Dissertationen: „Absorption de protéine“

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Garmy, Nicolas. „Interactions lipide-lipide et lipide-protéine dans les microdomaines membranaires. Rôle dans l'absorption intestinale du cholestérol et des sphingolipides, et dans la régulation de la sécrétion d'une protéine“. Aix-Marseille 3, 2005. http://www.theses.fr/2005AIX30029.

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Les microdomaines membranaires sont des zones spécialisées de la membrane plasmique enrichies en sphingolipides et cholestérol, impliquées dans les mécanismes de communication cellulaire et de transduction du signal. Nous avons entrepris la caractérisation physicochimique des interactions lipide-lipide stabilisant ces structures en étudiant l'interaction du cholestérol avec le squelette de base des sphingolipides : la sphingosine. En utilisant des modèles cellulaires, nous avons caractérisé les mécanismes impliqués dans le transport de ces deux lipides et démontré l'existence d'un effet inhibiteur réciproque de l'un sur l'absorption intestinale de l'autre. Nous avons mis en évidence, au sein d'une enzyme, l'existence d'un domaine structural de reconnaissance des sphingolipides (lui permettant de rester au contact des membranes lors de son adressage), dont la déstabilisation nous a permis pour la première fois d'impliquer les rafts dans la régulation de la sécrétion d'une protéine
Plasma membrane microdomains are specialized zones enriched in sphingolipids and cholesterol, which are involved in the mechanisms of cellular communication and signal transduction. We have characterized the lipid-lipid interactions that stabilized lipid rafts by studying the interaction of cholesterol with sphingosine, which is the common backbone of sphingolipids. By using cellular models, we characterized the mechanisms involved in the transport of both lipids and demonstrated the existence of a mutual inhibitory effect of sphingosine and cholesterol on their intestinal absorption. Finally, we demonstrated the presence of a sphingolipid binding domain in a pancreatic enzyme. This domain allows the enzyme to remain in contact with membranes during its secretion pathway. The destabilization of this structural domain allowed for the first time to imply lipid rafts in the regulation of the secretion of a protein

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Lipsker, Dan Michael. „Interactions de la protéine de stress hsp70 avec les cellules dendritiques humaines : Etude du trafic de certains antigènes de surface des cellules de Langerhans humaines“. Université Louis Pasteur (Strasbourg) (1971-2008), 2002. http://www.theses.fr/2002STR13044.

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Briand, Elisabeth. „Fonctionnalisation de surfaces d'or et greffage de protéines pour l'élaboration d'un immunocapteur“. Paris 6, 2007. http://www.theses.fr/2007PA066013.

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Un immunocapteur consiste à utiliser les propriété de reconnaissance d'un anticorps pour détecter spécifiquement un analyte cible dans un milieu complexe. L'immobilisation de des anticorps (IgG) est cruciale et doit aboutir à un nombre optimal d'IgG accessibles. Ce travail a porté sur l'étude de l'interface biomolécules/surface d'or par quatre techniques d'analyse (PM-IRRAS, QCM, XPS et AFM). Trois modes d'immobilisation des IgG ont été testés, et leur liaison orientée par la protéine A (PrA) répond le mieux aux critères définis. Puis, l'influence de la première couche de thiols (ou SAM) sur l'activité des PrA a été étudiée. Trois SAM ont été comparées (une SAM pure et deux SAM mixtes). La nature chimique du thiol diluant influence l'adsorption des protéines et leur activité. Une couche hydrophile hétérogène favorise l'espacement des PrA, avec une couverture en anticorps optimale. Enfin, ce capteur a été testé pour détecter une toxine marine, l'acide okadaïque.

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Bou, Haidar Naila. „Développement d’un pansement à libération contrôlée d’une protéine spécifique anti-biofilm bactérien. Application aux plaies chroniques“. Thesis, Normandie, 2019. http://www.theses.fr/2019NORMR087.

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Le biofilm bactérien constitue un obstacle majeur à la cicatrisation des plaies. Par ailleurs, il est responsable de l’émergence d’une résistance et d’une tolérance accrues aux antibiotiques. Par conséquent, le développement de systèmes de délivrance contrôlée d’un agent ciblant la structure du biofilm apparaît comme une approche thérapeutique alternative indispensable et urgente pour la prise en charge des plaies chroniques. A travers cette étude, nous avons développé des systèmes membranaires pour pansements libérant une protéine, la dispersine B (DB),capable de cibler de manière sélective la matrice du biofilm, en créant un microenvironnement délétère pour le biofilm bactérien. Pour ce faire, nous nous sommes intéressés aux membranes asymétriques (MAs) à base de polyesters biodégradables tels que le poly(3-hydroxybutyrate-co-4-hydroxybutyrate), le poly (butylène succinate-co-butylène adipate) (PBSA), et l’acide polylactique. En incorporant dans la solution de polymère des agents porogènes hydrophiles (APs), nous avons pu obtenir des MAs à porosité élevée, un réseau poreux interconnecté, perméables au dioxygène et à l’eau vapeur. En utilisant l’albumine de sérum bovin, nous avons pu montrer que la capacité de piégeage de la protéine et sa libération contrôlée à partir des MAs de PBSA était influencée par la structure de celles-ci et la présence d’APs résiduels. Les études in vitro ont montré une très grande efficacité anti-biofilm à la fois en inhibition et en dispersion (jusqu’à 80%). Les tests standards normalisés de cytotoxicité in vitro ont montré que les MAs de PBSA non chargées et chargées en DB répondaient aux critères de cytocompatibilité exigées pour une application de type pansement
Bacterial biofilms are a major obstacle to the wound healing process. In addition, they are responsible for the emergence of resistance and tolerance to antibiotics. Hence, the development of controlled drug delivery systems targeting the bacterial biofilm appears as an urgent and essential alternative therapeutic approach for the effective management of chronic wound. In this work, we developed wound dressings in which a protein, dispersin B (DB), is released capable of selectively targeting the biofilm matrix, creating a deleterious microenvironment for the bacterial biofilm. To this end, we were interested in asymmetric membranes (AMs) from biodegradable polyesters such as the poly(3-hydroxybutyrate-co-4-hydroxybutyrate), the poly (butylene succinate-co-butylene adipate) (PBSA) and the polylactic acid. By the incorporation of hydrophilic porogen agents (PA), we were able to obtain AMs with a high level of porosity, exhibiting a porous interconnected network and oxygen and water vapor permeability. Using bovine serum albumin as a model protein, we demonstrated that protein loading and release from the PBSA AMs were affected by the membrane structure and the presence of residual PA. In vitro studies showed highest antibiofilm efficiency both in inhibition and dispersion (up to 80%). Normalized in vitro cytotoxicity standard assays revealed that unloaded and DB-loaded PBSA membranes met cytocompatibility criteria required for wound dressing applications

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Schollier, Audrey. „Probing protein adsorption modes onto poly(ethylene glycol) brushes by neutron reflection“. Doctoral thesis, Universite Libre de Bruxelles, 2011. http://hdl.handle.net/2013/ULB-DIPOT:oai:dipot.ulb.ac.be:2013/209952.

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Adsorption of proteins at interfaces has an important role in biotechnological and pharmaceutical applications. Indeed, several undesirable processes are related to protein adsorption, as for example: fouling of contact lenses, clotting on blood contacting devices, triggering inflammation around artificial organs, diminished circulation time of therapeutic proteins and drug bearing liposomes. Neutral water soluble polymers, such as poly(ethylene glycol) (PEG), are used to repress protein adsorption: by coating the surface with a polymer brush, a "cushion" is created between the protein and the surface, that can reduce, or even completely repress the adsorption. Understanding the mechanism that inhibits the adsorption at interfaces is an active field of research, and could lead to relevant improvements in biomaterials performances and design.

A clear understanding of the mechanism of protein adsorption onto polymer brushes is still missing. The first models describing the interactions of a polymer brush with adsorbing particles predicted two adsorption modes: primary adsorption at the grafting surface, and secondary adsorption at the outer edge of the brush (occurring for large cylindrical proteins). Primary adsorption can be repressed by increasing the grafting density of the brush, and secondary adsorption by increasing its thickness, in agreement with the experiments reported in the literature. But experimental evidences (a maximum in the adsorbed amount observed for long brushes) suggested then the existence of a third mode: ternary adsorption within the brush itself, due to attractive interactions between the protein and the brush. Standard techniques can in general only probe the total adsorbed amount. The aim of this work was to separate primary and ternary adsorption isotherms, by using neutron reflectivity and deuterated proteins. As neutrons interact differently with hydrogen and deuterium atoms, the contrast between the hydrogenated brush and the deuterated protein is high enough to separate the two contributions.

We studied the adsorption of deuterated myoglobin on PEG brushes with different degrees of polymerisation (N = 56, 146 and 770), and as a function of the area per grafted chain. The contribution of primary and ternary adsorption was separated for the different systems, and the adsorbed amount was extracted and the adsorption isotherms compared to the theoretical predictions. The ability to distinguish between the different adsorption modes, and the quantification of their relative contribution to the overall amount of adsorbed proteins, represents a major advance in optimising surface properties. In particular, the occurrence of ternary adsorption onto PEG brushes affects their status as tool for repressing protein adsorption.

L’adsorption de protéines aux interfaces a un rôle important pour certaines applications pharmaceutiques ou biotechnologiques. En effet, plusieurs processus indésirables sont liés à l’adsorption de protéines, par exemple l’encrassement de lentilles de contact, la coagulation dans des appareils contenant du sang, l’inflammation d’organes artificiels ou encore la diminution du temps de circulation dans le corps de protéines ou liposomes thérapeutiques. Certains polymères, tels que le polyéthylène glycol (PEG), sont utilisés pour réprimer l’adsorption de protéines :en greffant une brosse de PEG sur la surface, une couche est créée entre la protéine et celle-ci qui diminue, voire même réprime complètement l’adsorption. Comprendre le mécanisme qui entrave l’adsorption aux interfaces est un sujet de recherche actif, qui pourrait mener à des améliorations significatives dans la conception de biomatériaux.

À ce jour, la compréhension du mécanisme d’adsorption de protéines sur des brosses de polymère n’est pas claire. Les premiers modèles décrivant les interactions entre brosses de polymères et particules adsorbantes prédisaient deux modes d’adsorption :l’adsorption primaire sur la surface de greffage, et l’adsorption secondaire à l’extérieur de la brosse (pour les grandes protéines cylindriques uniquement). L’adsorption primaire peut-être réprimée en augmentant la densité de greffage de la brosse, et l’adsorption secondaire en augmentant son épaisseur, en accord avec les expériences reportées dans la littérature. Mais d’autres évidences expérimentales (un maximum dans la quantité adsorbée observé pour les brosses longues) ont ensuite suggéré l’existence d’un troisième mode :l’adsorption ternaire à l’intérieur même de la brosse, due aux interactions attractives entre la protéine et la brosse.

Les techniques standards peuvent en général mesurer la quantité adsorbée totale. Le but de ce travail était de séparer les isothermes d’adsorption primaire et ternaire, en utilisant la réflectivité de neutrons et des protéines deutérées. Comme les neutrons interagissent différemment avec les atomes d’hydrogène ou de deutérium, le contraste entre la brosse hydrogénée et la protéine deutérée est ainsi suffisant pour séparer les deux contributions.

Nous avons étudié l’adsorption de myoglobine deutérée sur des brosses de PEG avec différents degrés de polymérisation (N = 56, 146 and 770), en fonction de l’aire par chaîne Σ. La contribution des adsorptions primaire et ternaire put être séparée pour les différents systèmes, et les quantités adsorbées extraites pour finalement comparer les isothermes d’adsorption aux prédictions théoriques. La possibilité de distinguer les différents modes d’adsorption, et la quantification de leur contribution relative à la quantité totale de protéines adsorbées représente une avancée majeure dans l’optimisation des propriétés des surfaces. L’adsorption ternaire dans les brosses de PEG en particulier remet en question leur utilisation pour réprimer l’adsorption de protéines.
Doctorat en Sciences
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Harmel, Élodie. „Rôle et régulation de la protéine kinase AMPK au niveau intestinal“. Phd thesis, Université Claude Bernard - Lyon I, 2012. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00934093.

