Dissertationen zum Thema „Cancer du sein post-partum“

La sénescence est une réponse à un stress biologique, caractérisée par un arrêt stable du cycle cellulaire. Néanmoins, les cellules restent métabolliquement actives et acquièrent un phenotype sécrétoire associé à la sénescence, avec la production d’un sécrétome complexe composé de cytokines, chémiokines, facteurs de croissance et modulateurs du remodelage de la matrice extracellulaire. La sénescence est associée à de nombreux processus pathologiques, comme la tumorigénèse et le vieillessement. Cependant, où, quand et comment la sénescence contribue aux processus physiologiques reste méconnu. Pour répondre à cette question, nous avons tiré profit de la glande mammaire (GM), un organe avec une plasticité remarquable pendant le développement post-natal. L’involution de la GM est l’un des évenements majeurs de mort cellulaire et de remodelage tissulaire chez les mammifères, lorsque les cellules épithéliales produisant le lait sont éliminées et que la GM retourne à son état pré-grossesse, attendant la prochaine gestation. Au cours de ma thèse, nous avons montré que la sénescence était induite transitoirement pendant la phase irréversible de l’involution. De plus, le programme de sénescence apparaissait spécifiquement dans les cellules luminales productrices de lait et corrélait à l’expression de l’inhibiteur du cycle cellulaire p16. En parallèle, nous avons établi un nouveau modèle d’organoides pour mimer la gestation, la lactation et l’involution de la GM. Dans ce modèle ex-vivo, nous avons aussi relever la présence de cellules sénescentes strictement lors du processus d’involution. Pour évaluer l’impact biologique de la sénescence in vivo, nous avons utilisé une méthode de scellement des mamelons pour découpler les phases réversible et irréversible de l’involution. Nous avons dévoilé une association étroite entre le sevrage des hormones lactogéniques qui a lieu lors de la seconde phase d’involution, et l’induction du programme de sénescence. Pour mieux définir les rôles physiologiques de la sénescence pendant l’involution, nous avons traités des souris avec de l’ABT-263, un composé sénolytique induisant l’apoptose des cellules sénescentes. Nous avons observé une altération du remodelage tissulaire suite à l’élimination des cellules sénescentes, avec des alvéoles résiduelles plus larges et un remplissage adipocytaire retardé. De plus, dans des organoides provenant de souris transgéniques p16-3MR, nous avons éliminé les cellules sénescentes avec succès grâce à l’administration de ganciclovir, ce qui a retardé le processus d’involution. Dans leur ensemble, les modèles in vivo et ex-vivo suggèrent un rôle important de la sénescence pour moduler la phase de remodelage tissulaire dans l’involution de la GM. Enfin, le processus d’involution est intiment lié avec le cancer du sein post-partum, un cancer diagnostiqué dans les 10 ans suivant une grossesse et associé à un mauvais pronostic. Explorer comment la sénescence impacte le microenvironnement lors de l’involution pourrait ainsi fournir de nouvelles connaissances pour mieux comprendre le cancer du sein post-partum
Cellular senescence is a biological stress response characterized by a stable cell cycle arrest. Nonetheless, cells remain metabolically active and acquire a senescence-associated secretory phenotype (SASP), a complex secretome composed of cytokines, chemokines, growth factors, and extracellular matrix remodeling modulators. Senescence is associated with various pathological processes, such as tumorigenesis and aging. However, it is unknown when, where and how senescence contributes to physiological processes. To answer this question, we took advantage of the mammary gland (MG), an organ with remarkable plasticity throughout postnatal development. The MG involution is one of the major mammalian cell death and tissue remodeling events, when milk-producing epithelial cells are removed, and the MG returns to its pre-gestation state, resting for further pregnancy. During my Ph.D., we showed that senescence was transiently induced during the irreversible phase of involution. The senescent program occurred specifically in the alveolar milk-producing luminal cells and correlated with the expression of the cell cycle inhibitor p16. In parallel, we established a novel organoid system to mimic MG gestation, lactation, and involution. In this ex-vivo model, we also highlighted the presence of senescent cells strictly during the involution-like process. To assess the biological impact of senescence in vivo, we used a teat sealing method to uncouple the reversible and irreversible phases of involution. We unveiled a close association between the withdrawal of lactogenic hormones occurring in the second phase of involution and the induction of the senescence program. To further define the physiological roles of senescence during involution, we treated mice with ABT-263, a senolytic compound inducing apoptosis of senescent cells. Interestingly, we observed an impaired tissue remodeling upon senescence elimination, with larger remaining alveolar structures and delayed adipocyte refilling. Moreover, in organoids from transgenic p16-3MR mice, we successfully removed senescent cells with ganciclovir and delayed the involution-like process. Taken together, both in vivo and ex-vivo models suggest an essential role of senescence in modulating the tissue remodeling phase of MG involution. Importantly, the involution process is intimately associated with postpartum breast cancer (PPBC), a cancer diagnosed within 10 years following delivery with a poor prognosis. Investigating how senescence impacts the microenvironment during the involution process might provide major insights to understand PPBC

Une désescalade thérapeutique des traitements du cancer du sein est observée notamment grâce à la chimiothérapie néo-adjuvante (CNA). Alors que la technique du ganglion sentinelle (GS) n'est actuellement pas recommandée après CNA, nous avons démontré sa faisabilité dans une série prospective de 129 patientes traitées par CNA avec un taux d'identification de 93,8%, un taux de FN de 14,3% et de 0% pour les patientes N0 avant CNA. En cas d'atteinte duGS, le risque de GNS métastatique était corrélé à la taille tumorale (p=0.016) et la taille de la métastase du GS (p=0.0055). Le nomogramme du MD Anderson (AUC=0.716) et le score de Thenon (AUC=0.778) pouvaient évaluer la probabilité d'atteinte du GNS. L'analyse per opératoire du GS par apposition a permis l'identification d'une métastase chez 72% des patientes (sensibilité=38.2% ; spécificité=97.8%). Les patientes qui présentaient une micro métastase ou la présence de cellules tumorales isolées dans le GS avaient un risque multiplié par 2,3 de FN de l'apposition par rapport aux patientes qui avaient une atteinte macro métastatique. En conclusion, notre travail a permis de montrer que la CNA n'avait pas d'influence négative sur la faisabilité de la technique du GS, en particulier pour les patientes N0 clinique avant traitement. Après CNA, l'analyse per opératoire du GS est possible ainsi que l'utilisation de certains nomogrammes déjà existants pour calculer la probabilité d'atteinte du GNS lorsque le GS est métastatique.

