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Dissertationen zum Thema „Cellules végétales – Cultures cellulaires“
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Paisarnrat, Somchart. „Métabolisation des alcools monoterpéniques par des cellules de raisin Muscat cultivées " in vitro "“. Toulouse, INPT, 1985. http://www.theses.fr/1985INPT019A.
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L'objectif des travaux presentes est d'approfondir les connaissances relatives aux mecanismes metaboliques et physiologiques impliques dans la biogenese des monoterpenes par des cellules de plantes cultivees "in vitro", composes responsables de la flaveur des baies de raisin muscat. En particulier ont ete etudies: la nature et l'evolution quantitive des glycosides monoterpeniques elabores au cours de la bioconversion du nerol et du geraniol exogenes, l'origine et le devenir metabolique des alcools monoterpeniques libres et glucosyles synthetises par les suspensions de cellules de raisin muscat au cours de la biotransformation du 1-**(3)h geraniol exogene
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Guyon, Jean-Baptiste. „Développement technologique et bioproduction d’actifs pour la cosmétique à l'aide de cultures cellulaires végétales indifférenciées“. Thesis, Bordeaux, 2014. http://www.theses.fr/2014BORD0300.
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Les premières cultures cellulaires végétales in vitro ont été développées à partir de carotte, grâce à Gautheret en 1939. Il a obtenu ce résultat par la découverte au préalable du pouvoir de totipotence des cellules végétales (Haberland 1902). Afin d’obtenir les cellules indifférenciées Gautheret a utilisé des milieux de culture contenant des macroéléments (K, N et P), des microélements (Mg, B,…), des vitamines, du sucre et des phytohormones. Dans la littérature, plusieurs compositions sont souvent utilisées comme White (1934), Murashige and Skoog (1962)) ou Gamborg, Miller et Ojima (1970). Les nuances entre ces milieux se basent sur des concentrations modifiées en phosphates, nitrates ou en phytohormones (auxine/cytokinine). Chaque espèce a besoin d’un milieu particulier pour induire la callogénèse. En effet, selon l’origine (géographique) et le type d’explant (feuilles, racines, tiges,…) traité les conditions d’induction de la callogénèse varieront. De nombreuses personnes portent un intérêt aux cultures cellulaires pour leur utilisation en cosmétique ou en pharmacie. Actuellement, deux entreprises produisent ces cellules à l’échelle industrielle. Ainsi, Phyton Biotech (entreprise allemande) purifie du taxol à partir d’If (Taxus baccata) et Mitsui petrochemical produit de la skinonine à partir de grémils (Lithospernum erythrorizon)The first plant cell culture has been developed by Gautheret in 1939 based on carrot plant cell tissus. He obtained these results through the discovery of the plant totipotency power (Haberland, 1902). He used for cal production a culture medium composed by macroelements (K, N, P…) and microelements (Mg, B …), vitamin, sugar. Later on, several mediums were used like and described in literature i.e. Murashige and Skoog (1962), White (1934) or Gamborg, Miller and Ojima (1970). The differences between such medium consisted mainly concentrations especially of phosphates, nitrates or auxin/cytokinine balance. However, each species needs specific medium for growth. Any people works of this subject and the interest for pharmaceutical and cosmetical industry grow up. Plant cell culture is a difficult technology an industrial use. Recently, two companies performed industrial production of taxol (Taxus baccata) and shikonin (Lithospernum erythrorizon) respectively PhytonBitotech and Mitsui petrochemical. My thesis work was to develop plant cell cultures fom unusual plants which can be used for the industrial production of cosmetics
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Decendit, Alain. „Stimulation par les cytokinines de la production d'alcaloïdes indoliques dans des suspensions cellulaires de Catharanthus roseus (L. ) G. Don : modalités et sites d'action“. Tours, 1992. http://www.theses.fr/1992TOUR3801.
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Donnez, David. „Etude de la bioproduction des stilbènes dans les suspensions cellulaires de Vitis 41B : élicitation et mécanismes de l’induction de la biosynthèse“. Reims, 2010. http://theses.univ-reims.fr/sciences/2010REIMS028.pdf.
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Le trans-resvératrol (trans-3-5-4’ trihydroxystilbène), composé phénolique de la famille des stilbènes, participe aux mécanismes de défense de la vigne. Cette molécule présente de nombreuses activités biologiques intéressantes pour la santé humaine. L’ensemble de ces éléments fait du resvératrol une molécule d’intérêt mais les mécanismes liés à sa biosynthèse restent à approfondir. Le recours à un modèle d’étude simplifié, comme des suspensions cellulaires, autorise un accès facilité aux études à l’échelle cellulaire. Au cours de ce travail, nous avons utilisé une suspension cellulaire de Vitis 41B, dont les caractéristiques ont été déterminées, tant au niveau de sa croissance que de sa capacité à produire du resvératrol. Différents inducteurs de la production du resvératrol ont été testés. Le méthyl-jasmonate à la concentration de 0,2 mM s’est avéré le plus efficace. Le scale-up en bioréacteur de 2 L a été réalisé et a conduit à la purification et à l’identification de viniférines en plus du resvératrol (200 mg/L). Les résultats montrent également que la formation des viniférines semble directement liée à la métabolisation du resvératrol présent dans le milieu de culture. La seconde partie du travail a consisté à caractériser la synthèse précoce du resvératrol à l’échelle cellulaire. L’utilisation de la vidéomicroscopie et de la microscopie confocale a permis de montrer que la synthèse du resvératrol était cytosolique et que son excrétion est localisée. Ces travaux montrent clairement que les suspensions cellulaires de vigne représentent un système biotechnologique pertinent pour l’étude fondamentale de la biosynthèse du resvératrol et sa bioproductionStilbenes are phenolic compounds produced by different plant species. The most well known stilbene is the trans-resveratrol (trans-3-5-4’ trihydroxystilbene) which acts as a phytoalexine on grapevine. Its discovery inside red wine led to enlighten its biological activities on human health. So the resveratrol became an interesting and hopeful molecule in medicine and also for understanding grapevine defenses but the biosynthetic mechanisms of this compound stayed unclear. Along this work, we used a Vitis 41B cell suspensions obtained from calli. In a first time, the cell growth kinetic was determined and we evaluated its ability to produced resveratrol. In order to study parameters which led to the resveratrol synthesis, we have tested various inducers and a concentration of 0,2 mM methyljasmonate showed the best induction. A scale-up in a 2-L bioreactor was conducted and led to the purification and identification of viniferins and allowed to obtain a 200 mg/L resveratrol accumulation. These results seem indicate that the viniferin production is linked to the metabolisation of the resveratrol inside the culture medium. The second part of this work focussed on the early synthesis of the resveratrol at the cellular scale. We have used videomicroscopy and confocal microscopy in order to show that the resveratrol synthesis takes place inside the cytosol and that its excretion is localized. Our study clearly showed that the grapevine cell suspension represents a pertinent and powerful system to study the resveratrol biosynthesis and its bioproduction
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Fourestey, Marie-Sophie. „Production d'anthocyanes par des cultures cellulaires de vigne in vitro : influence des phytohormones“. Bordeaux 2, 1996. http://www.theses.fr/1996BOR2P087.
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Trémouillaux-Guiller, Jocelyne. „Etude comparative des méthodologies de sélection de cultures cellulaires végétales à haute capacité d'accumulation : application à des souches et lignées clonales biosynthétisant des alcaloides dihydrofuoquinoleiques“. Tours, 1988. http://www.theses.fr/1988TOUR3804.
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Steward, Nicolas. „Physiologie, cinétique et modélisation de cultures de cellules végétales en suspension : comparaison de cultures discontinues et continues : influences de l'environnement sur l'activité cellulaire“. Vandoeuvre-les-Nancy, INPL, 1998. http://www.theses.fr/1998INPL026N.
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La présente thèse a pour objectif d'améliorer les connaissances sur la production de biomasse par la culture de cellules végétales en suspension, en prenant une souche modèle de luzerne (Medicago sativa). En premier lieu sont comparés des modes de culture discontinus et continus par leurs productivités en biomasse brute et leurs coûts industriels. Une seconde approche évalue l'impact de différents milieux de culture sur les paramètres cinétiques comme la croissance, le décès et la consommation des substrats. Pour cela est effectué un suivi des milieux intra- et extra-cellulaires, ainsi que la viabilité de la biomasse. Ensuite, une nouvelle méthode basée sur la teneur en estérases de la biomasse est exposée pour déterminer sa viabilité avec d'avantage de rapidité et de précision. La mesure de cette activité enzymatique libérée dans le milieu de culture permet un suivi précis des cinétiques de croissance, de décès et de lyse cellulaire. Les informations recueillies sur le comportement cinétique de la souche sont structurées sous la forme de deux modélisations mathématiques. La première décrit les évolutions extracellulaires, la viabilité de la biomasse et les phénomènes de lyse. La seconde améliore les prédictions du modèle précédent par l'adjonction des évolutions de la composition ionique intracellulaire. Celle-ci résulte d'une entrée des nutriments par diffusion, du catabolisme et de phénomènes d'équilibration avec le milieu de culture quand les cellules décèdent.
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Dantas, Barros Ana Maria. „Biotransformation de substrats exogènes d'origine synthétique par des cultures cellulaires végétales de Catharanthus roseus G. Don, Vinca minor L. Et Thevetia neriifolia Juss“. Paris 11, 1991. http://www.theses.fr/1991PA114836.
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Lambert, Nadine. „Etude comparative de la biosynthèse de roténoi͏̈des par des suspensions cellulaires hétérotrophes et photomixotrophes de Tephrosia vogelii Hook f : essais d'optimisation de la production“. Montpellier 2, 1989. http://www.theses.fr/1989MON20082.
