Dissertationen: „Hydrolyse des protéines“

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Aubes-Dufau, Isabelle. „Etude de l'amertume des hydolysats enzymatiques de protéines“. Toulouse, INSA, 1995. http://www.theses.fr/1995ISAT0026.

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Une reaction modele, l'hydrolyse de l'hemoglobine par la pepsine, a permis de mettre au point plusieurs procedes: production d'hydrolysats, methodes analytiques (determination du degre d'hydrolyse, chromatographie d'exclusion (colonne superose 12), chromatographie en phase inverse, analyse sensorielle), et methodes de fractionnement permettant d'isoler des composes amers. Afin de les generaliser, les techniques ont ete egalement appliquees a d'autres hydrolysats d'hemoglobine obtenus avec des enzymes de type et de specificite divers (proctase, alcalase, neutrase, papaine), ainsi qu'a d'autres types d'hydrolysats: hydrolysats de gelatine et de caseine produits par les cinq proteases precedemment citees, hydrolysats industriels. Il decoule de cette etude qu'il n'est pas possible de prevoir l'apparition d'un gout amer en considerant les parametres d'hydrolyse. En effet, la formation d'amertume semble dependre principalement du substrat de depart, mais aucune relation ne peut etre etablie avec le type ou la specificite de l'enzyme ou avec le degre d'hydrolyse. Cependant, il apparait que les fractions ameres sont extraites preferentiellement et selectivement par le butanol 2 et correspondent toujours a une gamme de poids moleculaires de 500 a 5000 da, determinee lors d'ultrafiltrations en cascade. De plus, les peptides principaux responsables de l'amertume des hydrolysats d'hemoglobine obtenus avec la pepsine, la proctase et l'alcalase ont ete isoles et identifies (ex: vv hemorphine 7). Il s'avere qu'ils sont specifiquement adsorbes sur la matrice de la colonne superose 12, faisant ainsi de cette technique une methode de detection potentielle de l'amertume des hydrolysats. Elle a d'ailleurs ete validee avec les hydrolysats non amers (hydrolysats d'hemoglobine produits par la papaine et la neutrase, hydrolysats de gelatine et hydrolysats industriels). Par contre, elle n'est pas forcement generalisable puisqu'elle n'est pas respectee dans le cas des hydrolysats amers de caseine. Elle reste toutefois interessante et doit etre envisagee lors d'etudes d'hydrolysats

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Teze, David. „Recherche des bases moléculaires de l’équilibre transglycosylation / hydrolyse d’une glycoside hydrolase de la famille 1“. Nantes, 2012. http://archive.bu.univ-nantes.fr/pollux/show.action?id=76219dd9-c156-4a82-990c-1742703c4252.

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Dans cette étude nous nous sommes intéressés à la β-glycosidase de Thermus thermophilus (Tt-β-gly), enzyme appartenant à la famille 1 des glycosides hydrolase (classification CAZY). Tt-β-gly catalyse les réactions d’hydrolyse et de transglycosylation de glycosides. Cette dernière présente un intérêt pour la synthèse d’oligosaccharides, qui sont des molécules difficiles à produire par voie chimique. L’évolution dirigée de cette enzyme avait été réalisée au laboratoire, permettant d’obtenir trois mutants à activité synthétique améliorée. Pour comprendre les bases moléculaires de cette amélioration nous avons caractérisé cinétiquement les mutants obtenus par évolution dirigée et avons résolu la structure cristallographique de deux d’entre eux. Nous en avons tiré une hypothèse sur l’effet des mutations qui pourrait se généraliser pour la création de transglycosidases par mutagenèse rationnelle. Ainsi, nous avons créé quatre nouveaux mutants qui présentent une activité synthétique améliorée, permettant de catalyser la formation de N(Me)-O-Bn-N-(β-D-fucopyranosyl(1→3)β-D-glucopyranosyl)hydroxylamine avec des rendements de 57 à 77% contre 36% pour Tt-β-gly native. D’un autre côté nous avons étudié la dynamique des molécules d’eau internes de la structure de Tt-β-gly, nous intéressant particulièrement à la recherche de « canaux d’eau » potentiels dans cette enzyme, susceptibles d’expliquer l’équilibre hydrolyse/transglycosylation. Nous avons pour cela combiné des approches de modélisation moléculaire et de suivi des échanges protons-deutérons par spectrométrie de masse (DXMS). Cette étude nous a permis d’identifier des canaux d’eau potentiels au sein de la structure de Tt-β-gly
In this study we investigated the Thermus thermophilus β-glycosidase (Tt-β-Gly), an enzyme belonging to family 1 glycoside hydrolases (CAZy classification). Tt-β-gly catalyzes hydrolysis and transglycosylation of glycosides. The later is of particular interest for the synthesis of oligosaccharides which are extremely challenging to produce chemically. Directed evolution of this enzyme was carried out in the laboratory to obtain three mutants with improved synthetic activity. These mutants were characterized and the structures of two of them were determined by protein crystallography in order to understand the molecular basis of this improvement. We propose a working hypothesis about the effect of mutations in order to create new transglycosidases by rational mutagenesis. Thus, we created four new mutants that exhibit improved synthetic activity and allow the formation of N (Me)-O-Bn-N-(β-D-fucopyranosyl (1 → 3) β-D-glucopyranosyl) hydroxylamine with yields of 57-77% against only 36% when wild type Tt-β-Gly was used. On the other hand, we have studied the dynamics of internal water molecules in the Tt-β-Gly structure, particularly focusing on searching potential "water channels" in this enzyme, which may explain the transglycosylation over hydrolysis balance. For this, we combined molecular modeling approaches and monitoring of proton-deuteron exchange by mass spectrometry (DXMS). During this study we identified potential water channels within the Tt-β-Gly structure

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Saravanamuthu, Gunalini. „Détermination des sites d'interaction des protéines par spectrométrie de masse MALDI-TOF“. Paris 6, 2011. http://www.theses.fr/2011PA066730.

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L’objectif principal de ce travail était l’étude par spectrométrie de masse des propriétés des complexes non covalents désorbés en phase gazeuse et le développement de méthode pour établir les sites d’interactions entre protéines. Pour cela, un complexe non covalent entre la trypsine bovine (T) et son inhibiteur sBBI a été choisi comme modèle dans nos études. Une première approche pour déterminer les sites d’interaction a été abordée. Elle consiste d’une part en l’optimisation de la modification chimique des systèmes étudiés soit isolés soit au sein du complexe non-covalent sous conditions non dénaturantes et d’autre part en la comparaison des produits de digestion de ces protéines par spectrométrie de masse MALDI-TOF. Ainsi l’analyse comparative permet l’identification des zones d’interactions entre les protéines. Pour cela, plusieurs modifications chimiques ont été choisies. Pour préciser les positions des résidus des modifiées, le séquençage de peptides en en MS/MS par MALDI-TOF/TOF a été effectué. Cette approche a permis de déterminer des sites d’interactions entre la trypsine (T) et son inhibiteur sBBI. Dans un second temps, la formation et le comportement du complexe T/sBBI (préparé sous conditions physiologiques) ont été explorés par ESI-MS pour être étendus à d’autres inhibiteurs. L’utilisation de cet outil a montré des changements significatifs de conformation du complexe en phase gazeuse selon l’état de solvatation et l’état de charge, responsables de la migration de Ca2+ de l’enzyme à l’inhibiteur

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Boudaud, Nathalie. „Contribution à l'étude des arômes de viandes cuites : analyse d'arômes élaborés à partir d'hydrolysats protéiques de poulet“. Nantes, 1992. http://www.theses.fr/1992NANT2049.

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Les preparations industrielles d'aromes de viandes cuites sont des melanges complexes qui peuvent etre obtenus au moyen d'un traitement comprenant la proteolyse enzymatique de sous-produits animaux dans un premier stade, suivi par le developpement de la reaction de maillard sur le materiau proteique extrait. L'action de la papaine sur la matiere premiere selon le procede en vigueur, qui peut etre amelioree sur un certain nombre de points, conduit a un hydrolysat contenant des amino-acides libres et des peptides de poids moleculaires inferieurs a 4000 daltons. La nature des amino-acides les plus abondants et le contenu glucidique tres faible de l'hydrolysat constituent des facteurs defavorables au developpement d'un arome du type viande rotie lors du traitement thermique. L'utilisation d'additifs permet de corriger cette deficience: l'apport de composes amines (amino-acides et uree) favorise la formation de pyrazines et l'addition de preparations aromatisantes riches en furannes, thiazoles et pyrazines, s'avere benefique du point de vue olfactif

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Nouri, L'Hadi. „Etude des performances du réacteur torique-application à l'hydrolyse enzymatique des protéines végétales“. Nantes, 1994. http://www.theses.fr/1994NANT2047.

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Dans ce memoire, nous avons caracterise l'ecoulement et le melange dans trois reacteurs toriques de volume differents. L'etude a porte sur l'influence de la vitesse de rotation du mobile d'agitation sur le melange et la vitesse moyenne de circulation. Nous avons propose des correlations empiriques permettant de predire la variation du nombre de reynolds d'ecoulement, donc de la vitesse moyenne de circulation, en fonction des conditions d'agitation et des caracteristiques geometriques des reacteurs. D'autre part, nous avons caracterise le comportement de l'ecoulement par un modele piston avec dispersion axiale et recirculation totale. Par ailleurs, nous avons etudie la cinetique de l'hydrolyse pepsique des proteines vegetales (gliadines de ble), en vue de modifier leurs proprietes fonctionnelles et nutritionnelles, et la mise en uvre de cette reaction dans les reacteurs fermes agite et torique. L'avancement de la reaction est caracterise par le degre d'hydrolyse et les hydrolysats sont analyses par chromatographie (rp-hplc) et l'electrophorese (sds-page). Sur la base de la puissance dissipee, nous avons compare les performances du reacteur torique a celles du reacteur agite. Les performances du reacteur torique peuvent etre predites a partir du modele du reacteur piston avec recirculation totale. Enfin, nous avons etudie l'ecoulement et le melange dans un reacteur torique continu en fonction des conditions d'agitation et du debit entree-sortie. Nous avons caracterise egalement la dispersion axiale dans le reacteur torique continu, et analyse les differences de comportement entre les reacteurs toriques ferme et continu

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Catak, Saron. „Vers l’élucidation du mécanisme de déamidation des résidus asparaginyles dans les peptides et les protéines“. Thesis, Nancy 1, 2007. http://www.theses.fr/2007NAN10124/document.

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La déamidation des protéines est un thème de grand intérêt qui a été le sujet de nombreuses études théoriques et expérimentales. La déamidation est un processus non-enzymatique et spontané qui convertit les résidus asparagines dans les protéines en acides aspartiques. Le changement de charge aboutit à des changements temporels de conformation dans les protéines et a été associé à la dégradation des protéines et au phénomène de vieillissement. Dans ce manuscrit, certains aspects mécanistiques de ce processus ont été étudiés et de nombreuses mises à jour ont été obtenues sur les mécanismes potentiels amenant à la déamidation. Ces mécanismes et leurs énergies sont présentés en détail. Une autre destinée possible des résidus asparagines, la coupure de la chaîne principale, est introduite et comparée au mécanisme de déamidation. Enfin, des tentatives pour comprendre l'effet des résidus adjacents dans la déamidation des asparagines sont élaborées et plusieurs idées pour un futur travail sont soulignés
Deamidation of proteins is a topic of wide interest that has been subject to experimental and theoretical studies. Deamidation is a nonenzymatic and spontaneous process that converts asparagine residues in proteins into aspartic acid. The change in charge leads to time-dependent conformational changes in proteins and has been associated with protein degradation and ageing. In this manuscript, certain mechanistic aspects of this process have been investigated and many insights have been attained on potential mechanisms leading to deamidation. These mechanisms and their energetics have been presented in detail. Another potential fate of asparagine residues, backbone cleavage, has been introduced and compared with the deamidation mechanism. Finally, attempts to understand the effect of neighboring residues on Asn deamidation have been elaborated and several ideas for future work have been outlined

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Tranchepain, Frédéric. „Interactions hyaluronane-protéines : hydrolyse du hyaluronane caractérisée par la hyaluronidase et complexation non spécifique hyaluronane-protéines. Influence de la longueur de la chaîne de hyaluronane“. Rouen, 2004. http://www.theses.fr/2004ROUES060.

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Bordenave-Juchereau, Stéphanie. „Hydrolyse de l'alpha-lactalbumine caprine en réacteur à l'ultrafiltration : génération et caractérisation de peptides issus de l'hydrolyse pepsique“. La Rochelle, 2000. http://www.theses.fr/2000LAROS036.

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Le lactosérum caprin, utilisé ici, est un sous-produit méconnu de l'industrie fromagère locale. Son hydrolyse par la pepsine est sélective : seule l'alpha-lactalbumine et la sérum albumine sont hydrolysées à ph2 et 40\c tandis que la beta-lactoglobuline reste intacte. Dans le but de purifier la beta-lactoglobuline et de produire des peptides dérivés de l'alpha-lactalbumine, nous avons mis en œuvre un réacteur enzymatique couplé à une membrane d'ultrafiltration minérale de seuil de coupure 30 kda. Ce réacteur a permis d'hydrolyser 800 ml de lactosérum en 4h. La perte d'activité enzymatique est compensée par ajout de pepsine après une heure. L’efficacité du système dépend de la nature de la couche de polarisation formée, elle-même liée aux conditions expérimentales. Le colmatage de la membrane a pu être limité en ajoutant 3mm de cystéine au lactosérum. La présence de 0,3m de Nacl augmentait le taux de passage des peptides mais également le colmatage et réduisait la durée de fonctionnement du réacteur. Les peptides contenus dans le permeat issu de l'hydrolyse continue de lactosérum caprin, possèdent des masses moléculaires comprises entre 150 à 6500 da, dont 36% inférieures à 600 da, 24% comprises entre 600 et 2000 da et 40% supérieures à 2000 da et un pont disulfure. Un des peptides identifié résultait de la réassociation de deux peptides via un échange de ponts disulfures. Parmi ces peptides, nous avons pu identifier et caractériser l'alpha-lactorphine, peptide bioactif multifonctionnel déjà décrit dans un hydrolysat pepsique d'alpha-lactalbumine bovine. L’ensemble des peptides du permeat ne présentait pas d'activité opioïde et une assez faible activité anti-hypertensive (anti-enzyme de conversion de l'angiotensine (Eca)). Toutefois, un fractionnement de cet hydrolysat a permis de mettre en évidence des activités anti-Eca atteignant 83%.

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Lenormand, Hélène. „L’activité enzymatique de la hyaluronidase sous la dépendance de la complexation non-spécifique entre les hyaluronane et les protéines“. Rouen, 2007. http://www.theses.fr/2007ROUES035.

