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Dissertationen zum Thema „Culture cellulaire de vigne“
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Commun, Katia. „Etude du comportement des proplastes de vigne au cours des phases d'isolement et de culture : incidence des facteurs du milieu et caractérisation de la production de phytoalexines“. Reims, 2001. http://www.theses.fr/2001REIMS032.
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Krisa, Stéphanie. „Production d'anthocyanes et de stilbènes par culture cellulaire de vitis vinifera : marquage au ¹³C et études biologiques“. Bordeaux 2, 1999. http://www.theses.fr/1999BOR28700.
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Fourestey, Marie-Sophie. „Production d'anthocyanes par des cultures cellulaires de vigne in vitro : influence des phytohormones“. Bordeaux 2, 1996. http://www.theses.fr/1996BOR2P087.
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Marant, Blandine. „Étude de la biosynthèse et de la bioproduction des stilbènes de vigne et de leur oligomérisation par des approches biotechnologiques“. Electronic Thesis or Diss., Reims, 2024. http://www.theses.fr/2024REIMS026.
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Les stilbènes sont des métabolites spécialisés de la vigne qui jouent un rôle important dans les réponses aux stress. Le resvératrol, principal précurseur des oligomères de stilbènes, est déjà reconnu pour ses propriétés biologiques. Les oligomères de resvératrol suscitent aussi un fort intérêt pour leurs activités biologiques dans des domaines variés. Cependant, leurs voies de synthèse sont peu caractérisées, notamment chez la vigne, et les méthodes actuelles d’obtention de ces stilbènes sont peu durables. L’objectif de cette thèse est d’étudier la biosynthèse des stilbènes dans des cultures cellulaires de vigne élicitées au méthyl-jasmonate (MeJA) et à la méthyl-β-cyclodextrine (MeβCD), afin de mieux comprendre les mécanismes enzymatiques impliqués dans la formation d’oligomères. Nous avons montré que l’élicitation par le MeJA induit la biosynthèse de différents stilbènes dans deux lignées cellulaires, dont plusieurs oligomères. L’expression hétérologue de la peroxydase 4 (PRX4) de vigne dans E. coli a révélé le rôle de cette enzyme dans la synthèse de dimères, trimères et tétramères de resvératrol. De plus, nous avons montré que le MeβCD potentialise les cellules après traitement au MeJA, augmentant ainsi l’expression des gènes associés à la synthèse du resvératrol et de ses oligomères. Nos travaux ont également montré que le MeβCD favorise l’accumulation du resvératrol, mais limite la production d’oligomères dépendante de la PRX4. Le traitement successif des deux lignées cellulaires par la MeβCD et le MeJA a aussi permis de produire plusieurs g/L de stilbènes en bioréacteur, soulignant l’intérêt industriel de ce procédé d’élicitation des cultures cellulairesStilbenes are specialized metabolites of grapevine that play a key role in stress response. Resveratrol, the primary precursor of stilbene oligomers, is widely recognized for its biological properties. Resveratrol oligomers are also of great interest for their pleiotropic biological activities in various applications. However, their biosynthetic pathways remain poorly characterized, especially in grapevine, and current methods of production are not sustainable. The aim of this thesis is to investigate the biosynthesis of stilbenes in grapevine cell cultures elicited with methyl-jasmonate (MeJA) and methyl-β-cyclodextrin (MeβCD) to better understand the enzymatic mechanisms involved in oligomers formation. We showed that elicitation with MeJA triggers the biosynthesis of various stilbenes, including oligomers, in two grapevine cell lines. The heterologous expression of grapevine peroxidase 4 (PRX4) in E. coli revealed the functional role of this enzyme in the synthesis of resveratrol dimers, trimers and tetramers. Furthermore, we showed that MeβCD primes grapevine cells after MeJA treatment, thereby enhancing the expression of genes associated with the biosynthesis of resveratrol and its oligomers. Our work also indicated that MeβCD enhances the accumulation of resveratrol but limits the PRX4-based synthesis of oligomers. Successive treatment with MeβCD and MeJA also triggers the production of several g/L of stilbenes in bioreactor, highlighting the industrial potential of this elicitation process in grapevine cell cultures
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Lopez-Serre, Anne-Marie. „Principes de distribution d'un fongicide entre un matériel végétal et un champignon pathogène : cas d'un anti-mildiou vigne expérimental, le flumetover ; étude du système Plasmopara viticola/vigne“. Université Joseph Fourier (Grenoble ; 1971-2015), 1997. http://www.theses.fr/1997GRE10229.
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La maitrise, au moins partielle, de la biodisponibilite des molecules a activite agronomique doit permettre d'optimiser leur formulation et leur utilisation. Nos recherches concement la biodisponibilite d'un fongicide experimental, le flumetover, anti-mildiou vigne brevete par rhone-poulenc agro france. L'enjeu est de comprendre comment un vegetal est capable d'accumuler cette molecule et de la restituer au champignon parasite (plasmopara viticola). Nous avons suivi la distribution du flumetover dans des modeles experimentaux de complexite croissante (organites cellulaires, cuticules isolees, cellules cultivees en suspension, pythiacees cultivables in vitro, feuilles de vigne saines ou infestes par plasmopara viticola, baies de raisin). Sur vigne, pour s'affranchir des contraintes liees a un traitement par pulverisation, nous avons mis au point un systeme d'immersion des feuilles et des baies. Ce systeme permet un flux constant de penetration du produit a travers les surfaces. Nous avons demontre que le flumetover se distribue selon la loi de fick regissant la diffusion d'un produit et la loi representant sa partition entre lipides et eau. A l'equilibre de diffusion/partition, le rapport des concentrations en flumetover entre espaces lipophiles et hydrophiles est proche du partage octanol/eau de la molecule. Seules les baies de raisin derogent a ces lois puisque penetration et distribution du flumetover y sont tres lentes. Ceci s'explique par leur epaisse protection cireuse et par une faible surface d'echange avec le milieu exterieur ; l'equilibre de diffusion/partition n'est jamais atteint. Le produit associe au materiel vegetal conserve la capacite de diffuser massivement vers un milieu aqueux externe depourvu de fongicide, jusqu'a obtenir un nouvel equilibre de diffusion/partition lipides/eau. Cependant, il apparait qu'une partie du produit penetre est peu diffusible. Il s'agit vraisemblablement de flumetover associe a des espaces fortement lipophiles pour lesquels les flux d'echange avec l'eau sont tres faibles. Seules les cellules d'erable metabolisent activement le flumetover : les premieres etapes de metabolisation sont les n-deethylation, mono-demethoxylation et n-demethylation. Les etapes suivantes permettent la formation de derives hydrophiles qui font l'objet d'une segregation cellulaire. Le suivi de la metabolisation du flumetover par rmn #1#9f a mis en evidence l'interet de la technique comme outil analytique dans l'etude de composes xenobiotiques fluores faiblement concentres.
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Fournioux, Jean-Claude. „Facteurs de l'édification de la tige de Vitis vinifera L. Dans différentes conditions de culture“. Dijon, 1995. http://www.theses.fr/1995DIJOS015.
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Les corrélations endogènes qui déterminent l'édification du rameau de vigne sont identifiées et analysées au vignoble et sur boutures cultivées en enceinte climatique. L'étude porte sur les phénomènes suivants : déterminisme de l'arrêt de croissance et de la sénescence des apex, aoutement, contrôle du rythme plastochronique, croissance compensatoire foliaire, élongation internodale et développement des bourgeons anticipés. Des effeuillages pratiqués au vignoble révèlent, par ailleurs, une influence corrélative particulière des feuilles adultes qui induit une carence calcique des apex. Ces résultats permettent d'établir le schéma général des mécanismes de transport du calcium au sein du cep. Certaines influences foliaires sur le développement des grappes sont aussi précisées. Les corrélations mises en jeu au cours des premières étapes de l'édification d'un plant produit par bouturage sont ensuite envisagées. Grâce à une approche expérimentale globale, les influences réciproques entre le jeune rameau, les racines en formation et les réserves sont démontrées. Les évolutions de ces influences au cours de la croissance de la bouture sont établies. Le modèle microbouturé in vitro est également analysé. Sur la base d'examens histologiques systématiques, toutes les modifications morphogénétiques consécutives à ce procédé de culture sont décrites en détail avec, pour résultat majeur, la démonstration de la possibilité d'une construction sympodiale du rameau. Il est ensuite démontré, qu'en fonction de la teneur en CO2 du conteneur de culture, on peut orienter à volonté la morphogenèse des vitroplants vers le type adulte, juvénile ou un modèle intermédiaire. Cette meilleure connaissance de la morphogenèse in vitro permet de proposer une nouvelle hypothèse sur les principes fondamentaux de la construction du rameau de Vitis vinifera in situ et, plus largement, de celui des vignes à vrilles oppositifoliées.