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Une souche heterotrophe et une souche photomixotrophe de tephrosia vogelii hook f. , papilionaceae tropicale accumulant dans ses feuilles des rotenoides (insecticides biodegradables) ont ete etudiees dans le but de cerner l'impact de la lumiere sur la production de metabolites secondaires in vitro. Deux systemes de culture ont ete employes: culture en erlenmeyer et culture en bioreacteur. Les cinetiques de production de biomasse, d'accumulation et d'excretion de rotenoides, l'evolution de la teneur en chlorophylles et de l'activite respiratoire et photosynthetique ainsi que les modifications intra et extracellulaires en certains constituants glucidiques, azotes et phosphates ont ete compares. Des differences importantes de comportement en fonction des potentialites photosynthetiques de la souche consideree et du systeme de culture employe ont ete mise en evidence. Dans tous les cas, la production de rotenoides est amelioree en condition de photomixotrophie et est correlee positivement a la croissance. Des essais d'optimisation de la production ont ete realises: incorporation de l-phenylalanine, stimulation par differents stress. Cette etude est completee par un essai de caracterisation de l'activite phenylalanine ammonialyase, enzyme cle de la voie de biosynthese des rotenoides. Son evolution au cours du cycle de culture des suspensions cellulaires heterotrophes et photomixotrophes et lors de traitements differents a ete suivi. Le role de la pal dans les mecanismes de regulation de la voie de biosynthese des rotenoides est discute
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Filali, Mohammed. „Effet de l'autotrophie aux substances de croissance sur les profils protéiques et les capacités d'accumulation alcaloïdique dans les suspensions cellulaires de Catharanthus roseus“. Tours, 1994. http://www.theses.fr/1994TOUR3807.
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Un des caractères physiologiques des cellules vététales en culture in vitro est leur tendance à devenir anergiées ou habituées, c'est à dire autotrophes aux substances de croissance. Ce phénomène pourrait être un des facteurs expliquant la diminution des capacités d'accumulation de métabolites secondaires. Notre travail vise à savoir si des gènes sont réprimés ou mis en expression au cours de ce processus. Nous utilisons un modèle dans lequel les cellules anergiées (ne produisant plus d'alcaloïdes) dérivent de cellules 2,4 D dépendantes utilisées comme témoins et qui peuvent accumuler des alcaloïdes. C'est pourquoi nous avons recherché si des polypeptides apparaissent ou disparaissent au cours de ce processus. Plus précisément, 3 polypeptides ayant pour masse moléculaire 28, 17 et 16kDa, paraissant reliés à l'accumulation alcaloïdique, ont pu être caractérisés dans les cellules 2,4-D dépendantes. Par ailleurs un polypeptide o de 53kDa, de caractéristiques électrophorétiques très proches de celles de la tryptophane décarboxylase, est toujours fortement cumulé dans la souche anergiée. Cinq polypeptides dont le polypeptide s (28kDa), liés semble-t-il à la biosynthèse alcaloïde, sont absents ou ne sont plus régulés par les cytokinines dans la souche anergiée. L'abondance en polypeptide o et l'absence en polypeptide s dans les cellules anergiées seraient des caractères liés à l'anergie. Les effets de l'anergie sont beaucoup plus marqués au niveau des protéines membranaires. Un polypeptide membranaire m1 de 16kDa, préférentiellement accumulé dans la souche anergiée a été isolé et microséquence. Les sondes oligonucléotidiques obtenues ont servi au criblage d'une banque de cADNs issus des ARNm de cellules 2,4D dépendantes conduisant à l'isolemetn de sept clones spécifiques. L'élucidation du rôle de ce polypeptide pourrait permettre de progresser dans la compréhension des mécanismes de l'autotrophie hormonale dans les souches cellulaires de Catharanthus roseusHabituation is known as a common character of in vitro plant cells. This phenomenon can be considered as a genral tendancy of plant cells to loose their exogenous hormonal requirement. Habituation is often correlated with lack of the synthesis and production of secondary metabolites. In this work we attempted to identify genes which were newly expressed or repressed during the transition from the normal to the habituated state. Our aim was to elucidate some biochemical aspects associated with hormonal autotrophy of plant cells. We compared the protein patterns of a 2,4 D dependant line to those of a 2,4 D independent cell line selected from the previous one. We had two major objectives : detect the polypeptides related to the habituated state ; compare changes in their expression patterns under a defined hormonal treatment, ie cytokinin or auxin supply in the culture medium. In the course of this study, 3 polypeptides with 28, 17 and 16kDa molecular mass were detected. Their synthesis appeared to be correlated with indole alkaloid accumulation in the 2,4 D dependent cell line. On the other hand a 53kDa polypeptide was always expressed at high level in habituated cell line, while a group of 5 polypeptides inluding polypeptide s was either completely lacking or at least not regulated by cytokinins in the habituated cell line. Abundance of th e 53kDa polypeptide and the attenuated expression of the polypeptide s 28kDa can be considered as the main traits of all habituated suspension cell lines of Catharanthus roseus. Differences in protein patterns were more important in membrane extracts. We found that microsomal protein profiles were relatively more differents between the two cell lines with a 16kDa polypeptide m1 expressed intensively in habituated cells. Cytokinins and auxins can modify the expression pattern, and in case of this peculiar regulation, the polypeptide m1 was purified and the corresponding sequence was determined. The oligonucleotides probes constructed from the N-terminal sequence were used for screening a cDNA library from Catharanthus roseus mRNA poly(A). Six specific clones were isolated. Elucidation of m1 gene function could perhaps bring new information about the hormonal autotrophy mechanism in Catharanthus roseus cell lines ?
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Chalak, Lamis. „Haplodiploi͏̈sation et cultures cellulaires chez le kiwi (Actinidia deliciosa Cv. Hayward) : caractérisation préliminaire de matériels obtenus“. Montpellier 2, 1995. http://www.theses.fr/1995MON20278.
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L'objet de cette these a ete d'etudier les possibilites d'haplodiploidisation et de cultures cellulaires chez le kiwi dans une optique a long terme d'integrer ces methodes dans les programmes de diversification varietale chez cette espece. La parthenogenese in situ induite par du pollen irradie aux rayons gamma a ete experimentee chez le cv. Hayward. Des plantes trihaploides ont pu etre obtenues par germination directe en serre. Le rendement en plantes trihaploides s'est revele largement different entre les deux pollens utilises. Pour le pollen le plus favorable et sans recourir a la culture in vitro, ce rendement peut etre estime a environ 100 trihaploides pour 100 fleurs pollinisees. Une etude moleculaire a l'aide de marqueurs isoenzymatiques et rapd a confirme l'origine maternelle des plantes trihaploides. Certains genotypes trihaploides, demeures stables in vivo, ont presente un doublement spontane a la suite d'une propagation par regeneration adventive a partir de petioles, alors que d'autres sont restes stables dans les memes conditions. Un trihalploide stable a fait l'objet de traitements antimitotiques in vitro de tiges et de feuilles, par la colchicine et l'oryzaline. Des plantes mixoploides, hexaploides et dodecaploides ont ete obtenues. L'application d'oryzaline a 5 m associee au processus de regeneration adventive est apparue comme un traitement optimal pour obtenir des doublements chromosomiques complets. Les experimentations de cultures cellulaires ont vise a obtenir et a maitriser la regeneration de plantes a partir de suspensions cellulaires et de protoplastes du cv. Hayward et de trois de ses genotypes trihaploides stables. Des plantes entieres ont ete regenerees a partir de protoplastes de cals de hayward, mais ce resultat a ete rare et aleatoire. Concernant les protoplastes trihaploides, le meilleur resultat s'est limite a la formation de colonies d'une dizaine de cellules. En revanche, la regeneration a partir de suspensions cellulaires a ete maitrisee et pourrait etre exploitee. L'ensemble de ces travaux a conduit en definitive a creer une variabilite a partir du cv. Hayward. Les materiels obtenus ont commence a faire l'objet d'une caracterisation (phenotype, stabilite, origine) qui devra etre poursuivie
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Cazaux, Edwige. „Isolement et culture des protoplastes d'"Hevea brasiliensis" : facteurs physiologiques et biochimiques impliqués dans la récalcitrance“. Montpellier 2, 1993. http://www.theses.fr/1993MON20023.
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Deux types de materiel de depart ont ete utilises pour l'isolement et la culture des protoplastes. D'une part des organes tels les tiges, les petioles et les feuilles d'autre part des cals embryogenes de tegument interne de graine immature. L'optimisation des conditions de maceration conduit a l'obtention d'un nombre eleve de protoplastes viables quel que soit le materiel de depart. Parmi les methodes de culture, l'utilisation de la technique d'inclusion dans l'alginate conduit a l'obtention de quelques divisions sporadiques chez les protoplastes de tige et de petiole. Ces divisions s'arretent au stade de deux cellules. Des stress oxydatifs intervenant au cours de la maceration et de la culture de meme qu'une production d'ethylene lors de la culture pourraient etre en partie responsables de la recalcitrance des protoplastes de tige. La culture des protoplastes de cals friables embryogenes necessite leur inclusion dans l'alginate et la presence de cellules nourrices de tabac en division actives. L'effet benefique des cellules nourrices de tabac serait du a la presence de plusieurs facteurs inducteurs. La densite de culture des cellules nourrices, de meme que le temps de contact determine l'intensite de la reponse. Dans ces conditions, des microcals ont ete obtenus a partir des protoplastes de cal du clone pr107. Cependant des brunissements interviennent limitant le developpement ulterieur des microcals
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Nguyen, Christophe. „Contribution à l'étude de la production de psoralène (furocoumarine) par la culture in vitro de plantes du genre psoralea (leguminosae)“. Vandoeuvre-les-Nancy, INPL, 1992. http://www.theses.fr/1992INPL085N.