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L’hydrolyse du hyaluronane (HA), polysaccharide de la matrice extracellulaire (MEC), est catalysée par la hyaluronidase (HAase). Les groupements carboxyl du HA lui confèrent un pouvoir complexant vis à vis des protéines influençant sa cinétique d’hydrolyse du HA. La complexation électrostatique non-spécifique entre le HA et des protéines est régie par des paramètres physicochimiques qui influencent l’état d’ionisation des biomacromolécules. Les complexes non-spécifiques que forment ensemble le HA et la HAase sont à l’origine d’une allure atypique des substrat- et enzyme-dépendances de l’hydrolyse du HA. La présence d’une protéine non-catalytique au sein d’un milieu HA/HAase permet un contrôle de l’activité enzymatique : activation ou inhibition. L’intervention d’une protéine de haut point isoélectrique permet l’hydrolyse du HA dans des conditions proches de celles de la MEC. Ce type de régulation de l’activité enzymatique peut avoir des implications dans la problématique du cancer
Hydrolysis of hyaluronan (HA), a polysaccharide of the extracellular matrix (ECM), is catalyzed by hyaluronidase (HAase). The carboxyl groups of HA allow it to complex proteins, influencing the HA hydrolysis. The electrostatic non-specific complexation between HA and proteins is governed by physicochemical parameters which influence the ionization state of the biomacromolecules and determine the nature of the complexes. The non-specific HA-HAase complexes are of the same type. They induce an atypical behaviour of substrate- and enzyme-dependences of the HA hydrolysis. The presence of a non-catalytic protein allows a control of the catalytic activity of HAase : activation or inhibition. The use of protein with high isoelectrical pH allows HA hydrolysis under conditions close to the MEC conditions. This type of enzyme activity regulation may have some implications in cancer

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Zuñiga, de Lopez Raquel. „Étude structurale et texturale de laits acidifiés par hydrolyse de Glucono-Delta-Lactone et contenant des polysaccharides“. Vandoeuvre-les-Nancy, INPL, 1999. http://www.theses.fr/1999INPL071N.

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Le développement des laits fermentes acides avec de nouvelles textures peut être réalisé en exploitant les interactions entre les protéines du lait et les polysaccharides. L’incorporation de ces macromolécules dans le lait peut provoquer une perturbation du système qui est amplifiée lors d'une fermentation. La structure qui en résulte peut avoir une forte incidence sur les propriétés mécaniques et texturales du produit. Afin d'étudier ces différents points, nous avons entrepris ce travail dont l'objectif était de relier la (micro)structure (met, meb, microscospie optique a contraste de phases) des gels de lait non homogénéisés contenant du xanthane et/ou de la gomme de caroube à leurs propriétés mécaniques à large déformation (extrusion capillaire) et aux propriétés d'écoulement des gels de laits homogénéisés. Dans les deux premières parties, l'influence du xanthane et/ou de la gomme de caroube sur la structure de gels de lait non brasses et sur leurs propriétés d'extrusion est montrée. Les profils d'extrusion obtenus ont été analysés mathématiquement en faisant appel au concept de la géométrie fractale et de l'analyse de Fourier. Enfin dans une troisième partie, l'influence de ces polysaccharides sur les propriétés thixotropes des gels homogénéisés est présenté. Il est apparu que l'utilisation de faibles quantités de xanthane ou de gomme de caroube ne modifie pas la microstructure des gels de lait non brassés et tend à augmenter la valeur des paramètres d'extrusion ; elle améliore aussi considérablement les propriétés texturales (augmentation des paramètres calculés à partir des courbes d'écoulement) des gels homogénéisés. En revanche, l'emploi de quantités plus importantes des polysaccharides, modifie complètement la microstructure et les propriétés d'extrusion des gels non homogénéisés et dégradé les propriétés texturales des gels homogénéisés. Une relation semble apparaitre entre le niveau de perturbation de la microstructure initiale des gels, leurs propriétés mécaniques à large déformation et les propriétés d'écoulement des gels homogénéisés.

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Schweizer, Martin. „Fractionnement et identification de petits peptides issus de l'hydrolyse enzymatique des protéines de colza“. Vandoeuvre-les-Nancy, INPL, 2002. http://www.theses.fr/2002INPL016N.

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Ce travail consiste en une étude préliminaire sur la production des petits peptides à partir des protéines de colza et se partage en trois parties: l'hydrolyse enzymatique des protéines de colza, les séparation et caractérisation des hydrolysats et, enfin, l'identification de la composition de petits peptides. L'intérêt de l'hydrolyse enzymatique réside dans la diversité des applications potentielles (cosmétique, pharmaceutique et alimentaire) des peptides obtenus. La première partie décrit l'obtention et la caractérisation de deux substrats protéiques (tourteau et concentrat) pour l'hydrolyse enzymatique. L'influence de quelques paramètres majeurs sur l'hydrolyse enzymatique comme la nature du substrat et de l'enzyme utilisée (Alcalase® 2. 4L, PTN® 3. 0S ou Orientase® 90N) est abordée. L'Alcalase® 2. 4L et l'Orientase® 90N conduisent à de très bons rendements en petits peptides. Dans une seconde partie, le fractionnement des hydrolysats par deux techniques complémentaires de séparation par la taille des molécules est abordé: l'ultrafiltration et la chromatographie liquide d'exclusion de taille à basse pression. Une cascade de séparations (ultrafiltration et C. L. -E. T. ) a conduit à l'obtention de fractions ciblées de petits peptides composés de deux à six acides aminés. Enfin, une nouvelle approche pour l'identification des petits peptides, utilisant le couplage C. L. H. P. /S. M. , est décrite. Le noyau de cette démarche est de combiner deux informations, la masse du peptide isolé et son temps de rétention en fonction de son caractère hydrophobe, afin de déterminer la composition des peptides en acides aminés. Cette méthode présente un intérêt pour la maîtrise des différentes étapes d'obtention de petits peptides et la recherche propriétés biologiques potentielles.

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Garreau, Isabelle. „Les protéines plasmatiques, sources potentielles de peptides biologiquement actifs : purification et caractérisation de peptides apparentés aux enképhalines libérés par hydrolyse enzymatique in vitro“. Limoges, 1993. http://www.theses.fr/1993LIMO0186.

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L'hydrolyse in vitro de proteines plasmatiques par la pepsine genere des peptides a activites biologiques diverses. Notre modele d'etude peptides apparentes aux enkephalines permet d'apporter des arguments experimentaux en faveur de l'existence in vivo d'une voie de liberation de sequences peptidiques mimant les effets biologiques de peptides endogenes. La caracterisation des peptides apparentes aux enkephalines est basee sur une approche methodologique qui associe des techniques separatives (chromatographie d'exclusion, clhp en phase inversee) a un dosage radioimmunologique utilisant des anticorps diriges contre les enkephalines; le caractere enkephaline-like des peptides identifies est demontre par des tests bases sur l'interaction ligand/recepteurs opioides. Le serum albumine bovine est la source principale sinon exclusive des peptides immunoreactifs de type met-enkephaline. L'un de ces peptides correspond a la sequence e-k-l-g-e-y-g-f-q (motif 394-402 du serum albumine bovine); un second peptide immunoreactif serait l'hexapeptide g-e-y-g-f-q deja identifie dans un hydrolysat de serum albumine de rat. Nos resultats designent les immunoglobulines comme source majeure de peptides immunoreactifs de type leu-enkephaline. Nous avons identifie les sequences immunoreactives y-l-v-l- et y-f-l respectivement dans les produits d'hydrolyse de plasma bovin et de -globulines, la sequence y-f-l est incluse dans le domaine ch3 des igg1 et igg2 bovines; la proteine plasmatique d'origine de la sequence y-l-v-l n'a pu etre determinee. Ces sequences peptidiques sont reconnues de maniere specifique par les anticorps anti-leu-enkephaline et leur caractere enkephaline-like a ete etabli par des tests cellulaires in vitro. Notre demarche experimentale est un modele applicable a la recherche de sources proteiques diverses susceptibles de liberer des peptides enkephaline-like et a la caracterisation d'autres activites biologiques dans les produits d'hydrolyse enzymatique de ces proteines. Des developpements de ce travail consisteraient a demontrer une liberation in vivo de peptides actifs, a partir de proteines plasmatiques, dependante de l'existence et de l'activite d'enzymes circulantes

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Marquenet, Emélie. „Identification du rôle de l'activité ATPase de MalT, modèle d'étude des ATPases STAND, protéines impliquées dans la transduction du signal“. Paris 7, 2008. http://www.theses.fr/2008PA077218.

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Récemment, la famille des ATPases STAND (pour "signal transduction ATPases with numerous domains") impliquées dans différents processus physiologiques, a été identifiée (Leipe et al. , 2004). Caractérisées par un domaine conservé NTPase, ces protéines fonctionnent comme des plateformes multimériques de signalisation. MalT, l'activateur transcriptionnel du régulon maltose d'E. Coli, est un membre représentatif de cette famille. Au cours de ce doctorat, j'ai utilisé MalT comme modèle pour comprendre le rôle de l'hydrolyse de l'ATP, encore inconnu, dans la signalisation STAND. MalT est régulée par deux effecteurs positifs, l'ATP et le maltotriose (l'inducteur du système), et trois effecteurs protéiques négatifs. Par la construction et la caractérisation in vivo et in vitro d'un variant de MalT capable de fixer l'ATP, mais incapable de l'hydrolyser, j'ai montré que l'hydrolyse de l'ATP n'est pas essentielle à l'activité de la protéine, mais joue un rôle crucial dans sa régulation. L'hydrolyse du nucléotide induit la conversion entre une forme active de la protéine capable de multimériser, MalT-ATP, et une forme inactive liée à l'ADP, cible des effecteurs négatifs. La conversion entre la forme inactive et la forme active dépend d'un échange entre ADP et ATP qui est favorisé par le maltotriose. En accord avec les données obtenues récemment sur d'autres protéines STAND, un nouveau modèle de la régulation de l'activité de MalT a été proposé. Depuis, j'ai étayé ce modèle par l'étude d'autres variants de MalT
The STAND ATPase family (for "signal transduction ATPases with numerous domains "), which has been recently " discovered, is a widespread family of proteins involved in various processes (Leipe and al. , 2004). These ATPases function as multimeric regulatory nexuses that integrate multiple regulatory signals. They characteristically comprise a common ATPase core domain. During my phD, I used the MalT protein, the transcription activator of the Escherichia coli maltose regulon, as a model System to address the role of the ATPase activity. MalT is highly controlled by positive (ATP and maltotriose, the inducer ) and negative proteic effectors. We have constructed a MalT variant that binds ATP but does not hydrolyze it and we have characterized it in vivo and in vitro. ATP hydrolysis is not essential for transcription activation but is crucial for the control of MalT actiVity. MalT cycles between an ADP bound, resting form that is the target of negative effectors and an ATP bound, active form, which oligomerizes. Conversion to the active form involves nucléotide exchange and depends on maltotriose binding. Resetting of the protein under the resting form relies on ATP hydrolysis which occurs when the protein is under the active state. I proposed a model of regulated binary switch that is likely to apply to other STAND NTPases, including Apaf-1 and 1-2 proteins

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Campagna, Sylvie. „Hydrolyse en milieu émulsionné et étude de la relation structure/fonction du PP3 de lait bovin“. Nancy 1, 1998. http://www.theses.fr/1998NAN10281.

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Le composant PP3 est une protéine de la fraction protéoses-peptones (PP) du lactosérum bovin, principal co-produit de la filière lait. Cette protéine présente une activité de surface supérieure à celle de la fraction PP totale. L’hydrolyse du PP3 en milieu émulsionné a été réalisée pour améliorer ses propriétés tensioactives. L’hydrolysat obtenu conserve une tensioactivité comparable à celle de la protéine intégrale. Le PP3, en faible concentration dans le lactosérum, peut difficilement être valorise en agro-alimentaire mais son utilisation (ou celle de l'hydrolysat) comme émulsifiant est possible dans des secteurs à forte valeur ajoutée (cosmétologie). Une contamination survenant lors de la préparation du PP3 par FPLC d'interactions hydrophobes a été identifiée. Elle peut etre évitée par l'utilisation d'une chromatographie d'affinité sur concanavaline A. Le rôle du PP3 reste inconnu malgré les nombreux travaux effectués sur le lait bovin. Cette protéine est fortement homologue à une protéine du lactosérum de chamelle et aux protéines GlyCAM-1 murines. L’étude des éléments de structures secondaires du PP3 montre que la zone C-terminale (résidu 119 a 135) se conforme en hélice alpha amphipatique dans un environnement lipidique. Le peptide de synthèse correspondant à cette zone (peptide P17) et la protéine interagissent avec des monocouches lipidiques constituées de préférence de phospholipides anioniques à l'état de gel, comme le dimyristoylphosphatidyl-glycerol (DPPG). Les mesures de conductance indiquent que le fragment 113-135 du PP3 (peptide P23) et la protéine s'insèrent dans des bicouches planes, contrairement au peptide P17 vraisemblablement trop court. Toutefois P17, P23 et la protéine entière ne sont pas hémolytiques ni ne permettent la lyse des souches bactériennes testées. L’hélice alpha amphipatique responsable des propriétés de surface du PP3, est prédite en région c-terminale des protéines homologues. Des lors, son implication dans une fonction commune est probable.

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Kobbi, Sabrine. „Purification de la RuBisCO à partir de la Luzerne, hydrolyse enzymatique, identification, structure-fonction des peptides bioactifs et leur valorisation dans des produits alimentaires“. Thesis, Lille 1, 2017. http://www.theses.fr/2017LIL10201.

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La luzerne est la plante la plus cultivée dans le monde et est une excellente source de protéines. Cependant, la RuBisCO a montré le plus d'intérêt. Cette protéine a été étiquetée comme la protéine la plus abondante sur terre, elle constitue environ 65% (p/p) des protéines solubles de la luzerne. Dans ce travail une nouvelle méthode a été mise en place pour la purification de la RuBisCO à partir de la poudre de luzerne 10% (p/v) en utilisant deux solvants différents et l’effet du pH. Premièrement, des méthodes d’analyse qualitative et quantitative ont été utilisées pour confirmer l’efficacité de la méthode de purification qui pourrait remplacer certains procédés industriels classiques. Puis, une hydrolyse pepsique a été réalisée sur la RuBisCO purifiée qui aboutit à une forte population peptidique bioactive. Les peptides finaux de 24h d’hydrolyse ont montré une meilleure activité antibactérienne ou antioxydante par rapport aux autres hydrolysats. 9 nouveaux peptides antibactériens ont été identifiés et caractérisés par SM et qui ont un CMI entre 2-6mM contre quatre espèces de bactéries: B subtilis, E coli, L innocua et M luteus. En plus, des fractions peptidiques antioxydantes ont également été identifiées dans ce travail. Et leur activité antioxydante a été évaluée par différents tests in vitro et in vivo sur l’huile de Colza. Enfin, l’addition du peptide RDRFL issu de l’hydrolyse pepsique de la RuBisCO a montré un effet positif sur la prolongation de la durée de conservation de la viande hachée et de la purée de tomate
Alfalfa is an excellent source of protein. However, RuBisCO proteins showed most interest. Indeed, this protein has been labelled the most abundant on earth; it constitutes about 65% (w/w) of soluble leaf protein of Alfalfa. In this work, a new method was introduced for the purification of RuBisCO from alfalfa powder 10% (w /v), using two different solvents and pH effect. In a first step, the performance of the proposed RuBisCO recovery method was evaluated through qualitative and quantitative analysis and the results obtained showed that this new method could replace some conventional industrial processes. In a second step, enzymatic hydrolysis was carried out on the purified RuBisCO, which resulted in a large bioactive peptide population. The final peptides after 24h of hydrolysis showed better antibacterial or antioxidant activity compared to the other peptide hydrolysates. Nine new antibacterial peptides have been identified and characterized by MS and have a MIC of 2-6 mM against four species of bacteria: B subtilis, E coli, L innocua and M luteus. In addition, antioxidants peptide fractions were identified in this work, their antioxidant activity was evaluated by various in vitro and in vivo tests on oil of Colza. Finally, the addition of peptide RDRFL derived from the peptic hydrolysis of RuBisCO has a positive effect on the prolongation of the shelf life of minced meat and of tomato puree

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Perreault, Véronique. „Prétraitement d'un isolat de protéines de lin par haute pression hydrostatique : impacts sur la structure protéique, l'hydrolyse enzymatique et les capacités antioxydantes des hydrolysats finaux“. Master's thesis, Université Laval, 2016. http://hdl.handle.net/20.500.11794/26804.

