Auswahl der wissenschaftlichen Literatur zum Thema „Développement mammaire“

La fonction de lactation, c’est-à-dire la production de lait, est l’aboutissement d’un long processus de développement et de différenciation des tissus mammaires. De la vie embryonnaire à la première lactation, la glande mammaire prend forme étape par étape. Chacune de ces étapes est contrôlée par une association d’hormones dans des rapports de concentrations bien définis et agissant de manière séquentielle. La mammogenèse dépend principalement des hormones stéroïdes en synergie avec la prolactine et l’hormone de croissance ; la lactogenèse de la prolactine et des glucocorticoïdes ; enfin, la galactopoïèse est sous le contrôle de la prolactine, de l’hormone de croissance et des glucocorticoïdes.

L’élevage des génisses laitières ou allaitantes, de la naissance au premier vêlage à 2 ou 3 ans, requiert des conditions optimales d’alimentation et de croissance, variables selon les génotypes et leur potentiel de production. Un gain de poids vif trop élevé ou trop faible avant la puberté, réduit le développement mammaire et la production laitière non seulement en première lactation mais aussi au cours des lactations suivantes. Un gain de poids vif élevé au-delà de la puberté et un poids vif élevé au premier vêlage améliorent la production laitière et la fertilité des vaches primipares. Leurs réserves mobilisables sont accrues et leur besoin de croissance est plus faible. Cependant, un excès d’embonpoint de la vache primipare peut réduire sa capacité d’ingestion déjà faible au début de la lactation et son aptitude au vêlage.

Le système lymphatique est un réseau vasculaire unidirectionnel transportant la lymphe qui permet le drainage des fluides interstitiels, le transport des lipides intestinaux, ainsi que la surveillance et la tolérance immunitaire. Néanmoins, le système lymphatique est impliqué dans de nombreuses pathologies et particulièrement dans la progression tumorale. En effet, le système lymphatique favorise la dissémination des métastases qui sont acheminées par les vaisseaux lymphatiques jusqu'aux organes distants. Plus récemment, le système lymphatique a été identifié comme un régulateur clé des réponses immunitaires lors du développement tumoral. Le système immunitaire est indispensable à la détection des tumeurs et à l'établissement de réponses lymphocytaires anti-tumorales. Cependant, lors des stades de développement tumoral avancés, des mécanismes d'échappement immunitaire se mettent en place en faveur de la croissance des tumeurs. Ces mécanismes sont notamment médiés par les tumeurs elles-mêmes mais aussi par différents acteurs de l'environnement tumoral. Le système lymphatique est un de ces acteurs, particulièrement retrouvé dans l'environnement tumoral mammaire. Les adénocarcinomes mammaires à des stades avancés répondent aux immunothérapies qui ciblent les points de contrôle immunitaire responsables de l'échappement immunitaire. En effet, le système lymphatique potentialise la réponse des tumeurs à ces immunothérapies car il joue un rôle double dans l'immunomodulation en contexte tumoral. Les vaisseaux lymphatiques sont capables de recruter les lymphocytes T dans la tumeur pour stimuler la surveillance immune anti-tumorale mais sont aussi capables d'engendrer des mécanismes immunosuppresseurs des lymphocytes T par l'expression de points de contrôle immunitaire. Durant de ma thèse, j'ai donc étudié les mécanismes immunomodulateurs du système lymphatique lors du développement des tumeurs mammaires. J'ai observé que le système lymphatique contrôle le passage de la surveillance immune vers l'immunosuppression, particulièrement induite par les ligands du point de contrôle immunitaire TIGIT. J'ai ainsi montré que l'activation des vaisseaux lymphatiques tumoraux entraine la surexpression du ligand Nectine-2 qui va inhiber les lymphocytes T surexprimant TIGIT. Cela va alors réduire la réponse des lymphocytes T CD8+ cytotoxiques afin de favoriser la croissance tumorale