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Nous avons étudié la possibilité d'utiliser la culture in vitro de plantes du genre psoralea pour produire du psoralène une molécule photosensibilisante aux nombreuses applications industrielles. Nous avons tout d'abord envisagé la production de ces composés par la culture en milieu liquide de cellules de p. Cinerea. Nous avons constitue un souchier de 131 cals. La variabilité génétique induite par la mise en culture in vitro a été stabilisée pour la moitie d'entre eux. A partir de ces cals, nous avons également initié des cultures de cellules en milieu liquide les suspensions cellulaires. Nous avons mis en évidence que certains cals et suspensions cellulaires synthétisaient une molécule dont le spectre UV était très voisin de celui du psoralene. L'identité de ce compose demande à être confirmée. Nous avons également aborde la production de psoralène par des racines transformées par agrobacterium rhizogenes. Une souche a été inoculée à sept espèces de psoralées pour constituer un souchier de racines transformées. Cependant, nous n'avons jamais pu détecter de psoralène dans les racines transformées alors que des racines prélevées sur les plantes entières en contiennent
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Schaumann-Gaudinet, Annick. „Perturbation par les ions lithium de caractéristiques ioniques des suspensions cellulaires d'Acer pseudoplatanus L“. Rouen, 1988. http://www.theses.fr/1988ROUES018.
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Cardin-Bernier, Guillaume. „Observateur pour le suivi en temps réel de cultures cellulaires végétales“. Mémoire, Université de Sherbrooke, 2011. http://savoirs.usherbrooke.ca/handle/11143/1591.
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Ce document présente le travail effectué et les résultats obtenus dans le cadre d'un projet visant à associer une technique nouvellement développée, le suivi des biomarqueurs endogènes permettant l'estimation de la concentration cellulaire de cultures végétales en suspensions, à un modèle mathématique décrivant l'évolution de ces cultures en fonction de la consommation des différents nutriments disponibles. Cette association permet d'obtenir une estimation des conditions de cultures cellulaires en temps réel dont la mesure ne peut actuellement être effectuée que par échantillonnages. Les temps d'expériences requis pour obtenir les mesures sont toutefois trop longs pour pouvoir effectuer un contrôle des conditions de cultures advenant une déviation du procédé. L'intérêt de ce projet se situe à deux endroits. Premièrement, la simplicité, la rapidité et l'efficacité de la technique de suivi des biomarqueurs endogènes permet le suivi en temps réel de la quantité de cellules lors de la culture (concentration cellulaire et biomasse). Or, en raison des particularités des cultures de cellules végétales, en particulier l'agglomération cellulaire, il est très difficile d'obtenir une estimation fiable de la concentration cellulaire. Présentement, il n'existe pas de technique commercialement disponible pour effectuer ce suivi. D'où l'intérêt de la méthode des biomarqueurs endogènes. Ensuite, l'association de ces mesures avec un modèle mathématique permet d'obtenir un outil décrivant l'évolution de la culture et de variables importantes qui l'influencent. Le modèle étant indépendant de la technique des biomarqueurs endogènes, il est possible de suivre un grand éventail de procédés et de variables en suivant la même méthodologie, en modifiant le modèle utilisé. Ce projet utilise un cas précis, la culture d'Arabidopsis thaliana dans un milieu standard avec un modèle relativement simple. Cependant, la même démarche peut être appliquée pour d'autres systèmes avec d'autres types d'organismes. Le travail présenté ici ouvre donc la voie à une meilleure compréhension des cultures cellulaires en générale et pourrait permettre l'optimisation de procédés jusqu'ici difficilement contrôlables dû au manque d'information disponible.
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Cartier, Nicole. „Les polysaccharides de la paroi primaire des cellules de Rubus fruticosus cultivées en suspension : intervention des polyosidases endogènes dans leur réarrangement au cours de la croissance“. Grenoble 1, 1986. http://www.theses.fr/1986GRE10058.
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Dirson, Roselyne. „Prolyl 4-hydroxylase de suspensions cellulaires de soja : caractérisation et relation avec les glycoprotéines pariétales riches en hydroxyproline“. Toulouse 3, 1990. http://www.theses.fr/1990TOU30120.
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Les travaux presentes dans ce memoire ont eu pour but de mettre en evidence et de caracteriser une activite propyl 4-hydroxylase. Cette enzyme assure les modifications post-traductionnelles de proteines impliquees dans l'arret de la croissance ou dans la reconnaissance cellulaires. Elle participe egalement aux mecanismes de defense active chez les plantes. Un screening de lignees cellulaires de differentes familles vegetales soumises a differents types d'elicitations a permis de selectionner une lignee de soja dont les parois sont riches en hydroxyproline (produit de l'enzyme recherchee). Les conditions optimales de l'essai enzymatique ont ete determinees a l'aide d'une methodologie de plans d'experience. Cette enzyme membranaire a ete purifiee et caracterisee (stabilite thermique, etudes cinetiques vis-a-vis de differents substrats, effets des cations ferreux et de leurs chelateurs sur l'activite enzymatique, specificite de substrats). Son activite a ensuite ete comparee dans differentes formes d'un meme vegetal (plante entiere, cals et cellules en culture, suspensions cellulaires elicitees). Enfin la mise au point d'une nouvelle methode de dosage de l'activite prolyl 4-hydroxylase, plus rapide et plus specifique a ete abordee
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Mignot, Gérard. „Culture de la lignée cellulaire Vero dans des milieux synthétiques et chimiquement définis : application à la culture sur microsupports en biogénérateurs“. Dijon, 1988. http://www.theses.fr/1988DIJOS035.
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Villemin, Clélia. „Evaluation du potentiel sensibilisant de protéines alimentaires : sélection et caractérisation de tests cellulaires“. Thesis, Nantes, 2019. http://www.theses.fr/2019NANT1030.
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Les allergies alimentaires représentent un problème majeur de santé publique. Bien qu'il soit obligatoire d'évaluer le potentiel allergisant de nouvelles protéines alimentaires ou de protéines alimentaires fonctionnalisées avant leur mise sur le marché, il n'existe aucun test validé permettant l'évaluation de leur potentiel sensibilisant. Nous avons sélectionné et caractérisé un modèle cellulaire permettant l'étude de l'influence de protéines alimentaires de référence sur le phénotype et les caractéristiques d'acteurs clefs du phénomène de sensibilisation : les cellules dendritiques. Nous observons une modulation de l'expression de marqueurs membranaires et solubles de ces cellules suite à l'exposition aux protéines de référence. L'analyse factorielle de l'expression de ces marqueurs nous a permis de différencier nos protéines aux potentiels allergisants faibles de celles aux potentiels allergisants élevés. Nous avons également observé que la modification du potentiel sensibilisant des gliadines, des allergènes majeurs du blé, après hydrolyse acide ou enzymatique est associée à une modification de leur interaction avec les cellules dendritiques. Nos résultats démontrent l'importance des propriétés intrinsèques des protéines pour leur interaction avec les cellules immunitaires et pour l'induction d'une réaction immunitaire. Notre étude montre également que notre modèle cellulaire pourrait être une méthode pertinente pour l'étude du potentiel allergisant de protéines alimentaires, ou pourrait être utilisable dans une stratégie d'évaluation du potentiel allergisantFood allergies are a major public health problem. Before placing a novel food on the market, its allergenic potential must be assessed. Currently, there is no test available to assess the sensitizing potential of new food proteins or functionalized food proteins. We have selected and characterized a cellular model allowing the study of the influence of dietary reference proteins on the phenotype and the characteristics of sensitization key players, dendritic cells. We observe an expression modulation of membrane and soluble markers of these cells following exposure to the reference proteins. The expression analysis of these markers allowed us to differentiate our proteins with low allergenic potentials from those with high allergenic potentials. We also observed that the modification of the sensitizing potential of gliadins, major wheat allergens, after acid or enzymatic hydrolysis is associated with a modification of their interaction with dendritic cells. Our results demonstrate the importance of the intrinsic properties of proteins for their interaction with immune cells and for the induction of an immune response. This study also shows that our cell model could be a relevant model for the study of the allergenic potential of dietary proteins, or could be used in a strategy to evaluate the allergenic potential
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Le, Sceller Annie. „Les techniques de culture des cellules de la peau“. Bordeaux 2, 1988. http://www.theses.fr/1988BOR2P121.
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Dorisse, Pascale. „Contribution à l'étude de la biotransformation de la papaverine par des suspensions cellulaires végétales in vitro : identification et approche de quantification des produits de bioconversion obtenus“. Toulouse, INPT, 1989. http://www.theses.fr/1989INPT017A.
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Les capacites de bioconversion du chlorhydrate de papaverine par cinq suspensions cellulaires non productrices d'alcaloides (saponaria officinalis, centella asiatica, hygrophila erecta, glycyrrhiza glabra cultivee a l'obscurite et a la lumiere) ont ete etudiees. La sensibilite au substrat varie en fonction des souches: la saponaire tolere jusqu'a 1250 mg/l tandis qu'une concentration de 100 mg/l se revele toxique pour les autres suspensions. Seule la suspension chlorophyllienne de glycyrrhiza glabra a bioconverti la papaverine en papaverinol, papaveraldine et en monodemethylpapaverine. Les rendements de bioconversion en ces differents produits, obtenus apres 21 jours de culture, a l'aide de papaverine-hcl 3-c#14, sont respectivement de 31,5%, 4% et 1%
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Jourdin, Sophie. „La culture des tissus végétaux, de la seconde moitié du XIXe siècle au XXe siècle“. Paris 7, 2009. http://www.theses.fr/2009PA070061.