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La physiopathologie du diabète de type II se caractérise par de sévères anomaliesmétaboliques telles que l'hyperglycémie et les dyslipidémies contribuant au développementdes maladies cardiovasculaires. Une altération de l'activité de l'AMPK dans les tissus tels quele muscle squelettique et le foie est associée à ces désordres métaboliques alors que sonactivation pharmacologique permet de les rétablir. Toutefois, le complexe hétérotrimériqueαβγ tissu-spécifique de l'AMPK confère une régulation et des rôles distincts qui demeurentinexplorés dans l'intestin, un organe favorisant pourtant l'augmentation de l'absorption desnutriments en situation de diabète de type II. La présente étude démontre une prépondérancedu complexe α1β2γ1 de l'AMPK dans les cellules intestinales Caco-2 dont l'un des rôles de lasous-unité α1 est de réguler l'ACC, l'enzyme de synthèse des acides gras. Contrairement àl'AMPK exprimée dans le foie, elle ne régule pas l'HMG-CoA Réductase impliquée dans lasynthèse du cholestérol. L'activation de l'AMPK mime l'effet de l'insuline en réduisantl'absorption intestinale du glucose et des lipides alors que son altération en situationd'insulino-résistance (e.g : induite par le 4-HHE dans un modèle cellulaire Caco-2 ou induitepar la diète dans le modèle animal Psammomys obesus) favorise l'absorption du glucose etdes lipides, ce qui exacerberait l'hyperglycémie et la dyslipidémie postprandiale associées audiabète de type II. L'AMPK au niveau intestinal constitue donc une cible thérapeutiquepotentielle complémentaire pour la prévention et le traitement du diabète de type II.

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Arfaoui, Mounir. „Étude structurale et électronique des sites de fixation de biomolécules par modélisation ab-initio de spectres d'absorption des rayons X“. Paris 6, 2008. https://hal.science/tel-04469788.

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Les métalloprotéines utilisent les propriétés chimiques de leur site actif, un métal de transition, afin d'accomplir un large éventail de processus biologiques. Une description détaillée de la géométrie autour de ces sites est un pré-requis pour comprendre leur mode de fonctionnement et à terme synthétiser des molécules thérapeutiques. Le XANES (X-ray Absorption Near Edge Structure) est une spectroscopie capable de fournir une description locale fine autour de l'atome absorbeur. A l'aide de modélisation ab-initio de spectres XANES, nous montrons qu'il est possible de discriminer entre des modèles structuraux obtenus par diffraction des rayons X à haute résolution. La méthode de calcul reposant sur la théorie de la fonctionelle de la densité utilise une base d'ondes planes. Nous l'avons appliquée pour analyser le site du fer dans différents dérivés de la myoglobine et le site du cobalt dans la méthyle-cobaloxime, un composé modèle pour la vitamine B12. Une attention particulière est portée à la description des états électroniques impliqués dans la liaison chimique au travers de la région du préseuil K du métal
Metalloproteins use the chemical properties of their active site, a transition metal, to carry out a wide range of biological processes. A detailed description of the geometry around these sites is a prerequisite for understanding their mode of operation and ultimately synthesizing therapeutic molecules. The XANES (X-ray Absorption Near Edge Structure) is a spectroscopy capable of providing a fine local description around the absorbing atom. Using ab-initio modeling of XANES spectra, we show that it is possible to discriminate between structural models obtained by high-resolution X-ray diffraction. The calculation method based on density functional theory uses a plane wave basis. We applied it to analyze the iron site in different derivatives of myoglobin and the cobalt site in methyl-cobaloxime, a model compound for vitamin B12. Special attention is paid to the description of the electronic states involved in the chemical bond through the K pre-edge region of the metal

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Bourinet, Laurent. „Etude des propriétés physico-chimiques des complexes collecteurs de lumière des bactéries pourpres sulfureuses“. Paris 11, 2004. http://www.theses.fr/2004PA112050.

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Cette thèse concerne l'étude des propriétés physico-chimiques des complexes collecteurs de lumière périphériques (LH2) des bactéries pourpres sulfureuses. Après avoir développé la culture de ces bactéries et la purification de leurs complexes LH2, j'ai utilisé une combinaison de techniques spectroscopiques (dichroi͏̈sme circulaire et linéaire, absorption électronique à température ambiante et à basse température, diffusion Raman de résonance) pour déterminer les propriétés électroniques et vibrationnelles de ces complexes. Ces protéines présentaient des différences marquées avec leurs homologues plus étudiés, les LH2 de bactéries pourpres non-sulfureuses. Les LH2 de bactéries pourpres sulfureuses présentent un certain nombre de propriétés qui les rapprochent des complexes de cœur ( LH1). Ce résultat est intéressant car la structure des LH2 et des LH1, bien que fondée sur le même principe, est très différente. Ces complexes sont tous formés de l'association sous forme d'anneaux de dimères de polypeptides membranaires. Cependant les LH1 sont formés de 16 de ces dimères, tandis que les LH2 n'en contiennent que 8 ou 9 et ont des tailles très différentes. J'ai montré que la technique de cryo-fracture et de microscopie électronique donne une estimation de la taille des complexes collecteurs de lumière. Avec cette méthode, j'ai estimé que les LH2 de Chromatium vinosum possédaient une taille intermédiaire (11/12 dimères) située entre les LH1 et les LH2. La découverte de cette nouvelle forme d'association de ces polypeptides ouvre des perspectives pour comprendre les déterminants qui guident les complexes collecteurs de lumière vers l'obtention d'une structure quaternaire donnée
This thesis concerns the study of the physico-chemical properties of peripheral light-harvesting (LH2) complexes from purple sulphur bacteria. After culturing the bacteria and purifying their LH2 complexes I used a combination of spectroscopic techniques (circular and linear dichroism, room- and low-temperature electronic absorption and resonance Raman) in order to determine the electronic and vibrational properties of the complexes. These proteins possess marked differences with their homologues from purple non-sulphur bacteria. The LH2 from purple sulphur bacteria possess a certain number of properties that resemble core light-harvesting (LH1) complexes. This result is interesting because the structures of LH2s and LH1s, which are based on a similar construction, are different. These complexes are all formed by the association of dimers of membrane polypeptides, in the form of a ring. LH1 contains 16 dimers, whereas, the LH2 has 8 or 9. Therefore, the sizes of these proteins are very different. I demonstrated that the technique of freeze fracture, combined with electron microscopy, gives an estimation of the size of these complexes. With this methodology, I showed that the LH2 from Chromatium vinosum possesses an intermediate size (11/12 dimers) between previously studied LH1 and LH2 complexes. The discovery of this new form of dimer association opens up the way towards a better understanding of the factors that govern the quaternary structure of light-harvesting complexes

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Georgopoulou, Uranie. „Aspects originaux de l'absorption intestinale des protéines chez les poissons téleostéens“. Paris 11, 1986. http://www.theses.fr/1986PA112196.

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Les cellules épithéliales du segment intestinal postérieur de la Truite, espèce carnivore pourvue d'un estomac et dont le développement s'effectue sans passage par une forme larvaire, possèdent des caractéristiques ultrastructurales évoquant celles des cellules iléales du rat nouveau-né. Chez celui-ci, l'absorption des protéines du colostrum et du fait et leur digestion intracellulaire sont liées à l'immunisation durant cette phase de l'alimentation. Ce processus disparaît quand la sécrétion peptique commence. Chez la truite adulte nous montrons que les cellules de l'intestin postérieur absorbent des protéines, comme l'HRP et la ferritine, retrouvées dans le système vacuolaire caractéristique de ces cellules. La visualisation d'une activité phosphatasique acide au niveau de ce système vacuolaire et la mise en évidence biochimique d'une forte activité catheptique caractéristique des cellules de l'intestin postérieur, nous laissent penser à une digestion intracellulaire des protéines. Nous montrons ensuite par des techniques immunologiques, que ces cellules absorbent et digèrent une même protéine (IgGH et HBSAg) et nous visualisons l'activité des enzymes lysosomales essentielles {cathepsines D et B) qui permettent cette digestion dans le système vacuolaire. Chez la truite juvénile, au moment de la première prise de nourriture, les cellules épithéliales de l'intestin postérieur qui possèdent déjà leur différenciation ultrastructurale caractéristique, voient leur activité catheptique augmenter brutalement. Le phénomène d'absorption des macromolécules est similaire à celui observé chez l'adulte, les vitesses de pénétration étant supérieures. Durant toute la vie de l'animal, l'intestin postérieur présente donc des caractéristiques ultrastructurales et fonctionnelles en relation avec l'absorption et la digestion intracellulaire des protéines. L'hypothèse, émise par différents auteurs, limitant l'éventualité d'un tel processus aux seules formes larvaires des téléostéens dépourvus d’estomac n'est donc pas avérée. Nous avons de plus montré qu’une partie des protéines jusqu’à 6% de PHRP ingérée échappe à la dégradation lysosomale, gagne l'espace intercellulaire, la lamina propria sous épithéliale et la circulation générale. Ce passage déclenche une réponse immunitaire locale qui se traduit par une augmentation considérable du nombre des cellules immunocompétentes infiltrées susceptibles de produire des anticorps agglutinants spécifiques. Chez une espèce carnivore pourvue d'un estomac, la Truite arc-en-ciel, nous démontrons donc que l'intestin postérieur assure deux fonctions essentielles a priori exclues, nutritionnelle et immunitaire
The epithelial cells of the posterior intestinal segment of Trout, a carnivorous species with a stomach and with a developmental cycle which does not include a larval phase, possess the ultrastructural characteristics resembling that of ileal cells of neonatal rat. For this one the absorption of proteins of colostrum and milk and their intracellular digestion arc related to the immunization during this phase of alimentation. This process disappears when peptic secretion begins. Ln the adult we show that cells of the posterior intestine absorb proteins like HRP and ferritin, which are found in the vacuolar system which is characteristic of these cells. Furthermore a capacity for intracellular protein digestion is strongly suggested by the visualization of a phosphatasic acid activity in the intracellular vacuolar system and the demonstration of a high catheptic activity which is characteristic of the posterior intestinal cells. Always in the adult we show by immunological methods, that cells absorb and digest the same protein (lgGH and HBSAg) and we visualize the essential lysosomal enzymes (cathepsins B and D) enabling this digestion to occurs. Ln the juvenile trout at the moment of the first feeding, the epithelial cells of the posterior intstine possess yet the characteristic ultrastructural differentiation, at the same time their catheptic activity increases. The phenomenon of macromolecular absorption is similar to that observed in adult, but the rates of penetration are superior. During the whole life of the animal the posterior intestine presents the ultrastructural and functional characteristics related to the intracellular absorption and digestion of proteins. The hypothesis emits by differents authors, limiting the eventuality of such a process only for teleost larval forms without a stornach, is not established. Furthermore we observed that a quantity of proteins (about 6% of the dose of ingested HRP) escapes from lysosomal degradation, reach the intercellular space, the intraepithelial lamina propina and general circulation. The immediate result of this passage is the beginning of a local immunological response with a considerable increase of the number of immunocompetents cells infiltrated between susceptible to produce specific agglutinating antibodies. Ln a carnivorous species, with a stornach, the rainbow Trout, we demonstrate that the posterior intestine assure two essential functions excluded a priori, nutritional and immune

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Leccese, Silvia. „Interaction between Orange Carotenoid Protein and mesoporous silica : from spectroscopic investigations to photoactive nanodevices“. Electronic Thesis or Diss., Sorbonne université, 2022. http://www.theses.fr/2022SORUS537.

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Ce projet de thèse concerne l’étude des interactions entre la Orange Carotenoid Protein (OCP) et la silice mésoporeuse SBA-15, visant à la mise au point de nanodispositifs photo-actifs. La OCP est une protéine photo-active impliquée dans la photoprotection des cyanobactéries. Il implique la dissipation thermique de l’excès d’énergie solaire en prévenant le stress oxydatif et les photo-dommages. L’OCP se compose de deux domaines structurels partageants un caroténoïde antioxydant, qui agit comme chromophore. La lumière bleue induit la photo-activation de l’OCP et son changement de couleur de l’orange au rouge. La SBA-15 a été choisie comme support inorganique pour l’OCP, visant à développer des nanodispositifs photochromiques biocompatibles. En effet la SBA-15 est largement utilisée pour l’immobilisation des protéines. Les paramètres structurels de la SBA-15, tels que le diamètre des pores, peuvent être modifiés en ajustant les paramètres de sa synthèse. Dans ce travail, nous avons immobilisé l’OCP sur différents types de nanoparticules de silice mésoporeuse SBA-15, vides ou fonctionnalisées en surface. Nous avons ensuite caractérisé structurellement les systèmes. Les matrices de SBA-15 se sont avérées être des supports appropriés pour l’OCP, dont le taux d’immobilisation est fortement renforcé par la pré-photo activation de la protéine. L’OCP reste photo-active à l’intérieur de la matrice de silice mésoporeuse, produisant ainsi des nanoparticules photochromiques. Les études de spectroscopie IRTF différentielle suggèrent que le mécanisme de photo-activation est le même qu’en solution, et très similaire pour tous les types d’OCP étudiés. En outre, dans des conditions appropriées, l’OCP peut également être relarguée à partir des nanoparticules de SBA-15. Enfin, nous avons développé des nanodispositifs photo-activables avec une fluorescence réglable en intensité, basée sur des nanoparticules de SBA-15 chargées de colorants et OCP. Plus en détail, nous avons immobilisé des molécules colorants et fluorescents (cyanine ou flavonols) sur la SBA-15, en présence d’OCP. L’éclairage à lumière bleue entraine une diminution réversible de la fluorescence. Également, la SBA-15 agit non seulement comme un échafaudage biocompatible, mais aussi comme un agent de protection contre le vieillissement des nanodispositifs développés
This thesis deals with the study of interactions between the Orange Carotenoid Protein and mesoporous silica SBA-15, aiming to the development of photoactive nano-devices. The photoactive Orange Carotenoid Protein (OCP) is a protein involved in photo-protective responses in cyanobacteria. It induces the thermal dissipation of excess solar energy counteracting oxidative stress and photodamage. OCP consists of two structural domains sharing a non-covalently linked antioxidant carotenoid as a chromophore. Blue light induces photoactivation of OCP and its colour changes from orange to red. SBA-15 (Santa Barbara Amorphous) was chosen as an inorganic support for OCP aiming at the development of photochromic bio-compatible nanodevices. SBA-15 is a mesoporous silica matrix that has attracted much attention as host for immobilization of enzymes as well as drug delivery systems. The structural parameters of SBA-15, such as the diameter of pores, can be modified by tuning parameters of its synthesis. Furthermore, the ability to modify the surface properties of SBA-15 can provide higher protein immobilization capacity. In this work we have immobilized OCP on different kinds of raw and surface-functionalized SBA-15 mesoporous silica nanoparticles, and we have structurally characterized the systems. SBA-15 matrices have demonstrated to be suitable supports for OCP, whose immobilization is strongly enhanced by the pre-photoactivation of the protein. OCP remains photoactive inside the mesoporous silica matrix, thereby producing photochromic nanoparticles. FTIR difference spectroscopy studies strongly suggest that the photoactivation mechanism is the same as in solution, and very similar for all the studied OCPs. Furthermore, under appropriate conditions, OCP can also be released from SBA-15 nanoparticles. Finally, we have developed photoactivable nanodevices with intensity-tuneable fluorescence based on OCP- and dye-loaded SBA-15 nanoparticles. More in details, we have immobilized synthetic cyanine dyes or natural fluorescent antioxidant flavonols on SBA-15, in presence of OCP. Blue light illumination was found to provide reversible quenching of red or green fluorescence under green or violet illumination, respectively. In addition, SBA-15 act not only as a biocompatible scaffold, but also as a protecting agent against aging of the developed nanodevices

