix helps the biofilms form stable structures in the lungs while also protecting the embedded bacterial colonies from the host defense system and antimicrobials. Pseudomonas aeruginosa are opportunistic bacteria that commonly infect CF airways in the biofilm form. Current antibiotic treatment regimens fail to completely eradicate these biofilms, leading to chronic, persistent infections that over time lead to patient death. Therefore, there is a need to investigate antibacterial strategies that would completely eradicate these infections at reasonable doses and improve quality of patients’ lives.
In this thesis, two strategies are investigated to better eradicate bacterial colonies – (1) the use of nutrient dispersion compounds for increasing the susceptibility of biofilm bacteria to the co-administered antibiotics, and (2) PEGylation of antimicrobial peptides to increase peptide retention in the lung airways.
Clinical strains of P. aeruginosa isolated from lungs of CF patients were used in this research to better mimic the greater robustness of clinical biofilms compared to biofilms of laboratory bacterial strains. Growth curve studies were carried out to characterize the growth patterns of the bacterial strains. Antibiotic susceptibility of the planktonic (free-flowing) bacteria was studied using the minimum inhibitory concentration (MIC) assay. A method to grow and characterize 1-day and 4-day old biofilms in the minimum biofilm eradication concentration (MBEC) assay apparatus was developed and characterized. The MBECs of combination formulations consisting of an antibiotic and a nutrient dispersion compound for different treatment durations were measured against biofilms of the clinical isolates using four commonly used antibiotics, and sodium citrate as the nutrient dispersion compound.
The growth curve studies allowed for better understanding of the clinical isolates’ growth rates in vitro, which could play an important role on their susceptibility to antibiotics. All bacterial strains displayed susceptibility to tobramycin sulfate and ciprofloxacin hydrochloride. Uniform bacterial growth was observed for 1-day old biofilms of both clinical isolates across all pegs. Growing 4-day old biofilms using 100% MHB without refreshing the bacterial suspension over 4 days gave uniform biofilm bacterial growth across the pegs. Four-day old biofilms displayed greater biomass than 1-day old biofilms for 2 out of 3 bacterial strains. Combination formulations eradicated 1-day and 4-day old biofilms at lower antibiotic concentrations than the antibiotic alone, with further improvement in eradication after increasing the duration of treatment. Sodium citrate did not enhance the metabolic activity of the biofilm bacteria.
The antimicrobial peptide CaLL was conjugated with different MW polyethylene glycol (PEG) molecules using disulfide and maleimide linkages, and the effect of PEGylation on its antibacterial activity against P. aeruginosa laboratory strain PAO1 was evaluated. PEGylation was observed to reduce bacterial growth inhibition by CaLL, with the disulfide-linked CaLL-PEG less efficacious than the maleimide-linked CaLL-PEG. Time-kill assays demonstrated the longer duration of action of PEGylated peptides compared to non-PEGylated peptides, probably due to prevention of enzymatic degradation of the peptide by the PEG molecule.
This research will shed light on antibacterial strategies for complete and rapid eradication of bacterial biofilms, thereby reducing development of antibiotic resistance and prevent recurrence of infection, reducing progressive lung damage caused in people with CF, and improve their quality of life.
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Bretonnière, Cédric. „Pneumonies à Pseudomonas aeruginosa : données expérimentales, pharmacologiques et microbiologiques“. Nantes, 2014. http://archive.bu.univ-nantes.fr/pollux/show.action?id=28f04d7c-22a3-4d1f-bd85-ce0e1e3a6785.
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Les pneumonies, notamment nosocomiales, sont fréquentes et grevées d'une mortalité et d'une morbidité élevées. Pseudomonas aeruginosa est au premier rang des bactéries responsables de ces infections et pose des problèmes préoccupants d'émergence de résistance aux antibiotiques. Dès lors, toute donnée microbiologique ou expérimentale pertinente est utile. Dans un premier temps, à partir d'un modèle d'infection pulmonaire aiguë chez le lapin, dont la particularité est la reproduction fidèle de la pharmacologie humaine, nous avons tenté de mettre au point un nouveau modèle d'infection pulmonaire chronique en utilisant une solution bactérienne avec des microbilles d'agarose. Nous avons utilisé le modèle d'infection aiguë pour évaluer l'efficacité de nouvelles molécules antibiotiques contre Pseudomonas aeruginosa. Ainsi, le dernier antibiotique de la classe des carbapénèmes, le doripénème, à différentes posologies et modes d'administration IV, a été comparé en termes d'efficacité aux 2 molécules de références, le méropénème et l'imipénème. Nous avons pu montrer que les posologies plus élevées de doripénème devaient être privilégiées. Nous avons également, dans ce même modèle, montré l'efficacité du ceftolozane. Cette nouvelle céphalosporine est aussi efficace que les comparateurs (ceftazidime, pipéracilline/tazobactam et imipénème) à posologie « usuelle » (1gX3/j) et plus efficace à doses plus élevées (2gX3/j). Enfin, nous avons comparé la sensibilité in vitro de 169 souches cliniques de Pseudomonas aeruginosa vis-à-vis des 3 carbapénèmes cités ci-dessus (imipénème, méropénème et doripénème) démontrant que ces 3 molécules sont au final assez prochesPneumonia, especially hospital acquired, is frequent and accounts for both high mortality and high morbidity. Pseudomonas aeruginosa is the main bacteria responsible for these infections and is cause for concern with emerging antibiotic resistance. Therefore, any relevant microbiological or experimental data may be useful. From an experimental model of acute lung infection in rabbits, whose particularity is the faithful reproduction of human pharmacology, we tried try to develop a new model of chronic pulmonary infection by using a bacterial solution with agarose micro-beads. The results of these experiments are presented. We used the acute infection experimental model to evaluate the efficacy of new antibiotics against Pseudomonas aeruginosa. Thus, doripenem, lasted available carbapenem, at different doses and routes of IV administration, was compared to the two reference drugs, meropenem and imipenem. We have shown that higher doses of doripenem should be preferred. We also, in the same acute model, evaluated the efficacy of ceftolozane, newer cephalosporin, versus the following drugs: ceftazidime, piperacillin / tazobactam and imipenem. At usual doses (1g thrice a day), ceftolozane showed the same efficacy than comparators and a higher efficacy when higher doses were used (2g TID). Finally, we compared the in vitro susceptibility of 169 clinical isolates of Pseudomonas aeruginosa to the three mentioned above carbapenems (imipenem, meropenem and doripenem) demonstrating that these three drugs are actually quite close
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Smith, Eric Earl. „Genetic adaptation by Pseudomonas aeruginosa during chronic cystic fibrosis infections and genetic variation between strains of P. aeruginosa /“. Thesis, Connect to this title online; UW restricted, 2006. http://hdl.handle.net/1773/5067.
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Damron, Frederick H. „Regulation of alginate production of Pseudomonas aeruginosa“. [Huntington, WV : Marshall University Libraries], 2009. http://www.marshall.edu/etd/descript.asp?ref=999.
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Ledgham, Fouzia. „La régulation des facteurs de virulence chez Pseudomonas aeruginosa : Quorum Sensing et synthèse d'alginate“. Aix-Marseille 2, 2001. http://www.theses.fr/2001AIX22034.
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Regni, Catherine A. „Structural studies of PMM/PGM from Pseudomonas aeruginosa“. Diss., Columbia, Mo. : University of Missouri-Columbia, 2005. http://hdl.handle.net/10355/4134.
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Thesis (Ph. D.)--University of Missouri-Columbia, 2005.The entire dissertation/thesis text is included in the research.pdf file; the official abstract appears in the short.pdf file (which also appears in the research.pdf); a non-technical general description, or public abstract, appears in the public.pdf file. Title from title screen of research.pdf file (viewed on October 18, 2007) Vita. Includes bibliographical references.
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Wuerth, Kelli. „Combating Pseudomonas aeruginosa lung infections using synthetic host defense peptides“. Thesis, University of British Columbia, 2017. http://hdl.handle.net/2429/62496.
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Pseudomonas aeruginosa is a Gram negative bacterium found frequently in the environment. It can infect immunocompromised patients and is a major cause of nosocomial infections. Of particular concern are its roles in lung infections as a causative agent for pneumonia and in respiratory infections in patients with cystic fibrosis and chronic obstructive pulmonary disease. Treatment of P. aeruginosa lung infections is difficult due to its formation of biofilms and the development of multi-drug resistant P. aeruginosa strains. Synthetic derivatives of host defense peptides (HDPs) called innate defense regulators (IDRs) are alternatives to antibiotics that modulate the immune response rather than directly targeting the bacteria, thus limiting the development of antibiotic resistance. IDRs have shown success against many bacteria but had not previously been tested in P. aeruginosa lung infection models. In this work, IDR-1002 reduced the production of inflammatory cytokines by macrophages in response to P. aeruginosa lipopolysaccharide. IDR-1002 also limited the toxicity caused by live P. aeruginosa to macrophages and bronchial epithelial cells. Importantly, IDR-1002 did not show any toxic effects in vitro, unlike the HDP LL-37. In an acute in vivo P. aeruginosa lung infection model, IDR-1002 significantly decreased the bacterial burden as well as the concentrations of MCP-1, KC, and IL-6 in the lungs. In another in vivo P. aeruginosa lung infection model using alginate to mimic a chronic infection, IDR-1002 decreased the infiltration of cells to the infection site and significantly decreased IL-6 levels in the lungs. To improve drug delivery, peptide IDR-1018, which has a strong aggregation propensity, was tested with various formulations, and its combination with a hyperbranched polyglycerol reduced the production of inflammatory cytokines in vitro and trended towards reducing cytokines in vivo in the acute P. aeruginosa lung infection model. Finally, RNA-Seq and downstream bioinformatics were performed on both lung and blood samples from the acute P. aeruginosa lung infection model, providing insights into the impact of P. aeruginosa during infection and the protective mechanisms of IDR-1002 via its anti-inflammatory effects. These data suggest the strong potential of IDR-1002 for the treatment of P. aeruginosa lung infections.Science, Faculty of
Microbiology and Immunology, Department of
Graduate
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Stacey, Sean D. „Regulating rsmA Expression in Pseudomonas aeruginosa“. Digital Commons @ East Tennessee State University, 2013. https://dc.etsu.edu/etd/1232.
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Pseudomonas aeruginosa, a Gram-negative bacillus, commonly infects immunocompromised individuals and uses a variety of virulence factors to persist in these hosts. The posttranscriptional regulator, RsmA, plays a role in the expression of many virulence factors in P. aeruginosa. RsmA up regulates virulence factors used in colonizing hosts. However, regulation of rsmA is not well elucidated. Transposon mutagenesis was performed on P. aeruginosa containing a transcriptional rsmA-lacZ fusion to answer this question. Mutants were screened via β-galactosidase assay and transposon insertions identified via arbitrary PCR. A probable MFS transporter, we named mtpX, was one significant transposon mutant identified. A ΔmtpX mutant containing the rsmA-lacZ transcriptional fusion was constructed to confirm our results. Further analysis of rsmA, looking at RNA and protein levels, revealed varying results in nonmucoid versus mucoid backgrounds. Phenotypic assays were performed to characterize this unknown transporter and develop a putative mechanism as to how MtpX affects rsmA expression.
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Bretheau, Chantal. „Infections urinaires nosocomiales à "Pseudomonas aeruginosa" : une enquête épidémiologique dans un établissement médico-social“. Paris 5, 1989. http://www.theses.fr/1989PA05P093.