The lymphatic system is a unidirectional vascular network transporting lymph, enabling drainage of interstitial fluids, transport of intestinal lipids, and also immune monitoring and tolerance. Nevertheless, the lymphatic system is involved in many pathologies, and particularly in tumor progression. Indeed, the lymphatic system promotes the metastatic spread, carried by lymphatic vessels to distant organs. More recently, the lymphatic system has been identified as a key regulator of immune responses during tumor development. The immune system is essential for tumor detection and establishment of anti-tumor lymphocyte responses. However, at advanced stages of tumor development, immune escape mechanisms are established in favor of tumor growth. These mechanisms are mediated not only by tumors themselves, but also by various players in the tumor environment. The lymphatic system is one of these players, particularly found in breast tumor environment. Advanced-stage breast adenocarcinomas respond to immunotherapies that target immune checkpoints responsible for immune escape. Indeed, the lymphatic system potentiates tumor response to these immunotherapies, playing a dual role in immunomodulation in the tumor context. Lymphatic vessels are able to recruit T cells to the tumor site to stimulate anti-tumor immune surveillance, but are also able to generate T cell immunosuppressive mechanisms through the expression of immune checkpoints. During my thesis, I therefore studied immunomodulatory mechanisms of the lymphatic system during mammary tumor development. I observed that the lymphatic system controls a switch from immune surveillance to immunosuppression, particularly induced by ligands of TIGIT immune checkpoint. I have shown that activation of tumor lymphatic vessels leads to overexpression of Nectin-2, which inhibits T cells overexpressing TIGIT. This in turn reduces cytotoxic CD8+ T cell responses to promote tumor growth

L’alimentation peut influencer le développement mammaire des femmes et compromettre la santé de la descendance. La leptine pourrait jouer un rôle majeur dans ces processus. Nous avons montré que chez la lapine, la synthèse mammaire de leptine était peu élevée en gestation puis augmentait en lactation, et que l’allaitement par une mère hyperadipeuse potentialisait les effets d’un régime obésogène ultérieur et induisait un développement mammaire anormal de la descendance. Nous avons également caractérisé la synthèse et la sécrétion mammaire de leptine, dans un modèle cellulaire hétérologue. Enfin, nous avons évalué la variation intra espèce ainsi que la croissance selon deux fenêtres nutritionnelles : alimentation obésogène administré dès la puberté ou dès la naissance, dans deux lignées murines, FVB/N et C57BL/6.Ce travail montre que la composition du lait maternel est altérée par l’alimentation et influe sur la croissance et le développement mammaire de la descendance, chez le lapin
Women’s nutrition can have long-term effects on mammary development and on the development and the health of the offspring. Leptin may play a major role during these processes. In the present work we show that leptin synthesis in the mammary gland slightly increases during pregnancy, but largely increases during lactation. We also show that, in the rabbit, milk consumption from obesogenic-fed dams promote the later effects of an obesogenic diet and leads to an abnormal mammary development observed in the offspring. We also highlight the synthesis and the mammary secretion of leptin in a heterologous cellular model. We also evaluate the intra-species variability as well as the growth considering two nutritional windows: obesogenic feeding from the puberty or from the birth, in two lineages of mice, FVB/N and C57BL /6.This work shows that the consumption of altered maternal milk has long-term effects by influencing the growth and the mammary development of the offspring, in rabbit

Le statut nutritionnel des femmes, en particulier au cours de l’enfance et de l’adolescence, peut influencer ultérieurement l’allaitement, en altérant le développement mammaire. Les mécanismes responsables de ces perturbations au niveau mammaire ne sont que partiellement connus. Le travail de cette thèse est réparti en deux volets. Nous avons d’abord étudié le gène de la leptine dans la glande mammaire de lapin. L’analyse quantitative par RT-PCR en temps réel a montré que le niveau d’expression des ARNm codant pour la leptine augmentait à partir de la fin de la gestation pour atteindre à mi-lactation, un niveau équivalent à celui du tissu adipeux alors que celui des récepteurs suivait une cinétique inverse. L’analyse de la localisation cellulaire de la leptine révèle une expression spécifique dans les cellules éptihéliales luminales. Ces résultats suggèrent que la leptine via un rôle autocrine et/ou paracrine pourrait constituer un médiateur important dans la régulation locale du développement mammaire. Nous nous sommes ensuite intéressés aux conséquences d’une adiposité élevée sur la lactation et sur le phénotype mammaire de la descendance. Au cours de cette étude, nous avons montré que le régime obésogène altérait non seulement la composition du lait mais que ce lait pouvait à son tour provoquer des modifications au niveau du phénotype mammaire chez la descendance. L’ensemble de ce travail soutient l’hypothèse selon laquelle le lait maternel, dont la composition peut être altérée selon l’alimentation de la mère, influerait sur le développement mammaire de la descendance