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Lair, Virginie. „Organisation et agrégats dans les sels fondus à température ambiante : relations structure/réactivité : applications à la chimie du vivant“. Paris 6, 2003. http://www.theses.fr/2003PA066175.

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Le, Bacquer Olivier. „Effets trophiques de la glutamine : études in vivo chez le nouveau-né prématuré et in vitro sur un modèle d'entérocytes humains en culture“. Nantes, 2002. http://www.theses.fr/2002NANT18VS.

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Les études réalisées chez l'animal et chez l'homme suggèrent que, dans les situations de catabolisme protéique, l'apport de glutamine stimule la synthèse protéique au niveau du corps entier et a un effet trophique sur l'intestin. Les mécanismes d'action de la glutamine restent à déterminer. Les résultats montrent que 1) chez le prématuré, une supplémentation en glutamine, réduit la synthèse protéique au niveau du corps entier, mais a un effet anti-catabolique en diminuant à la fois la protéolyse et l'oxydation protéique ; 2) ils montrent également que la carence en glutamine réduit la synthèse protéique. . . . . La supplémentation en glutamine restaure la plupart de ces paramètres, probablement via son métabolisme énergétique. En conclusion, ces données suggèrent que la glutamine pourrait favoriser le gain protéique chez le prématuré par son effet anti-catabolique ; elle pourrait également intervenir dans la trophicité du tube digestif de ces enfants en stimulant la synthèse protéique intestinale
Animal and human studies suggest that glutamine supply may enhance whole body protein synthesis stimulation and improve gut trophicity during critical illness. The mechanisms of these effects remain unclear. This work combines an in vivo study in very-low-birth-weight infants with two in vitro studies using the Caco-2 cell line as a model of human enterocytes in culture. Our results show that 1) in parenterally fed preterm, a 24h glutamine supplementation decreases whole body protein synthesis, but may have an acute protein-sparing effect, as it suppresses protein breakdown and oxidation; 2) we also demonstrate that glutamine deprivation impairs protein synthesis in a model of enterocytes. Finally, 3) apical nutrient deprivation, a model of fasting, impairs protein synthesis, depletes glutathione pool, and increases transepithelial permeability. Most of these parameters are restored by glutamine supplementation, probably through glutamine utilization as a source of energy. Taken together, these findings suggest that glutamine may improve protein accretion in preterm infants through an anti-catabolic effect, and regulate gut barrier function by stimulating intestinal protein synthesis

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Robert, Marie. „Développement d'hydrolysats pour l'alimentation des animaux d'aquaculture : caractérisation moléculaire et fonctionnelle“. Caen, 2014. http://www.theses.fr/2014CAEN2050.

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L’aquaculture est un secteur en pleine extension et produit aujourd’hui la moitié des produits aquatiques destinés à la consommation humaine. Elle constitue ainsi un secteur clé pour le maintien et l’amélioration de la sécurité alimentaire dans le monde. Cependant sa croissance rapide a déjà un impact important sur l’environnement, notamment sur les stocks de poissons sauvages dont elle dépend pour la fabrication des aliments aquacoles. Dans ce contexte, l’alimentation destinée aux poissons d’élevage a considérablement évolué et a dû s’adapter aux nombreuses contraintes économiques et environnementales. L’utilisation des farines de poisson pour la formulation des aliments a particulièrement diminué au profit des farines d’origine végétale. Néanmoins, ces dernières sont moins adaptées aux besoins nutritionnels des poissons et engendrent une baisse des performances de croissance des animaux. Les hydrolysats protéiques issus des co-produits de la pêche et de l’aquaculture sont des ingrédients à fort potentiel nutritionnel et bioactif développés pour restaurer les performances de croissance obtenues avec des aliments à haute teneur en farine d’origine végétale. Ces derniers sont des mélanges complexes riches en peptides hydrolytiques et en acides aminés libres mais dont la composition est peu connue. Une approche expérimentale a été développée pour caractériser la fraction peptidique de deux hydrolysats de co-produits. Cette dernière est basée sur une approche transcriptomique permettant d’obtenir des données transcriptomiques ciblées sur les co-produits d’intérêt, associée à une approche peptidomique. En associant l’optimisation des étapes de fractionnement et la complémentarité de deux techniques de spectrométrie, il a été possible d’aboutir à l’identification de plus de 1000 peptides dans chacun de ces mélanges complexes. En parallèle, des expériences de conditionnement alimentaire menées chez le bar commun, Dicentrarchus labrax, ont permis de mettre en évidence des propriétés nutritionnelles au moins équivalentes et souvent supérieures à celles des farines de poisson chez les bars maintenus en élevage. En effet, l’inclusion de 5% de l’un ou l’autre des deux hydrolysats étudiés dans des aliments contenant 95% de farine d’origine végétale permet de maintenir des performances de croissance équivalente à celles obtenues avec des aliments contenant 80% de farine d’origine végétale et 20% de farine de poisson. Les hydrolysats agissent par ailleurs sur la physiologie digestive du bar commun comme le montrent les profils d’expression des biomarqueurs de l’absorption intestinale suivis dans cette étude. Enfin, les deux hydrolysats possèdent une activité antibactérienne in vitro et l’hydrolysat de Tilapia stimule le système immunitaire du bar commun. Ces résultats démontrent l’intérêt de l’utilisation de ces deux hydrolysats en aquaculture en complément ou en remplacement des farines de poisson
Global production of farmed fish and shrimp has grown dramatically over the past decades and now contributes to half of the aquatic products intended for human consumption. Aquaculture is a key sector for the maintenance and improvement of food security worldwide. However, its rapid growth has a significant impact on the environment, particularly on the stocks of wild fish used to produce aqua feed. In this context, aqua feed has dramatically evolved and has been adapted to many economic and environmental constraints. The use of fishmeal has particularly declined in favor of plant protein sources. But plant proteins are less adapted to the nutritional needs of fish and result in lower growth performances. Protein hydrolysates from fishing and aquaculture by-products are ingredients of high nutritional and bioactive potential developed to restore growth performances in high-level plant protein diets. They are rich in hydrolytic peptides and free amino acids, but they are complex mixtures whose composition is not well known. We developed an experimental approach to characterize the peptide fraction of two by-product hydrolysates based on two complementary approaches: a transcriptomics approach aimed at getting transcriptomics data about the targeted by-products, and a peptidomics approach. The peptidomics approach combined the optimization of fractionation steps and two complementary mass spectrometry techniques. Thus we identified more than 1,000 peptides in the two by-product hydrolysates. Furthermore, diet conditioning experiments conducted in sea bass, Dicentrarchus labrax, highlighted their interesting nutritional properties to maintain growth performances of farmed fish. Indeed, dietary inclusion of 5\% of these hydrolysates in a high-level plant protein diet (95%) maintained growth performances at similar levels to those obtained with diets containing 80% of plant protein. In addition, we demonstrated an influence of these by-product hydrolysates on the digestive physiology of sea bass, as shown by biomarker expression in the intestinal absorption profiles observed in the study. Finally, our work shows that (i) both hydrolysates possess in vitro antibacterial activity and (ii) tilapia hydrolysate stimulates the immune system of sea bass. These results demonstrate the interest of using these two hydrolysates in aquaculture in addition to or instead of fishmeal

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Sakr, Soulai͏̈mane. „Effet de blessures sur l'activité de protéines membranaires dans la compartimentation des assimilats chez les végétaux“. Poitiers, 1996. http://www.theses.fr/1996POIT2294.

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Dans les plantes, une partie des sucres et des acides amines synthetises dans les feuilles est transportee a longue distance vers des organes receveurs importants pour la productivite vegetale (fruits, tubercules, racines). L'intensite et la direction de ce flux dependent largement de systemes membranaires catalysant le cotransport de ces assimilats avec les protons, a travers la membrane plasmique de diverses cellules. Leur activite depend de l'etat physiologique de la plante qui est en relation avec les conditions environnementales. Parmi ces dernieres, les plantes doivent souvent subir des blessures mecaniques plus ou moins importantes sous l'action des herbivores ou l'effet de pratiques culturales diverses. Pour mieux comprendre l'effet des blessures sur l'activite des systemes de transport membranaires, nous avons d'abord caracterise l'absorption du saccharose, du 3-o-methylglucose et de la valine par les disques foliaires places dans trois conditions experimentales: disques fraichement excises, disques ages (places en survie pendant 12 h) et de feuilles excisees (la feuille est separee de la plante mere et son petiole est trempe dans l'eau distillee pendant 12 h avant les experiences). Comparativement aux disques frais, la survie conduit a une stimulation generale et importante de l'absorption de ces solutes et du pouvoir acidifiant des tissus. L'excision stimule l'absorption du saccharose dans les disques mais ne modifie pas l'absorption des autres solutes et n'altere pas le pouvoir acidifiant des tissus. De plus, le systeme de transport du saccharose selectivement induit par l'excision differe de celui induit par la survie en ce qui concerne sa sensibilite au ph apoplastique, aux reactifs de groupements thiols et sa localisation tissulaire. Cette approche physiologique a ete completee par des approches biochimiques et moleculaires en etudiant les proprietes des vesicules de plasmalemme preparees a partir de ces tissus, et l'expression de l'atpase-h#+ et des transporteurs de glucides et d'acides amines. Le profil des proteines membranaires obtenu par electrophorese bidimensionnelle est fortement perturbe par les blessures. En ce qui concerne l'absorption, nous avons retrouve avec les vesicules energisees artificiellement des resultats similaires a ceux obtenus sur disques: une stimulation de l'absorption du saccharose consecutive a l'excision et une stimulation de l'absorption du 3-o-methylglucose et de la valine consecutive a la survie. L'effet stimulateur des blessures sur l'absorption de ces solutes resulte donc d'un impact membranaire direct au niveau des transporteurs. Toutefois, la stimulation de l'absorption du saccharose dans les disques ages n'est pas retrouvee au niveau des vesicules de plasmalemme. Cette stimulation serait donc due a une activation de l'atpase-h#+ par la survie. Une etude detaillee a porte sur les processus de regulation transcriptionnelle et post-traductionnelle de l'atpase-h#+. Dans le cas de la survie, nous avons effectivement note une augmentation de l'activite et de la quantite de l'atpase, et du transcrit correspondant. Dans le cas de l'excision, bien que la quantite du transcrit et de la proteine soient augmentees, l'activite atpasique n'est pas modifiee, ce qui demontre l'existence d'un controle post-traductionnel de son activite. Par ailleurs, l'effet des blessures sur les niveaux de transcrits et l'activite des transporteurs de saccharose, de glucose et d'acides amines a ete etudie. Cette etude souligne d'une part l'effet specifique et differentiel des blessures sur le niveau des transcrits des differents transporteurs, et d'autre part l'existence de controle transcriptionnels et post-transcriptionnels sous l'effet de ces traitements. Enfin, l'utilisation d'effecteurs de proteines kinases et des proteines phosphatases suggere que des processus de phosphorylation/dephosphorylation sont impliques dans la stimulation de l'activite de ces systemes de transport membranaire au cours de la survie. Ce travail permet donc de preciser les regulations a court terme qui peuvent s'exercer sur les enzymes controlant la distribution des assimilats

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Verdiere, Jérémy. „Étude de propriétés photophysiques de protéines fluorescentes par dynamique moléculaire“. Thesis, Université Paris-Saclay (ComUE), 2016. http://www.theses.fr/2016SACLS450/document.

