Dissertationen zum Thema „Animal urine“

The detection of predators by prey species is crucial in order to escape the threat posed by a predator. In mammals, the olfactory sensory system is commonly used to detect odors emitted by predators, and to determine how threatening the situation actually is. However, knowledge about this ability is still sparse and in some cases conflicting. The aim of the present study was therefore to assess whether CD-1 mice (Mus musculus) show behaviors such as avoidance, anxiety and/or decreased activity when exposed to any of the three odorants: cat bladder urine, horse voided urine or a fruity odor (N-pentyl acetate), with a blank solvent as an alternative in a two-compartment test arena. I found no significant differences between avoidance (the time that the mice spent in the different compartments), anxiety (the numbers of fecal pellets dropped by the mice), or the overall activity (the number of switches between the two compartments), when the mice were exposed to the three different odors. The fact that the cat urine derived from the bladder of the cat may explain the lack of avoidance responses, since bladder urine might not contain the same chemical components as voided urine. Bladder urine might therefore also lack the chemical components that signal “predator” to the mice. In conclusion, mice do not respond differently to the odor of cat bladder urine than to horse voided urine or to the fruity odor of N-pentyl acetate.

During the last thirty years it has become increasingly apparent that pheromones play a major role in animal communication. Of economic interest to agriculturalists is the role pheromones play in signaling the state of estrus. The ability to efficiently detect estrus is becoming increasingly important, especially in the management of dairy and beef herds, where artificial insemination is used extensively. The understanding of pheromones may eventually provide a solution to this problem. The purpose of this study was to identify one or more compounds in the urine of cattle which undergo a change in concentration during the estrous cycle. In order to accomplish the objectives of this study, urine was obtained from cows exhibiting estrus and again 7 days post estrus. The urine was extracted with ether and the extract analyzed by gas chromatography. The area under each chromatographic peak was determined by integration. Areas were analyzed for variance between estrus and di-estrus. An attempt was made to identify each of the compounds represented by those peaks which proved to have statistically different concentrations . Two significant peaks were identified by coinjection with standards and found to represent propionic acid and iso-caproic acid. Three other statistically significant peaks were analyzed by mass spectrometry but concentrations were too low to determine the identities. Results indicate that propionic acid, iso-caproic acid and two of the unidentified compounds decrease in concentration during estrus. The third unidentified compound was found to increase during estrus. studies have not yet been done to show pheromonal properties, however, the first step to allow such studies has now been accomplished. Five compounds have been found which change in concentration during estrus. Because the changes reflect similar concentration changes in pheromones, it is believed that they may eventually prove to be pheromonal.

Orientador: Aulus Cavalieri Carciofi
Banca: Cristiana Fonseca Ferreira Pontieri
Banca: Márcia de Oliveira Sampaio Gomes
Banca: Telma Teresinha Berchielli
Banca: Thaila Cristina Putarov
Resumo: As fibras dietéticas são um grupo de carboidratos de interesse da nutrição de gatos. Estas são utilizadas em formulações específicas para gatos para reduzir a densidade energética de alimentos, previner e/ou auxilar o tratamento de doenças gastrintestinais e metabólicas e também para promover saúde intestinal devido ao estímulo de microorganismos produtores de ácidos graxos voláteis. Contudo, pouca informação existe a respeito das consequências metabólicas do consumo de fibras por gatos, seu efeito na excreção de água e eletrólitos, produção de urina ou mesmo o efeito da absorção de ácidos orgânicos derivados da fermentação microbiana intestinal. Este estudo verificou a influencia da fibra dietetica no balanço hidro-eletrolitico e de macroelementos, produção de oxalato e equilibrio ácido-basico de gatos. Foram utilizados 18 gatos adultos e três dietas: BP0, um dieta controle sem adição de fibra; PB8, com adição de 8% de polpa de beterrada e PB16, com adição de 16% de polpa de beterraba. Após 15 dias de adaptação, o consumo de alimento e água foram monitorados e as fezes e urina foram coletadas durante 8 dias. Neste período foram determinados o balanço hídrico dos animais, densidade, pH e volume de urina e coletadas amostras para determinação da concentração urinária de cálcio, fósforo, cloreto, sódio, potássio, magnésio, enxofre, ácido úrico, citrato e oxalato, para calculo da supersaturação relativa para oxalato de cálcio (SSR OxCa). Também foram determinados tempo de retenç... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo)
Abstract: Dietary fibers are a group of carbohydrate of interest to the nutrition of cats. These are used in specific formulations for cats to reduce food energy density, avoid or assist the treatment of gastrointestinal and metabolic diseases and also to promote intestinal health due to stimulus of microorganisms to produce volatile fatty acids. However, there is little information about the metabolic consequences of fiber intake for cats, their effect on water and electrolytes excretion, urine production, or even the effect of absorption of organic acids derived from intestinal microbial fermentation. The present study verified the influence of dietary fiber in water and macroelements balance, oxalate production and acid-base balance of cats. It were used 18 adult cats and three diets: BP0, a control diet without adding fiber; BP8 with 8% beet pulp added and BP16, with 16% beet pulp added. After 15 days of adaptation, food and water consumption were monitored, and feces and urine were collected 8 consecutive days. During this period were determined water balance of the animals, urine density, pH and volume and samples were collected to determine the urinary concentration of calcium, phosphorus, chloride, sodium, potassium, magnesium, sulfur, uric acid, citrate and oxalate, for calculation of relative supersaturation for calcium oxalate (RSS CaOx). Also were determined food retention time in the digestive tract, fecal fermentation end-products, hairball excretion and acid-base status ... (Complete abstract click electronic access below)
Doutor

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Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico
This study aimed to evaluate the relation between body weight, the amount of muscle in the carcass, the rib eye area and subcutaneous fat thickness with the daily excretion of creatinine in Nelore heifers of different weights. We also assessed the total creatinine excretion at intervals of 4 and 24 hours and the relation of purine derivatives (PD), urea (U) and nitrogenous compounds (NC) to creatinine (C), obtained from spot samples of urine at intervals of 2 hours. Fifteen heifers were used, grouped according to body weight in three groups, one group with four heifers with the average weight 127 kg ± 24,2 (low), three of 221 kg ± 22,3 (medium) and eight of 434 kg ± 29,2 (high). The animals from the higher body weight group (high) were randomly distributed into two subgroups, each one with four animals, and one of them (restricted high) the diet was provided near to the maintenance level (1,3% of body weight) and to the other group (voluntary high) the diet was provided ad libitum. For the low and medium group, the same diet, composed of 60% of roughage (corn silage), 30% concentrate (a mixture based on soybean hulls, ground corn, soybean meal, urea/ammonium sulfate, chloride sodium and minerals) and 10% of cotton seed, was provided ad libitum. The experimental period lasted nine days, after 30 days of adaptation. The collections of urine were performed, using number 22 or 26 Folley catheters, depending on the weight of the heifer. Considering the period of collection of 24 hours, the daily creatinine excretion expressed in g, mg/kg BW, mg/kg of empty body weight (EBW) and mmol/kg BW0,75 was influenced by body weight and the amount of muscle (MUS) in the carcass (P<0.05), according to the following regression equations: C (g) = 0,397530 + 0,0441496 BW - 0,0596162 MUS; C (mg/kg BW) = 28,0059 + 0,041690 BW - 0,144537 MUS; C (mg/kg EBW) = 30,3663 + 0,0614500 BW - 0,205820 MUS and C (mmol/kg BW0,75) = 0,735514 + 0,00253957 BW - 0,00565242 MUS. To estimate the creatinine excretion, body weight was the main determinant, and the use of other variables, muscle, and rib eye area and subcutaneous fat thickness was not sufficient to improve the results. The average daily excretion U, CN and PD were just affected by body weight. None of the excretion was influenced by the rib eye area and subcutaneous fat thickness. The daily creatinine excretion found in this study was 26,35 mg/kg BW. or 0,95 mmol/kg BW0,75. When the collection was done at intervals of 4 hours, the average daily creatinine excretion found was 0,91 mmol/kg BW0,75. When expressed in g and mmol/kg BW0,75 there was a significant difference (P <0.05) among groups, by being higher the creatinine excretion for those animals of greater body weight, when expressed in mg/kg BW was not influenced by body weight (P> 0.05). There was no effect (P> 0.05) of the collection periods (00h00-04h00, 04h00-08h00, 08h00-12h00, 12h00-16h00, 16h00-20h00, 20h00-00h00 hours) in the creatinine excretion expressed in any unit. From the collection of spot urine at intervals of 2 hours was observed the relationship PD:C has not varied during the day (P> 0.05), allowing the calculation of the excretion of PD (mmol/day) to be done with obtained sample at any time of the day. There was effect (P<0,05) of the periods of the urine spot sample over the relations U:C and NC:C, which were analyzed by Fourier serie, obtaining two points daily close to the average of 7,77 to the relation of U:C and 6,42 to the relation NC:C. The two points got very close to food time (08h00 and 16h00). To estimate the nitrogenous compounds excretions, recommends two spot collections, right after the food is given. It is concluded that the lack of time effect of collection over the relationship of PD:C indicates that one can use the sample spot obtained at any time to determine, the excretion of PD, there is no need in the total collection urine.
Objetivou-se avaliar a relação entre o peso corporal, a quantidade de músculo na carcaça, a área de olho de lombo e a espessura de gordura subcutânea com a excreção diária de creatinina em novilhas Nelore de diferentes pesos. Avaliaram-se também as excreções totais de creatinina a intervalos de 4 e 24 horas e as relações de derivados de purina (DP), uréia (U) e compostos nitrogenados totais (NT) com a creatinina (C), obtidas de coletas spot de urina a intervalos de 2 horas. Utilizaram-se quinze novilhas, sendo agrupadas em função do peso corporal em três grupos, sendo um grupo com quatro novilhas com peso médio de 127 kg ± 24,2 (baixo), três de 221 kg ± 22,3 (médio) e oito de 434 kg ± 29,2 (alto). Os animais do grupo de maior peso corporal (alto) foram distribuídos aleatoriamente em dois subgrupos, cada um com quatro animais, sendo que a um deles (alto restrito) a dieta foi fornecida ao nível próximo da mantença (1,3% do peso corporal) e ao outro grupo (alto voluntário) a dieta foi fornecida ad libitum. Para o grupo baixo e médio, a mesma dieta, constituída de 60% de volumoso (silagem de milho), 30% de concentrado (mistura à base de casca de soja, milho moído, farelo de soja, uréia/sulfato de amônia, cloreto de sódio e minerais) e 10% de caroço de algodão, foi fornecida ad libitum. O período experimental teve duração de nove dias, após 30 dias de adaptação. As coletas de urina foram realizadas utilizando-se sondas de Folley nº 22 ou 26, conforme o peso da novilha. Considerando o período de coleta de 24 horas, a excreção diária de creatinina (C), expressa em g, mg/kg de peso corporal (PC), mg/kg de peso de corpo vazio (PCVZ) e mmol/kg de peso metabólico (PC0,75) foi influenciada pelo peso corporal e pela quantidade de músculo (MUS) na carcaça (P<0,05), conforme as seguintes equações de regressão: C (g) = 0,397530 + 0,0441496 PC - 0,0596162 MUS; C (mg/kg PC) = 28,0059 + 0,041690 PC - 0,144537 MUS; C (mg/kg PCVZ) = 30,3663 + 0,0614500 PC - 0,205820 MUS e C (mmol/kg PC0,75) = 0,735514 + 0,00253957 PC - 0,00565242 MUS. Para estimar a excreção de creatinina, o peso corporal foi o principal determinante, sendo que a utilização de outras variáveis, músculo, área de olho de lombo e espessura de gordura subcutânea não foi suficiente para melhorar os resultados. As excreções médias diárias U, NT e DP apenas foram afetadas pelo peso corporal. Nenhuma das excreções foi influenciada pela área de olho de lombo e espessura de gordura subcutânea. A excreção diária de creatinina encontrada nesse estudo foi de 26,35 mg/kg PC ou 0,95 mmol/kg PC0,75. Quando a coleta foi feita a intervalos de 4 horas, a excreção média diária de creatinina encontrada foi de 0,91 mmol/kg PC0,75. Quando expressa em g e mmol/kg PC0,75 houve diferença significativa (P<0,05) entre os grupos, sendo maior a excreção de creatinina para os animais de maior peso corporal; quando expressa em mg/kg PC não foi influenciada pelo peso corporal (P>0,05). Não houve efeito (P>0,05) de períodos de coleta (00h00- 04h00, 04h00-08h00, 08h00-12h00, 12h00-16h00, 16h00-20h00, 20h00-00h00) sobre a excreção de creatinina expressa em qualquer unidade. A partir da coleta spot de urina a intervalos de 2 horas foi observado que a relação DP:C não variou durante o dia (P>0,05), permitindo o cálculo da excreção de DP (mmol/dia) ser efetivado com coletas obtidas em qualquer horário do dia. Houve efeito (P<0,05) dos períodos de coleta spot de urina sobre as relações U:C e NT:C, que foram avaliadas pela série de Fourier, obtendo-se dois pontos diários próximos à média de 7,77 para a relação U:C e 6,42 para a relação NT:C. Os dois pontos ficaram bem próximos aos horários das alimentações (08h00 e 16h00). Conclui-se que a ausência do efeito do tempo de coleta sobre a relação DP:C indica que pode-se usar a amostra spot obtida em qualquer horário para determinar a excreção de DP, não havendo necessidade de coleta total de urina. Para estimar as excreções de compostos nitrogenados, recomendam-se duas coletas spot, imediatamente após o fornecimento das dietas.

Orientador: Aulus Cavalieri Carciofi
Banca: Thaila Cristina Putarov
Banca: Márcia de Oliveira Sampaio Gomes
Resumo: O presente estudo avaliou o efeito do consumo de dietas secas extrusadas com diferentes quantidades de amido, proteína e hidroxiprolina sobre o balanço hídrico, excreção renal de oxalato, composição química da urina e a supersaturação relativa da urina para oxalato de cálcio em gatos. Três dietas foram formuladas: Dieta AMIDO com 25% de proteína, 47% de amido e 0,77% de hidroxiprolina; dieta SOJA com 50% de proteína, 19% de amido e 0,94% de hidroxiprolina; dieta HIDROX com 50% de proteína, 21% de amido e 2,98% de hidroxiprolina. Foram utilizados 24 gatos, totalizando oito repetições por tratamento. Os animais foram submetidos a dez dias de adaptação, seguido por sete dias de coleta total de fezes e urina e um dia para coleta de sangue. Os dados foram submetidos à análise de variância e médias comparadas pelo teste de Tukey. Variáveis não paramétricas foram submetidas aos testes de Kruskal-Wallis e Dunn. De acordo com o proposto pelo experimento, foi verificado diferença nas ingestões de amido, proteína e hidroxiprolina. O volume urinário (P<0,001), ingestão de água de bebedouro (P<0,001) e total de água ingerido (P=0,006) foi menor nos gatos alimentados com AMIDO. Houve aumento na excreção renal de Cl, S, ácido úrico e uréia para animais das dietas SOJA e HIDROX, comparados com os da dieta AMIDO (P<0,05). A excreção de K foi menor em animais recebendo a dieta SOJA quando comparados com o tratamento HIDROX (P=0,02). Os animais tiveram aumento na concentração urinária de K e Mg... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo)
Abstract: The present study evaluated the effect of dry extruded food intake with different amounts of starch, protein and hydroxyproline on the water balance, renal oxalate excretion, urine chemical composition and the relative supersaturation of urine for calcium oxalate in cats. Three diets were formulated: Diet STARCH with 25% of crude protein, 47% of starch and 0,77% of hydroxyproline; diet SOY with 50% of crude protein, 19% of starch and 0,94% of hydroxyproline; diet HYDROX with 50% of crude protein, 21% of starch and 2,98% of hydroxyproline. Twenty-four cats were used, with eight repetitions per treatment. Animals were submitted to an adaptation period of ten days, followed by seven days for total feces and urine collection and one day for blood collection. Data were submitted to analysis of variance and means compared by Tukey test. Non-parametric variables were submitted to Kruskal-Wallis and Dunn tests. Following the purpose of experiment, cats had different starch, crude protein and hydroxyproline intake. The urinary volume (P<0.001), water intake via drinking bowl (P<0.001) and total water intake (P=0.006) was lower in cats fed STARCH. There was an increase in renal excretion of Cl, S, uric acid and urea for animals receiving SOY and HYDROX diets compared to STARCH diet (P<0.05). The excretion of K was lower for animals receiving SOY diet when compared to HIDROX treatment (P=0.02). Animals presented higher urinary concentration of K and Mg (P<0.01) when fed the STARCH diet ... (Complete abstract click electronic access below)
Mestre

Thesis (MSc)--Stellenbosch University, 2002.
ENGLISH ABSTRACT: The cheetah, Acinonyx jubatus, sometimes referred to as "the greyhound of the cats", is probably the most elegant member of the cat family. Formerly widespread in southern Africa it is now threatened with extinction. It occurs in open savanna and light woodland, but also hilly country on occasion. The cheetah is a predator that can reach speeds of more then 110 km/h in short bursts. With a mass of between only 40 to 60 kg, it is not very powerful and cannot defend itself very effectively against carnivores such as the lion and hyaena, for example. This might be the reason why, in order not to advertise its presence, the urine of this animal is practically odourless. In turn, this might explain why no research has so far been devoted to the urine of this animal. In contrast extensive work has been done on the chemical characterisation of the urine of many other carnivores, notably the lion. Extraction of the urine with dichloromethane gave too little material for GC-MS. SPME sampling of the urine itself gave insufficient sample enrichment. Better results were obtained when an SPME-type of headspace sampling, using a larger mass of polydimethylsiloxane, was employed although many of the constituents of the urine could still barely be detected. The compounds identified include a large number of ketones, aldehydes, cyclic and acyclic ethers, carboxylic acids, amides two sulphur compounds in barely detectable quantities, and elemental sulphur. Perhaps the most remarkable result of this thesis is that it was found that the urine of the cheetah, although it is a carnivore, does not contain several sulphur compounds in relatively high concentrations. However, it does contain elemental sulphur. Perhaps a mechanism exists by which the cheetah can convert strongly odorous sulphur containing compounds into the less strongly smelling sulphur.
AFRIKAANSE OPSOMMING: Die jagluiperd, Acinonyx jubatus, 'n roofdier wat tydens 'n jagtog vir kort tye snelhede van meer as 110 km/h kan bereik, is waarskynlik die elegantste lid van die katfamilie. Met sy vaartbelynde liggaam weeg die dier egter slegs tussen 40 en 60 kg kan hy homself nie doeltreffend teen groter roofdiere verdedig nie. Chemiese verbindings, sogenaamde feromone, wat onder andere in die uriene uitgeskei word, word dikwels deur diere gebruik vir gebiedsafbakening en om met ander lede van die spesie te kommunikeer. Die uriene van die jadluiperd is egter feitlik reukloos. Tot dusver is die chemiese samestelling van die uriene van die jagluiperd nog nie ondersoek nie. Ekstraksie van die uriene met dichlorometaan het te min materiaal vir gaschromatografies-massaspektrometriese analise opgelewer, maar bevredigende resultate is verkry deur van 'n verbeterde monsternemingsmetode gebruik te maak. 'n Groot aantal organiese verbindings en twee swawelbevattende verbindings in skaars waarneembare hoeveelhede is in die uriene geïdentifiseer. Daar is egter 'n aansienlike hoeveelheid van die element swawel is in die uriene gevind. Laasgenoemde ontdekking, is die mees verbasende resultaat van hierdie navorsing. Die uitskeiding van swawel in uriene is, sover bekend, eenmalig in die soogdierwêreld. Dit is moontlik dat die jagluiperd oor 'n meganisme beskik om swawelverbindings wat baie sterk ruik om te sit na swawel wat nie so sterk ruik nie. Hierdie meganisme sal die dier se kanse op oorlewing verbeter deur van die swawelbevattende verbindings in sy dieet ontslae te raak sonder om sy teenwoordigheid in die omgewing te adverteer.