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Douthett, Rebecca L. „Enhancement of the humoral immune response to Pseudomonas aeruginosa“. The Ohio State University, 2005. http://rave.ohiolink.edu/etdc/view?acc_num=osu1126903068.
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Chemani, Chanez, und Régis Matran. „Les lectines : nouveaux déterminants de la pathogénicité de Pseudomonas aeruginosa au cours de l'infection pulmonaire : vers de nouvelles thérapeutiques“. Lille 2, 2009. http://www.theses.fr/2009LIL2S020.
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Pseudomonas aeruginosa est un pathogène fréquemment impliqué dans les infections pulmonaires aiguës et chroniques, notamment chez les patients atteints de mucoviscidose. L'adhésion de cette bactérie est principalement médiée par des lectines qui reconnaissent spécifiquement des structures glycaniques de l'hôte. Dans ce travail, nous avons évalué le rôle respectif de deux lectines LecA et LecB dans la pathogénicité de P. Aeruginosa ainsi que les effets de sucres inhibiteurs spécifiques de celles-ci dans un modèle de pneumonie aiguë chez la souris et sur un modèle cellulaire. En comparant une souche parentale à ses deux mutants isogéniques (mutant lecA et lecB), nous avons montré que ces deux lectines jouent un rôle majeur dans l'adhésion de P. Aeruginosa aux cellules A549 et sont associées à la sévérité de la lésion pulmonaire in vivo. L'inhibition de ces deux lectines diminue significativement la cytotoxicité in vitro et augmente la clairance bactérienne pulmonaire in vivo. Nous avons ensuite évalué la contribution des deux lectines à l'initiation et l'installation de l'infection chronique. Dans un modèle murin de pneumonie chronique, nous avons observé une mortalité moins importante avec les mutants lecA et lecB et une diminution de la de la charge bactérienne pulmonaire au 4ème et 7ème jour suivant l'infection. L'analyse de l'expression des gènes de virulence au cours de l'infection chronique montre une surexpression d'exoS et de lasI chez les mutants lectines par rapport à la souche parentale. Les capacités thérapeutiques d'inhibiteurs glycomimétiques ayant un potentiel d'inhibition 7 à 10 fois supérieur aux ligands naturels ont été évaluées. Ces molécules de synthèse diminuent significativement l'adhésion de P. Aeruginosa in vitro et montrent un effet protecteur vis-à-vis de la lésion pulmonaire in vivo. En conclusion, nous avons montré que les lectines jouent un rôle majeur dans la pathogénicité de P. Aeruginosa. L'inhibition des lectines par des sucres compétiteurs pourrait constituer une nouvelle piste thérapeutique dans l'infection à P. Aeruginosa.
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岑海音 und Hoi-yum Irma Shum. „Interactions of pseudomonas aeruginosa toxins with respiratory mucosa in vitro“. Thesis, The University of Hong Kong (Pokfulam, Hong Kong), 2003. http://hub.hku.hk/bib/B31244725.
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Cottalorda, Agnès. „Diversité phénotypique et moléculaire d'isolats urinaires de Pseudomonas aeruginosa Antimicrobial resistance and genotypic diversity of Pseudomonas aeruginosa urinary isolates collected prospectively in a French hospital Within-host microevolution of Pseudomonas aeruginosa urinary isolates : a seven-patient longitudinal genomic and phenotypic study“. Thesis, Normandie, 2020. http://www.theses.fr/2020NORMR028.
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Nos travaux ont exploré la diversité phénotypique (sensibilité aux antibiotiques) et génétique (MultiLocus Sequence Typing et Whole Genome Sequencing) d’isolats urinaires de P. aeruginosa. Nous avons étudié la diversité intra-prélèvement, via l’étude de multiples isolats par échantillon collectés chez 120 patients présentant une infection urinaire (40) ou une bactériurie asymptomatique (80) à P. aeruginosa. En parallèle, la diversité au cours du temps a été étudiée chez des isolats collectés chez 7 patients sur une période de 48 à 488 jours. Les patients étaient le plus souvent colonisés ou infectés par un seul génotype ou clone type, bien qu’une diversité phénotypique (28% des patients) et génotypique (4% des patients) ait été identifiée pour la première fois au sein d’un même prélèvement, à l’origine d’infections ou de colonisations polyclonales. Par ailleurs, des mutations et/ou de larges délétions génomiques ont été identifiées au cours du temps, principalement au sein de gènes codant des régulateurs transcriptionnels, des systèmes à deux composants ou impliqués dans le catabolisme du carbone. En parallèle des changements génomiques, des modifications phénotypiques affectant le fitness et la capacité des isolats à former du biofilm ont été observées. Ainsi, la diversité phénotypique et génétique intra-hôte doit être prise en compte pour parfaire le diagnostic et le traitement des infections urinaires à P. aeruginosaThe aim of this study was to explore phenotypic (antimicrobial resistance) and genetic diversity (MultiLocus Sequence Typing and Whole Genome Sequencing) of P. aeruginosa urinary isolates. Thus, we have studied (i) within-sample diversity (several isolates analyzed per urine sample) of urinary isolates collected from 120 patients with urinary tract infection (40) or asymptomatic bacteriuria (80), and (ii) P. aeruginosa within-host evolution for 7 patients with successive urine samples (from 48 to 488 days apart). Even though patients were mostly colonized or infected by a given clone, this is the first study to identify within-sample phenotypic (28% of patients) and genotypic (4% of patients) diversity, and thus polyclonal bacteriuria. P. aeruginosa adaptation to the urinary tract was mostly driven by mutations and/or large genomic deletions, particularly in genes encoding transcriptional regulators, two component systems and carbon compound catabolism. Genomic adaptation was associated with phenotypic changes in terms of biofilm formation and fitness.Thus, phenotypic and genetic within-host diversity should be taken into account in the diagnosis and treatment of P. aeruginosa urinary tract infections
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Le, Berre Rozenn. „Physiopathologie et rôle des facteurs de virulence dans la pneumonie à Pseudomonas aeruginosa“. Aix-Marseille 2, 2007. http://theses.univ-amu.fr.lama.univ-amu.fr/2007AIX20681.pdf.
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La pneumonie aigue à Pseudomonas aeruginosa provoque une mortalité de 40%. L’optimisation de nouvelles thérapeutiques nécessite une parfaite connaissance de la physiopathologie de cette infection et des facteurs de virulence de la bactérie. Sur un modèle de pneumonie à P. Aeruginosa chez le rat, en utilisant un inhibiteur de caspase nous montrons un lien entre apoptose pulmonaire et altération des mouvements liquidiens pulmonaires. Sur ce même modèle, nous montrons que le système de sécrétion de type III (SSTT) entraîne une lésion pulmonaire importante associée à une diminution des polynucléaires neutrophiles alvéolaires. Sur 56 souches de P. Aeruginosa responsables de pneumonies nosocomiales, nous caractérisons des facteurs de virulence : le SSTT, le lipopolysaccharide et le quorum sensing (élastase et pyocyanine). Les exotoxines du SSTT et l’élastase ont un rôle majeur dans la virulence de la pneumonie chez la souris. Ainsi, une modulation de la réponse de l’hôte ou une action directe sur les facteurs de virulence du pathogène constitue de nouvelles pistes thérapeutiquesP. Aeruginosa ventilator-acquired pneumonia is associated with a 40% mortality rate. Physiopathologic mechanisms related to virulence factors are major determinants to optimize new therapies. In a rat P. Aeruginosa pneumonia model, by using a broad spectrum caspase inhibitor, we showed an association between lung apoptosis and lung fluid balance. With the same model, we demonstrated that the type III secretion system (TTSS) has a major role in acute lung injury and in alveolar polymorphonuclear neutrophils decrease. We analysed the virulence factors (TTSS, lipopolysaccharide and quorum sensing (elastase and pyocyanine)) of 56 P. Aeruginosa pathogenic strains from critically ill patient with ventilator acquired pneumonia. TTSS exotoxins and elastase play a major role in murine pneumonia virulence. Thus, therapies targeting virulence factors or host response are promising
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Azuama, Onyedikachi Cecil. „Recherche de nouveaux actifs d'origine végétale contre le pathogène opportuniste de l'homme Pseudomonas aeruginosa Battling Pseudomonas aeruginosa virulence with natural plant bioactive compounds Membrane-interactive compounds from Pistacia lentiscus L. thwart Pseudomonas aeruginosa virulence Tackling Pseudomonas aeruginosa virulence by mulinane-like diterpenoids from Azorella atacamensis Pseudomonas aeruginosa virulence attenuation by extracts of Parastrephia terestiuscula, Baccharis grisebachii, Haplopappus rigidus medicinal plants of the Asteraceae family from the Atacama Desert area The absence of SigX results in impaired carbon metabolism and membrane fluidity in Pseudomonas aeruginosa Activation of the Cell Wall stress response in Pseudomonas aeruginosa infected by a Pf4 Phage Variant The temperature-regulation of Pseudomonas aeruginosa cmaX-cfrX-cmp-X operon reveals an intriguing molecular network involving the Sigma factors AlgU and SigX“. Thesis, Normandie, 2020. http://www.theses.fr/2020NORMR077.
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La résistance aux antimicrobiens est l’un des défis majeurs du XX1eme siècle. Pseudomonas aeruginosa est inscrit sur la liste des organismes pathogènes qui deviennent résistants aux antibiotiques conventionnels. De nouvelles stratégies visant à atténuer la virulence sans perturber la croissance et la viabilité bactériennes, également connues sous le nom de stratégie anti-virulence, sont développées. Les plantes sont connues pour produire de nombreux métabolites secondaires. Des extraits de fruits de Pistachia Lentiscus originaires d'Algérie et de 40 extraits de plantes originaires du Nord-Chili ont été criblés pour leur capacité à atténuer la production de la pyocyanine, un facteur de virulence majeur de P. aeruginosa, dans le but d’évaluer leur potentiel effet antivirulence. Les extraits sélectionnés (Pistacia lentiscus, Azorella atacamensis, Baccharis grisebachii, Haplopappus rigidus et Parastrephia terestiucula), ont été fractionnés et l’ensemble de ces extraits et fractions a montré une atténuation de la production d’autres facteurs de virulence (élastase, rhamnolipides), qui a pu être attribuée, au moins partiellement à une diminution de la communication bactérienne via le mécanisme du quorum sensing. Ces extraits et fractions altèrent également la fluidité membranaire de P. aeruginosa. Cet effet anti-virulence a été validé dans un modèle d'infection cellulaire, et sur le nématode Caenorhabditis elegans. Dans toutes ces conditions, la croissance de P. aeruginosa n'a pas été affectée. Un profilage chimique des extraits et fractions de P. lentiscus et d'A atacamensis a révélé la présence d'acide gingkolique et de diterpenoides de type azorellane/mulinane comme potentiels composés bioactifs. De futures études visent à identifier les composés bioactifs sur P. aeruginosa H103, ainsi que sur un panel de souches cliniques, et à évaluer un potentiel effet potentialisateur de l'activité des antibiotiques. Ces travaux visent in fine à proposer ces composés d’origine végétale comme adjuvants dans le traitement des infections à P. aeruginosaAntimicrobial resistance has become a great challenge in therapeutic medicine so much so that the World health organization forecasts the possibility of a post-antibiotic era where minor injuries may lead to mortality. Pseudomonas aeruginosa is among the list of organisms that are highly resistant to conventional antibiotics, partly due to its broad genome, which facilitates the elaboration of virulence determinants and rapid adaptation to various environments, in addition to its inherent resistance mechanisms. In view of this, alternative measures of controlling microbial virulence activities using novel approaches that do not disturb its growth and viability, also known as anti-virulence strategy, are gaining wider attention. Since plants are repositories of several metabolites with chemical defense system against environmental pathogens, through ethnobotanical led studies, the effect of Pistacia lentiscus fruit extracts originating from Algeria and forty plant extracts originating from North-Chile were biologically and chemically evaluated with the aim of deciphering their anti-virulence effects against P. aeruginosa. Furthermore, this study tried to gain more insight into the bioactive compounds and possible mechanism of action. From the results obtained, selected plant extracts attenuated P. aeruginosa mainly pyocyanin activity and /or elastase and rhamnolipids virulence production which appears to be associated with the inhibition of quorum sensing activities and the alteration in membrane activities. The anti-virulence effect of the selected extracts (P. lentiscus, Azorella atacamensis, Baccharis grisebachii, Haplopappus rigidus and Parastrephia terestiucula) were also validated in biological models of infections where they mediated the toxicity of P. aeruginosa towards A549 human monolayer cells and/or Caenorhabditis elegans nematode. Interestingly, growth of the pathogen was not affected. Further chemical profiling of P. Lentiscus, and A atacamensis extracts revealed the presence of gingkolic acid and azorellane/mulinane diterpenoids as the putative bioactive compounds. Future studies intend to explore these extracts and their derived compounds on the potentiation of antibiotic activity in a panel of clinical strains. In general, this study sets the pace for the possible use of these plant extracts as adjuvants in treatment of P. aeruginosa infections
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Essoh, Christiane you. „Étude épidémiologique de souches de Pseudomonas aeruginosa responsables d’infections et de leurs bactériophages pour une approche thérapeutique“. Thesis, Paris 11, 2013. http://www.theses.fr/2013PA112072/document.
