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Dissertationen zum Thema „Fonction génétique“
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Kusy, Sophie. „Régulation de l'expression et fonction anti-tumorale de la sémaphorine SEMA3F“. Poitiers, 2005. http://www.theses.fr/2005POIT2288.
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Notre groupe a cloné en 3p21. 3 un gène codant pour la sémaphorine SEMA3F. C'est une protéine sécrétée impliquée initialement dans la migration cellulaire. Nos objectifs étaient d'étudier la régulation de l'expression de SEMA3F et de vérifier son rôle anti-tumoral chez l'animal. Nous avons établi la carte du promoteur de SEMA3F, identifié de multiples sites d'initiation de la transcription dans un îlot CpG et isolé une région nécessaire à l'expression. La méthylation de SEMA3F et le remodelage de la chromatine interviennent dans cette régulation. Nous avons aussi déterminé le profil d'expression et les propriétés biologiques des 2 formes épissées de SEMA3F durant la maturation du système nerveux murin. Malgré des fonctions redondantes, ces isoformes subissent une régulation temporelle et régionale. Enfin, nous avons décrit l'activité anti-tumorale de SEMA3F dans le poumon de rats immunodéficients. La neuropiline 2, les intégrines et les MAPKinases semblent impliquées dans ce phénomèneOur group cloned the SEMA3F gene in the 3p21. 3 chromosomic region. It is a secreted protein initially implicated in the cellular migration. Our aims were to study the regulation of SEMA3F expression and to verify its anti-tumoral rule in the animal. We have mapped the promoter of SEMA3F, localized the transcriptional initiation sites within the CpG-island and defined the region necessary for transcriptional activation. The methylation of SEMA3F and the chromatin remodeling are implicated in this regulation. We also have studied the expression and the biological properties of the two spliced forms of SEMA3F during the maturation of the mouse brain. Although functionally redundant, these forms are characterized by a temporal and regional specific regulation. Finally, we have described the anti-tumoral activity of SEMA3F into the lungs of nude rats. The neuropilin 2, integrins and MAPKinases seem to be implicated in this effect
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Helleu, Quentin. „Nature, fonction et évolution d’un élément génétique égoïste chez Drosophila simulans“. Thesis, Université Paris-Saclay (ComUE), 2015. http://www.theses.fr/2015SACLS134.
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Les distorteurs de ségrégation méiotiques sont des éléments génétiques égoïstes qui favorisent leur propre transmission en manipulant la méiose à leur avantage. La diffusion dans les populations d’un distorteur lié au chromosome X (Sex-Ratio) provoque un excès de femelles et cela conduit à un conflit entre le chromosome X et les autres chromosomes. Ces conflits intra-génomiques sont d’importants moteurs de l’évolution des génomes. Mais, peu de choses sont connues sur la nature moléculaire et la fonction des éléments égoïstes Sex-Ratio. Le premier chapitre de cette thèse présente une synthèse actualisée sur les distorteurs de ségrégation méiotiques liés à un chromosome sexuel. Le second chapitre est consacré à l’identification et la caractérisation d’un élément distorteur du système Sex-Ratio « Paris » de Drosophila simulans, dans lequel deux éléments distorteurs liés au chromosome X provoquent ensemble la misségrégation des chromatides sœurs du chromosome Y lors de la méiose II. J’identifie à travers une cartographie génétique par recombinaison un des loci distorteur et je conduis une validation fonctionnelle de son implication dans la distorsion. Il s’agit d’un jeune gène qui évolue rapidement et appartient à une famille de gènes bien connus, impliquée dans la constitution de l’hétérochromatine. Ce gène a émergé par duplication il y a environ 15-22 millions d’années et a connu de façon indépendante de multiples duplications en cis, pseudogenizations, ou bien directement sa perte tout au long de son histoire évolutive. Cela suggère que ce gène pourrait avoir été impliquée dans de multiples conflits génétiques. Le dernier chapitre est consacré à une étude exploratoire de la diversité structurale des chromosomes Y en relation avec la distorsion de ségrégation méiotique du système « Paris ». Les résultats présentés dans ce manuscrit contribuent à augmenter les connaissances sur l’origine moléculaire des conflits génétiques et sur leur impact évolutifSegregation distorters are selfish genetic elements that promote their own transmission by subverting the meiotic process to their advantage. The spread of an X-linked distorter (Sex-Ratio) in populations results in an excess of females, which triggers a genetic conflict between the X chromosome and the rest of the genome. Such conflicts are important drivers of genome evolution, but little is known about the molecular nature and the function of the Sex Ratio selfish elements. The first chapter of this manuscript is a review of the current knowledge about X-linked segregation distorters. Then, I present my work on the « Paris » Sex Ratio system of Drosophila simulans, in which two distorter elements on the X chromosome co-operate to prevent Y chromosome sister chromatids segregation during meiosis II. I mapped a gene in one of the distorter loci and achieved the functional validation of its involvement in sex-ratio distortion. It is a young and rapidly evolving gene that belongs to a well-known gene family involved in chromatin state regulation. It emerged through duplication about 15-22 Myrs ago and has experienced multiple independant cis-duplications, loss or pseudogenization throughout its evolutionary history. This suggests that this gene could have been involved in multiple genetic conflicts. Finally, the last chapter is about an opening study of the strucural diversity of Y chromosomes in relation to « Paris » segregation distorter. These findings should help understanding the molecular basis of genetic conflicts and the evolutionary impact of heterochromatin regulation during meiosis
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Renier, Nicolas. „Développement et fonction des commissures cérébrales“. Paris 6, 2011. http://www.theses.fr/2011PA066393.
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Les moitiés droites et gauches du cerveau sont reliées entre elles par des axones dits commissuraux. Le développement de ces axones peut être affecté dans certaines maladies humaines ou modèles animaux, entraînant des déficits neurologiques. Alors qu’un corpus de connaissances important a été acquis sur les mécanismes moléculaires contrôlant le développement des commissures, peu d’études ont été réalisées sur leur fonction. Nous nous sommes inspirés d’une maladie héréditaire, « Horizontal Gaze Palsy with Progressive Scoliosis ». Les patients affectés ne possèdent pas de commissures caudales. La mutation se situe dans le gène Robo3, un récepteur nécessaire au développement des commissures. Nous avons généré un modèle murin permettant de décroiser artificiellement des commissures sélectionnées, consistant en la délétion ciblée du gène Robo3. Nous avons étudié divers systèmes physiologiques dans ce mutant en induisant la recombinaison de Robo3 dans diverses régions du cerveau contrôlant les mouvements oculomoteurs, l’audition, la respiration, la somesthésie et la locomotion. Nous avons observé dans chaque système des défauts spécifiques induits par le re-cablage des axones : paralysies, ataxie, désynchronisation des mouvements respiratoires, démarche de type kangourou… Nous avons observé que le décroisement partiel d’un système sensoriel, les vibrisses, conduit à une duplication de sa représentation corticale, chaque carte recevant les afférences provenant d’une moitié du corps. Ces études ont permis de caractériser un nouveau modèle murin d’une maladie humaine, et ont montré l’étendue et les limites de la plasticité du cerveau au cours du développement normal ou pathologique
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Ravet, Karl. „Les Ferritines chez A. Thaliana : fonction et régulation“. Montpellier 2, 2008. http://www.theses.fr/2008MON20202.
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Fe is essential for all cells because it is the cofactor of numerous proteins, however, excess free Fe is potentially deleterious for the cell. Ferritins are multimeric proteins, present in all the kingdoms of life that can store iron in a safe and bioavailable form. In mammals, ferritins are the main Fe store. They have been predicted to fulfil the same function in plants, but direct evidences are lacking. In plants, ferritin synthesis in response to iron overload is mainly regulated at the transcriptional level, whereas, in animals, it is mainly regulated at the post-transcriptional level by the aconitase dependent IRP/IRE system. The aims of my PhD project were: (i) to elucidate ferritin function in plant physiology and (ii) to decipher the signaling pathway leading to ferritin accumulation in response to iron overload. (i) To directly study ferritin function in plants, a loss-of-function approach was developed in Arabidopsis. We present evidence that ferritins do not constitute the major iron pool either in seeds for seedling development or in leaves for proper functioning of the photosynthetic apparatus. The loss of ferritins in vegetative and reproductive organs resulted in sensitivity to excess iron. Furthermore, the absence of ferritin led to a strong deregulation of expression of several metal transporter genes in the stalk, over-accumulation of iron in reproductive organs, and a decrease in fertility. Finally, I showed that in the absence of ferritin, plants had higher levels of ROS, and increased activity of enzymes involved in their detoxification. Ferritins are also involved in iron-detoxification during senescence to avoid ROS accumulation. Seeds ferritins are also involved in the protection against oxidative stress during germination and appear to take part in the integrated iron homeostasis establishment. Taken together, my work showed that Arabidopsis ferritins are essential factors that integrate iron and redox homeostasis, while they do not constitute a major iron source for development. (ii) To study ferritin regulation in A. Thaliana, the characterization of mutants in the three genes encoding aconitase permitted us to demonstrate that the IRP/IRE system does not occur in the regulation of iron metabolism in plants. Nevertheless, AtFer1 mRNA stability studies have revealed that iron treatment leads to the destabilization of the AtFer1 mRNA. We identified the presence of DST sequences, characterized as mRNA stability determinant, in the 3'-UTR of AtFer1 mRNA. Using chimeric constructs in which the AtFer1 3'-UTR or the AtFer1 3'-UTR with a mutated DST sequence were fused downstream of reporter genes, we have shown that the DST sequence in the 3'-UTR of AtFer1 is functional and sufficient for the iron-dependent mRNA degradation. Using dst1 and dst2 mutants, which are unable to destabilize transcript via DST sequences, we have shown that the DST1 and DST2 gene products, acting in trans in the DST-dependent degradation pathway, are involved in the degradation of AtFer1. Therefore, in addition to the transcriptional regulation described so far, iron is also involved in DST-dependent post-transcriptional regulation of AtFer1 expression. In conclusion, my work has shown that Arabidopsis ferritins are essential elements, which prevent iron toxicity by maintaining a proper labile iron level into the cell, and that sophisticated mechanisms, involving transcriptional and post-transcriptional regulations, permit the tight adjustment of the ferritin accumulation required for the optimal effectiveness of this system
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Larouche, André. „Étude structure-fonction des intégrases d'intégrons et de leurs sites d'attachement“. Thesis, Université Laval, 2010. http://www.theses.ulaval.ca/2010/27153/27153.pdf.
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Pronier, Elodie. „Etude de la fonction de TET2 dans l'hématopoïese normale et pathologique“. Paris 7, 2013. http://www.theses.fr/2013PA077035.
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Les hémopathies myéloïdes sont des maladies clonales de la cellule souche hématopoïétique. Récemment de nombreuses études ont démontré l'implication des facteurs épigénétiques dans l'apparition de ces maladies. En effet, le séquençage d'ADN de patients atteints de diverses hémopathies malignes a permis l'identification de mutations dans le gène TET2 (TET methylcytosïne dioxygenase 2). Cette enzyme convertit les 5-méthylcytosines en 5-hydroxyméthylcytosines (5hmC). L'impact biologique de cette nouvelle base de l'ADN ainsi que la fonction des protéines TET sont encore mal connus. Les objectifs de ma thèse ont donc consisté à déterminer la ou les fonction(s) de TET2 au cours de l'hématopoïèse humaine et son implication dans la transformation maligne. Mes travaux ont confirmé, dans les cellules de patients atteints de NMP, que la mutation de TET2 induit une diminution du taux global de 5hmC génomique. Puis nous avons montré qu'une haploinsuffisance en TET2 dans des cellules CD34+ induisait un biais de différenciation vers le lignage myéloïde aux dépens des lignages lymphoïdes et érythrocytaires. Elle influence aussi les étapes terminales des trois lignages myéloïdes. Nous avons également démontré que l'inhibition de TET2 induit la surexpression de MIF (Macrophage Migration Inhibitory Factor}, TET2 est capable de se fixer au niveau de son site d'initiation de la transcription (TSS) et d'influencer sa transcription par recrutement d'EGR-1 et de la polymerase II activée. Enfin, l'haploinsuffisance de TET2 confère un avantage sélectif aux cellules CD34+ permettant une reconstitution supérieure du système hématopoïétique de souris immunodéficientes dans un modèle de xénogreffeMyeloid malignancies are clonal disease of the hematopoietic stem cell develop following a skewed of the differentiation toward myeloid lineages associated with increased proliferation. Recently, many studies have demonstrated the involvement epigenetic factors in malignant transformation. Indeed, DNA sequencing of patients with diverse malignancies identified mutations in TET2 (TET methylcytosïne dioxygenase 2) gene. This gene encodes an enzyme that couverts 5-methylcytosines to 5-hydroxyméthylcytosines (5hmC). The biological impact of this new modification of DNA bases and the TET protein function during hematopoiesis is poorly understood. The objectives of my thesis were to determine the function(s) of TET2 in human hematopoiesis and involvement in malignant transformation. My results confirmed in the cells from MPN patients that TET2 mutation induces a decrease in the overall rate of 5hmC. Then we hâve shown that TET2 haploinsufficiency after infection of CD34+ using a specific shRNA induces differentiation skewed toward myeloid lineage. This haploinsufficiency also affects the terminal stages of myeloid three lineages. We also demonstrated that TET2 inhibition induces expression of several inflammatory cytokines such as MIF (Macrophage Migration Inhibitory Factor}. TET2 binds to it promoter regions and influence their transcription through the recruitment of EGR1 and active polymerase II. Finally, haploinsufficiency of TET2 induces a selective advantage of CD34+ cells for reconstitution of the hematopoietic System of highly immunodeficient mice. TET2 is involved in several steps of tumor transformation but these functions factor transcription remain poorly understood
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Javot, Hélène. „Analyse physiologique et génétique de la fonction des aquaporines dans la racine d'Arabidopsis Thaliana“. Paris 11, 2002. http://www.theses.fr/2002PA112257.