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L'histoire de la culture des tissus végétaux de la seconde moitié du XIXe siècle au XXe siècle révèle l'évolution de nombreux aspects de la biologie et physiologie végétales en construction, pour comprendre comment on maîtrise les parties végétales, leurs besoins et leur capacité à survivre isolées en dehors de l'organisme et en conditions artificielles. Au-delà du travail historique sur le développement de ces cultures - aux Etats-Unis, en Allemagne et en France - la thèse est une étude épistémologique de l'évolution de la représentation des conceptions théoriques sur les potentialités de la cellule et ses limites. En outre, cette étude insiste sur le caractère très empirique de la mise au point de ces méthodes expérimentales. Nous mettons en évidence le fait que les cultures sont des objets d'étude tout en étant des instruments de cette recherche en biologie ; nous étudions aussi les liens très étroits avec la physiologie de la nutrition et de la division cellulaire, impliquant la question des hormones végétales et engageant le concept même de cellule. Cette histoire étant liée à la génétique, la biochimie, la cytologie, et après la seconde guerre mondiale, à la biologie moléculaire, l'étude des cultures cellulaires est une problématique originale pour étudier les transformations importantes de la biologie contemporaineThe history of the plant tissue culture in the second half of the XIXe century at the XXe century shows the evolution of many aspects of the evolution of plant biology and physiology, to understand how to control the vegetable parts, their needs and their capacity to survive isolated and in artificial conditions. Beyond an historical work on the development of these cultures - in the United States, in Germany and in France -the thesis is an epistemological study of the evolution of the representation of the theoretical conceptions on the potentialities of the cell and its limits. Moreover, this study insists on the very empirical character of the development of these experimental methods. We emphasize that the cultures are objects of study while being instruments of this research in biology; we study also the very close links with the physiology of the nutrition and the cellular division, implying the question of the vegetable hormones and engaging the concept of cell itself. This history being related to the genetics, biochemistry, cytology, and after the second world war, molecular biology, the study of the cellular cultures is an original problematic for studying the important transformations of contemporary biology
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Millecamps, Jean-Luc. „Sélection de chicorées "cichorium intybus l. Var Witloof" résistantes aux sulfonylurées par cultures cellulaires“. Lille 1, 1989. http://www.theses.fr/1989LIL10030.
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A partir de diverses suspensions cellulaires de Cichorium intybus l. Var. Witllof n'ayant pas subi de traitement mutagène, nous avons isolé, en utilisant la variabilité induite par les cultures in vitro, plusieurs souches de cellules résistantes au chlorsulfuron (matière active d'un herbicide de la famille des sulfonylurees). (. . . )
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Velzenberger, Elodie. „Validations biologiques et physico-chimiques d'un revêtement cellulosique de boîtes pour cultures cellulaires bioactives“. Compiègne, 2008. http://www.theses.fr/2008COMP1784.
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Les propriétés de surface des biomatériaux conditionnent l'adsorption des protéines présentes dans l'environnement physiologique. La nature de la couche protéique adsorbée influence la morphologie et les orientations fonctionnelles des cellules adhérentes. Cette thèse a pour objet de combiner une approche biologique et physico-chimique pour caractériser un support cellulosique (CEL) original pour culture cellulaire et mieux comprendre les interactions protéine-surface et cellule-surface. L'objectif de ce projet pluridisciplinaire est de corréler les propriétés de surface avec les activations biologiques. Trois lignées cellulaires adhérentes murines ont été utilisées (les fibroblastes Swiss 3T3, les pré-ostéoblastes MC-3T3 et des cellules de mélanome B16F10). L'utilisation des mesures d'angles de contact en milieu liquide et de l'AFM a permis la caractérisation physico-chimique du substrat avant et après adsorption de fibronectine. Les principaux résultats obtenus pour CEL sont : L'agrégation cellulaire; L'inhibition de la prolifération cellulaire accompagnée d'un arrêt en phase G1 du cycle cellulaire; L'induction de l'apoptose; Le revêtement est très hydrophile et la fibronectine s'adsorbe peu et dans une conformation inadaptée pour l'adhésion cellulaire(mauvaise accessibilité RGD); L'affinité instantanée négligeable de la Fn pour le revêtement cellulosique. Cette étude montre que CEL est un biomatériau anti-adhésif donnant des résultats démonstratifs et reproductibles. En outre, cette étude souligne la nécessité d'associer plusieurs approches (ELISA, angles de contact en milieu liquide, spectroscopie de force) pour caractériser les interactions protéine-surface en conditions physiologiques, sur les biomatériauxSurface properties of biomaterials may influence protein adsorption and the composition of the protein layer may affect the morphology and the functional orientations of adherent cells. In this work, both biological and physico-chemical approaches were combined to characterize an original cellulosic coating (CEL) for cell culture and to better understand the interactions involved between a surface, proteins and finally cells. The aim of this multi-disciplinary project is to correlate surface properties (at the micrometric and at the nanometric scale) with biological activations. Three adherent murine cell lines were chosen (fibroblasts Swiss 3T3, pre-osteoblasts MC-3T3 and melanoma cells B16F10). Liquid-liquid contact angle measurements and AFM enabled to characterize the physico-chemical properties of the cellulosic substratum before and after fibronectin adsorption. The principal results obtained with the cellulosic substratum are summerized below : Cell aggregation; A cellular proliferation inhibition with a blocking in G1-phase; An induction of apoptosis; CEL is hydrophilic and a little amount of fibronectin is adsorbed on the substratum in a conformation which is not appropriate for cell adhesion (bad accessibility to RGD site); Instantaneous affinity negligible of fibronectin for the cellulosic material. This study evidences that CEL is an anti-adhesive biomaterial which gives reproducible and demonstrative results. Moreover, this work underlines the necessity to combine several approaches (ELISA assays, liquid-liquid contact angle measurements, force spectroscopy) to characterize the interaction between a protein and a biomaterial surface under physiological conditions
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Pascal, Nadine. „Quelques observations sur les effets d'une carence de fer sur la cellule végétale non chlorophyllienne“. Grenoble 1, 1992. http://www.theses.fr/1992GRE10165.
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Des cellules isolees d'erable (acer pseudoplatanus l. ) cultivees dans une solution nutritive complete ou depourvue de fer ont ete comparees afin d'etudier les impacts d'une deficience en fer sur la cellule vegetale non photosynthetique. En premier lieu, nous avons observe que l'absence de fer dans le milieu de culture ralentit le rythme des divisions cellulaires et impose un arret de croissance apres 1 a 1,5 generations. A l'issue de la phase de division, les cellules presentent une senescence rapide et meurent de facon prematuree. Dans le but de cerner les evenements responsables de ces perturbations physiologiques, nous avons explore quelques fonctions metaboliques majeures de la cellule d'erable: la synthese des grandes chaines polycarbonees insaturees et la respiration. Ainsi, l'analyse des acides gras insatures et des carotenoides a montre que la carence de fer bloque severement certains mecanismes membranaires de desaturation en cis et en trans respectivement: la desaturation du c18:2 en c18:3 par les desaturases microsomiales et/ou plastidiales; la desaturation du phytoene, precurseur des carotenoides, par la phytoene desaturase de l'enveloppe plastidiale. L'implication du fer dans ce dernier systeme n'etait pas connue jusqu'a present. Pendant l'installation de la carence de fer, la respiration basale des cellules reste normale. Toutefois, la vitesse de la respiration decouplee ne cesse de decroitre sous l'effet du dysfonctionnement progressif de la succinate deshydrogenase: seul le transfert des electrons via le complexe ii de la chaine respiratoire est en effet altere, malgre une depletion generalisee en centres fer-soufre et en cytochromes mitochondriaux. A l'issue de la phase de division, les mitochondries fonctionnent au maximum de leurs capacites sans pouvoir repondre integralement aux besoins energetiques du metabolisme. S'ensuit alors un effondrement de l'activite respiratoire, associe a une disparition totale des cretes de la membrane interne des mitochondries. La desorganisation de la fonction respiratoire sous l'influence de la carence de fer est probablement le facteur responsable de la mort des cellules d'erable
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Agier, Catherine. „Toxicité et cinétique d'absorption de composés azotés protonables chez les cellules végétales cultivées "in vitro"“. Paris 11, 1990. http://www.theses.fr/1990PA114840.
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Janocka, Déborah. „Culture in vitro de la Fucale Pelvetia canaliculata : applications à la production de biomasse algale et à la cryoconservation des semences“. Caen, 2009. http://www.theses.fr/2009CAEN2073.
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Pelvetia canaliculata est une Phéophycée commune des côtes de la Manche. Son exploitation industrielle n’est pas actuellement envisageable en raison de ses peuplements limités nécessitant alors l’élaboration de systèmes de micropropagation. La production de biomasse algale de Pelvetia a été développée à partir des cellules somatiques (protoplastes, explants) et des semences naturelles (zygotes) en fonction de la période du cycle de développement. La cryoconservation des zygotes permet d’envisager la constitution d’un stock de semences disponible toute l’année. La mise au point d’une solution enzymatique a permis la production en routine de protoplastes avec des rendements atteignant 107 protoplastes. G-1 de matière fraîche à partir des apex. L’étude des paramètres physicochimiques de leur régénération a abouti à la formation de la paroi squelettique puis au déclenchement de bourgeonnements et de divisions cellulaires traduisant une reprise du programme morphogénétique. La culture d’explants sur milieu solide a induit la néoformation de bourgeons à partir des différentes zones du thalle, notamment de la zone sous-apicale. L’amélioration du protocole a été initiée. Les facteurs contrôlant la libération synchrone et massive des gamètes de Pelvetia et la production des zygotes ont été identifiés. La séquence du développement embryonnaire in vitro a été décrite jusqu’au stade plantule mettant en évidence l’absence de polarité du zygote et d’une première division asymétrique. Le protocole de cryoconservation des zygotes mis au point permet d’obtenir une viabilité des embryons après réchauffement d’environ 60% au bout de 28 jours de culture et leur régénération en plantulesPelvetia canaliculata is a common Phaeophyceae of the French Channel coast. For the time being its industrial exploitation is not possible due to its restricted wild populations it is requiring the elaboration of systems of micropropagation. The production of algal biomass of Pelvetia has been developed from somatic cells (protoplasts, tissue culture) and from natural seeds (zygotes) according to the period of the life cycle. The cryopreservation of zygotes has been also developed allowing to the establishment of a seedstock available throughout the year for macroalgal culture. The composition of an enzyme solution has been determined in order to produce reliably protoplasts from apical regions of the thallus, protoplasts yields reaching 1 x 107 protoplasts per gram of fresh weight. The study of the physicochemical parameters of the protoplast regeneration has led to the synthesis of the cell wall followed by buddings and cell divisions indicating a new start of a morphogenetic program. Tissue culture on solid medium induced buds regeneration from the different regions of the thallus, particularly from subapical explant. The improvement of the protocol has been initiated. The factors involved in the synchronous and massive discharge of gametes of Pelvetia and the production of zygotes have been identified. The sequence of the embryonic development in vitro has been described until the plantlet stage revealing the absence of a zygotic polarity and of a first asymmetric division. A protocol of cryopreservation of zygotes has been established. The viability of the cooled embryos after thawing was about 60% after 28 days of culture and they developed into plantlets
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Luque, Alejandro E. „La réplication de l'ADN nucléaire dans la cellule de blé : étude des facteurs réplicatifs et mise en place d'un système viral de réplication végétale“. Bordeaux 2, 1999. http://www.theses.fr/1999BOR28637.