Nutritional status, mostly during childhood and adolescence, can induce long-term effects in particular on mammary gland development. The mechanisms underlying this phenomenon still remain unknown. We have first studied leptin gene expression inrabbit mammary gland. The real time RT-PCR quantitative analysis showed that the leptin mRNA level rose from the end of pregnancy to reach at mid-lactation, a level equal to that of the adipose tissue, while leptin receptor mRNA concentration was higher during pregnancy as compared to lactation. Cellular localization of leptin reveals an expression in the luminal epithelial cells. These results suggest that leptin, through an autocrine and/or a paracrine role, could participate in the local regulation of mammary gland development. We then analyzed the consequences of adiposity on lactation and on offspring’s mammary gland development in the rabbit. We showed first that the obesogenic diet alters milk composition and second that this altered milk could lead to mammary alterations in the offspring. These results support the hypothesis that maternal milk, which composition can change according to the maternal diet, may have long-term effects on offspring’s mammary gland development

L’épithélium mammaire est composé de cellules luminales et basales myoépithéliales. Il comprend des cellules souches et progénitrices qui gouvernent le développement de la glande. Leur dérégulation est probablement à l’origine de certains cancers du sein très agressifs, dits « triple-­‐négatifs » (négatifs pour les récepteurs hormonaux et HER2), pour lesquels il n’existe pas de thérapie ciblée. L’équipe a identifié un nouveau marqueur spécifique du compartiment basal comprenant les cellules souches, la Podoplanine (Pdpn), dont l’expression est concentrée aux contactsintercellulaires basal-­‐luminal. La Pdpn est une glycoprotéine transmembranaire connectée au cytosquelette, impliquée dans le développement denombreux tissus et la tumorigenèse. Son rôle dans la glande mammaire n’a jamais été étudié. A l’aide d’une délétion génique conditionnelle, nous avons trouvé que l’absence de Pdpn dans l’épithélium mammaire perturbe la fonction des cellules souches/progénitrices basales ainsi quel’expression de plusieurs composants du signalosome de la voie Wnt/b-­‐caténine. De plus, la perte de Pdpn dans un modèle murin de tumorigénèsemammaire induite par l’activation de la signalisation Wnt/b-­‐caténine réduit la fréquence des tumeurs mammaires triple-­‐négatives, limite l’expansiondes cellules initiatrices de tumeurs et favorise l’expression de marqueurs moléculaires associés à un programme de transition mésenchymo-­‐épithéliale. Au moyen d’expériences de gain de fonction dans une lignée de cellules basales mammaires, Nous avons montré que les phénotypes décrits précédemment reposent sur des mécanismes moléculaires impliquant la Pdpn dans le contrôle positif de l’activation de la voie Wnt/b-­‐caténine. Notre étude révèle un rôle pour la Pdpn dans le contrôle des cellules souches et de leur réponse à la signalisation Wnt/b-­‐caténine au cours du développement et de la tumorigénèse mammaire
Stem cells (SC) drive mammary development, giving rise postnatally to an epithelial bilayer composed of luminal and basal myoepithelial cells. The molecular identity of SCs and the factors regulating their function remain poorly defined. We identified the transmembrane protein, Podoplanin (Pdpn), as a specific marker of the basal compartment, including multipotent SCs, and found Pdpn localized at the basal-luminal interface. Embryonic deletion of Pdpn targeted to basal cells diminished basal and luminal SC activity and affected expression of several Wnt/b-catenin (Wnt/b-cat) signaling components. Moreover, Pdpn deletion attenuated mammary tumor formation in a mouse model of b-cat-induced breast cancer, limiting tumor-initiating cell expansion and promoting molecular features associated with mesenchymal-to-epithelial cell transition. In line with the loss-of-function data, we demonstrated that mechanistically, Pdpn enhanced Wnt/b-cat signaling in mammary basal cells. Overall, our study reveals a role for Pdpn in mammary development and tumorigenesis through the control of Wnt/b-cat-responsive SCs