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Les aquaporines sont des protéines capables de faciliter le transport de l'eau au travers des membranes cellulaires. Elles appartiennent à une grande famille multigénique comprenant 35 membres chez Arabidopsis thaliana. Une partie des travaux de cette thèse vise à évaluer l'importance, au niveau racinaire, de la régulation des aquaporines par le pH cytoplasmique, et en particulier en situation de stress. Des mesures combinées du pH cytoplasmique par RMN et du transport racinaire d'eau à l'aide d'une chambre à pression, ont montré qu'une acidification du cytoplasme est accompagnée d'une diminution forte, rapide et réversible de la conductivité hydrique de racines excisées d'Arabidopsis. Les mêmes effets sont observés, que l'acidification soit induite à l'aide d'un acide faible diffusible, par traitement des cellules à l'aide de poisons respiratoires, ou par imposition d'une anoxie. Le second volet de ce travail concerne l'analyse de 6 lignées mutantes d'Arabidopsis inactivées dans un gène unique d'aquaporine de la sous-famille PIP, par insertion d'ADN-T d'Agrobacterium tumefaciens. Aucune altération de la croissance ou du développement des lignées mutantes n'a été observée. L'utilisation du gène rapporteur GUS a permis d'établir le patron d'expression des gènes PIP2;2 et PIP2;3 au niveau de la racine. Chez deux lignées mutantes pour PIP2;2, la perméabilité hydrique est diminuée de 25 % au niveau des cellules corticales, et de 14 % au niveau des appareils racinaires. L'ensemble de nos résultats suggèrent que PIP2;2 pourrait être impliquée dans le maintien de flux intenses d'eau en réponse à de faibles gradients osmotiques dans la racine. L'identification de la fonction d'une isoforme spécifique d'aquaporine écarte ainsi l'hypothèse d'une redondance fonctionnelle totale au sein de la famille des aquaporines. En conclusion, ces travaux apportent des données originales sur les fonctions générales et spécifiques des aquaporines dans les racines de plantesAquaporins are water channel proteins which facilitate the diffusion of water across cell membranes. These proteins define a large multigenic family with 35 members in Arahidopsis thaliana. In a first part of this work, we addressed the relevance of aquaporin regulation by cytoplasmic pH at the root level, and especially in stress conditions. Cytoplasmic pH and root water transport were followed using NMR and pressure chamber techniques, respectively. Results indicate that a cytoplasmic acidification was associated to a strong, rapid and reversible diminution of the hydraulic conductivity of Arabidopsis excised root systems. A same behavior was observed, whether acidification was induced by means of weak acid diffusion, cell treatment with respiratory drugs, or anoxia. A second aspect of this work concerns the analysis of 6 aquaporin single knockout mutants in Arabidopsis. These mutants concern the PIP sub-family and were obtained after insertion of the T-DNA from Agrobacterium tumefaciens. No growth or developmental phenotype could be observed for any of the mutant plants in any of the conditions investigated. The expression pattern of the PIP2;2 et PIP2;3 genes in roots was determined by GUS reporter gene analyses. In two PIP2;2 mutant lines, the hydraulic conductivity of root cortex cells and whole root systems was diminished by 25 % and 14 %, respectively. Altogether, our results point to a predominant function for PIP2;2 in maintaining efficient water uptake in response to small osmotic gradients within the root. The identification of a function for a specific aquaporin isoform discards the idea of a total functional redundancy within the aquaporin family. In conclusion, our work brings novel insights into general and specific aspects of aquaporin function in plant roots
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Populaire, Céline. „Etude des déterminants génétiques du diabète de type 2 de la fonction bêta pancréatique : combinaison des approches de la génétique inverse dans deux populations, japonaise et française“. Lille 2, 2004. http://www.theses.fr/2004LIL2S031.
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Le diabète de type 2 (DT2) est une maladie multifactorielle, influencée par des facteurs génétiques et environnementaux, dont la physiopathologie associe plusieurs défauts de l'insulino-sécrétion et de l'action de l'insuline dans les tissus cibles. Afin d'identifier certains des déterminants génétiques du DT2, nous avons utilisé 2 types d'approches: - suite à une exploration systématique du génome de fratries diabétiques japonaises, l'étude de 2 gènes candidats positionnels, APM1 au locus 3q26-q28 et CX36 au locus 15q13-q21 ; - l'analyse détaillée des séquences et variants géniques dans différents groupes de sujets diabétiques français des gènes KCNJ11 codant la sous-unité Kir6. 2 du canal KATP et PDX-1, spécifiques de la cellule b pancréatique. Ces études nous ont permis d'identifier et de valider à la fois des mutations impliquées dans une forme de diabète néonatal permanent, et des variants fréquents de susceptibilité au DT2 dans un contexte polygéniqueThe pathogenesis of type 2 diabetes (T2D) is complex, with two distinct mechanisms: insulin resistance and insulin deficiency. These abnormalities are due to genetic and environmental factors. To allow a better understanding of T2D aetiology, we have undertaken the identification of genetic variants implied in the development of the disease, using 2 approaches: - a genome wide scan for T2D in diabetic Japanese sib-pairs revealed 2 linked regions at loci 3q26-q28 and 15q13-q21 where are located respectively APM1 and CX36 genes - genetic studies of KCNJ11, encoding the sub-unit of the channel Kir6. 2, and PDX-1, b cell pancreatic specific transcription factor were investigated in different French diabetic groups. We found activating mutations responsible for a neonatal form of diabetes and frequent variants implicated in mechanisms leading to an ordinary T2D
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Compe, Emmanuel. „Etude de la fonction du produit du gène Spot 14“. Aix-Marseille 2, 2001. http://theses.univ-amu.fr.lama.univ-amu.fr/2001AIX20673.pdf.
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Lefèvre, Anick. „De la fonction des cellules de Leydig“. Lyon 1, 1992. http://www.theses.fr/1992LYO10008.
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Afin d'etudier la fonction des cellules de leydig et sa regulation nous avons construit, par hybridation intraspecifique et intra-tissulaire, une lignee exprimant la steroidogenese dans son entier. Nous avons au prealable mis au point une technique de purification des cellules de leydig etabli des cultures primaires de ces cellules et defini les parametres permettant l'expression de leur fonction in vitro valide un nouveau mode de fusion par champ electrique. La lignee k9 obtenue exprime une steroidogenese complete elle est a ce jour la seule capable de transcrire le gene codant pour le cytochrome p450 c17. Par ailleurs l'analyse du croisement cellules de leydig lignee surrenalienne y1 a montre que la steroidogenese dans les cellules non specialisees est sous le controle de facteurs negatifs qui agissent principalement en reprimant les recepteurs de l'hormone clef. Le facteur regulant negativement les recepteurs a acth est porte par le chromosome 11 de souris
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Ganem, Guila. „Commensalisme, fonction corticosurrénalienne et évolution chromosomique chez la souris domestique“. Montpellier 2, 1991. http://www.theses.fr/1991MON20053.
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Ce travail s'integre dans une problematique generale cherchant a determiner quels aspects de l'environnement de la souris domestique peuvent participer a l'etablissement d'une divergence chromosomique (par suite de fixation de fusions robertsoniennes) dans certaines de ses populations. La souris domestique occupe deux types d'habitat exterieur et commensal. Le phenomene robertsonien est correle avec l'habitat commensal. Ici le commensalisme est considere dans ses aspects sociaux resultant des fortes densites et de la reproduction continue dans ce type d'habitat. La sensibilite des individus de differentes populations a un stress psychogenique est mesuree a l'aide d'un indice physiologique: le taux de corticosterone plasmatique. Differents stress sont experimentes: la capture, l'exposition a un environnement nouveau et la rencontre d'un congenere inconnu. La corticosteronemie basale en periode diurne permet d'evaluer la reactivite quotidienne des individus. Ces differents indices permettent de differencier au sein de chaque population etudiee les femelles plus emotives que les males, et parmi les differentes populations de distinguer celles qui proviennent d'un habitat commensal de celles provenant de l'habitat exterieur. En habitat commensal les individus montrent une faible sensibilite vis-a-vis d'un stress psychogenique et une forte reactivite quotidienne, le contraire est observe chez les souris exterieures. Les resultats sont interpretes en terme d'adaptation. Les souris robertsoniennes semblent montrer une strategie mixte qui pourrait etre a l'origine d'un avantage adaptatif. Un nouveau modele sur la mise en place du phenomene est propose
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Manfruelli, Pascal. „Analyse génétique de lethal(2)giant larvae, un gène suppresseur de tumeur chez Drosophila melanogaster : fonction au cours du développement et interaction génétique“. Aix-Marseille 2, 1995. http://www.theses.fr/1995AIX22078.
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L'inactivation du gene suppresseur de tumeur lethal(2)giant larvae (l(2)gl) entraine la neoplasie maligne des neuroblastes des centres optiques du cerveau larvaire et la neoplasie benigne des cellules des disques imaginaux. La localisation cellulaire de la proteine, p127, et sa caracterisation biochimique ont indique qu'elle participe au reseau du cytosquelette membranaire. Dans une premiere partie de ce travail, nous avons decrit l'analyse genetique et phenotypique d'une mutation thermosensible de l(2)gl(l(2)gl#t#s#3) qui se comporte comme une mutation hypomorphe a des temperatures restrictives tout en conservant un potentiel tumoral. L'absence d'activite pendant l'embryogenese empeche la fermeture dorsale et l'involution de la tete et entraine aussi une hypertrophie de l'intestin moyen de l'embryon. Ces phenotypes sont accompagnes par un arret du changement de forme des cellules qui a normalement lieu dans l'epiderme lateral et dans les cellules de l'intestin moyen. L'activite de l(2)gl est aussi requise au cours de l'ovogenese, et la perte de fonction du gene cause la desorganisation des chambres ovariennes et affecte la morphologie des cellules folliculaires qui ont tendance a s'internaliser dans les chambres ovariennes. Ces resultats correles avec le phenotype tumoral des cellules epitheliales des disques imaginaux suggere fortement que p127 est impliquee in vivo dans le controle de la forme des cellules de differents types d'epithelium au cours du developpement. Dans la deuxieme partie de ce travail, nous avons cherche a isoler et a caracteriser des mutations qui modifieraient, en le supprimant ou en le renforcant, le phenotype tumoral cree par la perte de fonction du gene l(2)gl. A l'aide de l'allele thermosensible l(2)gl#t#s#3 nous avons pu isoler 2 mutations independantes qui suppriment de facon dominante le phenotype letal de larves l(2)gl#t#s#3/l(2)gl#t#s#3. Un autre crible base sur la suppression de la sterilite des males l(2)gl#t#s#3 hemizygotes a 27 a permis d'isoler une troisieme mutation dans un autre gene, qui est en cours de caracterisation. Nos resultats demontrent une interaction genetique entre le gene l(2)gl et le gene zipper qui code pour la gene lourde de la myosine ii non musculaire et confirment que l'association de ces deux proteines mise en evidence in vitro par strand et al. , (1994b) est aussi fonctionnelle in vivo
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Jawhari, Anass. „Etude structure-fonction du facteur de transcription/réparation TFIIH“. Université Louis Pasteur (Strasbourg) (1971-2008), 2003. https://publication-theses.unistra.fr/public/theses_doctorat/2003/JAWHARI_Anass_2003.pdf.
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Milligan, Laura. „Régulation et fonction d'un ARN non traduit transcrit d'un gène soumis à empreinte génomique parentale : l'ARN H19“. Montpellier 2, 2000. http://www.theses.fr/2000MON20186.
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L'arn h19, bien qu'associe aux polysomes, n'est pas traduit. Sa fonction n'est pas connue. Nous faisons ici la proposition que la stabilisation de l'arn h19 qui se produit au moment de la differenciation de la cellule musculaire de souris est l'un des evenements majeurs de l'expression du gene. Cette conclusion est basee sur l'observation que l'inhibition de la synthese proteique induit une importante destabilisation de l'arn h19 dans des cellules myoblastiques en train de proliferer, mais pas dans des cellules differenciees. Cette conclusion est egalement basee sur des experiences de run-on qui ont montre que la vitesse de transcription de l'arn h19 reste constante pendant la differenciation de la cellule musculaire. Des experiences de transfection du gene h19 dans des cellules h19-, derivees de souris knock out pour h19, nous amenent a envisager l'hypothese que le produit de ce gene, l'arn h19, pourrait s'opposer a la proliferation cellulaire en agissant comme un regulateur negatif de la traduction. En effet, outre le fait que l'arn h19 est associe aux polysomes, nous constatons que l'expression d'un gene rapporteur luciferase transfecte dans des myoblastes qui expriment l'arn h19 est reduite par rapport a celle constatee dans des myoblastes h19-. Nous avons egalement note que la resistance a l'infection virale par les virus emc, mengo et vsv, qui procedent par une inhibition de la synthese proteique coiffe-dependante, est plus elevee lorsqu'il s'agit de myoblastes h19- que lorsqu'il s'agit de myoblastes h19+. Enfin nous decrivons une forme d'association de l'arn h19 avec l'arn ribosomique 18s.
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Blanvillain, Robert. „Etude d'un marqueur génétique du suspenseur chez Arabidopsis thaliana et application d'un système d'activation de gène à la recherche de sa fonction“. Perpignan, 2000. http://www.theses.fr/2000PERP0433.