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Kitao, Yukio. „Etude par la culture associée in vitro de la variabilité de l'̈oïdium et de la sensibilité relative des cultivars de vigne“. Bordeaux 2, 1990. http://www.theses.fr/1990BOR20101.
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Le dispositif d'essai in vitro a été mis au point en utilisant des feuilles issues de vitroplants. Nous avons montré la stabilité de la réceptivité des feuilles à l'oïdium et la variabilité importante des populations de l'agent pathogène. Ce dispositif de culture in vitro révèle fidèlement la réceptivité des plantes, grâce à la maitrise des conditions du milieu et grâce à la constance des conditions de développement de l'agent pathogène et de la plante-hôte. Il peut être utilisé dans un programme d'amélioration de la vigne pour la résistance à l'oïdium avec un diagnostic précoce du degré de résistance des descendants
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Nivelle, Laetitia. „Etude des propriétés anti-tumorales in vitro de stilbènes issus de suspension cellulaire de vigne (Vitis labrusca)“. Thesis, Reims, 2017. http://www.theses.fr/2017REIMS014/document.
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Le resvératrol, stilbène produit naturellement dans les grappes de raisin, possède un pouvoir anti-tumoral caractérisé par ses effets pléïotropiques. La molécule s’est ainsi montrée capable d’inhiber la cancérogenèse en agissant à de multiples niveaux. Son incidence sur la croissance tumorale in vitro est généralement associée à une perturbation dans le cycle cellulaire et à une induction d’apoptose. De nombreuses molécules dérivées du resvératrol se sont montrées également efficaces pour moduler la croissance tumorale. Nous avons entrepris au cours de ces travaux de thèse d’étudier les activités biologiques de stilbènes issus d’une production de culture cellulaire de vigne. Les résultats de cette étude mettent en évidence une réduction de la croissance tumorale, dans un modèle d’étude in vitro de mélanome humain, pour le resvératrol et quatre oligomères de resvératrol bioproduits. L’étude plus approfondie de trois oligomères de resvératrol a permis de révéler des différences notables par rapport entre les effets du resvératrol et ses dérivés. En effet, bien que l’inhibition de la viabilité cellulaire des lignées cancéreuses s’accompagne d’une perturbation du cycle cellulaire pour le resvératrol et ses dérivés, elle se traduit différemment selon les composés. L’action du resvératrol sur le cycle cellulaire conduit à une nette augmentation des cellules en phase S, tandis que les oligomères de resvératrol n’induisent pas d’accumulation cellulaire franche dans une phase du cycle. De plus les oligomères de resvératrol présentent des capacités anti-invasives et anti-migratoires qui ne sont pas retrouvées chez le resvératrol. Enfin l’étude sur des fibroblastes normaux d’adultes (FNA) souligne que les dérivés du resvératrol diminuent la viabilité de cellules normales et cancéreuses à des concentrations similaires contrairement au resvératrol dont l’action est nettement inférieure sur les cellules saines. Cependant le pouvoir cytotoxique du resvératrol et de ses dérivés reste beaucoup plus faible chez les cellules normalesResveratrol, a natural stilbene found in the grapevine, exhibits pleiotropic antitumor activities. This molecule has been shown to inhibit the cancerogenesis processes at different levels. Its impact in tumor growth, in vitro, is generally associate with a disruption in cell cycle and an apoptosis induction. Various resveratrol derivatives appear also efficient to modulate tumor growth. We have studied, during this work, biological activities of stilbenes produced by grapevine cell cutures. Our results show a decrease in melanoma human growth, in vitro, for bioproduced resveratrol oligomers as well as resveratrol itself. Our experiments underline distinct effects between resveratrol and its derivatives. Indeed, all compounds disrupt cell cycle, but resveratrol induces S-phase arrest while resveratrol oligomers failed to induce a clearly phase arrest. Moreover, only resveratrol oligomers only have the ability to counteract invasive and migratory properties of melanoma cells. Finally, experiments performed in normal human fibroblasts study show that resveratrol oligomers present a similar potential to reduce viability of cancer as well as normal cells contrary to resveratrol which is less efficient in normal cells. However the cytotoxicity of resveratrol and its derivatives is significantly reduced on normal cells
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Vinjimore, Kesavan Srikanth. „Suivi de culture cellulaire par imagerie sans lentille“. Thesis, Cergy-Pontoise, 2014. http://www.theses.fr/2014CERG0732/document.
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Biological studies always start from curious observations. This is exemplified by description of cells for the first time by Robert Hooke in 1665, observed using his microscope. Since then the field of microscopy and cell biology grew hand in hand, with one field pushing the growth of the other and vice-versa. From basic description of cells in 1665, with parallel advancements in microscopy, we have travelled a long way to understand sub-cellular processes and molecular mechanisms. With each day, our understanding of cells increases and several questions are being posed and answered. Several high-resolution microscopic techniques are being introduced (PALM, STED, STORM, etc.) that push the resolution limit to few tens of nm, taking us to a new era where ‘seeing is believing'. Having said this, it is to be noted that the world of cells is vast, with information spread from nanometers to millimetres, and also over extended time-period, implying that not just one microscopic technique could acquire all the available information. The knowledge in the field of cell biology comes from a combination of imaging and quantifying techniques that complement one another.Majority of modern-day microscopic techniques focuses on increasing resolution which, is achieved at the expense of cost, compactness, simplicity, and field of view. The substantial decrease in the field of observation limits the visibility to a few single cells at best. Therefore, despite our ability to peer through the cells using increasingly powerful optical instruments, fundamental biology questions remain unanswered at mesoscopic scales. A global view of cell population with significant statistics both in terms of space and time is necessary to understand the dynamics of cell biology, taking in to account the heterogeneity of the population and the cell-cell variability. Mesoscopic information is as important as microscopic information. Although the latter gains access to sub-cellular functions, it is the former that leads to high-throughput, label-free measurements. By focussing on simplicity, cost, feasibility, field of view, and time-lapse in-incubator imaging, we developed ‘Lensfree Video Microscope' based on digital in-line holography that is capable of providing a new perspective to cell culture monitoring by being able to capture the kinetics of thousands of cells simultaneously. In this thesis, we present our lensfree video microscope and its applications in in-vitro cell culture monitoring and quantification.We validated the system by performing more than 20,000 hours of real-time imaging, in diverse conditions (e.g.: 37°C, 4°C, 0% O2, etc.) observing varied cell types and culture conditions (e.g.: primary cells, human stem cells, fibroblasts, endothelial cells, epithelial cells, 2D/3D cell culture, etc.). This permitted us to develop label-free cell based assays to study the major cellular events – cell adhesion and spreading, cell division, cell division orientation, cell migration, cell differentiation, network formation, and cell death. The results that we obtained respect the heterogeneity of the population, cell to cell variability (a raising concern in the biological community) and the massiveness of the population, whilst adhering to the standard cell culture practices - a rare combination that is seldom attained by existing real-time monitoring methods.We believe that our microscope and associated metrics would complement existing techniques by bridging the gap between mesoscopic and microscopic informationBiological studies always start from curious observations. This is exemplified by description of cells for the first time by Robert Hooke in 1665, observed using his microscope. Since then the field of microscopy and cell biology grew hand in hand, with one field pushing the growth of the other and vice-versa. From basic description of cells in 1665, with parallel advancements in microscopy, we have travelled a long way to understand sub-cellular processes and molecular mechanisms. With each day, our understanding of cells increases and several questions are being posed and answered. Several high-resolution microscopic techniques are being introduced (PALM, STED, STORM, etc.) that push the resolution limit to few tens of nm, taking us to a new era where ‘seeing is believing'. Having said this, it is to be noted that the world of cells is vast, with information spread from nanometers to millimetres, and also over extended time-period, implying that not just one microscopic technique could acquire all the available information. The knowledge in the field of cell biology comes from a combination of imaging and quantifying techniques that complement one another.Majority of modern-day microscopic techniques focuses on increasing resolution which, is achieved at the expense of cost, compactness, simplicity, and field of view. The substantial decrease in the field of observation limits the visibility to a few single cells at best. Therefore, despite our ability to peer through the cells using increasingly powerful optical instruments, fundamental biology questions remain unanswered at mesoscopic scales. A global view of cell population with significant statistics both in terms of space and time is necessary to understand the dynamics of cell biology, taking in to account the heterogeneity of the population and the cell-cell variability. Mesoscopic information is as important as microscopic information. Although the latter gains access to sub-cellular functions, it is the former that leads to high-throughput, label-free measurements. By focussing on simplicity, cost, feasibility, field of view, and time-lapse in-incubator imaging, we developed ‘Lensfree Video Microscope' based on digital in-line holography that is capable of providing a new perspective to cell culture monitoring by being able to capture the kinetics of thousands of cells simultaneously. In this thesis, we present our lensfree video microscope and its applications in in-vitro cell culture monitoring and quantification.We validated the system by performing more than 20,000 hours of real-time imaging, in diverse conditions (e.g.: 37°C, 4°C, 0% O2, etc.) observing varied cell types and culture conditions (e.g.: primary cells, human stem cells, fibroblasts, endothelial cells, epithelial cells, 2D/3D cell culture, etc.). This permitted us to develop label-free cell based assays to study the major cellular events – cell adhesion and spreading, cell division, cell division orientation, cell migration, cell differentiation, network formation, and cell death. The results that we obtained respect the heterogeneity of the population, cell to cell variability (a raising concern in the biological community) and the massiveness of the population, whilst adhering to the standard cell culture practices - a rare combination that is seldom attained by existing real-time monitoring methods.We believe that our microscope and associated metrics would complement existing techniques by bridging the gap between mesoscopic and microscopic information
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Chabert, Philippe. „Production d'anticorps monoclonaux par culture cellulaire : applications industrielles“. Lyon 1, 1989. http://www.theses.fr/1989LYO10128.