La maîtrise de la conduite d’élevage est essentielle pour produire des chevrettes qui expriment pleinement leur potentiel laitier au cours de leur carrière. Elle implique la détermination de phases clés au cours de la période de croissance, notamment pour la mise en place de la glande mammaire. L’objectif de cette thèse était de déterminer les effets d’un sevrage précoce combiné à différentes conduites alimentaires post-sevrage sur les performances zootechniques de chevrettes de race alpine ainsi que sur le développement de leur glande mammaire. Tout d’abord, nous avons montré qu’un sevrage précoce à 10 kg de poids vif n’affectait ni le développement corporel, ni les performances de reproduction, ni même la production laitière (PL) des chevrettesPar contre, un apport plus élevé de concentré pendant la phase d’élevage a augmenté le développement corporel et le poids de la glande mammaire. Toutefois, cela n’a impacté ni le développement du parenchyme mammaire au cours de la phase pré-pubère ou en début de gestation, ni même la proportion de Cellule Epithéliale Mammaire (CEM). La prolifération des CEM était identique quelle que soit la quantité de concentré ingérée. La PL n’a pas été modifiée par l’augmentation de l’ingestion de concentré. La modification de la concentration en énergie et en protéines du concentré en phase pré-pubère n’a eu d’effet ni sur les performances de croissance ou de reproduction, ni sur le développement de la glande mammaire. La chèvre semble donc s’adapter aux modifications de la conduite alimentaire sans pour autant que l’augmentation de croissanc
Control of husbandry management is essential to produce female goat kids that fully express their milk potential during their career. It involves the determination of key periods during growth, particularly for the mammary gland development. The objective of this thesis was to determinate the effects of early weaning combined with different post-weaning feeding strategies on the performances of alpine goat kids as well as on their mammary gland development. On the one hand, we showed that early weaning at 10 kg of body weight did not affect body development, reproductive parameters or milk production (MP). On the other hand, a high concentrate intake during the rearing period increased body development and the weight of mammary glands.However, this did not impact the development of mammary parenchyma during the pre-pubertal phase or at the beginning of gestation, nor even the proportion of Mammary Epithelial Cells (MEC). The proliferation of MEC was identical regardless of the amount of concentrate ingested. MP was not affected by increasing concentrate intake. Modifying the energy and protein concentration of the concentrate in the pre-pubertal period had no effect on growth, reproductive performance, mammary gland development or mammary parenchyma development. Therefore, goats seem to adapt to changes in feeding strategies without a negative effect of the increase in growth on their ability to produce milk

Le comportement des lapereaux nouveaux-nés (Oryctolagus cuniculus) est sous contrôle exclusif des entrées chimiosensorielles et tactiles, les autres systèmes sensoriels entrant en fonction plus tardivement. Parmi les signaux olfactifs qui orientent le comportement néonatal, une phéromone a pu être isolée dans le lait de lapine, la phéromone mammaire (PM). La PM contribue à deux mécanismes essentiels à la survie de l’individu : l’orientation vers la mamelle et sa prise en bouche (la PM contribue ainsi à la tétée) et l’apprentissage olfactif précoce. Dans ce contexte, ce travail de thèse a comporté 3 objectifs : analyser l’impact de l’état prandial et de l’ontogenèse 1) sur la réponse à la PM, 2) sur la réponse aux odeurs apprises en association avec la PM et 3) évaluer les éventuels impacts à long terme des deux fonctions de la PM au cours du développement du lapereau. 1) La réponse du lapereau à la PM semble dégagée de toute influence de la satiété au cours des premiers jours de vie. Puis, on note le passage d’une réponse automatique à ce signal phéromonal maternel à une réponse régulée par des facteurs post-ingestifs ou post-absorptifs. En effet, à J2,les lapereaux répondentoujours très fortement à la PM alors qu’à partir de J5, le signal ne conserve sa valeur motivationnelle qu’en phase pré-prandiale. D’autre part, ce travail montre clairement une évolution de la réponse des lapereaux à la PM au cours de leur développement. 