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Les protéines fluorescentes sont très largement utilisées dans les études de biologie moléculaire depuis maintenant une vingtaine d’année. Pour autant, l’origine de leurs propriétés photophysiques n’est pas totalement élucidée. Dans cette thèse, nous avons essayé d’améliorer la compréhension de la photophysique de deux protéines fluorescentes particulières : Padron et EosFP.Dans la protéine Padron, nous avons étudié l’isomérisation du chromophore et cherché à déterminer si la protonation et l’isomérisation sont simultanées ou successives. Pendant l’isomérisation, le donneur de proton potentiel est le résidu Tyr159. Nous avons d’abord montré que dans le vide, le transfert de proton est peu probable quelle que soit la géométrie du chromophore. Dans la protéine (où l’effet de l’environnement n’est pas négligeable) nous avons mis en évidence par dynamique moléculaire que, durant l’isomérisation, le transfert de proton n’est presque jamais favorable et reste donc un marginal.Par ailleurs, ces mêmes dynamiques ont montré que, à la fin de l’isomérisation, il apparaît de nombreux chemins de molécules d’eau reliant le chromophore au solvant et pouvant permettre un transfert de proton. On conclut doncque l’isomérisation et la protonation ne sont pas simultanées mais successives.Dans le cas de la protéine EosFP, nous avons analysé l’effet d’une molécule d’eau présente dans une partie des structures cristallines. Les dynamiques avec le chromophore à l’état fondamental ont montré que cette molécule ne joue pas de rôle, que ce soit sur le réseau de liaison hydrogène ou sur le spectre d’absorption. Par contre, à l’état excité, les dynamiques ont montré que l’extinction de fluorescence est beaucoup plus rapide sans la molécule d’eau qu’en sa présence.Par ailleurs, ces dynamiques ont mis en évidence que la protéine bloque souvent le chromophore dans des géométries où il ne peut pas retourner à l’état fondamental ni par fluorescence, ni par conversion interne. Ces géométries « noires» jouent un rôle important dans la photophysique.Pour tenir compte de ces géométries, nous avons calculé le rendement quantique et le temps de vie de fluorescence par intégration directe le long des trajectoires et par cinétique chimique. Dans les deux cas, nous avons obtenu un accord qualitatif avec l’expérience
Fluorescent proteins are widely used in biology studies since 20 years. Yet, the origin of their photophysical properties aren’t totally explained. Here, we try to improve the understanding of two particular fluorescent proteins: Padron and EosFP.In the protein Padron, we work on the isomerization of chromophore and try to determine whether isomerization and protonation are simultaneous or successive processes. During the isomerization, the potential donor is Tyr159.First, we show that, in vacuum, the proton transfer is quite unlikely whatever the chromophore geometry.In the protein (where the environment effect isn’t negligible) we evidence with molecular dynamics that, during isomerization, proton transfer stays marginal.In addition, these dynamics shown the appearance, at the end of isomerization, of a lot of water molecules channel between the chromophore and the solvent allowing a proton transfer. We conclude that isomerization and protonation are successive processes.In the case of the protein EosFP, we first analyze the effect of a water molecule which is found only in some of the crystallographic structures.Molecular dynamics of the protein with the chromophore in the ground state show that the water molecule doesn’t play any role neither in the hydrogen bond network nor in the absorption spectra.On the contrary, in the excited state, dynamics without this water show a significant faster decay of fluorescence that those with the molecule.In addition, those dynamics have demonstrate that during long period, the protein retains the chromophore in geometries in which it is unable to convert to the ground state, neither by fluorescence nor by internal conversion. Those “dark” geometries play a crucial role in the photophysics.To take them into account, we calculate the quantum yield and the fluorescence lifetime by direct integration along trajectories and by a kinetic scheme. We obtain a good qualitative agreement with the two methods

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Brouette, Nicolas. „Influence des propriétés interfaciales de couches organiques sur l'adsorption de protéines globulaires“. Doctoral thesis, Universite Libre de Bruxelles, 2012. http://hdl.handle.net/2013/ULB-DIPOT:oai:dipot.ulb.ac.be:2013/209645.

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Dans ce travail, l'adsorption de protéines globulaires sur des surfaces modifiées a été investiguée par ellipsométrie et par réflectivité de neutrons.

L'adsorption de myoglobine deutérée sur des monocouches hydrophobes d'OTS et de PS a été étudiée par réflectivité de neutrons pour des solutions de protéines de différentes concentrations (de 1 mg/ml à 0.01 mg/ml). A basse concentration, les protéines adsorbées se dénaturent et s'étalent sur le substrat hydrophobe et l'adsorption résulte en une fine couche dense en protéines. Sur le PS, les protéines s'étalent moins, ce qui est en accord avec la moindre hydrophobicité du PS. A haute concentration, une couche supplémentaire peu dénaturée est observée au-dessus de la première couche.

La cinétique d'adsorption primaire de HSA a été étudiée par ellipsométrie sur des brosses de PEG (Mw = 35700 Da) de différentes densités de greffage. Les résultats confirment que les brosses de PEG répriment l'adsorption de protéines. En outre, l'adsorption est très rapide sur le PS, tandis que sur les brosses, l'adsorption est plus lente. Le comportement à temps long de la quantité adsorbée Γ en fonction de la densité de greffage σ est en accord semi-quantitatif avec une théorie développée par Halperin et basée sur les différentes contributions à l'énergie libre d'une protéine adsorbée. Il a également été mis en évidence un régime pour lequel le taux d'adsorption dΓ/dt décroît exponentiellement avec la quantité de protéines adsorbées Γ.

L'adsorption de protéines (lysozyme, HSA et myoglobine) a ensuite été étudiée sur des brosses de PNIPAM en fonction des paramètres de la brosse et de la température. Les brosses ont été greffées par ATRP à partir d'une monocouche d'OEG (oligo éthylène glycol) silanisé contenant du brome comme initiateur. Il a été montré que l'adsorption primaire sur la surface de greffage est inférieure à 0.1 mg/m^2 et que l'adsorption ternaire dans la brosse, en dessous et au-dessus de la LCST, ne dépasse pas 1 mg/m^2 (~ 2% de fraction volumique en protéines). La résistance à l'adsorption a été associée à la présence d'une région hydrophile superficielle qui pourrait présenter une barrière cinétique à l'adsorption des protéines dans le cœur moins polaire de la brosse.

L'ensemble de ces résultats montre que les propriétés interfaciales du substrat jouent un rôle crucial dans les processus d'adsorption des protéines.

Doctorat en Sciences
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Moussa, Myriam. „Les transporteurs de caroténoïdes et de la vitamine E : identification et effet de leurs polymorphismes génétiques sur l'absorption/le statut en ces micronutriments“. Aix-Marseille 2, 2009. http://www.theses.fr/2009AIX20667.

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Les caroténoïdes et la vitamine E sont des microconstituants lipidiques d’origine végétale. Leur consommation est associée à une diminution du risque de certaines maladies chroniques telles que les maladies cardiovasculaires, certains types de cancers ou la dégénérescence maculaire liée à l’âge. Ces dernières années, plusieurs études se sont intéressées aux mécanismes moléculaires de l’absorption de ces molécules. Ces études ont mis en évidence le rôle d’un transporteur intestinal du cholestérol, le Scavenger Receptor Class B Type I (SR-BI) dans l’absorption de la vitamine E, du β-carotène et de la lutéine. Dans la première partie de cette thèse, nous avons montré l’implication de SR-BI dans le captage apical de deux autres caroténoïdes, le lycopène et l’α-carotène. Au niveau basolatéral, nous avons montré l’implication de l’ATP Binding Cassette A1 (ABCA1) dans l’efflux de la vitamine E. Nous nous sommes intéressés par la suite à deux autres transporteurs, le Niemman Pick Like 1 C1 (NPC1L1) transporteur intestinal du cholestérol, et le Cluster Determinant 36 (CD36) transporteur adipocytaire des acides gras à longue chaîne. Dans nos conditions d’étude, nous avons montré que le premier n’était pas impliqué dans l’absorption entérocytaire du lycopène, alors que le second semble jouer un rôle dans le captage de caroténoïdes par les adipocytes. Dans la seconde partie de ce travail, nous avons montré l’effet de variations au niveau de gènes impliqués dans le métabolisme lipidique sur les concentrations sanguines de caroténoïdes et de la vitamine E. Ces résultats apportent de nouveaux éléments expliquant la grande variabilité interindividuelle d’absorption des caroténoïdes et de la vitamine E, et pourraient notamment être pris en compte à terme, pour affiner les recommandations nutritionnelles.

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L'Heureux-Bouron, Diane. „Rôle des facteurs pré et post-absorptifs dans la dépression de la prise énergétique induite par les régimes hyperprotéiques chez le rat“. Paris 11, 2004. http://www.theses.fr/2004PA112074.

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Les regimes hyperproteiques (hp) induisent une depression de la prise energetique chez le rat. Les mecanismes qui sous-tendent cette depression sont mal connus. L'objet de cette these a ete d'une part, d'analyser dans ce phenomene, les roles des facteurs pre-absorptifs (aversion gustative conditionnee, palatabilite, volume de l'estomac) et post-absorptifs (concentration plasmatique et cerebrale d'acides amines). Il a ete d'autre part de determiner les roles du nerf vague, des recepteurs-ccka et enfin des transporteurs des acides amines du systeme a presents au niveau des neurones et cellules gliales de zones du cerveau suspectees de participer au controle de la prise alimentaire. Nous avons montre que la depression de la prise alimentaire induite par les regimes hp n'est pas le fruit d'une aversion gustative conditionnee et que les facteurs pre-absorptifs oro-pharynges (faible palatabilite des regimes hp) et gastriques (volume de l'estomac) n'ont pas de role preponderant dans ce phenomene. Le nerf vague n'est pas non plus une voie determinante dans le transfert des informations au cerveau aboutissant a cette depression de la prise alimentaire tandis que les recepteurs-ccka peripheriques et/ou centraux sont partiellement impliques. Enfin, l'augmentation de la concentration de certains acides amines dans le milieu extracellulaire active les transporteurs du systeme a dans les neurones de l'aera postrema, du noyau arque et du cortex piriforme anterieur, renforÇant l'idee de l'implication de ces zones dans ce phenomene. Nos resultats montrent que l'ingestion de proteines s'accompagne d'un effet satietogene vraisemblablement regit par de multiples mecanismes redondants
High protein (hp) diets induce an energy intake depression in rat. The mechanisms involved in this depression are not well understood. The aim of this these is to analyse in this phenomena, (i) the roles of pre-aborptive (conditioned taste aversion, palatability, gastric volume) and post-absorptive (brain and plasmatic amino acid concentration) factors and (ii) the respective roles of the vagus nerve, ccka-receptors and system a of amino acid transporters in neuronal and glial cells of some brain zones suspected to be involved in the control of food intake. We have shown that food intake depression induced by hp diet was not due to a conditioned taste aversion and that oro-pharyngeal (low palatability of hp diet) and gastric (gastric volume) pre-absorptive factors did not have a main role in this depression. The vagus nerve was not a decisive pathway for the mediation of information to the brain leading to food intake depression whereas peripheral and/or central ccka-receptors were partially involvement. Finally, the increase of some amino acid concentration in the extracellular medium induced system a amino acid transporters in neurons of the aera postrema, the arcuate nucleus and the anterior pyriform cortex reinforcing the idea of a possible involvement of these three zones in this phenomenon. Our results have shown that protein intake was accompanied by a satiating effect, certainly controlled by several redundant mechanisms

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Leclerc, Pierre-Louis. „Élaboration de nanoparticules de protéines de lactosérum comme système d'administration de quercétine en système gastro-intestinal“. Thesis, Université Laval, 2012. http://www.theses.ulaval.ca/2012/28400/28400.pdf.

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Etheve, Jocelyne. „Corrélation potentiel d'écoulement-concentration interfaciale de protéines à l'interface silice-solution : influence d'un traitement externe par de la poly(éthylèneimine) sur la pénétration du lysozyme à l'intérieur d'une membrane portant des groupes sulfonates“. Montpellier 2, 2003. http://www.theses.fr/2003MON20004.

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Taulemesse, François. „Analyse écophysiologique et génétique de l’absorption d’azote post-floraison chez le blé tendre (Triticum aestivum L.) en relation avec la concentration en protéines des grains“. Thesis, Clermont-Ferrand 2, 2015. http://www.theses.fr/2015CLF22581/document.