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Nous avons développé deux techniques de production d'anticorps monoclonaux par culture cellulaire : une technique de culture en supension en fermenteur et une technique de culture sur fibres creuses. L'étude de la production d'anticorps monoclonaux en fermenteur a conduit au développement d'un système ouvert faisant appel à la perfusion de milieu frais en continu grâce à un module de microfiltration en ligne permettant la séparation cellules - milieu de culture tout au long de la culture. Ce système autorise des productions de 1 à 2 grammes d'anticorps monoclonaux par mois sous des volumes de lot de 10 à 20 litres. La culture cellulaire sur fibres creuses repose sur une compartimentation entre les cellules et le milieu de culture circulant, simulant les conditions d'alimentation en nutriments et en gaz observés "in vivo". Le système, grâce à une double circulation de milieu de part et d'autre des fibres, permet des productions selon le clone, de 7 à 15 grammes d'anticorps par mois pour des volumes de récolte de 2 à 5 litres. Le développement de ces deux procédés de production a nécessité la mise au point de milieux de culture définis pour la croissnce et la sécrétion. Ces deux techniques permettent d'obtenir des immunoglobulines ayant les mêmes caractéristiques et au moins les mêmes potentialités que les anticorps produits sur animal
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Berdeu, Anthony. „Imagerie sans lentille 3D pour la culture cellulaire 3D“. Thesis, Université Grenoble Alpes (ComUE), 2017. http://www.theses.fr/2017GREAS036/document.
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Ce travail de thèse se situe à l’interface de deux domaines : la culture cellulaire en trois dimensions et l’imagerie sans lentille.Fournissant un protocole de culture cellulaire plus réaliste sur le plan physiologique, le passage des cultures monocouches (2D) à des cultures tridimensionnelles (3D) - via l’utilisation de gels extracellulaires dans lesquels les cellules peuvent se développer dans les trois dimensions - permet de faire de grandes avancées dans de nombreux domaines en biologie tels que l’organogénèse, l’oncologie et la médecine régénérative. Ces nouveaux objets à étudier crée un besoin en matière d’imagerie 3D.De son côté, l’imagerie sans lentille 2D fournit un moyen robuste, peu cher, sans marquage et non toxique, d’étudier les cultures cellulaires en deux dimensions sur de grandes échelles et sur de longues périodes. Ce type de microscopie enregistre l’image des interférences produites par l’échantillon biologique traversé par une lumière cohérente. Connaissant la physique de la propagation de la lumière, ces hologrammes sont rétro-propagés numériquement pour reconstruire l’objet recherché. L’algorithme de reconstruction remplace les lentilles absentes dans le rôle de la formation de l’image.Le but de cette thèse est de montrer la possibilité d’adapter cette technologie sans lentille à l’imagerie des cultures cellulaires en 3D. De nouveaux prototypes de microscopes sans lentille sont conçus en parallèle du développement d’algorithmes de reconstructions tomographiques dédiés.Concernant les prototypes, plusieurs solutions sont testées pour converger vers un schéma alliant deux conditions. La première est le choix de la simplicité d’utilisation avec une culture cellulaire en boîte de Petri standard et ne nécessitant aucune préparation spécifique ou aucun changement de contenant. Cette condition entraînant de fortes contraintes géométriques sur l’architecture, la deuxième est de trouver la meilleure couverture angulaire possible des angles d’éclairage. Enfin, une version adaptée aux conditions en incubateur est développée et testée avec succès.Concernant les algorithmes, quatre types de solutions sont proposés, basées sur le théorème de diffraction de Fourier classiquement utilisé en tomographie diffractive optique. Toutes cherchent à corriger deux problèmes inhérents au microscope sans lentille : l’absence de l’information de phase, le capteur n’étant sensible qu’à l’intensité de l’onde reçue, et la couverture angulaire limitée. Le premier algorithme se limite à remplacer la phase inconnue par celle d’une onde incidente plane. Rapide, cette méthode est néanmoins source de nombreux artefacts. La deuxième solution, en approximant l’objet 3D inconnu par un plan moyen, utilise les outils de la microscopie sans lentille 2D pour retrouver cette phase manquante via une approche inverse. La troisième solution consiste à implémenter une approche inverse régularisée sur l’objet 3D à reconstruire. C’est la méthode la plus efficace pour compenser les deux problèmes mentionnés, mais elle est très lente. La quatrième et dernière solution est basée sur un algorithme de type Gerchberg-Saxton modifié avec une étape de régularisation sur l’objet.Toutes ces méthodes sont comparées et testées avec succès sur des simulations numériques et des données expérimentales. Des comparaisons avec des acquisitions au microscope classique montrent la validité des reconstructions en matière de tailles et de formes des objets reconstruits ainsi que la précision de leur positionnement tridimensionnel. Elles permettent de reconstruire des volumes de plusieurs dizaines de millimètres cubes de cultures cellulaires 3D, inaccessibles en microscopie standard.Par ailleurs, les données spatio-temporelles obtenues avec succès en incubateur montrent aussi la pertinence de ce type d’imagerie en mettant en évidence des interactions dynamiques sur de grandes échelles des cellules entres elles ainsi qu’avec leur environnement tridimensionnelThis PhD work is at the interface of two fields: 3D cell culture and lens-free imaging.Providing a more realistic cell culture protocol on the physiological level, switching from single-layer (2D) cultures to three-dimensional (3D) cultures - via the use of extracellular gel in which cells can grow in three dimensions - is at the origin of several breakthroughs in several fields such as developmental biology, oncology and regenerative medicine. The study of these new 3D structures creates a need in terms of 3D imaging.On another side, 2D lens-free imaging provides a robust, inexpensive, non-labeling and non-toxic tool to study cell cultures in two dimensions over large scales and over long periods of time. This type of microscopy records the interferences produced by a coherent light scattered by the biological sample. Knowing the physics of the light propagation, these holograms are retro-propagated numerically to reconstruct the unknown object. The reconstruction algorithm replaces the absent lenses in the role of image formation.The aim of this PhD is to show the possibility of adapting this lens-free technology for imaging 3D cell culture. New lens-free microscopes are designed and built along with the development of dedicated tomographic reconstruction algorithms.Concerning the prototypes, several solutions are tested to finally converge to a scheme combining two conditions. The first requirement is the choice of simplicity of use with a cell culture in standard Petri dish and requiring no specific preparation or change of container. The second condition is to find the best possible angular coverage of lighting angles in regards of the geometric constraint imposed by the first requirement. Finally, an incubator-proof version is successfully built and tested.Regarding the algorithms, four major types of solutions are implemented, all based on the Fourier diffraction theorem, conventionally used in optical diffractive tomography. All methods aim to correct two inherent problems of a lens-free microscope: the absence of phase information, the sensor being sensitive only to the intensity of the incident wave, and the limited angular coverage. The first algorithm simply replaces the unknown phase with that of an incident plane wave. However, this method is fast but it is the source of many artifacts. The second solution tries to estimate the missing phase by approximating the unknown object by an average plane and uses the tools of the 2D lens-free microscopy to recover the missing phase in an inverse problem approach. The third solution consists in implementing a regularized inverse problem approach on the 3D object to reconstruct. This is the most effective method to deal with the two problems mentioned above but it is very slow. The fourth and last solution is based on a modified Gerchberg-Saxton algorithm with a regularization step on the object.All these methods are compared and tested successfully on numerical simulations and experimental data. Comparisons with conventional microscope acquisitions show the validity of the reconstructions in terms of shape and positioning of the retrieved objects as well as the accuracy of their three-dimensional positioning. Biological samples are reconstructed with volumes of several tens of cubic millimeters, inaccessible in standard microscopy.Moreover, 3D time-lapse data successfully obtained in incubators show the relevance of this type of imaging by highlighting large-scale interactions between cells or between cells and their three-dimensional environment
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Mode, Franck. „Culture de meristemes de vigne : application a la regeneration de plantes et au transfert de genes“. Reims, 2000. http://www.theses.fr/2000REIMS010.