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Les graines de lin sont des oléagineux largement cultivés au Canada. Cependant, les résidus générés suite au processus d’extraction de l’huile contiennent une importante quantité de protéines et peuvent être valorisées dans l’alimentation humaine en raison, principalement, de certaines fractions peptidiques possédant des propriétés bioactives. Dans le cadre de ce travail, l’influence des hautes pressions hydrostatiques (HPH) sur un isolat de protéines de lin a été étudiée concernant les modifications de la structure protéique, l’hydrolyse enzymatique ainsi que l’activité antioxydante des hydrolysats. Ainsi, des solutions protéiques de lin (1% m/v) ont été soumises à un traitement de HPH à 600 MPa pendant 5 et 20 minutes, à 20°C et comparés à des échantillons non-pressurisés. Deux traitements subséquents d’hydrolyse ont été effectués suite au traitement ou non de pressurisation : une première hydrolyse trypsique suivie d’une deuxième par la pronase. Dans un premier temps, la caractérisation de l’isolat protéique de lin pressurisé et non pressurisé a été réalisée par spectrofluorimétrie et par une analyse de la taille des particules afin d’étudier l’effet de la pressurisation sur les HPH la matrice protéique végétale. Par la suite, les hydrolysats protéiques ont été caractérisés par HPLC-MS et leur capacité antioxydante a été déterminée par ORAC. Les résultats ont démontré que le niveau de pressurisation et la durée du traitement ont un impact sur la structure protéique en induisant la dissociation des protéines, et la formation d’agrégats. Ceux-ci seraient occasionnés par la décompression ou créés durant l’entreposage des isolats. Suite à l’hydrolyse enzymatique des solutions protéiques pressurisées ou non par la trypsine seule et par la trypsine-pronase, les analyses chromatographiques ont révélé que la concentration de certains peptides a été modifiée lorsque la trypsine seule était utilisée après un traitement à HPH. Enfin, les HPH ont amélioré la capacité antioxydante des hydrolysats obtenus lors de l’hydrolyse trypsine-pronase comparativement au contrôle non-pressurisé.
Flaxseed is an oilseed widely cultivated in Canada. However, residues generated after oil extraction contains large amount of proteins and then can be much-valued in human diet due to its bioactive peptide fractions. The influence of high hydrostatic pressure (HHP) on flaxseed protein isolate was studied especially in terms of protein structures, enzymatic hydrolysis and final hydrolysate antioxidant activity. Flaxseed protein solutions (1% w/v) were subjected first to 600 MPa HHP treatments during 5 and 20 minutes at 20°C and were compared to non-pressurized samples. Two subsequent hydrolysis treatments were performed on pressure or non-pressure treated samples: tryptic hydrolysis was carried out and another hydrolysis was performed using pronase on tryptic hydrolysates. Firstly, the characterization of treated and untreated flaxseed protein isolates was done by spectrofluorometric and particle size analyses. Thereafter, flaxseed hydrolysates were analyzed by HPLC-MS and antioxidant capacity by ORAC. These results demonstrated that the pressurizing level and duration had an impact on proteins structure, inducing the dissociation of protein leading subsequently to aggregates. These aggregates were formed by decompression or during further storage. After enzymatic hydrolysis of pressurized or non-pressurized samples by trypsin and trypsin-pronase, chromatographic analyses showed that HHP treatments modified the concentration of certain peptides of the tryptic hydrolysates only. Finally, HHP increases antioxidant capacity (ORAC) of final trysin-pronase hydrolysates when compared to a control.

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Moras, Benjamin. „Fractionnement de protéines végétales pour le développement d'ingrédients alimentaires infantiles hypoallergéniques et à teneur réduite en phytoestrogènes“. Thesis, Toulouse, INPT, 2015. http://www.theses.fr/2015INPT0070.

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Les travaux de recherche présentés dans ce manuscrit ont pour but de développer des procédés industriels pour la production de quatre ingrédients alimentaires infantiles ayant des propriétés hypoallergéniques et des teneurs réduites en phytoestrogènes. Les propriétés nutritionnelles des protéines de riz et de soja en font des sources intéressantes. Néanmoins, plusieurs problématiques liées aux caractéristiques des produits apparaissent aujourd’hui : la présence de phytoestrogènes (isoflavones) dans les isolats protéiques de soja ; la difficulté à solubiliser et isoler les protéines de riz et la forte allergénicité des protéines dans le cas du soja. Ces travaux présentent l’étude du fractionnement des protéines de soja et de riz pour le développement : d’isolat protéique à teneur réduite en isoflavones ; isolat protéique de riz ayant une teneur supérieure à 90% de protéines ; hydrolysats protéiques de soja et de riz dont le profil de poids moléculaire est maitrisé et potentiellement hypoallergénique. Afin d’y parvenir, la réduction de la taille des protéines par des processus enzymatiques puis le contrôle de leur poids moléculaire ont dû être étudiés. Concernant l’élimination des phytoestrogènes (isoflavones), deux méthodes ont permis d’atteindre de hauts rendements d’extractions. En premier lieu, l’étude de l’extraction par éthanol via une optimisation à petite échelle, suivie d’une mise à l’échelle industrielle ont permis de développer un premier produit à teneur résiduelle en isoflavones inférieure à 50 μg/g de produit sec représentant une réduction de près de 98% de la teneur en isoflavones. Le second procédé étudié a été la rétention des isoflavones sur résine d’adsorption à partir d’un hydrolysat protéique de soja préalablement mis au point, et ceci, par l’utilisation de solution aqueuse sans étape préalable d’extraction. Ce procédé a fait l’objet d’une mise à l’échelle industrielle et d’une étude du comportement chromatographique des isoflavones. L’extraction des isoflavones par eau subcritique et CO2 supercritique est aussi présentée dans cette thèse. Elle a permis de mettre en évidence l’influence de la polarité des différents composés et de la teneur en protéines des produits de soja utilisés. Ces travaux de thèse ont aussi permis de définir un nouveau procédé pour la production d’isolat protéique de riz par l’intermédiaire d’enzymes de types cellulolytiques et amylases, à partir de coproduits issus de l’industrie du sirop de glucose. Des études sur des matières moins transformées telles que le son de riz et la farine ont aussi été étudiées pour la concentration des protéines. L’étude de l’hydrolyse des protéines de soja et de riz a été possible par le suivi de différents indicateurs tels que le pH, la solubilité des protéines, le degré d’hydrolyse, le profil de poids moléculaire par électrophorèse et par chromatographie d’exclusion stérique. Ces procédés ont permis la production de quatre nouveaux ingrédients pouvant être testés pour leurs caractéristiques hypoallergéniques avant une éventuelle production industrielle
The objectives of these works were to develop industrial processes for the production of four infant food ingredients with hypoallergenic properties and reduced levels of phytoestrogens. For this purpose, the nutritional properties of the rice and soy protein are promising. However, due to the presence of phytoestrogens (isoflavones) the consumption of soy protein isolates is a big concern for infant food security because the high exposure to these compounds, known to be endocrine disruptors. Consequently, it was first intended to develop a soy protein isolate with reduced content of isoflavones below 50 μg/g following the recommendations of French and European health authorities. Rice protein isolates are either non-existent on the market, or extremely rare. Therefore, the development of rice protein isolate with a minimum content of 90 % protein was another objective. For the sensitive population, such as infants, the aim of this work was also to develop soy and rice protein hydrolysates conferring hypoallergenic properties. To achieve this goal, the reduction of the size of proteins and the control of their molecular weight was studied. Two methods were used to achieve high extractions yields. A study of ethanol extraction ranging from small-scale optimization to industrial scale was used for a final product with a residual content in isoflavones below 50 μg/g. The second method was to retain isoflavones on adsorption resin from a soy protein hydrolysate. This was possible without preliminary extraction step by solvent. This method was also tested in the industrial scale. The chromatographic behavior of different isoflavones was also studied. The extraction of isoflavones with subcritical water and supercritical CO2 is also presented in this thesis even though these methods were not retained. These pressurized extractions showed the influence of the polarity of isoflavones and the protein content of soy products onto the isoflavone extraction. These works also identified a novel process for the production of rice protein isolate by the hydrolysis of polysaccharides with cellulolytic enzymes and amylases from concentrated protein byproducts from the glucose syrup industry. Studies on less processed materials such as rice bran and flour were also studied for protein isolation. The study of the hydrolysis by proteases of soy and rice proteins were monitored by various indicators such as pH, protein solubility, the degree of hydrolysis, the molecular weight profile by electrophoresis, and size exclusion chromatography. These processes are enabled for the production of four new ingredients that will be tested for their hypoallergenic characteristics before a large scale production

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Gbogouri, Grodji Albarin. „Co-valorisation des protéines et des lipides riches en lécithine et en acides gras polyinsaturés oméga 3 à partir de têtes de saumon (Salmo salar) par hydrolyse enzymatique“. Vandoeuvre-les-Nancy, INPL, 2005. http://docnum.univ-lorraine.fr/public/INPL/2005_GBOGOURI_G_A.pdf.

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Les composés lipidiques et protéiques des têtes de saumon (Salmo salar) ont été extraits par un procédé d'hydrolyse enzymatique. Dans la première partie de cette étude, l'extraction enzymatique des hydrolysats protéiques avec l'Alcalase® 2,4 L a été réalisée et l' optimisation du procédé par l'utilisation de la méthode des surfaces de réponse a permis de quantifier l'influence et les interactions des facteurs (pH, température, rapport enzyme / substrat). Par planification expérimentale, des hydrolysats protéiques avec des degrés d' hydrolyse variant de 10,8 % à 17,3 % et des rendements protéiques compris entre 47 % et 71 % ont été obtenus. Les propriétés fonctionnelles des hydrolysats protéiques ont été améliorées. Dans la deuxième partie, l'huile est extraite à un taux de 19,6 %, omparable à la méthode d'extraction par solvant (21,5 %). Les deux types d'huiles ont des caractéristiques physico-chimiques similaires et les acides docosahexaenoique (DHA) et eicosapentenoique (EPA) sont majoritaires parmi les acides gras polyinsaturés. Les culots protéiques contiennent la majorité des phospholipides (55 %) dont la phosphatidylcholine qui représente environ 55 % des phospholipides. Le potentiel de ce procédé d'extraction peut être étendu à d'autres sources d'acide gras polyinsaturés à longue chaîne sensibles à des conditions d'extraction drastiques
A new process for the extraction of lipids and proteins from salmon (Salmo salar) heads was performed by enzymatic treatment. In the first part of this work, proteolysis assisted with Alcalase® 2. 4 L was performed. The use of Response Surface Methodology allowed optimization of temperature, enzyme / substrate ratio and pH leading to various hydrolysates (10. 8 % - 17. 3 % degree of hydrolysis) and protein recovery ranging from 47 % to 71 %. The functional properties of protein hydrolysates were improved. In the second part, the enzymatic extraction of oil yielded 19. 6 % and was comparable to solvent extraction (21. 5 %). The oil fractions resulting from the proteolysis were rich in polyunsaturated fatty acids and their individual fatty acid composition was similar to total lipids extracted by solvent method. Docosahexaenoic acid (DHA) and eicosapentaenoic acid (EPA) constituted predominant fatty acids among total n-3 polyunsaturated fatty acids. The sludge lipids contained most of phospholipids (up to 55 %) with high content of phosphatidylcholine (around 55 % of phospholipids). This process might be extended to any source of long chain polyunsaturated fatty acids, which are sensitive to drastic conditions

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Touati, Abdelmadjid. „Contribution à l'étude des relations entre les propriétés physico-chimiques et fonctionnelles des caséines B et K modifiées par voie chimique enzymatique“. Nantes, 1991. http://www.theses.fr/1991NANT2021.

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Les modifications chimiques de la caséine ont été réalisées d'une part, par estérification des acides amines dicarboxyliques (acides glutamiques et aspartiques) et d'autre part, par alkylation réductrice des groupements amines des lysines à l'aide de composés carbonyles de structures diverses. Les dérivés estérifiés, insuffisamment solubles, avaient des valeurs d'activité émulsifiante faibles. L'alkylation de la caséine par l'acétaldehyde a permis l'obtention de dérivés dont l'augmentation de leur activité émulsifiante est reliée au degré d'alkylation. L'utilisation de composés carbonyles de structures variées conduit à des dérivés dont la solubilité et les propriétés émulsifiantes dépendent de la nature de l'agent alkylant (taille, mono ou bifonctionnel). Par contre, l'alkylation par l'acétaldehyde d'un hydrolysat trypsique de la caséine a permis l'amélioration de la solubilité et des propriétés émulsifiantes (activité et stabilité des émulsions) quel que soit le PH. Le caséinomacropeptide (64 résidus) issu de l'hydrolyse de la caséine par la chymosine est soluble à tous les PH et présente une activité émulsifiante voisine de celle de la caséine. Cependant, son caractère trop hydrophile ne le rend pas apte à stabiliser les émulsions obtenues, notamment aux PH neutres et alcalins. Enfin, la solubilité et l'aptitude aux modifications chimiques de la caséine ont été étudiées dans des solvants organiques. Cette chimie des protéines dans des milieux non conventionnels pourra être à l'origine de nouvelles propriétés interactives des protéines laitières

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Rakotozafy, Randrianasolo Lalatiana Rasata. „Application de réactions enzymatiques énantiosélectives au dédoublement de synthons chiraux utilisables dans l'industrie pharmaceutique ou en chimie fine“. Paris 6, 1991. http://www.theses.fr/1991PA066301.

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Une étude systématique du dédoublement de deux types d'alcools secondaires a été entreprise en évaluant les coefficients d'énantiosélectivité E de différentes préparations enzymatiques commerciales ou non vis-a-vis de ces molécules. Les poudres ace toniques d'un champignon filamenteux, mucor plumbeus préparées au laboratoire sont particulièrement efficaces pour dédoubler des alcools secondaires acétyléniques ainsi que l'oct-1-en-3-ol et l'octan-3-ol. Les coefficients d'énantiosélectivité sont compris entre 20 et 100. Ces alcools optiquement purs sont des synthons chiraux pour la synthèse de molécules d'un grand intérêt biologique comme les leucotrienes, les prostaglandines, les vitamines, les alcaloi͏̈des ou les phéromones. . . Le (s)-5-hydroxy-hept-6-ynoate de méthyle qui sera utilisé pour la synthèse du leucotriene b4 marqué au tritium est obtenu par hydrolyse par l'alpha-chymotrypsine du mélange racémique correspondant. (E=17,9). La pig liver esterase (ple) et la horse liver esterase (hle) ont permis de dédoubler d'autres alcools secondaires encombrés utilisables comme auxiliaires chiraux et dont certains se sont révèlés de bons substituts de 8-phenylmenthol pour la réaction d'hydrogénation asymétrique d'énamino-esters. Pour le 2,2-diphenylcyclepentanol, le 1,1-diphenyl-2-butanol et le 1,1-diphenyl-2-propanol, le dédoublement par hydrolyse enzymatique des acétates racémiques correspondants en tampon contenant 10% de dmso est une méthode de préparation des deux énantiomères plus facile et plus pratique, sinon plus économique, que les méthodes chimiques actuellement employées

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Mat, Damien. „Cinétiques d’hydrolyse des protéines et des lipides lors de digestions in vitro d’aliments modèles : influence des paramètres de structure des matrices“. Thesis, Université Paris-Saclay (ComUE), 2017. http://www.theses.fr/2017SACLA007.