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La concentration en protéines des grains est un critère qualitatif majeur qui conditionne la valeur économique et technologique du blé tendre (Triticum aestivum L.). Cependant, la forte relation négative existant entre concentration en protéines et rendement en grains implique que l’amélioration de la concentration en protéines par une approche génétique soit complexe à atteindre sans impacter négativement le rendement. Pour contourner cette difficulté, il a été proposé qu’une sélection variétale basée sur l’écart à cette relation négative (nommé Grain Protein Deviation ; GPD) permette d’améliorer la concentration en protéines indépendamment du rendement. Au niveau physiologique, le GPD est fortement corrélé à la capacité des génotypes à absorber de l’azote après floraison indépendamment de la quantité d’azote déjà absorbée à floraison, suggérant que la satiété en azote soit à la base de son établissement. Envisager une sélection sur la base du GPD nécessite cependant d’acquérir des connaissances approfondies des mécanismes impliqués dans la régulation de l’absorption d’azote par la satiété en azote, qui permettraient de cibler précisément des traits simples à quantifier et robustement associés à cette capacité accrue d’accumulation de protéines dans les grains.Cette étude se base sur deux expérimentations conduites en conditions contrôlées et une expérimentation au champ. Dans chacune de ces expérimentations, différents niveaux de fertilisation ont été appliqués en pré-floraison afin d’obtenir des statuts azotés contrastés à floraison. L’effet du statut azoté à floraison sur l’absorption post-floraison a ensuite été observé dans différentes conditions de disponibilités d’azote après floraison. Des mesures physiologiques et moléculaires ont été réalisées en parallèle des mesures d’absorption d’azote.Nous avons mis en évidence que l’absorption d’azote post-floraison présente une dynamique élaborée qui suppose qu’elle est soumise à des régulations complexes. Parmi celles-ci, le statut azoté des plantes à floraison conditionne en grande part la quantité d’azote absorbée dans les jours qui suivent la floraison (PANUprécoce , de floraison à floraison + 250 degrés-jour). La quantité de PANUprécoce se présente comme un déterminant fort de la concentration en protéines des grains du fait de la forte corrélation positive observée entre ces deux traits en conditions contrôlées et au champ, et ce indépendamment du niveau de rendement. L’étude de deux génotypes robustement contrastés pour le GPD a montré qu’à statuts azotés équivalents, la quantité de PANUprécoce est sujette à des effets génétiques qui tendent à confirmer l’impact de la variabilité génétique de satiété en azote sur l’établissement du GPD.Ces travaux ont permis de proposer des marqueurs du GPD potentiellement valorisables en sélection. Au niveau physiologique, la croissance des tiges après floraison se présente comme un marqueur prometteur du GPD car ce trait est fortement corrélé à la PANUprécoce. Au niveau moléculaire, la concentration en nitrates des racines, également soumise à des effets génétiques, est proposée comme marqueur potentiel du fait de son rôle probable dans la régulation expressionnelle des gènes impliqués dans l’absorption et l’assimilation d’azote
Grain protein concentration is one of the major qualitative criteria of bread wheat (Triticum aestivum L.) economic and technological value. However, the negative relationship existing between protein concentration and grain yield implies that grain protein concentration improvement is complex to achieve without detrimental effect on grain yield. Breeding programs based on the deviation to this negative relationship (Grain protein deviation of GPD) have been proposed to be a suitable strategy to improve grain nitrogen concentration without detrimental effects on yield. At a physiological level, GPD is strongly correlated with genotypes aptitude to uptake nitrogen after flowering independently of the nitrogen amount already taken up before this stage, suggesting that satiety for nitrogen could be involved in its establishment. Breeding for GPD implies however a more detailed knowledge of the processes implied in nitrogen uptake regulation by nitrogen plant satiety. This would allow targeting traits both simple to measure and robustly associated with this increased capacity to accumulate proteins in grains.The present study is based on two experiments carried on under controlled conditions and a third led under field conditions. In all experiments, various levels of pre-flowering fertilization were applied in order to obtain contrasted plant nitrogen status at flowering. Nitrogen status effect on post-flowering nitrogen uptake was observed under various post-flowering N availability conditions. Physiological and molecular measurements were carried out in parallel with uptake measurements.We highlighted that post-flowering nitrogen uptake has an elaborate dynamic, suggesting the involvement of complex regulations. Among these, plant nitrogen status at flowering determines to a great extent the amount of nitrogen taken up during the days following flowering (early PANU, from flowering to flowering +250 °C.days-1). Early PANU appears to be a strong determinant of grain protein concentration, as strong positive correlations were observed between these two traits both under controlled conditions and field conditions, independently of grain yield level. The study of two genotypes strongly contrasted for GPD highlighted that, despite comparable N status, early PANU is subjected to strong genetic variations which tend to identify N satiety as a determinant of GPD.The present study identified robust markers of GPD of potential use in plant breeding. At a physiological level, post flowering stem elongation appears to be a promising marker of GPD since this trait is strongly correlated with early PANU. At a molecular level, root nitrate concentration, a trait submitted to genetic variations, is also proposed as a marker of GPD because of its role in the expression regulation of the genes governing nitrogen uptake and assimilation

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Rungkat-Zakaria, Fransiska. „Etude de l'allergénicité de la caséine bovine : Réponse proliférative des lymphocytes en mastocytes à l'alimentation en caséine et mise en évidence de l'absorption intestinale des antigènes chez des souris“. Nancy 1, 1991. http://docnum.univ-lorraine.fr/public/SCD_T_1991_0110_RUNGKAT_ZAKARIA.pdf.

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L'ingestion de la caséine par des souris à raison de 100 mg/jour entraine une réponse lymphoblastique in vitro. Les processus d'hydrolyse par les enzymes digestives n'éliminent pas les déterminants antigéniques de la caséine. La production d'igg totale n'est pas accompagnée par la production d'igg spécifiques. Il n'existe pas d'indication de production d'ige par les souris. Cependant, l'accumulation d'histamine dans les mastocytes a été observée. Les résultats des expériences d'absorption intestinale en utilisant les sacs intestinaux retournés de souris montrent des passages des antigènes issus des caséines et de leurs hydrolysats obtenus par l'action des enzymes digestives. L'absorption de fragments issus de la caséine et de ses hydrolysats de poids moléculaires inferieurs à 3000 da a été mise en évidence. Ces fragments ainsi absorbés contiennent toujours des sites antigéniques. L'antigenicite des caséines natives et de leurs hydrolysats est retrouvée dans les fractions clhp testées. Les étapes de la sensibilisation par les caséines peuvent être résumées comme suit : consommation des caséines (antigènes) --- absorption des peptides antigéniques (p. M. 3000 da) --- sensibilisation des lymphocytes.

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Reisch, Andreas. „Anti-fouling polyelectrolyte multilayers based on phosphorylcholine bearing polyelectrolytes : Studies at rest and under stretching“. Strasbourg, 2009. https://publication-theses.unistra.fr/restreint/theses_doctorat/2009/REISCH_Andreas_2009.pdf.

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Des polyélectrolytes (PEL) modifiés avec phosphorylcholine (PC) et triéthylène glycol (EO)3 furent intégrés dans des multicouches de polyélectrolytes (PEL ML) afin de créer des surfaces résistant à l´adsorption de protéines et à l´adhésion de cellules. Différents PEL modifiés avec PC reliée par différents espaceurs furent synthétisés. Des précurseurs contenant la PC et l´espaceur sont synthétisés par réaction de POCl3 avec la choline et l'alcool adéquat et ensuite couplés par une liaison amide aux PEL. L´adsorption des PEL modifiés sur des PEL ML et de protéines sur ces surfaces fut étudiée par QCM et OWLS. La quantité de protéines adsorbée dépendait des propriétés de la dernière couche adsorbée, notamment de sa charge, structure, hydratation ainsi que du type et du nombre des groupes PC et (EO)3. Des surfaces quasiment résistantes furent obtenues avec du poly acide acrylique modifié par (EO)3PC ou par (EO)3. Ces films gardent leur caractère résistant même sous étirement du substrat
Polyelectrolytes (PEL) modified with phosphorylcholine (PC) and triethylene glycol (EO)3 groups were integrated into polyelectrolyte multilayers (PEL ML) in the aim of creating protein and cell resistant surfaces. We synthesized various PEL modified with PC groups linked through different spacers. Precursor molecules comprising the PC group and the spacer were synthesized by reaction of POCl3 with choline and a suitable alcohol. These precursor molecules were then coupled to the PEL through an amide bond. Adsorption of these modified PEL on PEL ML and protein adsorption thereon were studied by QCM and OWLS. Protein adsorption depended on the properties of the adsorbed top layer, especially its charge, structure, hydration and type and number of PC and (EO)3 groups. Practically protein and cell resistant surfaces were obtained using poly acrylic acid modified either with (EO)3PC or (EO)3 groups. These surfaces also retain their anti-fouling properties under stretching of the substrate

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Simon, Anne. „Intérêt de la microscopie de force atomique sur la biofonctionnalisation de matériaux : caractérisation du greffage et de l'adhésion cellulaire“. Bordeaux 1, 2002. http://www.theses.fr/2002BOR12583.

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Cette étude se situe dans le contexte de la conception de biomatériaux biofonctionnalisés. Nous proposons ici de développer de telles surfaces par le greffage d'une monocouche de peptides adhésion de type RGD. Le greffage du peptide est ainsi bien établi et caractérisé par mouillabilité, XPS, PM-IRRAS, et MFA. La seconde stratégie consiste à adsorber des protéines adhésives sur des surfaces de silice silanisée. La MFA montre ensuite sa potentialité dans létude de cellules vivantes, dans leur milieu de culture. Différents états d'adhésion de ces cellules sont établis suivant la surface de dépôt. La perte d'adhérence est testée pour chaque condition envisagée, en appliquant une force extérieure avec la sonde du MFA. L'évolution du comportement dynamique des cellules est ensuite suivie. Nous présentons enfin une nouvelle approche pour corréler les propriétés mécaniques des cellules osseuses à leur état d'adhésion, à partir de l'analyse d'images obtenues par MFA.

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Gattuso, Hugo. „Photosensibilisation de l’ADN : modélisation des interactions entre la lumière et les systèmes moléculaires complexes“. Thesis, Université de Lorraine, 2017. http://www.theses.fr/2017LORR0101/document.

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Le travail présenté dans ce manuscrit est basé sur l’utilisation de la modélisation moléculaire, de la simulation et de la chimie théorique pour l’étude de la photosensibilisation de l’ADN ; c’est à dire l’augmentation de la sensibilité de l’ADN vis-à-vis de la lumière au travers de l’action d’agents photosensibilisants. Premièrement, les voies photophysiques et photochimiques de plusieurs molécules connues telles que nile bleu, nile rouge, BMEMC ou une base modifiée endogène, Pyo, ont été étudiés dans le but de comprendre leurs mécanismes de photosensibilisation. Les phénomènes associés qui ont été mis en évidence sont des transferts d’électrons et d’énergie, la production d’électrons solvatés et l’activation à deux photons. De plus, deux outils pour l’étude des interactions entre les molécules et l’ADN ont été dévellopés; i) un protocole calculatoire capable de fournir l’énergie libre d’interaction de drogues dans leurs poches; ii) un outil basé sur l’hamiltonien semi-empirique de Frenkel qui permet de modéliser le spectre de dichroïsme circulaire électronique de biomacromolécules. Ensuite, les effets de photolésions sur la structure et la flexibilité de l’ADN ont été étudiés ; i.e. les dimères de pyrimidines, la pyrimidine(6-4)pyrimidone (6-4PP) et les clusters de sites abasiques. Finalement, la reconnaissance de brins d’ADN lésés par des protéines de réparation et le rapport avec leurs activités enzymatiques a été analysé. Le lecteur peut se référer à la première partie de ce manuscrit pour une présentation vulgarisée du contexte de ce projet
The work presented in this manuscript is based on the use of molecular modeling, simulation and theoretical chemistry in order to study the photosensitization of DNA; i.e. the enhancement of the sensitivity of DNA to light through the action of a photosensitizing agent. A first aspect has been to study the photophysical and photochemical pathways of several known sensitizers such as nileblue, nilered, BMEMC or an endogenous modified nucleobase, Pyo, in order to understand their mechanisms of photosensitization. The related phenomena that have been observed are electron transfers, triplet-triplet energy transfers, production of solvated electrons and two-photons activations. Moreover, two tools have been developed to study the interaction between photosensitizing agents and DNA; i) a protocol able to provide the binding free energy of drugs in their interaction pockets; ii) a tool based on the semi-empirical Frenkel Hamiltonian to model the electronic circular dichroism of biomacromolecular systems in a straightforward way. Then the effects of photoinduced lesions on the DNA structure and flexibility have been investigated; i.e. cylcopyrimidine dimers (CPD), pyrimidine(6-4)pyrimidone (6-4PP) and cluster abasic sites. Finally the recognition of damaged DNA strands by repair enzymes is presented and the implication on enzymatic activities has been highlighted. The reader can refer to the first section of the manuscript for a popularized presentation of the project context

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Bogard, Matthieu. „Analyse génétique et écophysiologique de l'écart à la relation teneur en protéines - rendement en grains chez le blé tendre (Triticum aestivum L.)“. Phd thesis, Université Blaise Pascal - Clermont-Ferrand II, 2011. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00679581.