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La lignée 276S présente un marqueur moléculaire issu d'une stratégie de piège à promoteur (insertion de l'ORF GUS via un ADN-T). Dans cette lignée, l'activité GUS est restreinte au suspenseur depuis le stade préglobulaire jusqu'à sa dégénérescence au stade torpille. Un ARNm du gène étiqueté par l'ADN-T est détecté dans des extraits de siliques. L'étude de sa séquence suggère l'existence d'un peptide de 25aa : SUP25, qui s'aligne avec les peptides de la famille HOK/GEF impliqués dans une voie de mort bactérienne programmée lors de la stratégie du plasmide egoi͏̈ste. L'expression transitoire du gène SUP25 dans les cellules d'oignon tout comme l'application du peptide SUP25 sur protoplastes d'Arabidopsis révèle une fonction toxique du gène. Une méthode de détection de la fragmentation d'ADN permet d'envisager l'intervention du peptide dans une voie de MCP. SUP25 est donc probablement impliqué dans la dégénérescence du suspenseur. Afin de caractériser la fonction du gene in planta, et pour conduire l'expression de gènes au cours de l'embryogenèse, nous avons utilisé le sytème d'activation de gènes pOp-LhG4 élaboré par Moore et al. (1998). Le système repose sur 2 composants (un facteur de transcription LhG4 et sa cible pOp) séparés dans deux plantes distinctes (respectivement activatrice et rapporteur. Le gène raporteur est transactivé en F1 dans le croisement entre 2 parents selon le profil de l'activateur. 3lignés activatrices ont été générées en conduisant l'espression du LhG4 dans différents profils de promoteurs (p35S, paBI3 et pSUP25) ainsi que 4 rapporteurs dont les gènes sont sous contrôle du promoteur pOp (GUS, GFP, SUP25 et AntiSUP25). Le système est fonctionnel dans A. Thaliana et fiable à partir dsu stade coeur. En revanche, avant le stade coeur le système serait dépendant du phénomène d'empreinte parentale. Pour la GFP, nous avons généré un nouveau variant : tevL-EGFPer pour lequel le seuil de détection est 6 fois supérieure à celui de tevL-EGFP et 28 fois supérieure à celui detevL-mGFP5erThe 276S line displays a molecular marker from a promoter trap strategy (insertion of a T-DNA containing a promoterless GUS gene). In this line, GUS activity is restricted to the suspensor from the pre-globular stage to the torpedo stage when the suspensor degenerates. A trancript corresponding to the tagged gene is detected in silique extracts. Its sequence suggests the existence of a 25aa peptide :SUP25, which has similarities with HOK/GEF peptides involved in a bacterial PCD pathway
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Scherrer, Grégory. „Etude de la fonction du récepteur aux opioïdes delta par modification génétique chez la souris“. Université Louis Pasteur (Strasbourg) (1971-2008), 2005. http://www.theses.fr/2005STR13151.
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Le système opioïde est un système neuromodulateur composé des récepteurs mu, delta et kappa et de leurs ligands peptidiques endogènes. Il régule de très nombreuses fonctions centrales et périphériques, notamment le contrôle de la douleur et les réponses émotionnelles. L’objectif de ce travail était de contribuer à la compréhension de la fonction du récepteur aux opioïdes delta. La stratégie reposait sur l’établissement et l’étude de souris génétiquement modifiées. Dans la première partie de ce travail, nous avons analysé le comportement de souris déficientes en récepteur delta dans des modèles de douleur, d’anxiété, de dépression et de mémoire. Nous avons pu définir quelle est l’implication du récepteur delta dans le contrôle de la douleur aiguë thermique et mettre en évidence sa participation dans les processus de mémorisation contextuelle. Dans la seconde partie de ce travail, nous avons établi une lignée de souris floxées pour le gène codant pour le récepteur delta (dor). Ces animaux expriment des récepteurs delta fonctionnels à un taux physiologique, et permettront, par expression régio-spécifique de la recombinase Cre, d’invalider le gène dor puis d’étudier la fonction du récepteur dans les différentes sous-populations neuronales où il est exprimé. Enfin, dans la troisième partie de ce travail, nous avons généré et analysé une lignée de souris exprimant un récepteur delta fusionné à la protéine fluorescente verte GFP. La visualisation directe de delta sur des sections de tissu a révélé sa distribution et sa localisation subcellulaire, et permis la caractérisation des neurones dans lesquels il est exprimé. Le trafic intracellulaire du récepteur a également été étudié, à la fois sur des coupes de tissu et en temps réel dans des cultures primaires de neurones. Ceci a permis d’évaluer in vivo l’incidence des propriétés dynamiques et de la répartition subcellulaire du récepteur sur son activitéThe opioid system is a neuromodulator system composed of mu, delta and kappa opioid receptors, and their endogenous peptidic ligands. The opioid system regulates numerous central and peripheral functions such as pain control and emotional responses. The goal of this work was to better understand delta opioid receptor function. The strategy relied on the study of mutant mice. In the first part of this work, we analyzed the behaviour of mice deficient for delta opioid receptors in several models of pain, anxiety, depression and memory. We managed both to clarify the involvement of delta opioid receptors in the control of acute thermal pain, and to reveal its participation to mechanisms underlying processing of contextual memory. In the second part of this work, we have established a mouse line harbouring a floxed delta opioid receptor gene. These animals, which express functional delta opioid receptors at physiological levels, will be useful to study the function of delta opioid receptors expressed in different brain structures through local gene invalidation gene by region-specific expression of the Cre recombinase. Finally, in the third part of this work, we have both generated and analyzed a mouse line expressing delta opioid receptors fused to the green fluorescent protein GFP. Direct visualization of delta on brain slices revealed its distribution and subcellular localization and allowed characterization of delta expressing neurons. Receptor trafficking was also studied, on tissue sections as well as in real-time on primary cultures, to reveal relationship existing between dynamic properties and subcellular localization of delta opioid receptors and their activity in vivo
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Villard, Elise. „Impact de facteurs génétiques et métaboliques sur la fonction et la structure des HDL“. Paris 6, 2013. http://www.theses.fr/2013PA066284.
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A partir de l’observation que des patients déficients pour la CETP ont des taux très élevés de HDL-C, des molécules pharmacologiques inhibitrices de la CETP ont été développées afin de réduire les MCV. Cependant, les évaluations cliniques de phase III concernant deux de ces inhibiteurs CETP (Torcetrapib et Dalcetrapib) n’ont pas démontré l’efficacité de ces traitements sur la réduction de l’incidence des MCV. Pourtant ces molécules augmentent les taux de HDL-C et améliorent de façon significative la capacité des particules HDL à assurer l’efflux cellulaire de cholestérol du macrophage, en favorisant la fonctionnalité des HDL de grande taille ou celle de taille réduite. Ces observations soulignent que la biologie de la capacité d’efflux des particules HDL est un mécanisme complexe et multifactoriel. L’objectif de mon travail a donc été d’identifier l’impact de facteurs génétiques, cliniques et métaboliques sur la structure et la capacité d’efflux des particules HDL. De plus, dans le contexte où l’inhibition de la CETP s’avère être inefficace pour réduire les MCV, il est important de considérer que la CETP semble assurer des fonctions athéroprotectrices, qu’il est nécessaire d’identifier et de préserver. En effet les études d’associations entre les taux circulants de CETP et le risque de MCV conduisent à des conclusions contradictoires indiquant que la CETP exerce des effets pro et anti-athérogènes et que selon le contexte métabolique des individus, les actions de la CETP s’expriment davantage vers un effet global bénéfique ou délétère. L’objectif de mon travail a donc également été d’identifier dans quelles situations l’activité CETP s’avère particulièrement délétère afin de proposer des stratégies thérapeutiques adaptées pour réduire les MCV. Mes travaux de recherche contribuent à une meilleure compréhension de l’impact de facteurs métaboliques et génétiques sur la fonction d’efflux des particules HDL et suggèrent qu’une thérapie visant à améliorer la fonctionnalité d’efflux des particules HDL pourrait présenter des effets différents selon le sexe, le contexte métabolique et les déterminants génétiques des sujets. De plus, dans le contexte de l’échec des inhibiteurs de la CETP, j’ai montré que la CETP exerce des effets bénéfiques en améliorant la capacité d’efflux des plasmas sur le macrophage humain et en réduisant la réponse inflammatoire postprandialeThe high HDL-C plasma levels observed in CETP-deficient subjects have afforded a rational to the development of pharmacological CETP inhibitors to increase HDL-C and to reduce cardiovascular diseases. However, clinical evaluation of 2 CETP inhibitors (Torcetrapib and Dalcetrapib) revealed that those treatments were surprisingly not able to reduce cardiovascular diseases. Indeed, these molecules induce significant elevation of plasma HDL-C levels and improve HDL efflux capacity, improving large HDL or small HDL particle function. These observations highlight the complexity of HDL function biology, which is modulated by many factors. Thus, my PhD work focused on the modulation of HDL structure and efflux capacity by clinical, genetic and metabolic factors. Furthermore, in the current context of CETP inhibitors failure, it is important to keep in mind the potent atheroprotective functions of CETP; those may be preserved to manage cardiovascular diseases. Indeed, this concept is supported by the contradictory conclusions reached by association studies between CETP and cardiovascular risk. Hence, CETP may have pro and anti-atherogenic functions, which result in either a global benefic or deleterious effect, according to individual metabolic context. Consequently, my PhD project aims to identify the extent of CETP atherogenicity in order to propose a relevant therapeutic strategy to prevent its deleterious effects and broadlier CAD development. My PhD research work affords a better understanding of HDL efflux capacity modulation by genetic and metabolic factors, highlighting that HDL-based therapy could have different effect according to metabolic and genetic context of treated patients. Moreover, as a putative explanation of CETP inhibitor failure, I demonstrated that CETP acts as an anti-atherogenic protein, as it improves plasma efflux capacity from human macrophage and modulates the postprandial inflammatory response
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Le, Gourrierec José. „Fonction et mode d'action moléculaire du facteur de transcription GT-1 chez Arabidopsis thaliana“. Amiens, 2000. http://www.theses.fr/2000AMIE0107.
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Bonello, Jean-François. „La famille multigénique Esr : expression et fonction dans l'albumen de maïs“. Lyon, École normale supérieure (sciences), 2000. http://www.theses.fr/2000ENSL0162.
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Zaidman-Rémy, Anna. „Analyse génétique de la fonction des peptidoglycan recognition proteins dans la réponse immunitaire de la drosophile“. Paris 7, 2007. http://www.theses.fr/2007PA077216.
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L'immunité innée est un mécanisme de défense essentiel et très conservé. Chez la drosophile, la réponse immunitaire inclut la synthèse de peptides antimicrobiens contrôlée par deux voies de signalisation en réponse aux infections par des bactéries à Gram-positif (voie Toll) ou à Grain-négatif (voie Imd). Leur activation repose sur la reconnaissance du peptidoglycane (PG) de l'enveloppe des bactéries par une famille de protéines, les Peptidoglycan Récognition Proteins (PGRPs). Parmi ces PGRPs, certains possèdent une activité enzymatique de dégradation du PG. Des approches biochimiques et fonctionnelles in vivo nous ont permis de déterminer les rôles de deux de ces PGRPs dits catalytiques. PGRP-LB est une protéine sécrétée qui dégrade spécifiquement le PG des bactéries à Gram-négatif et lui fait perdre sa capacité immuno-stimulante. PGRP-LB diminue ainsi le niveau d'activation de la voie Imd en dégradant son éliciteur : le PG. La régulation de l'expression de PGRP-LB par cette même voie crée une boucle de rétroaction négative qui ajuste la réponse immunitaire à la sévérité de l'infection. Nous montrons aussi un rôle de PGRP-LB dans le contrôle de la réponse immunitaire intestinale et la tolérance aux commensaux. PGRP-SB1 possède quant à elle une activité bactéricide in vivo requise dans la défense contre certains germes bactériens. Cette enzyme est exprimée très fortement via la voie Imd pendant l'infection, et est sécrétée dans l'hémolymphe où elle participe à l'élimination des bactéries. Nos données soulignent le rôle central des PGRPs de drosophile dans la reconnaissance des agents infectieux, la modulation de la réponse immunitaire et l'élimination des bactériesIn Drosophila, two pathways regulate the expression of antimicrobial peptides in response to bacterial infection. The activation of these pathways relies on the detection of the peptidoglycan (PGN) of the bacterial cell wall by a conserved family of proteins, the Peptidoglycan Recognition Proteins (PGRPs). The receptors PGRP-SA and SD function upstream of the Toll pathway in the sensing of PGN from gram-positive bacteria while PGRP-LC and LE activate the Imd pathway upon recognition of PGN from gram-negative bacteria. In addition to these recognition PGRPs that can bind and recognize PGN, a second class of PGRPs named catalytic PGRPs can degrade PGN. A combination of biochemical and genetic approaches allowed us to determine two important functions for catalytic PGRPs. First, we shown that PGRP-LB is a secreted protein regulated by the Imd pathway, which specifically degrades gram-negative bacterial PGN into non-immunostimulatory fragments. We demonstrated that the regulation of PGRP-LB by the Imd pathway provides a negative feedback regulation to tightly adjust immune activation to infections. We also revealed a role of PGRP-LB in the control of the gut immune response and the tolerance to commensals. Second, we demonstrated in vivo an essential bactericidal function for the enzyme PGRP-SB1, which is strongly induced by the Imd pathway after an infection and is secreted into the hemolymph, where it participates in the elimination of bacteria. Collectively, our work indicates that PGRPs are essential components of the Drosophila host defence that act not only in the sensing of microbes but also as regulators and effectors of the antibacterial response
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Chaoui, Asma. „Bases moléculaires et cellulaires du syndrome de Waardenburg : de la génétique à la fonction de SOX10“. Thesis, Paris Est, 2013. http://www.theses.fr/2013PEST0103.
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Afrache, Hassnae. „Prédiction de la fonction des butyrophilines par l'étude de leur évolution et de leur variabilité génétique“. Thesis, Aix-Marseille, 2014. http://www.theses.fr/2014AIXM5032.