Cette recherche a pour objectifs de décrire et surtout d'expliquer de décrire et surtout d'expliquer la qualité de vie et le développement post-traumatique (changements positifs psychologiques vécus suite à un événement de vie difficile) de femmes étant actuellemnt de 5 à 15 ans du diagnostic d'un cancer du sein, en comparaison avec d'autres n'ayant pas eu le acncer et faisant référence à l'événement le plus difficile vécu dans les 15 dernières années de leur vie. Méthode : cette étude transversale a été menée par questionnaires auprès de 307 femmes ayant eu le cancer et 132 femmes constituant une position contrôle. Des entretiens semi-directifs, conduits auprès de 28 femmes anciennement cancéreuses ont complété les questionnaires dans l'appréhension du développement post-traumatiques après le cancer. Résultats : La qualité de vie des femmes à long terme du cancer est satisfaisante et comparable à celle de la population contrôle. Bien que des changements positifs soient effectivement déclarés, ils ne semblent pas spécifiques au cancer. Dans les deux populations, la qualité de vie mentale dépend essentiellement de la personnalité et du soutien perçu, la qualité de vie physique de variables sociodémographiques, médicales et des séquelles laissées par l'événement, le développement post-traumatique du coping. Conclusion : dans l'ensemble et à long terme, le cancer ne paraît pas plus délétère que d'autres événements difficiles sur la qualité de vie. Il convient néanmoins de ne pas minimiser l'impact d'un cancer du sein dans la vie d'une femme.

Une absence ou une réduction de l’expression des gènes de prédisposition au cancer du sein BRCA1 et BRCA2 est retrouvée dans un tiers des cancers du sein sporadiques. Cependant, les mécanismes entraînant une inactivation de leur expression déjà identifiés comme la présence de mutations somatiques, l’hyperméthylation de leur promoteur ou encore la perte d’hétérozygotie (LOH) ne suffisent pas, à eux-seuls, à expliquer cette forte diminution. Nous avons donc émis l’hypothèse d’une régulation de l’expression des gènes BRCA par les microARNs (miR). Suite à une analyse bioinformatique, validée par des tests luciférase, nous avons montré l’interaction directe de miR-146a et miR-146b-5p avec la 3’UTR de BRCA1. Ces miRs diminuent le taux de protéine BRCA1 lors de leur surexpression et l’augmentent lors de leur inhibition. Nous avons montré également le rôle joué par ces miRs dans la prolifération cellulaire et dans la réparation par recombinaison homologue, fonctions pour lesquelles BRCA1 est requise. Nous avons retrouvé ces 2 miRs surexprimés dans les lignées mammaires et les tumeurs triple-négatives qui ont un profil semblable aux tumeurs développées chez les porteuses de mutations BRCA1. Dans une deuxième partie nous avons analysé si ces deux microARNs jouaient aussi un rôle dans les cancers du sein familiaux. Notre étude du SNP rs2910164 : G>C situé dans le gène de miR-146a, nous a permis de montrer que sa présence ne modifie pas le risque de développer un cancer du sein chez les porteuses de mutation BRCA1 et BRCA2. Nous avons également entrepris de rechercher si certains gènes codant pour des miRs pouvaient être de nouveaux gènes modificateurs du risque tumoral chez les porteuses BRCA, et/ou de nouveaux allèles de prédisposition au cancer du sein
An absence or a reduction of the expression of the BRCA1 and BRCA2 breast cancer predisposition genes is found in one third of sporadic breast cancers. However, the mechanisms leading to the inactivation of their expression that have been already identified like the presence of somatic mutations, hypermethylation of the promoter or loss of heterozygosity at the BRCA loci are not sufficient to explain this large diminution. We therefore hypothesised that the expression of the BRCA genes could be regulated by microRNAs (miR). Following a bioinformatics analysis, validated by luciferase tests, we have shown a direct interaction of miR-146a and miR-146-b-5p with the 3’UTR of BRCA1. These miRs decrease the BRCA1 protein rate when they are overexpressed and increase it when they are inhibited. Furthermore we have demonstrated the role played by these miRs in cell proliferation and DNA repair by homologous recombination, two mechanisms for which BRCA1 is required. We have found these two miRs overexpressed in mammary cell lines and in triple-negative breast tumors that have a profile similar to that of the tumors developed by BRCA1 mutation carriers. In a second part, we analysed if these two microRNAs also play a role in familial breast cancers. An association study of the rs2910164 : G>C SNP located in the gene for miR-146a, has permitted us to show that its presence does not seem to modify the risk to develop breast cancer in BRCA1 and BRCA2 mutation carriers. We have also undertaken to determine if some miR genes could modify tumor risk in BRCA mutation carriers, and/or could represent new breast cancer predisposing alleles