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L’aliment est une source structurée de nutriments. Les différents éléments qui le composent sont arrangés et associés à plusieurs échelles et lui confèrent des propriétés organoleptiques et rhéologiques. Cette structure va être déconstruite par les différents étages de l’appareil digestif et prise en charge par l’organisme et son microbiote. La réponse qualitative et cinétique du système digestif à une structure particulière doit donc être prise en compte pour compléter notre compréhension des attributs nutritionnels de l’aliment et aller vers des formulations à visée de bien-être et de santé.Cette thèse s’est concentrée sur des matrices complexes riches en protéines de type émulsions huile dans eau. Tout en gardant constante la composition (10 % d’huile et 15% de protéines de lactosérum), des matrices de structures diverses et parfaitement maîtrisées ont été définies puis préparées en modulant les conditions des procédés de fabrication. Pour étudier leur comportement lors de la digestion, un protocole de digestion in vitro statique a été mis en oeuvre, associé à la titration par pH-stat. Cette méthodologie a permis de suivre, de façon originale, l’hydrolyse, et des protéines, et des lipides, au cours de la phase intestinale simulée.Son usage a ensuite été étendu à la phase gastrique pour le suivi de la protéolyse par la pepsine. L’étude des matrices solides représente un challenge dans les protocoles in vitro car elles ont un degré de complexité supplémentaire par rapport aux matrices liquides ou semi-solides. Une partie du travail s’est ainsi concentrée sur l’étude de l’effet de la taille des fragments sur la libération des nutriments, ainsi que leur impact sur la qualité de la mesure par pH-stat.Le potentiel de ce travail méthodologique a été démontré sur différents effets de structure des aliments sur la digestion. L’état physique de la phase continue en particulier et la taille des gouttelettes d’huile étaient parmi les plus influents. Des interactions entre protéolyses et lipolyse ont aussi été observés, ce qui démontre que le suivi simultané des cinétiques d’hydrolyse est un aspect important pour une compréhension plus complète des effets de structure.Par ailleurs la collaboration avec des physiologistes et des microbiologistes a permis la conduite de deux études in vivo chez le rat dont les premiers résultats attestent d’un effet structure à la fois sur la composition du microbiote et sur des marqueurs physiologiques
Food is a structured source of nutrients. Its different components are arranged and associated on several scales and provide organoleptic and rheological properties. This structure is going to be deconstructed by the different stages of the digestive tract and managed by the organism and its microbiota. The qualitative and kinetical response of the digestive tract to a specific structure must then be taken into account to complete our understanding of the nutritional attributes of the food and achieve functional formulations aiming to well-being and health.This thesis focused on complex protein-rich oil-inwater emulsion-type matrices. While keeping the composition constant (10 % oil and 15 % whey proteins), matrices with various and perfectly controlled structures have been designed and prepared by modulating the conditions of the fabrication process. To study the behavior during the digestion, a static in vitro digestion protocol has been carried out, associated to pH-stat titration. This method allowed to follow, in an innovative way, concurrent hydrolysis of both lipids and proteins during the simulated intestinal phase.Its use was then further extended to the gastric phase in order to follow the proteolysis by the pepsin. The study of solid matrices represents a challenge in in vitro protocols since they have an additional degree of complexity compared to liquid and semi-solid ones. A part of this work thereby focused on the study of the influence of the size of the fragments on the nutrients release, as well as on their impact on the quality of the pH-stat monitoring. The methodologic potential of this work has been demonstrated on different structure effects of the food onto its digestion. The physical state of the continuous phase in particular and the size of oil droplets were among the most influent parameters. Interactions between proteolysis and lipolysis were also observed, proving that simultaneous following of the hydrolysis kinetics is an important aspect for a more complete understanding of the structure effects.Moreover, collaborating with physiologists and microbiologists allowed the conduct of two in vivo studies with rats, the first results of which attest a structure effect on the microbiota composition and on physiological markers

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Monceaux, Philippe. „Valorisation des productions amylacées en Picardie : étude d'un nouveau procédé de fractionnement du blé tendre“. Compiègne, 1986. http://www.theses.fr/1986COMPD252.

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Grâce à un climat et à un sol appropriés, la Picardie est une région de grande culture végétale. Le blé tendre est un produit bien maîtrisé par l’agriculteur picard présente un bilan économique et énergétique favorable incitant celui-ci à développer encore cette culture. Toutefois, ses débouchés à l'exportation (54,5 % de la production picarde de blé tendre est exportée en 1982/83) sont très importants et une recherche de transformation locale apparaît comme nécessaire. Après une analyse de la composition chimique et de la structure de la matière première de base et de ses constituants, l'étude des principaux procédés de fractionnement du blé a été réalisée. Ils sont de deux types - Procédés utilisant la farine comme matière première de départ ; - Procédés utilisant le grain de blé comme matière première de départ. Seuls, les premiers sont appliqués industriellement, mais I’utilisation totale du grain de blé entier présente l’avantage de n’avoir aucune perte des constituants principaux de l’ amande (amidon et gluten). A partir de cette analyse, un nouveau procédé de fractionnement du blé tendre a été proposé puis vérifié expérimentalement. Ce procédé conduit à trois produits finis : Gluten vital, Hydrolysat d’amidon (ou dans une variante possible, l’alcool) , Sons protéinés. Le gluten vital obtenu par un procédé direct de fractionnement du grain de blé entier nécessite une suspension de départ épaisse (40 % MS) qui a été centrifugée puis lavée. Le gluten, d’après les tests réalisés, est vital et contient de 0,8 à 1 % de cellulose (0,2 à 0,4 % cellulose dans le cas d'un gluten issu d'une farine blanche). L’hydrolysat d'amidon issu de ce procédé après liquéfaction, centrifugation et saccharification, peut être obtenu à différents niveaux de pureté. Des sirops impurs à 90 % de glucose (sur sec) ont fait l'objet d’essais industriels et pourraient être utilisés dans les industries de fermentation. Les sons protéinés sont constitués d'un mélange de sons de blé et de levures (Candida tropicalis) issu d’une fermentation. Cet aliment destiné à l’alimentation animale contient 25 à 28 % de matières azotées totales. Un essai sur porcelets n’a révelé aucun effet négatif des sons protéinés sur leur croissance. Les essais expérimentaux réalisés étape par étape nous ont conduit à proposer un bilan matière de ce nouveau procédé de fractionnement du blé (en sachant que les problèmes de recyclage d’eau n’ont pu être travaillé) puis une étude économique a montré qu’une unité industrielle de 84 000 t de blé (par an) suivant ce procédé possédait une bonne rentabilité. Ce nouveau procédé de valorisation de blé tendre est différent des procédés existants à la fois par l’enchaînement d'opérations unitaires proposé et par les caractéristiques et spécifications des produits de sortie. Un pilote industriel est aujourd’hui, I’étape intermédiaire nécessaire avant tout développement industriel pour préciser les recyclages d’effluents, affiner le bilan matière du, procédé et tester, en grande quantité, les produits de sortie auprès des industriels.

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Dion-Poulin, Alexandra. „Étude de la fonctionnalité d’hydrolysats protéiques d’insectes générés par le couplage de l’hydrolyse enzymatique et des hautes pressions hydrostatiques et de l’acceptabilité d’un ingrédient d’insectes auprès de cuisiniers novateurs“. Master's thesis, Université Laval, 2021. http://hdl.handle.net/20.500.11794/68780.

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L’intérêt pour l’entomophagie est grandissant en raison de ses nombreux avantages tant environnementaux que nutritionnels. L’acceptabilité sociale de cette pratique dans les sociétés occidentales est un obstacle majeur de cette industrie. Il est reconnu que l’incorporation des insectes sous forme d’ingrédients plutôt qu’entiers favorise l’acceptabilité des consommateurs. Toutefois, la farine d’insectes possède une faible fonctionnalité et est davantage utilisée comme agent de remplissage dans des aliments. L’hydrolyse enzymatique est une méthode largement utilisée afin de modifier la fonctionnalité de diverses protéines et son efficacité peut être améliorée par l’utilisation d’un prétraitement aux hautes pressions hydrostatiques (HPH). Dans le cadre de ce projet, la fonctionnalité de farines d’insectes brutes et d’hydrolysats protéiques générés à partir de farines prétraitées ou non par pressurisation avant l’hydrolyse enzymatique a été déterminée. La solubilité et la capacité de rétention d’huile ont été améliorées par ce procédé contrairement à la capacité de rétention d’eau et aux propriétés moussantes et gélifiantes. Laviscosité et les propriétés émulsifiantes ont été peu améliorées. Cependant, leurs fonctionnalités généralement améliorées en comparaison de celles des farines pourraient faciliter leur acceptabilité. Plus spécifiquement, il est reconnu qu’une expérience positive de consommation favorise l’acceptabilité notamment lorsque des chefs sont inclus dans ce type de processus. Pour ce projet, une étude qualitative basée a priori sur la théorie de la diffusion de Rogers a également été effectuée afin de déterminer la perception de cuisiniers novateurs sur l’utilisation d’ingrédients d’insectes. Tous les participants avaient une opinion positive envers l’entomophagie, mais trouvaient que les inconvénients majeurs de la farine étaient sa texture, son odeur et sa faible acceptabilité par les consommateurs. Comprendre ces perceptions permettra d’accroître l’utilisation des ingrédients d’insectes dans la gastronomie et éventuellement l’acceptabilité sociale.
Interest in Entomophagy increases due to several environmental and nutritional benefits, but the social acceptability of this practice is a major obstacle in Western societies. Studies have shown that incorporating insect as an ingredient rather than whole insects promotes consumer acceptability. As a result of their poor functionality, insect meals arecommonly used as a filler agent. Enzymatic hydrolysis is a widely used method to modify and improve the functionality of various proteins, but the effectiveness of this method can be enhanced by using high hydrostatic pressures (HHP) as a pre-treatment. In this project, the functionality of insect meals and protein hydrolysates prepared from meals that were pretreated or not prior enzymatic hydrolysis by pressurization has been determined. The solubility and oil binding capacity were enhanced by this process in contrast to water binding capacity as well as foaming and gelling properties. Viscosity and emulsifying property were slightly increased comparatively to insect meal. However, their different functionalities from those of insect meals could facilitate their acceptability. Specifically, it is acknowledged thata positive consumption experience promotes the entomophagy acceptability especially whenchefs are included in the process. For this project a qualitative study based a priori on Roger’sdiffusion of innovation theory was also conducted to explore the perceptions of innovative chefs on the use of insect ingredients. All participants had a positive opinion of entomophagy and the majority was ready to use it. Understanding these perceptions will increase the use of insect ingredients in the gastronomy and eventually social acceptability.

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El-Zahar, Khaled. „Étude des protéines du système laitier ovin et de leurs transformations par hydrolyse et par fermentation lors de la fabrication des yaourts“. Nantes, 2004. http://www.theses.fr/2004NANT2016.

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Quatre types de levains ont été utilisés pour la fabrication de yaourts à partir de laits de brebis ayant subi un pré-traitement thermique différent. Le degré d'hydrolyse des caséines et des protéines du lactosérum dépendait des ferments lactiques utilisés. Au cours de la fermentation, la caséine est davantage dégradée que les caséines S ; l' -lactalbumine (ALA) est davantage dégradée que la -lactoglobuline (BLG). L' -lactalbumine et la -lactoglobuline ont été obtenues pures par chromatographie sur résine échangeuse d'anions. La -lactoglobuline était un mélange des deux variants A et B tandis que l' -lactalbumine n'était composée que d'une seule fraction. La -lactoglobuline existe sous une forme monomérique à pH acide et à faible force ionique mais se dimérise à pH neutre. Contrairement à son homologue bovin, la -lactoglobuline ovine est sensible à l'action de la pepsine. Des hydrolysats pepsiques des protéines du lactosérum ont montré une activité antimicrobienne contre Escherichia coli, Bacillus subtilis et Staphylococcus aureus
Four set of starters have been used for the fabrication of yoghurts from ovine milk pre-heated in different conditions. The degree of hydrolysis of caseins and whey proteins depended on the starter used. During fermentation, -casein was more hydrolysed than S-caseins; -lactalbumin (ALA) was more degraded than -lactoglobulin (BLG). -lactalbumin and -lactoglobulin have been obtained in a pure form by anion-exchange chromatography. -lactoglobulin was a mixture of A and B variants. -lactalbumin was obtained as an unique variant. -lactoglobulin was monomeric at acid pH and low ionic strength but became dimeric at neutral pH. At the opposite of its bovine counterpart, ovine -lactoglobulin was susceptible to pepsinolysis. Peptic hydrolysates of whey proteins showed an antibacterial activity against Escherichia coli, Bacillus subtilis and Staphylococcus aureus

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Sylla, Khalifa Serigne Babacar. „Valorisation de co-produits de la sole tropicale (Cynoglossus senegalensis) par hydrolyse enzymatique : application en nutrition animale“. Lorient, 2011. http://www.theses.fr/2011LORIS242.