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Dans le cadre de cette thèse nous nous sommes intéressés à l'étude de l'évolution et de la variabilité génétique de la famille des butyrophilines (BTN), des récepteurs de la superfamille des immunoglobulines impliqués dans la régulation de la réponse immunitaire. Par une étude phylogénétique approfondie nous avons caractérisé chez les mammifères 14 groupes phylogénétiques résultant d'une série de duplications à partir de huit gènes ancestraux à la base des thériens. Par la suite, nous avons étudié l'évolution des BTN de la région CMH chez les primates et leur variabilité génétique dans les populations humaines par une analyse minutieuse des données de séquençage générées du projet 1000 Genomes pour plus de 1600 individus à travers le monde. Nous avons montré que l'évolution du gène BTNL2 est marquée par une pression de sélection positive diversifiante chez les mammifères qui est accompagnée chez les hominoïdes d'un niveau de polymorphisme élevé induisant la formation de variants tronqués de BTNL2. Chez l'homme, quatre lignages d'allèles ont été identifiés. Ils ont été maintenus à des fréquences intermédiaires par une forte sélection balancée. D'autre part, l'analyse phylogénétique détaillée du groupe BTN3 (BTN3A1, 3A2 et 3A3) a montré la présence d'une évolution concertée, caractérisée par une homogénéisation forte et récurrente de la région codant pour le peptide signale et le domaine IgV chez les hominoïdes, au cours de laquelle les séquences de 3A1 et 3A3 sont remplacées par la séquence de 3A2. Chez l'homme, ces gènes sont polymorphismes important avec plus de 46 allèles chacun, mais avec la présence d'une homogénéisation extrême des séquences du domaine IgVIn this thesis we were interested in studying the evolution and the genetic variability of the butyrophilin family (BTN), a family of immune receptors belonging to the immunoglobulin superfamily implicated in the regulation of immune response. Through a thorough phylogenetic study of the family we characterized 14 phylogenetic groups in mammals resulting from a series of duplications from eight ancestral genes at the base of therian. Thereafter, we studied the evolution of the BTN of the MHC region and their genetic variability in human populations by a careful analysis of sequencing data generated by the consortium 1000 Genomes for more than 1,600 individuals representing 26 populations worldwide. We have shown that the evolution of BTNL2 gene is marked by a positive diversifying selection in placental mammals. This selection pressure is accompanied in hominoids of a high level of polymorphism inducing the formation of truncated BTNL2 variants. In humans this high level of polymorphism results in the presence of four ancient allele lineages that are maintained at intermediate frequencies by a strong balancing selection. On the other hand, a detailed phylogenetic analysis of BTN3 group (BTN3A1, 3A2 and 3A3) showed that these genes evolve in hominoids in a concerted manner characterized by a strong and recurrent homogenization of the regions encoding for the peptide signal and the IgV domain in which the 3A1 and 3A3 sequences are replaced by the 3A2 sequence. In humans these genes are polymorphic with over 46 alleles each, but with the presence of extreme homogenization of IgV domain sequences
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Lavoie, Elyse. „Étude de la fonction cellulaire de SYP1 chez Saccharomyces cerevisiae“. Thesis, Université Laval, 2006. http://www.theses.ulaval.ca/2006/23617/23617.pdf.
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L’organisation du cytosquelette d’actine chez Saccharomyces cerevisiae nécessite plusieurs protéines
dont la profiline, impliquée dans la polymérisation des filaments d’actine. Les cellules pfy1Δ
présentent un phénotype anormal; les granules corticaux sont dépolarisés et il y a absence de
câbles d’actine visibles. Le gène SYP1 a été identifié en tant que suppresseur de la souche
pfy1Δ. Nous avons étudié SYP1 dans le but de lui attribuer une fonction cellulaire. La
surexpression de SYP1 dans les souches bni1Δ, cdc10Δ, chs5Δ, end3Δ et sla2Δ provoque un
retard important de la croissance tandis qu’elle corrige le défaut de bourgeonnement de la
souche arf3Δ ainsi que le défaut d’endocytose des souches ede1Δ, sla1Δ et sac6Δ. La localisation
cellulaire dans des souches mutantes révèle que Syp1p est délocalisée dans les souches bni1Δ,
cdc10Δ, cdc12-6, chs1Δ et cla4Δ. Ces résultats nous permettent de conclure que Syp1p joue un
rôle dans l’organisation du cytosquelette d’actine ainsi que dans l’endocytose.
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Bouhali, Kamal. „Rôle des gènes Dlx5 et Dlx6 dans la fonction ovarienne : un nouveau modèle d'Insuffisance Ovarienne Prématurée“. Paris 6, 2011. http://www.theses.fr/2011PA066236.
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Au cours de mon travail de thèse, je me suis intéressé à l’implication des gènes Dlx5 et Dlx6 dans la fonction ovarienne. J’ai démontré l’expression de ces gènes par les sites de stéroïdogenèse ovarienne (granulosa et thèque interne). J’ai montré que l’haploinsuffisance de Dlx5 et Dlx6 chez la souris est associée à une hypofertilité femelle caractérisée par une réduction de la taille des portées et de la durée de la vie fertile. L’analyse histologique des ovaires de ces souris m’a permis de montrer une déplétion rapide des follicules aboutissant à un phénotype réminiscent de certaines formes d’Insuffisance Ovarienne Prématurée (IOP). De plus, j’ai montré que, dans les cellules de granulosa, il existe une régulation réciproque entre Dlx5, Dlx6 et Foxl2 ; un facteur clé dans la différenciation, le maintien de l’identité et de la fonction ovarienne. Ainsi, chez la souris, la réduction allélique de Dlx5/6 conduit à une surexpression de Foxl2 au niveau des follicules matures pouvant être responsable du phénotype observé. Compte tenu de l’association entre Foxl2 et l’IOP, j’ai ensuite exploré la possible implication de Dlx5/6 dans des formes familiales d’IOP. Par analyse de clonage positionnel nous avons mis en évidence une liaison génétique entre le locus 7q21. 3 (contenant les gènes DLX5 et DLX6) dans une large famille d’IOP. En conclusion, les résultats de ma thèse ont permis de décrire un nouveau rôle des gènes Dlx5 et Dlx6 dans la fonction ovarienne. Via leur interaction avec Foxl2, ces gènes pourraient participer au maintien de l’homéostasie au cours de la maturation folliculaire. De plus, mes résultats apportent une nouvelle cible génétique pour l’IOP
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Boisvert, Marie-Ève. „Les courts ARN chez C. elegans : spécificité et fonction des protéines argonautes“. Thesis, Université Laval, 2007. http://www.theses.ulaval.ca/2007/24611/24611.pdf.
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Chez C. elegans, les caractéristiques moléculaires des différentes voies des courts ARN divergent. Dans la voie du RNAi, une molécule d’ARN double-brin linéaire mène à la production de siARN, initiant la dégradation de l’ARNm. Quant aux microARN, le précurseur du microARN présente une structure « épingle à cheveux » et le microARN mature induit un blocage de la traduction de cet ARNm. Ces deux voies requièrent leurs protéines Argonautes spécifiques. Nous avons conçu une molécule d’ARNdb linéaire contenant à la fois une séquence d’un microARN et une séquence d’un siARN, et suggérons que la spécificité des Argonautes n’est pas déterminée par la molécule de départ. Nous tentons aussi de comprendre le rôle des Argonautes ALG-1 et ALG-2. Une immunoprécipitation et une analyse des facteurs protéiques et ribonucléiques associés ont été effectués. Cette expérience pourrait aussi s’avérer un outil simple permettant l’identification de nouvelles cibles potentielles des microARN.The molecular characteristics of the RNAi and microRNA pathways are different. In the RNAi pathway, fully base-paired dsRNA molecules trigger the production of small interfering RNAs (siRNAs), which lead to the degradation of the complementary targeted mRNA. On the other hand, the stem-looped miRNA precursor is processed in mature miRNA, which then imperfectly interacts with the mRNA target, leading to the blocking of its translation. In the worm C. elegans, each of the RNAi and miRNA pathways needs its specific Argonautes proteins. RNAi requires RDE-1, while ALG-1 and ALG-2 act in the miRNA pathway. The restriction of siRNAs and miRNAs to specific Argonaute proteins might reflect the recognition of the trigger by specific factors targeting it to the correct Argonaute protein. To better understand the importance of the trigger in the selection of the adequate Argonaute and pathway, we designed a dsRNA trigger containing both miRNA and siRNA sequences. This chimeric molecule can rescue successfully the loss of function of the miRNA let-7, and can also initiate the gfp gene silencing by RNAi. We demonstrated that RDE-1 and the dsRNA-binding protein RDE-4 are essential for RNAi induced with our trigger, but are not involved in the let-7 function of the chimera molecule. On the other hand, we showed that ALG-2 is strictly required for the miRNA function, but not for the RNAi function. Interestingly, we also found that the let-7 miRNA processed from our molecule has a limited lifetime, while the RNAi response, initiated from the same dsRNA, is maintained for a longer period. We suggest that the specificity of the Argonautes and thus the choice of the small RNA pathway is not determined by the type of RNA trigger, but rather by their respective molecular response. Furthermore, we also tried to understand the roles of ALG-1 and ALG-2. An immunoprecipitation of these proteins and an analysis of the protein and RNA interactors were carried out.
Inscrite au Tableau d'honneur de la Faculté des études supérieures
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Coiffier, Delphine [Marie Claude]. „Mise en évidence d'une fonction et d'une cible commune des gènes Hox chez Drosophila melanogaster“. Aix-Marseille 2, 2007. http://theses.univ-amu.fr.lama.univ-amu.fr/2007AIX22027.pdf.
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Les gènes Hox codent des facteurs de transcription à homéodomaine conservés, largement étudiés au niveau de leurs fonctions spécialisées: la détermination de la morphologie des structures le long de l’axe antéro-postérieur. Le fait qu’ils soient organisés en complexes à travers les espèces suggère qu’ils sont issus d’un ancêtre commun qui s’est dupliqué et a divergé pour acquérir de nouvelles fonctions. Leur origine commune implique que ces gènes pourraient partager une fonction commune et par conséquent une cible moléculaire commune. Au cours de ma thèse j’ai ré-examiné une fonction potentiellement commune des gènes Hox chez la drosophile: la répression de la formation de la tête dans le tronc. Par une approche combinant génétique et biologie moléculaire réalisée chez la drosophile, j’ai démontré que les gènes Hox Dfd, Scr, Antp, Ubx, abdA et AbdB sont chacun capables de réprimer le développement de la tête dans le tronc en régulant l’expression d’une cible commune, le gène optix, spécifique de la tête. L’analyse de l’implication des partenaires des Hox dans cette activité a démontré une coopération entre les Hox et teashirt et la nécessité de la présence de leurs cofacteurs universels Extradenticle et Homothorax, pour réprimer optix. De plus, j’ai mis en évidence un rôle de la signalisation Wg dans la répression de la formation de la tête dans le tronc; cette fonction avait déjà été révélée chez le xénope et la souris, mais pas chez la drosophile. Finalement, l’étude de la fonction embryonnaire du gène de la famille Six, optix, suggère un rôle dans le développement du labrum et des crochets buccaux. Ces résultats sont discutés en s’appuyant sur la connaissance actuelle concernant l’évolution des gènes Hox, de leur fonction et de leurs cofacteursHox genes, encoding homeodomain transcription factors, are conserved in higher animals and have been particularly well studied for their specialised functions: the formation of distinct morphologies along the anterior posterior axis. These genes are localised in complexes and are thought to have derived, via duplication followed by divergence, from a common ancestral gene. If so the current and diverged Hox genes may have retained a common, possibly ancient, function. During my PhD, I have re-examined a common activity of Hox genes in Drosophila : the repression of head in the trunk. Using genetic and molecular approaches, I show that the Hox genes Dfd, Scr, Antp, Ubx, abdA and AbdB are each, individually able to prevent head formation in the trunk, repressing the expression of the head specific gene optix in their specific domains of activity. Hox partners are essential for this common function as Teashirt, and their universal cofactors Extradenticle and Homothorax repress optix. Futhermore, my results indicate that Wg signalling acts together with Hox and Teashirt to repress optix in the trunk, a function previously limited to vertebrates. Finally, the study of optix during embryogenesis shows that it is required for the normal development of the cuticular structures derived from the labrum and for the formation of the mouth hooks. These results are discussed with respect to current knowledge concerning the evolution of Hox genes, their function and their cofactors
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Colote, Soudhir A. „Approche des relations structure-fonction de protéines se liant à l'actine par la méthode de génie génétique“. Montpellier 2, 1991. http://www.theses.fr/1991MON20063.
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Les proteines liant l'actine jouent un role regulateur en modulant la vitesse de polymerisation des actines g et l'organisation tridimensionnelle, intracellulaire des filaments d'actines. Elles font partie integrante de l'appareil contractile et definissent aussi la morphologie cellulaire. Ces proteines sont souvent presentes sous differents isoformes dans differents types cellulaires et s'affairent a des taches differentes. Leurs expressions varient dans des conditions physiologiques differentes et dans des cas pathologiques. Nous avons choisi trois de ces proteines: les tropomyosines, la gelsoline et la fodrine, pour une etude structure-fonction de ces molecules en utilisant les techniques du genie genetique. Dans un premier temps, nous avons utilise differentes methodes de clonage des adnc qui nous ont permis de constituer des outils. Ensuite, nous avons effectue une etude de type phyletique pour permettre, dans le cas des tropomyosines, de definir les regions specifiques de chaque isoforme. Puis nous avons regarde l'expression differentielle des isoformes de tropomyosine correspondant a l'etat differencie et non differencie d'une cellule en utilisant la lignee: hl60 ou u937 comme modeles. Nous avons, par la suite, mis au point une methode de clonage generale qui pourrait etre appliquee au clonage des proteines se liant a l'actine, basee sur des interactions proteine-proteine directes. D'autre part, au cours de ces travaux, nous avons mis au point quelques techniques de purification des acides nucleiques en utilisant la chromatographie liquide a haute performance
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Kabore, Nongodo Firmin. „Analyse épidémio-génétique de la fonction rénale chez les personnes d’Afrique sub-Saharienne vivant avec le VIH“. Thesis, Montpellier, 2019. http://www.theses.fr/2019MONTT070.