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Rakotomanga-Rasolonjatovo, Vololonirina. „Incidences des traitements pesticides sur les grains de pollen de Tradescantia et de l'orge : Aspects cellulaires et moléculaires“. Toulouse, INPT, 1995. http://www.theses.fr/1995INPT019A.
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L'incidence des pesticides sur la qualite pollinique et sur le metabolisme fondamental du gametophyte male en formation a ete etudiee chez le tradescantia bracteata l. Et chez l'hordeum vulgare l. Les pesticides affectent la qualite pollinique et les alterations induites dans les grains de pollen sont dose-dependantes. Le nombre de grains de pollen qui germent diminue et l'elongation du tube pollinique est ralentie. La viabilite pollinique a ete reduite chez le tradescantia lors des traitements par contact direct ou par voie vasculaire. Dans le cas de l'orge seuls les traitements repetitifs affectent le taux de pollen viable. Les noyaux des cellules polliniques et des cellules tapetales constituent une cible pour l'action des pesticides. En effet, la morphologie de la chromatine, la teneur en adn ainsi que la synthese d'adn du pollen ont ete modifiees. Par ailleurs, chez le tradescantia traite par l'herbicide, la teneur en adn des cellules tapetales a ete egalement reduite. Les pesticides ont modifie un nombre limite de proteines polliniques et tapetales, les changements des profils proteiques pouvant se resumer par l'induction ou l'inhibition de la synthese des proteines et par l'accumulation ou de la degradation des proteines pre existantes. Les traitements pesticides ont induit chez les deux plantes la synthese d'un polypeptide de 25/26 kda dans les grains de pollen et celle d'un polypeptide de 32 kda dans les microsporocytes. De plus des proteines specifiques du stade et du traitement apparaissent et/ou disparaissent. Chez l'orge, la synthese d'un polypeptide de 18 kda a ete induite a tous les stades de developpement et quel que soit le traitement. Chez le tradescantia, l'apparition d'une proteine de 62 kda dans le tapis a ete reliee au traitement a l'herbicide. Chez les deux especes, la comparaison des sequences des proteines accumulees avec celles des banques de donnees a permis d'identifier en particulier une proteine ayant une homologie de sequence avec les histones h3. 3 d'arabidopsis thaliana
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Brasselet-Sicé, Sabrina. „Mise en place de modèles cellulaires pour l'étude de l'absorption des médicaments“. Nice, 2006. http://www.theses.fr/2006NICE4031.
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Le passage des barrières épithéliales constitue une étape limitante pour l’absorption des médicaments. Dans le but de tester in vitro l’efficacité de lipoaminoacides, promoteurs d’absorption breveté par la société Physica Pharma, j’ai mis en place au laboratoire deux modèles cellulaires de barrières épithéliales. Le premier modèle est un modèle de barrière épithéliale intestinale constitué par la lignée cellulaire humaine immortalisée, les cellules de colon Caco-2. Le deuxième modèle est un modèle de barrière épithéliale nasale constitué par des cultures primaires de cellules épithéliales nasales humaines issues d’actes chirurgicaux. La perméabilité de quatre principes actifs a été étudiée sur ces modèles, en présence ou en absence de différents lipoaminoacides. Les études in vitro ont montré une augmentation de la perméabilité des molécules d’intérêt, liée à l’ouverture des jonctions intercellulaire, en présence des promoteurs d’absorption. A l’issu de ce travail, plusieurs formulations ont été sélectionnées pour des études précliniques sur l’animal entier. Le modèle de barrière intestinale n’a pas permis de prédire l’absorption in vivo. En effet, les études de l’administration par voie orale in vivo chez le chien n’ont pas pu être corrélées avec les résultats in vitro. En revanche, ce travail de thèse a permis de valider un modèle de barrière épithéliale nasale pour l’étude de la perméabilité de molécules à destinée nasale, qui a été validé par des études in vivo chez le mouton. Les cultures cellulaires mises en place ont donné un aspect qualitatif et non quantitatif des évènements complexes qui se produisent in vivoThe passage of the epithelial barriers constitutes a stage limiting for the absorption of drugs. With the aim of testing in vitro the effectiveness of lipoaminoacids, patented by the company Physica Pharma, as promoters of absorption, I set up at the laboratory two cellular models of epithelial barriers. The first model is a model of intestinal barrier constituted by immortalized human cells, the colon Caco-2 cell line. The second model is a model of nasal epithelial barrier consisting of primary cultures of human nasal epithelial cells available from surgical acts. The permeability of four active drugs was studied on these models. The in vitro studies showed an increase in the permeability of drugs, in the presence of different lipoaminoacids, owing to the opening of the intercellular junctions. From this work, several formulations were selected for preclinical studies on the whole animal. The intestinal model barrier didn’t predict absorption in vivo. Indeed, the in vivo oral absorption studies carried out on the dog could not be correlated with the in vitro results. On the other hand, this work validates an epithelial nasal barrier model for permeability studies of molecules administered by nasal airway, which was validated by in vivo studies in the sheep. Cell cultures gave a qualitative but not a quantitative aspect of the complex events which occur in vivo
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Negri, Diana. „Embryogenèse somatique chez l'orge (Hordeum vulgare L. ) : application aux cultures de cellules et de protoplastes“. Paris 11, 1989. http://www.theses.fr/1989PA112300.
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This study deals with experiments about callogenesis and morphogenie potential of barley (Hordeum Vulgare L. ) tissue cultures. In this purpose, different genotypes and explants have been studied. The effect of medium composition has been also investigated. From immature embryo explants, high rates of callogenesis and in vitro plant regeneration has been obtained. Strong genotypic and medium composition effects have been also noticed on rate of callogenesis, type of callus and in vitro regenerative ability. Histological examinations of callus tissues have shown cellular proliferation primarily originating from the scutellum of young embryos. Subsequent differentiation of callus led to the formation of somatic embryos which have been histologically characterized. Organogenesis (root and apical meristem) was also obvious. For initiation of barley cell suspensions, pieces of embryogenie calluses have been selected. After dissociation and filtration procedures, rapidly growing and homogeneous cell lines which consisted of highly-cytoplasmic rich cells, have been obtained. In a third step, investigations on protoplast culture have been carried out with callus and suspension materials. Only cell suspension in exponential growth stage was suitable for protoplast culture. The isolated protoplasts were able to divide and produced numerous microcolonies which have developed into well growing indifferentiated calluses. Plating efficiency was also greatly affected by enzymatic solution composition. The use of this in vitro system in genetic manipulations such as transformation experiments is discussedL'étude du potentiel de régénération de plantes des cultures de tissus d'orge(Hordeum vulgare L. ) a fait l’objet de la première partie de ce mémoire. L'expérimentation a porté d’une part sur le choix de l'explant (origine développement) et d'autre part sur les conditions de culture (composition du milieu de culture). Des cals présentant un pouvoir élevé de néoformation de plantes ont été obtenus à partir d'embryons immatures. Le potentiel de régénération de plantes dépend du génotype, du milieu de callogénèse ainsi que de la durée de culture in vitro. Une étude histologique à permis de localiser au niveau du scutellum des embryons immatures les centres de prolifération cellulaire et de caractériser le mode de néoformation (embryogenèse somatique et organogenèse). L'étudedes conditions d'établissement de suspensions cellulaires est présentée dans la seconde partie. Les suspensions cellulaires isolées par dissociation et filtration de cals embryogènes se sont révélées non morphogènes. L'utilisation de suspensions cellulaires a permis l'obtention: populations de protoplastes aptes à se diviser. Les conditions isolement de protoplastes influent sur le taux de formation microcolonies. Leur culture a conduit à la formation microcolonies qui se développent jusqu'au stade cal indifférencié. L'utilisation de ces techniques de culture in vitro est discutée dans le cadre des manipulations génétiques telles les transformations dans le contexte des Graminées et notamment, des céréales
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Nassra, Merian. „Effets anti-inflammatoires des stilbènes sur des cultures cellulaires de microglies et mécanismes d'action“. Thesis, Bordeaux 2, 2012. http://www.theses.fr/2012BOR22018/document.