A doença da urina do xarope do bordo (MSUD) é causada pela deficiência na atividade do complexo da desidrogenase dos U-cetoácidos de cadeia ramificada (BCKAD), promovendo o acúmulo dos aminoácidos de cadeia ramificada (BCAA) leucina (Leu), isoleucina (Ile) e valina (Val) e seus U-cetoácidos correspondentes (BCKA). A MSUD caracteriza-se por cetoacidose, ataxia, coma, retardo mental e psicomotor. Estudos em animais demonstraram que BCAA e BCKA estimulam a lipoperoxidação e reduzem capacidade antioxidante cerebral em ratos. Também há evidências de que o estresse oxidativo ocorra em pacientes com MSUD no diagnóstico e durante o tratamento e que devido à terapia com dieta restrita e hipoproteica eles possuam deficiência de L-carnitina (L-car), um importante composto para o metabolismo energético. Recentemente, estudos demonstraram o papel antioxidante e anti-inflamatório da L-car, através de sua ação antiperoxidativa, sequestradora de espécies reativas e efeito estabilizador de danos às membranas celulares. Considerando que a fisiopatologia da MSUD ainda é pouco compreendida e que existe um crescente número de estudos enfatizando o envolvimento do estresse oxidativo na doença, neste trabalho foi investigado o efeito in vitro e in vivo da L-car sobre o estresse oxidativo e o dano inflamatório na MSUD tendo como objetivos: A) estudar a indução ao dano oxidativo pelos metabólitos acumulados na MSUD, verificando o possível papel antioxidante da L-car sobre o dano ao DNA in vitro; B) avaliar o efeito in vivo da suplementação de 50 mg/kg/dia de L-car sobre: b.1) a indução do dano ao DNA em leucócitos de pacientes com a MSUD tratados com dieta de restrição proteica, correlacionando as concentrações dos principais metabólitos acumulados nesta doença e verificando o possível papel antioxidante da suplementação da Lcar; b.2) a concentração de citocinas pró-inflamatórias em plasma de pacientes com MSUD tratados com dieta de restrição proteica e a correlação com o estresse oxidativo; b.3) os parâmetros de dano oxidativo à biomoléculas em urina de pacientes com MSUD sob dieta de restrição proteica; C) avaliar o efeito da L-car sobre o estresse oxidativo causado pelos metabólitos acumulados na MSUD em córtex cerebral e cerebelo de ratos Wistar, através de um modelo crônico de indução química da doença. Verificou-se que a Leu e o seu - cetoácido correspondente, o ácido -cetoisocapróico (KIC), causaram danos ao DNA in vitro e L-car foi capaz de diminuir significativamente essas alterações, principalmente as causadas pelo KIC. Quando testado o efeito da suplementação de L-car sobre o dano ao DNA em pacientes MSUD, observou-se um aumento significativo de lesões ao DNA em pacientes com dieta de restrição proteica quando comparados aos controles e a terapia com L-car foi capaz de diminuir significativamente os níveis desses danos. Também foram verificadas correlações do tipo negativa entre as concentrações de L-car e os índices de dano ao DNA e do tipo positiva entre as lesões ao DNA e níveis de MDA, marcador de lipoperoxidação, explicitando uma relação entre o dano ao DNA observado nos pacientes com MSUD, estresse oxidativo e o benefício da suplementação de L-car. Também averiguou-se o efeito da terapia de L-car sobre as citocinas pró-inflamatórias interleucina 1Y (IL-1Y), interleucina 6 (IL-6) e interferon gama (INF- Z). Constatou-se aumentos significativos de IL-1Y, IL-6 e INF- Z no plasma de pacientes com MSUD antes da suplementação de L-car e uma reversão completa desses valores aos níveis dos controles para IL-1Y e INF- Z após a administração de L-car. Ainda, verificou-se que a L-car pode auxiliar na defesa celular contra a inflamação e o estresse oxidativo, observando-se uma correlação negativa entre todas citocinas testadas e as concentrações de L-car, e uma correlação positiva entre o conteúdo de MDA e níveis de IL-1Y e IL-6. Constatou-se também que as medidas de di-tirosina (dano oxidativo a proteínas) e isoprostanos (dano de lipoperoxidação) estavam aumentadas e a capacidade antioxidante total diminuída na urina de pacientes com MSUD sem terapia com L-car e a suplementação deste composto induziu efeitos benéficos sobre estes parâmetros, reduzindo os níveis de di-tirosina e isoprostanos e aumentando a capacidade antioxidante medida em urina. Foi também observado um aumento de KIC urinário após dois meses de tratamento com L-car, quando comparado com o grupo controle, demonstrando um incremento da excreção deste metabolito tóxico. Desta forma, esses resultados sugerem um efeito de reversão de dano oxidativo pela L-car e que a urina pode ser utilizada para monitorar este tipo de lesão em pacientes afetados pela MSUD. Por fim, foram analisados em córtex cerebral e cerebelo de ratos Wistar submetidos ao modelo crônico de MSUD: espécies reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS), para avaliar lipoperoxidação, conteúdo de carbonilas (dano oxidativo proteico), oxidação de diclorofluoresceína (DCF), para quantificar produção de espécies reativas teciduais, conteúdo de glutationa reduzida (GSH) que é um importante antioxidante não enzimático e a atividade das enzimas antioxidantes catalase (CAT), superóxido dismutase (SOD), glutationa peroxidase (GPx) e glicose-6-fosfato-desidrogenase (G6PD). Os resultados mostraram que a administração crônica de BCAA estimulou a lipoperoxidação, o dano oxidativo proteico, aumento de espécies reativas e diminuição das defesas antioxidantes enzimáticas e não enzimáticas, especialmente em córtex cerebral e o tratamento com L-car foi capaz de prevenir estes efeitos, exceto o dano oxidativo a proteínas. Em conjunto, estes resultados demonstram que os metabólitos acumulados na MSUD induzem dano oxidativo a biomoléculas (lipídios, proteínas e DNA), diminuem o status antioxidante e promovem aumento de processos inflamatórios. Ainda, estes dados podem contribuir para a compreensão dos mecanismos de ação dos efeitos citotóxicos dos metabólitos acumulados na MSUD e evidenciar o papel do estresse oxidativo e da inflamação na neuropatofiosiologia desta doença, além do efeito protetor da L-car sobre este processo. O estudo de antioxidantes, como a L-car, pode propor uma abordagem terapêutica adicional ao que é empregado atualmente para pacientes com MSUD, que é essencialmente dietética e, portanto, de difícil manejo.
Maple syrup urine disease (MSUD) is caused by deficiency of the activity of the mitochondrial enzyme complex branched-chain U-ketoacid dehydrogenase (BCKAD). The metabolic defect leads to accumulation of the branched chain amino acids (BCAA) leucine (Leu), isoleucine (Ile) and valine (Val) and the corresponding branched-chain U-keto acids. The clinical features of MSUD include ketoacidosis, seizures, coma, psychomotor delay and mental retardation. Treatment consists in Leu, Val and Ile restricted diet. Studies in animals have demonstrated that lipid peroxidation is stimulated by BCAA and BCKA in brain of rats and these metabolites reduce in vitro and in vivo the cerebral capacity to modulate the damage associated to increased free radical production. Also, there is evidence that oxidative stress occurs in MSUD patients at diagnosis and during treatment and that due to terapy with protein restricted diet they present L-carnitine (L-car) deficiency, an important compound for energy metabolism. Recent studies have demonstrated the antioxidant and anti-inflammatory role of L-carnitine (L-car), through its action against peroxidation in different tissues by various mechanisms, a scavenger of reactive oxygen species and the stabilizing effect of damage to cell membranes. Considering that the pathophysiology of MSUD is still poorly understood, and that there is an increasing number of studies emphasizing the oxidative stress involvement in the disease, this study investigated the in vitro and in vivo effect of L-car on oxidative stress and inflammatory damage in MSUD with the following purposes: A) to study the induction of damage by accumulated metabolites in MSUD, analyzing the possible antioxidant role of L-car on DNA damage in vitro; B) to evaluate the in vivo effect of 50 mg/kg/day of L-car supplementation about: b.1) the induction of DNA damage in leukocytes of MSUD patients treated with protein-restricted diet, correlating this damage with the concentrations of the major metabolites accumulated in this disorder and checking the possible antioxidant role of L-car supplementation; b.2) plasma inflammatory cytokines in treated MSUD patients with protein-restricted diet and the correlation with oxidative stress; b.3) oxidative damage parameters in urine of MSUD patients with protein-restricted diet supplemented with L-car; C) to investigate the BCAA effect on some oxidative stress parameters and evaluate the L-car efficacy against these possible pro-oxidant effects in cerebral cortex and cerebellum of rats submitted to a chronic chemically-induced model of MSUD. DNA damage index (DI) showed that Leu and -ketoisocaproic acid (KIC) groups was significantly higher than that of the control group, and that L-car was able to significantly prevent this damage, especially that due to KIC. Accordingly, DNA DI in MSUD patients under BCAA-restricted diet was significantly increased as compared to controls and L-car supplementation was able to significantly decrease this parameter. It was also verified a significant positive correlation between DNA DI and MDA content, a marker of lipid peroxidation. Furthermore, we found an inverse significant correlation between DI and L-car levels. These results strengthen a relationship between DNA damage observed in MSUD patients, oxidative stress and the L-car supplementation benefit. The role of L-car on plasma inflammatory cytokines interleukin-1Y (IL-1Y), interleukin-6 (IL-6) and interferon-gamma (INF- Z) was also evaluated in these patients. Significant increases of IL-1Y, IL-6, and INF- Z were observed before the treatment with L-car. Moreover, there is a negative correlation between all cytokines tested and L-car concentrations and a positive correlation among the MDA content and IL-1Y and IL-6 values after L-car supplementation. It was also demonstrated that the oxidative stress parameters di-tyrosine (oxidative protein damage) and isoprostanes (lipid peroxidation assay) were increased and the antioxidant capacity was reduced in urine of MSUD patients without L-car therapy and that the supplementation of this compound induced beneficial effects on these parameters, so reducing the di-tyrosine and isoprostanes levels and increasing the antioxidant capacity. It was also showed a significant increase in urinary KIC after 2 months of L-car treatment compared to control group, demonstrating an increased excretion of this toxic metabolite. In conclusion, these results suggest a reversion effect of the oxidative damage by L-car and that urine can be used to monitorize oxidative damage in patients affected by this disease. The following parameters were analysed in cerebral cortex and cerebellum of Wistar rats submitted to MSUD chemically-induced chronic model: thiobarbituric acid reactive species (TBA-RS), to evaluate lipid peroxidation, carbonyl content to evaluate protein oxidative damage, DCF oxidation to quantify reactive species production, reduced glutathione (GSH), an important non-enzymatic antioxidant and the activities of antioxidant enzymes catalase (CAT), superoxide dismutase (SOD), glutathione peroxidase (GPx) and glucose-6-phosphate dehydrogenase (G6PD). The results showed that the chronic administration of BCAA was able to promote both lipid and protein oxidation, increase of reactive species production and decreased brain antioxidant defenses, especially in cerebral cortex and that L-car was able to prevent these effects, except for oxidative damage to proteins. Taken together, these results demonstrate that the metabolites accumulated in MSUD cause oxidative damage to biomolecules (lipids, proteins and DNA), decrease antioxidant status and promote increased inflammatory processes. These results may contribute to the understanding of the mechanism of action of the cytotoxic effect of the metabolites accumulated in MSUD and the role of oxidative stress and inflammation in the MSUD neuropathophysiology besides the protective effect of L-car on this process. The study of antioxidants like L-car can opens an additional therapeutic approach to that currently employed for MSUD patients, which is primarily dietary and therefore difficult to handle.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:46:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 246842 bytes, checksum: f7b7371c8cb299837b636e055567a1b8 (MD5) Previous issue date: 2005-03-02
This trial was carried out to evaluate the effect of periods of urine and feces collection on urinary excretion of creatinine, urea and purine derivatives, absorbed purine, microbial nitrogen compounds production (Nmic), apparent digestibility of dry matter (DM), organic matter (OM), crude protein (CP), ether extract (EE), neutral detergent fiber (NDF) and nonfiber carbohydrates (CNF) and total digestible nutrients contents (TDN) of Nelore bovines four categories (heifers, steers, bulls and lactating cows) fed 25 or 50% concentrate, total dry matter basis. The plasma N-urea concentrations (NUP) were evaluated and the Nmic obtained in urine spot samples was compared with that of total collection. The experiment was divided in two experimental periods of 28 days each, when the feces and urine total collection were performed at 22nd and 28th day of each experimental period. Feces were colleted directly from the floor after excretion and the urine was obtained using catheters in females and funnels in males. A 25% concentrate-based diet was fed to the animals in the first period and a 50% concentrate-based diet in the second one, all of them with 12% CP. Sixteen Nelore bovines, under feedlot, housed in individual pens, were assigned to a completely randomized design, in a split plot scheme, where the treatments were represented by the plots (2 x 4 factorial scheme), with two levels of concentrate (25 or 50%) and four Nelore categories, and the split plots were represented by the urine collections. The comparisons for digestibility evaluation were made by regression analyses, that were performed considering 4 days of feces collection of each period. The equations were obtained by comparing the nutrients digestibility referent to one (24h), two (48h) or three days (72h) compared to four days (96h of collection). Comparison with six days of total feces collection, using equations (second experimental period [50% concentrate]) was considered reference (144h total feces collection). No interaction (P>0.05) among concentrate levels, Nelore categories and collection days for the urinary volume, the creatinine excretion and Nmic production was observed. Urinary volume was not affected (P>0.05) by the concentrate levels and collection days, but significant effect (P<0.05) was observed for cows. Creatinine excretion was not affected (P>0.05) by treatments and collection days, considering average of 27.1 mg/kg0.75. Absorbed purines and microbial nitrogen compounds production were also not influenced (P>005) by the treatments and collection days. Nmic production estimated by the urinary spot collection differed (P>0.05) neither from that obtained by total collection total, nor among the concentrate levels and Nelore categories. No significant difference (P>0.05) was observed for any evaluated digestibility and TDN contents during the total feces collection period. The results suggest that the coefficients of variation decresed as the period of collection days increased. Considering the results of creatinine excretion and of microbial protein production, it was concluded that a 24-h period is enough for researchs with Nelore, independently of the category, and that urinary spot sample collection can be used to estimate microbial protein production in all Nelore bovines (heifers, steers, bulls and lactating cows). Total feces collection from 1 to 6 days to evaluate nutrients apparent digestibility are precise, but better results could be obtained by increasing the collection period.
O presente trabalho foi conduzido com o objetivo de avaliar o efeito da duração do período de coletas de urina e de fezes sobre a excreção urinária de creatinina, de uréia e de derivados de purinas, as purinas absorvidas, a produção de compostos nitrogenados microbianos (Nmic), as digestibilidades aparentes da matéria seca (MS), matéria orgânica (MO), proteína bruta (PB), extrato etéreo (EE), fibra em detergente neutro (FDN) e de carboidratos não-fibrosos (CNF) e os teores de nutrientes digestíveis totais (NDT) em Nelores de quatro categorias (novilhas, machos castrados, machos inteiros e vacas em lactação) alimentados com 25 ou 50% de concentrado na base da matéria seca total das dietas. Avaliou-se ainda as concentrações de N-uréia plasmática (NUP) e comparou-se também a produção de Nmic obtida em amostras spot de urina com aquela da coleta total. O experimento foi conduzido em dois períodos experimentais com duração de 28 dias cada, sendo as coletas totais de urina e de fezes efetuadas do 22o ao 28o dias de cada período experimental. As fezes foram retiradas do piso imediatamente após excreção e a urina obtida com sondas em fêmeas e funis nos machos. Utilizou-se dieta com 25% de concentrado no primeiro período e com 50% no segundo experimental. Todas as dietas continham aproximadamente 12% de PB. Utilizaram-se 16 animais da raça Nelore, mantidos em confinamento, alojados em baias individuais, distribuídos em delineamento inteiramente casualizado, em esquema de parcelas subdivididas, tendo nas parcelas os tratamentos em esquema fatorial 2 x 4, sendo dois níveis de concentrado (25 ou 50%) e quatro categorias de Nelores e nas subparcelas os seis dias de coletas de urina. Já para a avaliação das digestibilidades, as comparações foram feitas através de análises de regressão, que foram efetuadas considerando quatro dias de coletas de fezes em cada período, sendo as equações obtidas sempre comparando as digestibilidades dos nutrientes referentes a um dia (24 h), 2 dias (48 h) ou 3 dias (72 h) em relação aos 4 dias (96 h de coleta). Foram feitas também comparações através de equações, utilizando os seis dias de coleta total de fezes, referentes ao segundo período experimental (50% de concentrado), sendo nesse caso utilizado como referência os seis dias de coleta total (144 h de coleta total de fezes). Não houve interação (P>0,05) entre níveis de concentrado, categorias de Nelore e dias de coleta para o volume urinário, a excreção de creatinina e a produção de Nmic. O volume urinário não foi influenciado (P>0,05) pelos níveis de concentrado e dias de coleta, contudo foi significativamente maior (P<0,05) para as vacas. A excreção de creatinina não foi afetada (P>0,05) pelos tratamentos e dias de coletas, observando-se média de 27,1 mg/kg0,75. As purinas absorvidas e a produção de compostos nitrogenados microbianos também não foram influenciadas (P>0,05) pelos tratamentos e dias de coleta. A produção de Nmic estimada através de amostra spot de urina não diferiu (P>0,05) daquela obtida pela coleta total, nem entre os níveis de concentrados e categorias de Nelore. Não houve diferença significativa (P>0,05) para nenhuma das digestibilidades avaliadas e também para os teores de NDT entre os dias de coleta total de fezes, contudo, observou-se que os coeficientes de variação diminuíram à medida que se aumentou o número de dias de coleta. Concluiu-se considerando as respostas obtidas para excreção de creatinina e a produção de proteína microbiana, que um período de coletas de urina de 24 horas é suficiente para trabalhos com Nelores, independente de serem novilhas, machos castrados ou inteiros e vacas em lactação e que a coleta de amostra spot de urina também pode ser utilizada para estimar a produção de proteína microbiana em novilhas, machos inteiros ou castrados e vacas lactantes da raça Nelore. Concluiu-se também que para avaliar a digestibilidade aparente dos nutrientes, coletas totais de fezes feitas durante um a seis dias são exatas. Contudo, a precisão é melhorada com o aumento dos dias de coleta.