Objectifs : Cette recherche étudie la variabilité de la qualité de vie de femmes atteintes de cancer du sein à l’aide de l’évaluation de facteurs biopsychosociaux, de la mise en évidence du rôle de la surveillance alternée mise en place à l’institut-Du-Sein (Drôme-Ardèche) et de l’étude du lien entre ces facteurs et le vécu de la surveillance post-thérapeutique. Méthode : Population : 30 femmes atteintes d’un cancer du sein non métastasé en rémission âgées de 36 à 78 ans et actuellement sous surveillance à l’Institut Du Sein (Drôme, Ardèche) ont participé à l’étude. Outils : cinq outils ont été utilisés : 1) Un entretien semi-directif abordant les thèmes suivants : la condition de malade et son contexte, l’installation du cancer et dans la maladie et les attentes relatives au suivi ; 2) Le test de l’arbre (Fernandez, 2005, 2010) pour évaluer à partir de constellations de tracés les facteurs psychologiques associées à la maladie ; 3) Le questionnaire d’anxiété et de dépression (HAD) (Zigmund et Snaith, 1983) évaluant la symptomatologie anxieuse et dépressive et sa sévérité ; 4) Le questionnaire d’image corporelle (QIC) (Bruchon-Schweitzer, 1981) afin d’évaluer la satisfaction de l’image corporelle ; 5) Le questionnaire de coping (WCC) (Vitalino et al., 1985 ; Cousson et al., 1996) évaluant les stratégies d’ajustement face au cancer ; 6) Le questionnaire de soutien social spécifique au cancer (QSSS-c) (Segrestan, 2008) qui estime le soutien social perçu ; 7) Le questionnaire de qualité de vie (FACT-B) (Brady et al., 1997) pour évaluer la qualité de vie globale, des symptômes physiques spécifiques et généraux du cancer du sein. Résultats : En s’appuyant sur le modèle transactionnel-intégratif-multifactoriel (TIM) de Bruchon-Schweitzer et Boujut (2014), on retrouve que certains antécédents (niveau d’étude, âge jeune, présence d’enfant à charge, mastectomie et présence d’hormonothérapie dans le traitement) ainsi que les facteurs liés à l’adaptation psychologique (coping, soutien social perçu) et facteurs psychologiques (anxiété, dépression, image corporelle) ont des effets directs sur la QdV et ses dimensions. Aucun effet médiateurs des facteurs transactionnels n’a été retrouvé entre les antécédents et les issus. Conclusion : Le modèle TIM est adapté et prometteur : des liens ont été mis en évidence entre les différents facteurs et le vécu par les patientes de la surveillance post-thérapeutique. L’évaluation de l’anxiété, de la dépression et de l’image corporelle des patientes à chaque étape de la maladie (au diagnostic, à la fin des traitements et en rémission) doit être rendue systématique. Des réajustements de la surveillance alternée mise en place à l’Institut-Du-Sein sont nécessaires
Objectives: This research deals with the variability of the quality of life of women suffering from a breast cancer, thanks to the assessment of biological, psychological and social factors, of the emphasis of the role of alternative follow-up installed by the Institut Du Sein (Drôme-Ardèche) and the study of the link between these factors, let alone the experience of the post medical supervision. Method: Population: 30 women in remission suffering from a non metastatic breast cancer, aged from 36 to 78 and currently under medical control at the Institut Du Sein were involved in this survey. Tools: 1) A semi guided interview broaching the following themes: the sick person’s condition and her background, the development of cancer as for the illness and the expectations in relation with the aftercare ; 2) The Test de l’arbre (Fernandez, 2005, 2010) to assess the psychological factors associated to the illness due to regrouping of drawing ; 3) The hospital anxiety and depression scale (HAD) (Zigmund et Snaith, 1983) assessing the symptomatic issue and its seriousness ; 4) The body image questionnaire (QIC) (Bruchon-Schweitzer, 1981) so as to assess the satisfaction of the body image ; 5) The way of coping checklist (WCC) (Vitalino et al., 1985 ; Cousson et al., 1996) assessing the adjustment strategies facing cancer ; 6) The cancer specific and social support questionnaire (QSSS-c) (Segrestan, 2008) which takes the social support received into consideration ; 7) The quality of life questionnaire (FACT-B) (Brady et al., 1997) to assess the general quality of life, all the general, physical and specific symptoms of breast cancer. Results: Using the transactionnel-integratif-multifactoriel (TIM) patterns of Bruchon-Schweitzer et Boujut (2014), it seems that certain medical history (educational standards, young age, dependent children, mastectomy and hormonotherapy in the treatment) and factors linked to the psychological adaptability (coping, perceived social support) adding psychological factors linked (anxiety, physical, body image) have direct consequences on the quality of life and its impacts. No mediator effect of the transactional factors was to be found between antecedent and quality of life. Conclusion: The TIM pattern is both adapted and promising: some links between the different factors and how the patients experienced the post medical aftercare were brought into the fore. The assessment of anxiety, depression and body image of the patients at each step of the illness (at the time of the diagnosis, at the end of the treatment and during the remission period) must be automatically done. Some adjustments of the alternative follow-up might be necessary at the Institut Du Sein

Cette etude longitudinale, menee au centre regional de lutte contre le cancer de la gironde, a etudie les reactions cognitives et emotionnelles a la douleur postoperatoire de quatre-vingtdeux femmes traitees chirurgicalement pour un cancer du sein (tumorectomie ou mastectomie). Les resultats ont montre que la moitie des patientes presentaient un syndrome douloureux post-mastectomie a six mois postoperatoires et que les reactions cognitives et affectives a la douleur postoperatoire chronique etaient influencees par l'anxiete-trait et l'investissement corporel, deux caracteristiques psychologiques evaluees en preoperatoire, sans que l'intensite douloureuse ne soit un facteur determinant. De plus, les reactions a la douleur, percue dans sa dimension affective, seraient davantage dependantes des representations et du sens qui lui sont associes. Dans une dynamique integrative de la psychologie de la sante et de la psychologie clinique, l'etude des dimensions cognitivoaffectives des reactions a la douleur ont permis d'expliquer la fonction defensive temporaire de la douleur vis-a-vis de l'atteinte ou de la perte du sein par le processus d'arret cognitif. Ainsi, cette etude a souligne l'importance de considerer un phenomene subjectif en lien avec l'ensemble des facteurs medicaux, sociaux et psychologiques dans le but d'une meilleure comprehension et d'une meilleure prise en charge.