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Notre objectif etait d'utiliser le meristeme caulinaire vegetatif comme cible a l'introduction de genes etrangers et a la regeneration de plants de vignes. Nous nous sommes plus particulierement interesses aux genotypes champenois : 41b, chardonnay, pinot noir et pinot meunier. Pour mener de tels travaux, nous devions disposer de vitroplants de qualite. L'utilisation de macroelements particuliers, mm ou sh selon les genotypes, a permis l'obtention de vitroplants sains, homogenes et vigoureux sur lesquels etaient preleves les bourgeons axillaires. Les explants nodaux avaient le dome meristematique parfaitement accessible et degage pour le transfert de genes. La taille de l'explant, la balance hormonale et le deroulement de la culture en 2 phases avaient un role determinant sur l'allongement et sur la proliferation de pousses. La maitrise de ces parametres a permis d'obtenir des pousses multiples a raison de 2,9 a 5,2 pousses par explant pendant une periode de 6 mois. C'est la premiere fois que l'ensemble des varietes champenoises a pu etre regenere in vitro par un meme procede. L'analyse de l'expression transitoire du gene uida, introduit grace au helios gene gun a mis en evidence la possibilite d'exprimer le gene uida dans les cellules du dome meristematique de vigne. Il est egalement possible d'introduire et d'exprimer un transgene dans les cellules meristematiques d'explants nodaux de vigne suite a la coculture avec a. Tumefaciens. Nous avons pu mettre en evidence le role essentiel de l'acetosyringone ainsi que de la balance hormonale durant la coculture et nous avons detecte l'expression du gene uida sur pres de 2% des domes meristematiques, 6 jours apres la coculture. Ce travail montre donc que l'utilisation de meristemes caulinaires comme cible au transfert de gene, par biolistique ou par a. Tumefaciens, est envisageable chez la vigne.
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Borenstein, Nicolas. „Cardiomyoplastie cellulaire avec une préparation cellulaire sans culture pour le traitement de pathologies cardiaques non ischémiques“. Paris 7, 2007. http://www.theses.fr/2007PA077029.
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L'insuffisance cardiaque se définit comme une inadéquation entre les besoins métaboliques et la capacité du cœur à assurer son rôle de pompe. Le concept de la transplantation de cellules souches ou progénitrices dans le myocarde pathologique pourrait être prévenue par l'apport précoce de cellules myogéniques. Cette « cardiomyoplastie cellulaire » a pour but ultime une amélioration des performances contractiles du coeur. Le travail présenté ici est le fruit d'une collaboration entre un centre de recherche chirurgical (IMM Recherche), et une unité de l'Institut Pasteur, spécialisée dans la biologie du développement et en particulier dans la myogenèse. Une grosse partie de l'étude a été de développer un modèle fiable et reproductible de cardiomyopathie dilatée sur un gros animal, le mouton. Parallèlement, la validation des techniques de préparation cellulaire sans culture a été entreprise. L'absence de culture est ici le cœur de l'originalité de notre démarche. Nos premières tentatives de faisabilité ont apporté formellement la preuve de la possibilité de ne pas cultiver les cellules satellites et de les voir se développer dans le myocarde sain. Cette préparation cellulaire a ensuite été implantée de manière autologue sur un modèle de préparation ventriculaire droite avant détransposition, puis sur le modèle de cardiomyopathie dilatée. Nos résultats démontrent bien une amélioration fonctionnelle sur ce dernier modèle. Une partie centrale de notre démarche a également été de valider des méthodes de traçage cellulaire, par des méthodes chimiques, puis par l'exploitation d'un modèle porcin très consanguin, permettant, en théorie, la greffe de cellules mâles chez les femellesHeart failure is defined as a state of imbalance between metabolic needs and the capacity of the heart to work efficiently as a pump. The concept of transplantation of stem or progenitor cells in diseased myocardium in order to improve contractile performances of the heart is also known as cellular cardiomyoplasty. Our work stems from a collaboration between a large animal surgical facilty (IMM Recherche) and a more fundamental unit specialized in myogenesis at Institut Pasteur. Our work focused on the potential benefit of cellular transplantation with non cultured cells, obtained from a muscle biopsy, into overtoaded right ventricle (detransposition model in the lamb) or dysfunctional myocardium (dilated cardiomyopathy model in the adult sheep). We could demonstrate functional improvement in the latter model. In parallel, we sought to validate chemical markers for cellular tracking upon grafting and we finalized our project with the validation of an original, highly inbred porcine model, in order to track, with genetic molecular biology techniques, male cells into female myocardium
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Lukyanova, Lyubov. „Préparation de matrices microporeuses d'organogel et évaluation en culture cellulaire“. Toulouse 3, 2009. http://thesesups.ups-tlse.fr/491/.
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Ce travail décrit l'élaboration et la caractérisation d'une nouvelle famille de matériaux "mous" pour des applications en génie tissulaire. Les sont préparés à partir d'un organogélifiant de faible masse, l'acide 12-hydroxystéarique (HSA) et d'huiles (triglycérides caprique/caprylique ou huile de soja). La technique de dissolution de particules à partir de gabarits préformés (sel, sucre, sucre glace) permet d'introduire une microporosité contrôlée à l'intérieur des organogels. La microscopie électronique à balayage et la microtomographie X révèlent l'architecture 3D de ces matrices microporeuses (10-500µm). La porosité effective se situe entre 55-70%. Les échanges liquides évalués par conductimétrie ont également montrés un bon niveau d'écoulement. Les matériaux élaborés sont biodégradables et peuvent être détruits en présence de lipases pancréatiques. La tenue mécanique des matrices (module d'Young de 10-75 kPa) est tout à fait adaptée pour la reconstruction de tissus mous. L'évaluation biologique in vitro avec les fibroblastes CHO montre que la matrice à base d'huile de soja obtenue à partir d'un gabarit de sucre favorise non seulement la survie et la prolifération significative des cellules, mais en plus, elle permet également la synthèse de collagène. Les résultats obtenus démontrent que ces matériaux biocompatibles et biodégradables offrent une porosité et une microarchitecture appropriées à des applications en génie tissulaireThe present work is focused on the design of a new family of soft materials, microporous organogels as matrices for tissue engineering applications. These microporous organogels matrices were prepared from biocompatible components: low-molecular weight organogelator, 12-hydroxystearic acid (HSA), and oils (caprylic/capric triglyceride or soybean oil). Particulate leaching technique with predesigned leachable sugar, salt and powdered sugar templates was used for controlled porosity introduction into the basic organogel materials. The scanning electron microscopy and microtomography reconstruction revealed the microporous architecture of these soft organogel scaffolds (10-500µm). The effective porosity was in the range of 55-70%. Conductometric investigation of draining process showed a good level of fluid exchange in the microporous matrices. The microporous organogels are enzymatically biodegradable by pancreatic lipase. The Young's moduli of resulted porous scaffolds (10-75 kPa) corresponded well to soft tissue reconstruction applications. The biological in vitro experiments with fibroblasts (CHO) showed the significant survival and proliferation of fibroblasts on sugar soybean templated scaffolds and, moreover, the collagen synthesis. The results demonstrate that designed biocompatible and biodegradable caprylic/capric triglyceride and soybean oil microporous organogels with an appropriate porosity and microarchitecture can be potential candidates as artificial extracellular matrixes for tissue engineering applications
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Waffo, Teguo Pierre. „Production de polyphénols par culture in vitro de cellules de vigne : isolement des catéchines et d'un stilbène“. Bordeaux 2, 1995. http://www.theses.fr/1995BOR2P089.