The importance of skin processing technologies, in the history and dispersal of humankind around the planet cannot be overstated. This area of material culture is often underrepresented as a research topic, and has been hampered, in part, by the lack of a systematic analysis methodology targeted at specifically this material type. This research aimed to develop a methodology for determining the tanning technologies in use during prehistory, from extant archaeologically recovered processed skin objects. The methodology is a product of macroscopic and microscopic observations of a large sample reference collection, used to produce a database of defining characteristics and tendencies for each of six tannage types. The sample collection is made up of twenty-two species identified as economically important from both Europe and North America. Six sample pieces of skin were taken from a single individual of each of the twenty-two species, and processed using six tanning technologies, the use of which covered a large geographic area and time frame. A second reference collection of clothing and utilitarian items, made from traditionally processed skins, was used to add a section of in-life use traces to the database of discriminating traits. The developed methodology was tested by examining archaeologically recovered and ethnographically collected skin objects, from museum collections across North America and Europe. Objects from many different preservation contexts, including wet, dry, and frozen sites were analysed to determine whether or not the discriminating traits survived interment. It was found that defining characteristics and tendencies do exist between the main tannage technologies, and can be recorded at multiple levels of observation. The analysis of skin objects in museum collections confirmed that at least some defining characteristics and tendencies survived in all preservation contexts. In addition, the preservation of in-life use traces proved to be diagnostic of not only tannage type, but small sections of chaîne opératoire and object biography as well. Overall, this research has demonstrated that archaeologically preserved objects made from processed skin can provide information about the tannage technologies in use prehistorically, as well as more detailed information such as manufacturing sequences and the conditions of use an object was subjected to. Thus, analysis of this nature can be used to access information on a more individual level than previously believed.

The freshwater prawn, Macrobrachium rosenbergii (de Man, 1879) is an important aquaculture species but one that has the disadvantage of heterogeneous individual growth (HIG) according to different morphotypes. Chemical cues, especially, pheromones, are one of the most important communication types between individual prawns, along with visual and tactile methods. Testing pheromones, whilst restricting other cues, may therefore lead to a better understanding of the influence of these communicatory compounds on the prawn reproductive process. The three principle objectives of this study were therefore: 1) To examine the effect of moult stage and morphotype on pheromone-induced sexual behaviour 2) To examine the role of pheromone / urine concentrations on sexual attraction behaviour 3) To describe the functional morphology of the antennal gland and examine its possible role in pheromone production and release. Identical bioassay tanks were designed and constructed to study the reproductive behaviour of prawns. Experiments were set up to examine responses to pheromone release by live prawns over 30 minutes and behavioural response observations were made with the aid of a Closed-Circuit Videotape System (CCVS). Results were statistically analysed using a repeated measures general linear model (GLM). Three trials were designed to test the effect of moult stage of both males and females and male morphotypes on sexual attraction behavioural responses. Twelve prawns were used for each trial and each prawn was used five times (1 no-pheromone control and 4 for experimental tests). The first trial studied the effect of female moult stages (pre-, inter and newly-moulted) on sexual attraction behaviour of blue claw (BC) male. Results of this trial showed that newly-moulted females spent significantly (p<0.05) less time approaching the BC male than the pre- and inter-moult females. The second trial studied the effect of male moult stage (pre-, inter and newly-moulted) on sexual attraction to receptive females. Results showed that the time taken by the inter-moult males was (p<0.05) less than the pre- and newly-moulted males in approaching the newly-moulted female. The third trial tested the effect of male morphotypes (small male, SM, orange claw, OC and dominant blue claw, BC) on sexual attraction behaviour towards newly-moulted females. Results showed that the BC male was significantly more attractive (p<0.05) than other morphotypes to newly-moulted females and that the OC male was the least attractive. The role of moulting stage for both male and female prawns on reproductive response behaviour was investigated. Because BC males responded significantly faster towards newly-moulted female more than to either pre-or inter-moult females, results of the first trial suggest that BC males are able to use different chemical cues to gather information about a conspecific’s gender and can differentiate female’s moult stages. Since BC males responded significantly faster towards newly-moulted females more than to either pre-or inter-moult females, this suggests that females at this particular stage released a distinct sexual pheromone or concentration of pheromone that differed from those pheromones released by both pre- and inter-moult females. In contrast, newly-moulted females prefer the inter-moult BC males which indicate that females have an ability to distinguish the moult status of BC males. Furthermore, it indicates that pheromone characteristics change with the moult status of BC males. Also, newly-moulted females are most likely to be avoiding the potential costs of mate guarding with soft shell BC males. Results obtained from the third trial suggested that a newly-moulted female can discriminate male morphotypes (SM, OC and BC) from their pheromone cues. This indicates that male morphotypes release pheromones which differ from each other in some way. Newly-moulted females responded positively to both SM and BC males with different levels of attraction with the greatest attraction to BC males to BC males suggesting that pheromone released from the BC male may carry information relating to dominance status. Urine is believed to be one of the main carriers of pheromone and is usually released from the antennal gland. Different urine concentrations (0.1, 1.0, 2.0, 3.0, 5.0 and 10µl l-1) of collected urine from BC males were used to test the sexual attraction behaviour of receptive newly-moulted females. Also, the attractant capability of fresh urine following exposure to different temperature regimes (cooled at 4ºC, frozen at -70ºC and heated at 70ºC) was tested. Since newly-moulted female M. rosenbergii were attracted to BC male urine, this indicates the existence of sex pheromone in the fresh urine. Also, it was found that the sexual response of females to fresh urine of BC males was directly proportional to urine concentration with faster responses observed with increasing urine concentrations. At the three fresh urine concentrations 0.1 µl l-1, 1.0 µl l-1 and 2.0 µl l-1, statistical analysis indicated no significant difference (p>0.05) between these three concentrations while a significant (P<0.05) response was to concentrations more than 3.0 µl l-1. This may indicate that these three concentrations were not sufficient to elicit attraction behaviour in newly-moulted females. A concentration of 3.0 µl l-1 of fresh urine is suggested to be a sufficient concentration to elicit a significant sexual attraction under laboratory conditions. Response of newly-moulted female prawns to the various temperature treatments tested declined in response to nominally increasingly degradative treatments. Also, statistical analysis showed that temperature treatment and concentration added both had a significant effect on the response of females. The greatest degradation of urine attractiveness was found with the 70ºC heat treatment. It can be concluded that the pheromone components of prawn urine are friable when exposed to high temperatures. Using light and transmission electron microscopes, ultrastructural observation of the antennal gland (AG) of M. rosenbergii suggests that it has four distinct regions, the coelomosac, the nephridial tubules, the labyrinth and the bladder. Morphological and functional descriptions of each of these regions were compared with those of other aquatic Crustacea.

Urine is considered an ideal source of biomarkers, however in veterinary medicine a complete study on the urine proteome is still lacking. The present work aimed to apply proteomic techniques to the separation of the urine proteome in dogs, cats, horses, cows and some non-conventional species. High resolution electrophoresis (HRE) was also validated for the quantification of albuminuria in dogs and cats. In healthy cats, applying SDS-PAGE and 2DE coupled to mass spectrometry (MS), was produced a reference map of the urine proteome. Moreover, 13 differentially represented urine proteins were linked with CKD, suggesting uromodulin, cauxin, CFAD, Apo-H, RBP and CYSM as candidate biomarkers to be investigated further. In dogs, applying SDS-PAGE coupled to MS, was highlighted a specific pattern in healthy animals showing important differences in patients affected by leishmaniasis. In particular, uromodulin could be a putative biomarker of tubular damage while arginine esterase and low MW proteins needs to be investigated further. In cows, applying SDS-PAGE, were highlighted different patterns between heifers and cows showing some interesting changes during pregnancy. In particular, putative alpha-fetoprotein and b-PAP needs to be further investigated. In horses, applying SDS-PAGE, was produced a reference profile characterized by 13±4 protein bands and the most represented one was the putative uromodulin. Proteinuric horses showed the decrease of the putative uromodulin band and the appearance of 2 to 4 protein bands at higher MW and a greater variability in the range of MW between 49 and 17 kDa. In felids and giraffes was quantified proteinuria reporting the first data for UTP and UPC. Moreover, by means of SDS-PAGE, were highlighted species-specific electrophoretic patterns in big felids and giraffes.

Orientador: Leonardo Pezza
Coorientador: Helena Redigolo Pezza
Banca: Matthieu Tubino
Banca: Paulo Roberto da Silva Ribeiro
Resumo: Este trabalho propõe um método analítico simples, rápido e de baixo custo para screening (qualitativo/semi-quantitativo) de sulfonamidas em amostras complexas, tais como leite bovino e urina. Para o screening de sulfonamidas em urina e leite bovino foi empregado um procedimento de análise por injeção em fluxo em meio micelar com detecção espectrofotométrica (λ = 555 nm), o qual está baseado na reação entre sulfonamidas e p-dimetilaminocinamaldeído em meio ácido. O uso de meio micelar conferiu ao método grande sensibilidade analítica possibilitando sua aplicação no screening dos analitos alvos de acordo com o valor de limite máximo de resíduo permitido (LMRsulfonamidas = 100 ppb). As condições experimentais para o desenvolvimento do método proposto foram otimizadas com auxílio de planejamento de experimentos. Para validação do método desenvolvido foram avaliados os seguintes parâmetros: exatidão, precisão, limite de detecção (LOD = 3 SDBranco / inclinação da curva analítica), limite de quantificação (LOQ = 10 SDBranco / inclinação da curva analítica) e robustez. O método desenvolvido foi aplicado na análise de sulfonamidas em leite bovino, empregando-se no pré-tratamento das amostras a metodologia QuEChERS. Uma outra aplicação realizada foi a determinação de sulfonamidas em amostras de urina sintética após prévia hidrólise da uréia (interferente) na qual uma leguminosa foi usada como fonte da enzima urease. Em ambas as aplicações, os resultados obtidos foram satisfatórios. O método desenvolvido representa uma alternativa vantajosa em relação a outros métodos disponíveis, pois apresenta baixo custo relativo, além de ser simples, rápido, ambientalmente mais amigável (envolve o baixo consumo de reagentes e amostras) e não requerer procedimentos específicos ou complicados para o preparo das amostras
Abstract: This work proposes a simple, fast and low cost analytical method for the screening (qualitative / quantitative) of sulfonamides in complex samples, such as urine and bovine milk. The screening of sulfonamides in those samples was proceeded by flow injection analysis in, micellar medium, with spectrophotometric detection (λ = 555 nm). The method is based on the reaction between sulfonamide and p- dimethylaminocinnamaldehyde in acidic medium. The use of micellar media increased the sensitivity of the analytical method allowing its application in the screening of target analytes according to the permitted value of maximum residue level (LMRsulfonamides = 100 ppb). Experimental design methodologies were used to optimize the proposed method. The following parameters were assessed in order to validate the method: accuracy, precision, limit of detection (LOD = 3 SD Blank / inclination of the analytical curve), limit of quantification (LOQ = 10 SD Blank / inclination of the analytical curve) and robustness. The method was applied to the analysis of sulfonamides in bovine milk. Pre-treatment of samples was proceeded by QuEChERS methodology. The method was also applied to the determination of sulfonamides in samples of synthetic urine after previous hydrolysis of urea (interferent); a legume was used as the source of the enzyme urease. In both applications, the results were satisfactory. The method represents an advantageous alternative over other available methods, since it has relatively low cost, besides being simple, rapid, environmentally friendly (it involves a low consumption of reagents and samples) and does not require specific or complicated procedures to prepare the samples
Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:07Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-06-21Bitstream added on 2014-06-13T18:38:49Z : No. of bitstreams: 1 ruy_mrs_me_araiq.pdf: 774298 bytes, checksum: f4cf28b55c14f53039b0a2672cb4fbf9 (MD5)
Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)
Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)
Este trabalho propõe um método analítico simples, rápido e de baixo custo para screening (qualitativo/semi-quantitativo) de sulfonamidas em amostras complexas, tais como leite bovino e urina. Para o screening de sulfonamidas em urina e leite bovino foi empregado um procedimento de análise por injeção em fluxo em meio micelar com detecção espectrofotométrica (λ = 555 nm), o qual está baseado na reação entre sulfonamidas e p-dimetilaminocinamaldeído em meio ácido. O uso de meio micelar conferiu ao método grande sensibilidade analítica possibilitando sua aplicação no screening dos analitos alvos de acordo com o valor de limite máximo de resíduo permitido (LMRsulfonamidas = 100 ppb). As condições experimentais para o desenvolvimento do método proposto foram otimizadas com auxílio de planejamento de experimentos. Para validação do método desenvolvido foram avaliados os seguintes parâmetros: exatidão, precisão, limite de detecção (LOD = 3 SDBranco / inclinação da curva analítica), limite de quantificação (LOQ = 10 SDBranco / inclinação da curva analítica) e robustez. O método desenvolvido foi aplicado na análise de sulfonamidas em leite bovino, empregando-se no pré-tratamento das amostras a metodologia QuEChERS. Uma outra aplicação realizada foi a determinação de sulfonamidas em amostras de urina sintética após prévia hidrólise da uréia (interferente) na qual uma leguminosa foi usada como fonte da enzima urease. Em ambas as aplicações, os resultados obtidos foram satisfatórios. O método desenvolvido representa uma alternativa vantajosa em relação a outros métodos disponíveis, pois apresenta baixo custo relativo, além de ser simples, rápido, ambientalmente mais amigável (envolve o baixo consumo de reagentes e amostras) e não requerer procedimentos específicos ou complicados para o preparo das amostras
This work proposes a simple, fast and low cost analytical method for the screening (qualitative / quantitative) of sulfonamides in complex samples, such as urine and bovine milk. The screening of sulfonamides in those samples was proceeded by flow injection analysis in, micellar medium, with spectrophotometric detection (λ = 555 nm). The method is based on the reaction between sulfonamide and p- dimethylaminocinnamaldehyde in acidic medium. The use of micellar media increased the sensitivity of the analytical method allowing its application in the screening of target analytes according to the permitted value of maximum residue level (LMRsulfonamides = 100 ppb). Experimental design methodologies were used to optimize the proposed method. The following parameters were assessed in order to validate the method: accuracy, precision, limit of detection (LOD = 3 SD Blank / inclination of the analytical curve), limit of quantification (LOQ = 10 SD Blank / inclination of the analytical curve) and robustness. The method was applied to the analysis of sulfonamides in bovine milk. Pre-treatment of samples was proceeded by QuEChERS methodology. The method was also applied to the determination of sulfonamides in samples of synthetic urine after previous hydrolysis of urea (interferent); a legume was used as the source of the enzyme urease. In both applications, the results were satisfactory. The method represents an advantageous alternative over other available methods, since it has relatively low cost, besides being simple, rapid, environmentally friendly (it involves a low consumption of reagents and samples) and does not require specific or complicated procedures to prepare the samples

Dissertação apresentada ao Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde da Universidade do Extremo Sul Catarinense - UNESC, como requisito parcial para a obtenção do título de Mestre em Ciências da Saúde
A doença da urina do xarope do bordo (DXB) constitui em um distúrbio de herança autossômica recessiva, causada pela deficiência na atividade do complexo α-cetoácido desidrogenase de cadeia ramificada, resultando no acúmulo dos aminoácidos de cadeia ramificada (AACR) leucina, isoleucina e valina e de seus respectivos α-cetoácidos de cadeia ramificada e hidroxiácidos correspondentes. Estudos demonstram um grau variável de retardo mental e outros sintomas neurológicos estando relacionados com alterações no estado redox, sugerindo dessa forma, que os danos estejam associados ao estresse oxidativo. Em vista que o Danio rerio, conhecido como peixe-zebra, vem sendo amplamente utilizado como modelo experimental em diversas áreas do conhecimento por apresentar características favoráveis que complementam os modelos experimentais existentes, esse projeto teve como objetivo geral desenvolver um modelo, quimicamente induzido, da Doença da Urina do Xarope do Bordo (DXB) em peixes-zebra, avaliando as concentrações de aminoácidos de cadeia ramificada e possíveis alterações no estresse oxidativo em tecido cerebral. Para isso, utilizou-se peixe-zebra jovens, expostos às concentrações de 1,58 μL/g, 15,80 μL/g e 158,0μL/g, além do grupo controle, por períodos de 1 hora e 24 horas. Ao fim da indução, os animais passaram por um protocolo de eutanásia com tricaína dissolvida em água, tendo seu conteúdo cerebral dissecado e armazenado adequadamente para as análises. Posteriormente, determinaram-se as concentrações de aminoácidos de cadeia ramificada por cromatografia líquida de alta eficiência, e avaliaram-se os parâmetros de estresse oxidativo: dosagem de sulfidrila, medida de oxidação de 2’,7’-diclorofluoresceína, medida de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico, atividades de superóxido dismutase e catalase. Identificaram-se acúmulos significativos de aminoácidos de cadeira ramificada, na exposição de 24 horas, na dose 158,0μL/g, em tecido cerebral de peixe-zebra. Ademais, observou-se que a mesma dose, no mesmo período, foi capaz de ocasionar aumento de espécies reativas e dano lípidico. Assim, sugere-se que o modelo animal para a Doença da Urina do Xarope do Bordo, utilizando peixe-zebra, auxilie na melhor compreensão do perfil de toxicidade da exposição a aminoácidos de cadeia ramificada, além de contribuir para um melhor entendimento da utilização do mesmo em futuras investigações e estratégias relacionadas a estudos fisiopatológicos envolvidos nessas condições.