Les microRNAs sont d'importants régulateurs de l'expression post-transcriptionnelle des gènes. Des perturbations d'expression et/ou d'activité des microRNAs contribuent au développement tumoral en dérégulant l'expression de gènes clés dans les cancers. Nos travaux se sont axés sur l'étude de l'expression et des fonctions des microRNAs (i) dans la régulation hormonale et (ii) au cours de la progression métastatique des cancers du sein. (i) Nous avons montré que l'activation des récepteurs des œstrogènes (par du 17-ß-œstradiol), un facteur de transcription clé des cancers du sein, induit une répression de l'expression des microRNAs dans plusieurs lignées tumorales mammaires œstrogéno-dépendantes. Cette diminution d'expression des microRNAs contribue à la prolifération œstrogéno-induite de ces cellules. (ii) Dans un modèle murin reproduisant les étapes caractéristiques de la progression métastatique, nous avons mis en évidence d'importantes dérégulations d'expression des microRNAs au cours de cette progression. En particulier, nos résultats suggèrent que les miR-31 et 125b auraient des propriétés pro-métastatiques
MicroRNAs are key players in post-transcriptional gene silencing. Altered expression and/or activity of microRNAs contribute to cancer development by modifying the expression of key cancer genes. Our work focused on the study of microRNAs expression and functions (i) in hormonal regulation and (ii) in metastatic progression of breast cancers. (i) We showed that upon activation of estrogen receptors (by 17-ß-estradiol), an important transcription factor , microRNAs expression are repressed in several estrogen-dependent breast cancer cell lines. This downregulation of microRNAs expresion is acting in part in the estrogen-dependent cell proliferation. (ii) In a mouse model of metastatic progression, we showed an important deregulation of microRNAs expression in regard with this progression. In particular, our work suggest that miR-31 and 125b would have prometastatic features

Le contrôle post-transcriptionnel de l'expression des gènes représente un vaste ensemble de processus biologiques autour de la machinerie des ARNm, jouant un rôle majeur dans la création de la diversité du répertoire protéique. La dérégulation de ces processus, générant un phénotype altéré, pourrait contribuer à la progression tumorale dans les cancers du sein. Nos travaux se sont axés sur l'étude de l'épissage alternatif des pré-ARNm et la dérégulation de la machinerie de l'épissage dans la progression métastatique des cancers du sein. Dans un modèle murin de carcinome mammaire, nous avons identifié des variants d'épissage spécifiquement associés au potentiel métastatique. Dans une large cohorte de patientes, nous avons montré que l'expression de certains de ces variants dans des tumeurs est associée à un pronostic défavorable. Enfin, nous avons caractérisé le profil d'expression des protéines régulatrices de l'épissage dans plusieurs séries de cancer du sein. Cette étude offre de nouvelles connaissances et perspectives pour le développement de biomarqueurs de la progression tumorale
Alternative RNA processing is a mechanism that plays a critical role for creation of protein diversity through selective inclusion or exclusion of RNA sequences during post-transcriptional control of gene expression. We hypothesized that alteration in this process might contribute greatly to tumour development and progression in breast cancer. The aim of our study was to identify and characterize defects in alternative splicing during breast tumour progression. In a murine model, we could identify specific mRNA splicing variants associated with metastatic development. In a large cohort of breast cancer patients, expression of a subset of these variants was correlated to poor prognosis. Finally, we characterised the expression profile of a large panel of proteins of the splicing machinery in breast cancer. Our study provides new insights in the understanding of mechanisms leading to tumour progression and perspectives for the development of new biomarkers and therapies

Pour les patients diagnostiqués avec un cancer au stade précoce, les décisions de traitement dépendent de l’évaluation du risque de rechute métastatique. Les outils de pronostic actuels sont fondés sur des approches purement statistiques, sans intégrer les connaissances disponibles sur les processus biologiques à l’oeuvre. L’objectif de cette thèse est de développer des modèles prédictifs du processus métastatique en utilisant une approche de modélisation mécaniste et la modélisation à effets mixtes. Dans la première partie, nous étendons un modèle mathématique du processus métastatique pour décrire la croissance de la tumeur primaire et de la masse métastatique totale chez des souris traitées avec le sunitinib (un inhibiteur de tyrosine kinase ayant une action anti-angiogénique) administré comme traitement néoadjuvant (i.e. avant exérèse de la tumeur primaire). Le modèle est utilisé pour tester des hypothèses expliquant les effets différentiels du sunitinib sur la tumeur primaire et les métastases. Des algorithmes d’apprentissage statistique sont utilisés pour évaluer la valeur prédictive des biomarqueurs sur les paramètres du modèle.Dans la deuxième partie de cette thèse, nous développons un modèle mécaniste pour la prédiction du temps de rechute métastatique et le validons sur des données cliniques des patientes atteintes d’un cancer du sein localisé. Ce modèle offre des prédictions personnalisées des métastases invisibles au moment du diagnostic, ainsi que des simulations de la croissance métastatique future, et il pourrait être utilisé comme un outil de prédiction individuelle pour aider à la gestion des patientes atteintes de cancer du sein
For patients diagnosed with early-stage cancer, treatment decisions depend on the evaluation of the risk of metastatic relapse. Current prognostic tools are based on purely statistical approaches that relate predictor variables to the outcome, without integrating any available knowledge of the underlying biological processes. The purpose of this thesis is to develop predictive models of the metastatic process using an established mechanistic modelling approach and the statistical mixed-effects modelling framework.In the first part, we extend the mathematical metastatic model to describe primary tumour and metastatic dynamics in response to neoadjuvant sunitinib in clinically relevant mouse models of spontaneous metastatic breast and kidney cancers. The calibrated model is then used to test possible hypothesis for the differential effects of sunitinib on primary tumour and metastases, and machine learning algorithms are applied to assess the predictive power of biomarkers on the model parameters.In the second part of this thesis, we develop a mechanistic model for the prediction of the time to metastatic relapse and validate it on a clinical dataset of breast cancer patients. This model offers personalised predictions of the invisible metastatic burden at the time of diagnosis, as well as forward simulations of metastatic growth, and it could be used as a personalised prediction tool to assist in the routine management of breast cancer patients