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Ce travail s’inscrit dans le cadre de la valorisation des coproduits issus de la chaîne de transformation de la sole tropicale (Cynoglossus senegalensis) au Sénégal par la mise en œuvre d’hydrolyse enzymatique afin d’obtenir des protéines à haute valeur alimentaire. Des coproduits (viscères, têtes) de la sole tropicale, ont été hydrolysés avec une protéase à large spectre (Protamex®). Dans cette étude il ressort que le degré d’hydrolyse (DH) est influencé par la température de l’hydrolyse. Un DH de 19% est obtenu à 50°C alors qu’il atteint 25% à 40°C après 3 heures d’hydrolyse. Les hydrolysats correspondants apparaissent riches en protéines (jusqu’à 61%) avec une teneur de près de 10% en sels minéraux. L’étude de la distribution de taille moléculaire des peptides de l’hydrolysat fait ressortir une taille inférieurs à 1760 Daltons L’optimisation des conditions d’hydrolyse, nous a amené à faire varier la quantité d’eau utilisée au cours des hydrolyses dans le but d’avoir un procédé industrialisable plus économe (en eau et en énergie) Pour ce faire, les effets de la variation du volume d’eau (10%, 25%, 50% et 100% p/p) au cours de l’hydrolyse enzymatique de coproduits de la sole tropicale ont été comparés. Il ressort qu’une proportion de 50% d’eau est suffisante dans nos conditions pour solubiliser près de 60% des protéines. Les hydrolysats ainsi obtenus ont une valeur nutritionnelle élevée pour les poulets de chairs car ils possèdent en quantité suffisante neuf acides aminés essentiels pour l’alimentation animale. Des tests de nutrition animale ont été réalisés chez des poulets de chairs. A cet effet, deux essais ont été réalisés sur 1200 poulets de souche cobb 500 non sexés à partir de 14 jours d’âge. Les résultats ont montré que les hydrolysats de coproduits favorisent la croissance des poulets. Les poids vifs à 6 semaines sont de 2369,60 g (lot 1), 2189,60 g (lot 2), 2298,05 g (lot 3) contre 2158,20 g (lot témoin), avec des GMQ moyens respectifs de 78,20 g, 66,72 g, 69,89 g et 68,30 g. Les poids de carcasse sont de 2112,43 g (lot 1), 1994,67 g (lot 2), 2081,75 g (lot 3) et 1989,22 g (lot témoin). La consommation alimentaire est influencée par le niveau et la nature des protéines en phase de finition. Toutefois, leur présence provoque une détérioration de l’indice de consommation pendant la finition ; il est de 2,30 (lot 1), 2,07 (lot 2), 2,05 (lot 3) et 2,0 (lot témoin). La recherche d’éventuelles pistes de valorisation en nutrition humaine, nous a amené à effectuer une analyse sensorielle préliminaire. Le profil sensoriel a été établi par un jury expert de 14 personnes. Onze (11) profils ont été identifiés par ce panel de dégustation. Par ailleurs, la caractérisation aromatique a révélé que cinquante sept (57) molécules sont responsables de ces odeurs décrites en analyse sensorielle dont trente sept (37) ont été identifiées
This scope of work relates to the valorization of the tongue sole (Cynoglossus senegalensis) by-products resulting from the processing chain in Senegal by the implementation of enzymatic hydrolysis in order to obtain high value proteins. The by-products (viscera and heads) of tongue sole, were hydrolized with a large spectra protease (Protamex®). It appears that the hydrolysis degree (DH) was influenced by the temperature of the proteolysis. Indeed a DH=19% is obtained at 50°C while it reaches up to 25% at 40°C after 3 hours of enzymatic action. Resulting hydrolysates appears to be rich in protein (up to 61%° with around 10% of minerals. The study of the molecular distribution size of the peptides reveals that they are below 1760Da. The effect of the water proportion to conduce hydrolsis was studied. It appears that 50% of water is enough in our conditions to solubilize of four different water ratio to hydrolyze sole by-products by using Protamex® were compared. It was found t60% of the initial proteins. Resulting hydrolysates have a great nutritional value for seting up table fowls because they have in big quantity nine essential amino acids for the animal feed. Feed trials were then carried out on 1200 chickens (cobb 500) with 14 days of age. The results showed that high nutritional value by-products proteins increase the growth of the birds. Indeed, the live weights at 6 weeks are 2369. 60 G (batch 1), 2189. 60 G (batch 2), 2298. 05 G (batch 3) against 2158. 20 G (witness batch), with respective average GMQ of 78. 20 G, 66. 72 G, 69. 89 G and 68. 30 G. The carcass weights are 2112. 43 G (batch 1), 1994. 67 G (batch 2), 2081. 75 G (batch 3) and 1989. 22 G (witness batch). Food consumption seems little influenced by the level and the nature of proteins. However, their presence decreased the consumption index during the end of the study; it is 2. 30 (batch 1), 2. 07 (batch 2), 2. 05 (batch 3) and 20. 8 (witness batch). To identify the future application of hydrolysates in human food, a preliminary sensory analysis was carried out. The sensory profile was established with a jury of 14 expert judges. 11 profiles were found by this panel. In addition, the aromatic characterization revealed that 57 molecules are responsible for these odours described in sensory analysis. The description of these aromatic compounds opens potential way of valorization of these hydrolysates in human consumption

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Nesterenko, Alla. „Etude et fonctionnalisation de protéines végétales en vue de leur application en microencapsulation“. Thesis, Toulouse, INPT, 2012. http://www.theses.fr/2012INPT0148/document.

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Les protéines extraites des végétaux sont des matériaux relativement peu coûteux, non toxiques, biocompatibles et biodégradables. Elles représentent une bonne alternative aux protéines d’origine animale et aux polymères dérivés du pétrole. Dans le cadre de cette étude, les protéines extraites de graines de soja et de tournesol ont été utilisées en tant que matériaux enrobants pour la microencapsulation de la matière active hydrophobe (α-tocophérol) ou hydrophile (acide ascorbique) par le procédé d’atomisation. Les protéines de soja sont largement utilisées dans les applications alimentaires et non-alimentaires, notamment en microencapsulation. Elles sont donc étudiées dans ce travail comme matériau enrobant de référence. Les protéines de tournesol n’ont quant à elles pas d’application industrielle concrète, si ce n’est sous la forme de tourteaux dans l’alimentation animale. C’est pourquoi il nous semble pertinent de trouver des nouvelles voies de valorisation pour ce coproduit d’origine agricole. Plusieurs modifications des protéines, telles que l’hydrolyse enzymatique, l’acylation, la réticulation enzymatique et la cationisation ont été étudiées dans le but d’améliorer les propriétés encapsulantes du matériau enrobant. Dans le contexte de la chimie verte, toutes les modifications ont été effectuées sans utilisation de solvants organiques ni de catalyseurs chimiques. L’influence des modifications chimiques et enzymatiques des protéines, et des paramètres du procédé (pression d’homogénéisation, ratio matériau enrobant/matière active et concentration en protéines) sur les différentes caractéristiques des préparations liquides et des microparticules (viscosité, taille des gouttelettes dans le cas des émulsions, morphologie et taille des microparticules), ainsi que sur les paramètres liés au procédé d’atomisation (rendement et efficacité de microencapsulation) a été particulièrement étudiée au cours de ce travail. Les résultats obtenus confirment que l’extrait protéique de tournesol est tout à fait pertinent comme matériau enrobant et permet d’obtenir des efficacités de microencapsulation significativement plus élevées par rapport à celles obtenues avec l’extrait protéique de soja
Proteins extracted from vegetables are relatively low-cost, non-toxic, biocompatible and biodegradable raw materials. They represent a good alternative to animal-based proteins and petroleum-extracted polymers. In this study, proteins derived from soybean and sunflower seeds were used as wall materials for microencapsulation of hydrophobic (-tocopherol) or hydrophilic (ascorbic acid) active material by spray-drying technique. Soybean proteins are widely used in food and non-food applications, especially in microencapsulation. They were studied in this work as wall material of reference. Sunflower proteins are not actually used in industrial application, but only in the form of oil-cake for animal feeding. That’s why new ways of valorization of this agricultural by-product should be investigated. Several proteins’ modifications such as enzymatic hydrolysis, acylation, cross-linking and cationization were studied in order to improve encapsulating properties of wall material. In the context of green chemistry, all the modifications and preparations were performed without use of organic solvents and chemical catalysts. The effect of protein chemical and enzymatic modifications, and process parameters (homogenization pressure, wall/core ratio and protein concentration) on different characteristics of liquid preparations and microparticles (viscosity, emulsion droplet size, microparticle size and morphology) and on parameters related to the spray-drying process (yield and efficiency of microencapsulation) was particularly investigated in this study. The obtained results confirmed that sunflower proteins are quite suitable as encapsulating agent and provide the microencapsulation efficiencies significantly higher compared to those obtained with soy proteins

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Chabeaud, Aurélie Laure. „Production de peptides de lieu noir dotés d'une capacité antioxydante par hydrolyse enzymatique en réacteur discontinu et fractionnement sur membrane“. Lorient, 2008. http://www.theses.fr/2008LORIS115.

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Ce travail s’inscrit dans le cadre général de la valorisation des co-produits de la pêche. Il porte sur la mise en oeuvre de l’hydrolyse enzymatique et des procédés de séparation sur membranes pour produire des peptides dotés d’une capacité antioxydante élevée selon un procédé transférable à l’échelle industrielle. Le filet de lieu noir a été choisi comme substrat modèle. L’hydrolyse enzymatique par l’Alcalase® a tout d’abord été optimisée à l’aide de la méthodologie des plans d’expériences. Les conditions d’hydrolyse permettant de maximiser l’activité antioxydante (test au β-carotène-linoléate) des peptides sont : T = 60 °C, pH 8, ratio E/S = 2,23 % (53,8 AU. Kg-1), pendant 10,8 min. Le transfert du procédé d’hydrolyse à l’échelle pilote (réacteur de 20L) a été validé. Le fractionnement sur chromatographie basse pression montre que la fraction inférieure à 1 kDa est majoritairement active. Le fractionnement sur membrane a été utilisé comme un deuxième levier pour agir (i) sur la distribution de la taille des peptides et (ii) sur le niveau d’activité des hydrolysats. Le rôle des paramètres opératoires (pression, teneur en peptides, facteur de réduction volumique (FRV)) a été étudié. Tout d’abord, on a observé que pour une teneur en peptides fixée, lorsque la pression augmente, le taux de rétention (TR) des peptides augmente et le seuil de coupure apparent (SC) de la membrane augmente. A une pression constante, lorsque la teneur en peptides (ou le FRV) augmente, le TR diminue et le SC augmente. La durée de la concentration renforce cependant le colmatage. Ensuite, on constate qu’en mode recyclage total, le fractionnement améliore la capacité antioxydante du perméat. En mode concentration, le fractionnement améliore l’activité du perméat tant que la concentration reste modérée (FRV ≤ 2). L’originalité de ce travail de thèse réside dans (i) la maximisation de la capacité antioxydante de l’hydrolysat, (ii) l’utilisation des paramètres opératoires pour modifier la sélectivité des membranes et obtenir des fractions peptidiques de poids moléculaires désirés et (iii) le développement d’outils analytiques adaptés à la quantification des peptides et au suivi de leur rétention par une membrane d’UF
This work is conducted in the framework of the fishery by-product up-grading. It concerns the implementation of the enzymatic hydrolysis and the membrane separation processes to produce peptides with a high antioxidant capacity according to a process transferable to the industrial scale. Saithe fillet was chosen as a model substrate. The enzymatic hydrolysis by Alcalase® was, first, optimized by means of the design of experiment methodology. Hydrolysis conditions maximising the antioxidant activity of peptides (β-carotene-linoleate model system assay) are: T = 60 °C, pH 8, E/S ratio = 2. 23 % (53. 8 AU. Kg-1) during 10. 8 min. The transposition of the hydrolysis process at pilot scale (20 L batch reactor) was validated. The fractionation on a low pressure chromatographic column shows that the fraction lower than 1 kDa are the most active. Membrane fractionation was then used as a second lever to act (i) on size distribution of peptides and (ii) on the activity level of hydrolysates. The role of the operating parameters (pressure, peptide content, volume reduction factor (VRF)) was studied. It was observed that, for a given peptide content, when the pressure increases, the retention rate (RR) of peptides increases and the apparent molecular weight cut-off (MWCO) of the membrane decreases. For a constant pressure, when the peptide content (or of the FRV) increases, the RR decreases and the apparent MWCO increase. However, the duration of concentration step strengthens the membrane fouling. In recirculation mode, the fractionation improve the antioxidant capacity of permeates. In concentration mode, the fractionation improved the activity as long as the concentration remains moderate (FRV ≤ 2). The originality of this PhD work is (i) the maximisation of the antioxidant capacity of the hydrolysate, (ii) the use of the fractionation operating parameters to modify the membrane selectivity and to obtain peptide fractions with defined molecular weight, and (iii) the development of analytical tools adapted to peptide quantification and to the follow-up of peptide retention on the UF membrane

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Linder, Michel. „Optimisation d'un procédé de valorisation de coproduits d'abattage par hydrolyse enzymatique : propriétés fonctionnelles et nutritionnelles des hydrolysats“. Vandoeuvre-les-Nancy, INPL, 1996. http://docnum.univ-lorraine.fr/public/INPL_T_1996_LINDER_M.pdf.

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La valorisation de coproduits d'abattage représente un enjeu économique, dans les entreprises de transformation de la viande. Le premier objectif de ce travail porte sur le paramétrage et l'optimisation d'un procédé d'obtention de fractions protéiques par hydrolyse enzymatique ménagée. L’utilisation de la méthodologie de la recherche expérimentale permet de quantifier l'influence et les interactions des facteurs (pH, température, concentration en enzymes, concentration en protéines, durée d'hydrolyse), en réacteur discontinu. La modélisation par méthode empirique du procédé d'hydrolyse, utilise une matrice de Doehlert autorisant sept niveaux différents pour les variables les plus sensibles. Le modèle quadratique obtenu conduit à l'optimisation des facteurs par la méthode des surfaces de réponse. Cette première partie du travail, destinée à limiter et quantifier les facteurs influents au stade industriel, montre que la durée d'hydrolyse et la concentration en enzyme sont les paramètres importants à maitriser. L’étude des propriétés fonctionnelles et nutritionnelles représente la deuxième partie de ce travail. Les propriétés d'hydratation et émulsifiantes d'hydrolysats protéiques issus de coproduits de veau ont été étudiées en fonction du degré d'hydrolyse et de la concentration protéique. Les résultats montrent qu'une hydrolyse enzymatique ménagée améliore les qualités fonctionnelles des hydrolysats. Les expérimentations réalisées industriellement en réacteur discontinu de 400 litres permettent, en fonction de la nature et de la spécificité de l'enzyme, d'obtenir des hydrolysats aptes à la gélification, propriété particulièrement recherchée. Un traitement thermique adapté, nécessaire à l'inactivation des protéases et à la solubilisation des tissus collagéniques, augmente la qualité microbiologique, tout en préservant les propriétés nutritionnelles et fonctionnelles des produits. La valeur nutritionnelle des hydrolysats industriels, destines à l'alimentation humaine, a été mesurée in vivo et in vitro

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Leconte, Danielle. „Contribution à l'étude de la valorisation du cruor des abattoirs : application de l'ultrafiltration à la préparation d'hydrolysats peptidiques à partir de l'hémoglobine bovine“. Compiègne, 1989. http://www.theses.fr/1989COMPD159.

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L'hydrolyse enzymatique d'un hémolysat de cruor, coproduit d’abattage actuellement mal valorisé est réalisée dons un réacteur à ultrafiltration pour une production en continu et à l’échelle pilote d'hydrolysats peptidiques à haute valeur ajoutée. L'état actuel de la valorisation du sang total, du plasma et du cruor, est développé dans la partie bibliographique de cette thèse. Le procédé d'obtention des hydrolisats d'hémoglobine, qui a été mis au point et optimisé au niveau pilote, met en œuvre des techniques de purification performantes, extrapolables au stade industriel, telles que : - La réaction ultrafiltration. 390 litres d'hémolysat sont hydrolysés en continu par la pepsine, à pH=2 et à 40°C dans un réacteur de 90 litres couplé à un appareil d’ultrafiltration. Des membranes minérales de seuils de coupure différents (10 000 et 20 000 daltons) ont été utilisées pour étudier l’influence du film ultrafiltrant sur les hydrolysats peptidiques produits. Cette technique, appliquée pendant plus de 24 heures à l’échelle pilote, permet d'obtenir des hydrolysats peptidiques d'hémoglobine peu colorés avec un rendement peptidique compris entre 70 et 80 %. - La décoloration des hydrolysats, dans une cuve agitée et thermostatée à 40°C, par adsorption des peptides héminiques sur la magnésie lourde. Le rendement de cette étape, après optimisation par une étude cinétique au laboratoire est de 90 %. - Le dessalement des hydrolysats peptidiques par électrodyalyse avec un rendement peptidique de 90 %. Les hydrolysats sont conditionnés sous forme de poudre après avoir concentrés sur évaporateurs à flot tombant ou à film mince agité et séchés par atomisation. Le rendement global du procédé est de 50 % (7-6 kg de poudre peptidique). La caractérisation des hydrolysats peptidiques obtenus prouve les parfaites définitions et reproductibilité de leur composition en acides aminés permettant leur expérimentation dans des domaines d'application exigeants tels que la nutrition entérale des prématurés, la thérapeutique vétérinaire et les milieux de culture.