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L'utilisation de virus de bactéries ou bactériophages pourrait être un complément efficace à l’antibiothérapie. Mon travail a porté sur la caractérisation de bactériophages dirigés contre l’espèce Pseudomonas aeruginosa, pathogène opportuniste responsable d'infections des voies respiratoires des patients atteints de mucoviscidose.J'ai tout d'abord déterminé la sensibilité des souches mucoviscidosiques au Pyophage (un cocktail de phages thérapeutiques Géorgien) et identifié six phages lytiques de quatre genres différents. Environ 15% des souches sont résistantes au Pyophage. Ensuite, en utilisant les souches cliniques multi-résistantes aux phages comme bactérie d’enrichissement, 32 phages ont été obtenus à partir des eaux usées de France et Côte d’Ivoire. Tous les phages analysés sont caudés et distribués au sein de dix genres parmi lesquels six exclusivement lytiques. J'ai identifié des souches bactériennes qui demeurent insensibles à tous les phages. J'ai montré que le système CRISPRs-Cas n'est pas associé à la résistance des souches aux phages lytiquesThe use of viruses of bacteria commonly called bacteriophages could constitute an efficient complement to antibiotics. During my PhD, I have characterized phages infecting the opportunistic pathogen Pseudomonas. aeruginosa, responsible for lung infections in cystic fribrosis patients. Firstly, I investigated the efficiency of Pyophage (a cocktail of phages therapeutic Georgian) on clinical P. aeruginosa strains and recovered six lytic phages from four different genus. The Pyophage appears to be unactive on approximately 15% of clinical strains. Secondly, and using multi-phages resistant strains as enrichment bacteria, 32 phages were isolated from waste water of France and Côte d’Ivoire. All phages are tailed and distributed within ten different genus including six exclusively lytic. I identified bacterial strains which remain insensitive to all phages. I also demonstrated that the CRISPRs-cas system plays no role in the resistance of strains to lytic phages
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Kammouni, Wafa. „Sécrétion des cellules glandulaires trachéales humaines en situation pro-inflammatoire : étude immuno-pharmacologique et implication dans la mucoviscidose“. Aix-Marseille 1, 1998. http://www.theses.fr/1998AIX11018.
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L'infection persistante par pseudomonas aeruginosa (p a) et l'inflammation sont les deux problemes majeurs de la mucoviscidose (mv), maladie due a des mutations du gene cftr. Dans les bronches, cftr est fortement exprime par les cellules glandulaires tracheales humaines sereuses (gths). La physiologie de ces cellules et leur implication dans la mv sont peu connues. Pour comprendre les relations : infection-inflammation et cellules gths, nous avons etudie les effets du lps de p a sur les cellules gths et gths-mv. Nous avons montre que les cellules gths en presence de lps acquierent un phenotype mv : une absence de reponse aux agonistes adrenergiques et cholinergiques correlee a une chute de l'expression des arnm de la cftr. Nous avons aussi montre que les cellules gths secretent constitutivement de l'il6 et de l'il8 et que les cellules gths-mv produisent plus d'il6 et d'il8 que les cellules normales. Dans les cellules gths, le lps induit une augmentation de la secretion d'il6 et d'il8 et une production de tnf. Les glucocorticoides inhibent cette augmentation de secretion d'il6 et d'il8 mais pas la production de tnf. Dans les cellules gths-mv, le lps induit aussi une augmentation de la secretion d'il6 et d'il8 mais n'induit aucune production de tnf ces resultats suggerent une immunodeficience pulmonaire locale dans la mv due a un defaut de production de cytokine par les cellules gths-mv. Nous avons ensuite developpe des lignees transformees de cellules gths normales (mm39) et mv (cf-km4 f508/f508). Ces lignees ont des caracteristiques similaires aux cellules originelles. La transfection du gene cftr par adenovirus corrige les defauts secretoires typiques des cellules mv : absence de stimulation de secretion proteique par des agents adrenergiques et cholinergiques et absence d'activite canal chlorure. Les cellules cf-km4 pourront permettre d'etudier les mecanismes cellulaires et moleculaires generant les defauts secretoires dans la mv.
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Crusz, S. A. „Lectin-mediated biofilm maturation, quorum sensing and Pseudomonas aeruginosa infections in cystic fibrosis“. Thesis, University of Nottingham, 2009. http://eprints.nottingham.ac.uk/10734/.
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Chronic infections with Pseudomonas aeruginosa are primarily responsible for the decline in lung function and ultimate mortality in cystic fibrosis patients. The overall aim of this project was to elucidate some of the molecular mechanisms governing the pathogenesis of P. aeruginosa in the cystic fibrosis lung. This was with particular reference to (a) quorum sensing, a cell-to-cell communication system controlling the production of virulence determinants in a population density dependent manner using diffusible signal molecules and (b) the pseudomonas lectins, LecA and LecB, which are known to contribute to biofilm formation. Serial sputum samples were collected from adult and paediatric patients with cystic fibrosis and a cohort of clinical P. aeruginosa isolates was assembled. Using bioreporters, these isolates were shown to synthesise a range of quorum sensing signal molecules. Furthermore, the direct detection of these P. aeruginosa products from infected sputum samples in conjunction with patient clinical data implied an association between sputum quorum sensing signal molecule level and cystic fibrosis disease status, response to intravenous antibiotics and the presence of non-culturable P. aeruginosa. Quorum sensing also makes an important contribution to P. aeruginosa biofilm maturation, antibiotic tolerance and resistance to host defences. There is evidence that the quorum sensing regulated lectins LecA and LecB contribute to biofilm development and this was investigated using different biofilm assays, including the flowchamber biofilm system. This work demonstrated that LecA contributed to biofilm maturation in both laboratory and clinical strains and hydrophobic galactosides were shown to be able to inhibit biofilm development. The putative biofilm target ligand for LecA was tentatively identified as the Psl exopolysaccharide. Mutants deficient in either lecA or lecB produced defective biofilms, which could be inhibited and/or dispersed by galactosides or furanosides respectively, including novel synthetic furanoside dendrimers. The latter proved inhibitory to both laboratory and clinical P. aeruginosa isolates and constitute a potential novel therapeutic.
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Balasubramanian, Deepak. „Pseudomonas Aeruginosa AmpR Transcriptional Regulatory Network“. FIU Digital Commons, 2013. http://digitalcommons.fiu.edu/etd/863.
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In Enterobacteriaceae, the transcriptional regulator AmpR, a member of the LysR family, regulates the expression of a chromosomal β-lactamase AmpC. The regulatory repertoire of AmpR is broader in Pseudomonas aeruginosa, an opportunistic pathogen responsible for numerous acute and chronic infections including cystic fibrosis. Previous studies showed that in addition to regulating ampC, P. aeruginosa AmpR regulates the sigma factor AlgT/U and production of some quorum sensing (QS)-regulated virulence factors. In order to better understand the ampR regulon, the transcriptional profiles generated using DNA microarrays and RNA-Seq of the prototypic P. aeruginosa PAO1 strain with its isogenic ampR deletion mutant, PAO∆ampR were analyzed. Transcriptome analysis demonstrates that the AmpR regulon is much more extensive than previously thought influencing the differential expression of over 500 genes. In addition to regulating resistance to β-lactam antibiotics via AmpC, AmpR also regulates non-β-lactam antibiotic resistance by modulating the MexEF-OprN efflux pump. Virulence mechanisms including biofilm formation, QS-regulated acute virulence, and diverse physiological processes such as oxidative stress response, heat-shock response and iron uptake are AmpR-regulated. Real-time PCR and phenotypic assays confirmed the transcriptome data. Further, Caenorhabditis elegans model demonstrates that a functional AmpR is required for full pathogenicity of P. aeruginosa. AmpR, a member of the core genome, also regulates genes in the regions of genome plasticity that are acquired by horizontal gene transfer. The extensive AmpR regulon included other transcriptional regulators and sigma factors, accounting for the extensive AmpR regulon. Gene expression studies demonstrate AmpR-dependent expression of the QS master regulator LasR that controls expression of many virulence factors. Using a chromosomally tagged AmpR, ChIP-Seq studies show direct AmpR binding to the lasR promoter. The data demonstrates that AmpR functions as a global regulator in P. aeruginosa and is a positive regulator of acute virulence while negatively regulating chronic infection phenotypes. In summary, my dissertation sheds light on the complex regulatory circuit in P. aeruginosa to provide a better understanding of the bacterial response to antibiotics and how the organism coordinately regulates a myriad of virulence factors.
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Golovkine, Guillaume. „Franchissement des barrières épithéliales et endothéliales par le pathogène opportuniste Pseudomonas aeruginosa“. Thesis, Université Grenoble Alpes (ComUE), 2015. http://www.theses.fr/2015GREAV009/document.