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Le rendement en grains (Rdt) et la teneur en protéines (%Prot) sont deux cibles majeures dans les programmes de sélection variétale chez le blé car ces caractères contribuent à la valeur économique de cette culture. Malheureusement, leur amélioration simultanée est empêchée par la relation négative %Prot-Rdt. Il a été montré que l'écart à cette relation ("Grain Protein Deviation", GPD) est déterminé en partie génétiquement et serait utile pour modifier cette relation négative mais ses bases biologiques restent mal comprises à ce jour. Nous avons montré que le GPD est principalement relié à la variabilité génétique pour l'absorption d'azote post-floraison (ABSN) dans les conditions agro-climatiques du Nord-Ouest de l'Europe. Nous proposons que la variabilité génétique pour l'accès à l'azote du sol (architecture et fonctionnement racinaire) ou pour la régulation de ABSN par le statut azoté (transport et assimilation de l'azote) pourrait expliquer le GPD. Etant donné que le retardement de la sénescence durant la période post-floraison peut résulter en une augmentation de ABSN, nous avons analysé les déterminants génétique des relations entre durée de sénescence des feuilles après floraison et Rdt ou %Prot, observées au niveau phénotypique, en utilisant des données acquises sur une population de cartographie de blé cultivée au sein d'un large réseau expérimental. Une association positive entre durée de sénescence des feuilles après floraison et %Prot ou Rdt a été observée selon les environnements étudiés. Nous faisons l'hypothèse que l'impact d'un retardement de la sénescence des feuilles après floraison pourrait être modulé selon la disponibilité en azote durant cette période, ce qui conduirait à modifier la relation %Prot-Rdt selon les environnements étudiés. Enfin, des données obtenues sur trois populations de cartographie cultivées dans un large réseau expérimental ont permis de suggérer, après méta-analyse de QTL, des régions génomiques potentiellement utiles en sélection pour améliorer la %Prot sans diminuer le Rdt. Ceci a permis de mettre en avant des régions situées sur les chromosomes 2A et 3B. En particulier, la région située sur le 2A pourrait être reliée à la présence d'un gène codant pour une glutamine synthétase chloroplastique qui a été associée à la variabilité génétique pour %Prot chez le blé tendre dans une étude antérieure.

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Oger, Samuel. „Analogues fluorescents de l'epicocconone et sondes pour le piégeage de produits naturels azaphiles“. Thesis, Normandie, 2017. http://www.theses.fr/2017NORMR035/document.

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L’étude des phénomènes biologiques et notamment du rôle des protéines au sein d’un mécanisme cellulaire est un défi pour les biologistes. L’avènement de la microscopie de fluorescence à excitation biphotonique et des techniques « super-résolutives » a permis l’amélioration des performances des techniques de microscopie classiques et l’application l’imagerie in vivo pour l’analyse des tissus biologiques. Ces techniques requièrent cependant l’emploi de sondes aux propriétés photophysiques optimisées en complément de la spécificité vis-à-vis de la ou des cible(s) biologique(s). L’epicocconone, une molécule naturelle profluorescente de la famille des azaphilones, est employée en protéomique pour la détection des protéines sur gel d’électrophorèse. Ce composé a la faculté de réagir avec les amines des résidus lysine des protéines pour former un adduit covalent énaminone hautement fluorescent dans le proche infrarouge (610 nm) sous irradiation UV (395 nm) ou visible (520 nm). Différents analogues synthétisés au sein du laboratoire ont permis d’étudier la relation structure-fluorescence de ces composés capables de détecter non spécifiquement les protéines du milieu étudié. Afin d’améliorer la spécificité de ces molécules en vue d’applications en imagerie, la synthèse de sondes polyfonctionnelles, via une réaction de cycloaddition 1,3 dipolaire azoture-alcyne catalysée au cuivre, associant un analogue de l’epicocconone à un agent de reconnaissance possédant une affinité particulière pour une cible biologique a été étudiée. La synthèse d’analogues de l’epicocconone optimisés pour l’absorption biphotonique a également été réalisée lors de cette thèse. Les propriétés optiques linéaires et non linéaires de ces composés ont été étudiées afin de sélectionner le meilleur composé pour des applications en imagerie par microscopie de fluorescence à excitation biphotonique. Enfin, la réactivité particulière des azaphilones a servi de point de départ au développement d’une stratégie d’identification et d’isolement de nouvelles molécules naturelles azaphiles grâce à l’utilisation de sondes à produits naturels capables de cibler spécifiquement ce type de composés
Understanding biological processes that involve proteins is a challenge for biologists. Two-photon excitation and super-resolution microscopy have improved drastically bioimaging techniques allowing in vivo deep tissue analysis. However those techniques require the use of optimized and selective fluorescent probes. Epicocconone is a natural profluorescent azaphilone widely used in proteomics for detecting proteins on electrophoresis gels. This compound can react reversibly with primary amines from lysines forming a covalent enaminone adduct that emits near infrared fluorescence light (610 nm) upon UV (395 nm) or visible (520 nm) excitation. Different analogues, that non-selectively bind to proteins, were previously synthesized in order to understand the structure-fluorescence relationship. The synthesis of polyfunctionnal probes was studied using copper-catalyzed azide-alkyne cycloaddition to connect the epicocconone scaffold to a recognition moiety, which can specifically recognise one biological target. New analogues optimized for two-photon absorption were synthesized. Their linear and non-linear optical properties were determined to select the most suitable molecule for two-photon excitation microscopy.In a last part, the particular reactivity of azaphilones was also regarded as a useful strategy for designing probes which could react specifically with azaphilic natural products in order to identify and isolate new ones

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Fournier, Clara. „Hydrophilisation de billes de polystyrène-divinylbenzène par adsorption de dérivés amphiphiles du dextrane : préparation et caractérisations structurales de nouveaux support pour la chromatographie des protéines“. Vandoeuvre-les-Nancy, INPL, 1996. http://docnum.univ-lorraine.fr/public/INPL_T_1996_FOURNIER_C.pdf.

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De nouvelles phases stationnaires pour la chromatographie liquide haute performance des protéines ont été préparées à partir de microsphères poreuses de polystyrène-divinylbenzène. Ce matériau étant très hydrophobe, il est nécessaire d'en modifier la surface afin de le rendre compatible avec la nature des biomolécules à séparer. Le procédé utilisé consiste à adsorber sur les particules, un polymère hydrophile tel que le dextrane. L’introduction de groupes phenoxy sur ce polysaccharide, à différentes concentrations, conduit à des dérivés amphiphiles capables de s'adsorber fortement sur le polystyrène. La couche de polymère déposée est stabilisée, dans les conditions optimales, par réticulation chimique à l'epichlorhydrine. Le taux de groupements phenoxy fixés sur le dextrane n'a pas une grande influence sur la quantité maximale de polymère qui peut être déposée sur le polystyrène mais est déterminant quant à l'aptitude des matériaux obtenus à adsorber les protéines. La porosité des supports préparés est étudiée tant à l'état sec par porosimétrie au mercure et par adsorption d'azote qu'à l'état solvate dans divers milieux aqueux et organiques par chromatographie d'exclusion stérique. Elle dépend non seulement de la composition et de la conformation de la couche adsorbée mais aussi de l'aptitude des dextranes modifiés à s'associer par le biais d'interactions phenoxy-phenoxy. Finalement, des billes poreuses de polystyrène, modifiées par adsorption à saturation d'un dextrane présentant un taux élevé en groupes phenoxy, sont testées en chromatographie d'exclusion stérique des protéines. Le dextrane étant un polymère facilement fonctionnalisable, de tels supports sont utilisables pour d'autres modes de chromatographies ; un exemple de purification de la trypsine par chromatographie d'affinité est donné

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Balme, Sébastien. „Spectroscopie de fluorescence dynamique confocale : réalisation du dispositif optique et application à l'étude de l'adsorption de protéines aux interfaces solide/liquide“. Phd thesis, Université Montpellier II - Sciences et Techniques du Languedoc, 2005. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00011288.

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La compréhension des phénomènes d'adsorption des protéines aux interfaces solides liquides est un élément clé dans la conception et l'utilisation de membranes artificielles et de matériaux biocompatibles. Devant la complexité des phénomènes, les études fondamentales et leurs modélisations revêtent une importance stratégique. Les techniques de fluorescence et de polarisation de fluorescence résolues dans le temps permettent à de très faible concentration d'obtenir des informations tant sur l'environnement direct que sur le mouvement d'une molécule émettrice. Par ailleurs, les techniques de fluorescence confocales rendent possibles quant à elles la visualisation d'un volume parfaitement localisé de l'ordre du femtolitre.
La fluorescence intrinsèque des protéines ou le marquage direct par un chromophore ne rendent pas toujours compte simplement du mouvements des protéines. De ce fait, Nous avons synthétisé une sonde fluorescente composée de biotine éthylènediamine et d'alexa fluor 594. Ce marquage permet d'obtenir un temps de corrélation unique l de 32 ns, compatible à celui attendu pour une protéine de géométrie sphérique de masse molaire de 66 KDa. Durant ce travail de thèse, nous avons développé un dispositif optique innovant permettant d'effectuer des études d'adsorption sous flux par des mesures de fluorescence et de polarisation de fluorescence résolues dans le temps en mode confocal. Le dispositif mise au point permet d'obtenir une résolution spatial de 1,2 µm soit un volume de l'ordre du femtolitre qu'il est possible de déplacer dans une cuve d'épaisseur de 230 µm. En fluorescence dynamique, les valeurs de temps de corrélation et de durée de vie de fluorescence obtenue sont similaires avec ceux obtenus en mesure de fluorescence classique.
Enfin, nous avons suivi la cinétique d'adsorption et l'évolution des profile de concentration de l'avidine lors du processus d'adsorption sur une surface modèle (mica) et sur une membrane d'hémodialyse (AN-69).

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Bindini, Elisa. „Understanding in vivo degradation of mesoporous silica therapeutic vectors through in situ ellipsometry“. Thesis, Sorbonne université, 2018. http://www.theses.fr/2018SORUS115/document.

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Dans les dernières 15 ans, la recherche biomédicale a exploré en profondeur l’utilisation de nanoparticules pour la délivrance ciblée de médicaments. Parmi plusieurs matériaux étudiés, la silice mésoporeuse représente une plateforme exceptionnelle pour ce type d’applications puisque elle est biocompatible et capable d’être chargé avec une quantité élevée de médicament, tout en étant facile à synthétiser et à fonctionnaliser. La connaissance des interactions entre nanoparticules de silice et environnement biologique est nécessaire pour concevoir des vecteurs thérapeutiques efficaces et pas toxiques. Cet étude a développé une nouvelle méthode d’analyse in situ pour suivre les interactions entre silice mésoporeuse et fluides biologiques réels (sérum et sang), employant une cellule d’analyse microfluidique et l’ellipsométrie en réflexion totale interne. Nous avons ainsi réalisé le suivi dynamique de la dégradation de vecteurs models à base de silice poreuse structuré dans une solution tampon à pH physiologique et une solution concentré de protéines. Ces analyses ont permis d’évaluer l’influence de la structure poreuse, de l’adsorption de protéines sur la surface et de la vitesse du flux sur la dissolution de la silice mésoporeuse
Dans les dernières 15 ans, la recherche biomédicale a exploré en profondeur l’utilisation de nanoparticules pour la délivrance ciblée de médicaments. Parmi plusieurs matériaux étudiés, la silice mesoporeuse représente une plateforme exceptionnelle pour ce type d’applications puisque elle est biocompatible et capable d’être chargé avec une quantité élevée de médicament, tout en étant facile à synthétiser et à fonctionnaliser .La connaissance des interactions entre nanoparticules de silice et environnement biologique est nécessaire pour concevoir des vecteurs thérapeutiques efficaces et pas toxiques. Cet étude a développé une nouvelle méthode d’analyse in situ pour suivre les interactions entre silice mesoporeuse et fluides biologiques réels (serum et sang), employant une cellule d’analyse microfluidique et l’ellipsometrie en réflexion totale interne. Nous avons ainsi réalisé le suivi dynamique de la dégradation de vecteurs models à base de silice poreuse structuré dans une solution tampon à pH physiologique et une solution concentré de protéines. Ces analyses ont permis d’évaluer l’influence de la structure poreuse, de l’adsorption de protéines sur la surface et de la vitesse du flux sur la dissolution de la silice mesoporeuse

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Goncalves, Aurélie. „Optimiser le statut en vitamine D via la nutrition : des interactions alimentaires aux mécanismes d'absorption“. Thesis, Aix-Marseille, 2014. http://www.theses.fr/2014AIXM5018.