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Adje, Estelle Yaba. „Hydrolyse ménagée de l’hémoglobine bovine par la pepsine porcine en mélanges hydroalcooliques et obtention d’une nouvelle famille de peptides antimicrobiens“. Thesis, Lille 1, 2010. http://www.theses.fr/2010LIL10103/document.

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L’hydrolyse de l’hémoglobine bovine par la pepsine peut être considérée comme une voie importante d’obtention de peptides antimicrobiens face à l’émergence des résistances bactériennes aux divers antibiotiques. Des alcools connus comme des solvants structurants ont été utilisés afin d’aboutir à une hydrolyse ménagée de l’hémoglobine par la pepsine. Le méthanol, l’éthanol, le propanol, le butanol ou le trifluoroéthanol ont été utilisés en vue de préserver ou d’induire de nouvelles modifications structurales de l’hémoglobine. L’hydrolyse pepsique de l’hémoglobine en milieu hydroalcoolique a aboutit à un mélange peptidique moins complexe majoritairement composé de peptides intermédiaires à activité antimicrobienne. L’étude des variations structurales a été réalisée par dichroïsme circulaire, spectrofluorimétrie et spectrophotométrie UV-visible. L’utilisation de 10% de TFE a permis l’obtention d’un hydrolysat moins complexe riche en peptides intermédiaires hydrophobes mais à concentration faible. La présence de 40% de méthanol, 30% d’éthanol, 20% de propanol ou de 10% de butanol a amélioré cette concentration. Ces alcools ont rendu plus spécifique l’activité de l’enzyme par une augmentation de l’hydrolyse préférentiellement en position C-terminale des leucines. Ils ont également rendu accessible le coeur hydrophobe de l’hémoglobine permettant ainsi d’obtenir une nouvelle famille peptidique: la famille α 67-106. Cette famille a montré une activité antimicrobienne vis-à-vis de quatre souches bactériennes (CMI: 35,2-187,1 μM) et une activité antihypertensive potentielle par sa capacité d’inhibition de l’enzyme de conversion de l’angiotensine (CI50: 42,55-1095 μM)
In view of the emergence of resistant bacteria, hydrolysis of bovine hemoglobin by pepsin can be considered as an important way for the obtaining of antimicrobial peptides. Known alcohols as structural solvents were used to lead to a limited hydrolysis of bovine hemoglobin. Methanol, ethanol, propanol, butanol, or trifluoroethanol were used in order to preserve or induce further structural changes of hemoglobin. Peptic hydrolysis of hemoglobin in hydroalcoholic solution has permitted to obtain less complex hydrolysate mainly composed of intermediate antimicrobial peptides. Structural changes of proteins were investigated using spectroscopic methods, such as, UV-visible spectophotometry, fluorescence spectroscopy and circular dichroïsm. Use of 10% TFE was allowed to less complex hydrolysate, containing intermediate hydrophobic peptides. Neverless, concentration of these peptides was low. Use of 40% methanol, 30% ethanol, 20% propanol or 10% butanol has improved this concentration. These alcohols have induced and increased more specific activity of pepsin, located preferentially in C-terminal position of leucine. They have also made available the hydrophobic core of hemoglobin allowing to a new peptide family: 67-106 α family. This family showed antimicrobial activity against four bacterial strains (MIC: 35.2-187.1 μM) and displayed at the same time ACE inhibitory activity (IC50: 42.55-1095 μM)

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Sabourin, Claire. „Etude et optimisation des propriétés technofonctionnelles et biologiques de co-produits marins ayant subi une hydrolyse enzymatique suivie d'une glycation“. Thesis, Brest, 2012. http://www.theses.fr/2012BRES0071/document.

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Pour répondre aux attentes des consommateurs, l'industrie agro-alimentaire mise sur l'innovation qui reste le vecteur principal de croissance et de différenciation des entreprises. Celles-ci sont en permanence à la recherche de nouveaux ingrédients. Elles visent ainsi la production d'aliments innovants dotés de structures complexes, dont les émulsions font partie. Ces dernières sont d’ailleurs largement répandues dans le domaine de l’agro-alimentaire. Cependant, au cours de leur fabrication ou de leur stockage, ces émulsions sont soumises à des phénomènes concomitants de déstabilisation et d’oxydation, palliés par la présence d’additifs le plus souvent d’origine chimique. Or, les consommateurs recherchent désormais des produits alimentaires contenant des substances naturelles, voire exempts d’additifs (clean label). La recherche de nouveaux ingrédients d'origine naturelle est donc un défi majeur pour les industriels de l’agro-alimentaire, et suscite un intérêt croissant. Les pistes explorées sont nombreuses, et parmi celles-ci, la réaction de glycation ou réaction de Maillard (RM) appliquée à des protéines ou des mélanges peptidiques. En effet, la RM peut s’avérer potentiellement intéressante pour renforcer la capacité antioxydante et/ou les propriétés technofonctionnelles, dont les propriétés émulsifiantes, de substrats protéiques. Dans ce contexte, nous avons cherché à optimiser les propriétés émulsifiantes et antioxydantes de deux substrats protéiques par la RM en conditions contrôlées et en présence de différents glucides. Du caséinate de sodium et un hydrolysat de coproduits de crevette ont été choisis. Le premier substrat est utilisé comme protéine de référence, car il est couramment employé dans l’industrie comme agent émulsifiant, et le second est étudié dans l’optique d’une valorisation des co-produits de la pêche. En effet, l'hydrolyse enzymatique constitue une approche d'un intérêt stratégique majeur pour réhabiliter la fraction protéique des coproduits marins. Nous avons réalisé des RM entre l’hydrolysat de crevette et trois concentrations différentes de xylose. Nous avons ainsi montré que l’augmentation de la concentration en xylose entraîne une diminution logarithmique du nombre de fonctions aminées restantes après RM. Ceci indique que la concentration en xylose initialement utilisée était limitante. Des analyses chromatographiques montrent que l’utilisation de concentrations plus importantes en xylose semble privilégier l’apparition de composés aromatiques de faible poids moléculaire(< 250 Da). Par ailleurs, l’augmentation de la concentration en xylose lors de la RM avec l’hydrolysat de crevette modifie les propriétés rhéologiques des émulsions à 0,5 % et pH 7. Enfin, la capacité antioxydante des hydrolysats de crevette issus de la RM augmente lorsque la concentration en xylose utilisée est croissante dans le milieu réactionnel. En conclusion, notre étude a permis de produire, à partir de deux substrats protéiques modifiés par RM en conditions contrôlées à 50°C, des ingrédients potentiellement bifonctionnels, montrant à la fois des propriétés émulsifiantes et antioxydantes
No

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Soufi, Kechaou Emna. „Bioréacteur enzymatique couplé à l’ultrafiltration pour la valorisation des co-produits issus des industries de la pêche : application à la seiche Sepia officinalis“. Nantes, 2011. http://www.theses.fr/2011NANT2065.

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Ce travail s'inscrit dans le cadre de la valorisation des co-produits issus des industries de transformation de la seiche Sepia officinalis. Il porte sur la mise en œuvre de l'hydrolyse enzymatique et des procédés de séparation membranaires en vue d'obtenir des composés d'intérêt comme les peptides et les lipides. Les techniques utilisées dans cette étude font partie des « technologies propres », visant une dépense énergétique et un investissement modérés. Les hydrolyses ont été menées en deux étapes, une première pour identifier l'efficacité des enzymes sur les matrices visées et cibler le domaine d'étude. Une fois l'enzyme choisie, la seconde étape a porté sur la détermination des conditions optimales d'hydrolyse par plan d'expériences avec pour objectif l'enrichissement de la phase soluble en peptides de petite taille et l'obtention d'une activité antimicrobienne. Le fractionnement par la charge sur des colonnes échangeuses d'ions nous a permis de déterminer la nature ionique des peptides antimicrobiens. Le fractionnement par la taille par ultrafiltration a été utilisé comme un deuxième levier pour agir (i) sur la distribution de la taille des peptides et (ii) sur le niveau d'activité des hydrolysats. Tout d'abord, un fractionnement à petite échelle a été réalisé avec des membranes en polyethersulfone et en cellulose régénérée à différents seuils de coupure allant de 1000 à 100 000 Da de manière à déterminer les meilleures conditions séparatives. Ensuite, une méthodologie de « scaling-up » par ultrafiltration de l'hydrolysat protéique sur un pilote pré-industriel a été proposée. L'originalité de ce travail de thèse réside dans (i) l'enrichissement de l'hydrolysat des viscères de seiche en composés valorisables comme les acides aminés essentiels ainsi que la mise en évidence d'une activité antimicrobienne et (ii) en la possibilité de transposer les essais à d'hydrolyse enzymatique et d'ultrafiltration à grande échelle en les intégrant dans un procédé industriel complet
This work is conducted in the framework of cuttlefish Sepia officinalis by-products up-grading from conditioning industries. It concerns the implementation of the enzymatic hydrolysis and the membrane separation processes to obtain valuable compounds such as peptides and lipids. The techniques used in this study belong to « clean technologies », environmentally sound involving moderate investment and low energy consumption. Hydrolysis of cuttlefish viscera had been carried out in two steps. The first one had objective to determine the efficiency of the enzymes on the matrixes investigated as well as the study area. Once the enzyme had been chosen, the second step was to optimize enzymatic hydrolysis using experimental designs, in order to obtain the highest small peptides recoveries the soluble phase and an antimicrobial activity. The fractionation on the protein hydrolysate according to the charge upon ion exchanging columms allowed determining the ionic profile of the antimicrobial peptides. Membrane fractionation (ultrafiltration) was then used as a second lever to act (i) on size distribution of peptides and (ii) on the activity level of the hydrolysates. First, small-scale fractionation was carried out on polyethersulfone and regenerated cellulose membranes with molecular weight cut-offs ranging from 1000 to 100 000 Da. Then, an scaling-up methodology was investigated by ultrafiltration of the hydrolysate on a pre-industrial pilot plant. The originality of this PhD work is (i) the enrichement of cuttlefish viscera hydrolysates with valuable compounds such as essential amino acids and the enhancement of the antimicrobial activity and (ii) the possibility to up-scale enzymatic hydrolysis and ultrafiltration integrating them in the conception of a complete industrial process

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Viens, Laurence. „Effet des activités de transfert des lipides et d'hydrolyse des triglycérides sur la composition lipidique, la structure et l'oxydabilité des LDL“. Dijon, 1996. http://www.theses.fr/1996DIJOMU09.

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Iung, Catherine. „Les propriétés fonctionnelles des protéines du lactosérum : Étude modélisée avec la beta -lactoglobuline“. Nancy 1, 1988. http://www.theses.fr/1988NAN10152.

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L'amélioration des propriétés fonctionnelles des protéines est un des principaux moyens envisagé actuellement pour l'essor des industries de sa transformation. L'utilisation de concentrés protéiques de lactosérum industriels montre ici combien il est difficile d'apprécier les modifications physico-chimiques intervenant lors du traitement enzymatique ou thermique dans un mélange complexe. L'étude modélisée est alors réalisée avec la beta -lactoglobuline isolée par une méthode originale de fractionnement en "batch" du lactosérum. Différents traitements enzymatiques et thermiques sont appliqués et leur influence sur les propriétés de surface est analysée par mesure du pouvoir émulsifiant et de la tension superficielle, en prenant en compte les modifications structurales survenues. Des essais de proteo lyse de la beta -lactoglobuline native ou dénaturée (par réduction des ponts disulfurés ou traitement thermique en milieu acide) sont réalisés dans de multiples conditions de ph, de température et de rapport E/S en utilisant la "rennilase", la pepsine ou la trypsine. La beta -lactoglobuline est difficilement hydrolysable en raison de sa structure globulaire compacte et l'hydrolyse enzymatique n'induit pas d'amélioration du pouvoir émulsifiant. Le traitement thermique en milieu acide dilué entraîne un remaniement profond de la structure qui consiste principalement en des coupures de liaisons peptidiques et en des associations de fragments donnant des agrégats de poids moléculaire supérieur à celui de la beta -lactoglobuline. Ces produits montrent une activité à l'interface élevée, suite à une adsorption et un réarrangement plus efficace et des intéractions plus fortes au niveau du film interfacial. On enregistre une forte amélioration du pouvoir émulsifiant (augmentation de 100 %). Cette étude associée aux données récentes sur la structure tridimensionnelle de la beta -lactoglobuline, montre et explique le comportement de cette protéine vis-à-vis de l'hydrolyse enzymatique et du traitement thermique en milieu acide

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Galian, Barrueco Carmen. „Caractérisation de 2 transporteurs ABC (“ATP-Binding Cassette”) bactériens de fonction inconnue : YheI/YheH de Bacillus subtilis et Rv1747 de Mycobacterium tuberculosis“. Phd thesis, Grenoble 1, 2008. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00369447.

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L'émergence du phénotype MDR (« multidrug resistance») des cellules cancéreuses est souvent corrélée à la surexpression de protéines membranaires appartenant à la superfamille ABC (« ATP binding cassette »). Ces protéines couplent l'hydrolyse de l'ATP au transport d'agents chimiothérapeutiques vers l'extérieur des cellules. Chez les bactéries, des transporteurs homologues ont été impliqués dans certains cas de résistance aux antibiotiques.
Deux nouveaux transporteurs ABC bactériens, Rv1747 de Mycobacterium tuberculosis et YheI/YheH de Bacillus subtilis, potentiellement impliqués dans la résistance aux antibiotiques, ont été étudiés ici en réalisant une expression hétérologue chez Escherichia coli et en isolant des vésicules de membrane inversées. Ce système s'est avéré inapproprié pour l'étude du transporteur Rv1747, à cause vraisemblablement des différences entre E. coli et M. tuberculosis dans l'usage des codons. En revanche, nous avons obtenu un degré important de surexpression de YheI/YheH qui nous a permis de caractériser son activité de transport et d'hydrolyse de l'ATP. Nous avons ainsi montré que les deux protéines, YheI et YheH, s'associent pour former un exportateur hétérodimérique capable de transporter de multiples drogues, et que le rôle des deux sous-unités n'est pas identique dans le mécanisme catalytique du transporteur. Enfin, nous avons réussi à purifier le transporteur YheI/YheH avec un rendement élevé et dans un état fonctionnel stable, permettant d'approfondir sa caractérisation biochimique ainsi que d'obtenir des cristaux bidimensionnels pour une étude structurale par microscopie électronique.

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Rabgaoui, Najat. „Modulation des défenses immunitaires humaines par les produits laitiers : interactions entre des peptides issus de l'hydrolyse des caséines bovines et les leucocytes polymorphonucléaires humains“. Montpellier 2, 1994. http://www.theses.fr/1994MON20047.