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Cotte, Laurent. „Culture du vih1 : interet pronostique et therapeutique“. Lyon 1, 1990. http://www.theses.fr/1990LYO1M310.
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WASSNER, ELISABETH. „Les milieux sans serums et les substituts de serums : revue generale et etude de deux produits de substitution : le serasup et le syntheserum“. Strasbourg 1, 1990. http://www.theses.fr/1990STR15036.
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ZAMITH, CHRISTIAN. „Le laboratoire de culture de peau au centre hospitalier universitaire de Toulouse Rangueil“. Toulouse 3, 1989. http://www.theses.fr/1989TOU31291.
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Hahn, Franziska. „Échafaudages microporeux et électroactifs 4D comme plateforme innovante de culture cellulaire“. Electronic Thesis or Diss., CY Cergy Paris Université, 2024. http://www.theses.fr/2024CYUN1333.
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In vivo, les cellules sont situées dans un microenvironnement poreux et dynamique en 3D qui fournit des signaux biochimiques et biophysiques ainsi que des signaux dynamiques influençant le comportement des cellules dans des contextes physiologiques et pathologiques. Afin de mieux reproduire ces conditions in vitro pour des applications en biologie cellulaire fondamentale, en ingénierie tissulaire et en dépistage de médicaments, cette thèse présente le développement d'échafaudages 4D électro-actifs, combinant une architecture 3D passive et microporeuse nommée polyHIPE et un polymère électroactif, PEDOT. Ces échafaudages servent de plateforme de culture cellulaire dynamique capable de délivrer une stimulation électromécanique. L'étude s'est d'abord concentrée sur la synthèse et la caractérisation des échafaudages polyHIPE-PEDOT électroactifs, qui ont présenté une structure hautement poreuse (10 à 100 µm) et interconnectée, bénéfique pour une colonisation cellulaire rapide. Notamment, ces échafaudages peuvent subir des changements volumétriques en réponse à une stimulation électrique. La deuxième partie de ce travail a porté sur l’évaluation de la compatibilité des échafaudages polyHIPE-PEDOT avec les exigences de la culture cellulaire. Les échafaudages se sont révélés cytocompatibles, favorisant l'adhésion, la migration et la prolifération des cellules. Les cellules à l'intérieur de l'échafaudage ont adopté une morphologie cellulaire fusiforme typique des micro-environnements cellulaires 3D et ont synthétisé de la fibronectine, une protéine de la matrice extracellulaire essentielle pour les interactions cellule-matrice. Dans la troisième partie de cette thèse, un dispositif de stimulation électromécanique adapté aux études de culture cellulaire in vitro (plaque à 6 puits) et à l'imagerie des cellules vivantes (boîte de Petri à fond de verre) a été développé. Un protocole de stimulation a été déterminé et n'a pas induit d'effets cytotoxiques aigus. Après stimulation, les cellules présentent une morphologie hétérogène, cependant, elles sont restées attacher dans la structure poreuse de l'échafaudage. Différentes sondes employées pour marquer des cellules vivantes ont permis de suivre en temps réel la dynamique cellulaire pendant la stimulation électromécanique. En outre, les cellules stimulées présentaient un profil de cytokines différent de celui des cellules non stimulées. Ainsi, cette thèse a démontré la preuve de concept de l'échafaudage polyHIPE-PEDOT électroactif en tant qu'outil pour la culture cellulaire 4D et pour de futures études de mécanobiologieIn vivo, cells are situated within a 3D porous and dynamic microenvironment that provides biochemical and biophysical cues as well as dynamic signals influencing cell behavior across physiological and pathological contexts. To better replicate these conditions in vitro for applications in fundamental cell biology, tissue engineering, and drug screening this thesis presents the development of 4D electroactive scaffolds, combining a 3D passive microporous polyHIPE architecture and an electroactive polymer, PEDOT. These scaffolds serve as a dynamic cell culture platform capable to deliver electromechanical stimulation. The study first focused on the synthesis and characterization of electroactive polyHIPE-PEDOT scaffolds, which demonstrated a highly porous (10 to 100 µm) and interconnective structure beneficial for rapid cell colonization. Notably, these scaffolds could undergo volumetric changes in response to electrical stimulation. The second part of this work focused the polyHIPE-PEDOT scaffolds were found to be suitable for cell culture applications. The scaffolds were found to be cytocompatible, supporting cell adhesion, migration and proliferation. Cells within the scaffold adopted a spindle-like cell morphology typical of 3D cell microenvironments and synthesized fibronectin, an extracellular matrix protein essential for cell-matrix interactions. In the third part of this thesis, an electromechanical stimulation device suitable for in vitro cell culture studies (6-well cell culture plate) and live cell imaging (glass bottomed petri dish) was developed. A stimulation protocol was established and did not induce acute cytotoxic effects. After stimulation, cells exhibited heterogenic cell morphology, however, remained spread within the porous structure of the scaffold. Different live cell probes allowed the real-time monitoring of the cell dynamics during electromechanical stimulation. Furthermore, the stimulated cells exhibited different cytokine profile compared to non-stimulated cells. Thus, this thesis demonstrated the proof of concept of the electroactive polyHIPE-PEDOT scaffold as a tool for 4D cell culture and for future mechanobiological studies
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Charbaji, Tarif. „Effet du chlorure de sodium sur la vigne en culture hors sol (Vitis vinifera C. V. Cabernet Sauvignon - C. V. 101-14 M. Et G. )“. Toulouse, INPT, 1988. http://www.theses.fr/1988INPT007A.
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Les plantes ont ete cultivees pendant trois ans en milieu hydroponique; on observe un effet benefique sur la croissance et le developpement de tous les organes vegetaifs aux doses de 2-15 meq. Le nacl apporte a 80 meq. L**(-1) a determine un effet depressif sur la croissance accompagne d'une floraison et d'une maturite plus avancees. L'equilibre mineral du vegetal est perturbe: antagonisme k-na, accumulation de na, cl et so::(4), appauvrisement de ca. On mesure une diminution de la resistance stomatique
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Carbonell, Delphine. „Étude de la détoxication des milieux de culture cellulaire : application à l'élimination de l'ammoniaque“. Nancy 1, 1992. http://www.theses.fr/1992NAN10171.