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P. aeruginosa est l'un des principaux pathogènes responsables d'infections nosocomiales. Les infections aiguës à cette bactérie sont associées à une morbidité et une mortalité élevées, notamment lorsque ces bactéries envahissent le système sanguin. Dans la majorité des cas, ces infections du sang sont la conséquence du franchissement par P. aeruginosa de deux barrières tissulaires: l'épithélium pour les muqueuses et l'endothélium pour les vaisseaux. Bien que ces évènements soient des étapes cruciales de la dissémination systémique des bactéries, les mécanismes permettant la pénétration du pathogène dans l'organisme sont à ce jour mal compris. Pour l'endothélium, nous démontrons que P. aeruginosa induit le clivage de la VE-cadhérine, une protéine des jonctions intercellulaires, par l'action de la protéase LasB sécrétée par les bactéries. Le clivage de la VE-cadhérine entraîne une perte d'intégrité de l'endothélium, permettant aux bactéries d'accéder au domaine basolatéral des cellules. Les toxines du Système de Sécrétion de Type 3 peuvent être alors injectées dans la cellule, provoquant une intoxication cellulaire majeure. Le franchissement de la barrière épithéliale s'opère par un mécanisme très différent. Par microscopie confocale en temps réel, nous montrons que P. aeruginosa transmigre par une voie paracellulaire, en exploitant des faiblesses jonctionnelles aux sites de divisions et de morts cellulaires. Ce processus de transmigration requiert l'action coordonnée des pili de Type IV, du flagelle et de toxines du Système de Sécrétion de Type 3P. aeruginosa is one of the main pathogens responsible for nosocomial infections. Acute infections by this bacterium are associated with high rates of morbidity and mortality, especially when bacteria disseminate in the bloodstream. In most situations, blood infection is the consequence of the crossing of two essential tissue barriers by P. aeruginosa: the epithelium for the mucosa and the endothelium for the blood vessel. Although these events are critical steps for systemic spread of bacteria, the mechanisms involved in the penetration of the pathogen in the organism are poorly understood. For the endothelium, we demonstrate that P. aeruginosa induces the cleavage of VE-cadherin, a protein of endothelial junctions, by the action of LasB, a protease secreted by the bacteria. VE-cadherin cleavage induces a loss of integrity of the endothelium, allowing bacterial access to the cellular basolateral domain. Once in this location, the Type 3 secretion system may inject toxins into the cell, triggering a major intoxication process. Crossing of the epithelial barrier involves a very different mechanism. Using real-time confocal microscopy, we show that P. aeruginosa uses a paracellular route to transmigrate, exploiting junctional weaknesses at sites of cell division and cell death. This transmigration process requires the coordinate actions of Type IV pili, the flagellum and toxins of the Type 3 secretion system
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Benabid, Rym. „Rôle de l'élastase du neutrophile dans les infections pulmonaires à Psudomonas aeruginosa“. Reims, 2009. http://theses.univ-reims.fr/exl-doc/GED00001022.pdf.
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P. Aeruginosa est un pathogène fréquemment isolé dans les infections pulmonaires. Ces dernières sont caractérisées par le recrutement massif des polynucléaires neutrophiles au site infectieux. La fonction principale des neutrophiles est d’éliminer le pathogène en utilisant deux systèmes : un système oxydatif et un système non oxydatif. Parmi les molécules du système non oxydatif, on trouve l’élastase du neutrophile (NE). Le rôle antibactérien de la NE dans la protection de l’hôte contre P. Aeruginosa et dans la modulation de la réponse inflammatoire n’ont pas été encore élucidés. Des souris déficientes en NE (NE-/-) et des souris sauvages (WT) ont été exposées à P. Aeruginosa selon un modèle d’infection à pneumonie aigüe. Nos résultats ont montré que les souris NE-/- sont plus susceptibles à l’infection que les souris WT. L’étude du mécanisme antibactérien de la NE a révélé que(i) l’enzyme est bactéricide contre différentes souches de P. Aeruginosa et (ii) la NE cible OprF, une porine majeure essentielle au maintien de l’intégrité de P. Aeruginosa et à la reconnaissance de la réponse immunitaire de l’hôte. Ensuite, nous avons démontré que la NE régule la réponse inflammatoire suite à l’infection pulmonaire par P. Aeruginosa. En effet, la NE induit l’expression des médiateurs pro-inflammatoires MIP-2, TNF-α et l’IL-6 (régulation transcriptionnelle). L’étude du mécanisme de cette régulation a indiqué que la NE ciblerait, entre autres, le récepteur TLR4. L’ensemble de ces résultats indique que la NE protège l’hôte de la morbidité et la mortalité associées aux infections pulmonaires à P. Aeruginosa et que cette enzyme joue un rôle double en exerçant une activité bactéricide directe sur ce pathogène et en modulant la réponse inflammatoire.
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Ben, Mlouka Mohamed Amine. „Caractérisation du système BAC impliqué dans la formation de biofilms chez Pseudomonas aeruginosa“. Rouen, 2014. http://www.theses.fr/2014ROUES051.
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Pseudomonas aeruginosa est une bactérie Gram négatif, pathogène opportuniste, impliquée dans un grand nombre d'infections nosocomiales. Cette bactérie est aussi responsable des surinfections broncho-pulmonaires chez les patients atteints de mucoviscidose. Cette prééminence est en partie due à sa capacité à former des biofilms qui lui confèrent une résistance exceptionnelle aux antimicrobiens. Les présents travaux ont eu comme objectif la caractérisation du système protéique baptisé BAC «Biofilm Associated Cluster», impliquant les protéines codées par le cluster de gènes PA3729-PA3732. L’objectif était d’évaluer l’implication de ce système dans la formation du biofilm et la sécrétion de lipides. Les tests phénotypiques réalisés sur les souches mutantes ont permis de confirmer le rôle du système BAC dans l’adhésion de la bactérie et la production de rhamnolipides. Les études de compartimentation par analyse protéomique ont permis de proposer des localisations pour les protéines PA3729 et PA3731 du système. Les études de conductance réalisées sur la protéine PA3729 purifiée, après reconstitution en bicouche lipidique, ont montré que cette protéine forme majoritairement un petit canal de 28 pS. Enfin, les études interactomiques par ITC (Isothermal Titration Calorimetry) sur les différentes protéines ont confirmé des interactions protéine-protéine entre certaines protéines du système, en particulier entre PA3731 et PA3732. En conclusion, le système BAC pourrait être un nouveau système de sécrétion, non encore caractérisé, impliqué dans la production extracellulaire de lipides. Ce système serait impliqué dans l’adhésion de la bactérie aux surfaces biotiques et abiotiquesPseudomonas aeruginosa is a gram negative bacterium, involved in a large number of nosocomial infections. This microorganism is also the main infectious agent involved in bronchopulmonary infections in cystic fibrosis patients. This is largely linked to the high ability of this bacterium to form biofilms which confers an increased resistance to antibiotics. The aim of the present study was to characterize the BAC “biofilm associated cluster”, system which involves proteins coded by the pA3729-pA3732 gene cluster. The aim was to evaluate the involvement of this system in the biofilm formation and lipid secretion. KO bac mutants were tested for their ability to adhere on biotic and abiotic surfaces. Thereafter, targeted proteomics approaches were implemented to decipher the potential localization of the different proteins of the BAC system. Preliminary functional experiments were also performed on the PA3729 purified protein which is probably addressed to the outer membrane. Lastly, interactomic experiments were realized on the BAC system purified proteins, by using the Isothermal Titration Calorimetry approach. Phenotypic tests performed with the mutants confirmed the role of the BAC system in the bacterial adhesion. Montal-Muller experiments demonstrated that the PA3729 protein was able to display a channel. Interactomic investigations confirmed the interaction between proteins of BAC system, in particular between PA3731 and PA3732. From these investigations, we hypothesize that the BAC system could be a new secretion system, not characterized yet, involved in extracellular lipid production. This system is involved in the bacterial adhesion to biotic and abiotic surfaces
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Bellemare, Audrey. „Étude du mode d'action antimicrobien de la pré-élafine contre Pseudomonas aeruginosa“. Thesis, Université Laval, 2010. http://www.theses.ulaval.ca/2010/27207/27207.pdf.
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Périnet, Simone. „Génomique fonctionnelle du gène modA essentiel à l'infection pulmonaire chronique chez Pseudomonas aeruginosa“. Master's thesis, Université Laval, 2014. http://hdl.handle.net/20.500.11794/25069.
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Pseudomonas aeruginosa est l’agent pathogène principal causant des infections pulmonaires chroniques chez les patients atteints de fibrose kystique (FK). Le mutant STM_modA dérivé de la souche P. aeruginosa PAO1 a été obtenu par mutagénèse par étiquette-signature et est donc incapable de persister dans le poumon d’un modèle de rat. Le mutant STM_modA présente une mutation par insertion interrompant le cadre de lecture du gène modA, dont le produit fait partie du transporteur ModABC qui permet l’internalisation du molybdate depuis l’espace périplasmique. Le molybdate est la forme environnementale et assimilable du molybdène, essentiel pour l’activité des molybdoenzymes. Il a été démontré par les présents travaux que l’activité du transporteur ModABC est essentielle pour l’infection pulmonaire chronique chez le rat, pour la formation du biofilm, pour la résistance à la prédation par l’amibe Dictyostelium discoideum, pour la dénitrification et la croissance anaérobie subséquente, ainsi que pour l’expression du transcriptome en conditions anaérobies.Pseudomonas aeruginosa is the main pathogen causing chronic lung infections in cystic fibrosis patients. The genome of the laboratory reference strain PAO1 was sequenced revealing its highly complex virulence regulatory network and a large part of genes of unknown function. A PCR-based signature tagged mutagenesis (STM) allowed the identification of 148 genes essential for chronic lung infection in a rat model. The PAO1-derivated strain STM_modA was obtained using this technique and is thus unable to persist in the rat lug in competition with a pool of strains. This strain carries an insertional mutation interrupting the open reading frame of the modA gene. This gene codes with the co-transcribed modB and modC genes for an ATP-binding cassette transporter (ModABC) responsible for the internalization of molybdate from the periplasmic space. Molybdate is the environmental molybdenum-containing ion, which is essential for the activity of the molybdoenzymes, a group of enzymes involved in a wide range of metabolic functions. The present work demonstrates that the ModABC transporter activity is essential for chronic lung infection in a rat model, for biofilm formation, for resistance to predation by the amoeba Dictyostelium discoideum as well as for denitrification and subsequent anaerobic growth. Whole transcriptome shotgun sequencing demonstrated major changes in the gene transcription levels of STM_modA in comparison with wild-type PAO1 in anaerobic conditions. This work highlights the ModABC transporter as a potential target for the inhibitors development, a new strategy for antimicrobial research.
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Orans, Jillian Redinbo Matthew Robert. „Structural studies of Pseudomonas aeruginosa pilY1, a protein central to infections in cystic fibrosis“. Chapel Hill, N.C. : University of North Carolina at Chapel Hill, 2007. http://dc.lib.unc.edu/u?/etd,2103.
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Thesis (Ph. D.)--University of North Carolina at Chapel Hill, 2007.Title from electronic title page (viewed Feb. 17, 2009). "... in partial fulfillment of requirements for the degree of Doctor of Philosophy in the Department of Chemistry." Discipline: Chemistry; Department/School: Chemistry.
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Doig, Janet Alice Mairi. „Studies on some unusual characteristics expressed by Pseudomonas aeruginosa associated with chronic respiratory infections“. Thesis, University of Edinburgh, 1985. http://hdl.handle.net/1842/23853.
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Ngo, Tuan Dung. „Définition de cibles potentielles dans le SST3 de Pseudomonas aeruginosa pour une nouvelle stratégie anti-infectieuse“. Thesis, Université Grenoble Alpes (ComUE), 2019. http://www.theses.fr/2019GREAV074.