2) Dans certaines conditions d’association, la PM est capable de transférer en un essai sa signification appétitive à une odeur initialement neutre. Ce transfert est modulé par les facteurs prandiaux plus tôt que ne l’est le déclenchement du comportement de tétée. De plus, cette capacité de transfert est limitée aux 4 premiers jours de vie des lapereaux, suggérant l’existence d’une période sensible pour cet apprentissage phéromonalement dirigé. 3) La rétention d’une odeur acquise au cours des 4 premiers jours de vie s’avère effective lors de tests de choix sociaux réalisés à 30 jours, mais pas lors de tests de choix alimentaire. Cette rétention semble néanmoins nécessiter (dans nos conditions) un renforcement plus consistant (allaitement sous la mère) que celui constitué par la PM seule. Ces résultats ouvrent des perspectives quant à l’étude des mécanismes orientant les apprentissages du nouveau-né de mammifère et de leurs conséquences à court comme à plus long terme, et notamment quant à la nature des renforçateurs phéromonaux ou multi-sensoriels véhiculés par la mère et impliqués dans ces apprentissages à finalité adaptée
Newborn rabbits (Oryctolagus cuniculus) are dependent of maternal odour cues to localise the nipples and to suck. During a nursing episode, they display a typical behaviour under the mother’s abdomen constitutedby searching movements of the head usually followed by oral grasping movements. Such responses are in particular released by the mammary pheromone (MP) emitted by lactating females. They may also be induced bya novel odorant after it has been learned by association with the MP. In this context, three objectives have beenpursued in the present thesis: the assessment of the impact of the satiation and of the rabbit pup development on 1) the releasing activity of the MP, 2) the reinforcing impact of the MP on an initially neutral odorant; and 3) the evaluation of the long term impact of the releasing and reinforcing functions of the MP during the development of the young rabbit. 1) During the first postnatal days, the ability of the MP to trigger the orocephalic movements of the pups appears independent of the prandial state. Then, a progressive transition from an “automatic” response to the MP to a response regulated by post-ingestive or post-absorptive factors occurs. Indeed, the response to the MP remains very high along the 24-h cycle on d2, but on d5 the MP is highly active only right before the daily nursing. Moreover, an evolution in the morphology of the response to the MP appears between birth and weaning. 2) The potency of the MP to induce odour-learning is affected by the prandial state as soon as d0. Inaddition, this reinforcing function vanishes after d4, suggesting the presence of a sensitive period for the reinforcing activity of the MP. 3) The neonatal learning of a new odorant seems to impact the behaviour of young rabbits (around 30-day-old) tested for their social preferences, but not for their feeding ones. But this retention seems to require a stronger reinforcement (nursing) than that resulting from the exposure to the MP only. These results open perspectives for the study of the mechanisms engaged in the learning of the mammal newborn and of their consequences in the short as the long term, in particular through the action of pheromonal and of multi-sensory reinforcers dependent of the mother that contribute to the adaptation of the young

Les microARN sont de petits ARN non-codants qui jouent des rôles importants dans l’extinction de l’expression de gènes cibles. Ils sont impliqués dans la régulation de divers processus cellulaires, tel que la différenciation, la prolifération et l’apoptose. Jusqu'à présent, leur implication dans la biologie de la glande mammaire a été suggérée par quelques études portant principalement sur des situations pathologiques permettant la caractérisation des microARN comme marqueurs de différents types de tumeurs du sein. L'implication des microARN dans la régulation de la biologie normale de la glande mammaire reste à découvrir. Pour comprendre la fonction des microARN dans les différents stades physiologiques de la glande mammaire, nous avons développé trois approches : (i) L’identification de microARN spécifiques de la glande mammaire. Ces microARN ont été recherchés par la réalisation d’une banque de petits ARN. Au total 24 nouveaux microARN ont été clonés dont 6 sont spécifiques de la souris (Sdassi et al. , 2009). (ii) L’invalidation conditionnelle (système Cre-loxP) de Dicer, l'une des