Made available in DSpace on 2015-12-10T14:22:39Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-07-17. Added 1 bitstream(s) on 2015-12-10T14:28:50Z : No. of bitstreams: 1 000855341.pdf: 1074140 bytes, checksum: 98940109d9d06c8c7f2bf99d2642cb2b (MD5)
Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)
Gatos são animais carnívoros, com elevada necessidade de aminoácidos. O aproveitamento de carboidratos por esses animais já foi estudado, contudo existem informações, relacionadas ao metabolismo deste nutriente, que ainda não são bem esclarecidas para a espécie. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito do consumo de dietas com diferentes relações entre amido e proteína sobre a formação e excreção do oxalato e o índice de supersaturação relativa da urina para oxalato de cálcio (SSR OxCa). Foram avaliados alimentos extrusados com diferentes proporções de amido (CHO) e Proteína (PB): Dieta A 47 com 47% de CHO e 25% de PB; dieta A 32 com 31,9% de CHO e 38% de PB; dieta A 19 com 19,2% de CHO e 52% de PB e dieta A 8 com 8,3 % de CHO e 62% de PB (na matéria seca). O estudo foi organizado em 4 blocos de 18 dias, cada um com quatro rações e oito gatos, totalizando 32 gatos e oito repetições por ração. Os gatos permaneceram em gaiolas metabólicas durante 10 dias de adaptação à dieta, seguidos de sete dias de coleta total de urina e fezes. Durante os dois primeiros dias de coleta a urina foi recolhida em garrafas com 1mL de H2SO4 (1N) e nos cinco dias seguintes em garrafas com 100mg de timol. Na urina produzida em cada período de 24 horas foi aferido o volume, densidade e pH. A urina de 5 dias de cada gato (colhida com timol) foi homogeneizada, sendo determinados os teores de cálcio, fósforo, cloro, enxofre, magnésio, sódio, potássio, citrato, oxalato, ácido úrico, creatinina e ureia. Na urina acidificada foram determinados o nitrogênio e energia bruta. Amostras de sangue para obtenção do plasma foram colhidas no 18º dia de cada período, sendo analisadas para oxalato e creatinina. Os alimentos e as fezes foram avaliados para matéria seca, matéria mineral, amido, fibra bruta e energia bruta. Com base nesses resultados foi calculada a SSR OxCa e a excreção fracionada de oxalato. Os resultados obtidos...
Cats are carnivores and have high amino acids requirements. The use of carbohydrates by these animals has been evaluated; however, there are some information that is not well understood. The objective of this study was to evaluate the effect of consumption of diets with different relations between starch and protein on the formation and excretion of oxalate, and the relative supersaturation index of calcium oxalate in urine (SSR OxCa). Four diets were extruded with different starch (CHO) and protein (CP) ratios: diet 47 with 47% of CHO and 25% of CP; diet 32 with 31.9% of CHO and 38% of CP; diet 19 with 19.2% of CHO and 52% of CP; and diet 8 with 8.3% of CHO and 62% of CP (dry matter basis). The experiment was organized in 4 blocks of 18 days; there were 4 diets and 8 cats in each block, resulting in eight animals per diet. Animals were kept in metabolic cages during 10 days for diet adaptation followed by 7 days of total urine and feces collection. Urine was collected in bottles with 1 ml of H2SO4 (1N) in the first two days of the collection period and the last five days in bottles with 100 mg of thymol. Volume, density and pH of urine were measured each 24 hours during the whole experiment. Urine harvested with thymol were homogenized and analyzed for calcium, phosphorus, chlorine, sulfur, magnesium, sodium, potassium, citrate, oxalate, uric acid and creatinine. In the acidic urine were determined nitrogen and gross energy. Blood samples were taken at 18th day of the experiment and evaluated for oxalate and creatinine. Food and feces were evaluated for dry matter, ash, starch, crude fiber and gross energy. Based on the results SSR OxCa and fractional excretion of oxalate were calculated. Data were submitted to analysis of variance and when significant differences were detected in the F test, multiple comparisons were performed using polynomial contrasts (P <0.05). Starch inclusion up to 47% did not restrict the diet consumption by ...
FAPESP: 2013/15766-9

A manipulação neonatal (MN) é um modelo experimental que examina como alterações ambientais no início da vida afetam estruturas neurais levando a modificações neuroendócrinas e comportamentais estáveis. Estas modificações estão relacionadas às alterações no cuidado materno que podem provocar alterações no desenvolvimento dos filhotes. Ratos manipulados, tanto machos quanto fêmeas, apresentam redução do comportamento sexual. Em fêmeas, a manipulação neonatal provoca diversas alterações morfológicas em regiões do sistema nervoso central relacionadas com o controle da reprodução, como a área pré-óptica medial, amígdala medial e o bulbo olfatório. Além disso, ratas manipuladas apresentam ciclos anovulatórios e alterações em concentrações hormonais, como ausência do pico de hormônio luteinizante (LH), diminuição da concentração plasmática de estradiol, prolactina, hormônio folículo estimulante e LH na tarde do proestro. Trabalhos demonstram que feromônios presentes na urina de ratos modulam a fisiologia reprodutiva de ratas, agindo através do órgão vomeronasal e do bulbo olfatório acessório, induzindo alterações na secreção de esteróides gonadais. A estimulação feromonal através da aplicação de urina de machos provoca a ativação de estruturas neurais relacionadas à facilitação do comportamento de lordose. O objetivo deste trabalho foi avaliar, em ratas adultas (90 dias) não-manipuladas e manipuladas durante o período neonatal, os efeitos do estímulo olfatório por feromônios da urina de machos sobre o comportamento sexual e concentração de esteróides gonadais. Para isso, foi realizada a borrifação de solução salina ou urina de ratos próxima às narinas de ratas manipuladas e não-manipuladas na noite do proestro. Este procedimento foi realizado com um spray manual a cada 10 minutos durante uma hora. Setenta e cinco minutos após o término da aplicação com o spray foi registrado o comportamento sexual e imediatamente após foi coletado o sangue para dosagem de estradiol e progesterona. Os resultados do trabalho confirmam dados anteriores em que a manipulação neonatal altera o comportamento sexual diminuindo o quociente de lordose e a frequência de intromissões penianas. Além disso, ratas manipuladas expostas à solução salina apresentaram uma tendência à diminuição da concentração de progesterona após o comportamento sexual quando comparadas às ratas não-manipuladas. Assim, podemos inferir que ratas manipuladas respondem menos às estimulações olfatórias e táteis realizadas pelo macho durante o acasalamento. O estímulo prévio com a urina de ratos machos reverteu o efeito da manipulação neonatal sobre o quociente de lordose, enquanto os níveis de progesterona não diferem dos observados nas ratas não-manipuladas. Assim, o aumento do quociente de lordose em ratas manipuladas que foram estimuladas com urina de ratos machos antes do comportamento sexual pode estar relacionado à elevação na concentração de progesterona.

The ability of prey to detect and respond appropriately to predator risk is important to overall prey fitness. Many aquatic organisms assess risk through the use of chemical cues that can change with predator diet. Two variable characteristics of diet are: 1. prey type and 2. prey mass. To assess the effect of these two characteristics on the assessment of risk by the mud crab Panopeus herbstii, I exposed mud crabs to the urine of the blue crab Callinectes sapidus fed one of 5 diet treatments: 10g of oyster shell free wet mass, 5g of oyster shell free wet mass, 10g crushed mud crabs, 5g crushed mud crabs, and a mix of 5g of oyster shell free wet mass and 5g crushed mud crab. Effects on P. herbstii foraging were tested in a previously developed bioassay by measuring shrimp consumption over a 4 hour period. I hypothesized that P. herbstii would have a larger magnitude response to urine from C. sapidus fed a diet of crushed mud crabs than to urine from C. sapidus fed a diet of oysters. I further hypothesized that P. herbstii would have a larger magnitude response to urine from C. sapidus fed a high mass diet relative to a lower mass diet. Contrary to expectations there was no observed effect of urine on P. herbstii foraging in any of the treatments. Results suggest that bioassay protocol may be unreliable suggesting further replication to determine the difference between this study and previous results. Future studies examining how P. herbstii varies with urine concentration will aid in understanding the ecological scale of this predator cue system. Determining the role of other potential cue sources will improve the predictive abilities of these studies.

Dissertação apresentada ao Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde da Universidade do Extremo Sul Catarinense – UNESC, para obtenção do título de Mestre em Ciências da Saúde.
A doença do xarope do bordo (DXB) é um erro inato do metabolismo causado pela deficiência na atividade do complexo da desidrogenase dos α cetoácidos de cadeia ramificada. Como consequência desse bloqueio ocorre o acúmulo dos aminoácidos de cadeia ramificada (AACR) leucina, isoleucina e valina, bem como seus αcetoácidos e α hidroxiácidos correspondentes. As principais características clínicas apresentadas pelos pacientes com DXB incluem cetoacidose convulsões, apnéia, hipoglicemia, coma, ataxia, retardo psicomotor e retardo mental, bem como edema generalizado e hipomielinização/desmielinização, como evidenciado por estudos de ressonância magnética do sistema nervoso central (SNC). No entanto, os mecanismos fisiopatológicos responsáveis pelos sintomas neurológicos apresentados pelos pacientes com DXB ainda são pouco conhecidos. No presente estudo investigou-se os efeitos da administração aguda de um pool de AACR sobre o imunoconteúdo de alguns marcadores envolvidos na morte celular por apoptose (Bax, Bcl-2, Bcl-xL, caspase 3 e caspase 8), para melhor compreender a fisiopatologia da disfunção neurológica presente nos pacientes com DXB. Ratos Wistar de 10 e 30 dias de vida receberam três administrações de um pool de AACR (15,8 µL/g de peso corporal), com intervalo de 1 hora entre as administrações, por via subcutânea (grupo teste). Os animais do grupo controle receberam três administrações de salina, com intervalo de 1 hora entre as administrações, por via subcutânea. Uma hora após a última administração, os ratos foram mortos por decapitação, o cérebro foi removido e o hipocampo e córtex cerebral foram isolados. A quantificação das proteínas Bax, Bcl-2, Bcl-xL e as caspases 3 e 8 foram mensuradas por Western blotting. Em ratos de 30 dias foi observado um aumento no imunoconteúdo do fator pró-apoptótico Bax e das caspases 3 e 8 no córtex cerebral, por outro lado, houve diminuição das caspases 3 e 8 concomitantemente com aumento dos fatores anti-apoptóticos Bcl-2 e Bcl-xL no hipocampo. Estes resultados sugerem que os AACR induzem apoptose, ativada pela via extrínseca, seguida da ativação da via intrínseca, no córtex cerebral, porém no hipocampo os parâmetros analisados não demonstram alterações. Os presentes resultados contribuem para explicar, pelo menos em parte, as sequelas neurológicas associadas às altas concentrações plasmáticas dos metabólitos acumulados na doença do xarope do bordo.
A doença do xarope do bordo (DXB) é um erro inato do metabolismo causado pela deficiência na atividade do complexo da desidrogenase dos α cetoácidos de cadeia ramificada. Como consequência desse bloqueio ocorre o acúmulo dos aminoácidos de cadeia ramificada (AACR) leucina, isoleucina e valina, bem como seus αcetoácidos e α hidroxiácidos correspondentes. As principais características clínicas apresentadas pelos pacientes com DXB incluem cetoacidose convulsões, apnéia, hipoglicemia, coma, ataxia, retardo psicomotor e retardo mental, bem como edema generalizado e hipomielinização/desmielinização, como evidenciado por estudos de ressonância magnética do sistema nervoso central (SNC). No entanto, os mecanismos fisiopatológicos responsáveis pelos sintomas neurológicos apresentados pelos pacientes com DXB ainda são pouco conhecidos. No presente estudo investigou-se os efeitos da administração aguda de um pool de AACR sobre o imunoconteúdo de alguns marcadores envolvidos na morte celular por apoptose (Bax, Bcl-2, Bcl-xL, caspase 3 e caspase 8), para melhor compreender a fisiopatologia da disfunção neurológica presente nos pacientes com DXB. Ratos Wistar de 10 e 30 dias de vida receberam três administrações de um pool de AACR (15,8 µL/g de peso corporal), com intervalo de 1 hora entre as administrações, por via subcutânea (grupo teste). Os animais do grupo controle receberam três administrações de salina, com intervalo de 1 hora entre as administrações, por via subcutânea. Uma hora após a última administração, os ratos foram mortos por decapitação, o cérebro foi removido e o hipocampo e córtex cerebral foram isolados. A quantificação das proteínas Bax, Bcl-2, Bcl-xL e as caspases 3 e 8 foram mensuradas por Western blotting. Em ratos de 30 dias foi observado um aumento no imunoconteúdo do fator pró-apoptótico Bax e das caspases 3 e 8 no córtex cerebral, por outro lado, houve diminuição das caspases 3 e 8 concomitantemente com aumento dos fatores anti-apoptóticos Bcl-2 e Bcl-xL no hipocampo. Estes resultados sugerem que os AACR induzem apoptose, ativada pela via extrínseca, seguida da ativação da via intrínseca, no córtex cerebral, porém no hipocampo os parâmetros analisados não demonstram alterações. Os presentes resultados contribuem para explicar, pelo menos em parte, as sequelas neurológicas associadas às altas concentrações plasmáticas dos metabólitos acumulados na doença do xarope do bordo.

A dieta tem forte influência sobre a formação de carga ácida no metabolismo dos pacientes com doença renal crônica (DRC), portanto é um fator que pode influenciar na gravidade da acidose metabólica. Esta é uma condição comumente encontrada em estágios mais avançados da DRC. Proteínas vegetais, como a proteína texturizada de soja (PTS), poderiam proporcionar uma formação de carga ácida menor e, pelo seu conteúdo de isoflavonas, consideradas antioxidantes, contribuiriam para a melhora do estresse metabólico. O objetivo do estudo foi avaliar os efeitos da substituição de fontes proteicas de origem animal por fonte vegetal (soja), durante uma semana, em parâmetros sanguíneos e urinários de acidose em pacientes com DRC. Foram avaliados 28 pacientes com DRC estadios 3, 4 e 5 antes e após a substituição de fontes de proteínas animais de uma refeição principal (almoço ou jantar) por PTS ao longo de 7 dias. Antes e após a intervenção foram avaliados: ingestão alimentar por registros, a carga ácida potencial dos alimentos (CAPA), exames clínicos de rotinas, antropometria (peso, altura e IMC), composição corporal por bioimpedância de espectroscopia multifrequencial (BIS), parâmetros de acidez sanguínea e urinária (bicarbonato e pH urinário) e marcadores de estresse oxidativo (CAT e AOPP). Para análise de resultados foram utilizados testes não paramétricos de Mann-Whitney e também testes de correlação de Spearman que foram empregados para avaliação de associações entre as variáveis. O valor de p<0,05 foi considerado para a significância estatística. Encontramos que em9 uma semana de intervenção com PTS houve aumento significativo nos marcadores de BIC e pH sanguíneos, assim como no pH urinário. A maioria dos pacientes saíram do estado de acidose metabólica. O marcador de estresse oxidativo CAT mostrou melhora, porém o AOPP não apresentou aumento significativo. Em relação a composição corporal, houve diminuição do peso e aumento nos marcadores de hiperhiratação (HH), porém aumento na massa livre de gordura (MLG) e massa gorda (MG). Esses resultados mostram que a diminuição de CAPA na dieta, pela inclusão da PTS pode gerar uma melhora na acidose metabólica e no estresse oxidativo, consolidando que o manejo dietético através da inclusão de proteína vegetal pode ser uma abordagem nutricional importante no tratamento do paciente com DRC.
The diet has a strong influence on the formation of the acid load in the metabolism of patients with CKD, and this is a factor that can influence the severity of metabolic acidosis. It is a condition commonly found in more advanced stages of CKD. Vegetable proteins, such as textured soy protein (PTS), could provide a lower acid charge formation and, because of their content of isoflavones, considered antioxidants, would contribute to the improvement of metabolic stress. The objective of this study was to evaluate the effects of replacing animal protein source to plant source (soybean) for one week and analyze the blood and urine parameters of acidosis in patients with CKD. We evaluated 28 patients with CKD stages 3, 4 and 5 before and after replacing animal protein sources of the main meal, either lunch or dinner, with PTS over 7 days. Before and after the intervention it was evaluated: feed intake per records, Load Acid Potential Food (CAPA), clinical routines, anthropometry (weight, height and BMI), body composition by bioelectrical impedance multifrequency spectroscopy (BIS), blood and urine parameters (Bicarbonate and urinary pH) and oxidative stress markers (CAT and AOPP) Mann-Whitney non-parametric tests were used to analyze the results, as well as the Spearman\'s correlation tests to evaluate associations between the variables. The p value <0.05 was considered for statistical significance. We found that in one week of intervention with PTS there was a significant increase in BIC markers and blood pH, as well as urinary pH. Most of the patients were not in the state of metabolic acidosis. The CAT oxidative stress marker showed11 improvement, but AOPP showed no significant increase. Regarding body composition, there was a decrease in weight and an increase in the hyper hydration markers, but an increase in fat free mass and fat mass. These results show that the decrease of CAPA in the diet and the inclusion of the PTS can generate an improvement in metabolic acidosis and oxidative stress, consolidating the dietary management using plant protein inclusion and this can be an important nutritional approach in the treatment of patients with DRC.

Orientador: Aulus Cavalieri Carciofi
Banca: Mirela Tinucci Costa
Banca: Marcia de Oliveira Sampaio Gomes
Resumo: Gatos são animais carnívoros, com elevada necessidade de aminoácidos. O aproveitamento de carboidratos por esses animais já foi estudado, contudo existem informações, relacionadas ao metabolismo deste nutriente, que ainda não são bem esclarecidas para a espécie. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito do consumo de dietas com diferentes relações entre amido e proteína sobre a formação e excreção do oxalato e o índice de supersaturação relativa da urina para oxalato de cálcio (SSR OxCa). Foram avaliados alimentos extrusados com diferentes proporções de amido (CHO) e Proteína (PB): Dieta A 47 com 47% de CHO e 25% de PB; dieta A 32 com 31,9% de CHO e 38% de PB; dieta A 19 com 19,2% de CHO e 52% de PB e dieta A 8 com 8,3 % de CHO e 62% de PB (na matéria seca). O estudo foi organizado em 4 blocos de 18 dias, cada um com quatro rações e oito gatos, totalizando 32 gatos e oito repetições por ração. Os gatos permaneceram em gaiolas metabólicas durante 10 dias de adaptação à dieta, seguidos de sete dias de coleta total de urina e fezes. Durante os dois primeiros dias de coleta a urina foi recolhida em garrafas com 1mL de H2SO4 (1N) e nos cinco dias seguintes em garrafas com 100mg de timol. Na urina produzida em cada período de 24 horas foi aferido o volume, densidade e pH. A urina de 5 dias de cada gato (colhida com timol) foi homogeneizada, sendo determinados os teores de cálcio, fósforo, cloro, enxofre, magnésio, sódio, potássio, citrato, oxalato, ácido úrico, creatinina e ureia. Na urina acidificada foram determinados o nitrogênio e energia bruta. Amostras de sangue para obtenção do plasma foram colhidas no 18º dia de cada período, sendo analisadas para oxalato e creatinina. Os alimentos e as fezes foram avaliados para matéria seca, matéria mineral, amido, fibra bruta e energia bruta. Com base nesses resultados foi calculada a SSR OxCa e a excreção fracionada de oxalato. Os resultados obtidos...
Abstract: Cats are carnivores and have high amino acids requirements. The use of carbohydrates by these animals has been evaluated; however, there are some information that is not well understood. The objective of this study was to evaluate the effect of consumption of diets with different relations between starch and protein on the formation and excretion of oxalate, and the relative supersaturation index of calcium oxalate in urine (SSR OxCa). Four diets were extruded with different starch (CHO) and protein (CP) ratios: diet 47 with 47% of CHO and 25% of CP; diet 32 with 31.9% of CHO and 38% of CP; diet 19 with 19.2% of CHO and 52% of CP; and diet 8 with 8.3% of CHO and 62% of CP (dry matter basis). The experiment was organized in 4 blocks of 18 days; there were 4 diets and 8 cats in each block, resulting in eight animals per diet. Animals were kept in metabolic cages during 10 days for diet adaptation followed by 7 days of total urine and feces collection. Urine was collected in bottles with 1 ml of H2SO4 (1N) in the first two days of the collection period and the last five days in bottles with 100 mg of thymol. Volume, density and pH of urine were measured each 24 hours during the whole experiment. Urine harvested with thymol were homogenized and analyzed for calcium, phosphorus, chlorine, sulfur, magnesium, sodium, potassium, citrate, oxalate, uric acid and creatinine. In the acidic urine were determined nitrogen and gross energy. Blood samples were taken at 18th day of the experiment and evaluated for oxalate and creatinine. Food and feces were evaluated for dry matter, ash, starch, crude fiber and gross energy. Based on the results SSR OxCa and fractional excretion of oxalate were calculated. Data were submitted to analysis of variance and when significant differences were detected in the F test, multiple comparisons were performed using polynomial contrasts (P <0.05). Starch inclusion up to 47% did not restrict the diet consumption by ...
Mestre