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Caractérisation et inhibition du Système de Sécrétion de Type III de Pseudomonas aeruginosaPseudomonas aeruginosa est un pathogène opportuniste gram-negatif qui cause des maladies nosocomiales et infecte les patients atteint de la mucoviscidose. Le Système de Sécrétion de Type III (SST3) est un de ses facteurs de virulence les plus importants et permet d’injecter directement quatre exotoxines dans les cellules hôtes. Une protéine très importante du SST3 est l’ATPase PscN qui est impliquée dans l’assemblage et le fonctionnement de ce système. Dans ce travail, nous mettons en évidence l’interaction de PscN avec des protéines sécrétées du SST3, avec leurs chaperonnes seul ou en complexes, en utilisant trois technique de ELISA, HTRF and MST. En particulier, la MST (Microscale Thermophoresis) nous a permis de déterminer les constantes de dissociation (Kd) entre ces protéines et PscN. Les résultats montrent que l’ATPase interagit préférentiellement avec les protéines sécrétées ou les complexes plutôt que les chaperonnes, ce qui confirme le fait que celles-ci sont libérées dans le cytoplasme bactérien après la dissociation des complexes. Par ailleurs, en évaluant le Kd entre des complexes d’effecteur, de translocateur ou d’aiguille et l’ATPase liée ou non au complexe « Gate-keeper », qui est connu comme un régulateur de sécrétion de protéines sécrétées par SST3, nous montrons que l’affinité de PscN avec le complexe de l’aiguille est considérablement augmentée en présence de ce régulateur. Ainsi, un nouveau rôle est assigné au complexe « Gate-keeper » dans la régulation de la sécrétion hiérarchique du SST3, en contrôlant le chargement du complexe de l’aiguille sur l’ATPase.En parallèle, nous avons ainsi l’opportuniste de caracteriser les effets ex vivo et in vivo de molécules identifiées dans un criblage antérieur in vitro en raison de leur capacité à inhibe l’interaction entre PscE et PscG. Ces deux protéines sont les deux chaperonnes cytoplasmiques de PscF, la protéine de l’aiguille du SST3. Cette interaction est une cible intéressante pour une stratégie anti-virulence car des simples ou doubles mutations ponctuelles dans l’interface d’interaction de PscE-PscG diminuent la virulence de P. aeruginosa. Ce travail met en avant les deux meilleures molécules « leads » dont la structure est très proches et qui appartiennent à un cluster hybride combiant les hits de deux libraries de molécules. Ces deux composés inhibent les dommages cellulaires causés par des souches de P. aeruginosa possédant le SST3, ne sont pas toxiques pour des cellules eucaryotes et ont un effet minimal sur la croissance, la mobilité et le métabolisme de la bactérie. De plus, ces « leads » peuvent améliorer considérablement la survie de Galleria mellonnela lors d’infection par P. aeruginosa.Mots clés: Pseudomonas aeruginosa, Système de Sécrétion de Type III, ATPase, Anti-virulenceCharacterization and inhibition of Pseudomonas aeruginosa Type III Secretion SystemPseudomonas aeruginosa is a Gram-negative opportunistic pathogen that causes nosocomial diseases and infects cystic fibrosis patients. The Type III Secretion System (T3SS) is one of its most important virulence factors, allowing the direct injection of four exotoxins into the target eukaryotic cells. An important protein of T3SS is the conserved ATPase, named PscN that is involved in the assembly and functioning of this system. In this work, we demonstrated the interaction of PscN with T3SS secreted cargo proteins and with their chaperons in complex or alone using ELISA, HTRF and MST assays. Of important, MST (Microscale Thermophoresis) allowed us to determine the dissociation constants (Kd) of these proteins and PscN, showing the interaction preference of this enzyme for the cargo or complex proteins rather than for the corresponding chaperons alone. This confirm the hypothesis that the chaperons are released in the bacterial cytoplasm after the complex dissociation. Otherwise, we assess the Kd between the effector, translocator or needle complexes and PscN bound or not to the gate-keeper complex which is described as a regulator of substrate sorting for the secretion. The results showed that the binding of the gate-keeper to PscN dramatically increases its relative affinity for the needle complex, thus revealing a new role of the gate-keeper in the loading of the needle complex to the ATPase for the control of substrate hierarchical secretion in P. aeruginosa.In parallel, committed to the anti-virulence strategy, we take the opportunity to characterize the ex vivo and in vivo effects of compounds identified by a previous in vitro screening to inhibit the interaction of PscE and PscG. These proteins are the two cognate chaperons of the T3SS needle protein PscF in the bacterial cytoplasm. This interaction had been shown to be a valid anti-virulence target because single or double point mutations introduced within the binding site between PscE and PscG lead to a decrease of P. aeruginosa virulence. This work points out two best leads which belong to the structural hybrid cluster combining hits from two different chemical libraries. The two compounds inhibit the cell damages caused by T3SS positive P. aeruginosa strains, are non-toxic for eukaryotic cell and have minimal effect on bacterial fitness. They were also shown to be specific for T3SS and could protect Galleria mellonnela against P. aeruginosa infection.Key words: Pseudomonas aeruginosa, Type III Secretion System, ATPase, Anti-virulence
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Buisson, Isabelle. „L'ecthyma gangréneux à pseudomonas aeruginosa chez le nourrisson : à propos de 6 cas“. Bordeaux 2, 1992. http://www.theses.fr/1992BOR2M063.
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Farra, Anna. „Antibiotic resistance and antibiotic consumption in Sweden with focus on Escherichia coli and Pseudomonas aeruginosa /“. Stockholm, 2007. http://diss.kib.ki.se/2007/978-91-7357-201-9/.
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MILON, VONAU PASCALE. „Antibiotherapie dans les infections a pseudomonas aeruginosa au cours des mucoviscidoses : apport de l'etude de 19 associations antibiotiques“. Aix-Marseille 2, 1992. http://www.theses.fr/1992AIX20166.
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Vincent, Anne Danner-Boucher Isabelle. „Incidence du Pseudomonas aeruginosa multi-résistant sur le devenir après transplantation pulmonaire chez des patients atteints de mucoviscidose à propos de 99 cas nantais /“. [S.l.] : [s.n.], 2008. http://castore.univ-nantes.fr/castore/GetOAIRef?idDoc=46066.
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Carnoy, Christophe. „Interactions mucines - Pseudomonas aeruginosa dans la mucoviscidose : mise en évidence d'adhésines et de sites de reconnaissance glycanniques“. Lille 1, 1991. http://www.theses.fr/1991LIL10133.
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Dans le but d'expliquer la prédominance de P. Aeruginosa au cours des infections bronchiques dans la mucoviscidose, nous nous sommes intéressé à l'interaction de ce genre avec les mucines salivaires de patients atteints de mucoviscidose. La mucoviscidose se caractérise par (i) une hypersécrétion de mucines salivaires, (ii) une sialylation importante de tous les glycopeptides salivaires et (ii) une sulfatation importante des glycopeptides de haute masse moléculaire. Une technique d'adhésion in vitro a permis de montrer que P. Aeruginosa adhérait de manière plus importante sur les glycopeptides salivaires de patients atteints de mucoviscidose que sur ceux de patients normaux et que cette adhésion était en partie liée à l'acide sialique. Une caractérisation des chaînes glycanniques a été effectuée en utlisant des techniques de purification par HPLC, et d'analyse par spectrométrie de masse FAB et spectroscopie RMN. Pour la première fois une forte hétérogénéité des chaînes glycanniques de mucines salivaires humaines a été décrite et 45 oligosaccharides neutres et sialylés ont été identifiés. L'utilisation de néoglycolipides présentant des structures glycanniques similaires à celles rencontrées au niveau des mucines a permis de démontrer que la structure N-acétyllactosamine et les structures sialylées en α2,3 étaient reconnues par P. Aeruginosa. A l'aide d'une technique originale de révélation des protéines membranaires par des mucines radiomarquées, une adhésine membranaire de P. Aeruginosa reconnue par les mucines salivaires d'un patient souffrant de mucoviscidose a été caractérisée
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Fatima, Abdouchakour. „Réservoir environnemental, persistance et succès épidémiologique des populations de Pseudomonas aeruginosa dans un hôpital“. Thesis, Montpellier, 2016. http://www.theses.fr/2016MONTT102/document.
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Pseudomonas aeruginosa est un pathogène d’origine environnementale capable de croître et de persister dans les systèmes de distribution d’eau et la plomberie. A l’hôpital, la fréquence des infections et épidémies associées aux soins dues à P. aeruginosa soulève de nombreuses questions quant à son cycle de transmission à l’homme dans l’environnement hospitalier. La situation épidémiologique du Centre Hospitalier Régional Universitaire de Montpellier a permis d’établir une collection de 730 souches de P. aeruginosa isolées durant une période de 9 ans. Cette collection est représentative des différentes niches environnementales et de deux périodes épidémiologiques marquées. Les souches cliniques impliquées dans des phénomènes épidémiques et des infections graves ont aussi été collectées. L’analyse génétique et phénétique de cette collection a pour objectif de mieux comprendre la structure, la dynamique et la persistance des populations de P. aeruginosa dans divers réservoirs environnementaux hospitaliers ainsi que les relations entre les réservoirs environnementaux et le succès épidémiologique des populations de P. aeruginosa.L’analyse intégrée des données obtenues dans les trois parties de cette étude convergent vers les résultats principaux suivants. Les réservoirs environnementaux médico-technologiques présentent une forte dynamique avec des phénomènes d’émergence clonale en relation avec les traitements réalisés sur les réseaux. A l’échelle d’un hôpital, le réservoir environnemental est directement impliqué dans les phénomènes épidémiques. La rupture du cycle homme/environnement par des barrières physiques conduit à un changement de situation épidémiologique avec une limitation de l’importance et de la fréquence des épidémies clonales. De plus, les souches les plus ubiquitaires et les plus persistantes dans l’environnement correspondent aux génotypes à fort risque épidémique local et mondial ou clones EHR (Epidemic High Risk). La structure de population de P. aeruginosa au sein de l’hôpital est similaire à celle de la population mondiale ou à celle décrite dans d’autres études : une structure épidémique avec la recombinaison qui a un effet prépondérant sur l’émergence des lignées. Le clone EHR majoritaire ST308 est plus résistant aux antibiotiques que les clones prévalants dans l’hôpital mais non impliqués dans des épidémies. Toutefois, la caractérisation de 46 souches du clone EHR majoritaire, ST308, montre une extrême variabilité au sein du génotype avec, en particulier, des comportements divers en termes de résistance aux antibiotiques. La forte capacité de formation de biofilm et la faible motilité décrites dans la littérature comme caractéristique des clones EHR ne sont pas observées dans cette étude. Notre principale hypothèse est que le succès épidémique du clone EHR ST308 dans l’hôpital est lié à sa diversité intraclonale plutôt qu’à un caractère particulier partagé par toutes les souches EHR.Ce travail apporte des arguments forts en faveur de l’implication des réservoirs environnementaux hospitaliers dans les épidémies d’infections associées aux soins dues à P. aeruginosa. Dans le but de mieux contrôler ces épidémies, les résultats de cette étude incitent à la surveillance des clones EHR de P. aeruginosa quel que soit leur profil de résistance aux antibiotiques et à mettre en place des mesures barrières entre l’environnement hydrique et le patient dès qu’un réservoir environnemental d’EHR se constitue.Mots clés : Pseudomonas aeruginosa, infections associées aux soins, épidémie, environnement, réseau d’eau, structure de population, clone à haut risque épidémique, résistance aux antibiotiques, biofilm, motilité, variabilité intraclonale, adaptationPseudomonas aeruginosa is an environmental pathogen that growths in water and plumbing systems. In hospital, the rate of healthcare associated infections (HAIs) and outbreaks caused by P. aeruginosa raised questions about the cycle of its transmission to human beings in the hospital environment. P. aeruginosa epidemiology at the Montpellier Academic Hospital allowed to collect 730 strains isolated over a 9-years period. This collection is representative of various environmental niches and two marked epidemiological periods. Clinical strains involved in outbreak events and serious infections were also included in the study. Genetic and phenetic analysis were performed with the aim to understand structure, dynamics and persistence of P. aeruginosa populations in various hospital reservoirs as well as the relationships between environmental reservoirs and epidemic success of P. aeruginosa.The experimental study, organized in 3 parts, produced the following major results. Medical and technological reservoirs of P. aeruginosa are highly dynamic and clonal emergence occurs in these systems, particularly in relation with networks decontamination by biocides. At the hospital scale, environmental reservoirs are directly involved in outbreak events. Physical barriers between water and patients cut the cycle of transmission from environment to human and markedly changed the epidemiology with a decrease of outbreaks in frequency and incidence. Moreover, the most ubiquitary strains that also persists in environment correspond to Epidemic High Risk (EHR) clones that succeed locally and globally. Population structure of P. aeruginosa within the hospital is similar to the worldwide population or to more local populations previously described: an epidemic structure with a background of recombinations involved in lineages emergence. The major EHR clone ST308 is more resistant to antibiotics than other prevalent clones not involved in outbreaks. However, the study of 46 strains in ST308 showed extreme within genotype variability, particularly various behaviours against antimicrobial agents. Increased ability to form biofilm and decreased motility have been described in literature as specific traits of EHR clones but it is not observed in this study. Our main hypothesis is that epidemic success of EHR clone ST308 in the hospital was linked to its diversity and versatility rather than to specific characters shared by all EHR strains.This study provides strong arguments in favour of the involvement of P. aeruginosa environmental reservoirs in HAI outbreaks. For a better control of these outbreaks, a surveillance of EHR clones of P. aeruginosa should be implemented independently to their antibiotic resistance. Moreover, barriers between environment and patient should be established as soon as an environmental reservoir of EHR clone is detected.Key words : Pseudomonas aeruginosa, Healthcare Associated Infections, outbreak, environment, water network, population structure, epidemic high risk clone, resistance to antibiotics, biofilm, motility, intraclonal variation, adaptation
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Potvin, Eric. „Génomique fonctionnelle de Pseudomonas aeruginosa et analyse moléculaire fine d'un facteur sigma-anti-sigma“. Doctoral thesis, Université Laval, 2007. http://hdl.handle.net/20.500.11794/19067.