enzymes clés impliquées dans la maturation des microARN. L'inactivation a été principalement réalisée dans les cellules épithéliales mammaires par l'utilisation de deux lignées transgéniques MMTV-Cre et WAP-Cre croisées avec les souris Dicerfl/fl. Les souris Dicerfl/+/MMTV-Cre hétérozygotes présentent un défaut de lactation. Les observations histologiques montrent un défaut de développement de la glande mammaire détectable à partir de 6 jours de gestation. Les études transcriptomiques ont été effectuées afin de caractériser les voies de signalisation affectées. Les souris Dicerfl/fl/WAP-Cre présentent également un défaut de la lactation. Les études histologiques montrent des anomalies de la glande mammaire de ces souris en fin de lactation. (iii) La caractérisation de l’expression des microARN à différents stades physiologiques de la glande mammaire de souris (Silveri et al. , 2006; Sdassi et al. , 2009). Le rôle de l'un d'entre eux (miR-30b) a été recherché à partir de l’analyse de souris transgéniques qui surexpriment ce microARN dans les cellules épithéliales mammaires. Les femelles présentent un défaut de la lactation. Les analyses histologiques n’ont pas montré d’anomalies de développement pendant la gestation ou la lactation ; en revanche, des défauts du remodelage de la glande mammaire au Les microARN sont de petits ARN non-codants qui jouent des rôles importants dans l’extinction de l’expression de gènes cibles. Ils sont impliqués dans la régulation de divers processus cellulaires, tel que la différenciation, la prolifération et l’apoptose. Jusqu'à présent, leur implication dans la biologie de la glande mammaire a été suggérée par quelques études portant principalement sur des situations pathologiques permettant la caractérisation des microARN comme marqueurs de différents types de tumeurs du sein. L'implication des microARN dans la régulation de la biologie normale de la glande mammaire reste à découvrir. Pour comprendre la fonction des microARN dans les différents stades physiologiques de la glande mammaire, nous avons développé trois approches : (i) L’identification de microARN spécifiques de la glande mammaire. Ces microARN ont été recherchés par la réalisation d’une banque de petits ARN. Au total 24 nouveaux microARN ont été clonés dont 6 sont spécifiques de la souris (Sdassi et al. , 2009). (ii) L’invalidation conditionnelle (système Cre-loxP) de Dicer, l'une des enzymes clés impliquées dans la maturation des microARN. L'inactivation a été principalement réalisée dans les cellules épithéliales mammaires par l'utilisation de deux lignées transgéniques MMTV-Cre et WAP-Cre croisées avec les souris Dicerfl/fl. Les souris Dicerfl/+/MMTV-Cre hétérozygotes présentent un défaut de lactation. Les observations histologiques montrent un défaut de développement de la glande mammaire détectable à partir de 6 jours de gestation. Les études transcriptomiquesont été effectuées afin de caractériser les voies de signalisation affectées. Les souris Dicerfl/fl/WAP-Cre présentent également un défaut de la lactation. Les études histologiques montrent des anomalies de la glande mammaire de ces souris en fin de lactation. (iii) La caractérisation de l’expression des microARN à différents stades physiologiques de la glande mammaire de souris (Silveri et al. , 2006; Sdassi et al. , 2009). Le rôle de l'un d'entre eux (miR-30b) a été recherché à partir de l’analyse de souris transgéniques qui surexpriment ce microARN dans les cellules épithéliales mammaires. Les femelles présentent un défaut de la lactation. Les analyses histologiques n’ont pas montré d’anomalies de développement pendant la gestation ou la lactation ; en revanche, des défauts du remodelage de la glande mammaire au Les microARN sont de petits ARN non-codants qui jouent des rôles importants dans l’extinction de l’expression de gènes cibles. Ils sont impliqués dans la régulation de divers processus cellulaires, tel que la différenciation, la prolifération et l’apoptose. Jusqu'à présent, leur implication dans la biologie de la glande mammaire a été suggérée par quelques études portant principalement sur des situations pathologiques permettant la caractérisation des microARN comme marqueurs de différents types de tumeurs du sein. L'implication des microARN dans la régulation de la biologie normale de la glande mammaire reste à découvrir. Pour comprendre la fonction des microARN dans les différents stades physiologiques de la glande mammaire, nous avons développé trois approches :(i) L’identification de microARN spécifiques de la glande