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Près de 500 millions de personnes dans le monde souffrent de maladies rénales chroniques (MRC) et environ 80% d’entre eux résident dans des pays à revenu faible ou intermédiaire. Les personnes vivant avec le VIH (PVVIH) sont exposées à un risque rénal accru en particulier en Afrique sub-Saharienne. Cette situation est probablement liée à une susceptibilité génétique conférée par des variants du gène de l’apolipoprotéine L1 (APOL1). Ces variants, dont la fréquence est élevée en Afrique et en particulier en Afrique de l’Ouest, ont été identifiés comme fortement impliqués dans la survenue de pathologies rénales graves rencontrées chez les PVVIH.Ce travail de thèse avait pour objectif d’améliorer les connaissances sur l’évolution à long terme de la fonction rénale chez des PVVIH d’Afrique subsaharienne traités contre l’infection à VIH et sur le risque de complications rénales associé aux variants génétiques de APOL1. Nous avons analysé les données médicales et génétiques de plusieurs cohortes de PVVIH suivies dans différentes structures sanitaires d’Afrique de l’Ouest et du Centre.Les prévalences et incidences de la MRC observées dans les différentes cohortes et estimées selon les recommandations du Kidney Disease Outcomes Quality Initiative sont faibles à modérées et contrastent avec les observations faites dans certains pays de la région avec des prévalences atteignant 30%.Les fréquences des 2 variants à risque du gène APOL1 sont également plus faibles qu’attendues, avec seulement 3 à 5% de porteurs du génotype à haut risque. L’observation de fréquences plus élevées en Afrique de l’Ouest qu’en Afrique Centrale est cependant confirmée.En raison du faible nombre de porteurs du génotype à haut risque et des faibles prévalences de MRC, nous n’avons pas pu mettre en évidence un effet significatif des variants de APOL1 sur le risque de complications rénales.En revanche, nos travaux confirment le rôle des facteurs de risque connus tels que l’âge, l’immunodépression, l’hypertension artérielle et l’exposition au Ténofovir Disoproxil Fumarate. Et ces observations nous ont conduits à évaluer les performances d’un score prédictif de la MRC initialement développé pour les PVVIH occidentaux. Nous montrons qu’il peut être utilisé en Afrique sub-saharienne pour identifier les personnes à risque de développer une MRC et leur proposer un suivi et une prise en charge adaptés.Ces travaux apportent des éléments rassurants quant à la santé rénale des PVVIH d’Afrique de l’Ouest suivis et traités pour leur infection VIH. Cependant, au regard des difficultés de prise en charge des maladies rénales sévères, la mise en place de stratégies de dépistage et de prévention doit constituer une priorité de santé publiqueNearly 500 million people worldwide suffer from chronic kidney disease (CKD) and about 80% of them live in low- and middle-income countries. Paeople living with HIV (PLHIV) are at increased risk of renal disease, particularly in sub-Saharan Africa. This situation is probably related to genetic susceptibility conferred by variants of the apolipoprotein L1 gene (APOL1). These variant highly prevalent in Africa, and particularly in West Africa, have been identified as being strongly implicated in the occurrence of serious renal diseases experienced by PLHIV.The aim of this thesis was to provide data about the long-term evolution of renal function in sub-Saharan African PLHIV treated for HIV infection and assess the risk of kidney complications associated with APOL1. We analyzed the medical and genetic data of several cohorts of PLHIV followed in different health care facilities in West and Central Africa.The prevalence and incidence of CKD in the different cohorts and estimated according to the recommendations of the Kidney Disease Outcomes Quality Initiative are low to moderate and contrast with the observations made in some countries of the region with prevalence reaching 30%.The frequencies of the 2 risk variants of the APOL1 gene are also lower than expected, with only 3 to 5% of carriers of the high-risk genotype. The observation of higher frequencies in West Africa than in Central Africa is, however, confirmed.Due to the low number of carriers of the high-risk genotype and the low prevalence of CKD, we were unable to demonstrate a significant effect of APOL1 variants on the risk of kidney complications.However, our work confirms the role of other risk factors such as age, immunosuppression, hypertension and Tenofovir Disoproxil Fumarate exposure. These observations led us to evaluate the performance of a prediction score of CKD initially developed for Western PLHIV. We show that this score can be used in sub-Saharan Africa to identify people at risk of developing a CKD and provide them with targeted monitoring and prevention intervention.These findings provide reassuring information about the evolution of renal function in West African PLHIV followed and treated for their HIV infection. However, given that management of severe kidney disease is a major challenge is these settings, the implementation of screening and prevention strategies must be a public health priority
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M'Rad, Amel. „Contribution à l'étude des hémoglobines anormales : épidémiologie, structure, fonction des hémoglobines anormales en Tunisie“. Paris 12, 1993. http://www.theses.fr/1993PA120051.
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La beta thalassemie frequente dans le pourtour mediterraneen et la drepanocytose venue d'afrique noire representent a elles seules la plus grande partie des hemoglobines anormales en tunisie. Les autres variants, dont la frequence est faible, ont une repartition inegale selon les regions. Le nord-ouest de la tunisie est la region la plus touchee (10,1%), anciennement impaludee, elle se singularise par un tres haut degre de consanguinite (24 a 46%). Nous avons d'abord effectue une enquete epidemiologique sur un echantillonnage largement representatif de la population tunisienne (12780 prelevements). Dans un deuxieme temps, nous avons effectue une autre enquete epidemiologique dans la region du nord-ouest, chez des jeunes enfants (1481 echantillons), en meme temps, nous avons determine la prevalence des anemies qui pourraient masquer les alpha et beta thalassemies. Nous avons trouve qu'environ un enfant sur deux a une anemie (les carences martiales: 28,4%). Ces anemies sont en rapport avec des conditions socio-economiques pour la plupart mediocres. Outre les hemoglobines frequentes (hb, s, hb c), nous avons mis en evidence des cas d'hb o arab, d punjab, korle bu, camperdown, d iran, e et quelques mutants tres rares tels que l'hb montgomery: (alpha 48(cd6) leucinearginine), l'hb athens-georgia: (beta40 (c6) argininelysine), ainsi qu'un mutant inedit, l'hb tunis: (beta124(h2)prolineserine), muet a l'electrophorese
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Choukrallah, Mohamed Amin. „Partie I, Étude structure-fonction de TBP dans les fibroblastes murins“. Strasbourg, 2010. http://www.theses.fr/2010STRA6091.
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Partie 1 : étude structure-fonction de la TBP (TATA Binding Protein) dans les fibroblastes murins. Le domaine C-terminal conservé de la TBP interagit avec de multiples partenaires pour former des complexes nécessaires à la transcription par les ARN polymérases I, II et III. Pour analyser ces interactions dans les cellules de mammifères, nous avons utilisé des fibroblastes embryonnaires murins modifiés génétiquement. Dans ces cellules, la TBP endogène peut être remplacée par une TBP exogène sauvage ou portant des mutations (substitution d’un seul acide aminé dans le domaine C-terminal). Nous avons montré que de nombreux mutants de TBP peuvent complémenter la perte de la TBP endogène, mais provoquent une baisse de la prolifération. Des expériences d’immunoprécipitation couplées à des analyses par spectrométrie de masse ont permis d’identifier deux mutations, R188E et K243E, qui affectent l'interaction TBP/BTAF1 et la formation du complexe B-TFIID. L'analyse du transcriptome montre que la mutation R188E affecte l'expression de seulement 474 gènes. En accord avec ces résultats, l'analyse par ChIP-seq montre que cette mutation n’a pas d’effet général sur la distribution de TBP et de la Pol II dans le génome, mais perturbe le fonctionnement d’un nombre réduit de promoteurs par des mécanismes différents. Sur certains promoteurs, la mutation affecte le recrutement de TBP, alors que sur d’autres, elle induit le remplacement de B-TFIID par TFIID, ce qui se traduit par le recrutement de la Pol II et l’activation du promoteur. Ces données montrent que le complexe B-TFIID n'est pas essentiel pour la viabilité cellulaire, mais il est nécessaire à une prolifération normale. Ces données montrent également que B-TFIID n’est pas un régulateur global de la transcription, mais régule spécifiquement un ensemble réduit de gènes. Partie 2 : étude de l’action de l’acide rétinoïque dans la différenciation neuronale des cellules souches embryonnaires. Les cellules souches embryonnaires murines (ES) se différencient en neurones pyramidaux glutaminergiques in vitro suite au traitement par l’acide rétinoïque (AR). Nous avons utilisé la technique de RNA-seq pour identifier les gènes dont l’expression est modifiée après le traitement par l’AR durant la différenciation neuronale. Nous avons ainsi pu établir des profils d’expression génique qui caractérisent chaque stade de ce processus. Plusieurs facteurs de transcription font partie des gènes régulés par l’AR. Parmi ces facteurs se trouve notamment HES3 (Hairy and Enhancer of Split). Afin de mieux comprendre la fonction de ce facteur, nous avons réprimé son expression dans les cellules ES par la technique de shRNA. La perte d’expression de HES3 n’affecte pas la réponse précoce à l’AR, ni l’initiation de la différenciation. Nos résultats indiquent que HES3 agit à une étape plus tardive où il est essentiel à l’expression des marqueurs neurogéniques Brn2 et Mapt. Ces observations suggèrent que HES3 est nécessaire à la différenciation neuronale des cellules ES in vitroPart 1 : structure-function analysis of TBP in murine embryonic fibroblasts. The conserved C-terminal domain of the TATA binding protein (TBP) interacts with multiple partners to form several complexes required for transcription by RNA Polymerases I, II and III. To analyse these interactions in mammalian cells we used genetically modified mouse embryonic fibroblasts where endogenous TBP can be replaced by an exogenous wild-type or mutant TBP with a single aminoacid substitution in the C-terminal domain. We show that many TBP mutants can complement loss of the endogenous TBP, but induce a slow growth phenotype. Tandem immunopurifications and mass-spectrometry analysis identify two TBP mutations, R188E and K243E, that completely disrupt the TBP/BTAF1 interaction and formation of the B-TFIID complex. Transcriptome analysis shows that the R188E mutation affects the expression of only 474 genes. In agreement with this, ChIP-seq analysis does not show major changes in genomic TBP and Pol II distribution in cells expressing TBPR188E. However, at affected promoters, mutations in TBP result either in its de novo recruitment or in an exchange of the B-TFIID by TFIID, thus promoting Pol II recruitment and gene activation in R188E mutant cells. These data show that B-TFIID complex is not essential for cell viability, but is required for normal proliferation. The B-TFIID is required for regulation of only a small subset of genes. Part 2 : study of the role of retinoic acid in neuronal differentiation of embryonic stem cells. Mouse embryonic stem cells (ES) can be differentiated into glutamatergic pyramidal neurons in vitro following retinoic acid (RA) treatment. We used RNA-seq to identify genes that are deregulated after RA treatment during neuronal differentiation. We established gene expression profiles that characterize each stage of this process. Several transcription factors are regulated by RA. HES3 (Hairy and Enhancer of split) is one of the most upregulated genes. To better understand its function, we repressed its expression using shRNA. The loss of HES3 expression does not affect the early RA response nor the initiation of differentiation. Our results indicate that HES3 acts at a later stage where it is essential for Brn2 and Mapt neurogenic markers expression. These observations suggest that HES3 is essential for neuronal differentiation of ES cells in vitro
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Côme, Christophe. „Fonction des facteurs de transcription de la famille snail dans les cancers du sein et du côlon“. Montpellier 2, 2005. http://www.theses.fr/2005MON20197.
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Leston, Araujo Itaua. „Facteurs environnementaux et génétiques déterminant la fonction thymique chez l'adulte sain“. Thesis, Sorbonne Paris Cité, 2019. http://www.theses.fr/2019USPCC092.
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Le thymus est un organe clé de l’immunité, permettant tout au long de la vie la production de cellules T naïves. L'involution thymique associée à l'âge est liée à une réduction de la masse tissulaire et de la cellularité thymique, ainsi que la perte de la structure tissulaire et de l’architecture normale conduisant à une baisse de la production de cellules T naïfs. Cependant, à l'exception de l'âge, les facteurs environnementaux ou génétiques susceptibles de régir la fonction thymique chez l'Homme restent mal connus. Nous avons caractérisé la variabilité de la fonction thymique chez 1000 adultes sains stratifiés par l’âge et par sexe sur la cohorte Milieu Intérieur, en utilisant la quantification des cercles d’excision (TRECs) dans le sang périphérique comme marqueur de la thymopoïèse. L'âge et le sexe sont les seuls facteurs non héritables identifiés qui affectent la fonction thymique. Les quantités de TREC diminuent avec l'âge étant plus élevée chez les femmes de tout âge. Surtout, une étude d'association pangénomique a révélé l’existence d’un variant génétique (rs2204985) dans le locus TCRA-TCRD, situé entre les segments géniques DD2 et DD3, l’allèle G étant associé à un niveau de TRECs supérieur à l’allèle A. Cette association a été validée dans une cohorte de réplication (cohorte MARTHA). La transplantation de cellules souches hématopoïétiques humaines de foie fetal avec le génotype GG dans des souris immunodéficientes est associée à une thymopoïèse accrue avec des TRECs plus élevés, une augmentation du nombre de thymocytes et aussi une plus grande diversité du répertoire TCRA-TCRD. Notre approche d’immunologie des populations a mis en évidence un variant génétique influençant la thymopoïèse l’adulte sain. Ceci pourrait avoir un impact direct en médecine dite de précision dans les domaines du vieillissement et de la vaccination, en transplantation de cellules souches hématopoïétiques, ainsi qu’en autoimmunité. Ces travaux conduisent également à étudier plus en détail les mécanismes de la thymopoïèse précoce et des réarrangements du locus TCRATCRDThe thymus is a vital organ for homeostatic maintenance of the peripheral immune system. Age-associated thymic involution is associated with a reduction in tissue mass and thymic cellularity, loss of tissue structure and abnormal architecture leading to a decline in naïve T cell output. However, with the exception of age, the underlying parameters that govern thymic function in healthy humans remain to be defined. We characterized the variability of thymic function among 1000 age- and sex-stratified healthy adults of the Milieu Intérieur cohort, using quantification of TRECs in peripheral blood T cells as a surrogate marker of thymopoiesis. Age and sex were the only nonheritable factors identified that affect thymic function. TREC amounts decreased with age and were higher in women compared to men of all ages. In addition, a genome-wide association study revealed a common variant (rs2204985) within the T cell receptor TCRA-TCRD locus, between the DD2 and DD3 gene segments, which associated with TREC amounts. This association was validated in a replication cohort (MARTHA cohort). Strikingly, transplantation of human hematopoietic stem cells with the rs2204985 GG genotype into immunodeficient mice led to thymopoiesis with higher TRECs, increased thymocyte counts, and a higher TCR repertoire diversity. Our population immunology approach revealed a genetic locus that influences thymopoiesis in healthy children and adults, with potentially broad implications in precision medicine, especially in aging and vaccines, hematopoietic stem cell transplantation and autoimmunity. This study leads also to further study the precise mechanisms of TCRA-TCRD rearrangements at early steps of thymopoiesis
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Cler, Émilie. „Caractérisation d’un sous-complexe de TFIID et de la fonction anti-oncogène de sa sous-unité TAF4 dans les fibroblastes embryonnaires murins“. Strasbourg, 2009. https://publication-theses.unistra.fr/public/theses_doctorat/2009/CLER_Emilie_2009.pdf.