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Les effets de peptides provenant de l'hydrolyse des caseines bovines sur la liberation d'especes oxygenees reactives (eor), la degranulation, le chimiotactisme et la production d'acide 5-hydroxy-eicosatetraenoique (5-hete) et de leucotriene b#4 (ltb#4) par les leucocytes polymorphonucleaires (pmn) ont ete etudies, les pmn ayant ete actives soit par le n-formyl-methionyl-leucyl-phenylalanine (fmlp), soit par l'acetate de phorbol myristate, soit par l'ionophore calcique a23187. Le fragment peptidique de la b-caseine bovine (60-63) inhibe la production des eor et celle de 5-hete par les pmn actives, mais est sans effet sur la liberation de: - glucoronidase et la production de ltb#4. Il augmente le chimiotactisme des pmn vers les fortes concentrations de fmlp. Le fragment peptidique de l'a-caseine bovine (90-95) augmente les quantites d'eor, de 5-hete et de lysozyme produites, mais il est sans effet sur le chimiotactisme, la liberation de; - glucoronidase et de ltb#4. Les deux peptides augmentent les quantites d'acide arachidonique liberees lors de la stimulation par a23187 des pmn supplementes par l'acide arachidonique. Certains peptides produits au cours de la digestion des caseines du lait de vache peuvent donc agir sur les fonctions des pmn en modulant l'activite des endoperoxydases responsables de la reduction du 5-hpete en 5-hete. Lors de l'activation des pmn, les peptides sont exposes a la myeloperoxydase et au peroxyde d'hydrogene liberes, leurs restes tyrosyls sont transformes en radicaux tyrosyls qui dimerisent

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Boukil, Abir. „Étude des performances du procédé d'ultrafiltration lors de la concentration d'hydrolysats trypsiques de β-lactoglobuline prétraitée par hautes pressions hydrostatiques“. Master's thesis, Université Laval, 2018. http://hdl.handle.net/20.500.11794/29625.

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L’hydrolyse enzymatique de la β-lactoglobuline (β-LG) génère un nombre conséquentdepeptides dont certains possèdent desactivités biologiques. Cependant, l’étape d’hydrolyse peut être améliorée en diminuant le temps de réaction tout en générant unrendementpeptidique plus important. Ainsi, plusieurs travauxse sont intéressés à l’utilisation des hautes pressions hydrostatiques (HPH)afin d’engendrer une dénaturation de la β-LG et ainsi accélérer l’étape d’hydrolyse enzymatique et la production de peptides bioactifs. Cependant, les HPHimpactent également surles profils peptidiques par une modification du ratio peptideshydrophiles/hydrophobes. Une telle modification est ainsi susceptible d’avoir une répercussion négative sur les performances de l’ultrafiltration (UF) lors du fractionnement et de la concentration des peptides bioactifs. Par conséquent, ce projetvisaità étudier l’impact d’un prétraitement de la β-LG parlesHPH (400 et 600 MPa, 10 min) sur les performances du procédé d’UFlors de la séparation d’un hydrolysat trypsiquede β-LG. Suite aux étapes d’UF en mode recirculation et concentration, il a été démontré qu’un prétraitement de la β-LG à 400 MPaa permisde générer des hydrolysats dont les abondances peptidiques, y compris celles de certains peptides bioactifs (VAGTWY et ALPMHIR) étaient supérieures comparativement aux autres conditions(0.1 et 600 MPa).Cependant, à 400 MPa, les flux de perméationétaient inférieursde 31%. La désorption peptidique des membranes d’UFa permis d’identifierle peptide antihypertenseur ALPMHIRcomme l’espèce colmatante majeure. Cependant, et spécifiquement à 400 MPa, d’autres peptides chargés négativement ont été caractérisés, notamment VAGTWY (peptide antidiabèteet antioxydant). Par conséquent, bien qu’un prétraitement par les HPH à 400 MPa permette une augmentation des rendements peptidiques, les performances de l’UF sont considérablement réduites.
Enzymatic hydrolysis of β-lactoglobulin (β-LG) generates a large amount of peptide species including some bioactive peptides.However, the stepof protein hydrolysis can be improved by decreasing the digestion time while increasing the peptide yield. Several studies focused on the use of high hydrostatic pressure (HHP) to improve the denaturationof the native β-LG structure and thus to accelerate its enzymatic hydrolysis and yieldof bioactive peptides.Nevertheless, HHP is reported to affect the resulting peptide profiles by modifying hydrophobic/hydrophilic peptides ratiowhich may negatively affect the performance of ultrafiltration (UF) used to fractionate and concentrate bioactive peptides.Therefore, the aim of this project was to evaluate the performances of UF forthe filtration of tryptic hydrolysates generated after pre-pressurization ofβ-LGat 400 and 600 MPafor10min.After hydrolysate fractionation by UF in total recirculation modeand concentration modes, it has been demonstrated that β-LGpre-pressurization at 400 MPainduced the recovery ofhigher peptide relative abundance in the hydrolysates, including several bioactive peptides (VAGTWY and ALPMHIR), compared to other conditions(0.1 and 600 MPa).At the same time, permeate fluxes were 31% lower at 400 MPa. Characterization of peptide desorbedfrom UF membranes has shown that the antihypertensive peptide (ALPMHIR) was identified as the main fouling peptide.However, other negatively charged peptides were specifically identified at 400 MPa, including VAGTWY (an antioxidant and antidiabetic peptide). Consequently, while pre-pressurization of β-LGat400 MPa improved the recoveryof bioactive peptidescompared to other conditions, UF performances were negatively impacteddue to thisHHP pretreatment.

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Jullian, Eric. „Isoforme foetale des chaînes lourdes de la myosine squelettique humaine : isolement, structure primaire et expression du messager“. Paris 5, 1996. http://www.theses.fr/1996PA05CD04.

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Dans le muscle squelettique le responsable de l'activité mécanique est la molécule de myosine qui transforme l'énergie provenant de l'hydrolyse de l'ATP en mouvement. Cette protéine hexamérique (2 chaînes lourdes et 4 chaînes légères) existe sous plusieurs formes en fonction du type des monomères qui la constituent. Au cours du développement, dans le muscle squelettique humain, deux isoformes ont été décrites, une forme embryonnaire et une forme périnatale. Les ADN complémentaires des chaînes lourdes de ces isoformes développementales ont été isolés et leurs séquences ont été déterminées. Un troisième ADN complémentaire a été isolé. Sa séquence nucléotidique (6010 bases) a été déterminée. Des expériences de protection à la RNase montrent une expression du messager durant la deuxième moitié de gestation et les premiers jours post-partum. Cette isoforme fœtale présente des différences de séquences avec l'isoforme périnatale précedemment décrite, 24 mutations nucléotidiques (0. 45%) conduisant à 9 substitutions d'acides animés (1,5%). Ces différences mettent en évidence un polymorphisme de restriction, mais celui-ci n'a pas été retrouvé. Tous les éléments recueillis sur l'isoforme fœtale font considérer cette dernière comme la foemr prépondérante exprimée entre la treizième semaine de développement et 2 jours après la naissance.

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Blanchard, Sophie. „Ingénierie de glycoside hydrolases pour la glycosylation des protéines recombinantes“. Université Joseph Fourier (Grenoble), 2004. https://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00008252.

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Le contrôle de la glycosylation des protéines recombinantes présente un enjeu considérable dans le développement de la production de protéines d'intérêt thérapeutique dans des systèmes d'expression hétérologues. La glycosylation joue en effet un rôle essentiel dans leurs propriétés, notamment pharmacocinétiques. Le remodelage de la N-glycosylation des protéines recombinantes a été envisagé via l'utilisation de la glycosynthase Cel7B E197A d'Humicola insolens. Cette enzyme doit tout d'abord être modifiée afin de pouvoir fixer un groupement N-acétylglucosaminyle dans le sous-site accepteur +1. Des études de modélisation moléculaire ont mis en évidence deux acides aminés qui pourraient empêcher le positionnement d'une unité glucosidique substituée en position 2. Différents mutants ont été préparés par mutagénèse dirigée afin d'étudier leur spécificité de substrat. Leurs activités glycosynthases ont été caractérisées, montrant l'influence des mutations introduites. Même si la spécificité de substrat désirée n'a pu être obtenue, une modification de la régiosélectivité de la glycosynthase a été mise en évidence vis-à-vis d'un substrat substitué en position 2 par un groupement de type azido
The control of glycosylation of recombinant proteins presents a considerable stake in the development of therapeutic proteins production in heterologous expression systems. Indeed glycosylation plays a key role in their properties, in particular pharmacokinetic properties. The remodelling of N-glycosylation of recombinant proteins was considered via the use of glycosynthase Cel7B E197A from Humicola insolens. This enzyme must first of all be modified in order to be able to accomodate an N-acetylglucosaminyl group in the acceptor subsite +1. Molecular modelling studies highlighted two amino acids which could prevent from positioning a carbohydrate unit substituted in position 2. Various mutants were prepared by site-directed mutagenesis in order to study their substrate specificity. Their glycosynthase activities were characterized, showing the influence of the introduced mutations. Even if the desired substrate specificity has not been obtained, a modification of the regioselectivity of the glycosynthase was highlighted with a substrate substituted in position 2 by an azido group

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Raphel, Véronique. „Purification et caractérisation de la N-acycleptide hydrolase intestinale de porc“. Aix-Marseille 3, 1994. http://www.theses.fr/1994AIX30036.

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En 1978, il a ete montre au laboratoire que des rats en croissance sont capables d'utiliser efficacement pour leur synthese proteique de la caseine dont tous les residus de lysine sont acetyles par de la n-acetyl-l-methionine. Une activite de type acetylamino-peptidasique est responsable au niveau intestinal de l'hydrolyse de la liaison isopeptidique. Il nous a semble important de caracteriser cette enzyme afin de preciser sa fonction dans la digestion des substrats proteiques alimentaires ou le catabolisme des proteines cellulaires. Nous avons purifie jusqu'a l'homogeneite une acylpeptide hydrolase a partir de muqueuse intestinale de porcs adultes en combinant des precipitations par le sulfate d'ammonium et des chromatographies d'echange d'ions, d'affinite et de filtration. L'enzyme est un tetramere de 280 kda constitue de sous-unites apparemment identiques de 762,4 kda. Son extremite n-terminale est bloquee, probablement par acetylation, et sa composition en acides amines est comparable a celle trouvee pour l'enzyme hepathique de porc et de rat. Son extremite c-terminale est une serine et son ph optimum d'action est voisin de 8. Les parametres cinetiques de l'hydrolyse de petits peptides de type n-acetyl-(l-alanine)#n avec n=2 a 4 catalysee par l'enzyme, montrent que la vitesse maximale de liberation de la n-acetyl-l-alanine diminue lorsque la longueur de la chaine augmente, le km etant de 0,70,1 mm. L'alanine n-acetylee est un inhibiteur competitif de l'enzyme lors de l'hydrolyse de son substrat synthetique, le n-acetyl-l-alanine-p-nitroanilide. Avec le d-stereoisomere, l'inhibition serait de type mixte, avec une forte composante incompetitive. L'etude du site actif de l'acylpeptide hydrolase intestinale de porc realisee par marquage au dfp et par l'action d'inhibiteurs montre que cette enzyme appartient a la classe des proteases a serine comme c'est le cas de plusieurs endopeptidases digestives, alors qu'ici il s'agit d'une exopeptidase. A l'aide d'anticorps polyclonaux diriges contre l'enzyme intestinale de porc, il a ete possible de montrer que cette proteine, ou son homologue structural, est vraisemblablement presente dans d'autres tissus chez le porc et le rat. Dans cette derniere espece la distribution de l'activite enzymatique ne varie pas le long de l'axe crypte-villosite au niveau intestinal. Outre son intervention dans les etapes ultimes de la digestion des proteines alimentaires naturellement ou artificiellement n-acetylees, l'acylpeptide hydrolase est probablement impliquee dans le catabolisme des proteines intracellulaires dont on sait qu'une fraction tres importante est n-acetylee

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Giorgi, Laurent Jean-Paul. „Cartographie structurale et fonctionnelle de la liaison entre la peptidyl-ARNt hydrolase et son substrat“. Palaiseau, Ecole polytechnique, 2010. http://www.theses.fr/2010EPXX0087.

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Pagliero, Estelle. „Etude fonctionnelle de Pmp23, une nouvelle enzyme de clivage du peptidoglycane chez Streptococcus pneumoniae“. Phd thesis, Université Joseph Fourier (Grenoble), 2006. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00012039.

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Le peptidoglycane est un composant majeur de la paroi cellulaire bactérienne dont l'intégrité est essentielle à la survie cellulaire. La biosynthèse du peptidoglycane est un processus régulé faisant intervenir des enzymes de synthèse, les « Penicillin-Binding Proteins », et des hydrolases qui agissent, selon toute vraisemblance, de façon concertée lors de la croissance et de la division bactérienne. La comparaison des génomes bactériens a permis d'identifier un nouveau domaine protéique, probablement impliqué dans le clivage du peptidoglycane, présent uniquement chez les bactéries à Gram positif : le domaine PECACE (PEptidoglycan CArbohydrate Cleavage Enzyme). Ce domaine, prédit pour avoir un repliement tridimensionnel analogue aux domaines catalytiques de la transglycosylase lytique Slt70 d'Escherichia coli et du lysozyme de type G d'oie, pourrait participer au clivage de la liaison glycosidique β(1-4) entre les résidus acide N-acétyl-D-muramique et N-acétyl-D-glucosamine du peptidoglycane. Chez la bactérie pathogène Streptococcus pneumoniae, ce domaine est présent dans la région extracellulaire d'une protéine que nous nommons Pmp23 (Pneumococcal Membrane Protein). La forme recombinante de cette protéine membranaire bitopique de 23 kDa dégrade in vitro des extraits bactériens contenant du peptidoglycane. L'inactivation du gène pmp23 chez S. pneumoniae modifie le comportement de la bactérie en culture, accroît sa sensibilité aux antibiotiques de la famille des β-lactamines et perturbe la localisation du site de division. Ces observations indiquent que Pmp23 est une hydrolase intervenant dans le métabolisme du peptidoglycane septal.

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Demers, Mathieu Véronique. „Activité antimicrobienne d'un extrait peptidique issus d'un hydrolysat trypsique de protéines de lactosérum“. Thesis, Université Laval, 2011. http://www.theses.ulaval.ca/2011/28671/28671.pdf.

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Eugenio, Francis Amann. „Équilibre et forme de l'apport en acides aminés dans l'alimentation : conséquences physiologiques et métaboliques chez le porc“. Thesis, Rennes, Agrocampus Ouest, 2022. http://www.theses.fr/2022NSARB358.