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Durant les dernières décennies, la vitamine D a été décrite comme un micronutriment d'intérêt, bénéfique pour la santé humaine, mais les mécanismes régissant son absorption intestinale ont été peu investigués. Il a longtemps été admis que son absorption était régie par un phénomène de diffusion passive. Nous avons tout d'abord montré qu'elle n'était pas uniquement passive mais impliquait des transporteurs membranaires du cholestérol tels que SR-BI, CD36 et NPC1-L1 et que des molécules pharmaceutiques utilisées pour inhiber l'absorption du cholestérol (Ezétimibe - Ezetrol®) pouvaient également diminuer celle de la vitamine D. Dans un second temps, nous avons montré que des composés présents au sein de notre alimentation comme les phytostérols pouvaient limiter l'absorption de la vitamine D. Au contraire, certains acides gras libres comme l'acide oléique pouvaient augmenter sa biodisponibilité. Ces données suggèrent que les autres composés lipidiques que nous consommons quotidiennement peuvent améliorer ou a contrario limiter l'absorption de la vitamine D. Pour finir, nous nous sommes intéressés aux mécanismes moléculaires en temps réel entre divers vecteurs lipidiques et les boucles extracellulaires de SR-BI et CD36 grâce à la technique de la résonnance plasmonique de surface. Nous avons montré que la nature et la composition des vecteurs lipidiques modulaient les interactions micelles-protéines. Ces travaux de thèse dégagent des perspectives prometteuses quant à l'avancement des connaissances et des mécanismes moléculaires régissant l'absorption intestinale de la vitamine D, et souligne le fait que nos choix alimentaires pourraient optimiser notre statut en vitamine D
Overs the last past decades, vitamin D has been described as a micronutrient of interest, beneficial to human health, but the mechanisms governing its intestinal absorption have been poorly investigated. Indeed, it has long been assumed that vitamin D was absorbed by a passive process. We first showed that vitamin D absorption was not only passive but involved membrane transporters including such as SR-BI, CD36 and NPC1-L1 and that pharmaceutical compounds used to inhibit cholesterol absorption (ei: Ezetimibe - Ezetrol ®) could also reduce vitamin D absorption. Then, we have shown that dietary molecules such as phytosterols could limit its absorption, while some free fatty acids such as oleic acid could increase its bioavailability. These data suggest that other dietary lipids daily consumed with vitamin D could improve or conversely limit its absorption. Finally, we investigated real-time interactions between various lipid ligands and scavenger receptors such as SR-BI and CD36 using the technique of surface plasmon resonance. This highlighted the fact that mixed-micelle lipid composition could modulate their interactions with these proteins.This thesis bring promising prospects in the advancement of knowledge and molecular mechanisms regulating vitamin D intestinal absorption, and enlightens the fact that our food choices could lead to an optimization of our vitamin D status

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Huang, Tongtong. „Protein adsorption and denaturation in injectable devices for pharmaceutical applications“. Thesis, Mulhouse, 2016. http://www.theses.fr/2016MULH8373.

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Protéines sont largement utilisés dans la formulation dans le domaine pharmaceutique et de jouer un rôle important dans les fonctions biologiques. Il est bien connu que l'adsorption de protéines sur la surface solide est toujours observé pour un stockage à long terme, ce qui entraînera une réduction de la dose de substance active ou une perte de l'activité biologique. Dans certains cas, une courte période de contact avec la surface est suffisante pour modifier fortement la conformation des protéines : par exemple, l'insuline pertes 52% de son activité biologique après 5 minutes de contact avec la surface de verre, ainsi qu'une perte de 30% d’activité biologique du cétrorélix est observé après 2 heures de contact. Parmi tous les paramètres, la dénaturation des protéines est fortement liée à sa stabilité des propriétés de surface. La compréhension de l'adsorption de protéines est devenue une question cruciale dans l'industrie pharmaceutique.Pour mieux comprendre le comportement des protéines à la surface, la quantification des protéines adsorbées et sa conformation devrait être étudiée. L'objectif de notre recherche sera de comprendre les comportements des protéines sur différents surfaces de seringue pré - remplie classique.Le principal objectif de ce projet est de comprendre le comportement de plusieurs modèles de protéines comme la sérum d’albumine bovine (BSA), le lysozyme (LSZ) et la myoglobine (MGB) en contact avec des surfaces de seringues pré-remplie comme le verre et l’élastomère. Nous proposons d'utiliser la chromatographie liquide à haute performance (HPLC) pour la quantification de protéine adsorbée sur une surface plane en déterminant la déplétion des protéines en solution. La réflexion totale atténuée infrarouge à transformée de fourier (FTIR-ATR) spectroscopie est utilisée de suivre les changements structurels des protéines adsorbées sur des surfaces solides. [...]
Proteins are widely used in formulation in the pharmaceutical field and play a major role in biological functions. It is well known that protein adsorption on solid surface is always observed for a long-term storage, which will result in a reduced dose of active compound or a loss of biological activity. In some cases, only short time of contact are sufficient to drastically modify the protein conformation: for instance, insulin losses 52% of its biological activity after 5 minutes contacting with glass surface, as well as a loss of 30% of cetrorelix is observed after 2 hours. Among all parameters, the time frame of the denaturation process is strongly related to the protein stability and surface properties. The understanding of protein adsorption has therefore become a crucial issue in the pharmaceutical industry.To gain a better understanding of proteins’ behavior on the surface, adsorbed protein quantification and its conformation should be studied. The objective of our research in a first will be to understand proteins’ behaviors on various surfaces which composed a classical prefilled syringe.The main goal of this PhD project is to understand the behaviors of several model proteins like bovine serum albumin (BSA), lysozyme (LSZ) and myoglobin (MGB) in contact with the surfaces of prefilled syringes such as glass and elastomer. We propose to use the high performance liquid chromatography (HPLC) to quantify the amount of protein adsorbed on a flat surface by determining the depletion of the proteins in solution. Fourier transform infrared-attenuated total reflection (FTIR-ATR) spectroscopy was as well as employed to follow the structural changes of adsorbed BSA on solid surface. [...]

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Bindini, Elisa. „Understanding in vivo degradation of mesoporous silica therapeutic vectors through in situ ellipsometry“. Electronic Thesis or Diss., Sorbonne université, 2018. https://accesdistant.sorbonne-universite.fr/login?url=https://theses-intra.sorbonne-universite.fr/2018SORUS115.pdf.

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Dans les dernières 15 ans, la recherche biomédicale a exploré en profondeur l’utilisation de nanoparticules pour la délivrance ciblée de médicaments. Parmi plusieurs matériaux étudiés, la silice mésoporeuse représente une plateforme exceptionnelle pour ce type d’applications puisque elle est biocompatible et capable d’être chargé avec une quantité élevée de médicament, tout en étant facile à synthétiser et à fonctionnaliser. La connaissance des interactions entre nanoparticules de silice et environnement biologique est nécessaire pour concevoir des vecteurs thérapeutiques efficaces et pas toxiques. Cet étude a développé une nouvelle méthode d’analyse in situ pour suivre les interactions entre silice mésoporeuse et fluides biologiques réels (sérum et sang), employant une cellule d’analyse microfluidique et l’ellipsométrie en réflexion totale interne. Nous avons ainsi réalisé le suivi dynamique de la dégradation de vecteurs models à base de silice poreuse structuré dans une solution tampon à pH physiologique et une solution concentré de protéines. Ces analyses ont permis d’évaluer l’influence de la structure poreuse, de l’adsorption de protéines sur la surface et de la vitesse du flux sur la dissolution de la silice mésoporeuse
Dans les dernières 15 ans, la recherche biomédicale a exploré en profondeur l’utilisation de nanoparticules pour la délivrance ciblée de médicaments. Parmi plusieurs matériaux étudiés, la silice mesoporeuse représente une plateforme exceptionnelle pour ce type d’applications puisque elle est biocompatible et capable d’être chargé avec une quantité élevée de médicament, tout en étant facile à synthétiser et à fonctionnaliser .La connaissance des interactions entre nanoparticules de silice et environnement biologique est nécessaire pour concevoir des vecteurs thérapeutiques efficaces et pas toxiques. Cet étude a développé une nouvelle méthode d’analyse in situ pour suivre les interactions entre silice mesoporeuse et fluides biologiques réels (serum et sang), employant une cellule d’analyse microfluidique et l’ellipsometrie en réflexion totale interne. Nous avons ainsi réalisé le suivi dynamique de la dégradation de vecteurs models à base de silice poreuse structuré dans une solution tampon à pH physiologique et une solution concentré de protéines. Ces analyses ont permis d’évaluer l’influence de la structure poreuse, de l’adsorption de protéines sur la surface et de la vitesse du flux sur la dissolution de la silice mesoporeuse

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Geissler, Alexandre. „Elaboration d'une nouvelle catégorie de surfaces adaptives sensibles à un stimulus mécanique“. Phd thesis, Université de Haute Alsace - Mulhouse, 2009. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00558988.

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Un matériau adaptatif ou " intelligent " est capable de modifier spontanément ses propriétés physico-chimiques en réponse à un stimulus (température, pH, etc.). Les surfaces sensibles à un stimulus mécanique constituent une nouvelle catégorie de matériaux adaptatifs capables de montrer des changements de propriétés de surface sous l'effet d'une contrainte mécanique. Dans ce contexte, ces travaux se concentrent sur l'adsorption d'objets biologiques tels que des protéines sur un support élastique. L'objectif étant de contrôler cette adsorption en fonction du taux d'étirement du substrat. Les élastomères de silicone (PDMS), de par leur élasticité et leur faible toxicité, constituent des supports de choix pour l'élaboration de telles surfaces. Ces matériaux polymère sont largement utilisés dans le domaine médical et en microfluidique.La première étape d'élaboration consiste à rendre la surface du support de PDMS chimiquement réactive. Pour des temps de traitement courts, la polymérisation plasma de l'anhydride maléique permet d'introduire des groupements réactifs à la surface du PDMS, tout en conservant ses propriétés élastiques à l'échelle locale.Les substrats de PDMS traités présentent des propriétés acide-base de surface qui sont caractéristiques des groupements diacide du film polymère plasma. Le degré d'ionisation et les propriétés d'adhésion de ces surfaces sont étudiés en fonction du pH. L'évolution de ces propriétés sous élongation atteste de l'effet de dilution des groupements réactifs de surface.Le support étirable et réactif est ensuite fonctionnalisé avec des systèmes constitués de polymères et de récepteurs spécifiques. D'une part, les chaînes de poly(éthylèneglycol) (Peg) présentent des propriétés de résistance à l'adsorption de protéines. D'autre part, la biotine est un récepteur capable de se lier spécifiquement à une protéine, la streptavidine. En combinant le greffage covalent des Pegs et de la biotine sur le substrat de PDMS, on obtient une surface bi-fonctionnelle. L'objectif est de masquer la biotine avec les Pegs lorsque le substrat est à l'état relaxé, puis de promouvoir l'adsorption spécifique de la streptavidine sous élongation, afin d'obtenir un système de reconnaissance moléculaire sensible à un stimulus mécanique.

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Martocq, Laurine. „Influence des nanoparticules d’argent élaborées par procédé plasma sur la conformation de la fibronectine“. Master's thesis, Université Laval, 2020. http://hdl.handle.net/20.500.11794/66601.

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L’objectif de ce projet est d’étudier l’influence de nanoparticules d’argent intégrées dans une matrice organosiliciée sur l’organisation de la fibronectine. L’argent étant connu depuis des siècles pour ses propriétés antibactériennes, l’étude de l’adsorption de protéines au contact de ces nanoparticules est essentielle en vue d’une utilisation dans le domaine biomédical. Dans un premier temps, les nanoparticules ont été intégrées dans une matrice organosiliciée, le tout synthétisé par plasma à basse pression. La présence d’argent dans le plasma durant le dépôt a été analysée par spectroscopie d’émission optique. Puis, la fibronectine a été adsorbée sur les surfaces pour étudier l’influence des nanoparticules. Les surfaces ont été caractérisées par différentes techniques notamment par spectroscopie photoélectronique par rayons X pour identifier la présence d’argent et de la fibronectine. La rugosité des surfaces a également été analysée par microscopie à force atomique et des mesures d’angle de contact dynamique ont été réalisées. Enfin, pour quantifier la fibronectine sur les surfaces et pour connaître l’organisation de la protéine, des tests ELISA ont été effectués.
The objective of this project is to study the influence of silver nanoparticles embedded in an organosilicon matrix on the fibronectin organization. Silver is known for its antibacterial properties for several centuries, the study of protein adsorption in contact of these nanoparticles is essential for a use in biomedical field. First, nanoparticles were embedded in an organosilicon matrix, all synthetized by low-pressure plasma. Presence of silver in the plasma during the deposition was analyzed by optical emission spectroscopy. Then, fibronectin was adsorbed on the surfaces to study the influence of silver nanoparticles. Surfaces were characterized by different methods, especially by X-ray photoelectron spectroscopy to identify the presence of silver and fibronectin. Roughness of the surfaces was analyzed by atomic force microscopy and dynamic contact angle measurements were realized. Finally, to quantify the fibronectin adsorbed on the surfaces and to know the protein organization, ELISA tests were performed.