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Actuellement, la production industrielle de molécules biologiques à haute valeur ajoutée est essentiellement assurée par des cellules animales cultivées in vitro, en mode batch ou fed batch. La productivité des cultures est cependant limitée par la mort rapide des cellules, généralement attribuée à l'épuisement de nutriments et/ou a l'accumulation de métabolites toxiques. L'ammoniaque représente un des principaux composes incrimines dans la toxicité des cultures. Cinq procédés de détoxication, destines à l'éliminer en continu et stérilement des milieux, sont expérimentés: deux procédés biologiques, reposant sur la mise en œuvre d'une réaction catalysée par une enzyme, la glutamate déshydrogénase ou la glutamine synthétase, trois procédés physico-chimiques, représentés par le stripping, l'utilisation de clinoptilolite et l'application de membranes hydrophobes microporeuses. L'examen des résultats obtenus a conduit au développement des deux systèmes les plus performants, bases l'un sur l'élimination des ions ammonium par échange d'ions sur clinoptilolite, l'autre sur l'extraction de l'ammoniac à travers des membranes hydrophobes microporeuses. Leurs paramètres de fonctionnement ont été déterminés de manière à pouvoir maintenir la concentration extracellulaire de l'ammoniaque inferieure à 1 mm. Le couplage de ces deux systèmes de détoxication à des cultures d'hybridomes a permis le maintien de la concentration extracellulaire de l'ammoniaque à des faibles valeurs
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Lhoste, Kévin. „Développement de PVDF micro et nanostructures pour des études de culture cellulaire“. Phd thesis, Université René Descartes - Paris V, 2012. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00790208.
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L'ingénierie tissulaire vise à réparer les tissus endommagés et à récupérer les fonctions biologiques correspondantes. Afin de restaurer un tissu endommagé tel que le système nerveux, la conception et la fabrication de nouveaux types d'échafaudages tissulaires sont nécessaires. Dans ce travail, nous avons développé plusieurs techniques de microfabrication pour le polyfluorure de vinylidène (PVDF), un fluoropolymère thermoplastique, non réactif et piézoélectrique, qui peut être utilisé pour la culture cellulaire et l'ingénierie tissulaire. Nous avons tout d'abord étudié l'adhésion et la croissance cellulaire sur des substrats en PVDF avec des motifs micro et nanométriques en utilisant différentes techniques de fabrication telles que la micro-photolithographie, la lithographie douce, l'impression par microcontact, etc. L'influence de la micro-structuration sur les activités piézo-électriques du PVDF a été caractérisée par différentes méthodes d'analyses de surface (FTIR, XRD). Par la suite, nous avons effectué une étude systématique sur la fabrication de nanofibres de PVDF et leur compatibilité avec la culture cellulaire. Enfin, nous avons démontré la possibilité de doper ces nanofibres avec des nanoparticules magnétiques ce qui les rends excitables à distance par un champ magnétique.
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Soudry, Maurice. „Capacités biostimulatrices d'un laser hélium-Néon : étude in vitro par culture cellulaire“. Aix-Marseille 2, 1987. http://www.theses.fr/1987AIX21502.
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Chartois, Anne-Gaele. „Culture cellulaire de toxoplasma gondii : application au diagnostic anténatal de toxoplasmose congénitale“. Bordeaux 2, 1990. http://www.theses.fr/1990BOR23086.
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Ouali, Tarak. „Culture d'Escherichia coli B et de Bacillus subtils en forte concentration cellulaire“. Compiègne, 1986. http://www.theses.fr/1986COMPI238.
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Dans la littérature, les stratégies essentielles suivies pour l’obtention d’une forte densité cellulaire sont les cultures avec addition adéquate de nutriments, y compris l’oxygène, les cultures avec ajout de substrat en fonction d’une valeur constante d’oxygène dissous, l’utilisation de l’oxygène pur avec contrôle de l’oxygène dissous, la dialyse et le recyclage cellulaire. Cependant, les contraintes observées sont : 1) le maintien d’un oxygène dissous (O. D) constant et la toxicité liée à l’utilisation de l’oxygène pur, 2) l’accumulation de métabolites inhibiteurs de la croissance, 3) l’inhibition due à des fortes pressions en CO2. Notre démarche est basée sur la réduction de la production de métabolites (acide acétique), vu qu’ils sont formés même en présence d’un excès d’oxygène, par le contrôle du taux de croissance spécifique « relatif » d’Escherichia coli par la réduction de la concentration de l’extrait de levure et le contrôle d’ajout du glucose à la fin de la culture. La production de métabolites est alors maintenue à un niveau faible et la croissance est prolongée jusqu'à 125 g/l poids sec. Cette biomasse correspond à 51-53 % de la biomasse théorique maximale. Cependant ceci ne peut être généralisé à toutes les espèces bactériennes. En effet, Bacillus subtilis croît en produisant une quantité très importante de métabolites, le rapport acétoïne /biomasse est constant ; par conséquent, la production de métabolites ne peut être contrôlée à des valeurs faibles à fortes biomasses. La biomasse maximale obtenue est de l’ordre de 60 g/l poids sec, des concentrations importantes d’acétoïne et de CO2, à la fin de la culture, sont observées.
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Ouali, Tarak. „Culture d'Escherichia coli B et de Bacillus subtilis en forte concentration cellulaire“. Grenoble 2 : ANRT, 1986. http://catalogue.bnf.fr/ark:/12148/cb376001506.
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Larronde, Fabienne. „Régulation de la biosynthèse des anthocyanes et des stilbènes par les sucres et le méthyl jasmonate chez Vitis vinifera : induction des défenses naturelles de la vigne“. Bordeaux 2, 2000. http://www.theses.fr/2000BOR28796.
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MALGARINI-CLOG, ELISABETH. „Culture in vitro de la vigne. Mise au point de techniques nouvelles de regeneration. Culture de protoplastes et contribution a la mise au point d'un protocole d'infection de protoplastes par les arn viraux du grapevine fanleaf virus, agent du court-noue de la vigne“. Strasbourg 1, 1992. http://www.theses.fr/1992STR13135.
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La vigne, plante ligneuse perenne, est sensible a de nombreux pathogenes et notamment aux virus. Deux nepovirus, le gf1v (grapevine fanleaf virus) et l'armv (arabis mosaic virus) sont responsables en france et dans de nombreux pays de la maladie du court-noue de la vigne. L'etude moleculaire d'une souche particuliere, gf1v f13, a permis de positionner les differents genes impliques dans la replication virale. L'introduction de genes viraux dans le genome des plantes est un moyen de lutte efficace contre l'infection virale chez de nombreuses especes. Avant d'aborder de tels programmes, il est necessaire de disposer de systemes de regeneration performants utilisables dans le cadre de l'amelioration genetique de cette espece qui permettront de restituer a partir d'un organe ou de protoplastes des plantes entieres conformes. Le but de cette these fut la mise au point de systemes de regeneration nouveaux et performants. Une organogenese de type caulinaire a ete obtenue, directement ou non, a partir de limbes foliaires et de portions d'entre-nuds. Des analyses histologiques ont permis de preciser l'origine des cals et des neoformations caulinaires produits. L'etude du processus de regeneration a partir de protoplastes a egalement ete engagee et l'influence de differents parametres susceptibles d'inflechir le deroulement de la culture ont ete etudies. Des microcals ont ete obtenus pour tous les genotypes utilises. L'efficacite d'etalement a ete notamment amelioree mais aucune plante entiere n'a pu etre regeneree. Nous avons mene, parallelement a ces manipulations, des experiences conduisant a la mise au point d'un protocole d'infection de protoplastes de vigne par les arn viraux du court-noue. C'est la premiere fois qu'un tel protocole est decrit pour la vigne
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Le, Sceller Annie. „Les techniques de culture des cellules de la peau“. Bordeaux 2, 1988. http://www.theses.fr/1988BOR2P121.
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Drian, Marie-Jeanne. „Effets des agonistes et antagonistes des récepteurs ionotropiques du glutamate sur la survie et la différenciation des cellules néopalliales de rat en culture“. Paris, EPHE, 2000. http://www.theses.fr/2000EPHE3038.