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Les processus neuro-inflammatoires sont observés dans de nombreux troubles neurodégénératifs. Les cellules microgliales étant les principales cellules immunitaires du système nerveux central, plusieurs recherches ont été menées afin de déterminer des molécules possédant des propriétés anti-inflammatoires au niveau de ces cellules. Une famille de polyphénols, les stilbènes (des dérivés du resvératrol), présentent des activités anti-inflammatoires au niveau périphérique et central. Dans notre étude, nous avons premièrement évalué les propriétés anti-inflammatoires de 25 stilbènes en déterminant leur capacité à inhiber la libération de NO dans un modèle de cellules microgliales BV-2 activées par le LPS. Dix stilbènes inhibent significativement cette production avec des IC50 comprises entre 3,9 ± 0,7 et 23,4 ±1,0 µM. Parmi ces composés, 1 monomère (moracine M) et 2 tétramères du resvératrol (vitisines A et B) diminuent la synthèse d’iNOS, enzyme responsable à la libération de NO, au niveau transcriptionnel et traductionnel. Nous avons ensuite mis en évidence que la moracine M inhibe la phosphorylation d’ERK1/2 et JNK (deux MAPK) et d’Akt (la voie PI3K/Akt) dans des cellules BV-2 activées. Ces enzymes étant impliquées dans la signalisation de la réponse inflammatoire, elles induisent la production de plusieurs médiateurs inflammatoires. La moracine M inhibe significativement la production de certains d'entre eux (NO, TNF-α, IL-1β et PGE2). Ce stilbène attenue également la synthèse de la protéine de mPGEs-1 (enzyme impliquée à la production de PGE2). Ainsi, la moracine M pourrait être un candidat potentiel pour prévenir l’inflammation impliquée dans les maladies neurodégénérativesChronic neuro-inflammatory processes observed in many neurodegenerative disorders. Microglia are the main immune cells of the central nervous system. Many studies have been conducted to find molecules with anti-inflammatory properties in the central nervous system. A family of polyphénols, Stilbenoids (resveratrol derivatives), showed anti-inflammatory effects in peripheral and central levels.In this study, we have first evaluated anti-inflammatory effects of 25 stilbenes for their potential to inhibit NO release by LPS-activated BV-2 microglial cells. Ten stilbenes significantly reduced LPS-induced NO production with IC50 ranging from 3.9 ± 0.7 to 23.4 ±1.0 µM. Among these molecules 1 monomer (moracin M) and two tetramers (vitisins A and B) attenuated the expression of iNOS, a responsible enzyme for NO release on transcriptional and translational levels. Then, we have demonstrated that moracin M inhibits ERK1/2 and JNK phosphorylation of MAPK pathway and Akt phosphorylation of PI3K/Akt pathway, two signaling pathways involved in the inflammatory response in activated BV-2 cells. Indeed, the activation of these pathways leads to the production of several inflammatory mediators. We have shown that moracin M significantly inhibits the production of certain mediators such as NO, TNF-α, IL-1β and PGE2. This stilbene reduces the synthesis of mPGES-1 protein (an enzyme involved in the production of PGE2). In conclusion, we suggest that moracine M could be a potential candidate prevents the inflammation which involved in the progress of neurodegenerative diseases
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El-Achkar, Pierre. „Etude de la biosynthese des phospholipides a ethanolamine par echange de base dans les cultures des cellules gliales (cultures primaires et lignees cellulaires)“. Strasbourg 1, 1988. http://www.theses.fr/1988STR13214.
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El-Achkar, Pierre. „Etude de la biosynthèse des phospholipides à éthanolamine par échange de base dans les cultures des cellules gliales cultures primaires et lignées cellulaires /“. Grenoble 2 : ANRT, 1988. http://catalogue.bnf.fr/ark:/12148/cb37611146d.
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Lejeune, Alexandre. „Perception et réactions de défense de la tomate lors de l'infestation par l'Orobanche ramosa“. Nantes, 2006. http://www.theses.fr/2006NANT2132.
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Parmi les cultures attaquées par la plante parasite Orobanche ramosa, la tomate présente un intérêt comme modèle d’étude des réactions de défense. En effet, des banques de données nucléiques sont disponibles et d’importantes ressources génétiques permettent d’envisager l’identification de variétés résistantes. L’expression de gènes de défense a été étudiée par northern blot sur des racines de la variété sensible de tomate M82 en contact avec des germinations d’O. Ramosa. Des gènes marqueurs des voies de l’acide salicylique, du jasmonate et de l’éthylène, sont induits de manière précoce (dans les premières heures de l’interaction). Ces réponses ont lieu avant la pénétration du parasite dans les racines de l’hôte, ce qui suggère la production par les germinations d’orobanches de molécules permettant leur perception par l'hôte. L’utilisation de suspensions cellulaires de tomate a permis de mieux caractériser ces réponses (augmentation de l’activité lipoxygénase et absence de production d’H2O2) et de confirmer la présence de molécules élicitrices libérées lors de l’interaction précoce tomate/orobanche. Un gène codant pour un récepteur kinase associé à la paroi (LeWAK) est aussi induit dans les racines et les suspensions cellulaires en réponse à l’orobanche. Cette protéine pourrait jouer un rôle dans la perception précoce du parasite à travers des mécanismes de signalisation impliquant une altération de la paroi de l’hôte. L’ADNc de ce récepteur a été cloné et une partie de sa séquence utilisée pour une production hétérologue chez E. Coli. Un sérum polyclonal a alors été développé contre le polypeptide produit afin de permettre l’étude de la localisation cellulaire et de l’évolution de la protéine LeWAK au cours de l’interactionAmong crops parasitized by the plant parasite Orobanche ramosa (broomrape), tomato constitutes a useful model to study defense responses. Indeed, expressed sequences databases and large genetic resources are available and could serve for further identification of resistant plants. Expression of known defense genes was studied on tomato M82 susceptible roots in contact with O. Ramosa seedlings. An early induction was reported for several marker genes of the salicylic acid, jasmonate and ethylene pathways, after only few hours of contact. These responses occur before any attachment of the parasite onto roots, which suggests that broomrape seedlings produce molecules allowing their perception by host. Tomato cell suspensions were used and enabled to (i) better characterize defense responses (increase in lipoxygenase activity, no H2O2 production), (ii) confirm the occurrence of elicitor molecules released in the early tomato: broomrape interaction. A gene encoding a wall-associated receptor kinase (LeWAK) was also induced both in roots and in cell suspensions challenged with broomrapes. It could be involved in host cell wall signalling leading to the early perception of the parasite. LeWAk cDNA was cloned and part of its sequence used for heterologous production in E. Coli. To study LeWAK localization and protein level during the interaction, a polyclonal antiserum raised against this produced polypeptide was developped
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Mattar, Dominique. „Établissement de cultures cellulaires haploïdes, diploïdes et transformées de ginkgo biloba par diverses stratégies variabilisantes“. Tours, 1994. http://www.theses.fr/1994TOUR3805.
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Ben, Seghir Ouafae. „Caractérisation des composés polyphénoliques dans les cultures de suspensions cellulaires de cotylédons de moutarde blanche (Sinapis alba L. )“. Vandoeuvre-les-Nancy, INPL, 1990. http://www.theses.fr/1990INPL057N.
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Ce travail rend compte d'abord de la mise au point d'un milieu de croissance pour la culture de suspensions cellulaires de moutarde blanche (Sinapis alba L. ) à partir de cals de cotylédons. Après optimisation de plusieurs paramètres de croissance (lumière, auxines, substrats), nous nous sommes plus particulièrement intéressés aux métabolites polyphénoliques solubles (libres et lies) et insolubles biosynthétisés pendant 11 jours de croissance. Ce temps limité est justifié par l'apparition d'un brunissement dans le milieu de culture à ce stade de la croissance. Le dosage des constituants polyphénoliques totaux intracellulaires, ainsi que leur caractérisation chimique ont été effectués au cours de la croissance cellulaire. La chromatographie en phase gazeuse (CPG) a été largement utilisée pour les fractionnements et les identifications de ces composés par comparaison à des échantillons commerciaux de structure connue. Les fractions solubles sont surtout représentées par les acides syringique, férulique et paracoumarique mis en évidence à l'état libre ou lié par des liaisons esters ou glycosidiques. Les oses engagés dans des liaisons glycosidiques sont surtout représentés par le glucose, la galactose et le fructose, tandis que le fructose est le plus abondant dans les combinaisons solubles incorporant des liaisons esters. Les oses libres ont été également mis en évidence et déterminés quantitativement par CPG. Par ailleurs, on peut remarquer que la teneur en lignine initialement dans les cals de cotylédons évolue faiblement au cours de la croissance des suspensions cellulaires. Enfin, trois activités enzymatiques impliquées dans le métabolisme phénolique ont été déterminées. On observe une corrélation entre le maximum d'activité PAL intracellulaire et la teneur maximale en lignine au 7ème jour. Au 9ème jour, les activités PPO et POD extracellulaires sont maximales ce qui tend à suggérer qu'elles sont vraisemblablement responsables du phénomène de brunissement du milieu de culture à ce stade de croissance.
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Schall, Serge. „La Multiplication de l'avocatier, Persea americana Mill. cv Fuerte, par microbouturage in vitro“. Grenoble 2 : ANRT, 1986. http://catalogue.bnf.fr/ark:/12148/cb376010776.
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Berthuy, Ophélie. „Puce à cellules multiplexée pour l'étude de réponses cellulaires parallélisées“. Thesis, Lyon 1, 2015. http://www.theses.fr/2015LYO10133/document.