Les protéines de liaison aux ARNms ou mRBPs participent à la régulation, à la coordination et au couplage des étapes post-transcriptionnelles de l'expression des gènes. Des modifications de la régulation de leur expression et de leur activité dans les cancers pourraient contribuer au développement tumoral. Nos travaux se sont accès sur l'étude d'une mRBP régulatrice de la traduction, hnRNP A1, dans les cellules tumorales mammaires. Nous avons montré que l'activité traductionnelle de hnRNPA1 pouvait être régulée par sa relocalisation cytoplasmique dans certaines conditions de stress. Nous avons observé qu'une localisation cytoplasmique de hnRNPA1 était associée à des rechutes métastatiques et à un mauvais pronostic dans des tumeurs du sein, et précisé l'effet de cette relocalisation cytoplasmique sur la tumorigenèse. Cette étude suggère que la régulation de la traduction par relocalisation subcellulaire d'une mRBP puisse être déterminante dans les cancers
MRNA binding proteins or mRBPs are involved in the regulation, the coordination and the coupling of post-transcriptional gene expression. Modifications in the regulation of their expression and/or activity in cancer contribute to the tumoral development. Our work focused on the study of the translational regulator, hnRNP A1,. We have shown that the translational activity of hnRNP A1 is regulated by its cytoplasmic relocalization upon different stress conditions. We have also observed that a cytoplasmic localization of hnRNP A1 is associated with metastatic relapse and bad prognosis in breast tumors, and we have initiated a study of the effects of this cytoplasmic relocalization on tumorigenesis. This work suggests that regulation of translation by subcellular relocalization of an mRBP may be determinant in cancer

La protéine suppresseur de tumeurs p53, est impliquée dans de nombreuses voies de signalisation cellulaire et est également la protéine la plus mutée dans les cancers. Les mécanismes de régulation de l'activité de p53 impliquent des modifications post-traductionnelles et des protéines partenaires pour lesquelles les données de la littérature sont pléthoriques et fragmentaires. Dans la présente étude, nous avons développé une approche de protéomique basée sur l'immunoprécipitation et la spectrométrie de masse pour étudier les modifications post-traductionnelles de p53 et identifier ses protéines d'interaction. Dans un premier temps nous avons séquencé la totalité de la protéine p53 immunoprécipitée des cellules du modèle Cos-1. Cette expérience nous a permis d'identifier plusieurs sites de phosphorylations déja connus sur les serines: S15, S33, S315 et S392. Nous avons également identifié des acétylations sur les lysines suivantes: K305, K370, K372, K373, K381 et K382. C'est la première fois que des acétylations sont reportées pour la proteine p53 isolée des cellules Cos-1. De plus, il est reporté pour la toute première fois l'existence d'acétylation sur les résidus 319, 357 et 386. Dans un second temps, nous avons recherché les protéines qui se fixent sur p53 dans les cellules épithéliale mammaire non cancéreuse (MCF10A) versus les cellules cancéreuse (MCF7). Nos résultats identifient un certain nombre de partenaires potentiels de p53 et montrent pour la première fois que l'inhibiteur de serine protéase Maspine est capable de former un complexe avec p53. Ce complexe nucléaire est retrouvé exclusivement dans les cellules non cancéreuses MCFlOA et pourrait constituer un nouveau mécanisme de régulation de l'activité de p53
The tumor suppressor protein p53 is involved in many signaling pathways and is the most frequently mutated protein in cancers. The mechanisms for the regulation of p53 activity involve post-translational modifications and partner proteins for which literature is phletoric and fragmentary. ln the present study, we have developed a proteomics approach, coupling immunoprecipitation and mass spectrometry, to investigate p53 post-translational modifications and protein partners. First, we sequenced the full p53 protein immunoprecipitated from the Cos-l cells. This lead to the identification and localization of several known phosphorylations on serine residues S 15, S33, S315 and S392 as weIl as several known acetylations on lysine residues: K305, K370, K372, K373, K381 and K382. Acetylation sites are being reported for the tirst time on monkey p53 from Cos-l cells on lysine 319,357 and 386. Second, we looked for partner proteins that can bind to p53 in non cancerous (MCFlOA cells) versus cancerous (MCF7) human breast epithelial cells. Our results report a series of putative interacting partners among which the serine protease inhibitor maspin. The complex between p53 and maspin was validated by westem-blotting, localized in the nucleus and found in the noncancerous MCFlOA cells only. The p53/maspin interaction could represent a new regulatory mechanism for the activity of p53