A urolitíase é um problema recorrente na clínica veterinária considerada como causa de morbidade. As urolitíases são estreitamente associadas ao pH urinário e a nutrição exerce um papel fundamental no controle desta afecção, pois através da manipulação da dieta, pode-se modificar o pH urinário. A dieta possui cátions e ânions na sua composição mineral e a diferença entre íons é medida em miliequivalentes (mEq/kg) e denominado excesso de bases (EB) da dieta, calculado através da equação: (49,9 x Ca) + (82,3 x Mg) + (43,5 x Na) + (25,6 x K) – (64,6 x P) – (62,4 x S) – (28,2 x Cl), sendo a concentração dos elementos em g/kg de MS. A finalidade deste estudo, dividido em dois experimentos, foi avaliar o efeito da adição de fontes de enxofre (S) e cálcio nas dietas de felinos sobre o pH urinário e equilíbrio ácido-básico. A adição de fontes de enxofre objetivou demonstrar a eficácia na acidificação urinária. No primeiro experimento avaliaram-se três diferentes fontes de enxofre: sulfato de cálcio (CaSO4), DL-metionina (DLM) e Metionina hidróxi análoga (MHA) adicionados a uma dieta controle em dois níveis cada um. No tratamento controle não houve adição de acidificantes. No primeiro nível adicionou-se 1,28 g de S/kg e no segundo 2,56 g de S/kg, resultando em sete tratamentos. No segundo experimento duas fontes de cálcio foram avaliadas com o objetivo de pesquisar a eficácia destes sais na alcalinização da urina. No tratamento controle não houve adição de fontes de cálcio. Nos tratamentos 2 e 3 foram adicionados à dieta controle carbonato de cálcio e gluconato de cálcio, respectivamente, nas doses de +160 mEq/kg, resultando em três tratamentos. A urina produzida em cada período de 24 horas teve aferida seu volume, densidade e pH. No segundo experimento foi também medida a excreção urinária de cálcio no período de 72h. O equilíbrio ácido-básico foi avaliado pela hemogasometria de sangue venoso. A DLM no maior nível e o MHA diferiram da dieta controle em relação ao pH urinário (p<0,001) e seu poder acidificante foi maior que o do sulfato de cálcio (p<0,05). As duas fontes de cálcio alcalinizaram a urina, mas o carbonato de cálcio atingiu um pH urinário mais alto que o gluconato de cálcio. Concluiu-se que o efeito diferenciado das fontes de S e cálcio sobre o pH urinário é um indicador de que a participação do cálcio é dependente dos ânions a que está associado, o que leva ao questionamento sobre qual a melhor forma de avaliar sua participação no cálculo do EB.
Urolithiasis is a commom problem in the veterinary clinic considered as a cause of morbidity. The urolithiasis are closely associated with urinary pH and nutrition plays a key role in the control of this disease, because through dietary manipulation, it´s possible modify the urinary pH. The diet has cations and anions in their mineral composition and the difference between ions is measured in milliequivalents (mEq/kg) and called base excess (BE) of the diet, calculated by the equation: (49.9 x Ca) + (82, Mg x 3) + (43.5 x Na) + (25.6 x K) - (64.6 x P) - (62.4 x S) - (28.2 x Cl), being the concentration of elements in g/kg DM. The purpose of this study, divided in two experiments, was to evaluate the effect of addition of sources of sulfur (S) and calcium in the diets of cats on the urinary pH and acid-base balance. The addition of sulfur sources aimed to demonstrate the efficacy in urinary acidification. In the first experiment were evaluated three different sources of sulfur, calcium sulfate (CaSO4), DLMethionine (DLM) and Methionine hydroxy analogue (MHA) added to a control diet at two levels each. In the control treatment there was no addition of acidifying. At the first level was added 1.28 g S/kg and in the second 2.56 g S/kg, resulting in seven treatments. In the second experiment two calcium sources were evaluated in order to research the effectiveness of these salts in alkalinize urine. In the control treatment there was no addition of calcium sources. In treatments 2 and 3 were added to the control diet calcium carbonate and calcium gluconate, respectively, at doses of +160 mEq/kg, resulting in three treatments. The urine produced in each period of 24 hours had measured its volume, density and pH. The second experiment also measured the urinary excretion of calcium in the period of 72 hours. The acid-base balance was evaluated by blood gas analysis of venous blood. The DLM at the highest level and MHA differed of the control diet in relation to urinary pH (p<0.001) and their acidifying power was greater than the calcium sulfate (p<0.05). The two sources of calcium alkalinized the urine, but the calcium carbonate reached a urine pH higher than calcium gluconate. It was concluded that the effect of different sources of S and calcium on urinary pH is an indicator that the participation of calcium is dependent of the anions that is associated, which leads to questions about how is the best way to evaluate its participation in calculation of BE.

La 4ème de couverture indique : "Les mécanismes physiopathologiques des anomalies congénitales d'écoulement des urines restent incomplètement élucidés. Nous avons développé un modèle expérimental fœtal afin d'étudier les conséquences à long-terme de ces anomalies sur l'hémodynamique rénale et sur le développement du rein. A partir de ce modèle, nous avons montré que les anomalies congénitales d'écoulement des urines conduisent à la détérioration progressive des flux sanguins rénaux et que ces altérations hémodynamiques sont aggravées par les modifications physiologiques liées à la naissance. Par l'étude sur développement rénal, nous avons établi la cinétique d'apparition des modifications tissulaires rénales, et nous avons corrélé ces observations à l'expression de marqueurs impliqués dans la régulation de composition de la matrice extracellulaire et de la différenciation rénale. Les implications de ces travaux en clinique humaine et sur la conception de nouveaux axes de recherche ont été développées. "

Este relatório foi elaborado no âmbito do estágio curricular, do Mestrado Integrado em Medicina Veterinária, realizado no Hospital Veterinário do Porto (HVP) no período compreendido entre 21 de setembro de 2015 e 21 de março de 2016. A primeira parte do presente relatório trata a casuística acompanhada ao longo do estágio. A segunda parte consiste numa revisão bibliográfica da infeção bacteriana do trato urinário inferior (IBTUI), sendo finalizada com um estudo retrospetivo, realizado no HVP, referente à epidemiologia dos agentes microbianos associados à IBTUI e respetivas resistências antibacterianas. A IBTUI é uma afeção comum nos animais de companhia, resultante da colonização do trato urinário por agentes bacterianos patogénicos, sendo o seu tratamento um dos principais contribuintes para o uso de antibacterianos na prática clínica veterinária; Abstract: Small animal medicine and surgery This report was elaborated within the scope of the curricular traineeship as part of the integrated master’s degree in Veterinary Medicine, held at the Hospital Veterinário do Porto (HVP) from September 21st, 2015 to March 21st, 2016. The first part of this report describes the casuistry followed during the traineeship. The second part consists of a bibliographic review about bacterial lower urinary tract infection (BLUTI) and it is followed by a retrospective study, carried out at HVP, concerning the epidemiology of microbial agents regarding BLUTI and their antibacterial resistance. BLUTI is a common disease in companion animals resulting from the colonization of the urinary tract by pathogenic bacterial agents, whose treatment is considered one of the main contributors to the use of antibacterial agents in veterinary clinical practice.

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Dissertacao (Mestrado)
IPEN/D
Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN/CNEN-SP

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:46:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 169797 bytes, checksum: f56fb6c7c94585900bf83023ad450875 (MD5) Previous issue date: 2005-03-02
The present work was developed based on two experiments. In the first one were used four castred Holstein steers, with initial average live weight of 445 kg, aiming to evaluate variations on the daily urinary excretion of creatinine, urea and purine derivatives, sampling during six consecutive days; and to evaluate the plasma N-urea concentration (NUP) for steers receiving diets with two levels of concentrate and two protein sources. The animals was distribuited in a 4x4 latin square, being the treatments defined by factorial outline 2x2, two urea levels (0 and 100%) replacing soybean meal and two levels of concentrate (0.75% and 1.25% of live weight - LW), the comparison between the evaluation days was lead using a split-plot design. The roughage, constituted of elephant grass silage (80%) and sorghum silage (20%), was supplied at libitum . The urine sampling were done during six consecutive days, using funnels collectors coupled in animals. The nitrogen microbial compounds synthesis was higher (P<0.05) for the higher use of concentrated and lower (P<0.05), when the protein from soybean meal was replaced by urea. There weren t found interaction (P>0.05) between the concentrate and urea levels for the concentration of NUP and urinary excretion of N-urea, neither effect (P>0.05) of urea levels. The urinary excretions of urea, allatoin, uric acid and total purine derivatives were not affected (P>0.05) by the days of urine sampling. In the same way, the amount of estimated microbial protein were not affected (P>0.05) by the days of urine sampling. The creatinine excretion were not affect by the days of urine sampling, presenting average values of 25,47 mg/kgLW, 117,92 mg/kg0.75 or 1,04 mmol/ kg0.75. The second experiment was aimed to determine variations in the daily urinary excretions of creatinine and nitrogen compounds, sampling during six consecutive days for dairy heifers, the effect of number of sampling days in the estimated microbial production was also evaluated. Eleven dairy Holstein heifers, with initial live weight of 280 kg, were used, being a simple sample of a population. To perform the comparison between the sampling days, the variance analyses method was used as a pure error isolation tool, adopting a model which considers the random effect of animal and the constant effect of the evaluation day. The roughage was composed by corn silage supplied at libitum . Daily 2 kg of concentrate ware supplied for each animal. The experimental period had a six day duration because the animals were adapted to the diet. To determine the daily urinary amount, No. 22 or 26 Folley catheters were used. The was not affected (P>0.05) by the days of urine sampling. The urinary excretion of creatinine, urea, allatoin, uric acid and the total purine derivatives excretions were not affected (P>0.05) by the days of urine sampling. The amount of estimated microbial protein were not affected (P>0,05) by the days of urine sampling either. The average value for the creatinine excretion was 30,5 mg/kgLW, 124,84 mg/kg0.75 or 1,1 mmol/kg0.75. Through the results of the two experiments, it can be inferred that the effect absence of the number of days on the creatinine excretion has a important practical application, because it reduces the long durations of sampling, as well as the research expenses, recommending urine samplings of 24-hour duration.
O presente trabalho foi desenvolvido a partir de dois experimentos. No primeiro foram utilizados quatro animais, machos castrados, de grau de sangue predominantemente Holandês com peso inicial médio de 445 kg, objetivando-se estimar as variações nas excreções diárias de creatinina, uréia e de derivados de purinas na urina, utilizando coletas durante seis dias consecutivos; e avaliar as concentrações de nitrogênio uréico no plasma (NUP) em novilhos submetidos a dietas que continham dois níveis de concentrado e duas fontes de proteína. Os animais foram distribuídos em um quadrado latino 4X4, sendo os tratamentos definidos em esquema fatorial 2X2, sendo dois níveis de uréia (0 e 100%) em substituição ao farelo de soja e dois níveis de oferta de concentrado (0,75% e 1,25% do PV), e a comparação entre dias de avaliação foi conduzida em esquema de parcelas subdivididas. O volumoso, constituído de silagem de capim elefante (80%) e silagem de sorgo (20%), foi fornecido à vontade. As coletas de urina foram feitas durante seis dias consecutivos, utilizando-se funis coletores adaptados aos animais. A síntese de compostos nitrogenados microbianos foi maior (P<0,05) para a maior oferta de concentrado e menor (P<0,05), quando a proteína do farelo de soja foi substituída pela uréia. Não houve interação (P>0,05) entre níveis de concentrado e de uréia para a concentração de NUP e a excreção de N-uréico na urina, nem efeito (P>0,05) de níveis de uréia. As excreções urinárias de uréia, alantoína, ácido úrico e derivados de purinas totais não foram afetadas (P>0,05) pelos dias de coleta de urina. Da mesma forma, a quantidade estimada de proteína microbiana não diferiu (P>0,05) entre os dias de coleta de urina. Não houve diferença (P>0,05) na excreção de creatinina entre os dias de coleta de urina, apresentando o valor médio de 25,47 mg/kgPV, 117,92 mg/kg0,75 ou 1,04 mmol/kg0,75. No segundo experimento, objetivou-se avaliar as variações nas excreções diárias de creatinina e de uréia na urina, utilizando coletas durante seis dias consecutivos em novilhas de origem leiteira; avaliou-se também o efeito da duração do período de coleta sobre a estimativa da produção microbiana obtida a partir dos derivados de purinas na urina. Utilizaram-se onze novilhas de grau de sangue predominantemente Holandês, com peso inicial médio de 280 kg, considerando-se o grupo de animais como uma amostra aleatória simples da população. Para comparação entre dias de coletas, empregou-se análise de variância como ferramenta para isolamento do erro puro, adotando-se modelo constituído pelo efeito aleatório de animal e pelo efeito fixo de dia de avaliação. O volumoso foi constituído de silagem de milho fornecida à vontade. Diariamente foi fornecido 2,0 kg de concentrado por animal. O período experimental teve duração de seis dias, pois os animais já estavam adaptados à dieta. As coletas de urina foram realizadas utilizando-se sondas de Folley no 22 ou 26, sendo determinado o volume urinário diário. As excreções urinárias de creatinina, uréia, alantoína, ácido úrico e derivados de purinas totais também não foram afetadas (P>0,05) pelos dias de coleta de urina. Da mesma forma a quantidade estimada de proteína microbiana não diferiu (P>0,05) entre os dias de coleta de urina. O valor médio para a excreção de creatinina foi de 30,5 mg/kgPV, 124,84 mg/kg0,75 ou 1,1 mmol/kg0,75. Através dos resultados obtidos nos dois experimentos, pode-se concluir que a ausência de efeito de número de dias sobre a excreção de creatinina tem uma grande aplicação prática, pois além de reduzir o trabalho com tempos longos de coletas, permite a redução nos custos da pesquisa, recomendando-se coletas de urina com duração de 24 horas.

Orientador: Ana Maria Aparecida Guaraldo
Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia
Made available in DSpace on 2018-07-21T00:42:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Rocha_RosangelaJunqueira_D.pdf: 4641170 bytes, checksum: aedf4a1570b3ee1a0bf27ff37fbccd29 (MD5) Previous issue date: 1995
Resumo: Para a detecção de antígenos de T. gondii na urina e plasma de camundongos infectados com o parasito foi utilizada técnica de ELISA de captura. Na técnica, IgG humana anti,T. gondii, obtida por cromatografia de afinidade, foi utilizada para o revestimento da placa de ELISA com o intuito de capturar antígenos específicos. Nas reações positivas, os antígenos de T. gondii foram reconhecidos por IgG de coelho anti, T. gondii obtida por cromatografia de afinidade. Utilizou,se o conjugado IgG de cabra anti,lgG de coelho marcado com peroxidase e como substrato a ortofenilenodiamina. Em cada placa de reação foram incluídos padrões contendo concentrações conhecidas de proteínas de taquizoitos (AgS T. gondii). A concentração de proteínas presentes nas amostras testadas foram expressas em J.1g1 mI. A técnica eviqenciou alta reprodutibilidade, com limite inferior de sensibilidade de 0,05 Ilg/mI. Foi observada antigenúria em camundongos inoculados com 1000, 25000, 50000 e 100000 taquizoitos da linhagem N de alta virulência de Toxoplasma gondii ,durante a fase aguda da infecção. Camundongos inoculados com 1, 6 ou 12 cistos da linhagem P de moderada virulência de T. gondii apresentaram antigenúria e antigenemia na fase aguda e crônica da infecção. Os primeiros cistos foram detectados no cérebro dos camundongos infectados com a linhagem P, 11 dias após a infecção. O número de cistos e o volume médio aumenta com o tempo de infecção, independentemente do número de cistos inoculados. Na fase crônica da infecção dos animais observou,se o ocorrência simultânea de cistos grandes e pequenos, indicando neoformação de cistos. A neoformação de cistos e antigenúria na fase crônica da infecção, indicam a possibilidade de reagudização periódica da infecção pelo T. gondii
Doutorado
Parasitologia
Doutor em Ciências Biológicas