mammaire. Ces microARN ont été recherchés par la réalisation d’une banque de petits ARN. Au total 24 nouveaux microARN ont été clonés dont 6 sont spécifiques de la souris (Sdassi et al. , 2009). (ii) L’invalidation conditionnelle (système Cre-loxP) de Dicer, l'une des enzymes clés impliquées dans la maturation des microARN. L'inactivation a été principalement réalisée dans les cellules épithéliales mammaires par l'utilisation de deux lignées transgéniques MMTV-Cre et WAP-Cre croisées avec les souris Dicerfl/fl. Les souris Dicerfl/+/MMTV-Cre hétérozygotes présentent un défaut de lactation. Les observations histologiques montrent un défaut de développement de la glande mammaire détectable à partir de 6 jours de gestation. Les études transcriptomiques ont été effectuées afin de caractériser les voies de signalisation affectées. Les souris Dicerfl/fl/WAP-Cre présentent également un défaut de la lactation. Les études histologiques montrent des anomalies de la glande mammaire de ces sourisen fin de lactation. (iii) La caractérisation de l’expression des microARN à différents stades physiologiques de la glande mammaire de souris (Silveri et al. , 2006; Sdassi et al. ,2009). Le rôle de l'un d'entre eux (miR-30b) a été recherché à partir de l’analyse de souris transgéniques qui surexpriment ce microARN dans les cellules épithéliales mammaires. Les femelles présentent un défaut de la lactation. Les analyseshistologiques n’ont pas montré d’anomalies de développement pendant la gestation ou la lactation ; en revanche, des défauts du remodelage de la glande mammaire au cours de l’involution sont détectés chez ces souris. Les études du transcriptome ont permis d’identifier des gènes potentiellement impliqués dans ce phénotype. Nos résultats montrent pour la première fois l'implication des microARN dans la biologie de la glande mammaire normale. Au cours de ces études, nous avons produit plusieurs modèles animaux qui permettent d’identifier la fonction des microARN et les cibles de l’un d’entre eux (miR-30b) dans cet organe
MicroRNA are small non-coding RNA that have been found to play important roles in silencing target genes and that are involved in the regulation of various normal cellular processes. Few studies have described their implication in mammary gland biology, mainly focusing on pathological situations allowing the characterization of microRNA as markers of tumour class in breast cancer. The involvement of microRNA in the regulation of normal mammary gland biology remains to be uncovered. To understand the function of microRNA in the different steps of mammary gland biology we developed three approaches: 1/ Identification of organ- and tissue- (testicles) specific microRNA suggest the existence of specific microRNA in the mammary gland. These microRNA have been investigated by creating a bank of small RNA. Twenty four new microRNA were cloned, of which 6 are specific for the mouse (Sdassi et al. , 2009). The expression profiles of these new microRNA were analysed by qRT-PCR, to allow for better characterization. 2/ Conditional invalidation (system Cre-loxP) of Dicer, one of the key enzymes involved in the microRNA maturation. The inactivation is achieved mainly in the mammary epithelial cells by the use of an MMTV-Cre and WAP-Cre transgenic lines crossed with Dicerfl/fl mice. The heterozygote Dicerfl/+/MMTV-Cre mice present a defect of lactation. Histological observations show a default of mammary gland development detectable from 6 days of gestation onwards. Transcriptomic studies will be conducted to further characterize the affected signaling pathways. The Dicerfl/fl/WAP-Cre KO mice also exhibit a defect of lactation. The histological studies show abnormalities in mammary gland development at 18 days lactation. The genes regulated by microRNA in this model will be characterized by transcriptomic studies. 3/ The characterization of microRNA expression patterns at different physiological stages of the mammary gland development in mice has been described (Silveri et al. , 2006; Sdassi et al. , 2009). The role of one of these microRNA (miR-30b) is currently being analyzed by studying the phenotype of transgenic mice which over express this microRNA in mammary epithelial cells. The females present a defect of lactation associated with a default of this tissue morphology that is observed from the end of gestation onwards. Transcriptomic studies are underway to identify signaling pathways involved in this phenotype as well as the targets of this microRNA in the mammary gland. However, histological analysis did not show any developmental abnormalities associated withdefects of lactation. A remodeling defect of the mammary gland was found in these mice during involution. Transcriptome analysis has identified genes potentially involved in this phenotype. Our results demonstrate for the first time the involvement of microRNA in normal mammary gland biology and have generated animal tools that will help the understanding of microRNA function and targets in this organ