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Pseudomonas aeruginosa est un pathogène opportuniste pouvant causer des infections pulmonaires chroniques chez les gens atteints de la Fibrose Kystique (FK). Pour réussir à s’implanter dans les voies respiratoires des patients FK, P. aeruginosa dispose d’un important arsenal de facteurs de virulence, dont la sécrétion de protéases, de lipases, de phospholipases ainsi que la production de toxines spécifiques. Le séquençage complet du chromosome de P. aeruginosa souche PAO1 (6.3 Mb) a révélé une organisation génomique hautement régulée. Dans le but de mieux comprendre l’interaction hôte-pathogène, nous avons utilisé la technique de mutagenèse à étiquette (STM). La STM a permis d’isoler 214 mutants incapables de maintenir l’infection pulmonaire chronique chez le rat. Parmi ceux-ci, le mutant STM2895, contenant un transposon dans le gène PA2895, a été retenu pour des analyses plus approfondies. L'étude phénotypique de STM2895 a permis de constater un défaut dans la production d’exoprotéases lorsque comparé à la souche sauvage PAO1. La caractérisation biochimique de ce défaut, utilisant des tests de dégradation spécifiques et l’immunobuvardage, a démontré qu’au moins deux des quatre protéases majeures sécrétées par P. aeruginosa sont impliquées. En effet, les élastases LasA et LasB ont été démontrées non fonctionnelles probablement dues à un problème de repliement. PA2895, une protéine possédant un domaine transmembranaire prédit, ne code pour aucune fonction connue, mais il est co-transcrit avec le gène PA2896, un facteur sigma putatif de type ECF (extracytoplasmic function). Des analyses en transcriptome sur le mutant STM2895, ainsi que sur un mutant de délétion de PA2896, ont permis de lier l’opéron au métabolisme du fer. De plus, des études in vivo dans le modèle d’infection pulmonaire chronique chez le rat ont clairement démontré que le mutant STM2895 est incapable de se maintenir dans l’hôte au même niveau que la souche sauvage PAO1. Le gène PA2895 est donc essentiel au maintien in vivo de P. aeruginosa dans le poumon de rat.Pseudomonas aeruginosa is an opportunistic pathogen that can cause pulmonary infections in cystic fibrosis patients (CF). To overcome innate self defense, P. aeruginosa possesses a wide arsenal of virulence factors. These include degradation enzymes such as proteases, lipases and phospholipases and the production of three specific toxins: exotoxin A and exoenzymes S and T. Sequencing of the complete P. aeruginosa chromosome (strain PAO1) of 6.3 Mb revealed a highly regulated and complex genomic organization. In order to better understand host-pathogen molecular interactions, we developped a new signature-tagged mutagenesis (STM) approach based on PCR screening. The PCR-based STM technology lead to the identification of 214 mutants deficient in their ability to maintain a chronic pulmonary infection in the rat lung. In that pool of STM mutants, STM2895, which contains a transposon insertion in functional PA2895, was the most frequently drafted during the whole mutant library screening. Phenotypic analyses of the STM2895 strain allowed us to identify an exoprotease production defect as compared with wild type strain PAO1. The biochemical characterization of that proteolytic default using specific degradation assays combined with western blotting revealed that at least two (LasA and LasB) of the four major exoproteases from P. aeruginosa STM2895 strain are inactive. In fact, LasA and LasB elastases were shown to be present in the STM2895 culture supernatant, correctly processed but inactive due to a probable misfolding of proteins. The PA2895 gene (unknown function) encodes a protein with a predicted transmembrane domain. Basic genomic context analyses strongly suggest a cotranscription unit with the downstream gene PA2896, a putative sigma 70 factor from ECF (extracytoplasmic function) type. Microarray experiments on the STM2895 strain and an insertional mutant of the PA2896 gene were performed to establish a link between the putative PA2895-PA2896 operon and the metabolism of iron. Transcriptome analysis also demonstrated a repressive action of PA2895 on the transcription of PA2896 putative sigma factor. Finally, in vivo studies in the rat lung chronic infection model clearly showed a ten-fold decrease in survival capacity of the mutant strain when compared to the PAO1 wild-type strain.
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Faure, Emmanuel. „Implications de la reconnaissance de Pseudomonas aeruginosa par le NLRC4-Inflammasome“. Phd thesis, Université du Droit et de la Santé - Lille II, 2013. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-01060187.
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L'inflammasome est complexe protéique intracellulaire de l'immunité innée permettant la reconnaissance de pathogènes intracellulaires. NLRC4, un Nod-like récepteur permettant l'activation de l'inflammasome est impliqué dans la reconnaissance du flagelle ainsi que du système de sécrétion de type 3 (SST3) de Pseudomonas aeruginosa, une bactérie majoritairement extracellulaire. Nous avons donc déterminer l'impact de la reconnaissance de P. aeruginosa par le NLRC4-inflammasome in vivo dans un modèle murin de pneumonie aiguë. De façon surprenante, l'activation du NLRC4-inflammasome par le SST3 de P. aeruginosa contribue à diminuer la survie de l'hôte en diminuant la clairance bactérienne pulmonaire et en augmentant la lésion pulmonaire induite. En effet, la perte de l'activation de l'inflammasome chez les souris NLRC4/- permet d'une part, une réponse précoce méfiée par l'IL-17A. Cette réponse dépendant de l'IL-17A conduit à une expression majeure de peptides antimicrobiens par l'épithélium pulmonaire et diminue la lésion pulmonaire en diminuant le recrutement des cellules immunitaires inflammatoires. L'administration d'IL-18 recombinante murine ou l'inhibition de cette voie par un anticorps anti-IL-17A inhibe cette réponse IL-17A dépendante. Ces résultats mettent en évidence un nouveau rôle du SST3 de P. aeruginosa, qui en plus de son effet cytotoxique et de la translocation d'exotoxines, permet d'activer l'inflammasome pour échapper à la réponse immunitaire innée de l'hôte en inhibant une voie IL-17 dépendante.
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Kukavica-Ibrulj, Iréna, und Iréna Kukavica-Ibrulj. „Génomique fonctionnelle du régulateur transcriptionnel PYCR de Pseudomonas aeruginosa essentiel in vivo et comparaison des cinétiques d'infection pulmonaire chronique“. Doctoral thesis, Université Laval, 2007. http://hdl.handle.net/20.500.11794/19688.
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Pseudomonas aeruginosa est une bactérie pathogène opportuniste, hautement résistant à une multitude d’antibiotiques qui infecte principalement les patients immunosupprimés. Il représente la cause principale de morbidité et de mortalité chez les patients atteints de fibrose kystique (mucoviscidose). Le but principal de ce projet consistait à identifier et à caractériser des gènes essentiels à l’infection et au maintien de P. aeruginosa dans un modèle animal d’infection pulmonaire chronique. À partir d’une banque de mutants transpositionnels, nous avons identifié 148 mutants de P. aeruginosa déficients à causer l’infection pulmonaire chronique chez le rat. Suite à des analyses bioinformatiques, le mutant inactivant le gène PA5437 a été sélectionné. L’opéron adjacent code pour les sous unités du pyruvate carboxylase (pycA et pycB) et est régulé par le gène PA5437, d’où l’appellation pycR pour pyruvate carboxylase regulator. Le pycR a été identifié comme étant un régulateur transcriptionnel de type LysR ayant une région typique de liaison à l’ADN. Le codon d’initiation de la transcription des gènes pycR et pycA a été identifié par élongation d’amorce. La capacité de liaison de la protéine PycR à l’ADN a été confirmée à l’aide du gel à retardement. L’implication de PycR dans la virulence bactérienne in vivo a été confirmée par indice de compétition et après 7 jours d’infection le mutant déficient ΔpycR est complètement éliminé du poumon du rat. L’importance de PycR a aussi été confirmée in vitro à l’aide des tests phénotypiques et enzymatiques démontrant la déficience dans la production de la lipase, de l’estérase et du biofilm. Finalement, l’analyse des résultats métaboliques et transcriptomiques a confirmé l’importance de PycR dans la régulation du métabolisme de lipides, de l’activité lipolytique, de la respiration anaérobique, de la formation du biofilm et des gènes régulés par le quorum sensing. Dans un second volet, une étude comparative entre souches prototypes (PAO1 et PA14) de P. aeruginosa et un isolat clinique (LESB58) de la fibrose kystique a été réalisée dans un modèle de l’infection pulmonaire chronique chez le rat. Cette étude a permis d’identifier des différences significatives au niveau de la localisation bactérienne dans les tissus pulmonaires de l’isolat clinique LESB58. D’importantes différences ont également été notées au niveau des facteurs de virulence comme la mobilité et la formation du biofilm. À long terme, les nouvelles connaissances acquises en génomique fonctionnelle devraient permettre d’identifier et de développer de nouvelles approches thérapeutiques permettant de combattre et mieux comprendre les infections causées par cette bactérie.Pseudomonas aeruginosa est une bactérie pathogène opportuniste, hautement résistant à une multitude d’antibiotiques qui infecte principalement les patients immunosupprimés. Il représente la cause principale de morbidité et de mortalité chez les patients atteints de fibrose kystique (mucoviscidose). Le but principal de ce projet consistait à identifier et à caractériser des gènes essentiels à l’infection et au maintien de P. aeruginosa dans un modèle animal d’infection pulmonaire chronique. À partir d’une banque de mutants transpositionnels, nous avons identifié 148 mutants de P. aeruginosa déficients à causer l’infection pulmonaire chronique chez le rat. Suite à des analyses bioinformatiques, le mutant inactivant le gène PA5437 a été sélectionné. L’opéron adjacent code pour les sous unités du pyruvate carboxylase (pycA et pycB) et est régulé par le gène PA5437, d’où l’appellation pycR pour pyruvate carboxylase regulator. Le pycR a été identifié comme étant un régulateur transcriptionnel de type LysR ayant une région typique de liaison à l’ADN. Le codon d’initiation de la transcription des gènes pycR et pycA a été identifié par élongation d’amorce. La capacité de liaison de la protéine PycR à l’ADN a été confirmée à l’aide du gel à retardement. L’implication de PycR dans la virulence bactérienne in vivo a été confirmée par indice de compétition et après 7 jours d’infection le mutant déficient ΔpycR est complètement éliminé du poumon du rat. L’importance de PycR a aussi été confirmée in vitro à l’aide des tests phénotypiques et enzymatiques démontrant la déficience dans la production de la lipase, de l’estérase et du biofilm. Finalement, l’analyse des résultats métaboliques et transcriptomiques a confirmé l’importance de PycR dans la régulation du métabolisme de lipides, de l’activité lipolytique, de la respiration anaérobique, de la formation du biofilm et des gènes régulés par le quorum sensing. Dans un second volet, une étude comparative entre souches prototypes (PAO1 et PA14) de P. aeruginosa et un isolat clinique (LESB58) de la fibrose kystique a été réalisée dans un modèle de l’infection pulmonaire chronique chez le rat. Cette étude a permis d’identifier des différences significatives au niveau de la localisation bactérienne dans les tissus pulmonaires de l’isolat clinique LESB58. D’importantes différences ont également été notées au niveau des facteurs de virulence comme la mobilité et la formation du biofilm. À long terme, les nouvelles connaissances acquises en génomique fonctionnelle devraient permettre d’identifier et de développer de nouvelles approches thérapeutiques permettant de combattre et mieux comprendre les infections causées par cette bactérie.