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L'initiation de la transcription par l’ARN polymérase II nécessite la formation d'un complexe de pré-initiation autour du site de démarrage de la transcription. Parmi les facteurs présents dans ce complexe, se trouve le complexe multi-protéique TFIID de 1,2 MDa, composé de TBP (TATA binding protein) et de 14 TAFs (TBP-associated factors). Au cours de ma thèse, j’ai travaillé sur TAF4, une protéine de 135 kDa qui présente un intérêt particulier du fait de son rôle présumé dans la signalisation par l’AMPc, les récepteurs nucléaires (notamment RAR), et les stress kinases. L’étude du facteur de transcription TAF4 a d’abord été envisagée, au préalable, d’un point de vue transcriptionnel. Elle s’est enrichie d’une composante en cancérologie, dès lors que l’étude approfondie des fibroblastes embryonnaires murins (MEFs) Taf4-/- a révélé l’importance de la protéine TAF4 en tant qu’anti-oncogène. Ainsi, ma thèse comporte deux parties distinctes n’ayant en commun que l’importance du facteur de transcription TAF4. Afin de purifier des complexes contenant TAF4, j’ai généré des lignées de MEFs exprimant un dérivé de TAF4 porteur d’une étiquette Flag. Des immunoprécipitations anti-Flag ainsi que des expériences de gel filtration et de centrifugation sur gradient de glycérol ont permis de détecter l’existence d’un sous-complexe de TFIID formé par TAF4, TAF5, TAF6, TAF9 et TAF12. Ce complexe est plus abondant que le TFIID complet dans les MEFs. En revanche, dans d’autres lignées cellulaires qui expriment des niveaux élevés de TBP, la majorité de TAF4 se trouve associée à TFIID. Nous avons donc mis en évidence l’existence d’un complexe intermédiaire d’assemblage de TFIID et montré que son abondance varie selon le type cellulaire en fonction du niveau d’expression de TBP. L’inactivation de TAF4 dans les MEFs provoque une croissance autocrine, un changement de morphologie, mais également une perte de l’inhibition de contact et une croissance cellulaire en multicouches. En injectant les MEFs Taf4-/- dans des souris nues, j’ai mis en évidence leur développent rapide et leur transformation en sarcomes non différenciés, localement invasifs dans la couche musculaire sous-jacente. Le traitement des MEFs (avant injection) par l’acide rétinoïque tout-trans (AR) supprime la formation de tumeurs induites par ces cellules, mais n’affecte pas leur prolifération in vitro. Nos résultats suggèrent un nouveau mécanisme de suppression de tumeur par l’AR qui modifie les propriétés de motilité et d’adhérence de ces MEFs par la régulation de plusieurs gènes impliqués dans le remodelage de la matrice extracellulaire. A partir de l’ensemble de ces résultats, nous suggérons que l’AR exerce son effet anti-tumoral non pas au niveau de la régulation de la prolifération ou de l’apoptose, mais en agissant sur des gènes qui modifient le microenvironnement tumoralThe regulated initiation of RNA polymerase II transcription requires the formation of a multi-subunit preinitiation complex over the transcription start site. Amongst the general transcription factors in this complex, is TFIID formed by the TATA binding protein, TBP and a set of 13-14 TBP-associated factors, TAFs. I have focussed my work on TAF4, a 135 kDa protein that plays an important role in signalling by cAMP, retinoic acid, and stress kinases. This project began by considering the transcriptional properties of TAF4, but was enriched by the discovery of the anti-oncogene function of TAF4 in mouse embryonic fibroblasts (MEFs). My thesis therefore comprises two distinct aspects that have TAF4 as a common denominator. To identify protein complexes containing TAF4, I generated MEF cell lines expressing a Flag-tagged TAF4. Immunoprecipitations as well as gel filtration and glycerol gradient centrifugation demonstrated that the majority of TAF4 is present in a sub-complex together with TAF5, TAF6, TAF9 and TAF12. In MEFs, this complex is much more abundant than full TFIID, however in other cell types expressing higher levels of TBP, TAF4 is found almost uniquely in the TFIID. We have therefore identified a subcomplex that may be an assembly intermediate of TFIID and shown that its abundance varies between cell types in relation to TBP expression levels. Inactivation of TAF4 in MEFs in vitro leads to autocrine growth, morphological changes and loss of contact inhibition. By injection of the Taf4-/- MEFs in nude mice, I found that they were oncogenically transformed and capable of forming large undifferentiated and locally invasive sarcomas. TAF4 therefore has an anti-oncogene function. Treatment of the MEFs with all-trans retinoic acid (RA) prior to injection completely suppressed their ability to form tumours, but did not affect their proliferation. We rather showed that RA induces changes in the motility and adhesive properties of these cells through regulation of several genes that can remodel the extracellular matrix. Taken together, the above results show that RA does not exert its anti-tumour effect by affecting proliferation or apoptosis, but rather by a novel mecanism involving the regulation of genes that remodel the extracellular matrix and thus the tumour microenvironment
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Têtu, Jean-François. „Clonage et caractérisation du promoteur du gène de la nitrate réductase chez Cichorium intybus L. : recherche de facteurs de transcription contrôlant l'expression de la nitrate réductase en fonction de la source azotée“. Lille 1, 2000. https://pepite-depot.univ-lille.fr/LIBRE/Th_Num/2000/50376-2000-214.pdf.
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La nitrate reductase (nr) des plantes superieures catalyse la reduction du nitrate en nitrite. Afin d'etudier la regulation du gene de la nitrate reductase (nia) chez cichorium intybus, nous avons entrepris l'isolement de son promoteur. Par pcr-inverse, nous avons isole un fragment de 932 pb presentant une homologie de disposition des sequences regulatrices avec les promoteurs de gene nia de vegetaux superieurs. Une analyse de la sequence nucleotidique revele l'existence de sites putatifs de liaison avec des facteurs de transcription de type nit2 de neurospora crassa. Afin de tester la fonctionnalite de cette sequence de 932 pb, nous avons entrepris la transformation de cotyledons etioles de chicoree avec agrobacterium tumefaciens portant la construction pnia : uida. Seule une plante, sur les six descendants de transformants primaires obtenus, montre une induction du promoteur par le nitrate. Cette regulation de la sequence pnia par le nitrate confirme le fait d'avoir clone un promoteur nr fonctionnel. Afin de confirmer ces resultats, nous avons mis au point une technique de detection de l'activite gus dans une culture cellulaire de chicoree transformee transitoirement avec la construction pnia : uida. En effet, la suspension cellulaire de chicoree represente un bon modele d'induction de l'expression de la nr par le nitrate. Lorsque cette suspension est repiquee d'un milieu ammonium a un milieu nitrate, on observe une augmentation tres rapide de l'accumulation de nitrate endogene, puis une augmentation de l'accumulation des transcrits nr et de l'activite nrUne premiere analyse de la suspension cellulaire de chicoree transformee pnia : uida en condition nitrate et ammonium montre une regulation de l'activite -glucuronidase dependante du nitrate. Dans une derniere partie, nous avons tente de mettre en evidence des proteines impliquees dans la reponse a l'induction par le nitrate dans la suspension cellulaire. Au niveau des proteines tissulaires solubles, tres peu de differences sont notees. Par contre, les differences sont plus marquees au niveau des proteines nucleaires, tant au niveau de la presence des proteines que de leur accumulation. 5 proteines montrant des differences d'accumulation en fonction de la source d'azote ont ete prelevees afin de realiser un spectre de masse. La proteine 2 presente de fortes homologies avec la proteine narq d'escherichia coli. Narq est impliquee dans la reponse au facteur nitrate en activant les genes narp et narl. Cependant, une micro-sequence de la proteine 2 n'est retrouvee dans aucune proteine isolee jusqu'a ce jour. Enfin, par des experiences de retards sur gels, nous montrons que certaines proteines nucleaires pourraient se lier specifiquement au promoteur nia de chicoree en presence de nitrate dans la region 391 a 536
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Siebert, Christelle. „Détection et fonction des récepteurs des androgènes tronqués dans le cancer de la prostate“. Strasbourg, 2010. https://publication-theses.unistra.fr/restreint/theses_doctorat/2010/SIEBERT_Christelle_2010_ED414.pdf.
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En 2010, le nombre de nouveaux cas de cancers de la prostate (CaP) en France est estimé à 71600. Avec 10000 décès par an, ce cancer se situe au deuxième rang des décès par cancer chez l’homme. La dépendance des cellules cancéreuses vis-à-vis des androgènes est mise à profit dans l’hormonothérapie des CaP. La physiopathologie de l’échappement à l’hormonothérapie peut faire appel à plusieurs types de mécanismes. L’un d’eux est l’émergence de mutations au niveau du gène du récepteur des androgènes (RA) favorisant la prolifération et la survie des cellules cancéreuses en absence d’androgènes. L’expression de gènes impliqués dans les voies de signalisation de certains facteurs de croissance ou de cytokines (CXCR4, CXCL12, EGFR, HER2, HER3, ET-A, VEGFR et Wnt11) a été analysée par RT-QPCR à partir d’échantillons présentant des formes tronquées du RA. Cette étude a montré une variation significative de l’expression d’EGFR, HER2, HER3 et Wnt11. Un test fonctionnel réalisé chez la levure a été mis au point au laboratoire pour détecter les mutations du RA à partir d’échantillons de CaP, mais il est long et fastidieux. Une version plus adaptée à la détection en routine des formes tronquées du RA a été développée. Ce test a aussi été miniaturisé en plaque 96 puits pour faciliter son emploi en routine et sa sensibilité a été augmentée en utilisant 2 systèmes rapporteurs ADE2 et lacZ. La première validation du nouveau test a confirmé que cette nouvelle méthode est plus rapide et plus sensible que l’ancienne. L’objectif final est de proposer ce test comme un outil innovant permettant la détection précoce de RA tronqués dans les CaP et la détermination de sous-populations de patientsIn 2010, the number of new cases of prostate cancers (PCa) is estimated at 71 600. With 10 000 deaths per year, PCa is in France the second cause of male mortality due to cancer. The dependence of cancerous cells towards androgens is taken into account in hormonal therapies against PCa. However, physiopathology of escape from hormonal therapies may involve several types of mechanisms. One is the emergence of mutations in the androgen receptor (AR) gene to promote proliferation and survival of cancer cells in the absence of androgens. Thereby, expression of genes involved in signaling pathways of growths factors or cytokines (CXCR4, CXCL12, EGFR, HER2, HER3, ET-A, VEGFR and Wnt11) was analyzed by RT-QPCR from samples presenting truncated AR variants. This study showed significant variation in the expression of EGFR, HER2, HER3 and Wnt11. A functional test realized in yeast was developed in the laboratory to detect truncated AR variants from PCa samples, but it is long and tedious. To overcome this situation, a more suitable version for routine detection of truncated AR variants was developed. This test has also been miniaturized into a 96-well plate to facilitate its routine use and its sensitivity was increased by using 2 ADE2 and lacZ reporter systems. The first validation of the new test confirmed that the new method is faster and more sensitive than the former. The final goal is to propose this test as an innovative tool for early detection of truncated AR variants in PCa and determination of subpopulations of patients
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Bonnet, Aline. „Etude de la fonction du gène Vestigial-like 2 dans la formation des muscles chez l'embryon de poulet“. Paris 6, 2010. http://www.theses.fr/2010PA066372.
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Le cofacteur de transcription Vestigial est impliqué dans la myogenèse chez la drosophile. Il est nécessaire à la mise en place de l’identité de certains muscles embryonnaires et adultes. De plus, il contrôle la différenciation musculaire en régulant la voie Notch. Un homologue de vestigial, le gène Vestigial-like 2 (Vgl-2) a été identifié chez les vertébrés. Il joue un rôle dans la différenciation musculaire in vitro. Au cours de ma thèse, je me suis intéressée à la fonction du gène Vgl-2 dans la formation des muscles chez l’embryon de poulet. Nous avons montré que Vgl-2 s’exprime dans tous les muscles squelettiques, de manière similaire à MyoD. Cependant, les transcrits Vgl-2 ne sont pas détectés dans les fibres musculaires. Lorsque la voie Notch est activée, l’expression de Vgl-2 dans les membres est inhibée comme celle de MyoD. Par ailleurs, les MRF régulent de manière différentielle l’expression de Vgl-2. Chez l’embryon de poulet, MyoD, Myogénine et MRF4 peuvent induire l’expression de Vgl-2 alors que Myf5 n’en est pas capable. La surexpression de VGL-2 in vivo conduit à l’activation de l’expression de Pax3 et Six1, gènes de spécification musculaire, de FgfR4, marqueur des myoblastes en prolifération ainsi que de MyoR et Id2, inhibiteurs de la différenciation. De plus, VGL 2 induit l’expression de MyoD, gène de détermination musculaire sans activer celle des gènes impliqués dans la différenciation musculaire. VGL-2 induit également l’expression de Notch2 et Delta-like 1 suggérant que dans ce contexte, la voie Notch est activée. Des expériences de gain de fonction à plus long terme sont en cours pour mieux comprendre la fonction de Vgl-2 dans la myogenèse embryonnaire
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Alarcon, Flora. „Estimation des risques de maladies dues à des mutations génétique à partir de données familiales“. Phd thesis, Université Paris Sud - Paris XI, 2009. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00765543.
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Certaines maladies à âge de début variable sont dues à la présence de mutation(s) d'un gène. Pour ces maladies, l'estimation précise du risque cumulé d'être atteint à un certain âge chez les porteurs de la mutation (appelé fonction de pénétrance) permet une meilleure compréhension des mécanismes sous-jacents de la maladie et permet également de développer et d'améliorer des stratégies de prévention. L'estimation de la pénétrance se fait à partir de données familiales recensées sur certains critères plus ou moins complexes. Cependant, la plupart des études utilisent des méthodes d'estimation qui ne tiennent pas compte du biais que représente ce recensement, ce qui implique des fonctions de pénétrance fortement surestimées. Au cours de cette thèse, nous nous sommes intéressés au développement de méthodes d'estimation de la fonction de pénétrance corrigeant pour le recensement des familles. Dans un premier temps, nous avons étudié une méthode permettant d'estimer la pénétrance quel que soit le mode de recensement des familles. Nous nous sommes ensuite intéressés plus particulièrement au cas de familles recensées sur l'existence d'au moins un atteint par famille. Dans ce cadre, nous avons développé une méthode d'estimation, que nous avons appelée la PEL, et l'avons comparée à une méthode déjà existante, la méthode prospective. Nous avons montré que la PEL était moins biaisée que la méthode prospective. Nous avons ensuite appliqué ces méthodes à deux jeux de données, l'un portant sur des familles françaises et portugaises, atteintes de neuropathie amyloide héréditaire ; l'autre portant sur des familles atteintes de cancer du sein. Nous avons également mené une étude sur des familles suédoises atteintes de neuropathie amyloide héréditaire. La PEL est une méthode paramétrique basée sur un modèle de Weibull et nous avons montré qu'elle n'était pas adaptée lorsque la distribution des données s'éloignait fortement de ce modèle. Nous avons donc développé une méthode non-paramétrique, que nous avons appelée IDEAL, permettant l'estimation de la pénétrance en tenant compte du recensement des familles et l'avons comparée à la PEL. Nous avons montré que IDEAL était moins biaisée lorsque la loi des données était éloignée d'une loi de Weibul.