Les patientes atteintes d’un cancer du sein bénéficient pour la plupart d’une mastectomie, qui consiste en une ablation du sein dans le but de retirer les cellules tumorales. Cet acte chirurgical entraîne une perte conséquente de tissu et peut être alors suivi d’une opération de reconstruction mammaire afin de combler le volume manquant. Il existe aujourd’hui un certain nombre de méthodes de reconstruction, cependant toutes présentent à la fois des avantages et des inconvénients. Les recherches actuelles sont orientées vers le développement de solutions de reconstruction innovantes à partir des propres tissus des patientes. Parmi elles, la reconstruction par chambre d’ingénierie tissulaire (TEC) semble prometteuse pour reconstruire des volumes plus importants.L’objectif de ce travail de thèse est de proposer une amélioration des TEC en ayant recourt à l’impression 3D de matériaux biorésorbables. L’utilisation de polymères thermoplastiques biorésorbables permet de ne pas avoir à réaliser une seconde chirurgie après la reconstruction qui consisterait en le retrait de l’implant. De plus, utiliser l’impression 3D comme moyen de fabrication permettra à terme de proposer aux patientes des implants sur-mesure adaptés à leur morphologie et donc d’améliorer l’aspect esthétique de la reconstruction.L’étude a d’abord porté sur le choix d’un procédé de fabrication additive et d’une méthode de stérilisation pour le développement de l’implant permettant de minimiser la dégradation des biomatériaux sélectionnés. La fabrication par dépôt de filament fondu ainsi que la stérilisation par oxyde d’éthylène ont été retenues comme moyen de production de l’implant final stérile. Une étude de dégradation in vitro a ensuite été réalisée dans le but de déterminer les profils de résorption des PLGA et PLCL. Enfin, une étude in vivo a été conduite sur un modèle rat qui nous a permis de valider le concept de TEC résorbable imprimée en 3D. Les deux biomatériaux résorbables sélectionnés se sont donc montrés compatibles avec le procédé de reconstruction par chambre d’ingénierie tissulaire et ont donc permis la croissance du lambeau graisseux au cours du temps au sein de la TEC
Mastectomy is one of the most common way to treat breast cancer, it consists in the removal of breast tissue to remove tumor cells. This surgical act causes a consequent loss of tissue and can then be followed by a breast reconstruction operation to fill in the missing volume. Implant based or autologous fat grafting (fat flap or lipofilling) are some of breast reconstruction method, however they all have advantages and drawbacks. Tissue engineering chamber (TEC) using fat flap from the patient’s own tissue could be a promising solution to restore large volume of mature and vascularized adipose tissue and a therapeutic alternative to current breast reconstruction techniques.The main objective of this thesis it to improve TEC by using additive manufacturing and bioabsorbable polymers. The use of bioresorbable thermoplastic polymers eliminates the need for a second surgery, which would consist of removing the implant after breast reconstruction. In addition, using 3D printing to manufacture the TEC will allow patients to be offered tailor-made implants adapted to their morphology and therefore improve the aesthetic aspect of the reconstruction.The study first focused on the choice of an additive manufacturing process and a sterilization method for the development of the implant to minimize the degradation of the selected biomaterials. Fused Filament Fabrication (FFF) as well as ethylene oxide sterilization were chosen as means of producing the final sterile device. An in vitro degradation study was then carried out to determine the resorption profiles of PLGA and PLCL. Finally, an in vivo study was carried out on a rat model which enabled us to validate the concept of 3D-printed bioabsorbable TEC. The two selected polymers were therefore shown to be compatible with the tissue engineering chamber reconstruction process and thus allowed the growth of the fat flap over time within the TEC

Les lymphomes anaplasiques à grandes cellules (ALCLs) sont caractérisés par l'expression d'une protéine de fusion (X-ALK) dans laquelle le partenaire N-terminal (dans la majorité des cas la nucléophosmine NPM) est fusionné à la portion cytoplasmique de la protéine ALK (Anaplastic Lymphoma Kinase) contenant un domaine tyrosine kinase. L'expression constitutive de cette tyrosine kinase oncogénique provoque l'activation de nombreuses voies de signalisation responsables du caractère tumoral des cellules qui l'expriment. En découvrant que la protéine de liaison à l'ARN, AUF1, est un partenaire privilégié de NPM-ALK, nous avons émis l'hypothèse qu'outre son effet sur la transcription, la tyrosine kinase oncogénique pourrait également réguler l'expression des gènes au niveau post-transcriptionnel. En utilisant une combinaison d'approches biochimiques, nous avons mis en évidence une hyperphosphorylation de la protéine AUF1 dans les cellules murines NIH3T3 exprimant de manière stable la translocation NPM-ALK et une corrélation entre cette hyperphosphorylation et l'augmentation de la stabilité d'un certain nombre d'ARN contenant une ARE (c-myc, Cycline D1, A1, B2. . . ). En utilisant des expériences d'imagerie cellulaire, nous avons montré qu'AUF1, HuR (une autre AUBP) et NPM-ALK (ou d'autres fusions X-ALK) étaient concentrés dans des granules cytoplasmiques, que nous avons appelés AG, pour ALK Granules. Nous avons analysé par vidéo-microscopie la parenté entre les AG et d'autres granules cytoplasmiques, les processing bodies (PB) et les granules de stress (SG), qui jouent un rôle dans le tri, le stockage ou la dégradation des ARNm. Enfin, nous avons identifié le contenu protéique et ribonucléique (mRNA et miRNA) des AG. L'ensemble de nos résultats montrent que les AGs contribuent au contrôle du métabolisme des ARN dans les cellules et pourraient jouer un rôle majeur dans l'oncogénicité de NPM-ALK
Anaplastic Large Cell Lymphomas (ALCLs) are characterized by the expression of a fusion protein (XALK), in which the N-terminal partner (in most cases the nuclephosmin NPM) is fused to the cytoplasmic portion of ALK (Anaplastic Lymphoma Kinase) containing a tyrosine kinase domain. The constitutive expression of this oncogenic tyrosine kinase causes activation of many signalling pathways responsible for malignant transformation of the cells that express it. Following the discovery that the RNA binding protein AUF1 to is a partner of NPM-ALK, we hypothesized that besides its effect on transcription, NPM-ALK may also regulate gene expression at the post-transcriptional level. In fact, AUF1belongs to the AUBP family that controls the stability and translation of many RNAs containing in their 3' non-coding region a region rich adenine and uridine (ARE). The majority of these mRNAs encode proteins involved in controlling cell proliferation, apoptosis, stress and immune response. Therefore, following its interaction with NPM-ALK, AUF1 activity could be modified resulting in deregulation of the expression of its RNA targets. Using a combination of biochemical approaches, we have shown that AUF1 is hyperphosphorylated in murine NIH3T3 cells stably expressing the NPM-ALK translocation and this hyperphosphorylation is correlated with an increased stability of a number of ARE containing RNAs (e. G. C-myc, cyclin D1, A1, B2. . . ). Using cell imaging experiments, we showed that AUF1, HuR (another AUBP) and NPM-ALK (or other fusion X-ALK proteins) were concentrated in cytoplasmic granules, which we called AG for ALK granules. We analyzed by video microscopy the relationship between AG and other cytoplasmic granules, the processing bodies (PBs) and stress granules (SGs), which play a role in sorting, storage or degradation of mRNA. Finally, we identified the protein and ribonucleic (mRNA and miRNA) of AG. All our results show that AGs contribute to the control of RNA metabolism in the cells and could play a major role in NPM-ALK mediated oncogenicity