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2016-12-13T12:43:30Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 392063 bytes, checksum: 6d044775c102dc09c3ead37086d2b1f2 (MD5)
Made available in DSpace on 2016-12-13T12:43:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 392063 bytes, checksum: 6d044775c102dc09c3ead37086d2b1f2 (MD5) Previous issue date: 2016-04-18
Esse estudo foi conduzido para estabelecer o perfil nictemeral da excreção urinária de creatinina (CR), uréia (UR), nitrogênio total (NT) e derivados de purina (DP) e as relações UR:CR, NT:CR e DP:CR em vacas leiteiras, com objetivo de reduzir a coleta de 24 para 2h ou indicar o melhor horário para estimar esses compostos por meio de coletas de urina spot. Foram utilizadas quinze vacas Holandesas em sistema de confinamento total em baias individuais. O estudo foi conduzido em delineamento inteiramente casualizado com três tratamentos e cinco repetições. Os tratamentos consistiram de três níveis de produção diária: Alta (31,26 ±2,99 kg), média (22,86 ±1,57 kg) e baixa (14,16 ±0,75 kg). O período experimental teve duração de 27 dias, sendo 14 para adaptação dos animais às condições experimentais e 13 dias para coletas de amostras. As amostras spot de urina foram coletadas de 2h em 2h (2hSp) no 16° e 17° dia experimental. Do 22o ao 25o dia foram obtidas amostras totais de urina a intervalos de duas horas. Não houve diferença entre os horários de coleta e produção de leite (PL) para a excreção diária de creatinina, expressa em mg/kgPC e para relação DP:CR para coleta total de 2h em 2h (2hTL). Houve efeitos dos horários de coleta e PL sobre as relações UR:CR e NT:CR para coleta 2hTL. Os horários representativos para coleta 24h das coletas 2hTL foram 2, 4, 6, 8, 12, 18, 20 ou 24 h para relação UR:CR e 2, 4, 6, 8, 10, 16, 18, 22 ou 24 h para relação NT:CR. Não houve diferença entre os horários de coleta e PL para relação DP:CR em coleta 2hSp. Para as coletas 2hSp, os horários indicados para estimação da excreção de NT e UR, foram 10, 18 e 24 h. Conclui-se que a excreção de creatinina, expressa em mg/kgPC, e a relação DP:C não variam ao longo do dia, respaldando a recomendação de que a coleta spot de urina seja efetuada a qualquer horário do dia para estimar a excreção de DP diária. Para coletas de urina spot ou redução do tempo de coleta de 24 para 2h, com objetivo de estimar a excreção de compostos nitrogenados, recomenda-se os horários de 10h, 18h e 24h. Ressalta-se, finalmente, que apesar desses três horários individualmente estimarem adequadamente a produção de compostos nitrogenados e DP, recomenda-se que seja feita coleta nos três horários para reduzir a probabilidade de erros das estimativas.
This study was conducted to establish the diurnal profile of urinary excretion of creatinine (CR), urea (UR), total nitrogen (TN), and purine derivatives (PD) and the UR:CR, TN:CR, and PD:CR ratios in dairy cows, aiming to reduce the collection time from 24 h to 2 h or indicate the best time to estimate these compounds via spot urine collections. Fifteen Holstein cows were used in a total confinement system, housed in individual stalls. The study was undertaken as a completely randomized design with three treatments and five replications. Treatments consisted of three levels of daily milk yield: high (31.26±2.99 kg), medium (22.86±1.57 kg), and low (14.16±0.75 kg). The experimental period lasted 27 days, including 14 days for the adaptation of animals to the experimental conditions and 13 days for sample collections. Spot urine samples were collected every 2 h (2hSp) on the 16th and 17th experimental days. From the 22nd to the 25th days, total urine samples were obtained at two-hour intervals. There was no difference between collection times and milk yield (MY) for the daily excretion of creatinine, expressed in mg/kg BW, and for the PD:CR ratio for total collection performed every 2 h (2hTL). There was an effect of collection times and MY on the UR:CR and TN:CR ratios for 2hTL collection. The representative times for the 24-h collection of 2hTL collections were 2, 4, 6, 8, 12, 18, 20, or 24h00 for UR:CR ratio and 2, 4, 6, 8, 10, 16, 18, 22, or 24h00 for TN:CR ratio. There was no difference between collection times and MY for the PD:CR ratio in 2hSp collection. For 2hSp collections, the times indicated for the estimate of TN and UR excretion were 10, 18, and 24 h. In conclusion, creatinine excretion, expressed in mg/kg BW, and PD:CR ratio do not vary throughout the day, corroborating the recommendation that the spot urine collection should be performed at any time of the day to estimate the daily PD excretion. For spot urine collections or to reduce the collection time from 24 to 2 h aiming to estimate the excretion of nitrogen compounds, the times 10h00, 18h00, and 24h00 are recommended. Lastly, we stress that although these three times alone adequately estimate production of nitrogen compounds and PD, we recommend that collection be performed at all three times to reduce the error probability of estimates.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2018-08-09T12:55:37Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 9379467 bytes, checksum: 3d00842f5ce615ad92103a3787053deb (MD5)
Made available in DSpace on 2018-08-09T12:55:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 9379467 bytes, checksum: 3d00842f5ce615ad92103a3787053deb (MD5) Previous issue date: 2018-06-18
Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior
O presente trabalho foi desenvolvido com os objetivos de avaliar a excreção de creatinina para validação da coleta spot de urina, bem como as excreções de derivados de purinas (DP) e compostos nitrogenados (CN) e suas relações com a creatinina em novilhas Nelore suplementadas a pasto (Capítulo 1); objetivou-se também avaliar a recuperação da creatinina em função do tempo e de diferentes temperaturas de armazenamento (Capítulo 2). O experimento referente ao Capítulo 1, foi conduzido no setor de gado de corte da Universidade Federal de Viçosa/MG, utilizando-se cinco novilhas Nelore com peso corporal (PC) médio de 400 ± 15kg, distribuídas em quadrado latino 5x5. Os cinco tratamentos experimentais se basearam na suplementação proteico-energética (concentrado com 22% de proteína bruta na matéria seca (MS), fornecido às12h), baseada no PC (0, 3, 6, 9 e 12 g/kg PC (PC0, PC3, PC6, PC9 e PC12, respectivamente)). Os animais receberam sal mineral ad libitum. Cada período experimental teve duração de 16 dias, sendo 12 de adaptação à dieta e quatro de coleta. A coleta total de urina e amostral de fezes, foi realizada em três dias, nos horários das 0h00-4h00, 4h00-8h00, 8h00-12h00, 12h00-16h00, 16h00-20h00 e 20h00-24h00. A coleta de spot de urina, foi realizada a cada 4 horas, assim como as coletas de líquido ruminal e sangue nos horários das 0, 4, 8, 12, 16, 20 horas. Para a coleta total de urina, utilizou-se sonda de Folley no26, acoplada a mangueira de polietileno que conduziu a urina até uma bolsa coletora de urina por sistema fechado, que foi esvaziada a cada quatro horas. A amostragem da urina coletada foi realizada a cada 4 horas, nos mesmos horários descritos para a coleta de sangue, medindo- se o volume e retirando-se duas amostras, uma diluída com solução H2SO4 0,036N e outra não diluída. Para determinação da excreção fecal, utilizou-se o dióxido de titânio, fornecido na quantidade total diária de 15g, entre os dias 8o e 16o de cada período. Para estimativa do consumo de pasto, utilizou-se a fibra indigestível em detergente neutro (FDNi) como indicador interno. Realizou-se coleta de pasto pela técnica do quadrado para determinação da MS potencialmente digestível (MSpd) no terceiro dia de cada período experimental. Nos dias 13o e 16o de cada período, realizou-se simulação de pastejo para estimar a composição do pasto ingerido. Nas amostras de urina foram determinadas as concentrações de creatinina, nitrogênio total urinário (NU), ureia (NUreia), ácido úrico (AU) e alantoína (AL). Para análise estatística utilizou-se o programa estatístico Proc Mixed do SAS 9.4. A avaliação da adequação da melhor forma de coleta de urina foi realizada utilizando a raiz quadrada do quadrado médio do erro da predição (QMEP) entre as amostras de urina obtidas por meio da coleta spot. O experimento, referente ao Capítulo 2, foi realizado no Departamento de Zootecnia da UFV. Foram utilizadas urina de vinte e cinco animais, dez provenientes da raça Nelore e quinze da raça Holandesa. As urinas (10 de Nelore e 10 de Holandês) foram diluídas em solução de H2SO4 0,036N, fracionadas e conservadas em temperatura ambiente, resfriadas (4oC) e congeladas (-20oC e a -40oC), analisadas em diferentes dias após a coleta (1, 3, 7, 10, 15, 30, 45, 60, 90, 120, 150 dias). Imediatamente após a coleta, a urina foi diluída e seu pH corrigido para valor inferior a 3, e a urina foi analisada, dando origem ao valor de creatinina, resultado utilizado como valor de referência da concentração de creatinina na amostra. Este valor referência, foi utilizado como divisor dos valores de creatinina obtidos nos dias da análise, por amostra, obtendo-se o valor de creatinina relativa, o que permite a observação do aumento ou diminuição da concentração de creatinina ao longo do tempo. Para avaliar a conversão de creatina em creatinina na urina de bovinos, utilizou-se urina proveniente de cinco bovinos da raça Holandesa. Estas urinas também foram diluídas e tiveram seu pH corrigido para valor inferior a 3. Para avaliar o efeito da adição de creatina na urina, adicionou-se solução de creatina (concentrações de 20, 40 e 60 mg/dL) nos eppendorf contendo urina diluída. Estas urinas foram analisadas em diferentes dias após a coleta (1, 3, 7, 15, 30 e 45 dias), sendo armazenadas nas mesmas temperaturas descritas anteriormente. No capítulo 1 observou-se efeito linear positivo (P=0,001) sobre o consumo de MS total devido ao aumento nas quantidades de suplemento fornecido aos animais, porém observou-se efeito quadrático (P=0,018) sobre a ingestão de MS proveniente do pasto. A ingestão de N diferiu entre os tratamentos (P<0,05), causado pelo aumentou na ingestão de suplemento, o que possibilitou aumento (P=0,001) na ingestão de CN. O fornecimento de suplementação possibilitou efeito sobre a concentração de N amoniacal ruminal (P<0,05). A concentração de N uréico no soro (NUS) foi afetada (P<0,05) pelo fornecimento de concentrado no período de 24 horas, porém o tratamento PC0 não apresentou variação na concentração de NUS (P>0,05), em função da ausência de suplementação. A excreção de creatinina diária foi de 23,01 ± 0,19 (22,82 – 23,2) mg/kgPC. As excreções de AL, AU e DP, em mmol, foram influenciadas linearmente pelos tratamentos (P=0,002; P=0,004; P=0,003, respectivamente). A síntese de nitrogênio microbiano (NM) foi influenciada, assim como as excreções de DP, linearmente (P=0,001) pelos tratamentos. As relações entre AL, AU e DP com a creatinina, não foram influenciadas pelos dias de coleta, períodos de coleta, tratamentos e suas interações (P>0,05), apresentando média de relações de 1,36 para AL:creatinina, 0,121 para AU:creatinina e 1,48 para PD:creatinina. Além do efeito de tratamento sobre a excreção de NU e NUrea, a excreção de CN na urina foi influenciada (P<0,05) também pelos períodos de coleta. As relações NU:creatinina e NUreia:creatinina na urina não apresentaram efeito (P>0,05) de tratamento, dias e períodos de coleta. A avaliação comparativa da excreção de creatinina observada nas amostras obtidas a partir da coleta total de urina, a cada 4 horas por 3 dias, com as amostras spot de urina obtidas em momentos pontuais (às 12, 16, 20, 0, 4 e 8 horas), demonstrou não haver diferença (P>0,05) entre as duas formas de coleta estudadas. A observação das relações AL:creatinina e AU:creatinina, nos métodos de coleta avaliados neste estudo, possibilitou a observação de que não houve variação (P>0,05) entre as amostras obtidas na forma de coleta total ou spot de urina. Na análise das relações NU:creatinina e NUreia:creatinina, observou-se que os horários das amostras obtidas às 4, 8, 12, 16 e 20 horas, foram similares (P>0,05) independentemente do método de amostragem. Entretanto, no horário da meia noite (amostragem 20h00-24h00, coleta total/0 hora, coleta spot de urina), observou-se variação na excreção de NU (inclinação, P=0,03) e de NUreia (inclinação, P=0,01; e intercepto, P=0,03), indicando que coletas spot de urina realizadas neste horário, não representariam a excreção de CN ao longo do período de 24 horas. Conclui- se que a excreção de creatinina é constante em 24h e estima adequadamente o volume urinário em bovinos mantidos em pastejo; e que uma única amostra spot de urina obtida no pasto, em qualquer horário do dia, pode ser usada para estimar a excreção de derivados de purinas. Para a estimativa da excreção de CN na urina são necessárias duas amostras spot de urina, uma quatro horas antes e outra quatro após a suplementação, em bovinos em pastejo. Os principais resultados do capítulo 2 foram que, a recuperação da creatinina foi constante (P>0,05) até o décimo quinto dia de armazenamento, independente da temperatura utilizada. A partir do 30o dia de armazenamento houve efeito de tempo e/ou temperatura (P<0,05) na recuperação de creatinina na urina de bovinos. As amostras armazenadas em temperatura ambiente e a 4oC apresentaram aumento na concentração da creatinina relativa com o passar dos dias (P<0,05). As amostras congeladas (-20oC e a -40oC) mantiveram a recuperação constante (P>0,05). A adição de creatina na urina causou aumento (P<0,05) nas concentrações de creatinina nas amostras armazenadas a temperatura ambiente e em refrigeração, a partir de 30 dias de armazenamento. Nas amostras armazenadas em temperaturas de congelamento, não houve alteração na concentração de creatinina (P>0,05). Amostras de urina podem ser armazenadas em qualquer temperatura estudada até quinze dias após a coleta para determinação da concentração de creatinina. Amostras que necessitem tempos de armazenamentos superiores a quinze dias devem ser congeladas a -20oC ou -40oC.
Aimed to evaluate the creatinine excretion to validate the urine spot sampling technique, as well as the excretions of purine derivatives (PD) and nitrogen compounds (NC) and their relationship with creatinine in Nelore heifers supplemented on pasture (Chapter 1); Were also aimed evaluate the recovery of creatinine as a function of time and different storage temperatures (Chapter 2). The experiment related to Chapter 1 were conducted in the beef cattle department of the Federal University of Viçosa/MG, using five Nelore heifers with mean body weight (BW) of 400 ± 15 kg, distributed in 5x5 Latin square. The five experimental treatments were based on protein-energy supplementation (concentrate with 22% crude protein in dry matter (DM) bases) offered based on BW (0, 3, 6, 9 and 12 g/kg BW (BW0, BW3, BW6, BW9 and BW12, respectively)). Each experimental period had a duration of 16 days, 12d to diet adaptation and four to sampling of urine, feces, blood and ruminal fluid. The total collection of urine and spot of feces sample was performed in three days, from 0:00-4:00, 4:00-8:00, 8:00-12:00, 12:00-16:00, 16:00- 20:00 and 20:00-24:00. Sampling spot of urine was performed for 24 hours, as well as the collection of ruminal fluid and blood at the times of 0, 4, 8, 12, 16, 20 hours. For total urine collection, a Folley no26 probe was used, coupled with a polyethylene hose that carried the urine to a closed urine collection bag, which was emptied every four hours. Sampling of the urine was performed every 4 hours, at the same times as described for blood sampling, by measuring the volume and taking two samples, one diluted with 0.036N H2SO4 and one undiluted. To determine fecal excretion, titanium dioxide, supplied in the total daily amount of 15 g, was used between days 8th and 16th of each period. In order to estimate pasture consumption, indigestible neutral detergent fiber (iNDF) was used as the internal marker. Pasture was collected by the square technique to determine the potentially digestible DM (pdDM) on the third day of each experimental period. On the 13th and 16th days of each period, manual grazing simulation was performed to estimate the composition of the pasture. In the urine samples, the concentrations of creatinine, total urinary nitrogen (UN), urea (UreaN), uric acid (UA) and allantoin (AL) were determined. Statistical analysis was performed using SAS's 9.4 Proc Mixed statistical software. The evaluation of the adequacy of the best form of urine collection was performed using the square root of the mean square of the prediction error (MSPE) among the urine samples obtained through spot sampling. The experiment, referring to Chapter 2, was carried out at the Animal Science Department of the UFV. Urine of twenty-five animals, ten from the Nelore and fifteen from the Holstein, were used. Urine samples (10 from Nelore and 10 from Holstein) were diluted in 0.036N H2SO4, fractionated and stored at room temperature, cooled (4°C) and frozen (-20°C and -40°C), being analyzed different days after sampling (1, 3, 7, 10, 15, 30, 45, 60, 90, 120, 150 days). Immediately after sampling, the urine was diluted, and its pH corrected to less than 3, and the urine was analyzed, giving a result used as a reference value of the creatinine concentration in the sample. This reference value was used as a divider of the creatinine values obtained on the days of the analysis, per sample, obtaining the relative creatinine value, which allows the observation of increase or decrease in creatinine concentration over time. To evaluate the conversion of creatine to creatinine in the urine of cattle, urine from five Holstein cows was used. These urines were also diluted and had their pH corrected below 3. To evaluate the effect of adding creatine to the urine, creatine solution (concentrations of 20, 40 and 60 mg/dL) was added to eppendorf containing diluted urine. These urines were analyzed on different days after sampling (1, 3, 7, 15, 30 and 45 days), being stored at the same temperatures described previously. In Chapter 1, a positive linear effect (P=0.001) was observed on the total DM intake due to the increase in the amount of supplementation provided to the animals. However, a quadratic effect (P=0.018) was observed on DM intake from pasture. Intake of N differed among treatments (P<0.05), caused by increased supplement intake, which allowed an increase (P=0.001) on the intake of N NC. The supply of supplementation influenced the ruminal ammoniacal N concentration (P<0.05). Serum urea N concentration (SUN) was affected (P<0.05) by the supply of concentrate in the 24-hour period, once the BW0 treatment did not show a variation in the SUN (P>0.05), as a function absence of supplementation. The creatinine excretion daily was 23.01 ± 0.19 (22.82 - 23.2) mg/kgBW. Excretions of AL, UA and PD, in mmol, were influenced by treatments (P=0.002, P=0.004, P=0.003, respectively). Microbial N synthesis (NM) was influenced, as well as the excretions of PD (P=0.001) by the treatments. The ratios between AL, UA and PD with creatinine were not influenced by collection days, collection periods, treatments and their interactions (P>0.05), with an average ratios of 1.36 for AL:creatinine, 0.121 for UA:creatinine and 1.48 for PD:creatinine. In addition to the treatment effect on UN and UreaN excretion, urine excretion of NC was also influenced (P<0.05) by collection periods. The UN:creatinine and UreaN:creatinine ratios showed no treatment effect (P>0.05), days and collection periods. The comparative evaluation of creatinine excretion observed in the samples obtained from the total collection of urine, sampling every 4 hours per 3 days, with the urine spot samples obtained at punctual moments (at 12, 16, 20, 0, 4 and 8 hours), showed no difference (P>0.05) between the two techniques of sampling. The observation of AL:creatinine and UA:creatinine of the two methods evaluated in this study allowed the observation that there was no variation (P>0.05) between the samples obtained in the form of total collection or urine spot. The analysis of the UN:creatinine and UreaN:creatinine ratios, it was observed that the sample times obtained at 4, 8, 12, 16 and 20 hours were similar (P>0.05) regardless of the sampling method. However, at midnight (sampling 20h00-24h00, total collection/0h, urine spot collection), there was variation in the excretion of UN (slope, P=0.03) and UreiaN (slope, P=0.01, and intercept, P=0.03), indicating that urine spot collections performed at this time would not represent NC excretion over the 24-hour period. Concluded that creatinine excretion is constant in 24 hours and adequately estimates the urinary volume in beef cattle kept in pasture; and that a single urine spot sample obtained in the pasture, at any time of the day, can be used to estimate the purine derivatives excretion. However, two urine spot samples, one obtained four hours before and other four hours after supplementation, are required for the estimation of excretion of CN in urine in grazing cattle. The main results of Chapter 2 were that the creatinine recovery was constant (P>0.05) until the 15th day of storage, regardless of the temperature used. From the 30th day of storage there was a time and/or temperature effect (P<0.05) on the recovery of creatinine in bovine urine. Samples stored at room temperature and at 4oC showed an increase in relative creatinine concentration with the passage of days (P<0.05). Frozen samples (-20oC and -40oC) maintained the constant recovery (P>0.05). The addition of creatine in the urine caused an increase (P<0.05) on creatinine recovery in the samples stored at room temperature and in refrigeration, after 30 days of storage. In samples stored at freezing temperatures, there was no change in creatinine recovery (P>0.05). Urine samples can be stored at any temperature evaluated to 15 days after collection for determination of creatinine concentration. Samples requiring storage times greater than 15 days should be frozen at - 20°C or -40°C.