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Rouget, Christel. „Etude de la fonction cytoplasmique de la protéine CstF-77K au cours de la maturation méiotique de l'ovocyte de xénope“. Montpellier 2, 2006. http://www.theses.fr/2006MON20108.
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La régulation post-transcriptionnelle des ARNs messagers constitue un mécanisme important du contrôle de l’expression génique dans de nombreux processus comme le développement précoce et la différenciation cellulaire. La protéine CstF-77 appartient au complexe de polyadénylation nucléaire CstF (cleavage stimulation factor) qui est responsable du choix du site de polyadénylation au niveau de l’extrémité 3’ des ARN pré-messagers. Cependant, plusieurs données chez la levure (Saccharomyces cerevisiae) et la Drosophile (Drosophila melanogaster) suggèrent que cette protéine pourrait avoir une autre fonction au niveau du cytoplasme. Les résultats obtenus au cours de cette étude ont permis de caractériser cette protéine chez le xénope. Sa localisation est nucléaire et cytoplasmique, comme ses homologues de levure et de drosophile. Nous avons montré que dans le cytoplasme des ovocytes de xénope, CstF-77 appartient à un complexe multiprotéique comprenant CPEB, XGLD2, CPSF-100 et Symplekin, protéines impliquées dans la polyadénylation cytoplasmique, ainsi qu’avec l’initiateur de la traduction eIF4E. D’un point de vue fonctionnel, les expériences réalisées montrent que CstF-77 n’est pas requise pour la polyadénylation cytoplasmique en elle-même. Néanmoins, l’immunodéplétion de cette protéine dans les ovocytes induit une accélération de la transition G2/M avec une synthèse précoce des protéines Mos et Aurora A, ainsi qu’une activation précoce de la MAP kinase. Des résultats similaires sont trouvés lors de l’immunodéplétion de la protéine CPEB qui est aussi un répresseur traductionnel d’ARNs messagers spécifiques stockés dans le cytoplasme des ovocytes. De plus, cette nouvelle fonction de la protéine CstF-77 est également retrouvée in vitro dans des lysats de réticulocytes. L’ensemble de ces résultats suggèrent que CstF-77 cytoplasmique serait impliquée dans le contrôle traductionnel de messagers, en association avec CPEB, lors de la maturation méiotique des ovocytes de xénope.
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Rodrigue, Marc-André. „Génétique moléculaire des glaucomes à angle ouvert, études structure/fonction de la protéine encodée par le gène TIGR/MYOC“. Thesis, National Library of Canada = Bibliothèque nationale du Canada, 2000. http://www.collectionscanada.ca/obj/s4/f2/dsk1/tape2/PQDD_0016/MQ53979.pdf.
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Lamprell, Helen. „Production des entéroxines dans les fromages en fonction de la diversité phénotypique et génétique des souches de Staphylococcus aureus“. Dijon, 2003. http://www.theses.fr/2003DIJOS064.
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L'objectif principal du travail était d'évaluer l'aptitude d'isolats de Staphylococcus aureus à produire des entérotoxines (SE) dans des conditions contrôlées de fabrication fromagère en fonction de leur diversité phénotypique et génétique. De tous les isolats collectés à partir de laits et fromages au lait cru provenant des Savoies et du Massif central, 6% étaient producteurs d'entérotoxines in vitro. Les isolats producteurs de SED in vitro présentaient une empreinte génétique distincte. La spectroscopie IRTF est une technique intéressante pour l'identification de S. Aureus. Seules SEA et/ou SED ont été détectées dans un fromage modèle de type pâte pressée non cuite. Aucune production d'entérotoxine n'a été détectée dans des fromages expérimentaux de type Cantal et Tomme de Savoie. Des traces de SEA et de SED ont été détectées dans un fromage expérimental de type Reblochon. Le potentiel redox semble un paramètre intéressant à étudier pour contrôler la production d'entérotoxinesThe main objective of this study was evaluate S. Aureus growth and enterotoxin (SE) production under controlled cheese making conditions, according to the phenotypic and genetic diversity of the isolates. Of all the S. Aureus isolates collected from raw milk and raw milk cheeses from the Savoie, Haute Savoie and Massif Central regions, 6% were capable of producing enterotoxins in vitro. SED producing strains presented a distinct genetic fingerprint. FTIR spectroscopy is an interesting technique for the identification of S. Aureus. Only SEA and/or SED were shown to be produced in the semi-hard cheese model. No enterotoxins were found in the Cantal and Tomme de Savoie type cheeses. Traces of SEA and SED were detected in the Reblochon type cheese. The redox potential seems to be an interesting parameter to be studied for the control of enterotoxin production
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Deba, Aurore. „Explorations fonctionnelles de la fonction vésicale chez la souris : études urodynamiques, pharmacologiques et génétiques“. Toulouse 3, 2009. http://thesesups.ups-tlse.fr/550/.
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Par le biais d'approches urodynamiques, pharmacologiques et génétiques, ce travail caractérise la fonction vésicale chez la souris dans des conditions physiologiques et physiopathologiques associées à l'hyperactivité vésicale. Tout d'abord nous présentons des techniques d'étude de la fonction vésicale in vitro et in vivo. Puis nous démontrons l'importance physiologique de l'ATP et de l'ACh dans le réflexe mictionnel et l'implication du récepteur P2X1 dans la contraction vésicale médié par l'ATP. De plus, nous mettons en évidence le rôle des récepteurs ß3-adrénergiques dans la relaxation vésicale chez la souris. Enfin, nous proposons une séquence des modifications fonctionnelles et de certains mécanismes moléculaires impliqués dans les dysfonctions de la vessie consécutives à l'obstruction partielle de l'urètre et aux lésions médullaires. Les résultats rassemblés mettent en évidence de nouvelles cibles thérapeutiques pour le traitement de l'hyperactivité vésicale chez l'HommeThe aim of this present study was to characterize the bladder function in the mouse in both physiological and pathophysiological conditions using cystometric, pharmacological and genetic investigations. In a first time, we set up in vitro and in vivo experimental techniques to explore the bladder function. Then, we demonstrated the physiological importance of ATP and ACh in the micturition reflex and the involvement of P2X1 receptors in the bladder contraction. In addition, the role of ß3-adrenoceptors in the bladder relaxation was evidenced. Finally, functional modifications and underlying mechanisms leading to bladder dysfunctions after bladder outlet obstruction and spinal cord injury were proposed. Our results highlighted new therapeutic targets for the treatment of overactive bladder in Humans
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Zwaenepoel, Ingrid. „Approche moléculaire des surdités héréditaires et de la fonction auditive“. Paris 7, 2003. http://www.theses.fr/2003PA077192.
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Mathieu, Noëlle. „Etude in vivo de la fonction de l'élément enhancer du gène TCRβ : Rôle sur la structure de la chromatine, l'expression et les recombinaisons V(D)J au locus TCRβ“. Aix-Marseille 2, 2000. http://www.theses.fr/2000AIX22067.
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Brocard, Lysiane. „Etudes génétiques de la symbiose Medicago truncatula-Sinorhizobium melitoti : utilisation d'approches de génétique inverse pour l'étude de la fonction biologique d'ENOD40 : études de nouveaux mutants symbiotiques de Medicago truncatula“. Paris 11, 2006. http://www.theses.fr/2006PA112309.
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Les légumineuses sont capables de s’associer avec des bactéries du sol pour former un nouvel organe: la nodosité. Le modèle utilisé au laboratoire pour l’étude de cette symbiose correspond au couple Medicago truncatula-Sinorhizobium meliloti. Afin de tenter de mieux comprendre la fonction du gène ENOD40, des approches par silencing ont été initiées. Des lignées transgéniques de M. Truncatula, qui expriment une construction ARNi (ARN interference) dirigée contre ENOD40, ont été produites. Les analyses phénotypiques et moléculaires de ces lignées montrent que l’induction de ce gène n’est pas requise pour cette association symbiotique. De plus, au cours de ce travail, un deuxième gène ENOD40, MtENOD40-2, a été identifié chez M. Truncatula. MtENOD40-2 se différencie de MtENOD40-1 par son profil de transcription mais également par la séquence du peptide I putativement codé par la majorité des gènes ENOD40 identifiés. En parallèle, afin de découvrir de nouveaux mutants de nodulation et les gènes correspondants, le criblage de deux collections de lignées d’insertion, soit ADN-T soit Tnt1, de M. Truncatula a été initié. Sur 271 lignées ADN-T criblées, quatre présentent des phénotypes symbiotiques qui ne co-ségrègent pas avec l’étiquette mutagène ; tandis que deux mutants symbiotiques étiquetés ont été identifiés parmi 200 lignées Tnt1. La production ainsi que le criblage de nouvelles lignées Tnt1 semblent constituer un outil plus efficace pour la découverte, chez M. Truncatula, de nouveaux gènes symbiotiques, par génétique directe, et de nouveaux mutants d’intérêt, par génétique inverseThe symbiotic interaction between leguminous plants and soil bacteria leads to the formation of a new organ : the nodule. The molecular mechanisms controlling this interaction are not yet well understood. The interaction between Medicago truncatula and Sinorhizobium meliloti represents an interesting model to study this symbiotic interaction. We have used a silencing approach with RNAi to investigate the function of the ENOD40 gene that is induced during the symbiotic interaction and encodes a short ORFs-containing RNA. Because of the lack of an appropriated viral vector for Virus-induced gene silencing (VIGS) in M. Truncatula, transgenic lines expressing an RNAi construct directed against ENOD40 were produced. The phenotype and the molecular analysis of these transgenic lines, analyzed under three different growth conditions indicated that the ENOD40 induction is not required for the symbiotic interaction. Moreover, a second MtENOD40 gene, MtENOD40-2, was discovered during this study. These MTENOD40 genes differ by their transcription patterns and their putative peptide I sequences. In addition, in order to discover new nodulation mutants and the corresponding genes, we initiated the screening of two insertion mutant collections (T-DNA or Tnt1). Four untagged and two tagged symbiotic mutants were isolated using respectively 271 T-DNA lines and 200 Tnt1 lines. Thus, as a result of the multicopy nature of the Tnt1 element in the Tnt1 lines, screening of these lines seems to be more efficient for the discovery of new symbiotic mutants in M. Truncatula by forward and reverse genetic approaches
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Gueydan, Charlotte. „Identification d'un réseau de gènes soumis à empreinte parentale et de sa fonction“. Montpellier 2, 2008. http://www.theses.fr/2008MON20123.
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L'empreinte génomique est un mécanisme épigénétique de régulation transcriptionnelle qui aboutit à l'expression d'un seul des deux allèles d'un gène en fonction de son origine parentale. Ce mécanisme, qui touche un nombre très restreint de gènes (environ 80 chez les euthériens), n'est présent que chez les marsupiaux et les mammifères euthériens. Les gènes soumis à empreinte appartiennent à des familles de gènes ayant des fonctions moléculaires très diverses comme le cycle cellulaire, la signalisation ou le métabolisme. Il semble donc que l'empreinte parentale ne cible pas une fonction moléculaire particulière. Cependant, beaucoup de mutants spontanés ou induits de ces gènes présentent des phénotypes similaires, en particulier une altération de la croissance embryonnaire, suggérant que l'empreinte génomique pourrait cibler les gènes impliqués dans le contrôle de cette croissance. Mon travail de thèse consistait donc à répondre à la question suivante : Les gènes soumis à empreinte contrôlent-ils la croissance embryonnaire de manière coordonnée ou utilisent-ils des mécanismes indépendants ? L'utilisation de méta-analyses de puces à ADN a permis d'identifier un réseau de gènes soumis à empreinte impliqué dans le contrôle de la croissance embryonnaire. Par la suite, l'existence de ce réseau a été confirmée in vivo et in vitro. Une fois l'existence d'un réseau de gènes soumis à empreinte démontrée, nous avons essayé d'identifier son (ses) rôle(s). Pour cela nous avons cherché dans quelle(s) situation(s) physiologique(s) les gènes de ce réseau voient leur expression co-régulée. Nous avons ainsi pu observer l'induction coordonnée de ces gènes lors des arrêts de prolifération dus à la confluence, la déprivation en facteurs de croissance et la différenciation. Ces résultats suggèrent fortement que le processus biologique associé à ce réseau est le contrôle de la quiescence et de l'arrêt de prolifération concomitant à la différenciation cellulaireGenomic imprinting is an epigenetic mechanism of regulation that results in the expression of a single allele in a parent-of-origin-dependent manner. This form of epigenetic regulation restrains the expresion of a small subset of mammalian genes to one parental allele, and exists only in Marsupials and eutherians. Imprinted genes are members of genes families with various molecular functions such as cell cycle, metabolism or signalisation. This indicates that imprinting does not target a specific biochemical process. However, alteration of imprinted loci is consistently associated with developmental disorders in humans, and mouse mutants of several imprinted genes display embryonic and/or postnatal growth phenotypes, indicating that genomic imprinting targets preferentially genes involved in the control of embryonic growth. During my PhD, I had to anwser to the following question : Do imprinted genes work coordinately to regulate the same biochemical processes, or do they control growth through independent mechanisms ? A meta-analyse of micro-array data identified an imprinted gene network that regulates embryonic growth. This data were afterwards experimentally confirmed in vitro and in vivo. We then devised a strategy to identify the precise biological function associated with this imprinted gene network and looked for biological situations where this network of co-regulated genes is actually activated. We observed a concerted induction of the imprinted genes comprised in the network during the proliferation shutdown that follows serum deprivation, confluence and differentiation. These data strongly suggest that the biological function associated with the imprinted gene network previously identified is the control of quiescence and of proliferation shutdown that precedes differentiation
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Zazopoulos, Emmanuel. „Étude de la structure et de la fonction de la protéine Nef du virus d'immunodéficience humaine de type 1“. Lyon 1, 1993. http://www.theses.fr/1993LYO1T078.