Dans le cadre d'une étude transversale menée sur 202 patientes ménopausées et non ménopausées,les objectifs sont de démontrer l'existence d'un lien entre ménopause et altération de l'état de santé buccodentaire. D'évaluer l'action du THM sur la morbidité dentaire et «in fine» sur la mortalité dentaire.De préciser les liens entre santé bucco-dentaire et diverses pathologies générales et d'apprécier les liens entre psychisme et soma chez les femmes ménopausées. D'apprécier l'influence des biphosphonates sur l'état de santé parodontal.De placer l'étude des liens état bucco-dentaire- ménopause dans une optique sociétale et anthropologique.La ménopause a pour conséquence une altération du parodonte (p=0,003).Le THM a une action bénéfique sur le parodonte.L'effet biologique du diabète est drastique quant à la perte des organes dentaires (p=0,050).L'étude souligne l'influence «per se» d'un mauvais état bucco-dentaire pour la pathologie coronarienne (OR=1,214). De plus,évènements stressants,sècheresse buccale,pathologies ostéo articulaires,carence hormonale sont des facteurs diversement liés de la mortalité dentaire durant cette période. Par ailleurs, il est apparu que les femmes ayant été récemment traitées pour un cancer du sein développaient plus de caries dentaires (p=0,031 OR=2,161). L'étude met en évidence les effets des biphosphonates sur l'altération du parodonte (p=0,011) malgré la prise d'un THM (p=0,020).Un milieu socioculturel aisé contribueraient à la médicalisation du phénomène physiologique.Le fait de vivre seule influerait sur la perte des organes dentaires (p=0,035). Enfin,la pratique régulière d'un sport améliorerait l'état de santé orale (p=0,036)
In a cross-sectional study of 202 postmenopausal and premenopausal women,the objectives of this study are to demonstrate a link between menopause and altered state of oral health.To evaluate the action of HRT on dental disease and finally on the tooth mortality. To assess and clarify the relationship between oral health and various general diseases and links between psyche and soma in postmenopausal women.Also discussed was the influence of bisphosphonates on the state of periodontal health.Finally,it was decided to place the study links oral menopausal status in a social and anthropological perspective.It appears then that menopause results in an altered state of oral health,(p = 0.003).HRT has a beneficial effect on the periodontal disease.The biological effects of diabetes are related to dental mortality (p = 0.050). This study emphasize the influence "per se" a bad oral health status for coronary artery disease (OR = 1.214).In postmenopausal women, stressful events, dry mouth, joint and bone diseases, hormonal deficiency are factors variously related dental mortality during this period. Moreover, it was found that women who have recently been treated for breast cancer developed more dental caries (p = 0.031 OR = 2.161).The study related the effects of bisphosphonates on the alteration of periodontal (p = 0.011), despite taking HRT (p = 0.020).In addition,background socio-economic favored contribute to the medicalization of physiological phenomenon. The fact of living alone would affect the loss of dental organs (p = 0.035). Finally, the regular practice of a sport improve the state of oral health (p = 0.036)