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L'aliment apporte aux porcs des nutriments indispensables à leurs fonctions biologiques comme les acides aminés (AA). Dans l’aliment, les AA peuvent être apportés sous forme de protéines, de peptides ou bien sous forme libre directement assimilables. Les réponses métabolique et physiologique des porcs à l'apport en AA par l’aliment peuvent être influencées par l’équilibre des AA (profil) ainsi que par la forme sous laquelle ces AA sont apportés (protéines, peptides, libres). L’objectif de la thèse était d’évaluer les réponses métaboliques et physiologiques des porcs nourris avec un profil équilibré ou non en AA apportés sous forme de protéines, de peptides, ou sous forme d’AA libres. La réponse métabolique des porcs a été évaluée en étudiant la cinétique plasmatique postprandiale des AA et de différents métabolites. Nous avons comparé les cinétiques postprandiales de porcs adultes et en croissance pour étudier l’influence de l'équilibre des AA alimentaires. Les effets métaboliques deévaluées par la mesure de l’expression des transporteurs d'AA et de peptides et de la morphologie de la muqueuse. Nous avons montré que l'alimentation des porcs avec un régime avec un profil équilibré en AA entraîne une utilisation plus rapide des AA alimentaires par rapport à un régime avec un profil déséquilibré en AA. L'utilisation des AA par les tissus périphériques des porcs adultes est plus lente que celle des porcs en croissance. Par contre, l’utilisation des AA par le tube digestif et le foie au “premier passage” est plus importante chez les porcs adultes que chez les porcs en croissance. La digestibilité des AA des protéines est plus faible que celle des l'AA libres et des petits peptides, car ces deux derniers sont immédiatement disponibles sans avoir besoin d'être digérés. Cela entraîne une différence dans leur biodisponibilité pour les tissus périphériques et le statut métabolique des porcs. En outre, la forme de l'AA alimentaire influence la physiologie intestinale, comme le montrent la morphologie et l'abondance de divers transporteurs intestinaux d'AA et de peptides dans les différentes sections de l'intestin grêle
Feeding animals is crucial for their life because they need nutrients like amino acids (AA). They use these AA for various biological processes like the synthesis of proteins and other biomolecules. Although, the metabolic and physiological response of pigs to feeding AA depends both on the dietary profile and form. The metabolic response of pigs was assessed by studying the dynamic changes in the postprandial plasma concentrations of different metabolites. Furthermore, as mature and growing animals have different metabolic needs and use of dietary AA, we used adult and growing pigs to study dietary AA balance. Meanwhile, as the form of AA has a direct impact on the rate of absorption of AA in the intestinal lumen, physiological adaptations like changes in morphology and gene expression of AA and peptide transporters were measured.We found that feeding pigs with a diet with a balanced AA profile results in quicker utilization of dietary AA compared to a diet with an unbalanced AA profile. The use of AA in the peripheral tissues of adult pigs is slower compared to growing pigs, conversely, more AA are utilized in the first-pass for adult pigs compared to growing pigs. There is a big difference in the AA digestibility of intact proteins compared to free AA and small peptides as the latter two are immediately available without the need for digestion. This causes a difference in their bioavailability to peripheral tissues and the metabolic status of pigs. Furthermore, the form of dietary AA influences intestinal physiology as seen in the morphology and the abundance of various intestinal AA and peptide transporters in the different sections of the small intestine of pigs

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Jain, Sanjay. „Etude génétique, enzymatique et fermentaire des protéines excrétées par un champignon mésophile : Penicillium occitanis et un champignon thermophile : Talaromyces sp : [thèse en partie soutenue sur un ensemble de travaux]/ par Sanjay Jain“. Toulouse 3, 1989. http://www.theses.fr/1989TOU30203.

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La souche po16 issue de penicillium occitanis cl100, hyperproductrice de pectinases et cellulases a ete isolee apres plusieurs etapes de mutagenese; les differents polysaccharidases produits par cette souche dans des conditions de fermentation differentes comme substrat des pectives caracterisees par differents degres d'esterification (citron et pomme) est decrite au chapitre i. La souche po16 est aussi capable de produire des lipases; les conditions de fermentation ont ete evaluees avec plusieurs substrats comme par exemple les huiles d'olive et de soja et les tween 20, 40 et 80 (chapitre ii). D'autre part, nous nous sommes interesses aux productions d'enzymes polysaccharolytiques thermostables produites par un champignon thermophile, talaromyces sp. Cl240. Les enzymes cellulolytiques i. E. Cellobiohydrolase, endoglucanase et -glucosidase, ont ete separees et caracterisees par fplc. Une cellobiohydrolase (cbh-i) a ete purifiee par echange d'ions et chromatographie d'interaction hydrophobe (chapitre iii). Nous avons aussi mis au point les conditions experimentales de formation et de regeneration des protoplastes de talaromyces sp. Puis les conditions de transformation de ces protoplastes par des vecteurs portant comme marqueur de selection le gene de resistance a la phleomycine. Le clonage d'un gene codant pour la cbhi de trichoderma reesei a ete egalement effectue chez talaromyces sp ll 240 dans l'optique de l'amelioration du spectre enzymatique de cette souche (chapitre iv).

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Le, Coeur Catherine. „Contribution à l'étude d'un hydrolysat pepsique de myoglobine de muscle squelettique rouge de thon Thunnus Albacares : caractérisation des peptides issus de l'hydrolyse étude de l'association hème-peptide“. La Rochelle, 1996. http://www.theses.fr/1996LAROS011.

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L’hydrolyse pepsique de la myoglobine de muscle squelettique rouge de thon Thunnus Albacares génère un mélange de peptides et d'heme. En vue de caractériser les peptides de cet hydrolysat, nous les avons purifiés par une méthode de chromatographie liquide haute performance mise au point au laboratoire. Il a ainsi été montré que la chromatographie d'exclusion, associée à la chromatographie en phase inverse permettait de résoudre efficacement ce mélange de peptides, malgré sa complexité. La composition en acides aminés des peptides a été déterminée par la méthode du picotag complétée par la méthode de la dérivée seconde qui est une méthode spectrale permettant de détecter et de quantifier les acides aminés aromatiques. La séquence des peptides a ensuite été déduite de la comparaison de leur composition en acides aminés avec la séquence connue de la myoglobine de thon. Ce travail nous a permis de définir les sites de coupure de la pepsine dans nos conditions expérimentales et de les comparer avec ceux décrits dans la littérature. La recherche de peptides actifs n'a pas permis de mettre en évidence dans notre mélange de peptides opioïdes, ni de peptides activateur ou inhibiteur de la croissance cellulaire. Par contre, certaines fractions peptidiques présentent une activité inhibitrice de l'enzyme de conversion de l'angiotensine et d'autres une activité inhibitrice des contractions de l'iléon de cobaye. Des fractions présentent en outre une capacité de fixation de l'heme supérieure à celle de la molécule native. Le type de liaisons existant entre l'heme et les peptides en mélange n'a pas été clairement défini, mais il semblerait que l'heme se lie aux peptides, non pas par des liaisons fortes de type covalentes mais plutôt par des liaisons faibles, facilement détruites lors des processus de purification ou simplement par variation de PH.

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Chabanon, Gérald. „Hydrolyses enzymatiques d'isolats protéiques issus de tourteaux de colza : cinétique, modélisation, caractérisation et fonctionnalité des peptides“. Vandoeuvre-les-Nancy, INPL, 2005. http://docnum.univ-lorraine.fr/public/INPL/2005_CHABANON_G.pdf.

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Cette thèse a permis d'étudier l'obtention de peptides biologiquement actifs ou à propriétés fonctionnelles à travers la mise en œuvre et le développement de procédés de préparation et d'hydrolyse d'isolats de protéines issus de tourteaux de colza. Tout d'abord, un procédé de préparation de deux isolats protéiques se différenciant par le type de protéines les constituant (Globuline ou Albumine) a été développé. Les deux isolats ne possèdent pas de bonnes propriétés fonctionnelles mais leur hydrolyse partielle par l'Alcalase 2,4L permet d'en améliorer certaines. Puis, l'action hydrolytique de protéases commerciales (Alcalase 2,4L, Pronase SG, Neutrase 0,8L, Prolyve BS, Lypaïne 6500, Orientase 90N, Espérase 7,5L) sur l'isolat de globulines a été comparée. La valorisation des hydrolysats a porté sur leur capacité à promouvoir la croissance de cellules animales cultivées dans un milieu sans sérum de veau fœtal. Il a été montré que les cinétiques d'hydrolyse, la taille des peptides produits et l'activité biologique des hydrolysats sont significativement influencées par la spécificité de l'enzyme et qu'il existe une relation enzyme / degré d'hydrolyse (DH) / activité ciblée. Enfin, nous avons montré pour trois systèmes enzyme/substrat différents (Alcalase/Globuline, Pronase/Globuline et Alcalase/Albumine) qu'à un DH et à un pH donnés, la composition peptidique des hydrolysats est indépendantes des concentrations initiales en enzyme et en substrat et de la température. Ainsi, la prédiction de l'évolution temporelle du DH, quelles que soient les valeurs de ces paramètres, permet de contrôler la génération d'un mélange peptidique aux propriétés ciblées. Un modèle phénoménologique basé sur le schéma réactionnel de Michaelis-Menten a alors été construit afin de simuler les cinétiques d'hydrolyse en réacteur discontinu. Pour cela, les phénomènes limitants impliqués dans l'hydrolyse (inhibition ou inactivation de l'enzyme, modification du substrat) ont été mis en évidence
This thesis made it possible to study obtaining biologically active peptides or with functional properties through the development of processes for the preparation and the hydrolysis of protein isolates resulting from rapeseed cakes. First, a method of preparation of two protein isolates being different by the type of proteins (Globulin or Albumin) was developed. The two isolates do not have good functional properties but their partial hydrolysis by Alcalase 2. 4L improves some of them. Then, the hydrolytic action of commercial proteases (Alcalase 2. 4L, Pronase SG, Neutrase 0. 8L, Prolyve BS, Lypaïne 6500, Orientase 90N, Espérase 7. 5L) on the isolate of globulins was compared. The valorisation of the hydrolysates related to their capacity to promote the growth of animal cells cultivated in a serum-free medium. It was shown that the kinetics of hydrolysis, the size of produced peptides and the biological activity of the hydrolysates are significantly influenced by the specificity of the enzyme and there is a relation enzyme/ degree of hydrolysis (DH)/ targeted activity. Lastly, we showed for three different enzyme/substrate systems (Alcalase / Globulin, Pronase / Globulin and Alcalase / Albumin) that at given DH and pH, the peptide composition of the hydrolysates is independent of the initial enzyme and substrate concentrations and of the temperature. Thus, the prediction of the temporal evolution of the DH, whatever the values of precedent parameters, allows to control the generation of a peptide mixture with targeted properties. A model based on the reaction pathway of Michaelis-Menten was then built in order to simulate the hydrolysis kinetics in batch reactor. For that, limiting phenomena implied in the hydrolysis (inhibition or inactivation of the enzyme, modification of the substrate) were highlighted

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Prost, Josiane. „Hydrolases pancréatiques : non-parallélisme entre la synthèse, le transport et l'excrétion“. Dijon, 1987. http://www.theses.fr/1987DIJOS018.

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Martinez, Thomas. „Les oomycètes microorganismes pathogènes de plantes : une nouvelle source de protéines pour l'utilisation des polymères lignocellulosiques“. Thesis, Toulouse 3, 2015. http://www.theses.fr/2015TOU30104.

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Les oomycètes représentent un groupe de microorganismes eucaryotes filamenteux distincts phylogénétiquement des champignons incluant de nombreuses espèces phytopathogènes. CBEL est une glycoprotéine pariétale de Phytophthora parasitica constituée d'une répétition de deux régions séparées par un linker. Chaque région protéique est constituée d'un domaine protéique de liaison à la cellulose (CBM1) et un motif PAN /Apple impliqué dans des interactions protéines-protéines ou protéines-polysaccharides. Cette étude doctorale porte sur la caractérisation de la protéine CBEL et plus particulièrement de ses CBM1s ainsi que sur l'évaluation et optimisation du potentiel de cette protéine à : (i) stimuler les défenses naturelles des plantes (ii) augmenter l'activité de glycosides hydrolases. Dans la première partie de ce travail doctoral différents tests visant à reproduire un traitement éliciteur externe sur plante entière ont pour cela été développés. Ces tests ont permis de mettre en évidence que formulée en présence de surfactants CBEL est capable d'induire diverses réponses de défense chez A. thaliana. Une production en masse de cette protéine a été réalisée dans la levure Pichia pastoris et la bactérie Escherichia coli dans l'optique d'une future application agronomique. Les protéines recombinantes CBELcol et CBELpic produite dans ces différents systèmes d'expression présentent des profils de glycosylation différents de celui de la protéine native CBELnat. Alors que ces protéines semblent se lier de manière identique à la cellulose les différents tests d'élicitation développés au cours de ce travail mettent en évidence des variations dans leur activité élicitrice suggérant que la nature des résidus glucidiques présents sur cette glycoprotéine peut avoir un impact sur sa capacité induire des réponses de défenses en application externe. Lors de la deuxième partie de ce travail de thèse la capacité de CBEL à interagir avec différents substrats cellulosiques a été caractérisée. Les résultats obtenus ont permis de montrer que CBEL se lie avec une haute affinité à la cellulose cristalline avicel et que la présence de CBM1 fonctionnels est nécessaire à cette interaction. De manière intéressante, le CBM1-1 et CBM1-2 ne semblent pas contribuer de manière égale à cette interaction. Par ailleurs la laison de CBEL à la cellulose induit des perturbations structurales sur le substrat et permet d'améliorer l'activité de la xylanase XynB de Talaromyces versatilis sur paille de blé. En outre une xylanase chimère possédant dans sa séquence le CBM1-1 de CBEL possède également une activité augmentée sur paille blé. L'ensemble de ces résultats met en évidence le potentiel de CBEL et de son CBM1-1 pour l'amélioration de l'activité de glycoside hydrolases utilisables par exemple en bioraffinerie. En dernier lieu un travail de caractérisation structurale de la protéine CBEL a également été entamé au cours de cette étude. L'enveloppe de la protéine CBEL en solution à notamment été déterminée par SAXS (Small Angle X-ray Scattering) et un modèle 3D de cette protéine a été obtenu
Oomycetes are fungal like microorganisms evolutionary distinct from true fungi that include pathogens of plants. CBEL is a cell wall glycoprotein isolated from the oomycete Phytophthora parasitica that is composed of two distinct regions linked by a threonine/proline rich linker. Each region owns a cellulose binding module (CBM1) and a PAN-Apple domain involved in protein-protein or proteins-polysaccharides interactions. Since CBEL is able to induce defense responses in numerous plant species, its use for the development of products able to protect crops has been envisaged. For this purpose we analysed the effect of an external CBEL treatment on plants. We found that in the presence of surfactants CBEL is able to induce cytosolic calcium changes, defense gene expression, and cell death on A. thaliana. CBEL application for crop protection requires the development of economically reliable production processes. In the case of proteinaceous elicitors, an attractive strategy to obtain large amount of elicitors is to express them in heterologous hosts such as bacteria or yeasts. CBELcol and CBELpic were produced respectively in E. coli and in P. pastoris. CBELcol is unglycosylated whereas CBELpic displays a glycosylation profile distinct from the native protein (CBELnat). We found that all these proteins are able to bind crystalline cellulose. On the other side we found that the elicitor activity of CBELpic is distinct from CBELnat and CBELcol suggesting that the glycosylation on CBEL can have an impact on its ability to induce plant defense responses after external treatment on A. thaliana. In the second part of this work the two CBMs (1-1 and 1-2) that form part of CBEL have been submitted to detailed characterization, first to better quantify their interaction with cellulose and second to determine whether these CBMs can be useful for biotechnological applications, such as biomass hydrolysis. A variety of biophysical techniques were used to study the interaction of the CBMs with various substrates and the data obtained clearly indicate that CBEL's CBM1-1 exhibits much greater cellulose binding ability than CBM1-2. Engineering of the family 11 xylanase from Talaromyces versatilis (TvXynB), an enzyme that naturally bears a family 1 CBM, has produced two variants. The first one lacks a CBM, whereas the second contains the CBEL CBM1-1 in the place of the natural CBM1. The study of these enzymes has revealed that wild type TvXynB binds to cellulose, probably via its CBM1, and that the substitution of its CBM by oomycetal CBM1-1 does not affect its activity on this substrate. Moreover, the presence of CBEL during the hydrolysis of wheat straw actually potentiates the action of TvXynB, a result that is consistent with the hypothesis that CBM1-1 can alter cellulose surface fibres rather like some other members of CBM family 1

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Rolland, Martin. „Mise au point d'un hydrolysat enzymatique de protéines de lactosérum pour la fortification protéique d'un jus d'orange“. Thesis, National Library of Canada = Bibliothèque nationale du Canada, 1999. http://www.collectionscanada.ca/obj/s4/f2/dsk2/ftp01/MQ44951.pdf.

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Dissertationen zum Thema „Hydrolyse des protéines“

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