Les patientes atteintes d’un cancer du sein bénéficient pour la plupart d’une mastectomie, qui consiste en une ablation du sein dans le but de retirer les cellules tumorales. Cet acte chirurgical entraîne une perte conséquente de tissu et peut être alors suivi d’une opération de reconstruction mammaire afin de combler le volume manquant. Il existe aujourd’hui un certain nombre de méthodes de reconstruction, cependant toutes présentent à la fois des avantages et des inconvénients. Les recherches actuelles sont orientées vers le développement de solutions de reconstruction innovantes à partir des propres tissus des patientes. Parmi elles, la reconstruction par chambre d’ingénierie tissulaire (TEC) semble prometteuse pour reconstruire des volumes plus importants.L’objectif de ce travail de thèse est de proposer une amélioration des TEC en ayant recourt à l’impression 3D de matériaux biorésorbables. L’utilisation de polymères thermoplastiques biorésorbables permet de ne pas avoir à réaliser une seconde chirurgie après la reconstruction qui consisterait en le retrait de l’implant. De plus, utiliser l’impression 3D comme moyen de fabrication permettra à terme de proposer aux patientes des implants sur-mesure adaptés à leur morphologie et donc d’améliorer l’aspect esthétique de la reconstruction.L’étude a d’abord porté sur le choix d’un procédé de fabrication additive et d’une méthode de stérilisation pour le développement de l’implant permettant de minimiser la dégradation des biomatériaux sélectionnés. La fabrication par dépôt de filament fondu ainsi que la stérilisation par oxyde d’éthylène ont été retenues comme moyen de production de l’implant final stérile. Une étude de dégradation in vitro a ensuite été réalisée dans le but de déterminer les profils de résorption des PLGA et PLCL. Enfin, une étude in vivo a été conduite sur un modèle rat qui nous a permis de valider le concept de TEC résorbable imprimée en 3D. Les deux biomatériaux résorbables sélectionnés se sont donc montrés compatibles avec le procédé de reconstruction par chambre d’ingénierie tissulaire et ont donc permis la croissance du lambeau graisseux au cours du temps au sein de la TEC
Mastectomy is one of the most common way to treat breast cancer, it consists in the removal of breast tissue to remove tumor cells. This surgical act causes a consequent loss of tissue and can then be followed by a breast reconstruction operation to fill in the missing volume. Implant based or autologous fat grafting (fat flap or lipofilling) are some of breast reconstruction method, however they all have advantages and drawbacks. Tissue engineering chamber (TEC) using fat flap from the patient’s own tissue could be a promising solution to restore large volume of mature and vascularized adipose tissue and a therapeutic alternative to current breast reconstruction techniques.The main objective of this thesis it to improve TEC by using additive manufacturing and bioabsorbable polymers. The use of bioresorbable thermoplastic polymers eliminates the need for a second surgery, which would consist of removing the implant after breast reconstruction. In addition, using 3D printing to manufacture the TEC will allow patients to be offered tailor-made implants adapted to their morphology and therefore improve the aesthetic aspect of the reconstruction.The study first focused on the choice of an additive manufacturing process and a sterilization method for the development of the implant to minimize the degradation of the selected biomaterials. Fused Filament Fabrication (FFF) as well as ethylene oxide sterilization were chosen as means of producing the final sterile device. An in vitro degradation study was then carried out to determine the resorption profiles of PLGA and PLCL. Finally, an in vivo study was carried out on a rat model which enabled us to validate the concept of 3D-printed bioabsorbable TEC. The two selected polymers were therefore shown to be compatible with the tissue engineering chamber reconstruction process and thus allowed the growth of the fat flap over time within the TEC