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Des récepteurs ionotropiques du glutamate sont déjà exprimés par des cellules immatures du système nerveux en voie de développement. Nous avons étudié les effets des agonistes et antagonistes de ces récepteurs sur des cellules dissociées de néopallium de rat en culture. Le blocage ou la stimulation des récepteurs du NMDA ne rnodifient la survie des cellules que s'ils sont effectués à un stade relativement avancé de la maturation in vitro. En revanche, des antagonistes compétitifs et non-compétitifs des- récepteurs AMPA/kai͏̈nate, appliqués dans un créneau temporel précis correspondant à un stade plus précoce, provoquent la mort de nombreuses cellules, principalement de neurones. La mort cellulaire est en grande partie de type apoptotique. Le nombre de cellules en prolifération est diminué. Ces effets peuvent être bloqués par la co-application d'un agoniste. Lorsque le traitement est administré plus tard, le taux de prolifération est augmenté et la mort cellulaire est diminuée. L'exposition au kai͏̈nate, même à haute dose, n'a aucun effet en termes de nombre de cellules si elle survient pendant les 4 premiers jours en culture. Cependant, ce type de traitement agit sur d'autres paramètres: elle diminue le nombre de cellules détectables par le marquage au cobalt. Contrairement au traitement précoce, I'exposition à un agoniste à des stades plus tardifs provoque une mort cellulaire rapide, plutôt de type nécrotique. Cet effet peut être bloqué parco-application d'un antagoniste. Le taux de prolifération n'est pas affecté. Ces résultats suggèrent que des cellules immatures du futur néocortex ont besoin d'un niveau approprié d'activation de leurs récepteurs AMPA/kai͏̈nate en fonction de leur stade de maturation.
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Spilmont, Christophe. „Morphogenese et activite secretoire des cellules glandulaires tracheales humaines en culture tridimensionnelle“. Reims, 1993. http://www.theses.fr/1993REIMM203.
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Gagné, Benoît. „Étude de l'effet neuroprotecteur des phytoestrogènes sur le stress oxydatif en culture cellulaire /“. Trois-Rivières : Université du Québec à Trois-Rivières, 2003. http://www.uqtr.ca/biblio/notice/resume/17806797R.html.
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Sukmana, Irza. „Développement d'un système tridimentionnel de culture cellulaire pour orienter la formation de microvaisseaux“. Thèse, Université de Sherbrooke, 2010. http://savoirs.usherbrooke.ca/handle/11143/1944.
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The development of functional and oriented microvessels within tissue constructs is a tremendous challenge in tissue engineering and regenerative medicine. It is justified by the need to allow better nutrient and oxygen supply and waste removal within the core of tissue constructs. It is one of the reasons why only few tissue substitutes are available to clinicians. Therefore, the focus of many research studies in the field of tissue engineering has been placed on promoting microvessel ingrowth inside tissue constructs prior to their implantation, as presented in Chapter 1. This process is often referred to as pre-vascularization. As such, Chapter 2 of this thesis is devoted to review the recent development and future challenges related to the microvascularization process of tissue constructs.The experimental work in this thesis is based on the hypothesis that polymer monofilaments precisely distanced from each others can be used to guide endothelial cells when dispersed in a (fibrin) gel and to induce tube-like structures in a directional fashion. In Chapter 3 of this thesis, the use of polymer fibres as contact guidance of endothelial cells to orient microvessel formation and development in a three-dimensional environment was validated.The novel cell attachment method described in Chapter 3 has resulted in an increase in Human Umbilical Vein Endothelial Cell (HUVEC) adhesion and spreading on bare poly(ethylene terephthalate) (PET) fibres. Furthermore, HUVEC-covered fibres were sandwiched between fibrin gels to allow the development of microvessels. Angiogenesis development was characterized and evaluated using a number of imaging techniques, including fluorescence microscopy and confocal microscopy. After 4 days of culture, microvessels formed large tube-like structures (diameter of approximately 100 [micro]m) between adjacent fibres distanced by 0.1mm. This proof-of-concept opens the door to other experiments and to possibility of scaling the system to bioreactor cultures. In Chapter 4, the effect of human fibroblasts and in another set of experiments, the influence of two angiogenic growth factors (i.e., Vascular Endothelial Growth Factor (VEGF) and basic Fibroblast Growth Factor (bFGF)) over the responses of the HUVEC-covered fibres sandwiched in fibrin were investigated.The development and maturation of microvessels as well as the assessment of lumen formation were evaluated using a fluorescent fibrin matrix, confocal microscopy and histology. Histology and fluorescent fibrin experiments confirmed that these microvessel-like structures formed between polymer monofilaments embedded in fibrin contained a lumen.The effects of VEGF and bFGF were dose dependent. Furthermore, the use of fibroblasts significantly improved the maturation of the microvessels compared to control and to samples cultured with VEGF and bFGF. Conclusions and suggested future work are presented in Chapter 5. Appendices A and B present the detailed protocols used to label cells in this study and general information about cell cytoskeleton, respectively.
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Ni, Xiaofang. „Culture et différenciation cellulaire sur des substrats structurés et dans des dispositifs microfluidiques“. Paris 6, 2009. http://www.theses.fr/2009PA066666.
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Les technologies de nanofabrication et de microfluidique sont aujourd'hui largement utilisées pour les études de la biologie cellulaire. Il est particulièrement intéressant d'utiliser ces nouvelles technologies afin de contrôler plus précisément la culture et la différenciation des cellules souches. Tout d'abord, deux nouvelles méthodes de lithographie, i. E. , la micro-aspiration par dégazage et la nano-impression UV molle sont présentées, en tenant compte des exigences pour la culture cellulaire. Des motifs de protéines ont été également obtenus dans des dispositifs microfluidiques, permettant de contrôler le positionnement cellulaire dans un micro-environnement particulier. Ensuite, de nouveaux dispositifs microfluidiques ont été conçus et utilisés pour évaluer la performance de la culture et la différenciation des cellules souches embryonnaires. Puis, en adaptant les protocoles existants et utilisant des chambres microfluidique à plusieurs compartiments, nous avons démontré la différenciation de cellules souches mésenchymateuses vers des cellules adipogéniques et cellules neurales. Enfin, la formation des réseaux cellulaires a été étudiée en utilisant les deux types de cellules souches et de facteurs de différentiation neuronale. En plus, nous avons initié des essais sur la fabrication des réseaux de micro-électrodes et le test de culture cellulaire sur ces réseaux afin de démontrer la transduction du signal de neurones sur puce.
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Gagné, Benoît. „Étude de l'effet neuroprotecteur des phytoestrogènes sur le stress oxydatif en culture cellulaire“. Thèse, Université du Québec à Trois-Rivières, 2003. http://depot-e.uqtr.ca/4537/1/000105230.pdf.
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Abeille, Fabien. „Automatisation et intégration d'un réacteur de culture cellulaire pour un fonctionnement en continu“. Thesis, Grenoble, 2014. http://www.theses.fr/2014GRENS036/document.