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Les travaux présentés dans cette thèse concernent le développement d'une puce à cellules multiplexée pour l'étude de réponses cellulaires parallélisées. La lignée de cellules issues de cancer de la prostate, les cellules LNCaP, ont servi de modèle d'étude grâce à leur capacité à sécréter l'antigène prostate-spécifique (PSA) et la β-2-microglobuline (B2M) en réponse à l'induction par des hormones telles que la dihydrotestostérone (DHT). Nous avons ainsi pu détecter en temps réel et sans marquage ces molécules lors de leur sécrétion par de petites populations de cellules LNCaP adhérentes (de 1 à 100 cellules) à des positions déterminées sur une biopuce SPRi. Trois approches différentes ont été envisagées pour cette biopuce. La première consistait à microtexturer la surface d'or d'un support de SPRi afin d'obtenir des micropuits dont le fond révèle la surface d'or (région cytophile) et dont l'extérieur est composé de polystyrène (cytophobe) afin de créer un contraste d'adhésion pour la culture cellulaire. Des anticorps ont pu être immobilisés de façon contrôlée dans les micropuits grâce à un automate de micro-dépôt non contact. Dans ce système miniaturisé, différentes lignées cellulaires ont pu être co-cultivées sur une surface de 1 cm², ouvrant la voie au multiplexage. Une petite population de cellules (de 1 à 100) a été déposée de façon automatisée dans chaque micropuits. Afin de maintenir les cellules dans un milieu hydraté au cours du dépôt, un polymère d'alginate biocompatible a été utilisé. Cette méthode permet l'encapsulation de cellules dans un très petit volume (< 50 nL). La capacité de cet hydrogel à maintenir les cellules encapsulées à une position donnée sur le support a conduit à la conception d'une deuxième approche pour la fabrication de la biopuce. En effet dans cette approche la surface n'est pas modifiée et les composés biologiques (anticorps et cellules) sont directement déposés de façon automatisée sur la couche d'or. Enfin une dernière approche a été développée en immobilisant cette fois-ci les cellules sur un support microtexturé placé en face de la couche sensible de SPRi. Dans les trois approches, les cinétiques de sécrétion du PSA et de la B2M sécrétées ont pu être suivies par SPRiThe work reported in this thesis focuses on the development of a multiplexed cell chip for the study of parallelized cellular responses. The lineage of cells from Prostate cancer LNCaP cells, were used as a study model thanks to their ability to secrete prostate-specific antigen (PSA) and β-2-microglobulin (B2M) in response to induction by hormones such as dihydrotestosterone (DHT). We were able to detect in real time these label-free molecules and their secretion by small populations of adherent LNCaP cells (from 1 to 100 cells) at specified positions on a SPRi biochip. Three different approaches were considered for this biochip. The first was to pattern the gold surface of a SPRi slide to obtain microwells whose bottom reveals the gold surface (cytophilic area) and an outer shell composed of polystyrene (cytophobe) to create an adhesive/non-adhesive surface for cell culture. Antibodies were immobilized in a controlled manner in the microwells using a piezo electric spotter. In this miniaturized system, different cell lines were co-cultured on a surface of 1 cm², paving the way for multiplexing. A small population of cells (1 to 100) was deposited in an automated manner into each microwell. In order to maintain the cells in a hydrated environment during deposition, a biocompatible alginate polymer was used. This method allows the encapsulation of cells in a very small volume (<50 nL). The ability of the hydrogel to maintain the encapsulated cells in a given position on the support led to the design of a second approach for the production of the biochip. In this second approach the surface is not altered and biological compounds (antibodies and cells) are directly deposited in an automated manner on the gold layer. Finally, a last approach was developed by immobilizing the cells on a patterned substrate placed in front of the sensitive layer SPRi. In all three approaches, the kinetics of PSA secretion and secreted B2M could be followed by SPRi
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Thierie, Jacques. „Théorie et applications des systèmes polyphasiques dispersés aux cultures cellulaires en chémostat“. Doctoral thesis, Universite Libre de Bruxelles, 2005. http://hdl.handle.net/2013/ULB-DIPOT:oai:dipot.ulb.ac.be:2013/211011.
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Les systèmes microbiologiques naturels (colonne d’eau), semi-naturels (station d’épuration), mais surtout industriels ou de laboratoire (bioréacteurs) sont communément représentés par des modèles mathématiques destinés à l’étude, à la compréhension des phénomènes ou au contrôle des processus (de production, par exemple).Dans l’énorme majorité des cas, lorsque les cellules (procaryotes ou eucaryotes) mises en jeu dans ces systèmes sont en suspension, le formalisme de ces modèles non structurés traite le système comme s’il était homogène. Or, en toute rigueur, il est clair que cette approche n’est qu’une approximation et que nous avons à faire à des phénomènes hétérogènes, formés de plusieurs phases (solide, liquide, gazeuse) intimement mélangées. Nous désignons ces systèmes comme « polyphasiques dispersés » (SPD). Ce sont des systèmes thermodynami-quement instables, (presque) toujours ouverts.
La démarche que nous avons entreprise consiste à examiner si le fait de considérer des systèmes dits « homogènes » comme des systèmes hétérogènes (ce qu’ils sont en réalité) apporte, malgré une complication du traitement mathématique, un complément d’information significatif et pertinent.
La démarche s’est faite en deux temps :
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Doctorat en sciences, Spécialisation biologie moléculaire
info:eu-repo/semantics/nonPublished
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Martineau, Estelle. „Etude de profils métaboliques dans les cellules de culture humaine par spectroscopie isotopique : application pour la découverte de nouvelles cibles thérapeutiques“. Nantes, 2011. http://www.theses.fr/2011NANT2099.
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L'étude des métabolites en milieu complexe par RMN et SMRI est extrêmement prometteuse pour le développement d'outils pour le dépistage du cancer du sein. Toutefois, la quantification des métabolites intracellulaires par RMN 1D est limitée par les recouvrements entre pics. La RMN 2D semble être une solution à ce problème mais les longues durées expérimentales restreignent son usage à des fins quantitatives. Par ailleurs, la SMRI n'a jamais été envisagée jusqu'à présent pour différencier des cellules cancéreuses. L'objectif de cette thèse est d'établir des profils isotopiques et métaboliques de ces cellules par RMN et SMRI. Une première approche consiste en une optimisation d'expériences de RMN 2D afin d'évaluer leurs potentialités pour obtenir des analyses quantitatives rapides et précises. La séquence INADEQUATE-1H permet, après optimisation, l'acquisition de spectres quantitatifs en 7 minutes avec une excellente linéarité et une répétabilité inférieure à 2%. En parallèle, une stratégie de comparaison des méthodes d'extraction est développée afin de choisir la plus robuste et répétable pour l'analyse métabolomique par RMN des cellules du cancer du sein. En couplant la méthode d'extraction choisie à la RMN 2D optimisée, la concentration absolue des métabolites est déterminée avec précision sur plusieurs lignées cancéreuses par une méthode d'ajouts dosés. Une seconde approche concerne la mise au point d'un outil de différenciation cellulaire par SMRI. La mesure des rapports isotopiques 15N/14N et 13C/12C permet d'établir une signature caractéristique de chaque lignée cellulaire et d'élaborer une carte isotopique discriminante de différents types de cancer du seinMetabolic studies in complex media by NMR and IRMS are highly promising towards the development of tools for breast cancer screening. Howewer, the quantification of intracellular metabolites by 1D NMR is limited by overlaps between peaks. 2D NMR offers a solution but suffers from long experiment durations which limit its quantitative use. On the other hand, IRMS has never been used to differenciate cancer cells. This work aims at establishing isotopic and metabolic profiles of these cells by NMR and IRMS. A first approach consists in optimizing 2D NMR sequences in order to estimate their potentialities for fast and precise quantitative analysis. Once optimized, the 1H INADEQUATE, sequence leads to quantitative spectra in 7 minutes with an excellent linearity and a repeatability better than 2%. Moreover, a comparison strategy of extraction methods is developed in order to determine the most robust and repeatable one for metabolomic studies of breast cancer cells. By coupling the optimum extraction method with the optimized 2D NMR protocol, the absolute metabolite concentrations are precisely determined on several cancer cell lines by a standard additions method. A second approach deals with the development of a cellular differentiation method by IRMS. The measurement of 15N/14N and 13C/12C isotopic ratios makes it possible to determine a characteristic isotopic signature of each cell line, and to draw up an isotopic map which discriminates between breast cancer cell lines
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Ginis, Olivia. „Identification de facteurs de transcription régulateurs de la voie de biosynthèse des alcaloïdes indoliques monoterpéniques chez Catharanthus roseus“. Thesis, Tours, 2012. http://www.theses.fr/2012TOUR4014/document.
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Catharanthus roseus est une plante tropicale qui produit spécifiquement des alcaloïdes indoliques monoterpéniques (AIM) d’intérêt thérapeutique. Chez C. roseus, la branche terpénique incluant la voie du méthylérythritol phosphate (MEP) est considérée comme limitante et présente une régulation transcriptionnelle coordonnée en réponse aux hormones inductrices de l’accumulation alcaloïdique. Lors de ce travail, suite à des analyses bioinformatiques et à la caractérisation de promoteurs de gènes de la voie MEP, nous avons identifié de nouvelles familles de facteurs de transcription impliquées dans la régulation de la biosynthèse des AIM. Des membres de la famille des ZCT, des WRKY et des RR type B interagissent avec le promoteur du gène hds de la voie MEP et régulent son activité. Ces travaux ont permis d’approfondir les connaissances sur les réseaux transcriptionnels régulateurs de la biosynthèse des AIM. L’utilisation de ces nouveaux facteurs de transcription activateurs peut désormais être envisagée dans le cadre d’expériences d’ingénierie métabolique afin d’augmenter l’accumulation d’alcaloïdes d’intérêt pharmaceutique chez C. roseusCatharanthus roseus is a tropical plant producing specifically monoterpene indole alkaloids (MIA) of high interest due to their therapeutical values. In C. roseus cells, the terpenoid branch including the methyl erythritol phosphate pathway (MEP) provides the MIA terpenoid moiety and is regarded as limited for MIA biosynthesis. This branch presents a coordinated transcriptional regulation in response to hormonal signals leading to MIA production. In this context, bioinformatic analysises and functional characterization of MEP pathway gene promoters allowed the identification of new transcription factor families involved in the MIA pathway regulation. Members of ZCT proteins, WRKY and type B RR families specifically interact with the hds promoter from the MEP pathway and regulate its activity. This work permits to gain into insight the transcriptional network controlling the MIA biosynthesis. It is possible now to consider using transcription factor that act as activators and target genes from the terpenoid branch to increase the accumulation of alkaloids of pharmaceutical interest in C. roseus by metabolic engineering approaches
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Lelievre, Jean-Marc. „Régulation hormonale de la sénescence de cellules de poire cultivées in vitro en relation avec la synthèse de protéines spécifiques“. Toulouse, INPT, 1987. http://www.theses.fr/1987INPT020A.
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Des cellules de poire cultivees en bioreacteur en privation d'auxine et en presence de mannitol, cessent de se diviser et subissent des modifications biochimiques et structurales associees a la senescence et a la mort. Analyse des effets de la re-addition de 2,4-d et de l'apport d'aba sur les syntheses proteiques et de polypeptides specifiques
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Bayad, Jamal. „Immortalisation de lignées cellulaires hépatocytaires : expression et régulation des enzymes du métabolisme des xenobiotiques“. Nancy 1, 1991. http://www.theses.fr/1991NAN10450.
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Dufresne, Murielle. „Comportements cellulaires en culture d'explants arteriels : caracterisation phenotypique et influence de l'heparine sur la proliferation“. Compiègne, 1998. http://www.theses.fr/1998COMP1120.