Tese de Doutorado apresentada ao Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde da Universidade do Extremo Sul Catarinense – UNESC, para obtenção do título de Doutora em Ciências da Saúde.
The urine disease maple syrup (MSUD) is a metabolic disorder of autosomal recessive pattern and, if untreated, causes severe neurological impairments. The pathophysiology of neurological deterioration in DXB is poorly understood; however radiological changes are well characterized. The aim of this study was to investigate whether the branched chain amino acids (BCAA) interfere in the regulation of immune and inflammatory processes in the central nervous system and cause brain swelling and effects of responsible mechanisms, and to evaluate the effects of dexamethasone administration on changes caused by the BCAA. The results demonstrate that acute administration of BCAA in infants rats decreased IL-10 levels and increased IL-6 levels in the hippocampus, cerebral cortex, while there was increase in IL-1β levels of IL-6 and TNF-α. The BCAA administration in young rats did not alter cytokine levels in analyzed brain structures. On the other hand, after chronic administration there was decrease in IL-1β and IL-6 in the cerebral cortex, the hippocampus while there was a decrease in the levels of IL-6, IL-10 and IFN-γ. Therefore, we evaluated the effect of acute administration of BCAA on the water content, the activity of the Na +, K + -ATPase and the permeability of the blood-brain barrier (BBB) in the hippocampus and cerebral cortex of rats infants, and the influence of dexamethasone administration. The results demonstrate that acute administration of cerebral edema caused BCAA, with the increase of water content in the brain. It was also observed a decrease in activity of the Na +, K + -ATPase and an increase in the content of sodium fluorescein, suggesting increased BBB permeability to small molecules, in the hippocampus and cerebral cortex. The dexamethasone administration is capable of preventing cerebral edema, inhibition activity of the Na +, K + -ATPase and was able to maintain the sodium fluorescein content similar to the control group in these structures. Finally, we evaluated the effects of treatment with dexamethasone on the levels of pro inflammatory cytokines and anti-rat infants undergoing acute administration of BCAA. The results demonstrated that treatment with dexamethasone was able to prevent the increase in IL-1β and TNF-α levels in the cerebral cortex and increased IL-6 levels in the hippocampus and cerebral cortex. However, treatment with dexamethasone was unable to prevent a decrease in IL-10 levels caused by administration of BCAA. In conclusion, the results showed that the BCAA induce changes in the immune system in the brain of rats subjected to the experimental model. Coupled with inflammation installed on animals it has been demonstrated that the BCAA cause cerebral edema in rats infants, and these effects may be directly related to inhibition of Na+, K+-ATPase and with increasing BBB permeability, furthermore, it was observed that administration of dexamethasone reversed these effects.
A doença da urina do xarope do bordo (DXB) é um distúrbio metabólico de caráter autossômico recessivo e, quando não tratada, ocasiona graves sequelas neurológicas. A fisiopatologia da deterioração neurológica na DXB é pouco compreendida; porem as alterações radiológicas estão bem caracterizadas. O objetivo deste trabalho foi investigar se os aminoácidos de cadeia ramificada (AACR) interferem na regulação de processos imunológicos e inflamatórios no sistema nervoso central e causam edema cerebral bem como avaliar os mecanismos responsáveis por esse efeito e efeitos da administração de dexametasona sobre as alterações provocadas pelos AACR. Os resultados demonstraram que a administração aguda de AACR em ratos infantes diminuiu os níveis de IL-10 e aumentou os níveis de IL-6 no hipocampo, enquanto que no córtex cerebral houve aumento nos níveis de IL-1β, IL-6 e TNF-α. A administração de AACR em ratos jovens não alterou os níveis de citocinas nas estruturas cerebrais analisadas. Por outro lado, após a administração crônica houve diminuição nos níveis de IL-1β e IL-6 no córtex cerebral, enquanto que no hipocampo observou-se diminuição nos níveis de IL-6, IL-10 e IFN-γ. Logo, foi avaliado o efeito da administração aguda de AACR sobre o conteúdo de água, atividade da Na+,K+-ATPase e a permeabilidade da barreira hematoencefálica (BHE) no hipocampo e córtex cerebral de ratos infantes, e a influência da administração de dexametasona. Os resultados demonstraram que a administração aguda de AACR causou edema cerebral observado pelo aumento do teor de água no cérebro. Observou-se também uma diminuição na atividade da Na+,K+-ATPase e um aumento no conteúdo de fluoresceína de sódio, sugerindo aumento da permeabilidade da BHE a moléculas pequenas, no hipocampo e córtex cerebral. A administração de dexametrasona foi capaz de prevenir o edema cerebral, a inibição da atividade da Na+,K+-ATPase e foi capaz de manter o conteúdo de fluoresceína de sódio similar ao grupo controle nessas estruturas. Por fim, avaliou-se os efeitos do tratamento com dexametasona sobre os níveis de citocinas pró e anti-inflamatórias em ratos infantes submetidos à administração aguda de AACR. Os resultados demonstraram que o tratamento com dexametasona foi capaz de impedir o aumento nos níveis de IL-1β e TNF-α no córtex cerebral e aumentar os níveis de IL-6 no hipocampo e córtex cerebral. Entretanto, o tratamento com dexametasona não foi capaz de impedir a diminuição nos níveis de IL-10 causada pela administração de AACR. Em conclusão, os resultados demonstraram que os AACR induzem alterações no sistema imune no cérebro de ratos submetidos ao modelo experimental. Aliado ao processo inflamatório instalado nos animais demonstrou-se que os AACR causam edema cerebral em ratos infantes, e esses efeitos podem estar diretamente relacionados com a inibição da atividade da Na+,K+-ATPase e com o aumento da permeabilidade da BHE, além disso, foi observado que a administração de dexametasona reverteu estes efeitos.

Orientador: Thais Borges César
Coorientador:Paulo Inácio da Costa
Banca: Neuza Mariko Aymoto Hassimotto
Banca: Alceu Afonso Jordão Jr.
Banca: Amanda Martins Baviera
Banca: Célia Maria de Sylos
Resumo: As polimetoxiflavonas (PMF) são uma subclasse do grupo dos flavonoides cítricos, as quais são conhecidas devido à ação antioxidante, anti-inflamatória, hipolipidêmica e anticâncer; além de elevada biodisponibilidade. Estudos recentes demonstram que os metabólitos gerados a partir das PMF são biologicamente ativos, e possuem efeitos benéficos superiores aos compostos originais. Objetivo: Este trabalho teve por objetivo, isolar e identificar metabólitos das PMF a partir da urina de ratos, e avaliar sua atividade biológica sobre a proteína transferidora de triglicerídeo microssomal (MTP) em células Huh7.5. Métodos: Trinta ratos Wistar adultos foram separados em 3 grupos (n = 10) e administrados com 200 mg/kg/dia de tangeretina (TAN), nobiletina (NOB) ou heptametoxiflavona (HMF), durante 15 dias. Os metabólitos foram extraídos da urina, isolados por cromatografia líquida preparativa, e identificados por cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC-ESI-MS) acoplada ao detector de UV (PDA). A ação dos metabólitos sobre a atividade da MTP foi avaliada por método fluorométrico. Resultados: Foram isolados metabólitos glucuronídeos com m/z [M+H]+ 565 amu (unidade de massa atômica), 551 amu, 535 amu, 521 amu, 505 amu; além de metabólitos hidroxilados com m/z [M+H]+ 419 amu, 405 amu, 389 amu, 375 amu, 359 amu, 329 amu, 315 amu. Os metabólitos TAN-4'-glucuronídeo (TAN-G1), TAN-dihidroxi-glucuronídeo (TAN-G2), TAN-4'-monohidroxilada (TAN-OH1), TAN-monohidroxilada (TAN-OH2), NOB-glucuroní... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo)
Abstract: The polymethoxylated flavones (PMF) are a subclass of flavonoids citrus, which are known because of their antioxidant, anti-inflammatory, hypolipidemic and anticancer properties; besides the high bioavailability that they present. Recent studies show that the metabolites generated from the PMF are biologically active and have beneficial effects greater than the original compounds. Objective: This study aimed to isolate and identify metabolites of PMF from the urine of rats, and evaluate its biological activity upon microsomal triglyceride transfer protein (MTP) in Huh7.5 cells. Methods: Thirty adult male Wistar rats were separated into 3 groups (n = 10) and fed with 200 mg / kg / day with tangeretin (TAN), nobiletina (NOB) or heptametoxiflavona (HMF) for 15 days. The metabolites were extracted from urine, isolated by preparative liquid chromatography and identified by high-performance liquid chromatography (HPLC-ESI-MS) coupled with UV detector (PDA). The action of the metabolites on the MTP activity was evaluated by fluorometric method. Results: We isolated glucuronide metabolites with m / z [M + H] + 565 amu (atomic mass unit), 551 amu, 535 amu, 521 amu, 505 amu; addition to the hydroxilated metabolites with m / z [M + H] + 419 amu, 405 amu, 389 amu, 375 amu, 359 amu, 329 amu, 315 amu. The TAN-4'-glucuronide metabolites (TAN-G1), TAN-dihydroxyglucuronide (TAN-G2), TAN-4'-monohidroxilada (TAN-OH1), TAN-monohydroxylada (TAN-OH2), NOB-glucuronide (NOB-G) NOB-monohydroxylada (NOB-OH), HMFmonohydroxylada (HMF-OH) have been identified and evaluated in in vitro assay. TAN-OH1 and NOB-OH reduced the MTP activity, and HMF-OH showed higher effect compared to its parent compound. PMF obtained from dry extract of orange peel, administered in rats, showed no effect on the MTP. Conclusion: These data show viable methods for isolation of the... (Complete abstract click electronic access below)
Doutor

Dissertação de Mestrado apresentada ao Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde da Universidade do Extremo Sul Catarinense para obtenção do título de Mestre em Ciências da Saúde.
A doença da urina do xarope do bordo (DXB) é um distúrbio metabólico hereditário em que ocorre o acúmulo dos aminoácidos de cadeia ramificada (AACR) leucina, isoleucina e valina, e de seus α-cetoácidos de cadeia ramificada (CACR) α-cetoisocaproico, α-cetometilvalérico e α-cetoisovalérico. Pacientes com DXB podem apresentar, entre outros sintomas, prejuízo neurológico. No entanto, a fisiopatologia subjacente a este dano cerebral permanece pouco esclarecida. Muitas estratégias terapêuticas, incluindo antioxidantes, são estudadas na tentativa de contribuir para o tratamento destes pacientes. Neste contexto, os ácidos graxos (AG) da família ômega-3, conhecidos por atuarem na estrutura e manutenção do sistema nervoso central, estão sendo amplamente estudados e recomendados para gestantes. Adicionalmente ao seu papel estrutural, estes AG são utilizados por atuarem como anti-inflamatórios e antioxidantes. O objetivo do presente estudo foi investigar, mediante dois protocolos de administração, os efeitos do ômega-3 sobre o dano ao DNA, através do ensaio cometa, em hipocampo, estriado e córtex cerebral da prole de ratos com DXB. No primeiro protocolo, investigou-se a suplementação materna com ômega-3 (0,8 g/kg peso corporal) durante o período pré-natal e seus efeitos sobre a prole. No segundo protocolo, investigou-se o tratamento de ratos infantes com ômega-3 (0,1 g/kg peso corporal) no período pós-natal. O modelo crônico de DXB aplicado à prole foi induzido quimicamente pelo pool de AACR (15,8 μL/g peso corporal). Os resultados mostraram que a suplementação materna com ômega-3 durante o período pré-natal não preveniu os danos causados ao DNA no cérebro da prole com DXB. Por outro lado, quando o ômega-3 foi utilizado como tratamento pós-natal, esse reverteu os danos ao DNA nas estruturas cerebrais hipocampo, estriado e córtex dos ratos com DXB. De acordo com estes resultados, pode-se concluir que os metabólitos acumulados na DXB causam dano ao DNA e que o ômega-3 apresentou efeito protetor quando administrado no período pós-natal. Assim, sugere-se que o ômega-3 possa ser utilizado como um possível adjuvante ao tratamento da DXB.

As emissões de gases de efeito estufa (GEE) para atmosfera representam um dos principais desafios da população mundial atualmente. A pecuária contribui para as emissões antrópicas principalmente de metano (CH4) e óxido nitroso (N2O) à tmosfera. O Brasil possui o maior rebanho bovino comercial do mundo e assim, possui importante participação nas emissões destes gases. As emissões de CH4 são provenientes principalmente da fermentação entérica e da deposição de fezes nos solos sob pastagem,.as emissões de N2O são provenientes da urina. Os fatores de emissão utilizados para quantificar as emissões na pecuária foram desenvolvidos pelo Intergovernamental Panel of Climate Change baseados em pesquisas realizadas em regiões de clima temperado. Dessa maneira faz-se necessária a determinação de fatores específicos as condições tropicais brasileiras possibilitando exatidão na quantificação das emissões de GEE. O presente trabalho teve como objetivo quantificar as emissões de CH4 provenientes das fezes e de N2O provenientes da urina de bovinos de corte depositadas em solos sob pastagens, assim como verificar a interferência de diferentes manejos dos animais, fatores climáticos e fatores intrínsecos aos dejetos nestas emissões. A pesquisa foi desenvolvida em propriedade privada (Agropecuária Nova Vida, localizada em Ariquemes, RO), produtora de bovinos de corte em sistemas de manejo à pasto e emi-confinamento. As emissões de CH4 e N2O foram quantificadas nos dejetos provenientes dos animais à pasto e em semi-confinamento, em duas áreas experimentais: pasto sem e com cobertura protegendo as amostras da insolação direta e precipitação pluvial. Durante o período de coleta dos gases (10 dias) foram verificados variações na umidade, temperatura e teor de carbono nas fezes, umidade e teor de nitrogênio no solo com adição de urina em diferentes profundidades (0-3 cm, 3-6 cm, 6-10 cm, 10-15 cm, 15-20 cm). Adicionalmente, foram quantificadas as emissões de CH4 e N2O provenientes do solo sem deposição de dejetos, como tratamento testemunha. Com relação às variáveis climáticas, verificou-se interação significativa da umidade das fezes com a produção de CH4 no bolo fecal. A produção de N2O é extremamente variável, apresentando variação temporal e sazonal. O efeito da dieta na produção dos gases nos dejetos não pode ser avaliado devido a problemas metodológicos. Os fatores de emissão encontrados foram: 0,6 kg C-CH4 animal-1 ano -1 e 0,05 kg N-N2O kg N aplicado-1, para fezes e urina depositadas no solo, respectivamente. O balanço das emissões de GEE na propriedade foi calculado considerando todas as fontes de emissão de CH4 e N2O e o estoque de C nas pastagens. A emissão líquida determinada foi de 5.350 Mg C-equivalente na propriedade no ano de 2009. Limitações metodológicas proporcionaram a geração de resultados considerados parciais. Futuras pesquisas são sugeridas para que o conhecimento das emissões de CH4 provenientes das fezes e N2O da urina de bovinos em clima tropical seja consolidado
Global warming and greenhouse gases (GHG) emissions to the atmosphere represent one of the major challenges to modern society. Livestock production contributes mainly to methane (CH4) and nitrous oxide (N2O) emissions. Brazil has the largest commercial cattle herd in the world and accordingly contributes a significant amount to global emissions levels of these gases. Methane emissions are mainly from enteric fermentation and feces deposition on soils under pastures. Nitrous oxide emissions occur from urine deposition on soils under pastures. Emission factors that are used to quantify livestock emissions were defined by the Intergovernmental Panel on Climate Change and were developed based on studies conducted in temperate regions. However, it is necessary to determine specific emission factors that reflect the reality of Brazilian tropical conditions allowing accurate GHG emissions quantification. This study aims to quantify CH4 emissions from feces and N2O from urine of beef cattle deposited on soils under pastures. It also intends to verify the interference of different animal managements, weather and intrinsic manure factors on emissions levels. The research was conducted on a private property (Agropecuária Nova Vida) located in Ariquemes, RO. The Farms main activity is beef cattle production based on grazing and semi-confinement systems. Emissions of CH4 and N2O are quantified on two experimental areas: pasture without coverage and pastures with coverage protecting the samples from direct sunlight and rainfall. In addition to gases sampling (10 days) on feces moisture, temperature and carbon content are monitored. Moisture and nitrogen content in the soil with urine deposition are monitored at different depths (0-3 cm, 3-6 cm, 6-10 cm, 10-15 cm, 15-20 cm). Additionally, we have quantified CH4 and N2O emissions from soil without manure deposition as a control treatment. We have found statistically different emissions levels between soils with and without manure. Moisture on feces had a statistical significant effect on CH4 emissions from feces. Nitrous oxide production is extremely variable with temporal and seasonal variations. The effect of diet on gases production in manure is not evaluated due to methodological problems. The estimations for emission factors are: 0.6 kg CH4-C animal-1 year-1 and 0.05 kg N2O-N kg N-1 for feces and urine deposited in the soil, respectively. The GHG balance of the whole farm is calculated considering all sources of emission and the C stocks in pastures. The annual net emissions for the farm are determined as 5350 Mg C equivalent. Methodological limitations provided partial results. Future research is suggested to achieve better estimations on CH4 and N2O emissions from beef cattle feces and urine in tropical climate

La spécialisation des parasites vis-à-vis de leur(s) hôte(s) et la formation de races d'hôtes sont des processus évolutifs clés dans le maintien et l'émergence de la diversité au sein des populations de parasites. Notre objectif était d'étudier ces processus chez Ixodes uriae, une tique d'oiseaux marins présentant une vaste distribution géographique et une large diversité d'hôtes, afin de mieux comprendre le rôle relatif des contraintes liées à l'hôte et aux facteurs géographiques dans l'évolution et la diversification de ce parasite. Cette question a été abordée à travers différentes approches réunissant des analyses de génétique des populations et de phylogéographie, des analyses morphologiques et une approche expérimentale sur le terrain. Les résultats obtenus montrent que le facteur spatial joue un rôle important dans la diversification d'I. uriae puisque quatre grands groupes géographiques génétiquement isolés ont été identifiés. L'évolution de races d'hôtes est également un processus récurrent de l'évolution d'I. uriae, même si la divergence entre races est plus ou moins marquée d'une région à l'autre. L'évolution des races semble impliquer une préférence d'hôte chez la tique ainsi que des contraintes adaptatives liées à l'hôte, de type mécanique ou physiologique (e.g., bec des oiseaux, digestion du sang, réponse immunitaire). L'ensemble des résultats est cohérent avec la notion d'évolution en mosaïque géographique qui prédit que les interactions entre espèces peuvent évoluer de manière différente dans un contexte spatial hétérogène ; ce qui souligne l'importance des caractéristiques écologiques des hôtes dans la diversification de la tique I. uriae. D'après nos résultats et ceux de différents collègues, la spécialisation d'hôte pourrait s'avérer être un processus commun chez les tiques et donc avoir de profondes implications épidémiologiques et évolutives pour les pathogènes qu'elles transmettent
Host specialization and host-race formation may be key processes in maintaining and generating diversity within parasite populations. The objective of this thesis was to analyze these processes in the seabird tick Ixodes uriae, a common and widely distributed ectoparasite that exploits a great diversity of seabird host species, to better understand the relative role of host-related constraints and geographic factors in its evolution and diversification. I addressed this question using different approaches, including population genetic and phylogeographic analyses, morphometry and field experimentation. Results show that the spatial factor is a key component in shaping the diversity of I. uriae, as four geographical genetically isolated groups exist within the global distribution of this parasite. The formation of host races is also a general process in the evolution of I. uriae, but has evolved to different degrees in different geographical regions. Host preference in the tick, along with mechanical or physiological host-related constraints (e.g., beak morphology, blood digestion, immune response) are likely involved in the evolution of I. uriae host races. Overall, results fall in line with the geographic mosaic theory of evolution that predicts that the outcome of species interactions can vary across geographic landscapes, highlighting the role played by ecological characteristics of the host in the diversification of I. uriae. Given results to date, host specialization may be a common process in tick systems and thus may have strong epidemiological and evolutionary implications for the pathogens that they transmit