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Au cours des six dernières décennies, la culture cellulaire est devenue une pratique courante. Elle est un outil majeur de la recherche biologique pour la compréhension du vivant, l'étude de maladies et la découverte de nouveaux médicaments. Elle représente un outil très répandu dans de nombreuses industries étant impliquées dans la production de produits alimentaires, cosmétiques et pharmaceutiques.Cependant, les cultures cellulaires en recherche et en industrie sont aujourd'hui confrontées à des limites et soulèvent des besoins à satisfaire. Elles sont toutes deux associées à des coûts élevés du fait des ressources nécessaires (cellules, réactifs, opérateurs qualifiés). Plus précisément, la culture en recherche est caractérisée par le faible débit des expériences, une variabilité importante et un risque de contamination due à la répétition d'opérations manuelles. De plus, les expériences de culture sont effectuées dans des conditions statiques et sur des modèles (cultures 2D, animaux...) relativement éloignés de la physiologie humaine. La culture cellulaire industrielle, quant à elle, a besoin de systèmes miniaturisés qui miment les procédés des bioréacteurs à grande échelle et qui offrent des possibilités de criblage plus élevés.Les systèmes de culture microfluidique représentent un outil prometteur pour résoudre ces problèmes et ces besoins. Le changement de comportement de la physique à petite échelle dans ces dispositifs permet de contrôler temporellement et spatialement le microenvironnement des cellules. Ce qui n'est pas possible avec des méthodes de culture classiques. Le degré d'automatisation et d'intégration permet une nette augmentation du nombre d'expériences par système et la réduction conséquente de la consommation de ressources. Ainsi, de nombreuses petites architectures 3D cellulaires cultivées dans des conditions dynamiques et à haut débit ont été réalisées et ont démontré leur capacité à recréer rapidement des environnements plus physiologiques. En ce qui concerne la culture industrielle, des cultures miniaturisées ont déjà montré leur capacité à reproduire les caractéristiques observées dans les macrobioreactors avec des possibilités de criblages élevées.Dans ce contexte, un bioréacteur microfluidique de paillasse, se conformant aux formats standards utilisés dans le laboratoire d'accueil, a été fabriqué avec succès au cours de cette thèse pour effectuer des cultures cellulaires en continu. Des solutions intégrées ont été mises au point pour fournir de façon continue les conditions adéquates pour la prolifération cellulaire (perfusion, régulation de température…). Des études ont également été menées afin d'automatiser la récolte des cellules avec pour but final de cultiver ces cellules sur du long terme dans le bioréacteur.Le système fabriqué garantit ainsi des conditions stériles pour les cultures sur un simple banc de laboratoire. En outre, ces cultures ont été réalisées de façon autonome sans utiliser un incubateur encombrant. Dans ces conditions, le bioréacteur permet de réaliser des cultures en continu de divers types cellulaires sur plusieurs jours: des cellules d'insectes ont été cultivées pendant 5 jours et des cellules de mammifère pendant 3 jours. En ce qui concerne les cultures de cellules de mammifère, une avancée majeure a été effectuée par rapport aux cultures réalisées dans les systèmes microfluidiques en utilisant comme support de culture des microporteurs (diam. : 175 µm).Bien que la culture de cellules sur microporteurs soit réalisée en routine dans l'industrie, aucun système de culture microfluidique autonome n'a encore intégré ce type de culture. Ce genre de miniaturisation est une avancée majeure pour des applications en bioprocédés où il devrait permettre de raccourcir et réduire les coûts associés au développement de bioproduitsOver the past six decades, cell culture has become a common practice. It is a major tool in biological research for the understanding of life science, such as the study of disease and the discovery of new drugs. It plays an important role in many industries since it is involved in the production of many food, cosmetic, and pharmaceutical products.However, Research and the industry are now facing some limits and are expressing needs to be addressed. They are both associated with high costs due to a large consumption of resources (cells, reagents, qualified operators). More specifically, cell culture in research is characterized by low throughput of experiments, important variability and risk of contamination due to the recurrent manual operations performed by operators. Additionally, experiments are performed in static conditions and on models (2D cultures, animals…) which poorly resemble the human physiology. Industrial cell culture needs miniaturized systems that mimic the large scale bioreactors and offer higher screening possibilities.Microfluidic cell culture systems represent a promising tool to address the aforementioned issues and needs. The change of physical behaviors at the small-scale in microfluidic devices allow controlling temporally and spatially the cell microenvironment, unattainable with conventional cell culture methods. The level of automation and integration allows the substantial increase of the number of experience per system and considerable reduction of resource consumption. Thus, many small cellular 3D architectures grown under dynamic conditions and in high-throughput have been performed and have demonstrated their ability to quickly re-create more physiological environments. Regarding the industrial culture, miniaturized cultures have already shown their ability to reproduce the characteristics of the culture observed in macrobioreactors with higher screening capabilities.In this framework, a benchtop microfluidic bioreactor, complying with the standard microfluidic platform and format used in the host laboratory, has been successfully fabricated to perform continuous cell cultures. Integrated solutions were developed to provide continuously the adequate conditions for cell proliferation (perfusion, thermal regulation…). Integrated cell harvest was also performed with the final goal to achieve long-term cell culture in the bioreactor.The fabricated system proved to guarantee sterile conditions for cell cultures on a regular lab bench. Moreover, these cultures were achieved autonomously without requiring a cumbersome incubator. In these conditions, the bioreactor demonstrated the possibility to perform continuous cell cultures of various cell types during several days: insects cells were cultured during 5 days and mammalian cells during 3 days. Regarding the mammalian cell cultures performed, a breakthrough has been achieved compared to the cultures performed in microfluidic systems since microcarriers (diam.:175 µm) were used as growth support.Although microcarrier cell culture is routinely performed in the industry, no autonomous microfluidic culture system has addressed this type of culture yet. Such a miniaturization is a major step forward for bioprocess applications where the need to develop scale-down bioreactors that mimic large scale operation has been clearly identified to shorten and reduce the costs associated to bioproduct development
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DARMOUL, DALILA. „Controle de l'expression d'un marqueur de differenciation enterocytaire : la dipeptidylpeptidase iv“. Paris 11, 1991. http://www.theses.fr/1991PA115009.
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Greuet, Joëlle. „Detoxication et regeneration hepatique : effet de la densite cellulaire et des facteurs hepatotrophiques sur l'expression des genes cyp dans les hepatocytes humains en culture primaire“. Paris 5, 1997. http://www.theses.fr/1997PA05N116.
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Faure, Olivier. „Les embryons somatiques de vigne Vitis vinifera l. Cv grenache noir. Aspects morphogénétiques et causes de la tératologie“. Paris 6, 1992. https://hal.archives-ouvertes.fr/tel-01096258.
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Les embryons somatiques de vigne, obtenus in vitro à partir de cals d'anthères, sont tératologiques et n'évoluent que rarement en plantule. Ils proviennent de cellules uniques de l'assise mécanique de l'anthère et des assises superficielles du cal; un suspenseur est précocement formé. Le développement des embryons somatiques est étudié par comparaison avec celui des embryons zygotiques du même cultivar. Des examens histocytologiques et histochimiques en lumière blanche et en fluorescence, des études biochimiques, des dosages cytométriques de l'ADN nucléaire (in situ et en flux), des dosages de substance de croissance (polyamines, acide abscissique et auxine) révèlent similitudes et différences au cours des deux types d'embryogenèse. Les embryons somatiques évoluent, jusqu'au stade torpille, comme les embryons zygotiques. Ils possèdent un méristème caulinaire et un méristème racinaire. Le méristème caulinaire est bloqué en phase g(0-1) ou g(0-2) et le méristème racinaire est fonctionnel. Ce fonctionnement racinaire est associé à des caractéristiques n'apparaissant qu'après la germination des embryons zygotiques (lignification, subérification des assises superficielles, accumulation de réserves cotylédonaires). Cette germination précoce s'accompagne d'une morphogenèse tératologique (prolifération cellulaire anarchique de surface, malformations cotylédonaires). L'amidon et les triglycérides ne sont pas utilisés; l'activité isocitrate-lyase est nulle et l'activité malate synthase très faible. Les teneurs en polyamines et les activités ornithine-décarboxylase et arginine-décarboxylase sont très importantes à toutes les phases de l'embryogenèse somatique; le rapport putrescine/spermidine est anormalement élevé. Par contre, pour un même stade, les teneurs en auxine et en acide abscissique libres sont beaucoup plus faibles que celles des embryons zygotiques. Les causes de ce comportement sont analysées. Des méthodes permettant de promouvoir un développement normal et d'augmenter le taux de conversion en plantule sont proposées.
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Oxygen is an essential nutrient for proper cell growth, although it is also often the limiting element. This is especially true when one wishes to grow and differentiate large masses of cells or tissues. Growth of large tissue mass creates hypoxic zones, where seeded cells eventually die because of improper oxygen accessibility due to non-existing or remote blood microvessels. This problem arises since oxygen has a poor solubility in aqueous culture media and because the oxygen molecules do not reach the cells in the center of cell aggregates. In order to palliate to this problem, two different types of oxygen carriers were considered and developed: 1) Perfluorocarbon-based emulsions (PFC), and 2) Liposomes encapsulating hemoglobin (LEH). In this work, PFC/EYP emulsions were prepared and their physico-chemical properties were evaluated using dynamic light scattering (DLS) and electron microscopy (TEM, SEM). Cytotoxicity assays were performed to test their cytocompatibility and these tests revealed important and irreversible cytotoxicity. For this reason, further studies on these types of carriers were suspended. PEGylated liposomes encapsulating hemoglobin were also prepared and characterized for size-distribution and temperature effect, using DLS and electron microscopy. Although exposure of LEH to cells in monolayers demonstrated some toxicity, 3-D cultures of endothelial cells did not. LEHs preparations were then loaded with oxygen and their transport and transfer capacities were analyzed. The outcome of this project demonstrated the ability of liposomes-encapsulating hemoglobin to transport and deliver efficiently oxygen, as well as the promotion of cell proliferation and the decrease of cellular hypoxia in a three-dimensional culture environment.
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