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Parmi les pathologies cardio-vasculaires, les resténoses sont responsables d'un taux d'échec supérieur à 50% à long terme pour des artères de petit calibre. Cette complication résulte d'une activation des cellules musculaires lisses qui, par leur prolifération et par la sécrétion de produits matriciels, forment un épaississement intramural. Elle est aussi le fait d'une recolonisation incomplète par les cellules endothéliales. Nos expériences consistent en l'étude d'un modèle de culture d'explants sur fond de boite qui s'inscrit dans une démarche préventive dans la lutte anti-resténose. Leur originalité provient de ce que les cellules évoluent dans un environnement plus proche du in vivo que dans un modèle de culture où les cellules sont dispersées. Appliquée aux artères de poulet ainsi qu'a celles de bœuf, de chien et de porc, cette culture d'explants génère une coculture de cellules endothéliales et musculaires lisses, marquée par une évolution spatio-temporelle caractéristique. La culture d'explants d'artères coronaires de porc a ensuite été soumise a l'addition d'héparine. Ce polysaccharide exerce un effet inhibiteur sur la prolifération des cellules musculaires lisses de porc. Son efficacité est cependant plus faible en culture d'explants qu'en culture de cellules dispersées. D'autre part, la multiplication des cellules endothéliales semble être stimulée en culture d'explants, alors que les cultures de cellules dispersées sont inhibées par l'héparine. Des études en cytofluorométrie indiquent que l'héparine modifie le niveau d'expression de l'alpha-actine indépendamment du niveau de croissance cellulaire. Ces résultats montrent que la réaction des cellules en culture d'explants ressemble plus à celle observée in vivo comparée à celle obtenue en culture de cellules dispersées. Ils confirment l'hypothèse selon laquelle l'efficacité de l'héparine serait renforcée si elle était délivrée localement.
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Saleil, Véronique. „Développement "in vitro" des apex isolés à partir de deux espèces d'igname, Dioscorea alata et Dioscorea trifida“. Montpellier 2, 1986. http://www.theses.fr/1986MON20091.
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Verdier-Pinard, Pascal. „Action des alcaloi͏̈des de la pervenche de Madagascar (Catharanthus roseus) sur les protéines microtubulaires : formation différentielle des paracristaux de tubuline“. Toulouse 3, 1994. http://www.theses.fr/1994TOU30273.
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La vinblastine et la vincristine, alcaloides extraits de la pervenche de madagascar, appeles aussi alcaloides de la vinca sont des poisons des microtubules. Ils sont utilises en chimiotherapie antitumorale. In vitro, ces composes et les derives actifs inhibent l'assemblage des microtubules aux memes doses (1-2m) ; pourtant ils ne presentent ni le meme spectre d'action therapeutique, ni la meme toxicite. Notre etude porte sur l'action de ces composes in vitro, a de plus fortes concentrations (100m), ils peuvent ainsi etre distingues par leur aptitude a former des paracristaux de tubuline. Ces paracristaux presentent des differences concernant leur stabilite au cours de sauts thermiques. En utilisant ce parametre les treize composes etudies ont ete regroupes en quatre familles. Chacune de ces familles comporte un des quatre alcaloides utilise en chimiotherapie: la vinblastine, la vincristine, la vindesine et la vinorelbine. Dans la serie des derives alpha-aminophosphonates, une relation structure-activite a ete definie. Le role des proteines associees aux microtubules (maps) dans la formation des paracristaux par ces alcaloides a ete aussi examine. Ce second parametre a permis de distinguer les alcaloides de la vinca les uns des autres. Ces deux parametres pourraient constituer une nouvelle approche pour differencier in vitro les alcaloides de la vinca et d'etablir une eventuelle correlation avec leur activite pharmacologique
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El, Maataoui Mohamed. „Embryogénèse somatique chez le chêne liège (Quercus suber L. ) : induction, étude cytohistologique et essai de régénération de plantes entières“. Aix-Marseille 3, 1990. http://www.theses.fr/1990AIX30039.
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Des embryons somatiques ont ete obtenus chez le chene liege (quercus suber l. ) a partir d'explants caulinaires herbaces, preleves sur des semis ages de 6 a 8 mois et a partir d'embryons zygotiques excises au stadce cotyledonaires precoce. Dans le premier cas, il s'agit d'un phenomene assez rare, ne se produisant que chez 3% des explants alors que dans le second cas, les pourcentages d'embryogenese peuvent atteindre la majorite des explants. Une etude cytohistologique a permis de suivre aux niveaux cellulaire et tissulaire les modalites de mise en place des elements embryogenes et de preciser l'ontogenese des embryons somatiques. Ces derniers se forment le plus souvent d'une maniere indirecte, au sein de proliferations tissulaires de type friable. Ils sont edifies par des cellules embryogenes qui subissent une segmentation similaire a celle qui intervient dans l'embryogenese zygotique. Ces cellules embryogenes sont en rapport avec des cellules volumineuses et vacuolisees dont la morphologie rappelle les suspenseurs rencontres dans l'embryogenese des gymnospermes. Les embryons somatiques obtenus deviennent rapidement le siege de deviations morphogenetiques comme la monocotylie, la germination precoce et l'embryogenese adventive, qui interferent considerablement avec la regeneration de plantes entieres. Dans nos conditions experimentales, celle-ci n'a ete possible que moyennant une longue periode de maturation pendant laquelle il se produit une importante accumulation de reserves, en particulier amylacees
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Boonne, Cathy. „Micropropagation "in vitro" de Dittrichia viscosa W. Greuter et tolérance des plantes juvéniles aux contraintes minérales“. Montpellier 2, 1990. http://www.theses.fr/1990MON20017.
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La micropopagation in vitro de dittrichia viscosa (composee) est realisee a partir de fragments de tige a un bourgeon. La multiplication des pousses est obtenue par microbouturages successifs avec le milieu gelose comprenant la solution minerale de murashige et skoog additionnee de kinetine et d'acide naphtalene-acetique. L'enracinement des pousses favorise par le meme milieu sans phytohormone est suivi d'une transplantation en serre sur sable. La conservation a 5c des micoplantes, sous forme de microboutures, a pu etre realisee. La reponse de plantes obtenues d'une part, par bouturage horticole et d'autre part, par micropropagation, a ete comparee. Il a ete verifie que la juvenilisation eventuelle des microplantes ne modifie pas les caracteristiques physiologiques adaptatives de l'espece. La differenciation d'ecotypes nutritionnels observee a partir de boutures horticoles se reproduit en utilisant des microplantes; ce resultat confirme que la differenciation obtenue est d'ordre genetique plutot que phenotypique. L'utilisation des microplantes pour etudier la differenciation ecotypique au sein de populations a permis de confirmer l'existence d'ecotypes nutritionnels divers chez dittrichia viscosa: calcicoles, calcifuges. . . Et serpentinicoles, ainsi que d'ecotypes continentaux (france, espagne, italie) et d'ecotypes insulaires (corse et sardaigne)
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Pedeboscq, Stéphane. „Etude in vitro des effets cytotoxiques et apoptotiques induits par divers agents anticancéreux sur cultures cellulaires de glioblastomes humains“. Bordeaux 2, 2007. http://www.theses.fr/2007BOR21493.
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Le glioblastome est la tumeur maligne la plus agressive du SNC, avec une médiane de survie d'environ 1 an. Malgré les progrès des techniques chirurgicales et le développement de nouveaux protocoles de radio- et chimiothérapie, le pronostic reste très sombre : de nouvelles stratégies thérapeutiques sont donc nécessaires. En conséquence, nous avons développé un modèle in vitro capable d'évaluer l'effet d'agents anticancéreux sur des primocultures de cellules obtenues à partir de patients atteints de glioblastome. Les anticancéreux restés proviennent de différentes classes pharmacologiques : alkylants (témozolomide, carboplatine, BCNU), anti-EGFR (geftinib) et inhibiteur du protéasome (bortezomib). L'effet cytotoxique des anticancéreux a été évalué par un test de viabilité cellulaire au MTT. L'induction d'apoptose a été mesurée par cytométrie de flux à l'aide de la sonde fluorescente TMRM. L'expression de EGFR et bcl-2 a été déterminée par western blot. Sur la lignée DBTRG05-MG surexprimant ZGFR, les résultats montrent une augmentation de la cytotoxicité du ténozolomide et du carboplatine par l'addition de geftinib. Ceci n'est pas observé sur la lignée U87-MG, n'exprimant pas RGFR. Le bortezomib montre une importante toxicité à très faible concentration sur les 2 lignées. Le modèle de culture primaire a permis de montrer les différences interindividuelles vis à vis des anticancéreux testés, et d'évaluer l'effet de nouvelles molécules. Des corrélations ont été établies entre résultats in vitro et efficacité clinique. Enfin, la détermination d'EGFR et bcl-2 sur chaque primoculture a permis de déterminer un profil de bon ou mauvais répondeurGlioblastoma multiforme is a malignant astrocytic tumor with median survival of about 12 months. Despite advances in surgical techniques and in the development of new protocols in radio- and chemotherapy, the prognosis remains poor and new therapeutic strategies are required. Therefore, we developed an in vitro model able to evaluate anticancer drug toxicity on cells obtained from individual glioblastoma patients. Anticancer agents tested were from different pharmacological classes alkylating agents (temozolomide, carboplatin and BCNU), tyrosine kinase inhibitor of EGFR (geftinib) and proteasome inhibitor (bortezomib). A cytotoxicity test using MTT was used to evaluate in vitro drug efficacy. Apoptosis was measured by flow cytometry using a fluorescent probe TMRM. EGFR and bcl-2 expressions were determined by a western blotting technique. On glioblastoma DBTRG05-MG cell line expressing high levels of EGFR, our results show a potentiation of temozolomide and carboplatin cytotoxity by the anti-EGFR grftinib. This is not observed on U87-MG cell line which do not express EGFR. Bortezomib shows a great toxicity on the two cell lines, at very low concentrations. The primary culture model permits to determine individual response for each patient, shows interindividual differences between patients and allow us to evaluate the in vitro efficacy of new molecules. Then, we could establish a correlation between the in vitro data determined with our study model and the clinical efficacy evaluated in the patient file. EGFR and bcl-2 status were assessed on each primoculture leading us to determinz a good and bad responder profile