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Boillot, Morgane. „Etude de la fonction de la protéine LGI1 impliquée dans les épilepsies du lobe temporal“. Thesis, Paris 6, 2015. http://www.theses.fr/2015PA066408.
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Ce travail a pour objet l'étude de la fonction de la protéine LGI1. Des mutations dans le gène LGI1 (leucine-rich, glioma-inactivated 1) sont responsables de l'épilepsie autosomique dominante avec crises à symptomatologie auditive (ADEAF), un syndrome épileptique familial qui est caractérisé par des symptômes auditifs et qui survient à l'adolescence ou chez le jeune adulte. Par ailleurs, des anticorps dirigés contre la protéine LGI1 ont été trouvés dans le liquide cérébro-spinal de patients présentant une encéphalite limbique autoimmune avec crises d'épilepsie, qui apparaît de façon aiguë chez l'adulte. La perte de fonction de LGI1, une protéine neuronale sécrétée, entraîne donc des crises chez l'Homme soit par haploinsuffisance (ADEAF) soit par un mécanisme autoimmun (encéphalite limbique). La littérature rapporte que LGI1 pourrait agir au niveau de la synapse glutamatergique et, durant le développement postnatal, sur la maturation des neurones glutamatergiques. Sa fonction est donc encore mal connue et controversée. Afin de mimer la perte de fonction de LGI1 chez l'animal, un modèle de souris knockout a auparavant été généré par l'équipe. Ces souris déficientes de façon constitutive pour le gène Lgi1 (Lgi1-/-) reproduisent en partie la pathologie humaine avec l'émergence de crises d'épilepsie spontanées. Dans la première partie de ce travail de thèse, nous avons généré et caractérisé le phénotype de souris knockout conditionnelles. Nous avons montré que la délétion de Lgi1 restreinte aux neurones glutamatergiques chez l'embryon ou chez l'adulte est suffisante pour provoquer des crises spontanées. Au contraire, la délétion de Lgi1 dans les interneurones GABAergiques à parvalbumine n'induit pas de changement du seuil d’apparition des crises. Ces résultats sont en faveur de l'hypothèse que la protéine Lgi1sécrétée par les neurones glutamatergiques a une contribution déterminante à laphysiopathologie des épilepsies liées à LGI1. Nous avons aussi démontré le rôle crucial decette protéine pour maintenir une excitabilité normale du développement à l'âge adulte.Dans la seconde partie, l'étude des souris Lgi1-/- constitutives a permis d'établir que la déficience en Lgi1 n'entraîne pas d'altérations de la morphologie des dendrites et dessynapses des neurones glutamatergiques. Par contre, elle conduit à une augmentation de latransmission synaptique glutamatergique due à une augmentation de la libération vésiculaire de glutamate dans la fente synaptique, suggérant un rôle présynaptique pourLgi1. Cet effet précède le début des crises et pourrait donc sous-tendre le phénotype épileptique.La poursuite de nos recherches consistera à préciser les mécanismes d'action présynaptique de LGI1. A plus long terme, l'identification récente de mutations du gène RELN dans l'ADEAF ouvrira de nouvelles voies de recherche, en particulier l'étude des interactions entre LGI1 et ReelinMutations in the gene LGI1 (leucine-rich, glioma-inactivated 1) have been reported in families with autosomal dominant epilepsy with auditory features (ADEAF). ADEAF is a well-defined inherited condition consisting of adolescence/early adulthood-onset lateral temporal seizures. Moreover, LGI1 antibodies are involved in autoimmune limbic encephalitis, an acquired epileptic disorder of adulthood associated with memory loss and confusion. LGI1 loss-of-function caused by haploinsufficiency (ADEAF) or by autoimmunity (limbic encephalitis) triggers seizures in Human. LGI1 is a secreted neuronal protein. Its function in the brain is still uncertain and controversial, but there is evidence that LGI1 acts at the glutamatergic synapses and in the maturation of glutamatergic neurons during postnatal development. To mimic LGI1 loss-of-function in animal, a knockout mouse model has been previously generated. Germline Lgi1-deficient mice (Lgi1-/-) recapitulate several features of the human disease with early-onset spontaneous seizures.During the first part of my thesis project, I generated Lgi1 conditional knockout mice and characterized their phenotype. Selective deletion of Lgi1 in glutamatergic neurons during embryogenesis or adulthood is sufficient to generate spontaneous seizures. In contrast, neither spontaneous seizures nor increased seizure susceptibility to convulsant were observed when Lgi1 deletion was restricted to parvalbumin-positive GABAergic interneurons. Together, these data suggested that Lgi1 secreted from excitatory neurons makes a major contribution to the pathogenesis of LGI1-related epilepsies. We also demonstrated that Lgi1 is required from embryogenesis to adulthood to maintain normal circuit excitability. During the second part, we showed, using germline Lgi1-/- mice, that Lgi1 deficiency does not alter the dendritic or synaptic morphology of glutamatergic neurons. However, it induces an increased synaptic release of glutamate that leads to an increased glutamatergic transmission. This effect suggests a presynaptic role for Lgi1. By preceding seizure onset, it may underlie the epileptic phenotype. Next step will be to precise how LGI1 acts at the presynaptic side. Also, the recent identification of mutations in the gene RELN in ADEAF will certainly open new avenue, especially LGI1 and Reelin interaction studies
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Plé, Hélène. „Caractérisation et fonction des microARN plaquettaires chez l'humain : implication dans l'insuffisance rénale chronique et dans l'activation plaquettaire“. Doctoral thesis, Université Laval, 2013. http://hdl.handle.net/20.500.11794/24308.
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Résumé Les plaquettes jouent un rôle central dans le maintien de l’hémostase et sont impliquées dans les maladies cardiovasculaires. Ces éléments sont anucléés, mais contiennent des ARN messagers (ARNm), dont la traduction pourrait être régulée par leurs microARN. Au cours de ce projet, je me suis concentrée à mieux caractériser ces microARN, afin de déterminer leur rôle dans la fonction plaquettaire. L’étude du répertoire complet des microARN plaquettaires humains, réalisée par séquençage à haut débit, montre un profil caractérisé par la forte expression de microARN impliqués dans la différentiation cellulaire et la mégacaryopoïèse. La diversité des microARN plaquettaires est enrichie par l’expression d’isoformes décalées en 5’, tel que miR-140-3p, ce qui leur confère la capacité de réguler des ARNm différents de l’isoforme principale. Beaucoup de microARN plaquettaires sont modifiés en 3’, ce qui peut altérer leur stabilité et influencer leur fonction. La présence de deux nucléotidyl-transférases et l’activité d’uridylation, observées dans des extraits protéiques de plaquettes in vitro, démontrent la capacité des plaquettes à modifier et à réguler leurs microARN. Dans un second temps, j’ai étudié l’implication des microARN dans les défauts plaquettaires observés chez les patients urémiques, dialysés ou non. Bien que les complexes impliqués dans la biogenèse et la fonction des microARN demeurent fonctionnels, le profil des microARN plaquettaires est altéré chez les patients urémiques, et semble rétabli par la dialyse. Deux gènes ont été identifiés comme étant régulés par des microARN altérés chez les patients urémiques, suggérant que l’altération de la régulation de certains ARNm par les microARN pourrait contribuer aux défauts plaquettaires chez ces patients. Militant en faveur d’un rôle des microARN dans la traduction des ARNm plaquettaire, j’ai mis en évidence (i) l’association des complexes effecteurs Argonaute 2 (Ago2)•microARN avec les ARNm, et (ii) la régulation de certains ARNm, traduits dans les plaquettes, par des microARN abondamment retrouvés dans celles-ci. Suite à l’activation des plaquettes, ces dernières sécrètent des microARN, essentiellement dans des microparticules, à l’intérieur desquelles ils sont associés à Ago2. Globalement, mes résultats laissent entrevoir un rôle important pour les microARN plaquettaires dans la régulation de leurs ARNm et la communication intercellulaire.Platelets play a central role in hemostasis and are involved in cardiovascular diseases. Devoid of a nucleus, platelets nevertheless contain messenger RNAs (mRNAs) and are capable of de novo protein synthesis. MicroRNAs are particularly abundant in platelets, suggesting that they may regulate mRNA translation. In this project, I characterized further the microRNA repertoire and pathway of human platelets in order to gain more insights into their role in platelet function. High-throughput sequencing analysis of human platelet small RNAs revealed an abundant array of microRNAs involved in cell differentiation or megakaryopoiesis. The diversity of platelet microRNAs is expanded by the expression of 5’ shifted isoforms, as observed with miR-140-3p that may regulate mRNAs different than the reference sequence. Most platelet microRNAs are extensively modified at their 3’ extremity, a process that is thought to alter their stability and function. The detection of two nucleotidytranferases, as well as uridylation activity in platelets, demonstrate their ability to modify and regulate their microRNAs. I then studied the implication of microRNAs in the platelet defects observed in uremic patients, undergoing dialysis or not. Although the complexes involved in microRNA biogenesis and function remain functional, the platelet microRNA profile of uremic patients was altered, but seems to be restored by dialysis. The identification of two genes that are regulated by microRNAs altered in uremic patients suggests that an alteration of microRNA-based mRNA regulatory mechanisms may underlie the platelet response to uremia. Consistent with a role for microRNAs in regulating platelet mRNAs, Ago2•microRNA complexes are associated with platelet mRNAs. In addition, certain mRNAs translated in platelets can be regulated by microRNAs that are particularly abundant in platelets. Following their activation, platelets secrete microRNAs, mainly via microparticles, in which they are found associated with Ago2. Altogether, my results suggest that platelet microRNAs may play an important role in the regulation of platelet mRNAs as well as in intercellular communications.
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Lehmann, Sylvia. „Etude de DAX-1 et de sa perte de fonction dans l'hypoplasie congénitale des glandes surrénales“. Université Louis Pasteur (Strasbourg) (1971-2008), 2005. https://publication-theses.unistra.fr/public/theses_doctorat/2005/LEHMANN_Sylvia_2005.pdf.
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Des mutations du gène DAX-1 (DSS-AHC critical region on the X chromosome, gene 1) sont responsables de l’hypoplasie congénitale surrénalienne (AHC). DAX-1 fait partie de la famille des récepteurs nucléaires, mais il est orphelin et agit comme répresseur transcriptionnel. Le but de mon travail de thèse était de mieux caractériser DAX-1 et sa perte de fonction provoquée par les mutations identifiées chez des patients avec AHC. Concernant la distribution intracellulaire de DAX-1, les résultats obtenus montrent que DAX-1 est nucléaire dans la majorité des cellules, mais aussi cytoplasmique et nucléo-cytoplasmique dans quelques cellules. Les répétitions du domaine amino-terminal agissent de façon coopérative pour déterminer la localisation majoritairement nucléaire de DAX-1. De plus, toutes les mutations ponctuelles AHC provoquent une réversion de la distribution intracellulaire de DAX-1 qui est localisée majoritairement dans le cytoplasme et ce même dans un contexte hétérologue. Les mutants AHC de la protéine sont plus sensibles à la digestion limitée à la trypsine ce qui suppose que leur repliement est affecté. Les mutations AHC induisent un mauvais repliement de DAX-1 qui n’est plus localisée dans le noyau et ne réprime plus l’expression de gènes cibles. Quant à la régulation de la localisation de DAX-1, elle n’implique pas le cycle cellulaire, les voies de signalisation de la PKA, PI3 kinase, ERK et p38. Parmi plusieurs stress testés, le choc thermique produit spécifiquement une relocalisation de DAX-1 dans le cytoplasme. Le choc thermique affecte aussi la solubilité de DAX-1 qui est diminuée, ainsi que les modifications post-traductionnelles de la protéine. Quant au mécanisme de répression de DAX-1, mes résultats démontrent que N-CoR n’est probablement pas un corépresseur de DAX-1. De plus, l’étude structure-fonction montre que DAX-1 semble posséder un mécanisme de répression unique qui diffère de celui des autres membres de la famille des récepteurs nucléairesMutations in DAX-1 gene (DSS-AHC critical region on the X chromosome, gene 1) are responsible for the adrenal hypoplasia congenita (AHC). DAX-1 is a member of the nuclear receptor family, but is an orphan and acts as a transcriptional repressor. The aim of my thesis work was to better characterise DAX-1 and its loss of function induced by mutations identified in AHC patients. Concerning the intracellular distribution of DAX-1, the results obtained show that DAX-1 is nuclear in the majority of cells, but also cytoplasmic and nucleocytoplasmic in some cells. The aminoterminal repeats act cooperatively to determine the nuclear localization of DAX-1. Moreover, all the AHC point mutations induce a reversion in DAX-1 intracellular distribution which is now mainly localized in the cytoplasm even in a heterologous context. The AHC mutant proteins are more sensitive to limited trypsin digestion which suggests that their folding is affected. The AHC mutations induce an incorrect folding of DAX-1 that is not anymore localized in the nucleus and can’t repress target genes. Cell cycle and the pathways of PKA, PI3kinase, ERK and p38 kinases don’t seem to be involved in regulating DAX-1 localization. Among several stress tested, heat shock induce a specific relocalization of DAX-1 in the cytoplasm. Heat shock decreases DAX-1 solubility and changes DAX-1 post-translational modifications. Regarding DAX-1 repression mechanism, my results demonstrate that N-CoR probably doesn’t work as a DAX-1 corepressor. Moreover, the structure-function study shows that DAX-1 seems to act through a unique repression mechanism which differs from the one used by other members of the nuclear receptor family
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Ramaekers, Ariane. „Etude de la fonction du récepteur métabotropique du glutamate de la drosophile, DmGluRA“. Montpellier 2, 2001. http://www.theses.fr/2001MON20153.
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