The opportunistic pathogen Pseudomonas aeruginosa is highly resistant to most classes of antibiotics and causes a wide variety of infections in compromised hosts. In addition, it represents the major cause of morbidity and mortality in cystic fibrosis (CF) patients. The principal goal of the present research project was to identify and to characterise P. aeruginosa genes essential for causing a chronic lung infection. Using a PCR-based signature-tagged mutagenesis, we identified a P. aeruginosa STM5437 mutant having an insertion into the PA5437 gene; its inactivation causes attenuation of virulence in vivo. The PA5437 gene, now called pycR, regulates the adjacent operon encoding the pyruvate carboxylase subunits (pyruvate carboxylase regulator). PycR has the signature of a putative transcriptional regulator with a predicted helix-turn-helix motif binding to a typical LysR DNA-binding motif identified in the PA5436 (pycA)-PA5437 (pycA) intercistronic region. Transcriptional start sites of pycA and pycR were identified by primer extension and the DNA binding capacity of PycR was confirmed by a DNA mobility gel shift assay. Genome-wide transcriptional profiling indicated that the genes whose control were differentially expressed by PycR implicated genes responsible for lipid metabolism, lipolytic activity, anaerobic respiration, biofilm formation and a number of quorum sensing regulated genes. This study defines PycR as a major regulator in virulence and where mutations in pycR have pleiotropic effects on the expression of multiple virulence factors such as lipase, esterase and biofilm formation. The expressions of several of these genes are associated with chronic lung persistence. In the second part of the study, P. aeruginosa prototype strains PAO1 and PA14 were compared with the CF isolate LESB58 in the rat model of chronic lung infection. This comparative study identified major differences for LESB58; in vivo in bacterial localisation in the rat lung and in vitro for motility and biofilm production. Functional genomics of P. aeruginosa will provide new insights for the development of novel therapeutic targets. Genomic biodiversity may explain the variation in severity of the P. aeruginosa infections in CF disease.
The opportunistic pathogen Pseudomonas aeruginosa is highly resistant to most classes of antibiotics and causes a wide variety of infections in compromised hosts. In addition, it represents the major cause of morbidity and mortality in cystic fibrosis (CF) patients. The principal goal of the present research project was to identify and to characterise P. aeruginosa genes essential for causing a chronic lung infection. Using a PCR-based signature-tagged mutagenesis, we identified a P. aeruginosa STM5437 mutant having an insertion into the PA5437 gene; its inactivation causes attenuation of virulence in vivo. The PA5437 gene, now called pycR, regulates the adjacent operon encoding the pyruvate carboxylase subunits (pyruvate carboxylase regulator). PycR has the signature of a putative transcriptional regulator with a predicted helix-turn-helix motif binding to a typical LysR DNA-binding motif identified in the PA5436 (pycA)-PA5437 (pycA) intercistronic region. Transcriptional start sites of pycA and pycR were identified by primer extension and the DNA binding capacity of PycR was confirmed by a DNA mobility gel shift assay. Genome-wide transcriptional profiling indicated that the genes whose control were differentially expressed by PycR implicated genes responsible for lipid metabolism, lipolytic activity, anaerobic respiration, biofilm formation and a number of quorum sensing regulated genes. This study defines PycR as a major regulator in virulence and where mutations in pycR have pleiotropic effects on the expression of multiple virulence factors such as lipase, esterase and biofilm formation. The expressions of several of these genes are associated with chronic lung persistence. In the second part of the study, P. aeruginosa prototype strains PAO1 and PA14 were compared with the CF isolate LESB58 in the rat model of chronic lung infection. This comparative study identified major differences for LESB58; in vivo in bacterial localisation in the rat lung and in vitro for motility and biofilm production. Functional genomics of P. aeruginosa will provide new insights for the development of novel therapeutic targets. Genomic biodiversity may explain the variation in severity of the P. aeruginosa infections in CF disease.
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Sans, Serramitjana Eulàlia. „Nanoencapsulated antimicrobials to fight Pseudomonas aeruginosa respiratory infections in cystic fibrosis patients: a promising strategy“. Doctoral thesis, Universitat de Barcelona, 2017. http://hdl.handle.net/10803/461914.
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P. aeruginosa is one of the major opportunistic pathogen colonizing the respiratory tract of cystic fibrosis (CF) patients and causing chronic airways infection. Once P.aeruginosa established chronically in the CF lung, bacterial density increases and the microorganism switches to a mucoid form and to a stable biofilm mode of growth in which susceptibility to antimicrobials decreases. The high resistance of P.aeruginosa to multiple antimicrobials led to scenarios in which almost no treatment options are available. In this regard, the research on the introduction of less toxic antimicrobials as well as the use of pharmaceutical forms enabling dose reductions, longer administration intervals, and reduced systemic toxicity has been stimulated.
Therefore, the aim of this thesis was to develop nanoencapsulated colistin and tobramycin in lipid nanoparticles (SLN: Solid Lipid Nanoparticles and NLC: Nanostrucutured Lipid Carriers) and explore their antimicrobial activity versus free drug against P.aeruginosa clinical isolates from CF patients and to investigate the efficacy of these novel formulations in the eradication of biofilms, one of the most relevant mechanisms involved in persistence and in chronic infections.
ELABORATION AND CHARACTERIZATION
The main objective of the first part of this thesis was to elaborate and characterize lipid nanoparticles (SLN and NLC) as colistin and tobramycin carriers to treat P.aeruginosa lung infection.
The nanoparticles obtained displayed a 200–400 nm size, high drug encapsulation (79–94%) and a sustained drug release profile. The integrity of the nanoparticles was not affected by nebulization through a mesh vibrating nebulizer. Next, tobramycin-NLCs were able to overcome an artificial mucus barrier in the presence of mucolytic agents. Moreover, lipid nanoparticles loaded with both antimicrobials appeared to be less toxic than free drug in cell culture. Finally, an in vivo distribution experiment showed that nanoparticles spread homogenously through the lung and there was no migration of lipid nanoparticles to other organs, such as liver, spleen or kidneys.
STABILITY
The second essential point of this work concerns the stability of both types of lipid nanoparticles after freeze-drying.
The results showed that colistin-SLNs lost their antimicrobial activity at the third month; on the contrary, the antibacterial activity of colistin-NLCs was maintained throughout the study within an adequate range. In addition, colistin-NLCs exhibited suitable physic-chemical properties at 5 °C and 25 °C/60% relative humidity over one year. Altogether, colistin-NLCs proved to have better stability than colistin- SLNs.
The last part focuses on the study of the antimicrobial activity of SLN and NLC loaded with colistin and tobramycin against P.aeruginosa isolates from Sant Joan de Déu and Vall d’Hebrón hospitals CF patients.
Regarding the data documenting planktonic experiments, colistin nanoparticles had the same antimicrobial activity as free drug. The activity of tobramycin-loaded SLN was less than that of either tobramycin-loaded NLC or free tobramycin. However, in the relation to biofilms, nanoencapsulated antimicrobials were much more efficient than their free form. Moreover, the results showed the more rapid killing of P. aeruginosa bacterial biofilms by NLC-colistin than by free colistin. Nevertheless, the two formulations did not differ in terms of the final percentages of living and dead cells, which were higher in the inner than in the outer layers of the treated biofilms.
Since it seems clear than biofilms play a key role in respiratory infections in CF patients by P. aeruginosa, these formulations seem to us encouraging alternative to the currently available CF therapies.P.aeruginosa és un dels principals patògens oportunistes colonitzadors del tracte respiratori dels pacients amb fibrosi quística (FQ) causant una infecció crònica. Una vegada aquest microorganisme ja està establert de manera crònica al pulmó, la densitat bacteriana augmenta i P.aeruginosa canvia de morfologia no mucosa a mucosa afavorint la formació de biofilm en el qual la susceptibilitat als antibiòtics es veu enormement disminuïda. L’elevada resistència de P.aeruginosa a múltiples antimicrobians ens condueix a un escenari on gairebé no hi ha opcions de tractament disponibles. En aquest sentit, la recerca en la introducció d’antimicrobians menys tòxics així com l’ús de noves formes farmacèutiques amb la capacitat de reduir la dosi, allargar els intervals d’administració així com reduir la toxicitat adquireix molta rellevància. Per tant, l’objectiu d’aquesta tesi va ser desenvolupar nanopartícules lipídiques (Solid Lipid Nanoparticles: SLN y Nanostructured Lipid Carriers: NLC) carregades amb colistina I també les partícules amb tobramicina, explorar la seva activitat antimicrobiana comparant-la amb la seva forma lliure contra soques clíniques de P.aeruginosa aïllades de pacients amb FQ, i investigar l’eficàcia d’aquestes noves nanoformulacions en l’eradicació dels biofilms ja que és un dels mecanismes més rellevants associat a les infeccions cròniques.
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Hendon-Dunn, Charlotte. „Bacteriophages as a potential treatment for Pseudomonas aeruginosa mediated chest infections in cystic fibrosis patients“. Thesis, University of Brighton, 2011. https://research.brighton.ac.uk/en/studentTheses/f92ff33d-5bf8-48c3-aba3-76d5fa5936f8.