Le récepteur de l'acide rétinoïque RAR est une protéine de la superfamille des récepteurs nucléaires liant le ligand acide rétinoïque (AR). En présence de son ligand, RAR induit la transcription de ses gènes cibles alors qu'en son absence la transcription est inhibée. Le mécanisme de régulation de RAR est altéré dans les lignées cellulaires humaines de carcinome mammaire dû à une baisse de capacité de synthèse de l'AR. Aussi, l'expression des microARN (miR) est perturbée dans le cancer du sein et un grand nombre de gènes ont été identifiés, après une analyse in-silico, comme des cibles prédites des miRs. Ces derniers peuvent être régulés pas des facteurs de transcription et ils sont capables d'inhiber la prolifération cellulaire et d'induire l'apoptose via la régulation de leurs cibles. Ainsi, les miRs peuvent jouer un rôle dans le mécanisme de régulation de RAR et être impliqués dans des boucles de régulation avec ce récepteur. Dans le cadre de ce travail, nous décrivons une approche développée pour prédire et caractériser des circuits de régulation au niveau transcriptionnel et post-transcriptionnel dans le cancer du sein. Nous nous sommes intéressés aux boucles de régulation de type feed-forward où RAR régule un miR et en commun ils régulent un ensemble de gènes codants pour des protéines dans les cellules tumorales mammaires MCF7 et SKBR3. Ces circuits ont été construits en combinant des données de ChIP-chip de RAR et des données de micro-puces d'ADN tout en utilisant des outils in-silico de prédiction des gènes cibles de miRs. Afin de proposer le modèle approprié de régulation, une analyse in-silico des éléments de réponse de l'AR (RARE) dans les promoteurs des miRs est réalisée. Cette étape permet de prédire si la régulation par RAR est directe ou indirecte. Les boucles ainsi prédites sont filtrées en se basant sur des données d'expression de miR existantes dans des bases de données et dans différentes lignées cellulaires, en vue d'éliminer les faux positifs. De plus, seuls les circuits pertinents sur le plan biologique et trouvés enrichis dans Gene Ontology sont retenus. Nous proposons également d'inférer l'activité des miRs afin d'orienter leur régulation par RAR. L'approche a réussi à identifier des boucles validées expérimentalement. Plusieurs circuits de régulation prédits semblent être impliqués dans divers aspects du développement de l'organisme, de la prolifération et de la différenciation cellulaire. De plus, nous avons pu valider que let-7a peut être induit par l'AR dans les MCF7.
The retinoic acid receptor (RAR) is a type of nuclear receptor that is activated by the ligand retinoic acid (RA). In the presence of ligand, RAR induces the transcription of its targets whereas in the absence of ligand the transcription is blocked. The mechanism of regulation of RAR is altered in breast cancer cell lines due to a reduced capacity to synthesize RA. Also aberrant patterns of microRNA (miR) expression have been reported in human breast cancer and a number of genes involved in breast cancer progression have been identified by in-silico analysis to be targets of miRs. The miRs could be controlled by transcription factors and via the regulation of their mRNA targets, the miRs could promote apoptosis and even inhibit cell proliferation. Hence, the miRs may play a role in the mechanism of regulation of RAR and could be involved in regulatory loops with this receptor. In this work, we describe an approach developed for the prediction and characterization of mixed transcriptional and post-transcriptional regulatory circuits in breast cancer. We concentrated in particular on feed-forward loops, in which RAR regulates a miR, and together with it, a set of joint target protein coding genes in human breast cancer cell lines MCF7 and SKBR3. These loops are constructed by combining ChIP-chip datasets of RAR with datasets of DNA microarrays and by using miR target prediction tools. In order to predict the appropriate model of regulation, in-silico analysis was performed to look for retinoic acid response element (RARE) in miR promoter. This step could identify if the regulation by RAR is direct or indirect. The regulatory loops will be then filtered, in order to reduce the number of false positive, based on databases designed to represent human miR expression profiles in different tissues or cell types. Moreover, only biologically relevant circuits enriched in Gene Ontology were retained. Also, we propose to infer miR activity in order to detect their regulation by RAR. This approach was able to find some existing experimental data. Several regulatory circuits seem to be involved in various aspects of organism development, proliferation and cell differentiation. Furthermore, we were able to validate the induction of let-7a by RA in MCF7 cells.

La reconstruction mammaire post-mastectomie améliore le bien-être psychosocial, et l’image corporelle des patientes. Parcontre, la reconstruction mammaire demeure faiblement utilisée et même inaccessible à des patients dû à des facteurs limitants. Les taux de reconstruction et les facteurs qui influencent l’accès à la reconstruction n’ont pas été évalués dans la province du Québec. Avec une revue de dossier rétrospective, l’objectif de notre étude est d’identifier les taux de reconstruction mammaire dans un centre tertiaire à Montréal et les facteurs qui influencent l’accès à la reconstruction, avec un revu de dossier rétrospective. Ensuite, nous avons évaluer directement dans la même cohorte de patientes, leur désire d’avoir une consultation en chirurgie plastique pour discuter d’une reconstruction. Il y avait un taux total de reconstruction mammaire post-mastectomie de 21%, dont 14% était immédiat et 8% tardif. Les patientes qui ont eu une reconstruction étaient plus jeunes, plus de tendance à avoir une plus grande proportion de mastectomie bilatérale, avaient des cancers non-invasifs et habitaient plus loin de l’hôpital (>10km). Environ la moitié des patientes avec une mastectomie sont intéresser à avoir une consultation avec un chirurgien plasticien mais seulement 38% ont eu une reconstruction. Les chances d’avoir subi une reconstruction, augmentent lorsqu’une reconstruction est offerte et expliquée. Présentement, il existe des barrières autres que les désires de la patiente qui empêchent l’accès à la reconstruction mammaire post-mastectomie.
Breast reconstruction post-mastectomy has been shown to improve psychosocial wellbeing, and body image. However, accessibility and acceptance of breast reconstruction is limited, with patients being unequally privileged based a number of limiting factors. To date, no evaluation on the rates of reconstruction and the factors that influence patient access has been performed in the province of Quebec. The objective of the research was two-fold with the first component being to identify the rates of breast reconstruction at a tertiary care center in Montreal and the factors influencing the rates of reconstruction through a retrospective chart review. The second component was to directly evaluate in the same cohort of breast cancer patients; their interest in a consultation with plastic surgery through a telephone questionnaire. There was a total rate of PMBR of 21%, where 14% of patients had an immediate reconstruction and 8% of eligible patients underwent a delayed reconstruction. Patients that received a PMBR were younger, more likely to have bilateral mastectomies, had non-invasive breast cancer and resided further then 10km from the hospital. Approximately half of patients with a mastectomy were interested in consulting a plastic surgeon but only 38% of all patients underwent a reconstruction. The offer and awareness of reconstruction increased the chance of opting to have a reconstruction. There are barriers outside of the patient’s own desires that impede their access to breast reconstruction.