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Agathangelou, Damianos. „Anabaena Sensory Rhodopsin : effect of mutations on the ultrafast photo-isomerization dynamics“. Thesis, Strasbourg, 2019. http://www.theses.fr/2019STRAE001/document.

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ASR, est une protéine photo réceptrice qui lie la base protonée de la rétine de Schiff dans deux conformations de l'état fondamental. La protéine particulière consiste en un système modèle dans lequel I'effet de l'environnement protéique sur la dynamique d'isomérisation des deux isomères peut être étudié. Dans cette thèse, une étude approfondie sur les protéines mutées ponctuellement est présentée, où la variable est l'environnement protéique. Les résultats montrent des différences significatives entre les durées de vie des états excités des deux isomères et les durées de vie plus courtes ou plus longues commentées en termes de mélange électronique Sl/S2. En complément, le développement expérimental d'un spectromètre à absorption transitoire (T.A) et d'un dispositif de spectroscopie électronique bidimensionnelle (2DES) fonctionnant respectivement dans les domaines spectral NIR et UV-Vis. Avec cette configuration, deux impulsions colinéaires à verrouillage de phase d'une durée inférieure à 10fs sont générées, où. la précision interférométrique sur le contrôle du retard entre les deux impulsions de pompe permet d'effectuer des mesures 2DES
ASR, is a photoreceptor protein that binds the protonated Schiff base of retinal in two ground state conformations. The particular protein consists a model system where the effect of the protein environment on the isomerization dynamics of the two isomers can be investigated. In this thesis an extended study on point mutated proteins is presented where the variable is the protein environment. The results show significant differences between the two isomers excited state lifetimes with the shorter or longer lifetimes commented in terms of Sl/S2 electronic mixing. Supplementary, the experimental development of a Transient absorption spectrometer (T.A) and a Two-dimensional electronic spectroscopy setup (2DES) operating in the NIR and UV-Vis spectral range respectively are described. The 2DES spectrometer is based on translating wedges made out of birefringent material producing two collinear phase-locked pulses with sub-I Ofs duration. The interferometric precision on controlling the delay between the two pump pulses allows to perform 2DES measurements on systems absorbing in the 360-430 nm range allowing to resolve the excitation process spectrally

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Baud, Grégory. „Modulation de l’absorption intestinale postprandiale du glucose apès Roux-en-Y Gastric Bypass chez le miniporc“. Thesis, Lille 2, 2016. http://www.theses.fr/2016LIL2S042/document.

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Le DT2 est caractérise par un défaut combiné de la sécrétion et de l’action de l’insuline. Depuis près d’un demi siècle la chirurgie bariatrique et notamment le Roux-en-Y Gastric Bypass (RYGB) ont montré des effets spectaculaires sur le contrôle glycémique remettant en question le paradigme de la prise en charge médicale du DT2. L’exclusion gastro duodénale induite par le RYGB améliore le métabolisme glucidique indépendemment de la perte de poids. Ainsi les modifications du flux biliaire semblent jouer un rôle, cependant les mécanismes sous-jacents ne sont pas clairs. Nous avons réalisés des RYGB chez le miniporc et nous avons montré que l'absorption intestinale du glucose est diminuée dans l’anse alimentaire (AL) dépourvue de bile. L'absorption du glucose dans l’AL était restaurée par l'ajout de la bile, et cet effet était inhibé lorsque le co transport actif sodium glucose 1 (SGLT1) était bloquée par la phlorizine. SGLT1 restait exprimée dans la AL, cependant la teneur dans la lumière de l’intestin en sodium était nettement diminuée. L’ajout de sodium dans l'AL provoquait le même effet que la bile sur l'absorption du glucose et augmentait également l’excursion glycémique post prandiale chez le miniporc au cours d’un repas test vigil. La diminution de l'absorption intestinale du glucose après RYGB a ensuite été confirmée chez l'homme. Nos résultats démontrent que la l’exclusion biliaire affecte le métabolisme post prandiale du glucose par modulation des co transporteurs intestinaux sodium-glucose
Type 2 diabetes (T2D) is characterized primarily as a combined defect of insulin secretion and insulin action. For nearly a decade, the somewhat mysterious but spectacular benefit of metabolic surgery, and more specifically of Roux-en-Y gastric bypass (RYGB), on glucose control has been caused a questioning the current paradigm of T2D management. Gastro-intestinal exclusion by RYGB improves glucose metabolism, independent of weight loss. Although changes in intestinal bile trafficking have been shown to play a role, the underlying mechanisms are unclear. We performed RYGB in minipigs and showed that the intestinal uptake of ingested glucose is blunted in the bile deprived alimentary limb (AL). Glucose uptake in the AL was restored by the addition of bile, and this effect was abolished when active glucose intestinal transport was blocked with phlorizin. Sodium-glucose cotransporter 1 remained expressed in the AL, while intraluminal sodium content was markedly decreased. Adding sodium to the AL had the same effect as bile on glucose uptake. It also increased postprandial blood glucose response in conscious minipigs following RYGB. The decrease in intestinal uptake of glucose after RYGB was confirmed in humans. Our results demonstrate that bile diversion affects postprandial glucose metabolism by modulating sodium-glucose intestinal cotransport

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Baigl, Damien. „Etude expérimentale de polyélectrolytes hydrophobes modèles“. Phd thesis, Université Pierre et Marie Curie - Paris VI, 2003. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00003620.

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Un polyélectrolyte hydrophobe est un polymère portant des charges électriques lorsqu'il est en solution aqueuse et dont l'eau est un mauvais solvant pour le squelette. Cette thèse a pour objectif d'établir l'influence de la nature hydrophobe du squelette sur les propriétés physiques des polyélectrolytes. Pour cela, nous avons tout d'abord synthétisé une série de poly(styrène-\emph(co)-styrènesulfonate de sodium), appelés PSS, possédant des taux de charge $f$ variant entre 30\% et 100\% et comportant entre $N=120$ et $N=2520$ monomères par chaîne. Ces PSS sont caractérisés précisément et peuvent être considérés comme des polyélectrolytes hydrophobes modèles. Nous avons alors étudié leurs propriétés volumiques puis interfaciales.\\ \emph(1. Propriétés en volume.) Le taux de charge effectif de la chaîne unique est anormalement réduit par rapport au cas du polyélectrolyte hydrophile. D'autre part, les propriétés structurales ont été caractérisées par la diffusion des rayons X et la technique de la sonde colloïdale en microscopie à force atomique (AFM). La conformation des chaînes se fait ressentir puisque la longueur de corrélation varie comme $N^0C_p^(-\alpha)$ où $C_p$ est la concentration en polymère et $\alpha$ un exposant dépendant de $f$, décroissant de 1/2 ($f=100\%$) à 1/3 au voisinage de la limite de solubilité. Ces observations sont interprétées dans le cadre d'un modèle théorique prédisant la conformation de la chaîne isolée comme un collier de perles, constitué de globules denses (les perles) reliés deux à deux par un segment de chaîne étirée. La dynamique collective des chaînes, quant à elle, est très proche de celle des polyélectrolytes hydrophiles.\\ \emph(2. Propriétés aux interfaces.) Nous avons conçu une expérience permettant, par adsorption électrostatique ou hydrophobe, de fixer les chaînes de PSS sur une surface solide plane modifiée chimiquement. La couche de PSS adsorbée, immergée dans l'eau, est caractérisée $in~situ$ par ellipsométrie, réflectivité des rayons X haute énergie et microscopie à force atomique. Nous avons ainsi trouvé que la taille de perles varie entre 1 et 5 nm en fonction de $f$. Cette variation est en parfait accord avec les prédictions du modèle dit du collier de perles. Enfin, les polyélectrolytes hydrophobes s'adsorbent également aux interfaces hydrophobes, les perles, dans certains cas, s'étalant sur la surface.

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Sergeeva, Yulia. „Complexes ADN/polycation en solution et aux interfaces en tant que vecteurs de transfection non viraux de pointe“. Phd thesis, Université de Strasbourg, 2013. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-01064224.

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Ma thèse a porté sur des complexes de polyélectrolytes en solution et en films LbL pour la transfection de cellules et le contrôle des interactions cellule-surface. Il est possible de doser un agent de transfection et de l'ADN plasmidique dans des films LbL en ajustant le nombre de couches. Les efficacités de transfection avec différentes lignées cellulaires ont été au moins aussi bonnes que celles rapportées dans la littérature, mais sont restées globalement faibles. Différents nanobags ont également été systématiquement testés menant à un protocole de transfection très efficace avec une faible cytotoxicité pour des fibroblastes humains qui sont difficiles à transfecter. Nous avons pu identifier les architectures LbL qui permettent de contrôler l'adhésion cellulaire même en présence de sérum. Cela nous a permis d'introduire une nouvelle technique pour le suivi in situ de la transfection par QCM-D en suivant la mobilité du cytosquelette qui sera poursuivie dans un futur projet.

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Côté, Stéphanie. „Évaluation de la vitesse d'absorption de boissons spéciales (de récupération)“. Thèse, 2003. http://hdl.handle.net/1866/14908.

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Jean, Catherine. „Activité antimicrobienne de peptides provenant d’hydrolysats de protéines de babeurre, de lactoferrine et de pois“. Thèse, 2015. http://hdl.handle.net/1866/13385.

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Les antibiotiques sont fréquemment utilisés dans l’alimentation de la volaille afin de prévenir certaines maladies, dont l’entérite nécrotique, ce qui occasionne l’émergence de souches bactériennes résistantes aux antibiotiques. Une alternative prometteuse est l’utilisation de peptides antimicrobiens (AMPs) comme suppléments alimentaires, tels les AMPs provenant des produits laitiers. L’objectif du projet était de développer une méthode de production d’extraits peptidiques à partir de coproduits de la transformation alimentaire (babeurre, lactoferrine, isolat de protéines de pois), afin de tester si ces extraits peptidiques possédaient une activité antimicrobienne sur les pathogènes spécifiques aviaires suivants : Salmonella Enteritidis, Salmonella Typhimurium, Escherichia coli et Staphylococcus aureus. Les protéines ont été mises en suspension dans l’eau (5% p/p) et hydrolysées par la pepsine, 6 heures, pH de 2.5. Les peptides furent récupérés par ultrafiltration (< 10 kDa), puis fractionnés selon leur charge nette : totaux, cationiques, anioniques et non liés. L’effet antimicrobien a été évalué surmicroplaques, par la survie bactérienne en présence de concentrations croissantes d’extraits peptidiques. Les extraits cationiques de babeurre ont démontré une efficacité à une concentration inférieure ou égale à 5 mg/mL; perte de 3 log pour Escherichia coli O78 :H80. En comparaison, la lactoferrine cationique a été efficace à une concentration inférieure ou égale à 0.6 mg/mL; perte de 6 log pour E. coli O78 :H80. Les extraits peptidiques du pois ont démontré une efficacité faible. Cette méthode s’avère prometteuse pour le développement d’une alternative ou d’un complément pour la réduction de l’utilisation des antibiotiques dans l’alimentation de la volaille.
Antibiotics are frequently used in poultry feed in order to prevent certain diseases, including necrotic enteritis, which causes the emergence of bacterial strains resistant to antibiotics. A promising alternative is the use of antimicrobial peptides (AMPs) as dietary supplements, such as AMPs from dairy products. The objective of this project was to develop a production method for the extraction peptides, from co-produced food processing (buttermilk, lactoferrin, pea protein isolates). These peptides were tested for the detection of antimicrobial activity on the following specific poultry pathogens; Salmonella Enteritidis, Salmonella Typhimurium, Escherichia coli and Staphylococcus aureus. Proteins were suspended in water (5% w/w) and pepsin hydrolyzed by pepsin for 6 hours at pH 2.5. Peptides were recovered by ultrafiltration (< 10 kDa) and fractionated based on the basis of their ionic charges: total, cationic, anionic and unbound peptides, to specifically target the fractions with antimicrobial activities. Bacterial survival was measured in contact with different peptides concentrations. Cationic buttermilk extracts were effective at a concentration less or equal to 5 mg / mL; loss of 3 log for Escherichia coli O78: H80, compared with lactoferrin which was effective at a concentration less than or equal to 0.6 mg / mL; loss of 6 log for E. coli O78: H80. The peptide extracts from pea showed low efficiency. The use of antimicrobial peptides, from buttermilk, lactoferrin and peas, is promising for the development of an alternative or a complement to reduce antimicrobial use.

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Dissertationen zum Thema „Absorption de protéine“

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