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Cystic fibrosis (CF) affects between 1in 2000 and 1 in 4500 births in caucasians of European descent. It is caused by a defect in the cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR) resulting in abnormal membrane osmolarity. CF is a multi-organ disease, however the cause of death is most often due to respiratory failure caused by infection of the airway epithelia with the bacterium Pseudomonas aeruginosa. Ps. aeruginosa grows in the airways as a biofilm and is recalcitrant to treatment with antibiotics. Therefore alternative therapies are urgently required. Bacteriophages have been and still are used in ex-Soviet bloc countries as a treatment for many infections. However, to date very few comprehensive studies have been conducted into phage therapy in humans. The aim of this study was to characterise several Ps. aeruginosa phage and to develop an in vitro co-culture model simulating a Ps. aeruginosa lung infection on which bacteriophage could be assessed for their efficacy as a therapeutic agent.
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Somerville, Margaret. „The action of extracellular products from Pseudomonas aeruginosa on airway mucus secretion in vivo and in vitro“. Thesis, University of Newcastle Upon Tyne, 1989. http://ethos.bl.uk/OrderDetails.do?uin=uk.bl.ethos.241369.
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Meynard, Jean-Luc. „Facteurs de risque des infections bactériennes au cours de l'infection par le VIH“. Paris 6, 2003. http://www.theses.fr/2003PA066454.
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Nilsson, Elin. „Characterization of IgY for Oral Immunotherapy and Prevention of Pseudomonas aeruginosa Infections in Cystic Fibrosis Patients“. Doctoral thesis, Uppsala universitet, Klinisk kemi, 2009. http://urn.kb.se/resolve?urn=urn:nbn:se:uu:diva-100191.
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Chicken antibodies, commonly referred to as IgY, have several properties that make them suitable for oral treatment of infections and there is essentially no risk for development of resistance. The overall aims of this thesis were to investigate Anti-Pseudomonas IgY as prophylaxis against infections with Pseudomonas aeruginosa for cystic fibrosis (CF) patients and to characterize the antibody treatment. We found that Anti-Pseudomonas IgY has affinity for P. aeruginosa flagellin, the major component of the flagellum. This is important since the flagellum is required for host invasion and establishment of infection. Flagellin induces inflammation. The main cause of morbidity and mortality among CF patients is chronic colonization of the airways with P. aeruginosa. We have studied prophylactic treatment of 17 Swedish CF patients with Anti-Pseudomonas IgY for up to twelve years. The results were compared with a control group of 23 Danish CF patients. Patients treated with IgY had 2.3 P. aeruginosa positive cultures/100 treatment months vs. 7.0 cultures/100 treatment months in the control group (p=0.028), and the time from inclusion to the first recolonization was significantly longer in the IgY-treated group (p=0.012). Lung function was preserved and patients treated with IgY had good nutritional status at the end of the study. Furthermore, other bacteria have not emerged instead of P. aeruginosa. Freeze-drying of IgY and the content of IgY preparations for oral use was investigated. Besides IgY, 26 egg yolk proteins were identified. Some of the proteins are known to have antimicrobial and immunostimulatory effects, and could have a positive additive effect to IgY treatment. Cholesterol levels were low. Conclusion: Anti-Pseudomonas IgY is a promising complement in the prevention of Pseudomonas aeruginosa infections in CF patients, partly explained by the fact that IgY binds to flagellin.Felatkigt ISBN ändrat: Tidigare 978-91-554-7477-5 nu 978-91-554-7478-2
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Chambonnier, Gaël. „Etude de la transition entre les infections aiguës et chroniques chez Pseudomonas aeruginosa : le système Rsm“. Thesis, Aix-Marseille, 2018. http://www.theses.fr/2018AIXM0073.
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Pseudomonas aeruginosa est une bactérie à gram-négatif et un pathogène opportuniste humain qui peut engendrer des infections de type aigu ou chronique. Les infections aiguës sont caractérisées par un mode de vie planctonique des bactéries, la production du système de sécrétion de type III qui cible les cellules de l’hôte et une faible expression des deux petits ARN non codant RsmY et RsmZ. Au contraire, l’infection chronique est caractérisée par un mode de vie sessile au sein d’un biofilm, la producion du système de sécrétion de type VI Hsi1 impliqué dans la compétition bactérienne et une forte expression de RsmY et RsmZ. Le contrôle de ces états infectieux dépend d’un réseau de régulation complexe impliquant notamment le système à deux composants GacS/GacA ainsi que les histidine kinases RetS et LadS qui régulent l’expression des deux petits ARN. Ces deux ARN agissent par titration des répresseur post-transcriptionnels RsmA et RsmF permettant ainsi la traduction des transcrits des facteurs de virulence. Si les mécanismes de ces 3 voies et le fonctionnement des petits ARN Rsm ont été étudiés, des inconnues subsistent en ce qui concerne la connexion de LadS avec GacS/GacA et/ou RetS et comment s’effectue la transition entre les deux modes d’infection en réponse à RsmY et RsmZ. Au cours de ma thèse, j’ai pu montrer que i) le rôle activateur de LadS est dépendant de la voie GacS/GacA et ii) la transition entre les infections aiguës et chroniques est dépendante de la concentration en petits ARN Rsm et qu’elle est progressive engendrant l’existence d’états intermédiaires où la bactérie présente à la fois des marqueurs de l’infection aiguë et de l’infection chroniquePseudomonas aeruginosa is a gram-negative bacterium and a human opportunistic pathogen responsible for acute and chronic infections. Acute infections are characterized by a planktonic lifestyle of the bacteria, the production of the type III secretion system that targets the host cells and a low concentration of the two small non-coding RNAs RsmY and RsmZ. In contrast, chronic infections are characterized by a sessile lifestyle into a biofilm, the production of the type VI secretion system Hsi1 involve in bacterial dueling and a high concentration of RsmY and RsmZ. The control of these states of infection depends on a complex regulatory network that mainly implies the GacS/GacA two-component system and the RetS and LadS histidine kinases which control the expression of the two small RNAs. These two RNAs act by titrating the post-transcriptional repressor RsmA (and RsmF) thus allowing the translation of the virulence factors’ mRNAs. While the overall mechanisms of these three pathways and the functioning of RsmY and RsmZ have been studied, gray areas remain to be lighten on one hand with regard to the connection of LadS with GacS/GacA and/or RetS and on the other hand concerning the transition between the two infectious modes in response to the two small RNAs. During my Ph.D, I demonstrated that LadS acts through the GacS/GacA pathway and I showed that the transition between the acute and chronic infections depends on the concentration of the small RNAs Rsm. I also pointed out that the transition is progressive what leads to the existence of intermediate states where a bacterium present both acute and chronic markers
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Moyne, Oriane. „Approche métabolomique pour l'étude de l'évolution adaptative de Pseudomonas aeruginosa au cours des infections pulmonaires chroniques dans la mucoviscidose“. Thesis, Université Grenoble Alpes (ComUE), 2019. http://www.theses.fr/2019GREAS003/document.
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L’infection pulmonaire chronique à Pseudomonas aeruginosa (P. a.) est considérée comme la principalecause de morbidité et de mortalité liée à la mucoviscidose. Au cours de cette infection persistante, labactérie s'adapte à l’environnement pulmonaire caractéristique de ces patients et évolue avec son hôtependant des décennies. Cette évolution adaptative est portée par les phénotypes, avec notamment unediminution de la virulence et une augmentation de la résistance aux antibiotiques au cours du temps. Bienque plusieurs études aient tenté d’évaluer les mécanismes génétiques de cette évolution, il demeureaujourd’hui difficile d’expliquer les relations entre les mutations accumulées dans le génome bactérien etl’expression de phénotypes cliniquement pertinents, ou encore de corréler ces mutations avec l’état desanté du patient.Nous proposons dans ce travail d’étudier les mécanismes sous-tendant cette évolution adaptative à unniveau d’observation post-génomique : la métabolomique. Dernière-née des disciplines –omiques, lamétabolomique permet la prise de vue instantanée du métabolisme, et offre une vision au plus proche duphénotype. Pour cela, nous avons constitué une banque de lignées clonales évolutives de P. a. prélevéesau cours de l’infection pulmonaire chronique chez des patients atteints de mucoviscidose. Cette banque aensuite été caractérisée aux plans clinique, phénotypique et métabolomique. L’intégration de ces différentsniveaux d’information par des méthodes statistiques multi-tableaux nous a permis de mettre en évidencedes voies métaboliques impliquées dans la patho-adaptation de P. a. à son hôte.Nos résultats permettent de faire émerger de nouvelles hypothèses pour le développement d’outilsthérapeutiques et diagnostiques visant à améliorer la prise en charge de ces infections particulièrementrésistantes aux antibiotiques. De plus, nos travaux démontrent l’intérêt de la métabolomique pour l’étudede l’évolution adaptative bactérienne en conditions naturellesChronic lung infection with Pseudomonas aeruginosa (P. a.) is considered as the leading cause of cysticfibrosis (CF) morbidity and mortality. During this persistent infection, the bacterium adapts to the typical lungenvironment of these patients and evolves within its host for decades. This adaptive evolution is driven byphenotypes, including a decrease in virulence and an increase in antibiotic resistance over time. Althoughseveral studies have attempted to elucidate the genetic mechanisms of this evolution, it remains difficulttoday to explain the relationships between the accumulated genomic mutations and the expression ofclinically relevant phenotypes, or to correlate these mutations with the patient’s health status.In this work, we propose to study the mechanisms underlying this adaptive evolution at a post-genomicobservation level: metabolomics. Metabolomics, the newest of the -omics disciplines, provides an instantview of the metabolic activities, and furnishes a vision as close as possible to the phenotype. To this end,we constructed a bank of evolutive clonal P. a. lineages sampled during chronic lung infection in patientswith CF. This bank was then clinically, phenotypically and metabolomically characterized. Integration ofthese different levels of information by multi-block statistical methods has allowed us to highlight metabolicpathways involved in within-host patho-adaptation of P. a. .Our results rise new hypotheses for the development of therapeutic and diagnostic tools with the aim ofimproving the management of these infections particularly resistant to antibiotics. In addition, our workdemonstrates the interest of metabolomics to study bacterial adaptive evolution under natural conditions
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Hedqvist, Camilla. „Lyophilization of specific IgY antibodies against Pseudomonas Aeruginosa used as therapy for Cystic fibrosis patients“. Thesis, Uppsala universitet, Institutionen för kvinnors och barns hälsa, 2013. http://urn.kb.se/resolve?urn=urn:nbn:se:uu:diva-227236.
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Pseudomonas Aeruginosa is a common gram-negative bacterium present in the environment. It causes severe infections in immunosuppressed patients. Cystic fibrosis patients are especially at risk of being infected with Pseudomonas Aeruginosa. Ongoing studies are preformed to find alternative therapies to antibiotics, due to increased resistance. One new treatment is intake of specific IgY antibodies against Pseudomonas Aeruginosa as an oral therapy. The problem today is that IgY solutions must be kept frozen until consumed. In this study we examined the possibility to freeze-dry specific IgY antibodies without losing any activity or specificity of the antibodies. This would be more convenient of patients, as well as it makes transportation and storage easier. The methods used were ELISA for control of activity, western blot analysis and SDS-PAGE gel for control of specificity. Three different batches of the IgY anti-Pseudomonas Aeruginosa solution were tested. The results showed that no loss in activity occurred that would affect clinical outcome or change of specificity in the antibodies after freeze-drying appears. This indicates that it is possible to replace the liquid antibody to a freeze-dried powder.