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Urinary infection is a multifactorial disease, very common in swine herds worldwide, is considered a major cause of reproductive failure that adversely affect the productivity levels of swine. In control of this infection has been frequently used acidifiers the urine. The present study was to evaluate the action of two acidifying, citric acid and ammonium chloride, used to control urinary tract infection, on the physico-chemical and microbiological tests of urine, pH, color and consistency of the feces of swine females in production. We used 48 pregnant females divided into six groups: control (-): females without urinary infection; control (+): females with infection, acid (-): females without infection receiving citric acid, acid (+): infected females receiving citric acid, chloride (-): females without infection receiving ammonium chloride, chloride (+): females with infection receiving ammonium chloride. Were collected samples of urine and feces on days zero, seven and 15 of treatment to perform on the physical-chemical and microbiological analysis. The urinary variables studied were: color, odor, pH, density, protein, sediment and bacterial count. The feces samples were evaluated for pH, color and consistency. The results showed that ammonium chloride was able to reduce the urinary pH, but did not affect the other urinary parameters. Since citric acid showed effect on the color of the urine with a tendency to yellow. The citric acid reduced the bacteriology count. The two acidifiers didn t can reduce the bacterial count, demonstrating that they did not have a bactericidal or bacteriostatic action. The pH of feces increased after supplementation with citric acid and ammonium chloride
A infecção urinária é uma doença multifatorial, muito freqüente nos rebanhos suínos no mundo todo, sendo considerada uma das principais causas de falhas reprodutivas que influenciam negativamente os índices de produtividade da suinocultura. No controle desta infecção tem sido freqüentemente utilizado os acidificantes urinários. O presente trabalho foi realizado com o objetivo de avaliar a ação de dois acidificantes, ácido cítrico e cloreto de amônio, usados para controlar a infecção urinária, sobre os parâmetros físico-químicos e microbiológicos da urina, pH, coloração e consistência das fezes de matrizes suínas em produção. Foram utilizadas 48 fêmeas em gestação distribuídas em seis grupos: controle (-): fêmeas sem infecção urinária; controle (+): fêmeas com infecção; ácido (-): fêmeas sem infecção recebendo ácido cítrico; ácido (+): fêmeas com infecção recebendo ácido cítrico; cloreto (-): fêmeas sem infecção recebendo cloreto de amônio; cloreto (+): fêmeas com infecção recebendo cloreto de amônio. Foram coletadas amostras de urina e fezes nos dias zero, sete e 15 do tratamento para realização das análises físico-químicas e microbiológicas. Aos 21 dias foram coletadas amostras de urina para verificar se permanecia o efeito dos acidificantes. As variáveis urinárias estudadas foram: cor, odor, aspecto, pH, densidade, proteína, sedimento e contagem bacteriana. Nas amostras de fezes foram avaliados o pH, a coloração e a consistência. Os resultados demonstraram que o cloreto de amônio foi capaz de reduzir o pH, porém não alterou os demais parâmetros urinários. Já o ácido cítrico mostrou efeito sobre a coloração da urina com tendência para o amarelo claro. O ácido cítrico foi o único acidificante capaz de reduzir a contagem bacteriana. O pH das fezes aumentou após a suplementação com ácido cítrico e cloreto de amônio

Dissertação de Mestrado apresentada ao Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, da Universidade do extremo Sul Catarinense, UNESC, para obtenção do título de Mestre em Ciências da Saúde.
A doença da Urina do Xarope de Bordo (DXB) é uma doença hereditária associada a uma alteração no metabolismo dos aminoácidos de cadeia ramificada, acarretando um acúmulo desses aminoácidos (leucina, valina e isoleucina) e seus derivados, α-cetoisocaproico, α-cetometilvalérico e α-cetoisovalérico. Esse acúmulo é prejudicial ao desenvolvimento do tecido nervoso. A aparecimento da doença se dá, normalmente, logo após o nascimento, sendo de difícil diagnóstico e muitas vezes fatal. Os pacientes que sobrevivem, normalmente apresentam danos no neurodesenvolvimento. O tratamento da DXB consiste, basicamente, em uma dieta restritiva de aminoácidos de cadeia ramificada, muitas vezes complementada com fórmulas dietéticas pobres em ácidos graxos ômega-3. A suplementação do ácido graxo ômega-3 vem sendo amplamente discutida de forma terapêutica, pois minimizaria os danos neurológicos ao atuar no desenvolvimento e manutenção do sistema nervoso central. O objetivo desse estudo foi investigar os efeitos da suplementação com ômega-3 sobre a sobre a atividade dos complexos da cadeia transportadora de elétrons e da enzima creatina quinase (CK) em cérebro (córtex cerebral, estriado e hipocampo) de animais submetidos a um modelo experimental de DXB, mediante dois protocolos de administração. O primeiro protocolo baseou-se na suplementação materna com ômega-3 (0,8 g/kg peso corporal) durante o período pré-natal e seus efeitos sobre os ratos infantes. No segundo protocolo, foi investigado a suplementação da prole com ômega-3 (0,1 g/kg peso corporal) no período pós-natal. O modelo crônico de DXB aplicado à prole foi induzido quimicamente pelo pool de AACR (15,8 μL/g peso corporal). Os resultados mostraram que a suplementação materna com ômega-3 durante o período pré-natal não modificou de forma estatisticamente significativa as atividades dos complexos da cadeia transportadora de elétrons e a atividade da enzima creatina quinase (CK) no cérebro da prole com DXB. Além disso, a suplementação dos ratos infantes, também não provocou alterações significativas nas atividades dos complexos da cadeia de transporte de elétrons nas estruturas cerebrais avaliadas. Entretanto, a suplementação com ômega-3 nos ratos infantes apresentou alterações estatisticamente significativas na atividade da CK no córtex cerebral dos animais. Esses resultados reforçam a necessidade de estudos adicionais para se avaliar a efetividade da suplementação com ácidos graxos ômega 3, nos períodos pré e pós-natal e determinar sua eficácia sobre os complexos da cadeia de transporte de elétrons e sobre a enzima CK.

Einleitung: Die Leptospirose ist eine der weltweit bedeutendsten Zoonosen. Durch den häufig asymptomatischen oder unspezifischen Krankheitsverlauf, wird von einer hohen Dunkelziffer ausgegangen. Menschen können sich über direkten Tierkontakt oder indirekten Kontakt mit dem Urin infizierter Tiere, zum Beispiel über kontaminierte Gewässer oder Erde, anstecken. Die Infektion erfolgt dabei über den Eintritt des Erregers in Schleimhäute oder Hautwunden. Ziel der Untersuchungen: Obwohl die Überlebenszeit von Leptospiren in der Umwelt einen entscheidenden Einfluss auf das Infektionsrisiko des Menschen hat, wurden bisher nur sehr wenige Untersuchungen dazu durchgeführt. Diese konzentrierten sich dabei vor allem auf das Überleben der Erreger in Erde oder Wasser. Daher war es Ziel dieser Arbeit die Umweltstabilität eines häufig in Deutschland gefundenen Leptospirenserovars unter verschiedenen Umweltbedingungen zu untersuchen. Zusätzlich zu diesen Untersuchungen war es Ziel dieser Arbeit, durch die Veröffentlichung eines Übersichtsartikels über die Leptospirose Ärzte in Deutschland für diese häufig unerkannt bleibende Erkrankung zu sensibilisieren. Material und Methoden: Ein jahrelang an Kulturmedium adaptierter Labor- und ein erst vor 3 Jahren isolierter Feldstamm von Leptospira kirschneri Serovar Grippotyphosa wurden auf ihr Überleben in der Umwelt untersucht. Es wurde ihre Widerstandsfähigkeit gegenüber verschiedenen Umwelteinflüssen, wie z.B. Tierurin als umgebendes Medium bei verschiedenen Temperaturen oder auch der Einfluss einer Trocknung, untersucht. Nachdem die Leptospiren den Umwelteinflüssen für unterschiedliche Zeitspannen ausgesetzt waren, wurde versucht sie in EMJH-Medium wieder zu kultivieren. Während einer Inkubationszeit von mindestens 28 Tagen bei 29 °C wurden diese Kulturen wöchentlich unter dem Dunkelfeldmikroskop auf das Vorhandensein motiler Leptospiren untersucht. Zusätzlich wurde durch Kultivierungsversuche in EMJH-Medium das Überleben der Leptospiren in einem Wasserstrom mit einer definierten Fließgeschwindigkeit und ihre Verbreitung in diesem Strom mittels real-time PCR untersucht. Alle Versuche wurden im Dreifachansatz durchgeführt. Statistische Untersuchungen wurden mittels eines zweiseitigen Mann-Whitney-U Tests (Fehler 1. Art α = 0,05) durchgeführt. Ergebnisse: Die beiden untersuchten Stämme von L. grippotyphosa überlebten nicht in unverdünntem Tierurin. In verdünntem Tierurin überlebten die Stämme, je nach Temperatur und Verdünnungsmedium, zwischen 1 - 72 Stunden (Laborstamm) und 4 - 24 Stunden (Feldstamm). Beide Stämme überlebten signifikant länger bei 15 °C als bei 37 °C (p < 0,001, bzw. p = 0,041). Der Laborstamm überlebte signifikant länger in verdünntem Rindereurin (max. 72 h bei 15 °C) als in verdünntem Hundeurin (max. 4 h; p = 0,027). Im Gegensatz dazu, überlebte der Feldstamm signifikant länger in Hundeurin (max. 24 h bei 15 °C) als in Rinderurin (max. 4 h; p = 0,028). Das vollständige Trocknen auf einer festen Oberfläche war bei Temperaturen zwischen 15 °C und 37 °C für beide Stämme letal. Jedoch war, unabhängig von der untersuchten Temperatur, eine halbe Stunde vor der vollständigen Trocknung eine Kultivierung der Leptospira spp. noch möglich. In einem Wasserstrom konnten sich die Leptospiren aufgrund ihrer Eigenbewegung schneller und langsamer als die Durchschnittsgeschwindigkeit (0,01 m / s) des Wassers bewegen, überlebten jedoch die mechanischen Schäden während des Schlauchdurchflusses nicht. Schlussfolgerungen: Das Überleben von Leptospira spp. ist offensichtlich von vielen Faktoren abhängig. Eine schnelle Verdünnung nach der Ausscheidung mit dem Urin scheint dabei essentiell zu sein. Niedrigere Temperaturen sowie eine feuchte Umgebung verbessern ihre Widerstandsfähigkeit gegen schädliche Einflüsse, während Trockenheit oder mechanische Schädigung ihr Überleben nicht ermöglichen. Wegen der großen Bedeutung der leptospiralen Überlebenszeit in der Umwelt für das Infektionsrisiko von Mensch und Tier sind weitere Untersuchungen auf diesem Forschungsgebiet in der Zukunft nötig.:1. Einleitung 2. Literaturübersicht 2.1 Die Geschichte der Leptospirose 2.2 Morphologie und Übertragungswege der Erreger 2.3 Taxonomie 2.4 Haupt- und Nebenwirte 2.5 Die Erkrankung beim Menschen 2.5.1 Vorkommen 2.5.2 Klinik und Therapie 2.6 Die Erkrankung beim Tier 2.6.1 Bei Nutztieren 2.6.2 Bei Haustieren 2.6.3 Bei Wildtieren 2.7 Diagnostik 2.8 Die Umweltstabilität der Erreger 2.8.1 In Erde 2.8.2 In Wasser 2.8.3 In Urin 3. Publikationen 3.1 Publikation Nr. 1 3.2 Publikation Nr. 2 4. Diskussion und Schlussfolgerung 5. Zusammenfassung 6. Summary 7. Literaturverzeichnis 8. Danksagung
Introduction: Leptospirosis is one of the most important zoonosis worldwide. Due to the often asymptomatic or non-specific course of the disease, a high number of unreported cases is assumed. Humans can get infected through direct contact with animals or indirect contact with the urine of infected animals, for example through contaminated water or soil. The infection occurs via entry of the pathogen through mucous membranes or skin wounds. Aims of the study: Although the survival time of Leptospira spp. in the environment has a crucial influence on the human infection risk, very few studies have been carried out so far. These studies focused primarily on the survival of the pathogens in soil or water. It was therefore the aim of this study to investigate the environmental stability of a leptospiral serovar that is frequently found in Germany under different environmental conditions. In addition to these investigations, the aim of this work was to raise the awareness of physicians in Germany for this often undetected and neglected disease by publishing a review article on leptospirosis. Material and Methods: The survival in the environment of both a laboratory strain, which has been adapted to culture medium for years and a field strain, which was isolated only 3 years ago, of Leptospira kirschneri Serovar Grippotyphosa was studied. Their resistance to various environmental influences, such as animal urine as surrounding medium at different temperatures or the influence of drying, were examined. After the leptospires were exposed to these influences for various time periods, an attempt was made to cultivate them in EMJH medium. During an incubation period of at least 28 days at 29 °C, the cultures were examined weekly for the presence of motile leptospires under the darkfield microscope. In addition, the survival of the leptospires in a water stream with a defined velocity and their distribution in this stream were examined by real-time PCR and cultivation experiments in EMJH medium. All experiments were carried out in triplicate. The statistical analysis was done using a two-tailed Mann-Whitney U test (type-1-error α = 0.05). Results: Both examined strains of L. grippotyphosa did not survive in undiluted animal urine. In diluted animal urine, the strains survived between 1-72 hours (laboratory strain) and 4-24 hours (field strain), depending on the temperature and dilution medium. Both strains survived significantly longer at 15 °C than at 37 °C (p < 0.001 or p = 0.041). The laboratory strain survived significantly longer in diluted cattle urine (max. 72 h at 15 °C) than in diluted dog urine (max. 4 h) (p = 0.027) while the field strain survived significantly longer in dog urine (max. 24 h at 15 °C) than in cattle urine (max. 4 h) (p = 0.028). Complete drying on a solid surface at temperatures between 15 °C and 37 °C was lethal for both strains. However, regardless of the temperature examined, Leptospira spp. were still cultivatable half an hour before the time point of complete drying. In a water stream, leptospires were able to move faster or slower than the average velocity of the water (0.01 m / s) due to their intrinsic mobility but were not able to survive the mechanical damage caused by running water in the hose system. Conclusions: Overall, it can be concluded that the survival of Leptospira spp. depends on many factors. Rapid dilution after urine excretion appears to be essential. Lower temperatures and a humid environment improve their survival time, while drought or mechanical damage is lethal to them. Because of the great importance of leptospiral survival in the environment for the infection risk of humans and animals, further studies in this research area will be necessary in the future.:1. Einleitung 2. Literaturübersicht 2.1 Die Geschichte der Leptospirose 2.2 Morphologie und Übertragungswege der Erreger 2.3 Taxonomie 2.4 Haupt- und Nebenwirte 2.5 Die Erkrankung beim Menschen 2.5.1 Vorkommen 2.5.2 Klinik und Therapie 2.6 Die Erkrankung beim Tier 2.6.1 Bei Nutztieren 2.6.2 Bei Haustieren 2.6.3 Bei Wildtieren 2.7 Diagnostik 2.8 Die Umweltstabilität der Erreger 2.8.1 In Erde 2.8.2 In Wasser 2.8.3 In Urin 3. Publikationen 3.1 Publikation Nr. 1 3.2 Publikation Nr. 2 4. Diskussion und Schlussfolgerung 5. Zusammenfassung 6. Summary 7. Literaturverzeichnis 8. Danksagung

Tese de mestrado, Biologia Humana e Ambiente, Universidade de Lisboa, Faculdade de Ciências, 2017
A qualidade do meio ambiente é fundamental para o nosso bem-estar. Uma maior prevalência de doenças não contagiosas e crónicas têm sido observadas e em parte atribuídas à exposição a substâncias tóxicas, e aos estilos de vida não saudáveis. Relativamente aos contaminantes ambientais, foram estabelecidos quatro grandes grupos, tendo em conta os seus efeitos negativos na saúde. Um destes grupos são o das substâncias químicas inorgânicas, onde se incluem alguns metais pesados. No grupo dos metais, temos aqueles que são vitais para a saúde humana, em quantidades definidas, enquanto os metalóides e a maioria dos metais pesados não desempenham qualquer função fisiológica nos humanos, podendo causar intoxicações. Os metais pesados são elementos naturais encontrados em toda a crosta terrestre, sendo caracterizados pelo seu elevado peso atómico. Os metais pesados são elementos ubíquos na natureza, estando assim o ser humano exposto por diversas vias, tais como a via oral, inalação e absorção dérmica. Esta exposição diária a um ambiente poluído pode causar acumulação de alguns metais pesados no organismo provocando danos em determinados órgãos ou sistemas. Assim, o nosso principal objectivo foi avaliar a exposição ambiental a três metais (chumbo, manganês e arsénio) em populações não ocupacionalmente expostas em diferentes zonas urbanas de Portugal, através da determinação de biomarcadores no sangue e urina nessas populações. Para este trabalho, a selecção destes três metais foi feita tendo em conta que estes três metais podem apresentar efeitos neurotóxicos, bem como alterações ao nível da síntese do heme. Para avaliação da exposição foram escolhidos biomarcadores de exposição, como a quantificação dos metais no sangue e na urina, bem como biomarcadores de exposição/efeito, tais como a quantificação do ácido delta-aminolevulínico e das porfirinas na urina, e a actividade da acetilcolinesterase no sangue. Ao analisarmos os resultados obtidos verificou-se que a concentração dos biomarcadores está relacionada com o meio envolvente. Na zona urbana mais industrializada (Vx), destaca-se os níveis de Pb, já no caso da área urbana com elevado tráfego automóvel e aéreo (Lx) podemos destacar os níveis de Mn e As, onde se verificaram os níveis médios mais elevados. Quanto aos biomarcadores de exposição/efeito observou-se que estas duas mesmas populações foram também as que apresentaram as concentrações médias superiores. No caso das porfirinas as populações Vx e Lx apresentaram valores acima dos estabelecidos, o que poderá indicar uma possível alteração do perfil das porfirinas. No caso do ácido delta-aminolevulínico, novamente Vx e Lx, foram as que apresentaram os níveis médios mais elevados, não ultrapassando no entanto os limites estabelecidos. Quanto à actividade da acetilcolinesterase não foram observadas diferenças significativas (p<0,05) entre as populações Vx e Lx. Podemos concluir através dos nossos resultados, que os biomarcadores seleccionados podem reflectir o nível de exposição ambiental aos três metais em estudo nas zonas frequentadas e áreas de habitação das populações analisadas. Verificou-se ainda a dificuldade de se encontrar valores referência para estes metais em fluidos biológicos em populações não expostas ocupacionalmente.
The quality of the environment is fundamental to our well-being. A higher prevalence of non-contagious and chronic diseases has been ascertained and are attributed in part to toxic substances exposure and unhealthy lifestyles. Concerning environmental contaminants, four large groups were established taking into account their negative effects on health. One of these groups are the inorganic chemicals, which include some heavy metals. In the metal group, there are metals that are vital for human health in defined amounts, others such as metalloids and most heavy metals have no physiological function in humans and may cause intoxication. Heavy metals are natural elements found throughout the earth's crust and are characterized by their high atomic weight. They are ubiquitous in nature and thus humans are exposed to them by various routes such as ingestion, inhalation and dermal absorption. This daily exposure to a polluted environment can cause accumulation of heavy metals in the body causing damage to certain organs or systems. Thus, our main objective was to evaluate human exposure to three metals, lead, arsenic and manganese in non-occupationally exposed populations in different urban areas of Portugal. The selection of the referred metals was made taking into account their existence in polluted environment and their effects on the nervous system as well as on heme biosynthetic pathways. To obtain the information concerning human metal exposure, exposure biomarkers were chosen, such as the quantification of metals in blood and urine, and also exposure/effect biomarkers, along with the levels of delta-aminolevulinic acid, porphyrins in urine and acetylcholinesterase activity in blood. When analysing the obtained results, it was verified that the quantification of the biomarkers was related to the surrounding environment. In the most industrialized urban area (Vx), the Pb levels stand out, and in the case of the urban area with high car and air traffic (Lx), Mn and As levels also presented the highest average levels. Regarding effect biomarkers, it was also observed that these two populations were the ones with the highest mean concentrations. In the case of porphyrins, Vx and Lx populations presented values above those established, eventually admitting that the porphyrins profiles could be altered. In the case of delta-aminolevulinic acid, again Vx and Lx, were those that presented higher average levels, but not exceeding the established limits. Regarding the activity of acetylcholinesterase, no significant differences (p <0.05) between Vx and Lx were observed. Finally, our results showed that the selected biomarkers could reflect the expected environmental exposure to the metals under study, the quality of the frequented areas and the housing areas of the selected populations.